JPS6044865A - 一体型多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、液体試料中のアンモニア生成性物質、アンモ
ニア生成基質またはアンモニアを分析するための一体型
多層分析要素に関するものである。

更に詳細には、本発明は血液、尿、髄液等の体液中の尿
累賭素の分析に有用な一体型多層分析要素に関するもの
である。本発明はさらＫｍ記の一体型多層分析要素を用
いてアンモニア生成性物質、アンモニア生成基質または
アンモニアを乾式に分析する方法にも関する。

体液中の尿素窒素、アンモニア、クレアチニン等の測定
は、腎臓病等の疾患の診断および経過コントロールのた
めに非常に重要である。従来、この尿素窒素の測定は一
般に湿式法あるいは溶液法と呼ばれる方法により行われ
ている。溶液法としては、尿素をジアセチルモノオキシ
ムと直接に反応させ、生成した化合物の色吸収を光度針
で測定する方法、尿素にウレアーゼを作用させてこれを
炭酸アンモニウムに分解し、アンモニアを遊離させてこ
れをネスラー試薬と反応させるか、フェノール／次亜塩
素酸塩を用いて着色インドフエノールに変換し、それぞ
れ生成した着色反応生成物を比色定量して間接的に尿累
量を測定する方法等がある。これらの湿式分析方法はそ
れ自体有用であるが、高価な装置と正確な測定技術を必
要とし、また測定時間が長いという欠点がある。

湿式法の前述の欠点をなくし、尿素窒素等の測定の簡易
操作と迅速測定をはかり、測定者の個人差をなくするた
めに全試薬（または主要な試薬）を包含した試験片、分
析容器または多層分析要素等の分析器具を用いて乾式操
作により尿素窒素等の測定を実施できる乾式法が近年種
々提案されている。乾式法に用いる分析器具の例として
、日本分析化学会線分析ライブラリー３「臨床化学分析
■含窒素成分」第２版（東京化学同人、ｌり７り年発行
）／Ｊ〜／４’頁、「臨床検査」第５巻（第を号）３ｒ
７〜３り１頁、（／　９４　／年発行）米国特許ＪＯ／
／ざ７≠明細書等に記載の濾紙片に細帯状の試薬層（ウ
レアーゼとアルカリ剤を含み、尿素からアンモニアガス
を生成させる）、細帯状の障壁柳眉、細帯状の指示薬層
（ｐＨ指指示薬ソロムクレゾールグリーン含む）がこの
順に設けられたＢＵＮ定量分析用試験片、特開昭ｊＯ−
タ５ａｙａ明細書に記載のｐ紙片にＩ）Ｈ指示薬ブロム
チモールブルーを含浸し、ついでウレアーゼと親水性ポ
リマーからなる障壁形成体との混合物をさらに含浸し、
最後にエチルセルロース半透膜を設けたＢＵＮ定量分析
用試験片、特開昭！コー５ａｔｒ　（特公昭５ｒ−ｔｙ
ｏＡ２）明細書に記載の水不浸透性の透明支持体の上に
指示薬層、アンモニア蒸気が均一に浸透可能で液体状水
およびアルカリ性妨簀物が浸透不可能なセルロースアセ
テートブチレート等の疎水性ポリマーの均質（非孔性）
薄層からなる障壁柳眉、ウレアーゼおよびアルカリ剤を
含む試薬層、および多孔性展開層をこの順に一体に積層
してなるＢＵＮ定量分析用一体型多層分析要素等が提案
あるいは実用に供されている。これらのうちで障壁柳眉
を有する一体型多層分析要素が操作の簡便さおよび定量
分析精度の点ですぐれているが、疎水性ポリマーの均質
薄層からなるアンモニアガス選択透過性障壁柳眉はアン
モニアガスがこの障壁柳眉を拡散通過する速度が遅いの
で感度が低く、又この障壁柳眉の厚さを薄くすればアン
モニアの透過速度が大きくなって感度は上がるが、液体
状水とアルカリ性妨害物も透過するようになって正確な
測定ができなくなるという欠点がある。

さらに、この障壁柳眉の厚さにより、アンモニアの拡散
通過時間が著しく異−なるため、厚さを一定かつ均一に
するために極めて高度の技術を必要とし、しかも、試薬
層の水性マトリクスとこの疎水性ポリマー均質薄層から
成る障壁柳眉との接着が難しく、一体型分析要素として
製造する際の問題点となっている。

