JPS6131081A - 変異株 - Google Patents
変異株Info
- Publication number
- JPS6131081A JPS6131081A JP15210584A JP15210584A JPS6131081A JP S6131081 A JPS6131081 A JP S6131081A JP 15210584 A JP15210584 A JP 15210584A JP 15210584 A JP15210584 A JP 15210584A JP S6131081 A JPS6131081 A JP S6131081A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glutathione
- candida
- variant strain
- candida utilis
- sulfite
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、キャンディダ・ウチルスの変異株に関するも
のである。
のである。
更に詳細には１本発明は、エチオニン及び亜硫酸塩の存
在下で生育可能であり、グルタチオンを著量生成するキ
ャンディダ・ウチルスの変異株に関するものである。
在下で生育可能であり、グルタチオンを著量生成するキ
ャンディダ・ウチルスの変異株に関するものである。
一般にグルタチオンは酵母及び動物の肝臓などに広く分
布しており、生体内の酸化還元系に関与しているトリペ
プチドで、肝機能回復作用や解毒作用などの重要な役割
を果す医薬上極めて有用な物質である。
布しており、生体内の酸化還元系に関与しているトリペ
プチドで、肝機能回復作用や解毒作用などの重要な役割
を果す医薬上極めて有用な物質である。
従来、グルタチオンの生産はキャンディダ・ウチルスの
培養によって行なわれるのが普通であった。しかし、キ
ャンディダ・ウチルスの野生株の培養における菌体中の
グルタチオンの含有量は０．５％程度であるに過ぎなか
った。
培養によって行なわれるのが普通であった。しかし、キ
ャンディダ・ウチルスの野生株の培養における菌体中の
グルタチオンの含有量は０．５％程度であるに過ぎなか
った。
近年、グルタチオンの生産性を高めるためにメチオニン
アナログ耐性をもったキャンディダ・ウチルスの変異株
を創製し、グルタチオンの含有量を０．８％程度まで高
めることに成功し、実用化されたのである。
アナログ耐性をもったキャンディダ・ウチルスの変異株
を創製し、グルタチオンの含有量を０．８％程度まで高
めることに成功し、実用化されたのである。
本発明者らは、グルタチオンの生産性を更に高めるため
に鋭意研究した結果、ここにグルタチオンを著量生成さ
せるこのできるキャンディダ・ウチルスの変異株を得る
ことに成功し、本発明を完成させるに至った。
に鋭意研究した結果、ここにグルタチオンを著量生成さ
せるこのできるキャンディダ・ウチルスの変異株を得る
ことに成功し、本発明を完成させるに至った。
本発明の変異株を創成するには、グルタチオンの構成ア
ミノ酸の一つであるＬ−システィンの菌体内濃度を高め
ることが必要であり、そして、Ｌ−システィンの菌体内
濃度を高めるには、Ｌ−システィンの生合成中間体であ
る亜硫酸の菌体内濃度を高めると同時に、Ｌ−システィ
ンの他の生合成中間体であるメチオニンの菌体内濃度を
高める必要があり、そのためには、亜硫酸耐性とメチオ
ニンアナログであるエチオニン耐性を併有する変異株を
取得することが必須であるとの想定のもとに行なわれた
。
ミノ酸の一つであるＬ−システィンの菌体内濃度を高め
ることが必要であり、そして、Ｌ−システィンの菌体内
濃度を高めるには、Ｌ−システィンの生合成中間体であ
る亜硫酸の菌体内濃度を高めると同時に、Ｌ−システィ
ンの他の生合成中間体であるメチオニンの菌体内濃度を
高める必要があり、そのためには、亜硫酸耐性とメチオ
ニンアナログであるエチオニン耐性を併有する変異株を
取得することが必須であるとの想定のもとに行なわれた
。
まず、キャンディダ・ウチルスの一般株の最低阻止濃度
のエチオニン及び亜硫酸塩を含有する培地が調製される
。この際使用されるエチオニンはＤ型、Ｌ型、ＤＬ−型
のいずれでもよく、また亜硫酸塩としては亜硫酸ナトリ
ウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸等が用いられる。
のエチオニン及び亜硫酸塩を含有する培地が調製される
。この際使用されるエチオニンはＤ型、Ｌ型、ＤＬ−型
のいずれでもよく、また亜硫酸塩としては亜硫酸ナトリ
ウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸等が用いられる。
最低阻止濃度としては、ＤＬ−エチオニン及び亜硫酸ソ
