JPS61269067A - アルカリホスフアタ−ゼ活性測定用一体型多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、液体試料中のアルカリ（性）ホスファターゼ
活性を測定するための一体型多層分析要素に関するもの
である。さらに詳しくは本発明は、水性液体試料の分析
、特に体液を試料とする臨床検査に有用なアルカリホス
ファターゼ活性測定用一体型層分析要素に関するもので
ある。

［発明の背景］ 臨床検査上、人の体液中のアルカリ（性）ホスファター
ゼの活性を測定することは極めて重要である。すなわち
骨腫瘍を含む骨疾患、閉塞性黄痘をはじめとする肝障害
等の診断に体液中のアルカリ（性）ホスファターゼ（以
下ＡＬＰと略す場合もある）活性の測定がなされている
。

アルカリホスファターゼ活性測定法は、エイチ・デー・
ケイ（）１．　Ｄ、　Ｋａｙ　）の方法（ジャーナル参
オプ・バイオロジカル壷ケミストリー［Ｊ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、、　８９　２３５（１１３３０
）参照）以来、様々な検討がなされてきた。それらのう
ちでは、イー・ジェイ・キング（Ｅ、　Ｊ、　Ｋｉｎｇ
）　　（バイオケミス　　　　□トリー・ジャーナル［
Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　］　３３１１８５．　　　　
１１！１１３ｉ９参照）等によって開発されたアリール
ホス　　　　′フェート類、さらには自己顕色性のある
ｐ−ニド　　　　　・ロフェニルホスフェートを基質と
して導入したことが測定方法の簡便化に著しい効果をも
たらし　　　　゛た。

上記の測定方法はその後、多くの研究者によつ　　　　
゛て改良がなされ、顕色反応の至適ｐＨがｌＯ付近であ
ること、好ましい共存アルコールの種類及び　　　　□
活性化剤としての無機塩、特にマグネシウムイオンの存
在等が明確になりｐ−ニトロフェニルホス　　　　：フ
ェートジナトリウム塩を基質としたＩ　ＦＣＣ法　　　
　１′（クリニカφキミ力、＃アクタ［Ｃ目ｎ、　Ｃｈ
ｉ謬１ｃａＡｃｔａ　］　　（１９８３）　３３９Ｆ　
〜３８７Ｆ）として確立されつつある。

しかしながら、ｐ−ニトロフェニルホスフェートジナト
リウム塩溶液は測定時に調製する必要がある上に、安定
性が乏しいとの問題がある。すな　　　　□わち２０〜
２６℃での溶液保存は８時間が限度であるという不便さ
がある。さらに、−ニド、：Ｉ７エユルホスフエートジ
ナトリウム塩はアマドール・イー（Ａｍａｄｏｒ、　Ｅ
、）等がジャーナル・オブ・アメリカン・メディカル・
アソシェイション（Ｊ。

Ａｍ自ｒ、　Ｗｅｄ、　Ａｓｓ、　）　　１１３４　９
５３　（１９８３）に示すように、フリーザ一温度にお
いても不安定である。それゆえ、測定前に試薬の純度検
定を実施し、かつ試薬の保存、調液後から測定に至るま
での保存等に特別の注意を必要とする。

上記のｐ−ニトロフェニルホスフェートの不安定性の問
題は、特公昭４５−３４８７２号公報記載のｐ−ニトロ
フェニルホスフェートの有機アミン塩の開発により著し
く改善された。また、ｐ−二トロフェニルホスフェート
よりも長波長側に吸収スペクトルを有するチモールフタ
レインモノホスフェートのアミン塩がジョン・エムーエ
リクソン等によって合成された（クリニカル・ケミスト
　リ　−［Ｃ１１ｎｉｃａｌ　　Ｃｈｅｉ＋１ｓｔｒｙ
］　　Ｖｏｌ　　　１９　　Ｎｏ、　　Ｊ１９７３、８
８４頁記載）、これらの研究によって基質自身の保存性
は著しく改善され、従って基質をＡＬＰ測定試薬キット
に組み込むことが容易になった。

一方、臨床検査の領域においては診断に関与する医師等
の医療関係者からの、簡便な操作による迅速な測定を求
める強い要請がある。これに答える方向として近年にお
いて乾式分析法、特に取り扱いの簡便な一体型多層分析
要素を用いるＡＬＰ測定法が開発され、さらにその改良
が進められている。

上記の一体型多層分析要素の構成としては、ビー・ウォ
ルター（Ｂ、％１ａｌｔｅｒ　）がアナリグイカル・ケ
ミストリー（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ）　（１９８３）５５４９３Ａに提案した、透明支持
体上に呈色反応試薬と親木性ポリマーバインダーとを含
む吸水性試薬層及び最上層に多孔性展開層を設けた一体
型多層分析要素が知られており、その他にも多数提案さ
れている。

しかしＡＬＰの分析を乾式分析により実施する場合には
、前述した湿式分析法におけるｐ−ニトロフェニルホス
フェート等の基質の保存性の改良程度では不充分である
。従ってさらに保存性を、特に基質の保存性を改良した
アルカリホスファターゼ活性測定用一体型多層分析要素
の開発が待たれている。

［発明の要旨］ 本発明者は、従来において提案、開発された乾式法によ
るアルカリ（性）ホスファターゼ活性の測定方法及び器
具（一体型多層分析要素）を検討したところ、これらの
分析方法は、塩基性緩衝剤または燐酸受容体として機能
する物質と基質（アリールホスフェートアミン塩等）が
分析要素の作成中あるいは保存中において接触し、結晶
状態では安定化していたアリールホスフェートアミン等
の基質でさえもその保存性が著しく低下する傾向がある
ことが判明した。

すなわち、アルカリホスファターゼの自己顕色性基質は
一般に電子吸引性を有する置換燐酸エステルであるため
に非酵素的加水分解を起しゃすい、ゆえに、アルカリホ
スファターゼの至適ｐＨ１０〜１１付近を緩衝する緩衝
剤または燐酸基の燐原子を求核攻撃する原子（アルコー
ル性水酸基の酸素やアミノ基の窒素原子）を有する燐酸
受容体が基質に接触することは、上記基質の非酵素的性
加水分解を促進させる結果となる。

本発明の主要な目的は、従来の一体型多層分析要素を用
いた乾式分析方法における上記の問題点が改良されたア
ルカリホスファターゼ活性測定用一体型多層分析要素を
提供することにある。

本発明の他の目的は、簡便及び迅速な操作が可能で、臨
床検査の非熟練者であっても容易に試料液体中のアルカ
リホスファターゼ活性を測定することのできる一体型多
層分析要素を提供すること　　　　□である。

