JPS6128387A

JPS6128387A - リパ−ゼの製造法

Info

Publication number: JPS6128387A
Application number: JP14958584A
Authority: JP
Inventors: Masahiro Nakao; 正宏中尾; Sumio Asami; 純生浅見; Takaharu Tanaka; 隆治田中; Kyoichi Ogura; 享一小倉; Hiroshi Ishigooka; 博石郷岡; Teruo Amachi; 輝夫天知; Hajime Yoshizumi; 肇吉栖
Original assignee: Suntory Ltd
Current assignee: Suntory Ltd
Priority date: 1984-07-20
Filing date: 1984-07-20
Publication date: 1986-02-08
Also published as: EP0187869A4; WO1986000925A1; JPH0480676B2; EP0187869A1; US4791059A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は新規リパーゼの製造法に関するものである。さ
らに詳しくは、スタフィロコッカス・±ヤビテイス（５
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｃａｐｉｔｉｓ　）に属
する微生物によるトリグリセリドから灘離脂肪酸および
グリセリンを生じせしめる新規ソノ４−−ゼの製造法に
関するものである。

（従来の技術）微生物、とくにバクテリアを用いるり／ＩＰ−ゼの製造
法としては、シュードモナス属、クロモバクテリウム属
、アクロモバクテリウム属、コリネバクテリウム属など
に属する菌を利用する方法が知られている。しかし力か
ら、これらの微生物に由来するリパーゼを用いて油脂類
、特にトリグリセリドを分解した場合、脂肪酸及びグリ
セリンのほかにかカリの量のモノグリセリド及びジグリ
セリドが生成する。これは、一旦分解生成した脂肪酸と
グリセリンがジノ４−ゼの作用によシ再度結合するか、
又はリパーゼによる分解がモノグリセリドもしくはジグ
リセリドの段階で停止するためであると考えられる。従
って、このような従来から知られているリノや一ゼを用
いて油脂を分解することによって脂肪酸を製造する方法
には、技術的にも経済的にも難点があった。

（発明が解決しようとする問題点）発明者等は、トリグリセリドを完全に分解して脂肪酸及
びグリセリンを生成せしめ、モノグリセリド及びジグリ
セリドを実質上生成せしめず、油脂の酵素的分解による
脂肪酸の工業的製造に使用することができるリパーゼを
開発すべく、広範囲上記の能力を有する新規なリパーゼ
を生産することを見出し、このリパーゼを純粋に分離す
ることに成功し、この発明を完成した。

（問題点を解決するだめの手段）従って、この発明は、スタフィロコッカ乙−−−ｒ−ヤ
ビテイス（５ｔａｐｈｙｌｏｅｏａｃｕａ　ｃａｐｉｔ
ｉｇ　）に属し、新規リパーゼ生産能を有する微生物を
栄養培地に培養し、培養液中に該リパーゼを蓄積せしめ
、該培養液から該リパーゼを採取することを特徴とする
新規リフ９−ゼの製造方法を提供するものであシ、この
ジノ９−ゼはトリグリセリドを実質上完全に脂肪酸とグ
リセリンとに分解し、有意量のモノグリセリド及びジグ
リセリドを生成せしめない。

リパーゼ生産菌この発明において使用する＋Ｊ　ノｅ−ゼ生産菌はスタ
フィロコッカス・キャビテイスに属シ、リノｆ　−ゼ生
産能を有する細菌である。このような細菌であればいず
れもこの発明の方法において使用することができ、例え
ばアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａ
ＴＣＣ）に保存されておシ、容易に入手することができ
るスタフィロコッカス・キャビテイスを使用することが
できる。このような菌として例えばスタフィロコッカス
・キャビテイスＡＴＣＣ２７８４０，ＡＴＣＣ２７８４
１、ＡＴＣＣ２７８４２゜及びＡＴＣＣ２７８４３を挙
げることができる。

さらに、この発明の方法に使用することができる新菌株
として、本発明者等がヒトの頭皮から初めて分離したス
タフィロコッカス・キャビテイスＴ−１−１株を挙げる
ことができる。この菌株は次のような菌学的諸性質を有
する。