一方、特開昭！≠−１ｚｌＯＹＡ号に畝上記技術の欠点
、特に拡散透過時間が長いために感度が低いという欠点
を改良した分析要素が開示されている。この分析要素は
、織り一又は編みネット又は有孔フォイルから成るスは
−サーをアンモニアガスの選択透過層として用いること
により、感度についての欠点を改良したものである。し
かしながらこの分析要素はスペーサーで剥離できる構造
のいわば非一体型のものであるため、特に低濃度域の感
度が低く、血液のように微量でその成分測置を行うこと
が望ましい検体の分析には適当とはいえない。また、こ
の分析要素は使用の際、試薬層およびスペーサーを取除
いて指示薬層を露出させ、その色変化を測定するように
なっており、操作、取扱いが煩雑である。また実施例お
よび図面に開示されているアンモニア分析用具は、指示
薬層として吸収性担体、たとえば紙、多孔性合成樹脂を
用いている。このような不透明担体中の色変化を測光す
る方式では、不透明担体上の乱反射、マスキング作用の
ために精度の良い測定ができない。したがってこの分析
用具は、半定量ないし比較的精度の悪い定量分析減圧し
か適用することができないという欠点がある。

特開昭１ｌ−７７１ｔＯおよび特開昭６ｌ−７７６ＡＩ
明細書には前述の疎水性ポリマーの均質（非孔性）薄層
からなる障壁柳眉のかわりに網状物またはメンブランフ
ィルタ−（プラッシュドポリマー層）からなる空気ツク
リア一層（液体遮断層）を用い２ＢＵＮ等のアンモニア
生成性物質定量分析用一体型多層分析要素が提案されて
おり、この多層分析要素においては、障壁物層を有する
多層分析要素におけるアンモニアガスの拡散透過時間が
長いために感度が低いという欠点とスペーサーを用いた
分析要素における被検成分の低濃度域における感度が低
いことと分析操作が煩雑であるという欠点とがともに解
消された一体型多層分析要素である。しかしそれでもな
おかつ網状物またはメンブランフィルタニは一体型多層
分析要素の製造工程において要素に組みこむ際にきわめ
て高度の技術を要し、ことにメンブランフィルタ−は機
械的強度が弱いために分析要素の製造工程において要素
に組みこむ際に細心の注意を払った高度の技術を要する
という問題点が残されていた。

本発明者は前述のごとき種々のアンモニアまたはアンモ
ニア生成性物質分析用分析要素の有する諸種の欠点を解
消し、短時間に容易な操作で高精度の分析が実施できる
高感度の一体型多層分析要素で、さらに容易に製造可能
な分析要素について鋭意研究を行ない本発明に到達した
。本発明のアンモニア生成性物質分析用一体型多層分析
要素においては、従来の障壁物層またはスペーサーに代
えて、ガス状アンモニアを通過させるが液体状水および
水に溶解したアルカリ性妨害物質を実質的に通過または
浸透させない、改良された空気バリア一層（液体遮断層
）をアンモニア指示薬層と試薬層との間に設けたことを
特徴とするものである。

本発明は、水不透過性透明支持体の上に■アンモニア指
示薬層、■空気バリア一層、■アンモニア生成性物質と
反応してガス状アンモニアを生成させることができる試
薬を含有する試薬層、および■多孔性展開層または定面
積多孔性層がこの順に一体に積層されてなる一体型多層
分析要素において、前記空気バリア一層が繊維状物質を
相互にからみあわせるか、接着または結合させて成りガ
ス状アンモニアを通過させるが液体状水および妨害物質
を含有する液体状水を実質的に遮断しつる連続空隙含有
多孔性物質からなることを特徴とする一体型多層分析要
素である。