ーダとして、５■ｇ及び０ 、５ ｒ＋ｙ／Ω程度が目
安となるが、より高濃度で生育する変異株が得られるの
であれば、より高濃度の培地を調製するのがよい。
ーダとして、５■ｇ及び０ 、５ ｒ＋ｙ／Ω程度が目
安となるが、より高濃度で生育する変異株が得られるの
であれば、より高濃度の培地を調製するのがよい。
変異させる菌株はキャンディダ・ウチルスに属するもの
であればいずれでもよい。
であればいずれでもよい。
キャンディダ・ウチルスの培養菌体をＸ線照射とニトロ
ソグアニジン処理によって突然変異を起させ、変異させ
た菌を、エチオニン及び亜硫酸塩をそれぞれ最低阻止濃
度以上に含んだ培地で培養し、生育した菌を分離し、合
成培地で生育のよい菌を選択し、それぞれの分離株を更
に培養し、グルタチオンを最も多量に生産する菌株を取
得する。
ソグアニジン処理によって突然変異を起させ、変異させ
た菌を、エチオニン及び亜硫酸塩をそれぞれ最低阻止濃
度以上に含んだ培地で培養し、生育した菌を分離し、合
成培地で生育のよい菌を選択し、それぞれの分離株を更
に培養し、グルタチオンを最も多量に生産する菌株を取
得する。
このようにして、本発明では、キャンディダ・ウチルス
ＩＡＭ４２６４からキャンディダ・ウチＪＬ／ＸＫＪＳ
−０５７１，ＦＥＲＭ Ｐ−６９０７及びキャンディ
ダ・ウチルスＫＪＳ−０５８２゜ＦＥＲＭ Ｐ−７３
９６が得られた。
ＩＡＭ４２６４からキャンディダ・ウチＪＬ／ＸＫＪＳ
−０５７１，ＦＥＲＭ Ｐ−６９０７及びキャンディ
ダ・ウチルスＫＪＳ−０５８２゜ＦＥＲＭ Ｐ−７３
９６が得られた。
ここに得られた本発明の変異株はいずれもほとんど同じ
菌学的性質を示している。次に、キャンディダ・ウチル
スＫＪＳ−０５７１，ＦＥＲＭＰ−６９０７及びキャン
ディダ・ウチルスＫＪＳ−０５８２，ＦＥＲＭ Ｐ−
７３９６の菌学的性質を述べる。
菌学的性質を示している。次に、キャンディダ・ウチル
スＫＪＳ−０５７１，ＦＥＲＭＰ−６９０７及びキャン
ディダ・ウチルスＫＪＳ−０５８２，ＦＥＲＭ Ｐ−
７３９６の菌学的性質を述べる。
１、 ＤＬ−エチオニン１０＋ｍｇ／Ｑ及び亜硫酸ナ
トリウム１ ｍｇ／ Ｑを含む培地で生育する。
トリウム１ ｍｇ／ Ｑを含む培地で生育する。
２、一般培地でよく生育し、著量のグルタチオンを生成
蓄積することができる。
蓄積することができる。
３、 ＹＭ寒天培地上で金縁、半レンズ状隆起、表面
滑らかで鈍い光沢、クリーム色で軟質のコロニーを形成
する。
滑らかで鈍い光沢、クリーム色で軟質のコロニーを形成
する。
４、 グルコース−イーストエキス−ペプトン水中で混
濁、沈澱あり、菌膜と菌膜の形成は認められない。
濁、沈澱あり、菌膜と菌膜の形成は認められない。
５、 ダルモー平板状で仮性菌糸を形成する６６、酢酸
ソーダ寒天斜面、麦芽エキス寒天斜面、Ｖ８ジュース寒
天斜面、コーンミール寒天斜面の培養で子嚢胞子の形成
は認められない。
ソーダ寒天斜面、麦芽エキス寒天斜面、Ｖ８ジュース寒
天斜面、コーンミール寒天斜面の培養で子嚢胞子の形成
は認められない。
７、 グルコース、シュークロース、ラフィノースを発
酵し、ガラスドース、マルトース、トレハロース、ラク
トースを発酵しない。
酵し、ガラスドース、マルトース、トレハロース、ラク
トースを発酵しない。
８、 グルコース、シュークロース、マルトース、セロ
ビオース、トレハロース、ラフィノース、メレジトース
、キシロース、エタノール、マンニトール、乳酸、クエ
ン酸、ＫＮＯ３を同化する。
ビオース、トレハロース、ラフィノース、メレジトース
、キシロース、エタノール、マンニトール、乳酸、クエ
ン酸、ＫＮＯ３を同化する。
９、 ビタミンフリー培地での生育良好。
本発明の変異株は、炭素源、窒素源及び無機塩等を含む
培地で好気的に培養すれば、著量のグルタチオンを生産
する。
培地で好気的に培養すれば、著量のグルタチオンを生産
する。
この際の培養形式としては、バッチ培養、或は連続培養
の何れでもよい。
の何れでもよい。
培養する際の炭素源としては、ブドウ糖、Ｍｉｌｌｉ。
酢酸、エタノール、糖蜜、亜硫酸パルプ廃液等が用いら
れ、またその窒素源としては、アンモニア。
れ、またその窒素源としては、アンモニア。
硫安、尿素 １１青酸塩などが使用される。さらに無機
塩としては、燐酸、カリウム、マグネシウム源として、
過リン酸石灰、燐安、塩化力１ハ燐酸カリ、苛性カリ、
硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等が用いられ、さ
らに微量の亜鉛、銅、マンガン、鉄イオン等の無機塩も
使用される。ビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等は特
に必要としないが、勿論これらを添加したり、コーンス
テイープリカー、酵母エキス、ペプトン等を加えても差