（Ａ）　　形態（１）大きさ；直径０．８〜１．２　ａｍの球菌、２〜
４個集って存在。

（２）運動性；なし。

（３）胞子形成；観察されず。

（４）ダラム染色性；陽性。

（５）抗酸性；なし。

（Ｂ）　　生育状態（１）肉汁寒天平板培養；やや凸状、円形、表面平滑、
不透明白色のコロニーを形成。コロニーは小さく、径１
〜３％である。

（２）肉汁液体培養；生育良好、液全体が混濁。

（３）肉汁ゼラチン穿刺培養；ゼラチンを液化せず、線
状に生育。

（４）肉汁寒天斜面培養；やや凸状、表面平滑。

不透明白色。生育良好。

（５）リドマスミルク；色調変化せず。凝固又は液化を
認めず。

（６）　　メチルレッド（ＭＲ）テスト；陽性（７）　
　フォーゲス・プロスカラエル（ｖｐ）テスト；陽性（８）インドール生成；なし。

（９）硫化水素生成；なし。

（至）デンプン分解能；なし。

αη　クエン酸利用能；ユーザー・クリステンセン反応
陽性ａ→　無機窒素源利用能；硝酸塩を利用するが、アンモ
ニウム塩を利用せず。

（２）色素産生能；なし。

αゆ　ウレアーゼ反応；陰性。

（ト）オキシダーゼ反応；陰性。

α→　カタラーゼ反応；陽性。

α力　生育範囲：ｐＨ５〜９、温度２０℃〜４０℃最適
生育温度３２℃〜３５℃。

α呻　酸素要求性；通性嫌気性。

（至）糖料用能；酸生成（＋）；Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｄ
−マンノース、シュクロース、クリセリン。

酸、ガス生成Ｃ−）：　Ｄ−ガラクトース、Ｄ−キシロ
ース、Ｌ−アラビノース、マルトース、ラクトース、ト
レハロース、Ｄ−ソルビット、イノジット、デンプン。

Ｄ−グルコースから乳酸を生成。

翰　耐塩性；あシ（１０〜２０チの食塩水中生育）。

（ハ）　リパーゼ活性；あシ。

（イ）レシチナーゼ活性；１ｈ ■　コアグラーゼ活性；なしくハ）フォスファターゼ活性；なし。

に）デオキシリボヌクレアーゼ活性；アシ。

なお、木菌は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研
菌寄託受託番号第７７２３号（ＦＥＢＭＰ−７７２３）
として寄託されている。

培養本発明を実施するにあたっては、上記のスタフィロコッ
カス・キャビテイスに属するジノ４−ゼ生産菌を培地に
培養する。

培地の栄養源としては、本菌が円滑に生育する限シ特に
限定するものではなく、炭素源としてはグルコース、ス
クロース、糖蜜、油脂などをあげることができ、また窒
素源としては、各種ペラトン、大豆粉、コーンステイー
プリカー、酵母エキス等の同化可能なものをひとつある
いは組み合わせて用いることができる。また、Ｍｇ　　
＋　Ｃａ　　＊Ｎａ＋等の塩類や各種ビタミン類、また
培養に即して消泡剤を培地に添加することもできる。

本発明において培養の形態は液体培養でも固体培養でも
よいが、通常は液体培養が好ましく、振トウ培養、通気
攪拌培養を行ない、ＩＪ　ノ臂−ゼを得ることができる
。本発明における培養条件は使用する菌株、培地組成に
よシ多少異なるが、目的物であるリパーゼの生産に最も
有利な条件を選択設定すればよく、本菌株のうちＴ−１
−１株の場合を記せば、培養温度は２０〜４０℃、とく
に好ましくは３０〜３７℃である。また培地の至適−は
ｐＨ５〜９に６Ｄ、４ＩＫｐＨ６〜７においては円滑な
ジノ４−ゼ生産が行なわれる０上述の如く、本発明に従い、スタフィロコッカスキャビ
テイスに属するリパーゼ生産菌を培地に培養して新規り
Ａ’−ゼを生産させる場合、培地にオリーブ油等の油脂
、あるいはレシチン等のりン脂質を添加することによシ
生産性が著しく増加する。これらの脂質の添加量はその
適当量を設定して培地に添加されるが、通常培地に対し
０．０１〜２チ′添加するのが適当である。培養期間は
菌株によシ異方るが１〜３日に、おいてリパ−ゼ活性は
完了する。