本発明は、アルカリホスファターゼに感応して自己顕色
性を示す基質を含有する多孔性展開層。

耐拡散性塩基を含有する緩衝層、および支持体層　　　
　□を積層してなるアルカリホスファターゼ活性測定用
一体型多層分析要素を提供するものである。　　　　　
”［発明の効果］ 本発明のアルカリ（性）ホスファターゼ活性側　　　　
゛定則一体型多層分析要素では、多孔性展開層（以下、
展開層と略す）が自己顕色性基質を含有し。

かつ緩衝層が耐拡散性塩基を含有する構成からなるもの
である。上記耐拡散性塩基は、燐酸受容体または緩衝剤
として機能することができる。すなわち本発明の分析要
素では、燐酸受容体または緩衝剤として機能する物質が
分析要素の作成時および保存中において分析要素の作成
後に展開層に拡散し、基質と接触する恐れがない。

上記特徴の結果として、本発明のＡＬＰ活性測定用一体
型多層分析要素は、基質の非酵素的加水分解が大幅に減
少して、基質の保存性が顕著に向上するため、分析要素
の作成が容易であり、かつその安定性も顕著に向上する
との利点がある。

さらに１本発明のＡＬＰ活性測定用一体型多層分析要素
は、作成直後の測定使用においても、従来のＡＬＰ活性
測定用一体型多層分析要素の場合に比較して明らかに高
い精度を示すとの利点がある。

［発明の詳細な記述］ 本発明のＡＬＰ活性測定用一体型多層分析要素の支持体
層を構成するものとしては、光透過性でかつ水不透過性
である支持体が好ましい、光透過性・水不透過性支持体
の例としては、ポリエチレンテレフタレート、ビスフェ
ノールＡのポリカルボネート、ポリスチレン、セルロー
スエステル（例、セルロースジアセテート、セルロース
トリアセテート、セルロースアセテートプロピオネート
等）等のポリマーからなる厚さ約５０ｇｍから約ｉｎｍ
、好ましくは約８０１Ｌｍから約３００１Ｌｍの範囲の
フィルム、もしくはシート状の透明支持体を挙げること
ができる。

支持体の表面には必要により下塗層を設けて、支持体の
上に設けられる緩衝層あるいはその他必要に応じて設け
られる層（例、吸水層）と支持体との接着を強固なもの
にすることができる。また、下塗層の代りに、支持体の
表面を物理的あるいは化学的な活性化処理を施して接着
力の向上を図ってもよい。

支持体の上には（場合によっては下塗層等の他の層を介
して）Ｍ樹層が設けられる０本発明のＡＬＰ活性測定用
一体型多層分析要素に備えられる緩衝層は親水性結合剤
よりなる層、すなわち水を吸収して膨潤する親木性ポリ
マーを層形成成分として利用している暦であることが好
ましい。

緩衝層の製造に用いることができる親水性ポリマーは、
一般には水吸収時の膨潤率が３０℃で約１５０％から約
２０００％、好ましくは約２５０％から約１５００％の
範囲の天然または合成親水性ポリマーである。そのよう
な親木性ポリマーの例としては、特開昭５８−１７１８
６４号公報および特願昭５８−２１７４２８号明細書等
に開示されているゼラチン（例、酸処理ゼラチン、脱イ
オンゼラチン等）、ゼラチン誘導体（例、フタル化ゼラ
チン、ヒドロキシアクリレートグラフトゼラチン等）、
アガロース、プルラン、プルラン誘導体、ポリアクリル
アミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン
等をあげることができる。

緩衝層の乾燥時の厚さは約１ルｍから約１１００ＩＬの
範囲であることが好ましく、より好ましくは約３ｐｍか
ら約３０１Ｌｍの範囲である。また緩衝層は実質的９透
明１あ６３が好ｌ°゛・　　　　　　　１本発明のＡＬ
Ｐ活性測定用一体型多層分析要素　　　　［においては
、緩衝層が耐拡散性塩基を含有するこ　　　　１とを特
徴とする。上記耐拡散性塩基は、燐酸受容　　　　□体
または緩衝剤として機能する・　　　　　　　　　　　
　１゜上記耐拡散性塩基の例としては、塩基性ポリマ　
　　　≧ −を挙げることができる。上記塩基性ポリマーと　　　
　１１′ しては、アミノ基を有する高分子化合物を使用す　　　
　。

ることができる、上記アミノ基としては、第一　　　　
５級、第二級および第三級アミン基を使用すること　　
　　搭。

ができる　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　１１・１゜ なお、緩衝層を塩基性ポリマーおよびゼラチン等の低融
点水溶性結合剤で構成する場合においては、緩衝層を構
成する際に緩衝層を硬膜化して。

活性測定時に熱的に安定な状態となるようにする　　　
　□゛必要ある。上記のような場合には、アミノ基とし
ては第三級アミノ基であることが好ましい、すなわち、
第一級および第二級アミン基は上記硬膜化反応を阻害す
る恐れがある。以上の理由から、上記塩基性ポリマーは
、第三級アミン構造を含むくり返し単位を含む塩基性ポ
リマーであることが好ましい、上記第三級アミン構造を
含むくり返し単位の例としては、下記一般式（１）によ
って表されるくり返し単位を挙げることができる。

［上記一般式（１）において、 Ｒ１は水素原子またはメチル基であり；Ｘは酸素原子ま
たは−ＮＨ−であり； ｎは０，１，２．３または４であり：そしてＲ２および
Ｒ３は炭素原子数１〜４のアルキル基またはヒドロキシ
アルキル基であるか（Ｒ２およびＲ３は同一であっても
異なっていてもよい）、あるいは Ｒ２とＲ３は隣接する窒素原子と共に六員飽和複素環を
形成してもよい］ 上記一般式（Ｉ）においては、Ｒ１は水素原子であるこ
とが好ましい、またｎは０．１，２または３であること
が好ましい、さらにＲ２およびＲ３はメチル基またはエ
チル基であるか（Ｒ２およびＲ３は同一であっても異な
っていてもよい）、あるいは−ＮＲ２Ｒ３がピペリジノ
基を形成することが好ましい、塩基性ポリマーが、上記
一般式（Ｉ）によって表されるくり返し単位を含む場合
には、少なくと・も３０モル・％含むことが好ましい。