支えない、培養温度は酵母の生産可能温度であれば良く
、例えば４０℃以下、特に３０℃以下で行われ、ＰＨは
３．５〜８．０、特に４．０〜６．０が望ましい。
塩としては、燐酸、カリウム、マグネシウム源として、
過リン酸石灰、燐安、塩化力１ハ燐酸カリ、苛性カリ、
硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等が用いられ、さ
らに微量の亜鉛、銅、マンガン、鉄イオン等の無機塩も
使用される。ビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等は特
に必要としないが、勿論これらを添加したり、コーンス
テイープリカー、酵母エキス、ペプトン等を加えても差
支えない、培養温度は酵母の生産可能温度であれば良く
、例えば４０℃以下、特に３０℃以下で行われ、ＰＨは
３．５〜８．０、特に４．０〜６．０が望ましい。
次に実施例をあげで説明する。
なおグルタチオンの定量は、菌体抽出液についてグリオ
キサラーゼ法「メソッド・イン・エンザイモロジーＪ第
１巻第５４０ページ、アカデミツクブレス社、１９５５
年版）で行った。
キサラーゼ法「メソッド・イン・エンザイモロジーＪ第
１巻第５４０ページ、アカデミツクブレス社、１９５５
年版）で行った。
実施例１
キャンディダ・ウチルスＩＡＭ４２６４の突然変異株で
エチオニンおよび亜硫酸塩含有培地に生育可能となった
キャンディダ・ウチルスＫＪＳ−０５７１、ＦＥＲＭ
Ｐ−６９０７をグルコース２％、イーストエキス２％
、ペプトン１％からなる培地でフラスコ種母培養し、こ
れを３００Ｑ容発酵槽に１％植菌した。
エチオニンおよび亜硫酸塩含有培地に生育可能となった
キャンディダ・ウチルスＫＪＳ−０５７１、ＦＥＲＭ
Ｐ−６９０７をグルコース２％、イーストエキス２％
、ペプトン１％からなる培地でフラスコ種母培養し、こ
れを３００Ｑ容発酵槽に１％植菌した。
培地としては、グルコース３％、硫安０．８％、リン酸
−カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０３％、硫
酸第一鉄１０ｐｐｍ、硫酸亜鉛３ ｐｐｍ、硫酸銅ＩＰ
Ｐ■、硫酸マンガンＬＯｐｐ＋ｉを用いバッチ培養を行
った。培養条件としては槽内液量２００Ｑ、培養温度３
０℃１通気量１５０ｆｌｐ■、攪拌数２０Ｏｒｐｍ、
ｐＨ４，５にて行った。２４時間培養後集菌したところ
乾燥時換算２９５０ ｇの菌体が得られ、菌体中のグル
タチオン含量は４．０％（対乾燥菌体比）であった。こ
の菌体を加熱抽出し、菌体残渣を遠心分離にて除きグル
タチオン抽出液を得た。この抽出液に硫酸を０．５Ｎに
なるように添加し、亜酸化銅を加えグルタチオンを銅塩
として析出させた。グルタチオン銅塩を水洗した後硫化
水素を通気し。
−カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０３％、硫
酸第一鉄１０ｐｐｍ、硫酸亜鉛３ ｐｐｍ、硫酸銅ＩＰ
Ｐ■、硫酸マンガンＬＯｐｐ＋ｉを用いバッチ培養を行
った。培養条件としては槽内液量２００Ｑ、培養温度３
０℃１通気量１５０ｆｌｐ■、攪拌数２０Ｏｒｐｍ、
ｐＨ４，５にて行った。２４時間培養後集菌したところ
乾燥時換算２９５０ ｇの菌体が得られ、菌体中のグル
タチオン含量は４．０％（対乾燥菌体比）であった。こ
の菌体を加熱抽出し、菌体残渣を遠心分離にて除きグル
タチオン抽出液を得た。この抽出液に硫酸を０．５Ｎに
なるように添加し、亜酸化銅を加えグルタチオンを銅塩
として析出させた。グルタチオン銅塩を水洗した後硫化
水素を通気し。
硫化鋼の除き、減圧濃縮することによりグルタチオンを
結晶９５．０ｇを得た。得られた結晶は高圧ろ紙電気泳
動、高速液体クロマトグラフィーよりグルタチオンであ
ることが確認され、ヨード法による純度は９９．０％で
あった。
結晶９５．０ｇを得た。得られた結晶は高圧ろ紙電気泳
動、高速液体クロマトグラフィーよりグルタチオンであ
ることが確認され、ヨード法による純度は９９．０％で
あった。
実施例２
キャンディダ・ウチルスＫＪＳ−０５８２、ＦＥＲＭ
Ｐ−７３９６をグルコース２％、イーストエキス２％
、ペプトン１％からなる培地でフラスコ培養し、これを
３００Ｑ容発酵槽に１％植菌した。
Ｐ−７３９６をグルコース２％、イーストエキス２％
、ペプトン１％からなる培地でフラスコ培養し、これを
３００Ｑ容発酵槽に１％植菌した。
培地としては、グルコース３％、硫安０，８％、リン酸
−カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０３％、硫
酸第一鉄１０ｐｐｍ、硫酸亜鉛３ ｐｐｍ＋、硫酸鋼１
ｐｐｍ、硫酸マンガン１０ｐｐｍを用いバッチ培養を
行った。培養条件としては槽内液量２００Ｑ、培養温度
