JPS59143959A - 乾式分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、乾式分析要素に関するものである。

さらに；ｉ’ｆシ＜は、本発明は、　４．Ｓに体液中に
含まれている微）４成分の分析に適した乾式分析要素に
関するものである。

体液などの液体試料中に含まれている微量成分の分析方
法としては、従来では、溶媒中において該微量成分と他
の成分とを接触させることにより直接的または間接的に
発色もしくは変色を示す反応などのような検知Ｉ＋（能
な反応を生起させて、その反兄、を検知することからな
る方法を代表とするＮ式法か多く利用されてきた。

しかしながら、−・方、ては分析操作の簡略化を目的と
して開発された乾式法も多く利用されるようになってき
ている。この乾式法に利用される試験用具の代表的な例
としては、分析対象の微量成分（アナライト）との接触
により直接的または間接的に何らかの検知可能な反応を
示す試薬を含有する少なくとも一つの試薬層とその支持
体とを基本構成として含むシート、フィルム、ストリッ
プ、テープなどの形態にある乾式分析要素（分析材料あ
るいは分析素子ともいう）が知られている。これらの分
析要素を用いる分析操作は−・般に、アナライｉ・を含
イｊする液体試料を分析要素に点着した後、必要により
その分析要素をインクベーションにかけ、次いでそこで
発生した発色もしくは変色のような検知可能な反１５を
分光測父！装頷などを用いて検知測定することにより実
施される。

乾式分析要素を用いるアナライ１の分析において利用さ
れている分析システムには各種のものがあるが、代表的
な分析システムの例としては次のようなものを挙げるこ
とができる。

（Ａ）試薬層に含有されている試薬とアナライトとの反
応自体が発色もしくは変色反応なとのような検知ＩＩｆ
能な反応であり、これを検知Ａ１１ｌ　’ｙｒｌするこ
とからなるシステ１＼。この分析システムは、たとえば
、総蛋白ｒｊ、アルブミン、グロブリンなどの各種の蛋
白質をアナライトとする分析、あるいは、間接型（遊離
型）ビリルピン（アルブミン結合ビリルヒン）、直接ビ
リルピンなとの血球色素分解物をアナライトとする分析
において利用されている。

（Ｂ）試薬層に少なくとも二種類の試薬が含有されてお
り、その内の−・種の試薬がアナライトと反応してアン
モニア、過醇化水素などのような反応性成分を生成させ
、該反応性成分が次いで他の試薬（例、色素前駆体）と
接触して発色もしくは変色反応などの検知可能な反応を
示し、この反応を検知な１１１定することからなるシス
テム。このシステムは、たとえは、コレステロール、ト
リグリセリド、遊Ｎ＋脂肪酸などの脂質、乳酸脱水素酵
素なとの酵素、そして尿素、尿酸をアナライトとする分
析において利用される。

ＣＣ）色素形成基を有する非拡散性試薬か予め試薬層に
含有されており、アナライトとの反応によりその試薬が
色素形成基を保持したまま拡散性生成物となり、その拡
散性生成物が未反応の１−記非拡散性試薬から分間され
、次いでこの拡散性生成物は媒染性成分と接触して発色
もしくは変色のような検知可能な反応を示し、これを検
知′Ａ１１ｌ定することからなるシステ１、。このシス
テムは、たとえｉ、ｔアミラーセなとの多糖類加水分Ｐ
Ｗ酵素の分析において利用される。

ＣＤ）検知１可能な！Ｉ♂性（例、４１色）を右する非
拡散性試薬かＹ・め試薬層に含有ぶれており、アナライ
Ｉ・との反応によりその試薬か検知ＩＩｆ能な４，５性
を保持したまま拡散性生成物となり、その拡散性生成物
を未反応の−１−記Ｊ＋拡散性試薬から分離したのち検
知ｆｌｌｌ定することからなるシステム。このシステム
は、たとえはアミラーセなどの多糖類加水分解酵素の分
析において利用される。

すなわち、分析要素においては、アナライ］・と反＋４
＼、する試薬、また場合によっては更に、アナライＩ・
の反応により生成した生成物と反応する試薬などが含イ
１されている。これらの試薬としては、それぞれの分４
ノ１の目的に応して適当なものが選択されるが、用いら
れる試薬のなかにｌ±、環境ｐＨの影響を受けて変質し
やすいもの、あるいは反応活性を示すために特定の範囲
のｐＨ条件を要求するものなど、その環境のｐＨ条件を
考虜する必□要があるものも少なくない。

たとえば、に述のように乾式分析要素における検出系で
は、酵素反応が利用されることが多い。

すなわち、酵素をアナライトとする系か、あるいはアナ
ライトを分解するための試薬として酵素を用いる系であ
る。一般に酵素反応は各々の酵素に適したＰＨ領領域お
いてのみ円滑に進行するものであるため、従来の乾式分
析要素においても、その酵素反応が発生する７３５位の
周囲（環境）のｐＨか、用いた酵素の最適ｐＨ領域とな
るように予め配Ｉ黄されている。すなわち、酵素をアナ
ライトとする分析要素では、その酵素の基質が含イ１さ
れている層、あるいは、アナライトを分解するための試
薬として酵素を用いる分析要素ではその酵素か含有され
ている層、なとのような酵素反応の発生を予定している
層内に湿式分析法などにおいて−・般的に利用されてい
る緩衝剤を含有させることにより環境のｐＨ条件を整備
し、分析要素内における酵素反応の円滑な進行を図って
いる。