上記一般式（１）によって表されるくり返し単位を誘導
することができる化合物の具体例としては。

アクリレート糸上ツマ−（上記一般式（Ｉ）において、
Ｒ１が水素原子で、Ｘが酸素原子であるもの）として、 ［（ジメチルアミノ）メチルコアクリレート、［（ジメ
チルアミノ）エチルコアクリレート、［（ジエチルアミ
ノ）エチルコアクリレート、［（ジメチルアミノ）エチ
ルコアクリレート、［（ジメチルアミノ）プロピルコア
クリレート、 （モルホリノエチル）アクリレート、 （ピペリジノプロピル）アクリレートおよび（［ビス（
β−ヒドロキシエチル）］アミノプロピル）アクリレー
トを挙げることができ、メタクリレート系モノマー（上
記一般式（Ｉ）において、　Ｒ１がメチル基で、Ｘが酸
素原子であるもの）として、 ［（ジメチルアミノ）メチル］メタクリレート、 ［（ジエチルアミノ）エチル］メタクリレート、 ［（ジメチルアミノ）エチル］メタクリレート、 ［（ジメチルアミノ）プロピル］メタクリレート。

（ピペリジノプロピル）メタクリレートおよび（［ビス
（β−ヒドロキシエチル）１アミノプロピル）メタクリ
レートを挙げることができ、アクリルアミド系モノマー
（上記一般式（Ｉ）において、Ｒ１が水素原子で、Ｘが
−ＮＨ−であるもの）として、 Ｎ−［（ジメチルアミノ）プロピルコアクリル　　　　
１アミドおよび　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ｔ■ Ｎ−［（ジプロピルアミノ）エチルｌアクリル　　　　
１アミドを挙げることができ、 メタクリルアミド系モノマー（上記一般式（Ｉ）におい
て、Ｒ１がメチル基で、Ｘが−ＮＨ−であるもの）とし
て、 Ｎ−［（ジメチルアミノ）プロピル］メタクリルアミド
を挙げることができる。

第三級アミン構造を含むくり返し単位の他の例　　　　
１としては、下記一般式（■）および（ｍ）によって表
されるくり返し単位を挙げることができる。

−イーＣＨ２ＣＨ２−Ｎ　−＋−−（ｍ）［上記一般式
（ＩＩ）および（ｍ）において、Ｒは炭素原子数１〜４
のアルキル基である］また、くり返し単位に含むことが
できる第三級アミンの他の例としては、 ビニルピリジン（例、２−ビニルピリジンおよび４−ビ
ニルピリジン）、 ビニルイミダゾール誘導体であるｌ−ビニル−３−フル
キル−２，３−ジヒドロイミダゾール（例、１−ビニル
−３−エチル−２，３−ジヒドロイミダゾール）、１−
ビニル−３−フルアルキル−２，３−ジヒドロイミダゾ
ール（例、１−ビニル−３−ベンジル−２，３−ジヒド
ロイミダゾール）、２−ビニル−１−アルキルイミダゾ
ール（例、２−ビニル−１−メチルイミダゾールおよび
２−ビニル−１−メチルイミダゾール）および２−′ビ
ニルー１−アルアルキルイミダゾール（例、２−ビニル
−１−ベンジルイミダゾール）等を挙げることができる
・ 上記様々な第三級アミン構造を含むくり返し単位を含む
塩基性ポリマーは、単独重合体であってもよく、共重合
体であってもよい、共重合体としては、上記くり返し単
位のみからなる共重合体であってもよいし、他の七ツマ
−との共重合体であってもよい、他の七ツマ−との共重
合体を製造する場合は、上記くり返し単位を少なくとも
３０モル％含有させることが好ましい、共重合体に用い
られる他のモノマーとしては、アクリルアミド、Ｎ置換
アクリルアミド、メタクリルアミド、Ｎ置換メタクリル
アミド、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステル、
スチレン、スチレン、Ｊ導体、ジビニルベンゼン、Ｎ−
ビニルピロリドン等を挙げることができる。

塩基性ポリマーの分子量の好ましい範囲は、分子量が低
すぎると塩基性ポリマーが展開層中に拡散する恐れがあ
り、他方高すぎるものは緩衝層塗布液中の親水性コロイ
ドとの相溶性が悪くなることを考慮して各塩基性ポリマ
ーの種類に応じて決定する。一般には１％食塩水に塩基
性ポリマーを溶解し、３０℃で測定した極限粘度が０．
１〜５．０程度、好ましくは０．３〜２．５程度の値と
なる塩基性ポリマーを用いる。

また塩基性ポリマーは疎水性ポリマーとの水性ラテック
ス、架橋性七ツマ−を利用した水性ラテックスあるいは
微粒子としても本発明において実施することができる。

さらに対拡散性塩基の例としては、疎水性ラテックスや
微粒子（例、各種金属酸化物、結晶性セルロース）等の
担体表面に、物理的または化学的に上記塩基性ポリマー
あるいは低分子塩基やアルカリ性金属塩を吸着させた粒
子等も挙げることができる。

緩衝層における耐拡散性塩基の好ましい含有量の範囲は
、含有量が低すぎると本発明の効果が不充分となる恐れ
があり、他方多すぎるものは緩衝層を形成する塗布液に
おける親木性ポリマーとの相溶性が悪くなることを考慮
して決定する。一般には緩衝層の乾燥重量当り５乃蚕８
０％の範囲。

好ましくは１０乃至６０％の範囲である。

本発明において燐酸受容体とは、アルカリホス　　　　
　□ファターゼの作用により基質から生じた燐酸を化　
　　　□学反応（例、酸・塩基中和反応）によりトラッ
プする機能を有する化合物を含むものである。すなわち
、従来の燐酸受容体は一般にアルカリホスファターゼの
作用により基質から生じた燐酸に対する反応が、燐酸と
水との反応（氷解）よりも速い官能基（水酸基など）を
有する化合物であった。

これに対して、本発明の耐拡散性塩基が燐酸受容体とし
て機能する場合には、生成した燐酸をトラップし分析要
素内の燐酸濃度の上昇を抑制して、反応生成物である燐
酸による生成物阻害を阻止する作用をする０本発明にお
いて燐酸受容体として機能することができる耐拡散性塩
基を用いることにより、目的の反応が促進され、アナラ
イトの酵素活性が増大し、この結果検出精度が向上する
。

なお、燐酸受容体として機能させる目的で耐拡散性塩基
を用いる場合においても、耐拡散性塩基は目的の酵素反
応の至適ｐＨを与えることのできる緩衝剤としても機能
させることも可能であるから、所望により別に緩衝剤を
加えずして緩衝層を形成させることもできる。

また、緩衝剤として機能させることを主な目的として、
上記耐拡散性塩基を緩衝層に含有させることもできる。

また、上記耐拡散性塩基が燐酸受容体として機能するが
、！ｌｌ副剤しての機能が不充分である場合には、緩衝
層に少なくとも１種類の緩衝剤として機能する他の化合
物を含有させることが好ましい。

緩衝層に含有させることができる上記緩衝剤として機能
する他の化合物としては、アナライトであるアルカリホ
スファターゼの至適ｐＨ１０〜１１付近を緩衝し、かつ
反応を阻害するなどの悪影響を及ぼすことのない緩衝剤
から選択する。