本発明の一体型多層分析要素は、被検成分（アナライト
）としてアンモニア自体を直接、あるいはアンモニア生
成性物質と試薬との反応により生成するアンモニアを測
定することによりアンモニア生成性物質を間接的に測定
するのに有利に使用される。アレモニア生成性物質と試
薬との組合せとしては、たとえば、尿素／ウレアーゼ、
クレアチニン／クレアチニン−ディゴナ−−ゼ、アミノ
酸／アミノ酸−デヒドロゲナーゼ、アミノ酸／アミノ酸
オキシダーゼ、アミノ酸／アミノ酸−デヒト９ラターゼ
、アミノ酸／アンモニア−リアーゼ、アミン／アミン−
オキシダーゼ、ジアミン／アミン−オキシダーゼ、グル
コース及び隣アミダート／燐アミダートヘキソース燐ト
ランスフェラーゼ、ＡＤＰ／カルバミン酸塩キナーゼ及
び燐酸カルノ（モル、酸アミド／アミドヒドロラーゼ、
ヌクレオ塩基−テ了ミナーゼ、ヌクレオシド／デアミナ
ーゼ、ヌクレオシド／デアミナーゼ、グアニン／グアナ
ーゼ等が挙げられる。このように本明細書及び特許請求
の範囲において「アンモニア生成性物質」とは、特定の
試薬と反応してそれ自体からアンモニアを生成するか、
あるいは複数個の反応系を経由してアンモニアを生成す
るような化合物または化合物群を意味するものである。

本発明の多層分析要素の支持体としては、多層分析要素
において一般的に用いられているような水不透過性の透
明支持体、たとえばポリエチレンテレフタレート、ビス
フェノールＡのポリカルボネ−）、ポリスチレン、セル
ロースエステル（例、セルロースジアセテート、セルロ
ーストリアセテート、セルロースアセテートプロピオネ
ート等）等のポリマーから成る透明支持体が使用される
。

この支持体の上にアンモニア指示薬層（以下、指示薬層
という）が設けられる。指示薬層には、ガス状アンモニ
ア反応して吸収波長に変化を生じるような化合物（以下
、呈色指示薬という）が含まれている。本発明の多層分
析要素に使用可能な呈色指示薬としては、たとえば、ロ
イコシアニン染料、ニトロ置換ロイコ染料およびロイコ
フタレイン染料のようカロイコ染料（特開昭ｊＪ−３１
７ｒｔ明細書に記載）；ヅロムフェノールヅルー、ヅロ
ムクレゾールグリーン、ブロムチモールブルー、キノリ
ンブルーおよびロゾール酸のようなｐＨ指示薬（共立出
版、化学大辞典、１０巻４３〜ｔ！頁参照）；トリアリ
ールメタン系染料前駆体；ロイコベンジリデン色素（特
開昭１ｊ−３７２゜特開昭ｊｔ−／４Ａｊ、２７ｊ明細
書に記載）；ジアゾニウム塩とアゾ染料カプラー；塩基
漂白可能染料等が挙げられる。

これらの呈色指示薬の少なくとも７種を、有機溶剤性バ
インダーポリマーあるいは水溶性バインダーポリマーと
混合し、透明支持体上に塗布して指示薬層を形成する。

使用できるバインダーポリマートシては、セルロースア
セテート（モノ、ジ、またはトリ、アセテート）、セル
ロースアセテートブチレート、セルロースアセテートプ
ロピオネート尋のセルロースエステル類１メチルセルロ
ース、エチルセルロース、プロピルセルロース等のアル
キルセルロース類；ポリメチルメタクリレ−′ト、ポリ
了クリレート、ポリスチレン、ポリアクリロニトリル、
ポリ酢酸ビニル、ポリビニルブチラール、クロル化ポリ
酢酸ビニル、ポリアクリルアミド、ポリビニルピロリド
ン、ポリビニルアルコール等の合成ビニル重合体又はこ
れらの共重合体等がある。

バインダーの重量に対する呈色指示薬の配合量は約１０
４から約７０係の範囲である。また、製造の際の呈色ま
たは変色防止のために、エタンスルホン酸、アスパラギ
ン酸、アゼライン酸、グルタル酸、コハク酸、グルタコ
ン酸、酒石酸、ピメリン酸、マロン酸、リンゴ酸、３．
３−ジメチルグルタル酸、クエンｆｆ、ｐ−）ルエンス
ルホン酸、過塩素酸、塩酸などの有機酸あるいは無機酸
などを加え、ＤＨを呈色指示薬の非呈色域のｐＨに調整
する。これらを、バインダーポリマーとともにア七トン
、２−メトキシエタノール、メチルエチルケトン、ジク
ロロメタン、ジクロロエタン、メタノール、エタノール
等の有機溶剤あるいは水に固形分濃度的１４から約２０
憾、好ましくは約３３４から約１０６となるように加え
て塗布液とする。これを乾燥膜厚約ｌ＃濯から約３０μ
ｍ、好ましくは約２μｍから約２０μｍの範囲となるよ
うに透明支持体の上に塗布、乾燥して指示薬層を形成す
る。