酵素反応を利用する検出系には、」−記のような酵素反
応によりイｊ）られる反応生成物自体が７ナライＩ・イ
ｆイＩｊＩ’の指側となる発色などを示す検出系もある
が、酵素）ｊ、　Ｊ心により生成した過酸化水素などの
反応性物質が、分析要素内に予め含有させてあった１１
４色性試薬（例、色素前駆体）と反応して発色もしくは
変色を生しるようにした検出系もまた°競市である。こ
のような検出系の色素前駆体としては、たとえばジアシ
ニウ１、塩のようなアジ色素前駆体があるが、シアジニ
ウム１１Ａは通常の酵素の至適ｐＨ（酵素反応にとって
最適なｐＨ領域）環境においては保存性が悪いという問
題がある。

すなわち、分キノ１要素内のｐＨ環境を酵素反尾：に適
当な条ｆ１に設定した場合には、その分析要素の保イｆ
中にジアジニウムｊｌが分解または変質するとの問題が
あり、　−力では、分析要素内のＰＨ環境をジアゾニウ
ムＪＩＨの保存に適当な条件に設定した場合には、検出
系に利用される酵素反応が円滑に進ｔ１シないとの問題
がある。

１、記の問題に対しては、分析要素内で、ジアッニウ１
１ｍ含イＪ層と酵素反応を起ｙせる層をそれぞれ別に配
置し、後者の酵素反応層にのみ緩衝剤を含有させること
も考えられるが、分析要素の保存中において、低分子星
の緩衝剤成分が酵素反応層から前者のジアゾニウム）ｉ
、ｉ含４１層に浸透拡散するため、結局はジアゾニラｌ
−塩の分解または変質につながる結果となる。また、ｆ
）η者のジアゾニウム１１含有層と後者の酵素反応層と
は分析操作の実施１（１Ｊにおいては必然的に液体的に
接触させる、すなわち、液体の存在下で流通させる心安
があるためこれらを完全に隔離することはできない。

また、従来の酸化酵素を利用する分析要素では醇化酵素
と７色試薬の還元性ロイコ色素とを含有する塗４ｒ液か
ら試薬層を形成しているが、この塗１＋）液のＰＨ条ｆ
１を醇化酵素の至適ｐＨ条ヂＩに一致さゼると、分析要
素の調製工程あるいは保存中において、５：Ｃ気中の酵
素を利用した酸化度１ε：が発生ずるため、分析操作を
行なう前に既に分析要素内のロイコ色素が−部酸化着色
を示し、これにより分析精度の低下が発生することも多
い。

−１，述のように、従来の分析要素において分析要素に
含有されている−もしくは二以」、の試薬の保イｆ’　
Ｉｔ！ｉにおける最適ｐＨ環境と分析操作実施時に利用
する検出反応の最適ｐＨ領域が相違する場合には、従来
の緩衝剤の利用によっては解決できない問題が発生する
ため、そのような検出系を利用する分析要素は、定量性
の高い分析要素として実際に使用することができなかっ
た。また、最適保存ＰＨ領領域重複しない△以」二の試
薬を回−分析要素内に含有させておくことも同様な理由
により困難であった・ 本発明は、上記のような問題の解決のために研究を行な
った結果、耐拡散性酸と耐拡散性１１基、Ｉｆましい具
体例としてはそれぞれ酸性ポリマーとＩＡ４基性ポリマ
ー、とを分析要素に導入することにより、分析要素内部
のｐＨ環境を局部的に調整すること、あるいは分析操作
１１′Ｆなとの所望の時期に分析要素内部のｐＨ環境を
任意に変えることが可能となることを見い出し、本発明
に到達した。

すなわち１本発明は、液体試料中に存在するアナライト
を分析するための少なくとも一種の試薬を含有する乾式
分析要素であって、互いに液体接触することにより共同
して少なくとも一種の試薬の反応時における環境ｐＨを
調整することのできる耐拡散性酸と耐拡散性１エム基と
が７１−いに別層に設けられており、かつ上記の少なく
とも一種の試薬が前記耐拡散性酸相もしくは前記耐拡散
性３１１基相のいずれかに含有されていることを特徴と
する乾式分析要素を提供するものである。

次に本発明を訂しく説明する。

本発明における乾式分析要素は、通常は、液体不透過性
で光透過性の支持体、−・層もしくは二層以上の試薬層
、そして液体試料展開層が順に積層してなる多層分析要
素の形態のものである。

１−記の構成において、支持体および液体試料ＩＮ開間
層材料および構成は既に公知である。本発明において利
用する支持体および液体試料展開層の材料および構成は
公知技術に従って任意に選釈することができる。また所
望により、光反射層、遮蔽層、拡散防Ｉｆ層、試薬層と
間に設けられる接着性イ・１与層などのような従来の乾
式分析要素において知られている各種の層を任意に設け
ることもできる。

なお、本発明においては試薬層および液体試料ｊ４開層
を含む積層物が自己支持性の一体積層物である場合には
、試薬層および／または液体試料展開層に］−記の支持
体の機能を持たせることも可能である。また、液体試料
ＩＪ（Ｃ間層は本発明の分析要素の構成にとって必須の
ものではない。