上記緩衝剤の例としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩や
グツド（Ｇｏｏｄ）の緩衝剤等の公知の緩衝剤を挙げる
ことができる。これらの緩衝剤は「蛋白質・酵素の基礎
実験法１　（掘尾武−他、南江堂、１１１１８１）等の
公知文献を参考にして選択し、使用することができる。

なお緩衝層の上下に、緩衝層を硬化させる目的で硬膜層
を設けてもよい、硬膜層を形成する親水性ポリマーバイ
ンダーの例としては、前述の緩衝層の製造に用いられる
親木性ポリマーと同様の親木性ポリマーを用いることが
できる。

緩衝層を構成する水溶性結合剤がゼラチン等の低融点性
物質である場合には、緩衝層の製造は公知の写真フィル
ム製造技術を用いれば容易に製造することができる。た
だし、このような緩衝層は活性測定中に溶解または流動
化等を起し、測定値をバラツカせる。上記問題点を改良
するために写真フィルム製造技術において公知のビニル
スルホン、アルデヒド等の硬化剤（架橋剤）が使用され
る。しかしながら、これらの硬化剤は本発明のｐＨ１ｏ
〜１１に緩衝した緩衝層塗布液に直接添加する・と架橋
（硬化）反応が高ｐＨ域では著しく早いため、一般には
安定的な塗布が困難となる。

そこで上記のような場合には、上記硬化剤を含む硬膜層
を緩衝層に隣接して設けることが好ましい、硬膜層は塗
布の段階で物理的に緩衝層と連続化できる位置であるな
らば、緩衝層との上下の位置関係および中間に介在する
他の機能層については特に制限はない、なお緩衝層を構
成する水溶性結合剤が７ガロース等の高融点性物質であ
る場合等においては、特に硬膜層を設ける必要がない場
合がある。

上記緩衝層または硬膜層の上に必要に応じて光遮蔽層を
設けることができる。光遮蔽層は、光遮蔽性、または光
遮蔽性と光反射性とを兼ね備えた微粒子または微粉末（
以下、単に微粒子という）が少量の被膜形成能を有する
親木性ポリマーバインダーに分散保持されている水透過
性または水浸透性の層である。光遮蔽層は緩衝層にて発
生した検出可能な変化（色変化、発色等）を光透過性を
有する支持体側から反射測光する際に、後述する展開層
に点着供給された水性液体の色、特に試料が全血である
場合のヘモグロビンの赤色等、を遮蔽するとともに光反
射層または背景層としても機能する。

光遮蔽性と光反射性とを兼ね備えた微粒子の例としては
、二酸化チタン微粒子（ルチル型、アナタース型または
プルカイト型の粒子径が約０．１ｇｍから約１．２１Ｌ
ｍの微結晶粒子等）、硫酸バリウム微粒子、アルミニウ
ム微粒子または微小フレーク等を挙げることができ、光
遮蔽性微粒子の例としては、カーボンブラック、ガスブ
ラック、　　　　　：カーボンミクロビーズ等を挙げる
ことができ、これらのうちで特に二酸化チタン微粒子、
硫酸バリウム微粒子が好ましい。

被膜形成能を有する親水性ポリマーバインダー　　　　
□ の例としては、前述の緩衝層の製造に用いられる親木性
ポリマーと同様の親水性ポリマーのほかニ、　弱ｔｔｉ
水性の再生セルロース、セルロースアセテート等を挙げ
ることができ、これらのうちではゼラチン、ゼラチン誘
導体、ポリアクリルアミド等が好ましい、なお、ゼラチ
ン、ゼラチン誘導体は公知の硬化剤（架橋剤）を混合し
て用いることができる。

光遮蔽層は、光遮蔽性微粒子と親木性ポリマー　　　〜
との水性分散液を公知の方法により緩衝層の上に塗布し
乾燥することにより設けることができる。

また光遮蔽層を設ける代りに、後述する展開層中に光遮
蔽層の成分を含有させてもよい。

なお、緩衝層の上に、場合によっては光遮蔽層等の層を
介して、後述する展開層を接着し覆歴するために接着層
を設けてもよい。

接着層は水で湿潤しているとき、または水を含んで膨潤
しているときに展開層を接着することができ、これによ
り各層を一体化で−きるような親水性ポリマーからなる
ことが好ましい、接着層の製造に用いることができる親
水性ポリマーの例としては、緩衝層の製造に用いられる
親水性ポリマーと同様な親木性ポリマーがあげられる。

これらのうちではゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアク
リルアミド等が好ましい、接着層の乾燥膜厚は一般に約
０．５ｐｍから約２０１Ｌｍ、好ましくは約ｌＪＬｍか
ら約１０ルｍの範囲である。

なお、接着層は緩衝層上以外にも、他の居間の接着力を
向上させるため所望の層上に設けてもよい。接着層は親
木性ポリマーと、必要によって加えられる界面活性剤等
を含む水溶液を公知の方法で、支持体や緩衝層等の上に
塗布する方法などにより設けることができる。

これらの層の上には、多孔性展開層が設けられる０本発
明の多孔性展開層は液体試料計量作用を有していること
が好ましい、液体試料計量作用を有する展開層とは、そ
の上側の表面（支持体から遠い側の表面）に点着供給さ
れた水性液体試料、を、その中に含有している成分を実
質的に偏在させることなしに、横（水平）方向に広げ１
．単位面績当りほぼ一定容量の割合で緩衝層に供給する
作用を有する層である。また本発明の多孔性展開層は、
アナライトであるアルカリホスファターゼが容易に通過
・拡張しうる空間を有する多孔性展開層であることが好
ましい。

以上の点から本発明のＡＬＰ活性測定用一体型多層分析
要素に備えられる多孔性展開層のマトリックスを構成す
る材料としては、濾紙、不織布、織物生地、編物生地、
ガラス繊維、濾紙、プラッシュポリマーより形成される
メンブランフィルタ−１あるいはポリマーミクロビーズ
等からなる三次元格子状構造物等を用いることが好まし
い。

展開層のマトリックスは、これらの材料から分析条件等
に応じて選択するが、全血など分析を阻害する非溶解性
物質（全血の場合は血球）を含む試料を用いる場合には
、阻害物質を除去する作用を有する繊維生地または編物
生地を用いることが好ましい。

