CS272206B2 - Method of alpha-ergocryptine production - Google Patents

Method of alpha-ergocryptine production Download PDF

Info

Publication number
CS272206B2
CS272206B2 CS853919A CS391985A CS272206B2 CS 272206 B2 CS272206 B2 CS 272206B2 CS 853919 A CS853919 A CS 853919A CS 391985 A CS391985 A CS 391985A CS 272206 B2 CS272206 B2 CS 272206B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
alpha
ergocryptine
fermentation
production
medium
Prior art date
Application number
CS853919A
Other languages
Czech (cs)
Other versions
CS391985A2 (en
Inventor
Detlef Dr Wilke
Alfred Dr Weber
Original Assignee
Schering Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Schering Ag filed Critical Schering Ag
Publication of CS391985A2 publication Critical patent/CS391985A2/en
Publication of CS272206B2 publication Critical patent/CS272206B2/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/182Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
    • C12P17/183Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system containing an indolo[4,3-F,G]quinoleine nucleus, e.g. compound containing the lysergic acid nucleus as well as the dimeric ergot nucleus

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Vynález 9e týká způsobu výroby alfa-ergokryptinu kultivaci určitého druhu mikroorganismu· alfa-Ergokryptin » 9,10alfa-dihydro-12'~ hydroxy-2í/l-n>ethylethyl/-5'alfa-/2-methylpropyl/-ergotaman-3', 6', 18-trion je, jak známo, farmakologicky účinný. Podle dosud známých způsobů výroby je alfa-ergokryptin dostupný fermenťační cestou jenom ve směsi s ostatními námelovými a peptidovýmí alkaloidy /německý zveřejňovaci spis 31 04 151/. Tim je jeho výrobě iizolace velice náročnáThe invention 9e relates to a method for producing alpha-ergocryptine by culturing a particular kind of microorganism. Alpha-Ergocryptine 9,10 alpha- dihydro-12'-hydroxy-2H-ethylethyl-5'alpha- (2-methylpropyl) -ergotaman-3 ' The 6 ', 18-trione is known to be pharmacologically active. According to the known production methods, alpha-ergocryptine is available via fermentation only in admixture with other ergot and peptide alkaloids (German publication 31 04 151). Tim is very difficult to manufacture and insulate

Nyní bylo nalezeno, že kmen houby druhu Clavioeps vylučuje do kultivačního prostředí ve vysokých výtěžcích alfa-ergokryptin prostý vedle stop agroklavinu přítomnosti dalších námelových alkaloidů. Tento kmen druhu Claviceps byl izolován z námele divoce rostoucí traviny druhu Spartina alterniflora; má interní označeni Schering, MBCE 5227 a je uložen v německé sbírce pro mikroorganismy pod číslem OSM 2836. Kmen vytváří na agarových prostředcích se sacharózou jako zdrojem uhlíku a aeparagínea jako zdrojem dusíku ploché,· nažloutlé kolonie z kompaktního mycelia. Průměr kolonii činí po 7 dnech kultivace 2 až 3 cm a po 20 dnech kultivace 6 až 8 cm.It has now been found that a fungus strain of the species Clavioeps secretes alpha-ergocryptin free from traces of agroclavin in the presence of other ergot alkaloids in high yields. This Claviceps strain was isolated from the ergot of wild-growing Spartina alterniflora; has the internal designation Schering, MBCE 5227 and is deposited in the German Collection for Microorganisms under number OSM 2836. The strain forms flat, yellowish colonies of compact mycelium on agar compositions with sucrose as a carbon source and aeparagine as a nitrogen source. The colony diameter is 2-3 cm after 7 days of cultivation and 6-8 cm after 20 days of cultivation.