本発明の乾式分析要素において、耐拡散性酸と１１１ｉ
Ｊ拡散性塩）、１；、とは力、いに別層に設けられてい
る。

好ましい具体例としては酸性ポリマーと塩基性ポリマー
とがカーいに別層に設けられている。ここでｌ］”別層
ｊとは、通路は「別層」を意味している。

以ドにおいては１耐拡散性醇の好ましい具体例である酸
性ポリマー、そして耐拡散性塩基の好ましいＪ−ｊ体側
である塩基性ポリマーを代表例として説明する。すなわ
ち、本発明において酸性ポリマーと１シ、１基性ポリマ
ーとは、互いに別の層を形成しているか、あるいは別の
層に含イ〕されている。ただし、Ｉ′相泪は、層状を形
成している必要はなく、たとえは酸性ポリマーと塩基性
ポリマーとは、−力のポリマーからなる層の中に、マイ
クロカプセル状に形成された他のポリマーが含有されて
いるような状態であってもよい。

本発明における酸性ポリマーとｔ′ＡＡ基性ポリマーは
、その少なくとも一方のポリマーが、分析要素に含有さ
れる試薬の少なくとも−・種を保持固定する／へイング
ーの全部もしくは−・部の役目を兼ねるように利用され
る。他の一方のポリマーは、一般には上記のポリマーを
含有する層に接して設けられるが、それらの相間が液体
的に接触している限り、酸性ポリマー相と塩基性ポリマ
ー相どは物理的に隣接して設けることは必須ではない。

また、Ｉ−記の他の一方のポリマーは、アナライトの検
出反応に関′ｊ−する一挿具−にの試薬を含有してもよ
く、あるいは中に前記の試薬を含有する相のＰＨ調整機
能を果す相として設けるだけでもよい。

次に本発明の乾式分析要素の構成の例を、耐性ポリマー
相および塩基性ポリマー相のＲ４関係を中心にして列記
する。

（１）アミラーゼ分析用分析要素 次に記載の各層が順次積層された分析要素。

ａ）支持体層 ｂ）塩基性ポリマ一層（塩基性ポリマーとゼラチンから
構成される層） Ｃ）呈色反応層（ジアゾニウム塩を含有する層で、パイ
ングーとして酸性ポリマーを用いた層） ｄ）拡ｎｋ防止層 ｅ）カプラー基質層（基質として利用されるカプラー化
Ｖ粉を含有する層） ｆ　）　ＩＮ開間 層２）ＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）分析用分析要素法に記
載の各層が順次積層された分析要素。

ａ）支持体層 ｂ）塩基性ポリマ一層（ＪＪＸ基性重性ポリマーラチン
から構成される層） Ｃ）反応層（乳酪とテトラゾリウ１、Ｊｌを含有する層
で、／へイングーとして酸性ポリマーを用いた層） ｄ）展開層 （３）グルコース分析用分析要素 次に記載の各層が順次積層された分析要素。

ａ）支持体層 ｂ）塩基性ポリマ一層（塩基性ポリマー、ゼラチンおよ
び疎水性ポリマーラテックスから構成される層） Ｃ）反応層（グルコースオキシターセ、ペルオキシダー
ゼ、発色剤などを含有する層で、パインターとして酸性
ポリマーとゼラチンとを用いた層） ｄ）ＩｊＧ開層 間層明において利用することができる酸性ポリマーと塩
基ｔ１ポリマーの例を次に記載する。

酸性ポリマーの例としては、ｐ−スチレンスルホン酸、
アクリル酸、メタクリル醜、マレイン酎、マレイン酸無
水物、マレイン酸モノアミド、マレイン酸モノエステル
、Ｎ−（スルホアルキル）アクリルアミド［好ましくは
、Ｎ−（β−スルホ−Ｅ−ブチル）アクリルアミド等コ
、およびＮ−（スルホアルキル）メタクリルアミド［好
ましくは、Ｎ−（β−スルホ−ｔ−ブチル）メタクリル
アミド笠］からなる群より選ばれる−・種以上の不飽和
結合を右する千ツマ−の重合体、もしくは−に記の七ノ
で−と他の不飽和結合を有するモノマーとの共重合体を
挙げることができる。

ＪＪ１基性ポリマーの例としては、２−ビニルピリジン
、４−ビニルピリジン、Ｎ−ビニルイミタツール、ｌ−
ビニル−３−アルキル−２，３−ジヒドロイミダゾール
（すなわちｌ−ビニル−３−アルキル−４−イミダシリ
ン）［好ましくは、１−一ビニルー３−エチルー２．３
−ジヒドロイミタシール、１−ビニル−３−メチル−２
，３−ジヒＩ・ロイミダゾール、ｌ−ビニル−３−ベン
ジル−２，３−ジヒドロイミダゾール等］、２−ヒーＡ
ｙ−１−フルキルイミダゾール［好ましくは２−ビニル
−１−メチルイミタゾール、２−ビニル−１−エチルメ
タクリレ、２−ビニル−１−ヘンシルイミダゾール等］
　（ジアルキルアミノ）アルキルアクリレート　［好ま
しくは、β−（ジメチルアミノ）メチルアクリレート、
β−（ジメチルアミノ）エチルアクリレート、β−（ジ
エチルアミノ）エチルアクリレート、β−モルホリノエ
チルアクリレ−：・、γ−（ジメチルアミノ）プロピル
アクリレート等］、（ジアルキルアミノ）アルキルメタ
クリレ−１−［好ましくは、β−（ジメチルアミノ）メ
チルメタクリレ−１・、β−（ジメチルアミノ）エチル
メタクリレ−１・、β−（ジエチルアミノ）エチルメタ
クリレート、β−モルホリノエチルメタクリレート、γ
−（ジメチルアミノ）プロピルメタクリレ−Ｉ・等］、
Ｎ−［（ジアルキルアミノ）アルキルコアクリルアミド
［好ましくは、Ｎ−［（ジメチルアミノ）プロピルメタ
クリルアミド′：￥］、およびＮ−［（ジアルキルアミ
ノ）アルキルコ　メタクリルアミド［好ましくは、Ｎ−
［（ジメチルアミノ）プロピル］メタクリルアミド等］
からなる群より選ばれる一挿具−にの不飽和結合を有す
るモノマーの重合体、もしくは上記のモノマーと他の不
飽和結合を有するモノマーとのノ（重合体であるなお、
酸性ポリマーおよび塩基性ポリマーに関する上記の記載
にある１１′他の不飽和結合をイＡする七ツマー町の例
としては、スチレン、ジビニルベンゼン、アクリルアミ
ド、Ｎ−置換アクリルアミド、メククリルアミド、Ｎ−
置換メタクリルアミド、アクリル醇エステル、メタクリ
ル酩エステルおよびＮ−ビニルピロリドンを挙げること
がてきる。