上記展開層に用いることができる織物生地（織布）とし
ては特開昭５５−１６４３５６号および特開昭５７−６
６３５９号の各公報に開示の広範囲の種類の織物生地が
あげられる。織物生地のうちでは、たて（経）糸とよこ
（！Ｉ）糸とで織った平織物が好ましく、平織物のうち
では細布生地、金山生地、ブロード生地、ボブリン生地
等が好ましい、織物生地を構成する糸としては後述する
編物生地を構成する糸と同様の素材からなる糸があげら
れ、糸の形態としてはフィラメント糸、紡績糸（加捻糸
）のいずれをも用いることができ、これらのうちでは紡
績糸が好ましい、織物生地め糸の太さは綿紡績糸番手で
表して約２Ｏ３から約１５０Ｓ、好ましくは約４０Ｓか
ら約１２０Ｓ相当の範囲または絹糸デニールで表して約
３５０から約３００Ｄ、好ましくは約４５０から約１３
０Ｄ相当の範囲、織物生地の厚さは約１１００ｐから約
５００１Ｌｍ、好ましくは約１２０ルｍから約３５０μ
ｍの範囲、織物生地の有する空隙率は約４０％から約９
０％、好ましくは約５０％から約８５％の範囲である。

また、上記展開層に用いることができる編物生地（編布
、すなわち編んだ布状物）としては、広　　　　′範囲
の種類の編物生地があげられ、それらのうち　　　　□
ではたて（経）メリヤスとよこ（緯）メリヤスが　　　
　□好ましい、たてメリヤスとしては、−重アトラス　
　　　゛編生地、トリコット編生地、ダブルトリコット
編生地、ミラニーズ編生地、ラッシェル編生地等を　　
　　□用いることができ、よこメリヤスとしては、平編
　　　　□生地、パール編生地、ゴム編生地、両面編生
地等を用いることができる０編物生地を編成する糸と　
　　　□しては、綿、絹、羊毛等の天然繊維の糸、ビス
コースレーヨン、キュプラ等の再生セルロース、セルロ
ースジアセレート、セルローストリアセテート等の半合
成有機ポリマー、ポリアミド（各種のナイロン類）、ア
セタール化ポリビニルアルコール（ビニロン等）、ポリ
アクリロニトリル、ポリエチレンテレフタレート、ポリ
エチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン等の合成有機
ポリマーの細繊維からなる糸または単繊維からなる糸、
天然繊維と再生セルロース、半合成または合成有機ポリ
マー繊維との混合繊維からなる糸があげられる。糸の形
態としては、フィラメント糸、紡績糸（加捻糸）のいず
れをも用いることができ、これらのうちでは紡績糸が好
ましい０編物生地の糸の太さは、綿紡績糸番手で表わし
て約４０５から約１５０Ｓ、好マシくは約６ｏｓから約
１２０３相当の範囲または絹糸デニールで表わして約３
５Ｄから約１３０Ｄ、好ましくは約４５０から約９゜Ｄ
相当の範囲である。ａｔ物生地の編成工程時のゲージ数
としては約２０から約５０の範囲、編物生地の厚さは約
１００７ｔｍから約６００１Ｌｍ、好ましくは約１５０
ｇｍから約４００１Ｌｍの範囲、編物生地の有する空隙
率は約４０％から約９０％、好ましくは約５０％から約
８５％の範囲である。

たてメリヤスのうちでは縦方向の伸縮が少なく、また編
物展開層のラミネーション工程における操作のしやすさ
、裁断時の編目はどけのなさ等の観点でトリコット編生
地、ラッセル編生地、ミラニーズ編生地、ダブルトリコ
ット編生地が好ましい。

多孔性展開層に用いられる織物または編物生地は水洗等
の脱脂処理により少なくとも糸製造時、織物製造時ある
いは編物編成時に供給または付着した油脂類を実質的に
除去した織物または編物生地であるが、さらにその織物
または編物生地は特開昭５７−６６３５９号公報に開示
の物理的活性化処理（好ましくはグロー放電処理または
コロナ放電処理等）を生地の少なくとも片面に施すか、
あるいは特開昭５５−１６４３５６号、特開昭５７−６
６３５９号公報等に開示の親木性ポリマー含浸処理等の
親木化処理、またはこれらの処理工程を逐次実施するこ
とにより織物または編物を親水化し、下側（支持体に近
い側）の層との接着力を強化することができる。

織物または編物生地からなる展開層を反応層または接着
層に接着、積層するには、特開昭５５−１６４３５８号
および特開昭５７−６６３５９号各公報等に開示の方法
に従って作成することができる。すなわち、反応層また
は接着層の塗布後未乾燥のうちに、または乾燥後の層に
水（または界面活性剤を少量含む水）を実質的に均一に
供給して層を膨潤させ、ついで織物または編物生地を湿
潤または膨潤している層の上に実質的に均一に軽く圧力
をかけながら接着、積層し一体化する。

また展開層がプラッシュポリマーまたはメンブランフィ
ルタ−からなる場合には特公昭５３−２１．６７７号公
報等、ポリマーミクロビーズからなる三次元格子状構造
物層である場合には特開昭５５−９０８５９号公報等、
濾紙または不織布からなる場合には特開昭５７−１４８
２５０号公報等にそれぞれ記載の方法に従って設けるこ
とかできる。

緩衝層または接着層の親木性ポリマーバインダーがゼラ
チンまたはゼラチン誘導体の場合には、層の塗布後ゼラ
チン（誘導体）が未乾燥のゲル状態の間に上記多孔性展
開層を構成する材料（織物または編物生地等）を接着、
積層し一体化する方法を採用することができる。

本発明のＡＬＰ活性測定用一体型多層分析要素分析要素
では、自己顕色性基質は展開層に含有させる０本発明に
おいて、自己顕色性基質とはアルカリ（性）ホスファタ
ーゼの基質として、加水分解反応を受は検出可能な発色
または変色を示す物質のことである。上記自己顕色性基
質としては、その保存性を考えると、自己顕色性アリー
ルポス　　　　り゛、１ フーート７ミ′塩である０とが好ましい・自己１ｊｉ　
　　　　、・色性アリールホスフェートアミン塩として
特に好　　　　１：（１： ましい化合物は、アルカリ性ホスファターゼの加　　　
　１木分解反応によって４００ｎｍ以上の可視領域吸　
　　　′収スペクトルを示すモノアリール燐酸エステル
のモノ又はジアミン塩である。

自己顕色性アリールホスフェートアミン塩を構成するア
リールホスフェートとしてはポワーージー・エヌ（Ｂｏ
ｗｅｒ　Ｇ、　Ｎ、　）　：クリニカル・ケミスト　リ
　−（（Ｉｉｎ、　　Ｃｈｅ＋ｗ）　　　Ｖｏｌ　　１
４．　　Ｎｏ　　？、　　ｆ３０８〜８１Ｇ（１９１１
７）　記載のｐ−ニトロフェニルホスフェート、フェノ
ールフタレンモノホスフェート、チモールフタレンモノ
ホスフェート、０−メチルフルオレセインホスフェート
等が挙げられる。また、特開昭５７−１５９４９９号公
報記載のアリールアゾ置換アリールホスフェート等を利
用することもできる。