リパーゼの採取・精製本新規リパーゼは菌体外酵素であるためジノ９−ゼは通
常の遠心法ちるいはテ過法によ）菌体から容易に分離す
ることができる。さらに精製を行なう場合は、酵素の採
取精製に通常用いられる手法、例えば、硫安等を用いる
塩析、エタノール、アセトン等を用いた溶媒沈澱、等電
点沈澱、活性炭、リン酸カルシウム等を用いた物理吸着
、イオン交換クロマトグラフィー、グル沖過法やアフィ
ニティークロマトグラフィーなど酵素精製に用いられて
いる一般的な方法のひとつ、あるいは複数の組み合わせ
によシ各々の使用目的に応じた種々の純度の酵素標品を
得ることができる。

精製方法の具体例を示すと次の如くである。本発明の方
法によシ得られた培養液を濾過または遠心分離すること
によシ、透明な酵素液が得られる。

この酵素液を濃縮し２０　ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝
液（ｐＨ７，０）で透析後、同緩衝液で平衡化したＤＥ
ＡＥ−セルロースに吸着させＮａＣ２でグラジェント溶
出させる。本リパーゼはＮａＣｔ濃度０．４〜０．５Ｍ
付近で溶出される。適宜濃縮後１００　ｍＭ　ＮａＣｔ
含有１００　ｍＭ　Ｔｒｉ　５−ＨＣｔ緩衝液（ＦＪ（
８，０）で平衡化したウルトログルＡＣＡ　３４　（Ｌ
ＫＢ製）を用いてグル濾過を行うことによシミ党派動的
に単一な標品を得ることができる。また上記培養液を限
外デ過膜によシ濃縮し、その濃縮液を希塩酸を用いて−
３．９〜４．０に調整し、低温（４℃が好ましい）に数
時間保持した後、遠心分離またはｒ遇することによシ沈
澱物を回収し、凍結乾燥することによシ酵素標品を得る
ことができる。

リパーゼの性質こうして精製された本りｚ臂−ゼの諸性質は次の通シで
ある。

■　基質特異性広く油脂を基質とする。オリーブ油、ヤシ油、ヒマシ油
などの植物油、牛脂などの動物油脂およびトリブチリン
等水溶性脂質を分解する。

油脂およびトリグリセライドを基質とした際の１）Ａ？
−ゼ活性を、オリーブ油およびトリオレインを基質とし
た際の活性を１００％とした相対活性値として、それぞ
れ第１図及び第２図に示す。

■　至適−および安定−範囲本りｉ４−ゼは第３図に示す通、９　ｐＨ４，５〜１０
５の範囲で活性を示し、至適−は７．５〜８．０と弱ア
ルカリ側である。

種々の緩衝液中で４℃、２４時間保持したときの残存υ
ノ（−ゼ活性は第４図に示す通シでおる。

ｐＨ４より酸性側およびｐｉ−１１１以上のアルカリ側
で失活がおこシ、ｐＨ４〜１１の範囲では安定である。

■　至適温度および安定温度範囲本ＩＪ　）４−ゼは第５図に示す通シ、２０〜４５℃の
範囲で活性を示し、至適温度は３０〜３５℃である。

各温度で３０分間処理したときの残存リパーゼ活性は第
６図に示す通シでおる。３０分間処理では４５℃まで安
定である。

■　阻害および活性化２価金属イオン、ＳＨ試薬、界面活性剤のリパーゼ活性
に及ぼす影響を、処理後の残存リパーゼ活性を測定して
求めた阻害度によシ調べた。１０−〇Ｃａ”　　、Ｍｎ
”、Ｍｇ”、Ｃｕ”、Ｚｎ”’　Ｆｅ２”（１ｍＭ　）
などではいずれも阻害はみられない。

とくにＣａ２＋の存在によシリパーゼ活性は３〜５倍程
度活性化される。

また、２ｍＭラウリル硫酸ナトリウム（５ＤＳ）、ヨー
ドアセトアミド、０．１％のツウィーン２０、ツウィー
ン８０、トライトンＸ　−１００によシ活性は９０チ以
上阻害される。

■　分子量５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法およびグル
ヂ過法によシ求めた分子量は約１２８，０００である。