なお、本発明の酸性ポリマーおよびｌｉ　、１５性ポリ
マーはそれぞれ複数種のもののｌ昆合物としても用いる
ことができ、また、セラチン、ポリビニルアルコールな
との他の水溶性ポリマーとの１１４合物または疎水性ポ
リマーの水性ラテフクスとの７７ｉ−合物としても用い
ることができる。

本発明における耐性ポリマー相と塩基に１ポリマー相は
、力いに液体接触することにより共同して少なくとも　
一種の試薬の反応待における環境ｐＨを調整する機能を
有している。すなわち、たとえば、分析要素に液体試料
が導入された場合には。

酸に１ポリマー相と１１！基性ポリマー相とはその液体
を介して接触して相！７゛作用を起し、緩衝作用を示す
ようになる。

本発明によれば、酸性ポリマーとｉｆ；４　Ｊｐ：性ポ
リマーは双方とも品分７．　Ｂ＞であるため分析要素内
で移動スることがない。従って、従来におい−ＣｐＨ条
例を調整するために利用されていた低分子値の緩衝剤が
分析質素内を拡散移動することにより引き起される分析
要素内部のｐＨ環境の望ましくない均一化を効果的に回
避することができる。そして、本発明に従う酸性ポリマ
ーと塩基性ポリマーとの組合わせを分析要素内に導入す
ることにより、所望の局部的な環境ＰＨの設定および分
析操作時の環境ｐＨの調整が容易に実現する。従って、
たとえば従来のアミラーセ分析用の分析要素において問
題とされていたジアツニウム１１の保存に適したｐＨの
設定と分析操作時におけるアミラーゼの酵素活性に適し
たｐＨ条件のイ□ｆ　’ｊ−が容易に実現し、これによ
り優れた定量性を有するアミラーゼ分析用分析要素を得
ることができる。

また、同様の問題を４１している従来の各種の分析要素
においても、本発明の酸性ポリマーと塩基性ポリマーと
のＭｔ合わせを利用することができ、所望のｐＨ条件の
調整を容易に達成することが可能となるため、本発明の
分析要素の構成は、そのような分析要素の製造作業を容
易にし、またそれらの分析要素の分析精度の向上に有効
に寄与するものである。

次に本発明の実施例および比較例を示す。

［実施例１］ 以ト“に示す材料および塗布液を用いて、支持体−１゜
に、■スジ基性ポリマ一層、酸性ポリマーを含有する１
１已色反応層、拡散防止層、カプラー基質層、液体試料
展開層を順次積層してアミラーセ活性Ａ１１１定川分析
要素を製造した。

（１）支持体 セラチン下塗りを施した透明ポリエチレンテレフタレー
ト（ＰＥＴ）フィル１、（厚さ＝１８０ｐｍ） （２）塩基性ポリマ一層 塩基性ポリマ一層塗布液の組成： アリカリ処理セラチン　□　　　　　　　２ｇポリ（Ｎ
−ビニルイミダツール）　　　　　　５ｇ水　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６０ｇポ
リオキシエチレンノニルフェニル エーテル（１分子中にオキシ エチレン基を平均１０個含有）’０．２ｇ」−記塗布液
を支持体」二に塗布し、これを乾燥することによりＩｎ
基性ポリマ一層（厚さ：１５７ｔｍ）を形成した。

（３）呈色反応層 ｉ）畢色反応層形成用塗布液の調製 水１００ｍＭに、酸性ポリマー［メチルビニルエーテル
・無水マレイン酸（モル比１：１）Ｊｌｉｆｆｉ合体、
商品名：ＧＡＮＴＲＥＺ　　ＡＮ　　１３９（ＧＡＦン
［製）、固有粘度［η］−１，０〜１．４］５ｇおよび
ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル（１分子中
にオキシエチレン基を平均１０個含有）Ｉｇを加え、８
０°Ｃにて３０分間加熱してエステル化反応を進行させ
、バインダー溶液を調製した。