自己顕色性アリールホスフェートアミン塩の具体的化合
物の例としては、Ｐ−ニトロフェニルホスフェートビス
（２−アミノ−２−メチル−１゜３−プロパンジオール
）塩、ｐ−ニトロフェニルホスフェートビス（シクロヘ
キシルアミン）塩、ｐ−ニトロフェニルホスフェートビ
ス（２−アミノ−２−エチル−１，３−プロパンジオー
ル）塩、ｐ−ニトロフェニルホスフェートビス（ジシク
ロヘキシルアミン）塩、ｐ−ニトロフェニルホスフェー
トシトリス塩（トリスはトリス（ヒドロキシメチル）ア
ミノメタンを意味する）、４−二トロナフチルホスフェ
ートビス（２−アミノ−２−エチ）Ｌｙ　−１、３−プ
ロパンジオール）塩、チモールフタレインモノホスフェ
ートビス（シクロヘキシルアミン）塩、４−フェニルア
ゾナフチルホスフェートビス（２−エチルアミノエタノ
ール）塩、フェノールフタレインモノホスフェートビス
（Ｎ−メチルグルカミン）塩、４−ニトロフェニルモノ
ホスフェートビス（２−アミノ−２−エチルプロパツー
ル）塩、４−ニトロフェニルモノホスフェートビス（２
−エチルエタノール）塩および４−ニトロフェニルモノ
ホスフェートビス（２−（イソプロピルアミノ）エタノ
ール）塩などを挙げることができる。

展開層に上記の自己顕色性基質を含有させるに際しては
、自己顕色性が基質緩衝層の緩衝剤等に接触しないよう
に含有させることが好ましい、その方法としては、展開
層に含有させる自己顕色性基質を、必要に応じて界面活
性剤、高分子化合物と共に有機溶剤、または有機溶剤と
水との混合溶剤等に溶解した塗布液を、前記した方法に
て支持体上に緩衝層、展開層を順次積層した積層体の展
開層の上から塗布する方法又は上記展開層に含浸させる
方法が利用できる。

上記の有機溶剤としてはエタノール、メタノール、プロ
パツール、アセトン、アセトニトリル等の水溶性極性溶
剤、及びトルエン、酢酸エチル等の疎水性溶剤を用いる
ことができる。

展開層がラミネートにより積層する展開層材料、例えば
、織物１編物、濾紙、不織布、ガラス繊維濾紙からなる
場合には、あらかじめ基質を含浸し、乾燥した後ラミネ
ートしてもよい、また塗布により形成される展開層１例
えばプラッシュポリマ一層やミクロビーズ三次元格子状
粒子構造体等からなる展開層の場合には、展開層と基質
の塗布液を混合して塗布してもよい。

本発明における展開層には上記自己顕色性基質以外にも
、光遮蔽性微粒子や界面活性剤等の試薬を必要に応じて
含有させることができる。これらの試薬は、自己顕色性
基質の塗布液に混合して展開層に含有させてもよいし、
基質とは別に上記のいずれかの方法を利用して展開層に
含有させてもよい。

本発明のＡＬＰ活性測定用一体型多層分析要素は以上の
ように、支持体、緩衝層および展開層を積層してなるも
のであり、これらの支持体、Ｉｌ衝　　　　□層および
展開層はこの順で積層されていることが　　　　　：好
ましい、なお本発明のＡＬＰ活性測定用一体型多層分析
要素は、前述のように上記の必須の層重　　　　′外に
も他の機能層を含んでいてもよいことは勿論　　　　１
である。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ｊ以下に本発明の実施例及び比較例を示す。

［実施例１］ 透明ポリエチレンテレフタレート支持体（厚さ　　　　
□：１８０ＪＬｍ）の表面を親木化処理し、その処理表
面上に下記の組成の塗布液を塗布、乾燥して乾燥膜厚１
５μｍの緩衝層を形成した。

緩衝、形成用　血液： アルカリ処理 脱イオンゼラチン　　　　　　２４ｇ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２４０ｇ
ノニルフェノキシ・ ポリグリシトール　　　　　ｌ・６ｇ ポリ（Ｎ−［（ジメチルアミノ） プロピルコアクリルアミド） １８％水溶液 （平均分子量約１０万）　　　　３０ｇＮ−（２−ヒド
ロキシエチル） エチレンジアミン− Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’−三酢酸　２ミリモルＺ　ｎ　（ＣＨ
３Ｃｏｏ）２　　・ ２８２０　　　　　　　　　１ミリモルＭ　ｇ　Ｓ　Ｏ
ｓ　　・７Ｈ２０２ミリモル以上の溶液に５ＮのＮａＯ
Ｈ水溶液を加えてｐＨを１１．０に調整した。

上記緩衝層の上に、下記の塗布液を乾燥膜厚が３．６終
ｍになるように塗布、乾燥して硬膜暦を形成した。

硬膜層形成用　血液： ゼラチン　　　　　　　　　　　１２ｇ水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　２６８ｇノニルフェノキシ
・ ポリグリシトール　　　　　１．３ｇ １．２−ビス（ビニルスルホニル アセトアミド）エタン　　０．７２ｇ 水／アセトン （混合比＝ｌ：１）　　　　　　１８ｇ上記硬膜層の上
に、下記の塗布液を乾燥膜厚が３１Ｌｍになるように塗
布し、接着層とした。

接着層形成用　血液： ゼラチン　　　　　　　　　　　１２ｇ水　　　　　　
　　　　　　　　　　　２ｇ８．７ｇノニルフェノキシ
・ ポリグリシトール　　　　　１．３ｇ 上記接ＭＭの上に、０．４％ノニルフェノキシ・ポリグ
リシトール水溶液を塗布し、次に３６ゲージ５０Ｄポリ
エチレンテレフタレート紡績糸からなるトリコット編物
を圧着して展開層とした。

上記展開層に、下記の組成の塗布液を１２０ｍｆＬ／ｒ
ｒｆとなるように塗布、乾燥した。。

己　　　　　　　　含　　　　　　　：ｐ−ニトロフェ
ニルホスフェート ビス（トリス）塩　　　５０ミリモル ポリビニルピロリドン （平均分子量ｌＯ万）　　　　　　６ｇエタノール　　
　　　　　　　　　２２ｇアセトン　　　　　　　　　
　　２２ｇ以上の方法により１本発明に従うＡＬＰ活性
測定用一体型多層分析要素を作成した。