■　等電点キャリアーアンホライン（ＬＫＢ製）を用いた等電点電
気泳動法によシ求めた等電点は３．９±０．１である。

■　アミノ酸組成アミノ酸　　　モル比　　　　残基数Ａａｐ　　　　　１３．３　　　　１５５Ｔｈｒ　　　
　　　６．６　　　　　７７Ｓｓｒ　　　　　　８．０
　　　　　９３Ｇｌｕ　　　　　１２．５　　　　１４
６Ｇｌｙ　　　　　　７．５　　　　　８８Ａｌａ　　
　　　　７．３　　　　　８５Ｖａｌ　　　　　　８．
２　　　　　９６Ｍｅｔ　　　　　　１．８　　　　　
２１１１ｕ　　　　　　７．７　　　　　９０Ｌｅｕ　
　　　　　４．６　　　　　５４Ｔｙｒ　　　　　　１
．１　　　　　１３Ｐｈａ　　　　　　４．８　　　　
　５６Ｌｙｓ　　　　　１１．６　　　　１３５Ｈ１ｓ
　　　　　　１．２　　　　１４Ａｒｇ　　　　　　１
．５　　　　　１７Ｐｒｏ　　　　　　２．０　　　　
　２３１１２Ｃｙｓ　　　　　　Ｏ，４５ ■　リポプロテインリノや−ゼ活性ＩＪ　ｉＲ−ゼ活性を有すると同時にＩＪ　７プロテイ
ンリパーゼ活性をも有する。

リノぐ−ゼ活性の測定法次ＫＩＪパーゼ活性の測定法は次の通シである。

大型試験管（φ２３’Ｘ２００ｙｎｍ）に２５ｙｎＭＴ
ｒ　ｉ　ａ−ＨＣ２緩衝液（ｐＨ８，０）　／　１０　
ｍＭＣａＣ４２５ｍＡ’を含む反応液にオリーブ油１ｍ
ｌを添加し、ミキサーで激しく攪拌した後、酵素液０．
５　ｍｌを加え、毎分３００回転の速度で往復振トウし
ながら３０℃にて３０分間反応させる。その後、２０Ｔ
Ｌｌのエタノールを加えて反応を止め、生成脂肪酸を０
０５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で滴定する。盲検値は上
記組成の反応液にエタノールを加えた後に酵素液を加え
たものをアルカリ滴定して求める。

ソノ４−ゼ活性の単位（Ｕｎｉｔ）は、国際生化学連合
（１，Ｕ、Ｂ。）の酵素委員会の提案に従い、上記の反
応条件で１分間に１μｍｏｌｅの脂肪酸を遊離する活性
をＩＵｎｉｔと定める。

次に、本発明を実施例によシさらに具体的に説明する。

実施例１゜グルコース０．５％、ポリペプトン１チ及びＮａＣＬｏ
、５％から成る液体培地（ｐＨ７，０）にスタフィロコ
ッカス・キャビディスＴ−１−１株（ＦＥＢＭ　Ｐ　−
７７２３）を接種し、３０℃にて１８時間振とり培養し
て種菌とした。

ＡＦＦペプトン（大豆蛋白加水分解物；味の素に、に、
製）１０％及びＮａＣＬ　Ｏ，５％から成る液体培地（
ｐＨ６，３）１００ｍＡ！を５００ｍＡｆ容坂ロフラス
コに分注し、滅菌し、この培地（１０チに下ペゾトン培
地）に・　１容量−の前記種菌を接種し、３０℃にて３
００回／分の往復振とう機を用いて２日間振とう培養し
た。

培養液を集め、遠心分離によって菌体を除去し、上澄液
を得た。この上澄液のリパーゼ活性を測定したところ］
、　０．３　ＵＡＬｌであった。この酵素液１３６０７
ｄについて硫安塩析を行い生じた沈澱区分を遠心分離す
ることによシ集め、２０　ｍＭＴｒｉ　ａ−ＨＣ１緩衝
液（ｐＨ７，０）中で一夜透析を行った後、同緩衝液で
平衡化したＤＥＡＥ−セルロースカラムを用いてクロマ
トグラフィー（ワットマン製：φ３６Ｘ２１０＋ｍｎ）
Ｋ付し０　→１．　Ｍ　ＮａＣｔグラジェント溶出を行
ったところ０．４〜０．５　Ｍ　ＮａＣ１で太リパーゼ
が溶出された。適当に濃縮後、１００ｍＭ　Ｔ　ｒ　ｉ
　５−ＨＣ２緩衝液（ｐＨｓ、ｏ　）／ｌ　ｏ　ｏ　ｍ
ＭＮａＣｔで平衡化したＵｌｔｒｏｇｅｌ　ＡｅＡ３４
カラムクロマトグラフィー（ＬＫＢ製；φ２５Ｘ４４０
瓢）に付し適宜再クロマトグラフィーを行うことによシ
ミ党派動的に単一々酵素標品を得ることができた。