２４℃、通気量１５０Ｑｐｍ、攪拌数２００ｒｐｙｓ、
ｐＨ４，５にて行った。２８時間後集菌したところ乾
燥時換算２９４０ｇの菌体が得られ、菌体中のグルタチ
オン含量は５．０％（対乾燥菌体比）であった。この菌
体を加熱抽出し、菌体残渣を遠心分離にて除きグルタチ
オン抽出液を得た。この抽出液に硫酸を０．５Ｎになる
ように添加し、亜酸化鋼を加えグルタチオンを銅塩とし
て析出させた。グルタチオン銅塩を水洗した後硫化水素
を通気し、硫化鋼を除き、減圧濃縮することによりグル
タチオンの結晶１２０ｇを得た。
−カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０３％、硫
酸第一鉄１０ｐｐｍ、硫酸亜鉛３ ｐｐｍ＋、硫酸鋼１
ｐｐｍ、硫酸マンガン１０ｐｐｍを用いバッチ培養を
行った。培養条件としては槽内液量２００Ｑ、培養温度
２４℃、通気量１５０Ｑｐｍ、攪拌数２００ｒｐｙｓ、
ｐＨ４，５にて行った。２８時間後集菌したところ乾
燥時換算２９４０ｇの菌体が得られ、菌体中のグルタチ
オン含量は５．０％（対乾燥菌体比）であった。この菌
体を加熱抽出し、菌体残渣を遠心分離にて除きグルタチ
オン抽出液を得た。この抽出液に硫酸を０．５Ｎになる
ように添加し、亜酸化鋼を加えグルタチオンを銅塩とし
て析出させた。グルタチオン銅塩を水洗した後硫化水素
を通気し、硫化鋼を除き、減圧濃縮することによりグル
タチオンの結晶１２０ｇを得た。
得られた結晶は高圧ろ紙電気泳動、高速液体クロマトグ
ラフィーよりグルタチオンであることが確認され、ヨー
ド法による純度は９９．０％であった。
ラフィーよりグルタチオンであることが確認され、ヨー
ド法による純度は９９．０％であった。
Claims (2)
- （１）エチオニン及び亜硫酸塩の存在下で生育可能であ
り、グルタチオンを著量生成するキャンディダ・ウチル
スの変異株。 - （２）キャンディダ・ウチルスＫＪＳ−０５７１、ＦＥ
ＲＭ Ｐ−６９０７又はキャンディダ・ウチルスＫＪＳ
−０５８２、ＦＥＲＭ Ｐ−７３９６である特許請求の
範囲第１項記載の変異株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15210584A JPS6131081A (ja) | 1984-07-24 | 1984-07-24 | 変異株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15210584A JPS6131081A (ja) | 1984-07-24 | 1984-07-24 | 変異株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6131081A true JPS6131081A (ja) | 1986-02-13 |
| JPS6151874B2 JPS6151874B2 (ja) | 1986-11-11 |
Family
ID=15533160
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15210584A Granted JPS6131081A (ja) | 1984-07-24 | 1984-07-24 | 変異株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6131081A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003080832A1 (fr) | 2002-03-26 | 2003-10-02 | Ajinomoto Co.,Inc. | Candida utilis contenant de la $g(g)-glutamylcysteine |
| EP1512747A1 (en) * | 2003-09-02 | 2005-03-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Gene encoding glutathione synthetase from candida utilis |
-
1984
- 1984-07-24 JP JP15210584A patent/JPS6131081A/ja active Granted
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003080832A1 (fr) | 2002-03-26 | 2003-10-02 | Ajinomoto Co.,Inc. | Candida utilis contenant de la $g(g)-glutamylcysteine |