上記分析要素の分析性能を、下記のように評価した。

分析要素を一辺が１５ｍｍの正方形に裁断し、プラスチ
ックマウント（特開昭５７−６３４５２号公報に記載）
に封入して、ＡＬＰ分析用スライドを作成した。

次に、ＡＬＰ活性測定のための標準分析法であるＩ　Ｆ
ＣＣ法により、ＡＬＰが１１０，２０７．３６８．６１
４．９２２および１１８２ＩＵ／皇（３７℃）と検定さ
れたヒト血清１０ＪＬ、ｌを各マウント中の分析要素の
展開層に点着し、水分の蒸着が充分に制御された３７℃
恒温加熱板上に静置し、中心波長４１０　ｎｍで２分お
よび５分での反射光学濃度測定を実施した。測定結果を
第１表に示す。

第１表 ＡＬＰ活性値　　　ＡＯＤ　（５分−２分）（ＩＵ／交
） ２０７０，０５０ ８１４０，１４０ ９２２０，１８８ １１８２０，２２３ 上記の結果から明らかなように、光学的濃度の　　　　
　□増加量とＡＬＰ活性値が正の相関を示し、本発明の
分析要素がＡＬＰ活性測定用として有効であることがわ
かる。

次に、本発明の分析要素を用い、病院患者血清を検体と
して多検体テストを行ない、テクニコン社製ＲＡ１００
Ｏ（ＡＭＰバッファー、ｐ−ニトロフェニルリン酸）を
用いた分析結果との相関を調べた。

測定結果を以下に示−す。

ｙ＝１．２６７ｘ＋９２．０ ：回帰直線の式 ％式％： ５ｙｘ＝１５．１　　：回帰からの標本標準偏差ｎ＝９
９　　　　　：検体数（試料数）Ｘは実施例１のＡＬＰ
測定用分析要素による測定値である。この結果より上記
分析要素は、他の標準的な測定方法とも良好な相関関係
があることが判明した。

［実施例２］ 実施例１の緩衝層形成用塗布液中のポリ（Ｎ−［（ジメ
チルアミノ）プロピル］アクリルアミド）１８％水溶液
の量３０ｇを９０ｇに変更した以外は実施例１と同様に
して、本発明に従うＡＬＰ測定用分析要素を調製しその
分析性能を評価した。

その結果１本実施例のスライドもＡＬＰ活性測定用分析
要素として有効であることが判明した・また本実施例に
おいても実施例１と同様に反射光学濃度測定を行なった
。その結果を下記第２表に示す。

第２表 スライド　　　　ＡＯＤ（５分−２分）／Ｕ実施例１　
　　　　　１．８９Ｘ１０−４実施例２　　　　　　２
．０４×１０−４上記第２表より明らかなように、単位
ユニット当りのｏＤの増加（ＡＯＤ　（５分−２分）／
Ｕ）で比較した場合には、ポリ（Ｎ、Ｎ−ジメ羊ルアミ
ノプロピルアクリルアミド）の量を増加させると感度は
増加した。

［実施例３］ 実施例１の緩衝層形成用塗布液中の成分に２−アミノ−
２−メチル−１，３−プロパンジオール３０ｍＭを加え
た以外は実施例１と同様にして、本発明に従うＡＬＦ測
定用分析要素を調製しその分析性能を評価した。

その結果１本実施例のスライドもＡＬＰ活性測定用分析
要素として有効であることが判明した。

また本実施例においても実施例２と同様に単位ユニット
当りのＯＤの増加を求めた。その結果を下記第３表に示
す。

第３表 スライド　　　　Δ００　（５分−２分）／Ｕ実施例１
　　　　　　１．８９Ｘ１０−４実施例３　　　　　　
２．４０Ｘ１０−４上記第３表より明らかなように、２
−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオールを加
えることにより、感度の増加が見られた。

［比較例］ 実施例１の緩衝層形成用塗布液の組成を下記の組成に並
行した以外は実施例１と同様にして、比較用のＡＬＰ活
性測定用分析要素を調製した。

アルカリ処理 脱イオンゼラチン　　　　　　３０ｇ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２４０ｇノ
ニルフェノキシ・ ポリグリシトール　　　　　１．６ｇ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル） エチレンジアミン− Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’−三酢酸　２・ミリモルＺｎ　（Ｃ２
Ｉ（３００）　２　　・ ２Ｈ２０１ミリモル Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２０２ミリモル 炭酸ナトリウム　　　　　　３．ＩＪｌｇ（０，１モル
） 以上の溶液に５ＮのＮａＯＨ水溶液を加えてｐＨを１１
．０に調整した。

上記のように調製された比較用のＡ’ＬＰ活性測定用分
析要素についても実施例２と同様に単位ユニット当りの
ＯＤの増加を求めその分析性能を評価した。その結果を
下記第４表に示す。

第４表 スライド　　　　Δ０Ｄ（５分−２分）／Ｕ実施例１　
　　　　　１．８９Ｘ１０−４比較例　　　　　　　２
．４１Ｘ１０−４また、保存性に着目して実施例１の分
析要素および比較用の分析要素を用いるスライドについ
ての比較を行なった。その結果を下記第５表に示す。

以下余白 第５表 スライド　　　　　　　　Δ０Ｄ （４５℃、２４時間−調製直後） 実施例１　　　　　　　０．０１９ 比較例　　　　　　　　０．１６０ 第５表において、Δ００　（４５℃、２４時間−調製直
後）の値は液体試料を点着せずに、［４５℃で２４時間
保存した分析要素を３７℃：ｔ’５分間インクベーショ
ンした時の反射光学濃度値］マイナス［ｖ！４製直後直
後析要素を３７℃で５分間インクベーションした時の反
射光学濃度値］に相当する値（カブリ反射光学濃度値）
である。

第４表に示すように感度的には、比較用の分析要素もＡ
ＬＰ活性測定に関する作用を有するが、一方で、保存性
に着目すると第５表から明らかなように比較用の分析要
素は、ＡＬＰ活性測定用分析要素として有効であるとは
いい難いものである。

［実施例４］ 実施例１の緩衝層形成用塗布液中のポリ（Ｎ−［（ジメ
チルアミノ）プロピルコアクリルアミド）の代りに、ポ
リ（Ｎ−［（ジエチルアミノ）プロピルコアクリルアミ
ド）を同量用いた以外は実施例１と同様にして、本発明
に従うＡＬＰ活性測定用分析要素を調製しその分析性能
を評価した。

その結果は１本実施例のスライドも実施例１．２および
３のスライドと同様に、ＡＬＰ活性測定用として良好で
あった。

［実施例５］ 実施例１の自己顕色性基質含有塗布液中のｐ−二トロフ
ェニルホスフェートビス（トリス）塩の代りに、ｐ−ニ
トロフェニルホスフェートビス（２−アミノ−２−エチ
ル−１，３−プロパンジオール）塩を同量用いた以外は
実施例１と同様にして、本発明に従うＡＬＰ活性測定用
分析要素を調製しその分析性能を評価した。