Na agarovém'živičném prostředí se sacharózou jako zdrojem uhlíku a jantaranera amonným nebo citranem amonným jako zdrojem dusíku vytváří houba pomalu rostouc!,· klenuté a nad agarovým povrchem lehce nadzdvižené, nažloutle hnědé kolonie. Kolonie má tvorbou vzdušného mycelia hrubý,· kulovitý povrch. Okraj kolonie je roztřepen. Průměr kolonie čini po 14 dnech 2 až 3 cm a po době 30 dní 6 až 7 cm. Vedle hyfovitého mycelia se vyskytuji krátké kulovité buňky,· které mohou být též nepravidelně tvarované a často vytvářejí řetězy a vyplněné vakuolami silně lámou světlo. Průměr hyf čini 3 až 4 um. Vakuolizované buňky mají průměr od 6 do 10 £um a délku od 10 do 25 <um.In an agar medium with sucrose as the carbon source and ammonium succinate or ammonium citrate as the nitrogen source, the fungus forms a slowly growing, domed and slightly elevated, yellowish brown colony above the agar surface. The colony has a rough, spherical surface formation of the airy mycelium. The colony's edge is frayed. The colony diameter is 2-3 cm after 14 days and 6-7 cm after 30 days. In addition to the hyphal mycelium, there are short spherical cells, which may also be irregularly shaped and often form chains and filled with vacuoles strongly refract the light. The diameter of the hyphae is 3 to 4 µm. Vacuolated cells have a diameter of 6 to 10 microns and a length of £ 10 to 25 <m.

Způsob výroby alfa-ergokryptinu podle vynálezu spočívá v tom,že se mikroorganismus druhu Claviceps paspali OSM 2836 kultivuje za anerobních podmínek v přítomnosti uhlohydrátů, dusíkatých sloučenin, růstových látek β minerálních soli při hodnotě pH 4 až 6 za teploty 20 až 35 °C a po skončené fermentaci se vzniklý alfa-ergokryptin izoluje.The process for the preparation of alpha-ergocryptin according to the invention is characterized in that the microorganism of the species Claviceps paspali OSM 2836 is cultivated under anerobic conditions in the presence of carbohydrates, nitrogen compounds, β mineral salt growth substances at pH 4-6 at 20-35 ° C. after fermentation, the resulting alpha-ergocryptin is isolated.

Způsob podle vynálezu se tedy provádí za podmínek, kterých se obvykle používá k pěstováni kultur hub pro metsbolickou syntézu. Tak se nejprve urči v obecných obvyklých předběžných pokusech nejpřiznivějši podminky fermentace, jako například volba nejpřlznivějšího živného prostředí/ technických podmínek/ jako teploty, vzdušnění, přesné hodnoty pH a optimálních časů pro klíčeni a vývoj mikroorganismu.Thus, the process of the invention is carried out under the conditions commonly used to cultivate fungal cultures for metsbolic synthesis. Thus, the most favorable fermentation conditions, such as selection of the most favorable nutrient medium / technical conditions / such as temperature, aeration, exact pH and optimum germination and development times, are first determined in general conventional preliminary experiments.

□ako zdroj uhlíku pro fermentační prostředí lze použit například glukózu nebo sacharozu. Oako zdroj dusíku slouží kromě jiného asparagin, jantaran amonný nebo síran amonný. Prostředí obsahuje dále nezbytné růstové látky /například kvasničný extrakt/ a minerální látky /draselné, hořečnaté, vápenaté, železnaté a zinečnaté kationty, jakož i sulfátové, fosfátové, dusičnanové g chloridové aionty/ v obvykle používané koncentraci.Například for example, glucose or sucrose can be used as a carbon source for the fermentation medium. Oako's nitrogen source serves inter alia asparagine, ammonium succinate or ammonium sulfate. The medium further contains the necessary growth agents (e.g., yeast extract) and minerals (potassium, magnesium, calcium, ferrous and zinc cations, as well as sulfate, phosphate, nitrate, chloride and ionic ions) in the concentration normally used.