別に、２−メトキシ−５−デトラデシルオキシ力ルポニ
ルベンゼンジアゾニウム・テトラフルオロホレート０．
１５０ｇを、アセトン２ｍＪＬとエチルアルコール４ｍ
文からなる混合溶媒に溶解してジアソニウム塩溶液を調
製し、これを攪拌下に前記の反応液（／へインター溶液
）に添加した。添加終ｒ後、この４１７合液（呈色反応
層形成用塗布液）を２０分間ｒｊ！Ｉ察したが、混合液
は透明な溶液の状態を！ｄＥ持していた。

ｉｉ）呈色反応層の形成 ３１Ａ基性ポリマ一層の」−に、」−記で調製したＶ色
反応層形成用塗布液を３ｇｍの乾燥塗布厚になるように
して塗７１ｊシたのち、これを５０℃で空気乾燥して耐
性ポリ峰−を含有する！？・色反応層を形成した。乾燥
後の７色反応層は透明度の高い状態を維持していた。

（４）拡散防ＪＩ層 水５０ｍｆＬ、二酸化チタン微粉末８０ｇ、およびｐ−
ノニルフェノキシグリセリン（２５％水溶液）０．５ｇ
からなる混合物をボールミル型粉砕機にて充分粉砕し、
これにアガロース３％水溶液３００ｇを添加して混合し
たのち、晴色反応層の１−に塗布、乾燥して、拡散防止
層を形成させた。

イ１）られた拡散防止層の乾燥後の厚さは６ｐｍであっ
た。

（５）カプラー基質層 カプラー化澱粉（反応性カプラー分子数／グルコース単
位数：ｌ／３０、反応性カプラーは２−［８−ヒドロキ
シ−３，６−ビス（ナトリウＪ１スルホナ１−）−’１
−ナフチルアミノ］−４．’６・−ジ　。

りａロー　ｓ−トリアジン）テ、Ｊ、Ｔ；Ｔｈｕ？ｓｔ
　ｔ　ｏｎ等の方法［Ｊ　、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、、７３．（７）、２９’８１−２９　（１９５
１）１による塩化シアヌルと１−アミノ−８−ヒドロキ
シナフタレン−３，６−ジスルホン酸モノナ）・リウム
塩から得られたものである）１０ｇ、水１０５ｇ、ポリ
アクリルアミド（５％水溶液）８０ｇ、およびｐ−ノニ
ルフェノキシグリセ１ノン（２５％水溶液）２ｇからな
る混合物を溶液状とＬ、これをナイロンメ・ンシュ濾過
シートを用１／）て濾過してカプラー基質層形成用塗布
液を調製した。

この？ｌ’ＨＩＩｊ液を拡散防止層のにに塗ＩＩｊ、乾
燥して、カプラー基質層を形成させた。得られた力、プ
ラーノ、（質層の乾燥後の厚さは１０μｍであった。

（６）油体試料Ｊｊｔ開層 間層Ｔ繊維と木綿との混紡布（混紡比：　ＰＥＴ繊維／
木綿＝７５／ｊ５）を、ポリアクリルアミ１；’　（、
ｔＦ均屯合度：１８，０００．０．８％水溶液）１５０
ｇおよびＰ−ノニルフェノキシグリセリン（２５％水溶
液）Ｉｇからなる水溶液に浸漬して親木化処理を行なっ
た。

Ｉ−記の（５）までの工程によりカプラー基質層までを
伺１没したＰＥＴフィルムのカプラー基質層の表面をＰ
−ノニルフェノキシグリセリン（０゜２％水溶液）で湿
潤させたのち、その上に」起重の親木化処理した混紡布
を圧着し、次いで、これを乾燥した。

［比較例１］ 実施例１のアミラーゼ活性測定用分析要素の製造におい
て、１λ１基性ポリマ一層を設けることを省略した以外
は同様にして分析要素を製造した。

［アミラーゼ活性測定用分析要素の評価］（１）試料液
体の導入ドにおけるカプラー基質層のｐＨの測定 液体試料展開層の旧設を省略した実施例１および比較例
１の分析要素のそれぞれのカプラー基質層の表面に、ｌ
Ｏμ文のヒトＪ（ｎ漿を点着し、２分後に表面電極（Ｇ
Ｓ−１６５Ｆ：東亜電波■製）を用いて、１該基質層の
ｐＨを測定した。その結果を第１表に示す。

第１表　　カプラー基質層のｐＨ 実施例１　　　　比較例１ ６．８　　　　　５．０ 第１表は、塩基性ポリマ一層を有する分析要素（実施例
１）のカプラー基質層のｐＨが、試才゛ｌ液体の導入下
において、アミラーゼの至適ｐＨ領域（ｐＨ６，８〜７
．０）に維持されているのに対して、Ｊ１！基性ポリマ
一層を有していない分析要素（比較例１）の場合には、
それが大きく逸脱していることを／Ｉ＼している。

（２）アミラーゼ活性の４１１１定 新哨なヒト唾液を７％アルブミン生理食塩水で希釈する
ことにより６，０ＯＯＵ／ｕの活性値を持つアミラーゼ
標準液を調製した。このアミラーセｒＦ準液１ｏル見を
、」−述の二種類のアミラーゼ活性Ａ１１ｌ定用分析要
素の展開層」二に点着させ、３７°Ｃで加水分解反応を
進行させた。マクベス反射光学濃度計を用いて加水分解
反応の進行を、分析要素の１−１４色反応層の反射光学
濃度を測定することにより観察した。結果を第２表にノ
】−１す。