上記精製過程での比活性（■蛋白質当シの活性）、回収
率はそれぞれ１３６．２ＵＡｎ９．３４チであった。

実施例２実施例１に示したのと同様の培養上澄液について限外テ
過（日本ミリボア製、ベリコンラボカセット；分子量１
０，０００限外濾過膜ＰＴＧＣ０ＬＣ０５）により濃縮
した後、２０　ｍＭ　Ｔｒ　ｉ　５−ＨＣＬ緩衝液（ｐ
Ｈ７，０）で平衡化したＤＥＡＥ−セルロースカラムを
用いるクロマトグラフィーに付し、以下実施例１に示し
た方法で精製を行い電気泳動的に単一な酵素標品を得る
ことができた。

実施例３゜ＡＦＦ−１！プトン（大豆蛋白加水分解物）５％、Ｎａ
Ｃｔｏ、　５　％から成る液体培地（ＰＨ６，３）７／
を１４１容ジャーファーメンタ−（ＮＥＷ　ＢＲＵＮＳ
ＷＩ　ＣＫＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）に入れて殺菌し
、培地を調製した。

実施例１の場合と同様にして培養した種菌〔スタフィロ
コッカス・キャビテイス’ｒ−１−１（ＦＥＢＭＰ−７
７２３）１２００ｍＪを上記の培地に接種し、培養温度
３０℃、攪拌数３００　ｒ、ｐ、ｍ、、通気量２．Ｏｖ
、ｖ、ｍにて２４時間培養を行った。培養ＥＮを遠心分
離して菌体を除き、限外涙過（日本ミリボア製・４リコ
ンラボ力セツト分子量１０，０００限外濾過膜、ＰＴＧ
ＣＯＬＣ０５）により４倍濃縮し、この濃縮液を塩酸を
用いてｐＨ３，９に調整し、低温（４℃が好ましい）に
２時間放置した後、生じた沈澱物を遠心分離または沖過
によシ回収し溶解した後凍結乾燥することによ）精製酵
素標品を得た。上記精製過程での比活性（■蛋白質当シ
の活性）、回収率はそれぞれ８７．　ＯＵ／ｍ９．２８
チであった。

実施例４゜実施例１で得られた酵素標品を用いて、トリオレイン（
９９チ純度、牛丼化学）を基質として酵素反応を行い、
その反応生成物をシリカゲル薄層クロマトグラフィーで
同定した。すなわち２５ｍＭ　Ｔｒｉ　ａ−ＨＣＩ緩衝
液（ｐＨｓ、　ｏ　）　／　１０　、ｍＦ）ｆｃａｃｔ
２２ｄにトリオレイン１０μ！を加え、これに酵素を総
活性として３Ｕとなるよう添加し３０℃で反応を行った
。

また、比較のため、市販のリゾプス・アルビダス（Ｒｈ
１ｚｏｐｕｓ　ａｒｒｈｉｚｕａ　）由来のリパーゼ、
キャンディダ・シリンドラセ−（Ｃａｎｄｉｄａｅｙｌ
ｉｎｄｒａｃｅａ　）由来のリパーゼ、及びシュート１
カフ　Ｈ咥（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａ、ｐ、　）由
来のリパーゼを用いて同様の反応を行っｔ０反応中１０分、３０分、６０分、及び１．２０分目にサ
ンプルを採取し、クロロホルムによシ生成物を抽出し、
そして抽出液１μｌを薄層クロマトグラフィーによシ分
析した。

この薄層クロマトグラフ系は次の通シとした。

溶媒系：クロロホルム／アセトン（９６：４）。

発　色：　１　％　ｃｅ（ｓｏ４）２／１０　％ＨｚＳ
Ｏ４加熱。

薄層板ニジリカグルＫｉｅｓｓ１ｇｅｌ　６０　Ｆ２５
４　（Ｍｅｒｋ社製）。

この結果を第７図に示す。この図から明らかな通シ、リ
ゾシス（糸状菌）由来のリノヤーゼ、キャンディ〆（酵
母）由来のリパーゼ、及びシュードモナス（細菌）由来
のＩＪ　ノｆ−ゼを用いた場合には、いずれの反応時間
においてもジグリセリドでおる１、３−ジオレイン及び
１．２−（２，３）−ジオレイン、並びにモノグリセリ
ドであるモノオレインが生成し、これらは反応時間の経
過と共にむしろ増加する傾向を示したが、本発明のリパ
ーゼを用いた場合には、全反応時間にわたってモノオレ
イン及びジオレインは検出されず、オレイン酸のみが生
、成した。