Fermentace může být jedno- nebo dvouetupňové, přičemž prostředí užité pro předkulturu může být totožné e prostředím hlavní kultury nebo odliěné. Pro předkulturu se používá 8 výhodou glukóza jako zdroj uhlíku, pro hlavni kulturu s výhodou saoharóza. Prostředí předkultury obsahuje s výhodou 10 až 100 mg/1 zdrojů uhlíku/ prostředí hlavní kultury s výhodou 100 až 300 mg.The fermentation can be one- or two-stage, with the medium used for the preculture being identical to that of the main culture or differentiated. For preculture, preferably glucose is used as a carbon source, for the main culture preferably saoharose. The preculture environment preferably contains 10 to 100 mg / l of carbon source / main culture medium, preferably 100 to 300 mg.

Na začátku fermentace se nastavuje hodnota pH prostředí s výhodou v rozsahu od 4 do So Teplota kultivace ss pohybuje v rozmezí asi od 10 až do 35 °C, s výhodou v rozmezí od 20 do 30 °C. Podminky kultivace jsou přísně aerobní. Optimální doba fermentace se zjišťuje obvyklým způsobem pomoci analýzy vzniklého alfa-ergokryptinu.At the beginning of the fermentation is adjusted pH of the medium preferably ranges from 4 to about S ss cultivation temperature ranges from about 10 to 35 ° C, preferably from 20 to 30 ° C. The cultivation conditions are strictly aerobic. The optimal fermentation time is determined in a conventional manner by analysis of the resulting alpha-ergocryptine.

Po skončené fermentaci ee vzniklý alfaergokryptin izoluje o sobě známým způsobem, například tak,'· že se fermentační násady extrahuji s vodou nemisitelným organickým rozpouštědlem,· jako ethylacetátem, methylisobutylketonem, dichlormethanem, chloroformem nebo tetrachlorethanem,- extrakty se zkoncsntruji a získaný surový produkt se čisti chromatografií a/nebo krystalizaci.After fermentation, the resulting alphaergocryptine is isolated in a manner known per se, for example by extracting the fermentation broth with a water-immiscible organic solvent, such as ethyl acetate, methyl isobutyl ketone, dichloromethane, chloroform or tetrachloroethane, and extracting the crude product obtained. chromatography and / or crystallization.

Následující příklad provedeni slouží k vysvětleni způsobu podle vynálezu.The following exemplary embodiment serves to explain the method of the invention.

CS 272208 B2CS 272208 B2

Claviceps druh OSM 2836 aa pěstuje na živném prostředí» které obsahuje následující složky:Claviceps species OSM 2836 aa is grown on a nutrient medium »which contains the following ingredients:

Sacharózu /100g/l/,kyselinu citrónovou /10g/l/, kvasničný extrakt /0,!l g/1/,1 dihydroganfosfát draselný /500 mg/l/,< heptahydrát síranu hořečnatého /300 mg/1/,’ síran amonný /6 g/1/, tetrahydrót dusičnanu vápenatého /1 g/1/, heptahydrát síranu železnatého /7 mg/1/, heptahydrát síranu zinečnatáho /6 mg/1/, agar /16 g/l/.Hodnota pH živného prostředí se nastavuje na 5,1. Pěstovaná kultura ea uchovává po dobu 5 až 20 dnů při teplotě 30 °C v ter» mostatu.Sucrose / 100 g / l /, citric acid / 10 g / l /, yeast extract / 0 ug / 1/1 dihydroganfosfát potassium / 500 mg / l / <heptahydrate of magnesium sulfate / 300 mg / 1 /, 'ammonium sulfate (6 g / l), calcium nitrate tetrahydrate (1 g / l), ferrous sulfate heptahydrate (7 mg / l), zinc sulfate heptahydrate (6 mg / l), agar (16 g / l). set to 5.1. The cultivated culture ea is stored for 5 to 20 days at 30 ° C in teratate.