かくして得られた指示薬層の上に空気バリア一層を設け
る。

空気バリア一層は繊維状物質が相互にからみあわせ、接
着または結合されてなる連続空隙含有多孔性物質からカ
リ、分析要素の製造時（後述する試薬層を空気バリア一
層の上に塗布によシ設けるとき）および／または分析操
作時に液体状水および妨害成分、例えばアルカリ物質等
、を溶解含有する液体状水を実質的に通過または透過さ
せず、かつガス状アンモニアが通過できるものである。

この連続空隙含有多孔性物質は繊維状物質またはその集
合体を物理的にからみあわせるか、物理的および／また
は化学的に接着または結合させた構成からなるもので、
その具体例として、繊維として天然繊維性物質であるセ
ルロース繊維、綿繊維、麻繊維、絹繊維、羊毛繊維等、
再生または半合成物質からなる繊維としてレーヨン繊維
、ビニロン線維、セルロースアセテート繊維等１合成物
質からなる繊維としてグラスウール、ポリエチレン繊維
、ポリエチレンテレフタレート繊維、ポリアクリロニト
リル繊維、ポリ塩化ビニル繊維等、またはこれらを混合
してなる繊維状物質から抄造により製造した半紙、美濃
紙や障子紙等の和紙、Ｆ紙、洋皮紙等の紙、これらの繊
維状物質から製造したフェルトおよび不織布等があけら
れる。連続空隙含有多孔性物質の（以下１紙、フェルト
等ということがある。）空隙率は約２０４から約りｏｅ
ｓ、好ましくは約！０４から約１３−４の範囲、平均空
隙サイズは約０，０／μｍから約２０μｍ１好ましくは
約０．１４ｍから約１０μＷＬ、厚さは約５０μｍから
約！０θμｍ、好ましくは約７ｏｔｔｍから約３００μ
ｍの範囲である。また紙、フェルト等は毛細管現象によ
って液体、特に水またはアルカリ性物質等の妨害物を溶
解含有する水が毛細管流を生じない程度に疎水性または
撥水性を有していることが好ましい。紙、フェルト等の
疎水性または撥水性が弱い場合には疎水化処理または撥
水化処理を施すことが好ましい。疎水化処理または撥水
化処理（以下、撥水化処理で両者を代表させる）はシリ
コーン樹脂、シリコーンオイル、弗素樹脂、弗素オイル
に代表される一般に撥水住処、理剤として公知の物質を
、必要によシ溶剤（例えば、ヘキサン、シクロヘキサン
、石油エーテル等）で固形分含有量が約０．／４から約
！嗟の範囲になるように稀釈し、これを含浸、塗布また
はスプレー等の方法で紙、フェルト等の少なくとも一表
面およびその近傍に適用することＫより実施することが
できる。

紙、フェルト等の連続空隙含有多孔性物質は、指示薬層
のマトリクスを構成している水性バインダーや有機溶剤
性バインダーをはじめとする多様な材料に対して実用的
な強度をもって接着する。

接着は、指示薬層に紙、フェルト等を、必要によりウェ
ット状態としてはりつけ、乾燥すればよい。

ここにウェット状態とは、バインダーを溶解している溶
媒が残ってｂるか、あるいは乾燥した膜が可溶性溶媒（
有様溶媒まｆｃは水）でぬらされてバインダーが膨潤状
態、分散状態または溶液状態にあることを意味する。ま
た、指示薬層の、Ｈインダーが、たとえばポリ酢酸ビニ
ルのように粘着性を有する場合には、指示薬層を特にウ
ェット状態とすることなく、紙、フェルト等をそのまま
圧着”すればよい。

かくして形成された空気バリア一層の上に、試薬層を設
ける。試薬層には、尿素、クレアチニンのような基質と
反応してアンモニアを生成させるウレアーゼ、クレアチ
ニンーデイミナーゼ等の酵素の如く、アンモニア生成物
質と反応してアンモニアを生成させる試薬、および反応
により生成したアンモニアをガス状に効率良く遊離させ
るためのアルカリ剤またはアルカリ性緩衝剤が含有され
る。水性液体中のアンモニアを測定する場合には試薬層
中にはアルカリ剤またはアルカリ性緩衝剤だけを主たる
試薬として含有させる。