実施例５゜実施例１で得られた酵素標品を用いてトリオレイン、ジ
オレイン及びモノオレインを基質として酵素反応を行い
、その反応生成物をシリカゲル薄層クロマトグラフィー
て同定した。すなわち２５ｍＭ　Ｔｒｉ　５−ＨＣ４緩
衝液ＣＰ！（８，０）／１　ｏ　ｍＭＣａＣ／！２１−
にトリオレイン（９９チ純度）７．５μｌ：同緩衝液１
ｄにディオレイン（９９チ純度）５μｌ；同緩衝液１ゴ
にもモノオレイン（９９％純度）３μノを加え、各々酵
素液を総活性として３Ｕとなるよう添加し、３０℃にて
６０分間同条件で反応させた後、クロロホルムによシ抽
出し、この抽出液を、実施例４の場合と同様にしてシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーに付した。この結果を第
８図に示す。図から明らかな通シ、いずれの基質からも
オレイン酸のみが生じた。

実施例６゜１０＊ＡＦＦペプトン培地（実施例１参照のこと）に１
％のオリーブ油を加え、次の菌株を接種して３０℃にて
、３日間振とり培養した。

（１）　　スタフィロコッカス（Ｓｔ−）・キャビテイ
ス（２）　　Ｓ’ｔ、キャビテイス　ＡＴＣＣ２７８４
１（３）　　ｓｔ、キャビテイス　ＡＴＣＣ２７８４２
（４）　　Ｓｔ、キャビテイス　ＡＴＣＣ２７８４３（
５）　　Ｓｔ、キャビテイスＴ−１−１（ＦＥＢＭ　Ｐ
−７７２３）培養後、遠心分離によシ菌体を除去し、上
清液を得、これを酵素液として使用した。この酵素液の
りノ４−ゼカ価は次の通シであった。

この酵素液を、Ｔｒｉｍ−ＨＣ４緩衝液（ＰＨｓ、　ｏ
、１０　ｍＭ　ＣａＣＡ２）によシ、リノクーゼカ価が
３Ｔ、Ｕ／プとなるように稀釈し、と九にトリオレイン
１０分、３０分、６０分、及び１２０分目にサンプリン
グし、これをクロロホルムで抽出し、クロロホルム相２
μノを例３に記載した薄層クロマトグラフィーによシ分
析した。この結果を第９図に示す。

図から明らかな通シ、いずれの菌株に由来する酵素液を
使用した場合にも、反応液中にモノオレイン及びジオレ
インは検出されなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図はオリーブ油を基質とした場合の活性を１００と
して、この発明のリパーゼの各種基質に対する相対活性
を示し、第２図はトリオレインを基質とした場合の活性
を１００とし、この発明のリパーゼの各種基質に対する
相対活性を示し、第３図はこの発明のリパーゼの活性に
対する−の影響を示し、第４図はこの発明のリパーゼの
−に対する安定性を示し、第５図はこの発明のリパーゼ
の活性に対する温度の影響を示し、第６図はこの発明の
す１？−ゼの温度に対する安定性を示し、第７図はこの
発明のリパーゼと従来技術のリパーゼとを反応生成物に
関して比較した薄層クロマトグラムでアシ、第８図は各
種のオレイン酸グリセリドに対するこの発明のＩＪ　ノ
Ｊ？−ゼの反応性を示す薄層クロマトグラムであシ、そ
して第９図はこの発明の種々の酵素液（菌株を異にする
）によｊ５　トリオレインを分解した場合の生成物を示
す薄層クロマトグラムである。第３図及び第４図中＋は０．１Ｍ酢酸緩衝液を使用して
測定した活性を示し、−〇−は０．１　Ｍ燐酸緩衝液を
使用して測定した活性を示し、そして−口−は０．１Ｍ
グリシン−ＮａＯＨ緩衝液を使用して測定した活性を示
す。

Claims

【特許請求の範囲】１、スタフィロコッカス・キャピティス（￥Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ｃａｐｉｔｉｓ
￥）に属し、リパーゼ生産能を有する微生物を栄養培地
に培養し、培地中に該リパーゼを蓄積せしめ、該培地か
ら該リパーゼを採取することを特徴とする新規リパーゼ
の製造方法。２、前記リパーゼが微アルカリ域に至適ｐＨを有し、ト
リグリセリドを脂肪酸およびグリセリンに変換する酵素
である特許請求の範囲第１項記載の製造方法。