第２表　呈色反応層の反射光学濃度 （４１１定波長５６０ｎｍ） 反応時間（分）　実施例１　　比較例１１　　　　　　
Ｑ、ｌＯＯ，０３ ２０，２３０，０９ ３０，３４０，１８ ４０，４６０，２３ ５’　　　　　、０．５７　　０．３１第２表は、分析
要素に塩基性ポリマ一層を設けることにより、それを設
けない場合に比べて、約−倍の呈色感度が得られること
を示している。

［実施例２］ 以下に示す材料および塗布液を用いて、支持体」二に、
塩基性ポリマ一層、酸性ポリマーを含有するす色反応層
、および液体試料展開層を順次積層して乳酸脱水素酵素
（ＬＩ）Ｈ）活性測定用分析要素を製造した。

（１）支持体 ゼラチンド塗りを施した透明ポリエチレンテレフタレ−
ｌ−７イルム（厚さ：１８０ｐＬｍ）（２）塩基性ポリ
マ一層 実施例１と回しＩ′Ａ、ｉ基性ポリマ一層を支持体Ｊ一
番こ設けた。

（３）す色反応層 ｉ、）　Ｌ７：色反応層形成用塗Ｉｒｊ液の組成ＮＡＤ
　　　　　　　　　　　　　　１００ｍｇ乳酪　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２ｇジアホラーセ　　　
　　　　　　　　　２０Ｕ３．３°−（３，３“−ジメ
トキシ− ４，４゛−ビフェニリレン）ビス ［２−（ｐ−二トロフェニル）− ５−フェニル−２Ｈ− テトラツリウムクロリド］ （２％メタノール溶培）　　　　　　　５ｍ９゜ア刀ロ
ースやジ−プラーク （マリンコロイド社製）　　　　　　　　５ｇメチルビ
ニルエーテル・マレイン酸 へ屯合体水溶液（１０重昂％、 粘度：３００ｃｐｓ）　　　　　　２．０ｍ、ｕポリオ
キシエチレンノニルフェニル エーテル（１分子中にオキシ エチレン基を平均１０個含有）　　　０．５．ｇｌｌ）
−呈色反応層の形成 ｊ其基性ポリマ一層の」二に、Ｊｚ記の呈色反応層形成
ｍ４ＩＨ５液を５μｍの乾燥塗布厚になるようにして塗
ｉｕ　したのち、これを５０°Ｃで空気乾燥して酸性ポ
リマーを含有する呈色反応層を形成した。乾燥後の呈色
反応層は透明度の高い状態を維持していた。

（４）展開層 り記の呈色反応層の表面を水で湿間させた後、これにメ
ンブランフィルタ−（平均孔径３３−０ｐ−、厚さ１８
０ルｍ、富士写真フィルム（株）製、ＦＭ−３００）を
接着してＬＤＨ活性測定用分析要素を製造した。

［比較例２］ 実施例２のＬＤＨ活性測定用分析要素の製造において、
塩基性ポリマ一層を設けることを省略し、かつＶ色反応
層形成のための塗布液の組成を以ドに記載するもの（酸
性ポリマーの代りに緩挿Ｉ液を導入）に変えた以外は同
様にして分析要素を製造した。

呈／１ノー１、−・［・ｍ　　の、　・ＮＡＤ　　　　
　　　　　　　　　　　　　１００ｍｇ乳Ｓ　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２ｇジアホラーゼ　　　
　　　　　　　　　２０Ｕ３．３’−（３，３’−ジメ
トキシ− ４，４“−ビフェニリレン）ビス ［２−（ｐ−ニトロフェニル）− ５〜フェニル−２Ｈ− テトラツリウムクロリド］ （２％メタノール溶液）　　　　　　５ｍ文アカロース
・ジ−プラーク （マリンコロイド社製）　　　　　　　　５ｇトリス（
ＴＲＩＳ）　Ｗ衝液　　　　　　０．１２Ｍポリオキシ
エチレンノニルフェニル エーテル（１分子中にオキシ エチレン基を平均１０個含有）　　　０．５ｇ（−′訂
ニドリス緩衝液の含有量は塗布液全体に対する量である
） ［比較例３］ 実施例２のＬＤＨ活性測定用分析要素の製造において、
塩基性ポリマ一層を設けることを省略した以外は同様に
して分析要素を製造した。

［ＬＤＨ活性測定用分析要素の評価］ （１）試料液体の導入下における呈色反応層のＰＨの測
定 液体試料展開層の付設を省略した実施例２および比較例
２．３の分析要素のそれぞれの呈色反応層の表面に、ｌ
Ｏｐ文のヒト血漿を点着し、２分後に表面電極（ＧＳ−
１６５Ｆ：東亜電波ｖ４製）を用いて、該基質層のＰＨ
を測定した。その結果を第３表に示す。

第３表　呈色反応層のｐＨ 実施例２　　比較例２　　比較例３ ｐＨ９，２９，２６，０ 第３表は、塩基性ポリマ一層を有する分析要素（実施例
２）が、緩衝能を右する低分子電解質を一７色反応層に
含む分析要素（比較例２）と同等の緩衝能を有すること
を示している。−・方、ｔ１２基性ポリマ一層の無い分
析要素（比較例３）の場合では、その！い色反１５層の
ｐＨは試料液体の導入下において、ＬＤＨの至適ｐＨ領
域（ＰＨ９，０〜１０．０）から大きく逸脱することを
示している。