アルカリ性緩衝剤としてはｐＨ値が７から２゜！、好ま
しくは７．６から２．０の範囲の緩衝剤を用いることが
できる。緩衝剤の具体例としてエチレンジアミンテトラ
酢酸（ＥＤＴＡ）、）リス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタン（Ｔｒｉｓ）、燐酸塩緩衝剤、Ｎ、Ｎ−ビス（２
−ヒドロキシェ、チル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ　）、
Ｎ−（）リス（ヒドロキシメチル）メチルツー３−アミ
ノプロパンスルホン酸（Ｔａｐｓ）、Ｎ−２−ヒドロキ
シメチルビにラジンーＮ′−２−ヒドロキシプロパ７−
ｊ−スにホ７酸（Ｈｅｐｐｓｏ　）、Ｎ−，２−ヒドロ
キシエチルピペラジン−Ｎ’　−３−プロパンスルホン
酸（Ｅｐｐｓ）、Ｎ、Ｎ−ビス（コーヒドロキシエチル
）−コーアミノエタンスルホン酸、Ｊ−ＣＮ−ビス（ヒ
ドロキシエチル）アミノ〕−−−ヒドロキシプロノモン
スルホンｅ（Ｄｉｐｓｏ　）。

Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−エタン、ＸＡ
／ホン酸（Ｈｅｐｅｓ　）、ピペラジ７−Ｎ、Ｎ’−ビ
ス（コーヒドロキシプロ／ξンスルホン酸）コ水和物（
Ｐｏｐｓｏ　）、Ｊ　（Ｎ　）　’Ｉ　ｘ　（ｋ−）”
　。

キシメチル）メチルアミノコ−２−ヒドロキシプロパン
スルホン酸（Ｔａｐｓｏ）％Ｎ−）リス（ヒドロキシメ
チル）メチルアミノエタンスルホン酸（Ｔｅａ）、Ｎ−
［コーヒドロキシーｌ、ｌ−ビス（ヒドロキシメチル）
エチルコグリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）等またはこれらの
リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金
属塩、またはアルカリ土類金属塩等のｒ　Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙＪｊ巻ダｔ７〜弘７７頁（ｌり、４４年）
、［Ａｎａｌｙｔｉｃａ　ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ
　１０４４巻、ｓｏｏ〜ｓｉｏ頁（ｌりｔｏ年）等に記
載の公知の緩衝剤がある。

試薬層には必要によシ、湿潤剤、バインダー架橋剤（硬
化剤）、安定剤、重金属イオントラップ剤（錯化剤）等
を含有させることができる。重金属イオント之ツブ剤は
、酵素活性を阻害するような重金属イオンをマスキング
するために使用されるものでありたとえば、ＥＤＴＡ、
ＪＮａ、ＥＤＴＡ、＄Ｎａ、　二）リロトリ酢酸（ＮＴ
Ａ）。

ジエチレントリアミンペンタ酢酸のようなコンプレクサ
ン（ｃｏｍｐ　１ｅｘａｎｅ）が用いられる。これらの
試薬類をゼラチン等の水性バインダーと混合して塗布液
とし、空気バリア一層の上に塗布することにより試薬層
が形成される。

試薬層に含まれるウレアーゼ等の試薬は、バインダーの
重量に対してｏ、１−ｔｏ憾、好ましくは４〜．２Ｃ４
程度が適当であり、またアルカリ性緩衝剤の使用量はバ
インダーに対してｏ、ｉ、ｉｏ優程度が適当であり、重
金属イオントラップ剤の使用量は、バインダーに対して
Ｏ０ｊ〜λｏ４程度が適当である。この試薬層の膜厚は
一般に、／〜２０μｍ程度、好ましくは、３〜ｉｏ４ｍ
程度である。

かぐして形成された試薬層上に、多孔性展開層（以下、
展開ノーという）が設けられる。この際、必要により、
光反射層を設けてから展開層を設けてもよい。光反射層
は、たとえば二酸化チタンまたは硫酸バリウム微粉末、
ゼラチンおよび界面活性剤等を含む水性液を乾燥膜厚０
．ｊ〜コＯμｍ程度となるように塗布乾燥すればよい。