Asi 1 om2 velký kousek mycelia se za sterilních podmínek rozmělni pomoci mixéru v 5 ml fyziologického roztoku a tim se očkuje 50 ml předkultury obsahující glukózu /100 g/1/, kyselinu citrónovou /7,5 g/1/, dihydrohenfosfát draselný /0,59 g/1/,' heptahydrát síranu hořečnatého /300 mg/1/, síran amonný /6 g/1/, heptahydrát síranu železnatého /7 mg/1/, heptahydrát síranu zinečnatého /7 mg/1// tetrahydřát dusičnanu vápenatého /1 g/1/, kvasničný extrakt /0,1 g/1/, nastavené na hodnotě pH 5,1, která je umístěna v·’.500 ml Erlenmeysrově baňce a kultivuje se na rotační třepačce s 220 otáčkami za minutu po dobu 4 dní při teplotě 24 °C.About 1 om 2 large piece of mycelium under sterile conditions comminuted means of a mixer in 5 ml of physiological solution and thus is inoculated with 50 ml of a preculture containing glucose / 100 g / 1 /, citric acid / 7.5 g / 1 /, potassium dihydrohenfosfát / 0 59 g (1), magnesium sulfate heptahydrate (300 mg / 1), ammonium sulfate (6 g / 1), ferrous sulfate heptahydrate (7 mg / 1), zinc sulfate heptahydrate (7 mg / 1 // calcium nitrate tetrahydrate) (1 g / l), yeast extract (0.1 g / l), adjusted to pH 5.1, placed in a 500 ml Erlenmeyser flask and cultured on a rotary shaker at 220 rpm for a period of time. 4 days at 24 ° C.

ml takto získané předkultury se přenesou do 80 ml prostředí obsahujícího sacharózu /200 g/l/r kyselinu citrónovou /10 g/1/, kvasničný extrakt /0,1 g/1/, dihydrogenfosfát draselný /500 mg/1/, heptahydrát síranu hořečnatého /300 mg/1/, síran amonný /6 g/1/, tetrahydřát dusičnanu vápenatého /1 g/1/, heptahydrát síranu železnatého /7 mg/1/ a heptahydrátu síranu zinečnatáho /8 mg/1/, nastaveného na hodnotu pH 5,1,' které Js umístěno v 500 ml Erlenmeyerově baňce a po dobu 9 dni se při teplotě 24 °C třepě na rotační třepačce se 240 otáčkami za minutu.ml of the preculture thus obtained are transferred to 80 ml of sucrose-containing medium (200 g / l) of citric acid (10 g / l), yeast extract (0.1 g / l), potassium dihydrogen phosphate (500 mg / l), sulfate heptahydrate magnesium (300 mg / l), ammonium sulfate (6 g / l), calcium nitrate tetrahydrate (1 g / l), ferrous sulfate heptahydrate (7 mg / l) and zinc sulfate heptahydrate (8 mg / l), set to pH 5.1, placed in a 500 ml Erlenmeyer flask and shaken for 9 days at 24 ° C on a rotary shaker at 240 rpm.

Potom se živné prostředí odfiltruje a pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie /Fresenius Z,Anal.Chem, 303,' 1980, 208/ ss urči obsah alfsargokryptinu. Koncentrace kultivačního filtrátu čini 525 mg/1.The culture medium is then filtered off and the alfsargocryptin content is determined by high pressure liquid chromatography (Fresenius Z, Anal.Chem, 303, 1980, 208). The concentration of the culture filtrate was 525 mg / L.

Claims (1)

PREDMET VYNALEZUOBJECT OF THE INVENTION Způsob výroby alfa-ergokryptinu, vyznačující se tim, že se mikroorganismus druhu Claviceps paspali OSM 2836 kultivuje za anerobnich podmínek v přítomnosti uhlohydrátů, dusíkatých sloučenin, růstových látek a minerálních soli při hodnotě pH 4 až 6 za teploty 20 až 35 Ca po skončené fermentací se vzniklý alfa-ergokryptin izoluje.Process for the preparation of alpha-ergocryptine, characterized in that the microorganism of the species Claviceps paspali OSM 2836 is cultivated under anerobic conditions in the presence of carbohydrates, nitrogen compounds, growth substances and mineral salts at pH 4 to 6 at 20 to 35 Ca after fermentation. the resulting alpha-ergocryptine is isolated.
CS853919A 1984-06-01 1985-05-31 Method of alpha-ergocryptine production CS272206B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19843420953 DE3420953A1 (en) 1984-06-01 1984-06-01 METHOD FOR PRODUCING (ALPHA) ERGOKRYPTIN