（２）呈色反応層のベースカブリ（アチライト不存在ド
における発色光学濃度）および発色光学濃度の測定 ｉ）実施例２、および比較例２．３で得られた分析要素
を調製したのち速やかにマクベス反射光７膿＋ｆｓ　Ａ
ｔによりベースカブリを１１１１定した。

次いで、各分析要素にコントロール血清（モニトロール
■、ディト社製）を１０ｇＭ点着し、３７℃で１０　分
間インクベーション後、マクベス反射光学濃度計により
、血清中のＬＤＨによる発色を測定した。

Ｉ震尼の測定結果を第４表に示す。

第４表　呈色反応層の反射、光学濃度 （７１１＋１定波長５３０’、ｎ　ｍ）実施例２　比較
例２　比較例３ ベースカブリ　０．１６　０．３２　０．１５発発色度
　　　０．２５　０．２６　０．１１第４表により、緩
衝剤を導入して緩衝作用を４＝１　　　。

’ｊ−した分析要素（比較例２）はベースカブリが高く
、充分な分析精度を示しえないことが明らかである。

ｌｉ）実施例２、および比較例２．３で得られた分析要
素を調製したのち、２５℃で１０］」間装置、し、次い
でマクベス反則光学濃度計によりペースカブリを測定し
た。

次いで、各分析要素にコンｉ・ロール血清（モニトロー
ル■、ディト社製）を１０に文点着し、３７°ＣでｌＯ
分間インクペーション後、マクベス反則光学濃ＩＫ５１
により、血清中のＬＤＨによる発色を測定した。

１−記の測定結果を第５表に示す。

第５表　呈色反応層の反射光学濃度 （測定波長５３０ｎｍ） 実施例２　比較例２　比較例３ ベースカブリ　０．１．７　０．４５　０．１６発色濃
Ｉｆｆ　　　　０　、２６　０　、１５　０　、１１第
５表により、緩衝剤を導入して緩衝作用を４＝Ｊす−し
た分析要素（比較例２）は保存中にベースカブリか更に
上ｙし、充分な分析精度を示しえないことかわかる。な
お、比較例２における低い発色濃度は発色試薬として含
有されているテトラゾリウム塩の酸化に起因するものと
推定される。

（３）実施例２の分析要素の緩衝能力 ■ｈ基性ポリマ一層の効果を見るために１液体試、ｔ’
ｌ展開層の付設を省略した実施例２の分析要素のｊｔ呈
色反応層表面に、種々のｐＨを有するヒト血漿１０川文
を点着し、２分後に表面電極（ＧＳ−１６５Ｆ＋東亜電
波■製）を用いて、呈色反応層のｐＨを測定した。結果
を第６表に示す。

第６表　呈色反応層のｐＨ 試料血清のＰＨ呈色反応層のｐＨ ７，４８，９ ７，６８，９ ７，９９，０ ８，２９，１ ８，４９，１ 第６表の結果より、本発明の分析要素が優れた緩挿Ｉ作
用をイｊすることがわかる。

［実施例３］ 以トに示す材料および塗ｉｎ　波を用いて、支持体１、
に、塩基性ポリマ一層、耐性ポリマーを含有する７色反
応層、および展開層を順次積層してグルコース分析用分
析要素を製造した。

（１）支持体 ゼラチンド塗りを施した透明ポリエチレンテレフタレー
トフィルム（厚さ：１８０μｍ）（２）塩基性ポリマ一
層 ｉ　）　１５基性ポリで一層塗４ｊ液の組成１０％ゼラ
チン水溶液　　　　　　　２０ｍ文ジビニルヘンゼン・
Ｎ、Ｎ− ジエチルアミノメチルスチレン 共用合体（モル比１０：９０） ラテンクス水溶液 （樹脂金−１ｉ−：１５％）　　　　　　　６ｍ文ｉｉ
）塩ノ１（性ポリで一層の形成 １、記埜１ｊ液を支持体」二に塗布し、これを乾燥する
ことにより塩基性ポリマ一層（厚さ：５ｇｍ）を形成し
た。

（３）呈色反応層 ｉ）呈色反応層形成用塗布液の組成 グルコースオキシダーゼ　　　２００００　Ｕ　／　ｍ
’ベルオキシターゼ　　　　　　２００００　Ｕ　／　
ｍ’４−アミノアンチピリン　　　　　１．５ｇ／ｍ’
１．７−シヒドロキシナフタレン　０．７ｇ／ｍ’アル
カリ処理セラチン　　　　　　　１５　ｇ　／　ｍ’メ
チルビニルエーテル・マレイン酪 共に合体水溶液（１０重都％、 粘度：３００ｃｐｓ）　　　　　　５ｇ／ｍ’ポリオキ
シエチレンノニルフェニル エーテル（１分子中にオキシエチ Ｌ、７基をｉＦ、均ｌＯ個含む）　　　０　、２　ｇ　
／　ｍ’ｉｉ）呈色反応層の形成 塩ス（性ポリマ一層の」二に、」皿子で調製した呈色反
応層形成用塗布液を５牌ｍの乾燥塗４ｊ厚になるように
して塗布したのち、これを５０°Ｃで空気乾燥して呈色
反応層を形成した。乾燥後の呈色反応層は透明度の高い
状態を維持していた。

（４）　Ｉｊｌｔ開層 １間層色反Ｊ心層の表面を水で湿潤させた後、これにメ
ンブランフィルタ−（平均孔径３．Ｏｇｍ、厚さ１８０
ｇｍ、富士写真フィルム（株）製、ＦＭ−３００）を接
着して、グルコース分析用分析要素とした。