展開層は、点着された液体試料が急速に横方向に円形に
広がり、ついで深さ方向にも浸入し、試薬層に液体試料
が単位面積当りほぼ一定量供給されるようにするための
ものである。本発明に使用される展開層は、上記の機能
を有するものであればどのようなものでもよいが、たと
えば特開昭！ｊ−，＃≠３２１、特開昭１７−６．！４
４１２明細番等に記載の親水化処理織物、特公昭ｊＪ−
，２１ｔ７７、特開昭！！−タｏｒｚり明細書等に記載
の非繊維多孔質媒体などが適当である。（親水化）織物
を使用する場合には、試薬層あるいは光反射層の上に。

ゼラチン等のバインダーおよび界面活性剤などを含む接
着層をあらかじめ形成しておくのが好ましい。

多孔性展開層のかわりに定面積多孔性層を設けることが
できる。定面積多孔性層は実開昭！７−１１２９１１、
特開昭、ｔ７−２０１１２りｇ明細書等に記載の素材お
よび方法で試薬層または接着層の上に設けることができ
る。

本発明の一体型多層分析要素を用いてアンモニア又はア
ンモニア生成性物質を測定するには、層間層上に被検液
ｊ〜３０ｔｔｌｌ程度を点着し、必要により３ＯＮ４！
００Ｃ好ましくは、３！〜３り０Ｃで／−，２０分、好
ましくは３〜ｉｏ分程度インキュベーションを行った後
、透明支持体側から指示薬層の色変化（発色、変色また
は退色）の程度を反射測光するか、標準色と視覚的に比
較すればよ−。

本発明の一体型多層分析要素は、空気バリア一層を有す
るためにアンモニアガスの拡散速度が高く、したがって
従来のものにくらべて測定時間が著しく短縮され、また
精度が著しく向上してい石。

しかも一体型であるから操作取扱も簡便である。

本発明の一体型多層分析は市販の紙、フェルト等を、必
要により撥水性処理するだけでそのまま空気バリア一層
として使用することができるので、大量生産に適する塗
布、ラミネート工程より成る実用的製造技術により効率
よく安価に製造が可能である。

次に実施例をあげて本発明を具体的に説明するが、本発
明がこれらに限定されるものでないことはいうまでもな
い。

実施例１ 次の工程により血中尿素窒素（ＢＵＮ）足置分析用一体
型多層分析要素を作製した。

厚さｌｒＯμｍの無色透明ポリエチレンテレフタレー）
（ＰＥＴ）フィルムの上に下記の層を順次４責ＩＬした
。

（１）　指示薬層（以下、成分量はＰＥＴフィルム／１
ｎ２当りの適用量を表わす′。） ヅロムクレゾールグリーン （ＣＡＳ　Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｎｕｍｂｅｒ　７Ａ−ＡＯ−１）　０．３１９酢酸ビニ
ル−ブチルアクリレ− トコポリマー（粘着性バイン ダー）　／θ、Ｊ１７ 〈えん酸　θ、／Ｊ−１／ アセトン　ｉｇ エタノール　ダｇ 水　２７ｇ ｎ−ノニル７丁ノ永−ソａ　１１７１１シドール　０−
／７ｇ 上記組成の溶液を塗布乾燥した。

（２）空気バリア一層 シリコーン樹脂のへキサン溶液（固形分含有量２優）に
浸漬した後乾燥することにより撥水処理したセルロース
繊維パルプからなるＦ紙（厚さ／１０μｍ、空隙率７ｊ
％）を指示薬層の上に軽く圧着してラミネートした。こ
の工程の操作は極めて扱いやすかった。

（３）試薬層 ゼラチン　ｉｔ、ｒｇ ウレアーゼ　３コｏｏｏＵ 水　１３７９ Ｈｅｐｐｓｏ　７９ ＥＤＴｋ−４ＡＮａ　ｏ、３ｇ オルト燐酸水素二ナトリウム　０．２／１ｐ−ノニルフ
ェノキシボリグ リシドール　０．ｊ／１ ＮａＯＨを加えてｐ　）Ｉ　Ｉに調整する上記溶液を空
気バリア一層の上に塗布し乾燥させた。