その結果は１本実施例のスライドも実施例１．２．３お
よび４のスライドと同様に、ＡＬＰ活性測定用として良
好であった。

［実施例６］ 実施例１．２，３および比較例において調製し　　　　
□たＡＬＰ活性測定用分析要素の保存性を比較検討する
ため、４５℃における２４時間後（Ｉ）およ　　　　□
び７日後（ｎ）の反射光学濃度値の上昇を求めた。結果
を下記第６表に示す。

第６表 スライド　　Δ００　（Ｉ）　　　ΔＯＤ（■）実施例
１　　０．０１９　　　０．０６０実施例２　　０．０
１５　　　０．０５９実施例３　　０．０８３　　　０
．２２０比較例　　　０．１６０　　　０．２４５第６
表において、Δ００　（Ｉ）の値は液体試料を点着せず
に、［４５℃で２４時間保存した分析要素を３７℃で５
分間インクベーションした時の反射光学濃度値］マイナ
ス［調製直後の分析要素を３７℃で５分間インクベージ
、ンした時の反射光学濃度値］に相当する値Ｃカブリ反
射光学濃度値）である、また八〇〇　（ｎ）の値は液体
試料を点着せずに、［４５℃で７日間保存した分析要素
を３７℃で５分間インクベージ曹ンした時の反射光学濃
度値］マイナス［調製直後の分析要素を３７℃で５分間
インクベーションした時の反射光学濃度値］に相当する
値（カブリ反射光学濃度値）である。

以上の結果より明らかなように、本発明に従う実施例１
．２および３のＡＬＰ活性測定用分析要素の保存性は非
常に良好であることが判明した。

また実施例４および５のＡＬＰ活性測定用分析要素につ
いても同様な保存性の検討を行なったところ、実施例１
のＡＬＰ活性測定用分析要素と同等な保存性を有するこ
とが判明した。

［実施例７］ 実施例１の緩衝層形成用塗布液中のポリ（Ｎ−［（ジメ
チルアミノ）プロピルコアクリルアミド）の代りに、下
記第７表記載の様々な耐拡散性塩基（１〜４）を同表記
載の量で用いた以外は。

実施例１と同様にして本発明に従うＡＬＰ活性測定用一
体型多層分析要素を作成し、それぞれの分析性能を評価
した。

その結果は、実施例１，２．３．４および５と同様に良
好であった。

ただし第７表における対拡散性塩基（１〜４）は、下記
のポリマーである。

ｌ）ポリ（［（ジメチルアミノ）エチルコアクリレート
） ２）［（ジメチルアミノ）プロピルコ アクリート／アクリルアミド（５対２）コポリマー ３）ポリ　［（ピペリジノプロピル） アクリレート］ ４）［（ジエチルアミノ）エチルコ アクリレート／アクリルアミド （１対１）コポリマー 第７表

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アルカリホスファターゼに感応して自己顕色性を示
   す基質を含有する多孔性展開層、耐拡散性塩基を含有す
   る緩衝層、および支持体層を積層してなるアルカリホス
   ファターゼ活性測定用一体型多層分析要素。 ２、上記緩衝層が、燐酸受容体および緩衝剤として機能
   する対拡散性塩基を含有し、実質的に他の緩衝剤を含有
   しないことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の分
   析要素。 ３、上記緩衝層が、緩衝剤として機能する耐拡散性塩基
   および少なくとも１種類の燐酸受容体を含有することを
   特徴とする特許請求の範囲第１項記載の分析要素。 ４、上記耐拡散性塩基が塩基性ポリマーであることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の分析要素。 ５、上記塩基性ポリマーが第三級アミン構造を含むくり
   返し単位を含むことを特徴とする特許請求の範囲第４項
   記載の分析要素。 ６、上記塩基性ポリマーが下記一般式（ I ）によって
   表されるくり返し単位を含むことを特徴とする特許請求
   の範囲第５項記載の分析要素。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ［上記一般式（ I ）において、 Ｒ＾１は水素原子またはメチル基であり； Ｘは酸素原子または−ＮＨ−であり； ｎは０、１、２、３または４であり； そしてＲ＾２およびＲ＾３は炭素原子数１〜４のアルキ
   ル基またはヒドロキシアルキル基であるか（Ｒ＾２およ
   びＲ＾３は同一であっても異なつていてもよい）、ある
   いは Ｒ＾２とＲ＾３は隣接する窒素原子と共に六員飽和複素
   環を形成してもよい］ ７、上記塩基性ポリマーが、上記一般式（ I ）におい
   て、Ｒ＾１は水素原子であり、Ｘは酸素原子または−Ｎ
   Ｈ−であり、ｎは０、１、２または３であり、そしてＲ
   ＾２およびＲ＾３はメチル基またはエチル基であるか（
   Ｒ＾２およびＲ＾３は同一であっても異なっていてもよ
   い）、あるいは−ＮＲ＾２Ｒ＾３がピペリジノ基を形成
   する、上記一般式（ I ）によって表されるくり返し単
   位を少なくとも３０モル％含むことを特徴とする特許請
   求の範囲第６項記載の分析要素。 ８、上記塩基性ポリマーが、１％食塩水に溶解して３０
   ℃で測定した極限粘度が０．１から５．０の範囲のポリ
   マーであることを特徴とする特許請求の範囲第４項記載
   の分析要素。 ９、上記緩衝層が、上記耐拡散性塩基を５乃至８０重量
   ％の範囲で含有することを特徴とする特許請求の範囲第
   １項記載の分析要素。 １０、上記自己顕色性基質が自己顕色性アリールホスフ
   ェートアミン塩であることを特徴とする特許請求の範囲
   第１項記載の分析要素。 １１、上記自己顕色性アリールホスフェートアミン塩が
   、アリール基としてニトロ置換フェニル、フェノールフ
   タレイン、チモールフタレイン、アリールアゾ置換アリ
   ール基及びフルオロテイン基よりなる群より選ばれるア
   リール基を有し、かつアミンがトリス（ヒドロキシメチ
   ル）アミノメタン、２−アミノ−２−メチル−１，３−
   プロパンジオール、２−アミノ−２−エチル−１，３−
   プロパンジオール、ビス（シクロヘキシル）アミン、２
   −（エチルアミノ）エタノール、Ｎ−メチルグルカミン
   、２−（メチルアミノ）エタノール、２−（ジメチルア
   ミノ）エタノール、２−（イソプロピルアミノ）エタノ
   ール及び２−アミノ−２−メチル−１−プロパノールよ
   りなる群より選ばれるアミンであることを特徴とする特
   許請求の範囲第１０項記載の分析要素。