［グルコース分析用分析要素の評価］ （１）試料液体の導入ドにおける呈色反応層のｐＨの測
定 液体試料展開層の刺殺を省略した実施例３の分析要素の
呈色反応層の表面に、１ｏＩｊ、文のヒ）・血漿を点Ａ
し、２分後に表面電極（ＧＳ−１６５Ｆ二東１１１町電
波■製）を用いて、該基質層のｐＨをＡｌ１１定したと
ころ、ＰＨ値５．６がｆ、ｌ＋られた。すなわち、グル
コースオキシダーセの至適ＰＨの約５−６と　・致して
いた。

（２）グルコースの分析 実施例３の分析要素の液体試料展開層の一トに、フン化
ナトリウムを種々の濃度で含有するヒト血ａ　ｌ　Ｏｐ
−文を点着し、３７°Ｃにおいて１０分間イソクベーシ
ョンした後、マクベス反射光学濃度計を用いて、血漿中
のグルコースによる発色をＪ＋１定した。その結果を第
７表に示す。

第７表　呈色反応層の反射光学濃度 （Ａｌ１１定波長５１０ｎｍ） ０　　　２　　　５　　　１０　　　２００．４９　　
０．４９　　０．５０　　０．４９　　０．５０第７表
の結果は、本発明のグルコース分析用分析要素における
呈色反応が、液体試料中のフッ化すトリウム（血液およ
び血清試料の保恒剤）により阻害されにくいことを示し
ている。

特Ｂ′Ｉ出願人　富士写真フィルム株式会社代理人　　
　　弁理士　　柳川泰男

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■。液体試料中に存在するアナライトを分析するだめの
   少なくとも−・種の試薬を含有する乾式分析要素であっ
   て、互いに液体接触することにより共同して少なくとも
   −・種の試薬の反ｊ心時における環境ｐＨを調整するこ
   とのできる耐拡散性酸と耐拡７ｉＱ性塩基とが互いに別
   相に設けられており、かつ上記の少なくとも一種の試薬
   が前記耐拡ｉｉ＆性耐相もしくは前記１酎拡１１（セ１
   １ｎ基相のいずれかに含イ１されていることを４’ｒ徴
   とする乾式分析要素。 ２゜前記耐拡散性酸および耐拡散性ｊ）、ｉ　）、Ｉ（
   かそれぞれ酸性ポリマーおよび１ス１基性ポリマーであ
   る特Ａ１’　＋？Ｉ’ｌ求の範囲〇′８１項記載の分析
   要素。 ３゜前記耐拡散性酸相と前記１耐拡散性１スに基相がそ
   れぞれ層状に形成されていることを特徴とするＩＩＩｆ
   −請求の範囲第１項もしくは第２項記載の分析要素。 ４゜酸性ポリマー相もしくは）ｌノ、（に１ポリマー相
   に含有されている試薬が呈色性試薬であることを４５徴
   とする４’ｌ　、ｉ１請求の範囲第１ゲ１乃至第３ダ１
   のいずれかに記載の分析要素。 ５゜アナライトが酵素もしくは酵素の基質であることを
   り、５徴とする特許請求の範囲第１ｑｒ乃全第４項のい
   ずれかの項記載の分析要素。 ６゜呈色性試薬がジアノニウム塩であることを１１１徴
   とするり、旨１１請求の範囲第４項もしくは第５ダｌ記
   載の分析要素。 ７゜酸性ポリマーが、ｐ−スチレンスルホン酎、アクリ
   ル酸、メタクリル酸、マレイン酸、マレイン醇無木物、
   マレイン醇モノアミ１：、−ｙレイン醇モノエステル、
   Ｎ−（スルホアルキル）アクリルアミドおよびＮ−（ス
   ルホアルキル）メタクリルアミドからなる群より選ばれ
   る一種以１−の不飽、ｌ１１結合を有する千ツマ−の重
   合体、もしくは上記のモノマーと他の不飽和結合を有す
   る七ノで−との共重合体で、あることを４．￥徴とする
   特許請求の範囲第２項乃至第６項のいずれかの項記載の
   分析要素。 ８゜１ｊ、！基性ポリマーが、２−ビニルピリジン、４
   −ビニルピリジン、Ｎ−ビニルイミダノール、■−ビニ
   ルー３−アルキルー２．３−ジヒトロイミタゾール、２
   −ビニル−１−アルキルイミグゾール、（ジアルキルア
   ミノ）アルキルアクリレート、（ジアルキルアミノ）ア
   ルキルメタクリレ−Ｉ゛、Ｎ−［（ジアルキルアミノ）
   アルキルメタクリルアミド、およびＮ−［（ジアルキル
   アミン）アルキル］メククリルアミドからなる泪より彦
   ばれる・挿具」−の不飽和結合を有するモノブーの重合
   体、もしくは」−記のモノマーと他の不飽和結合を右す
   るモノマーとの共重合体であることを４Ｌｌ、徴とする
   特許請求の範囲第２項乃至第６」工１のいずれかの項記
   載の分析要素。 ９゜液体試料展開層および液体不透過性で光透過性の支
   持体を含むことを特徴とする特Ｒ’ｌ’　Ｈ１’ｊ求の
   範囲第１項乃至第８項のいずれかの項記載の分析要素。