（４）光反射層 ＴｉＯ２微粉末　λ、ｚｇ ゼラチン　１７ｇ ｐ−ノニルフェノキシポリグリ シドール　ｏ、ｚｇ 水　ｔｏｇ 上記水分散液を塗布し乾燥させた。

（５）接着層 ゼラチン　λ、ｊｉ 水　ｊＯｔｔｌ ｐ−ノニルフェノキシポリグリ シドール　０．／１ｇ 上記組成の溶液を塗布し乾燥させた。

（６）展開層 接着層の表面を水で湿らせて膨潤させ、１００番手の綿
ブロード布を軽く圧力をかけてラミネートし接着させた
。

このようにして得られたＢＵＮ定量分析用一体型多層分
析要素を次の方法にょ９評価した。

尿素含有Ｏから１０ｏｔｎｇ／ｄｉの範囲に調製された
４種の７係アルヅミン水溶液１ＯＢｌを要素の展開層に
点着し、３７°Ｃでｔ分インクイーションし、直ちに発
色光学濃度を中心波長ｔ　００ｎｍの光でＰＥＴフィル
ム側から反射測光して第１表の結果が得られた。

第７表 第１表のデータからこの一体型多層分析要素を用いて尿
素含有量の定量分析を実施できることが明らかである。

実施例２および３ 空気バリア一層としてフィルタークロス用不織布（実施
例２）および和紙（障子紙、実施例３）シリコーン樹脂
へキサン溶液（固形分箸有量２ｔＳ）に浸漬して乾燥さ
せたものを用いたほかは実施例１と同様にしてＢＵＮ定
量分析用一体型多層分析要素を調製した。

実施例１と同様に評価を実施して第２表の結果を得た。

第λ表 第２表のデータから、この２種の一体型多層分析要素は
いずれを用いても尿素含有量の定量分析を実施できるこ
とが明らかである。

実施例４乃至６ 次のようにしてＢＵＮ定量分析用一体型多層分析要素を
作成した。

（１）指示薬層 厚さｉｒｏμｍの無色透明ＰＥＴフィルムの上に実施例
１の（１）と同様にして設けた。

（２）空気バリア一層 撥水処理しない濾紙（セルロース繊ｍ／ｅ／’フカらな
り、厚さ／オ’　／’　ｍ　ｓ空隙率７！１５実施例４
）、不織布（フィルタークロス用；実施例５）、障子紙
（実施例６）を指示薬層の上に軽く圧着してラミネート
した。

一方、表面が平滑な離型紙の上に順次実施例１の工程（
４）乃至（６）と同様にして試薬層、接着層、展開層を
設けた積層物を調製し友。ついで積層物から離型紙をは
ぎとシ、展開層を下にして清浄な平面の上におき、試薬
層の上に酢酸ビニルヅチルアクリレートコポリマー１０
９、水りＯｇおよびｐ−ノニルフェノキシポリグリシド
ール／９からなる液を乾燥後の厚さが約λμｍになるよ
うにして粘着性ポリマー層を塗布し乾燥した。ついで粘
着性ポリマー層を前述の３種の空気バリア一層に重ねて
積層物を軽く圧着ラミネートとして一体に接着してＢＵ
Ｎ定量分析用一体型多層分析要素を調製した。これらの
要素を実施例１と同様にして評価して第３表の結果を得
た。

第３表 第３表のデータから５これら３種の一体型多層分析要素
のいずれを用いても尿素含有量の定量分析が実施できる
ことが明らかである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ＋１１　水不透過性透明支持体の上に■アンモニア指示
   薬層、■空気バリア一層、■アンモニア生成性物質と反
   応してガス状アンモニアを生成させることができる試薬
   を含有する区薬層、および＠多孔性展開層または定面積
   多孔性層がこの順に一体に積層されてなる一体型多層分
   析要素において、前記空気バリア一層が繊維状物質を相
   互にからみあわせるか接着または結合させて成りガス状
   アンモニアを通過させるが液体状水および妨害物質を含
   有する液体状水を実質的に遮断しうる連続空隙含有多孔
   性物質からなることを特徴とする一体型多層分析要素。 （２）前記多孔性物質が厚さ約１０μｍから約！００　
   ｔｔ　ｍ　ｓ空隙率約、２０４から約９０４の範囲であ
   る抄造紙、フェルトまたは不織布である特許請求の範囲
   ｌに記載の一体型多層分析要素。