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS391985A2 CS391985A2 (en) 1990-04-11
CS272206B2 true CS272206B2 (en) 1991-01-15

Family

ID=6237689

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS853919A CS272206B2 (en) 1984-06-01 1985-05-31 Method of alpha-ergocryptine production

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP0183739B1 (en)
JP (1) JPS61502374A (en)
CS (1) CS272206B2 (en)
DD (1) DD237677A5 (en)
DE (2) DE3420953A1 (en)
HU (1) HU198100B (en)
WO (1) WO1985005635A1 (en)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1133916A (en) * 1966-07-22 1968-11-20 Farmaceutica Italia Soc Ergocryptine
SE332403B (en) * 1966-07-22 1971-02-08 Farm Italia Soc
HU178405B (en) 1980-02-08 1982-04-28 Richter Gedeon Vegyeszet Process for preparing ergocornine and beta-ergocryptine by fermentation
DE3104215A1 (en) * 1981-02-06 1982-08-19 Richter Gedeon Vegyészeti Gyár R.T., 1103 Budapest Process for the preparation of alkaloids in controlled amount and controlled ratio of amounts by fermentation

Also Published As

Publication number Publication date
EP0183739A1 (en) 1986-06-11
DE3420953A1 (en) 1985-12-05
CS391985A2 (en) 1990-04-11
WO1985005635A1 (en) 1985-12-19
DD237677A5 (en) 1986-07-23
EP0183739B1 (en) 1989-01-04
HU198100B (en) 1989-07-28
JPS61502374A (en) 1986-10-23
DE3567226D1 (en) 1989-02-09
HUT38396A (en) 1986-05-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PETERSEN et al. Production of cladospirone bisepoxide, a new fungal metabolite
US5334517A (en) Microbial process for the production of trans-4-hydroxy-L-proline
JPS60244295A (en) Production of (+)- trans-cyclopropane carboxylic acid
CA2025678C (en) Natural delta-lactones and process of the production thereof
CS272206B2 (en) Method of alpha-ergocryptine production
EP0071485B1 (en) Novel microorganisms derived from microorganisms of the genus escherichia by mutation and their use in the preparation of glutathione
US4369252A (en) Fermentation process for the preparation of ergot alkaloids, primarily ergocornine and β-ergocryptine
US4968610A (en) Process for the preparation of chanoclavine
US4939089A (en) Process for the preparation of festuclavine
EP0284358B1 (en) Novel anti-tumor compounds, method for the preparation thereof, and pharmaceutical preparations containing them
Rao et al. Effect of tweens on the production of ergot alkaloids by Aspergillus fumigatus
KR830002916B1 (en) Cephalosporin preparation by fermentation
CA1191103A (en) Production of gamma-decalactone
SU363232A1 (en) ALL-UNIONAL I&#39;fiiLYi ^ f, ^ - &#39;i. ^ Ii ^ T ^ -. I
CZ245694A3 (en) Novel industrial production strain of claviceps paspali micro-organism
CZ282335B6 (en) High-production strain of penicillium chrysogenum ccm 8197 micro-organism
CZ282334B6 (en) High-production strain of penicillium chrysogenum ccm 8196 micro-organism
JPH07289274A (en) Production of trans-4-hydroxy-l-proline
JPH04258295A (en) Production of phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine comprising linoleic acid as one and only constituent fatty acid
HK1010740B (en) Microbial process for the production of trans-4-hydroxyl-l-proline
JPH0627103B2 (en) New substance UCN-1028C
JPH0349687A (en) New anti-tumor antibiotic resolutiomycin and its production method
JPH04187632A (en) New anti-tumor antibiotic resolutiomycin and its production method

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20000531