| JPWO2003080832A1 (ja) * | 2002-03-26 | 2005-07-28 | 味の素株式会社 | γ−グルタミルシステインを含有するキャンディダ・ユティリス |
| US7553638B2 (en) | 2002-03-26 | 2009-06-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Candida utilis containing γ-glutamylcysteine |
| JP4561099B2 (ja) * | 2002-03-26 | 2010-10-13 | 味の素株式会社 | γ−グルタミルシステインを含有するキャンディダ・ユティリス |
| EP1512747A1 (en) * | 2003-09-02 | 2005-03-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Gene encoding glutathione synthetase from candida utilis |
| US7297513B2 (en) | 2003-09-02 | 2007-11-20 | Ajinomoto Co., Inc. | Gene encoding glutathione synthetase from Candida utilis |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6151874B2 (ja) | 1986-11-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU1435159A3 (ru) | Способ получени L-карнитина | |
| US3929578A (en) | Process for cultivating ethanol-assimilating yeasts | |
| KR101023923B1 (ko) | 글루타티온을 생산하는 방법 | |
| EP0079241B1 (en) | Process for producing glutathione | |
| JPS6358560B2 (ja) | ||
| JP2004129647A6 (ja) | グルタチオンの生産方法 | |
| EP0486024B1 (en) | Lactobacillus SP.B001 and method of producing mannitol | |
| CA1316857C (en) | Riboflavin producing strains of microorganisms, method for selecting, and method for fermentation | |
| JPS6131081A (ja) | 変異株 | |
| EP0229219A2 (en) | Urease and process for preparation thereof | |
| JPH05236981A (ja) | ガラクトオリゴ糖の製造方法 | |
| KR950005925B1 (ko) | D-(-)-타르타르산의 제조법 | |
| JPS60156379A (ja) | グルタチオン高含有酵母の製造方法 | |
| US4322498A (en) | Citric acid producing mutant yeast strains | |
| JPS6015398B2 (ja) | 微生物によるマンガンの除去法 | |
| JPH0564582A (ja) | アンモニア酸化細菌およびその増殖法 | |
| JP3100763B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アルギニンの製造法 | |
| EP0310949B1 (en) | Process for producing d-alanine | |
| CN117866788A (zh) | 一种选择型营养缺陷型酵母及其应用 | |
| JPH10191963A (ja) | Ｎａｄ及びグルタチオン高含有酵母 | |
| JP3600803B2 (ja) | マンニトール生成菌株カンジダ・マグノリア及びこれを使用したマンニトールの発酵製造方法 | |
| JPS639834B2 (ja) | ||
| KR900007000B1 (ko) | 칸디다 유틸리스의 변이주 sh 8636 및 이를 이용한 단세포단백질의 제조방법 | |
| JPS635080B2 (ja) | ||
| KR930008972B1 (ko) | 신균주 슈도모나스속 y-132 및 이로부터 생산되는 글루타릴-7-아미노세팔로스포린산 아실라아제 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |