JPS61216697A - 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は調味料、飼料添加剤、医薬等に広く利用されて
いるＬ−グルタミン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−グルタミン、
Ｌ−アルギニン、Ｌ−７エニルアラニン、Ｌ−スレオニ
ン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−プロリン
、Ｌ−バリン、Ｌ−セリン、Ｌ−オル−チン、Ｌ−７ト
ルリン、Ｌ−チロシン、Ｌ−トリプト７アンおよびＬ−
ロイシンなどのＬ−アミノ酸の製造法に関するものであ
る。

（従来の技術） 従来よりルビバクテリウム属、コリネバクテリクム属、
バチルス属又はエセリヒア属等に属する微生物により、
Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−
アルギニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−スレオニン、
Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−プロリン、Ｌ
−バリン、Ｌ−セリン、Ｌ−オルニチン、Ｌ−シトルリ
ン、Ｌ−プロリン、Ｌ−）リデトファンおよびＬ−ロイ
シンなどのＬ−アミノ酸は発酵法により工業的に生産さ
れている。これらの微生物は生育に酸素を必要とするた
め、このような微生物を用いてＬ−アミノ酸発酵を成立
させるためには、酸素の供給が必須である。一般的には
、従来から酸素の供給のためにＬ−アミノ酸発酵培地中
に空気を供給し、通気、攪拌によって気泡を細かくする
など培地中の溶存酸素濃度を高める方法が試みられてい
る。

しかしながら従来のし一アミノ酸発酵の中には空気を通
気攪拌しても、培地中にリンゴ酸、コ・・り酸および乳
酸などの有機酸が生成することがわかった。これら有機
酸の中で特に乳酸の生成が著しい。これらの有機酸の生
成は目的とするＬ−アミノ酸の発酵収率を低下させると
いう欠点を有していた。

（本発明が解決しようとする問題点） 本発明が解決しようとする問題点は上述の欠点を解決し
、工業的に従来以上に安価なＬ−アミノ酸を生産する方
法を開発することにある。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らはＬ−アミノ酸の発酵収率をさらに向上させ
、工業的に有利な発酵法によるＬ−アミノ酸の製造法を
開発すぺ〈鋭意研究した結果、空気中の酸素濃度以上の
酸素を培地中に供給することにより培地中のリンゴ酸、
コ／Ｓり酸、乳酸などの有機酸が低下し、目的とするＬ
−アミノ酸の収率が向上することを知った。本発明はこ
の知見に基づき更に研究を行りた結果なされたものであ
る。

即ち本発明は、Ｌ−アミノ酸生産菌ｔ−Ｌ−アミノ酸生
産液体培地中に接種、培養し、該培養液中で生成の著し
い乳酸に着目し、その乳酸が少なくとも１０η／ｄ１以
上に達した時期から、該培養液中の乳酸の量が１０〜２
００１１１９７ｄｔの範回になるように通常の空気より
も酸素濃度を高めた酸素を培地に供給しながら培養する
ことを特徴とする発酵法によるＬ−アミノ酸の製造法に
関する。

本発明でいうＬ−アミノ酸とはＬ−グルタミン酸、Ｌ−
リジン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−７エニ
ルアラニン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−
ヒスチジン、Ｌ−デミリン、Ｌ−バリン、Ｌ−セリン、
Ｌ−オルニチン、Ｌ−シトルリン、Ｌ−チロシン、Ｌ−
トリプトファンおよびＬ−ロイシンなどのＬ−アミノ酸
であり、ここに例示し７’ｊＬ−アミノ酸以外でも好気
的条件下で発酵法によ妙生産されるＬ−アミノ酸であれ
ば本発明の方法は使用可能である。

本発明で用いるＬ−アミノ酸生産菌は上記のも一アミノ
酸を生産する微生物であればどのような微生物を用いて
もよい。

具体的には Ｉ　Ｌ−グルタミン酸生産菌 遣邊佳 ブレビ６クテ１ウム・デイノ句カタム　　　　ＡＴＣＣ
１４０２０プレク臂リウム・フラバム　　　　　　　Ａ
ＴＣ（！　　１４０６７プレｂ９ｆリウム・ラクトフェ
ルメンタム　ＡＴＣｏ　　１３８６９プレク９チリウム
・ラクトフェルメンタム　ＦＩＲＭ−Ｐ　　５０１２　
　（ＡＪ　　１１３６０）コリ＋Ｗリウム・アセトアシ
ドフイラム　ＡＴＣＣ１３８７０コリ坤−りつ１リウム
・クラにタミクム　　　　　　ＡＴＣＣ１３０３２２Ｌ
−リジン生産菌 プレヒシリラしリウム・フラバム　　　　　　　　ＦＥ
ＲＭ−Ｐ　　１７０８　　（ＡＪ　　３４１９）コリオ
−肴すウム・タウータミクム　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　
　１７０９　　（ＡＪ　　３４２０）ツ５１シ勺−ｔリ
ウム・ラクトフェルメンタム　ＦＩＲＭ−Ｐ　　１７１
２　　（ＡＪ　　３４２５）プレヒゲ９ントリウム・ラ
クトフェルメンタム　ＦＩＲＭ−Ｐ　　１７１１　　（
ＡＪ　　３４２４）３　Ｌ−グルタミン生産菌 ブレビ６クデリウム・フラバム　　　　　　　ＦＥＲＭ
−Ｐ　　５５０２　　（ＡＪ　　１１５７６）コリネ−
ｙテ１ウム・アセドアシドフイラム　ＡＴＣＣ１３８７
０４Ｌ−フルギニン生産菌 ツ５ｔシ芳すウム・フラバム　　　　　　　ＦＩＲＭ−
Ｐ　　７６４２　　（ＡＪ　　１２１４４）コリオレ匂
−トリウム・クラレタミクム　　　　　ＦＩＲＭ−Ｐ　
　７２７４　　（ＡＪ　　１２０９３）５　Ｌ−フェニ
ルアラニン生産菌 ツ５ｔラジフ′リウム・ラクトフェルメンタム　ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ　　１８４４　　（ＡＪ　　３４３２）プレゆ勺
−ｔリウム・フラブム　　　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　　
１９１６　　（ＡＪ　　３４３９）コリオ−Ｗリウム・
クラークミクム　　　　　ＡＴＣＣ２１６７０６Ｌ−ス
レオニン生産菌 エセリヒア・コリ　　　　　　　　　　　　　　ＦＥＲ
Ｎ−Ｐ　　４９００　　（ＡＪ　　１１３３４）コリ木
骨リウム・クシにタミクム　　　　　Ｆｌ：ＲＭ−Ｐ　
　５８３５　　（ＡＪ　　１１６５４）　　　　　　　
　　′プレヒゲ９ｔリウム・フラブム　　　　　　　Ｆ
ＥＲＭ−Ｐ　　４１６４　　（ＡＪ　　１１１７２）ツ
ル１ラジリゝリウム・ラクトフェルメンタム　ＦＩＲＭ
−Ｐ　　４１８０　　（ＡＪ　　１１１７８）７　Ｌ−
イソロイシン生産菌 ツ５ｔシ肴すウム・フラバム　　　　　　　ＦＩＲＭ−
Ｐ　　８０５　　（ＡＪ　　３２７１）ブレビ６クテリ
ウム・ラクトフェルメンタム　ＦＩＲＭ−Ｐ　　４１９
２　　（ＡＪ　　１１１９０）８　Ｌ−ヒスチジン生産
菌 プレゆシリ２リウム・フラバム　　　　　　　ＦＥＲＭ
−Ｐ　　２３１６　　（ＡＪ　　３６２０）　　　　　
　　　　　’ブ’Ｖｂシジラゝリウム・ラクトフェルメ
ンタム　ＦＥＲＮ−Ｐ　　１５６５　　（ＡＪ　　３３
８６）；りオー勺たｔリウム・り’Ｈタミクム　　　　
　ＡＴＣＣ１４２９７９Ｌ−グロリン生産菌 −ｆｉ／１！！／芳リウム・フラシリウム　　　　　　
ＦＥＲＭ−Ｐ　　５３３２　　（ＡＪ　　１１５１２）
１０　　Ｌ−バリン生産菌 ツ５１うガリウム・ラクトフェルメンタム　ＦＥＲＪＩ
Ｉ−Ｐ　　１９４５　　（ＡＪ　　３４４６）２１／と
シ臂すウム・クラレーム　　　　　　　　　　ＦＥＩυ
ｄ−Ｐ　　５１２　　　（ＡＪ　　３２７６）コリ、ｔ
−ｌセーｔリウム・ラクトフェルメンタム　ＦＥＲＭ−
Ｐ　　１９６８　　（ＡＪ　　３４５５）１１　　Ｌ−
セリン生産菌 コリオレ芳すウム・りηシノフイラム　　　ＦＥＲＭ−
Ｐ　　１６８８　　（ＡＪ　　３４１４）ツｔ１う芳Ｉ
ＪつＡ・う／）７１＃、ｄンタＡ　　ＦＥＲＭ−Ｐ　　
１３７１　　（ＡＪ　　３３６０）うり一りドモタフス
・メカ）シた＝ツ→レク入　　　　　ＦＥＲＢ屋−Ｐ　
　４５３２　　（ＡＪ　　１１２６２）１２　　Ｌ−オ
ルニチン生産菌 プレビシガリウム・ラクトフェルメンタムＦＥＲＭ−Ｐ
　　５９３６　　（ＡＪ　　１１６７８）コリオ−９す
２リウム・クルタミクム　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　　５
６４４　　（ＡＪ　　１１５８９）１３　　Ｌ−シトル
リン生産菌 コリオレ芳すウム・〜ミクム　　　　　ＦＩＲＭ−Ｐ　
　５６４３　　（ＡＪ　　１１５８ｇ）ツｔ１う９祝ｔ
！７１）Ａ・７ラノ＜ｌｈ　　　　　　　　ＦＥＲＭ−
Ｐ　　１６４５　　（ＡＪ　　３４０８）１４　　Ｌ〜
チａシン生産菌 コリオレジラ１リウム・り九タミクム　　　　　ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ　　５８３６　　（ＡＪ　　１１６５５）Ｍ９ｆ
リウム−７ラパム　　　　　　　ＦＩＲＭ−Ｐ　　７９
１４　　（ＡＪ　　１２１８０）ノセ叱ル６ぺ・】ぐツ
シトリス　　　　　　　　　　　　　　ＦＥＲＭ−Ｐ　
　６７５８　　（ＡＪ　　１１９６ｇ）１５Ｌ−）リゾ
ドアアン生産薗 ノ＊ｓａ＜−、ｅｆｆＵｘ　　　　　　　　　　　　　
　　ＦＥＲＭ−Ｐ　　５２８６　　（ＡＪ　　１１４８
３）ブレビ６クテリウＡ−ラ外７ｘｌＬ−１ンタムＦ）
ｉ！ＲＭ−Ｐ　　７１２７　　（ＡＪ　　１２０４４）
−ｙｔ＞ｇリウＡ−７うＩ仏　　　　　　　　ＦＥＲＭ
−Ｐ　　７０３４　　（ＡＪ　　１２０２２）＝ｆｆ９
＞９ＭつＡ・／ｖ／＃／ム　　　　　ＦＩＲＭ−Ｐ　　
７１２８　　（ＡＪ　　１２０５２）１６　　Ｌ−ロイ
シン生産菌 ツ５ｔシジラ２リウム・ラクトフェルメンタム　ＦＩＲ
Ｍ−Ｐ　　１７６９　　（ＡＪ　　３４２７）’ｆｌＡ
６９ｆ９ウム・７うＩ＜Ａ　　　　　　　　　　　Ｆｆ
ｆｉＲＭ−Ｐ　　４２０　　　（ＡＪ　　３２２６）コ
〃ネ１９漂トリウム・クラにタミクム　　　　　ＦＥＲ
Ｎ−Ｐ　　１９６６　　（ＡＪ　　３４５３）などが使
用される。

本発明で使用するＬ−アミノ酸生産培地とじては、従来
より知られているＬ−アミノ酸生産菌に適したＬ−アミ
ノ酸生産培地が使用可能である。

更に本発明においては従来の空気中の酸素０度以上の酸
素量を供給するために、培地中の栄養物は従来の培地組
成以上の濃度のもやでも使用可能であり、例えば、Ｌ−
グルタミン酸生産培地の場合では従来ビオチンを菌体生
育の至適生育濃度以下に制限する必要がありたが、本発
明の方法を行えば至適生育濃度以下に制限する必要はな
く、他の栄養物のバランスを失わない限り高濃度にして
も良い。

本発明においては培地中の乳酸量を測定し、乳酸量があ
らかじめ決めた濃度以上になった時点より空気中の酸素
濃度以上の酸素’ｉＬ−アミノ酸生産培地に供給する。

乳酸の測定は、迅速性があれば公知のいかなる方法でも
良い。空気中の酸素を供給する時点での生成乳酸量は使
用するアミノ酸の種類、生産菌の種類により、任意に選
定すれば良い。具体的には１０　、ｙ／ｄｔ〜２００　
ｍｆ／ｄｉ、望マシくはｌＯダ／ｄｔ以上になった時点
で空気中の酸素濃度以上の酸素を培地中に供給すれば良
い。

本発明において使用される酸素は液体酸素、Ｐ、Ｓ、Ａ
（クレッシ中−、スイング、アブ雫−グシ、ン）法又は
酸素富化膜法によって製造嘔れる酸素などがある。

Ｐ、Ｓ、Ａ法による酸素製造とは具体的には酸素ガスは
吸収せず、窒素ガスを選択的に吸着する多孔性の微粒子
層、例えば合成ゼオライト、合成アルミナシリケートの
金属塩よシなる多孔性の微粒子層に空気を加圧して送シ
込み空気中の酸素分圧以上の酸素を製造する方法でｓｂ
、この方法によって得られる酸素は多孔性の微粒子の種
類、空気の加圧条件等によって任意の空気圧以上の酸素
濃度を有する高酸素ガスを得ることができる。

酸素富化膜法による酸素製造とはフッ素系、ポリオレフ
ィン系、−パール系、シリコーン系又はフッ化炭素系の
薄膜を用い酸素ガスのみを選択的に透過させて空気圧以
上の酸素を製造するものである。酸素の供給は培地中の
乳酸のレベルにょシ供給量を適宜調整すれば良い。この
場合過剰の酸素ガスを供給しても発酵収率に影響を及ぼ
さないが、経済的な酸素供給量は培地中の乳酸量が２０
０号を以下になるような量で良く、一般的には、酸素濃
度３０〜５５９６の酸素と空気の混合ガスの場合は、１
１５〜１／Ｉ　ＶＶＭ程度である。

空気以上の酸素を供給する方法は、空気と酸素を培養タ
ンク内に両者を別々のノ４イブで供給しても良く、空気
と酸素を混合した後に供給しても良く、又アンモニアガ
スと混合して供給してもよい。

更に酸素を培地の狭面から供給することも可能である。

本発明において、空気中の酸素濃度以上の酸素の供給を
停止する時点は、該ガスの供給を停止しても培地中の乳
酸の生成が認められなくなる時点で停止すればよい。

なお各アミノ酸発酵液からの各々のアミノ酸の単離方法
は常法に従って行なえば良く、特別な方法を必要としな
い。

実施例１ グルコース３１１／ｄｌ　、　ＫＨ２ＰＯ４０，１１１
／ｄｉ　。

Ｎ！ｇｓＯａ　’７Ｈ２００，０５Ｊｉ’　／　ｄｌ　
−Ｆｅ２Ｏ２”７Ｈ２０１ｍ９７ａ　−ＭｎＳＯ４・７
Ｈ２０１１１１９７ｄｔ、尿素０．５１／ｄｔ、ビオチ
ン３００μＩ／１３　、サイアミン塩酸塩３０００μｉ
／ｉ　。

大豆蛋白酸加水分解液を全窒素として１００１１１ｐ／
＃を含む種母培地をｐＨ７，５に調節し、その５０ｍを
５００−容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。ブレビバ
クテリウム・ラクトフェルメンタムＦＥＲＮ−Ｐ　５０
１２　（ＡＪ１１３６０）　ｔ−接種し、３１．５℃に
保ちつつ、１６時間振盪培養した。

一方、グ／ｌ／　：２−　ス８１　／　ｄｌ　％ＫＨ２
ＰＯ４０，２１／ｄｌ％Ｍｇ５ｏ４−７１（２ｏ　　Ｏ
，０５ｊｌ／ｄｔ−Ｆ＠ＳＯ４”７Ｈ２０１１ｎｇ／ｄ
ｔ。

ＭｎＳＯ４・ｊＨ２０１＃／ｄｔ−ビオチン１００μＩ
ｉ／１３　、サイアミンＨＣｔ５００μｍ１／４３、大
豆蛋白酸加水分解液を全窒素として５０９／ｄｊを含む
ｐＨ７，５に調節した培地の２８５＋ｄｔ−ＩＪ容ファ
ーメンタ−に入れ殺菌した。これに上記種母培地を夫々
１５−ずつ接種した。培養は３５℃、回転数１＃０００
　ｒｐｍでアンモニアガスにてｐＨ７，５〜７．８に保
持しつつ行った。通気は空気（１／Ｉ　ＶＶＭ　）だけ
の場合、および空ｆｉ　（０，６ＶＶＭ　）と酸素（０
，４ＶＶＭ　）の混合がスで行った。酸素との混合ガス
の場合は乳酸の生成がｚｏｏｍｙ／ｄｌを超えないよう
に通気する酸素の量をコントロールしてそれぞれ培養し
た。培讐１２時間目からは培養液中のグルコース濃度が
１〜３１１７ｄｔの範囲にコントロールされるように７
０１／ｄｌのグルコース溶液を連続的にフィードしなが
ら４８時間まで培養を続けた。

その結果生成したＬ−グルタミン酸の量は、第１表に示
す通りであった。

第　　１　　表 実施例２ 第２表の組成の種母培地を５００−容の振盪フラスコに
５０ｄ宛分注し、１１０℃にて５分間加熱滅菌した後ブ
レビバクテリウム・フラバムＦＥＲＭ−Ｐ　１７０８　
（ＡＪ　３４１９）を接種し３１．５℃、２０時間振盪
培養を行い、種培養液を得た。一方、２８５ｄのし一リ
ジン生産用培地ｔ−１，０！容のジャーファーメンタ−
２基に張り込み１２０℃で１５分間滅菌し、これに上記
種培養液を夫々１５−宛接種し、アンモニアにてＰ）１
を６．５から７．０にコントロールしつつ、３１．５℃
、回転数１．００Ｏｒｐｍで培養した。通気は空気（０
，５ＶＶＭ　”）だけの場合と空気（Ｑ、４　ＶＶＭ　
）と酸素（Ｑ、Ｉ　ＶＶＭ　）　（７）混合ガスの場合
で行った。酸素との混合がスの場合は乳酸の生成が５０
ｍ９７ｄｌを超えないように通気する酸素！ｋｔ−コン
トロールする方法について実施した。培養３６時間目か
らは、培養液中のグルコース濃度が１〜３１７ｄｌの範
囲にコントロールされるように、６０１／ｄｔのグルコ
ースと３９／ｄｉの硫酸Ｉアンモニウムの混合溶液を連
続的にフィードしながら９６時間まで培養を続けた。生
成したＬ−ＩＪジン量は第３表に示す通りであった。

第２表培地組成 第　　３　　表 実施例３ グルコース５　Ｎ　／ｄｔ、　（ＮＨ４）２Ｓｏ４０．
２　ＩＩ／ｄ。

尿素０．２１　／ｄ、　ＩＧＩ２ＰＯ４０，１５ＩＩ／
ａ。

ＭｓｒＳＯ４−７Ｈ２０ｏ、　０４．９　／ｄｌ、Ｆｅ
ＳＯ４−７１１２０１Ｗ／ｄｌ、サイアミニ／　−ＨＣ
ｌ１０．　Ｏｆｉｌｌ／ｄａ、ビオチン０．３μＩ／ｄ
ｔ、大豆蛋白酸加水分解液を全窒素として３０ダ／ｄｔ
ｔ−含む種母培地を−７，０に調節し、その５０１１ｊ
ｔ”５００１１１容肩付フラスコに入れ加熱殺菌し友。

ブレビパフチリウム・７ラパムＦＥＲＭ−Ｐ　５５０２
（ＡＪ　１１５７６　）　ｔ−接種し、３１．５℃に保
ちつつ、１２時間振盪培養し友。

一方、グルコース１１　ＩＩ／ｄｇ、　ＫＨ２ＰＯ４０
，２５１１／ｄｌ、　ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０４０ダ／　
ｄｌ　％　　（ＮＨ４）　２”４１、５１　／　ｄｔ％
Ｎａ２ＳＯ４ｔ、　５　Ｊ’　／　ｄｊ　ｓ　　Ｆｅ１
ｏ４４Ｈ２０１ｙｖ／ａｘサイアｔ７−ＨＣｌ　３５０
ＡＩ／４３％大豆蛋白酸加水分解液を全窒素として２０
！Ｉ９／ｄｔｔ−含むｐＨ６゜５に調整した培地を基本
培地とし、これにビオチンを０．３５　μＪＦ／ｄｌ　
ｓ又は３．５　ａｌ、乙Ｕ添加した。これらの２８５ｄ
′ｔ−１１３容ファーメンタ−に入れ殺菌した。これに
上記種母培養液をそれぞれ１５−ずつ接種した。

培養は３１．５Ｃ，回転数１０００　ｒｐｍでアンモニ
アガスにてｐ）１６．５ないし６．０に保持しつつ、主
培養を開始した。培養は空気（ｏ、　ｓ　ＶＶＭ　）だ
けを通気し７１１と、空気（０，４ＶＶＭ　）と酸素（
０，ＩＶＶＭ）の混合がスを通気して、乳酸の生成が５
０り／ｄｔ金超えないように酸素量をコントロールした
場合の２通りについて実験した。培養２４時間目からは
培養液中のグルコース濃度が１１１／ｄａ〜３１１／ｄ
ｉの範囲にコントロールされるように別に殺菌した７　
０　ｐ／ｄｉグルコース溶液を連続的にフィードしなが
ら７２時間培養を行った。得られたＬ−グルタミンの生
成は第４表に示す通りでありた。

第　　４　　表 実施例４ グルコ−ｘ　５１１　／ｄｔ％　ＫＨ２ＰＯ４０，１１
／ｄｌｓＭｇ８０４・７Ｈ２００，０４＆　／ｄｔ％　
Ｆ　ｅ　８０４・７Ｈ２０１ダ／ｄｔ１Ｍｎ８０４−４
ｎ２ｏ　　１　’ｎ９　／　ａ　％尿素ｏ、３１／ｌｎ
、大豆蛋白酸加水分解液を全窒素として１００ＩＩ９／
ｄａ、サイアミンＨＣ１３０１１／ｄｌｓ　ビオチン２
ｏｏ／ｌｉｌを含む種母培地をｐＨ７，０に調節し、そ
の５０４を５００−容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した
。プレピパクテリウム・フラバムＦＩＲＭ−Ｐ　７６４
２　（ＡＪ　１２１４４）を接種し、３１．５℃に保ち
つつ１６時間振盪培養した。

一方グルコース１４Ｎ／ｄｊ％ＫＨ２ＰＯ４０，１１／
ｄｌ。

Ｍｇ８０４−７８．Ｏ０，０４＃　／ｄｌ、Ｆ＠ＳＯｎ
・７Ｈ２０１１ｖ／ｄ１１Ｍｎｓｏ４−ａＨ２ｏ　　１
ｍｙ　／　ｔｔｇ　、硫安３．Ｏｊｌ／ｄｇ、大豆蛋白
酸加水分解液を全窒素として６５ダ／　ｃｍ　ｓサイア
ミン塩酸塩５μＩ／ｄｌ　ｓビオチン５μｌ〃を含むｐ
Ｈ７，０Ｋｍ！１節した培地の２８５ｄをＩＪ容ツアー
メンタ−に入れ殺菌した。これに上記種母培地を夫々１
５−ずつ接種し九。培養は３１，５℃、回転数１ｅＯ０
０ｒｐｍでアンモニアガスにてｐ）１６．５ないし７．
ＯＫ像保持つつ行った。通気は空気（０，５ＷＭ）だけ
の場合および空気（０，３ＶＶＭ　）と酸素（０，２Ｖ
ＶＭ　）の混合ガスの場合で行った。後者の場合は乳酸
の生成が２０ダ／αを超えないように通気する酸素量を
コントロールして夫々培養した。

培養３６時間目からは培養液中のグルコース濃度が１〜
３１１７ｄａの範囲にコントａ−ルされるように７ＯＮ
／ｄ＃のグルコース溶液を連続的に７４−ドしながら９
６時間まで培養を続けた。

その結果生成したＬ−アルギニン量は第５表に示す通り
であった。

第　　５　　表 実施例５ 第６表の組成の種母培地を５０〇−容の振盪フラスコに
５０ｄ宛分注し、１２０℃ｔζて５分間加熱滅菌した後
グレピパクテリクム・ラクトフェルメンタムＦＥＲＭ−
Ｐ　１８４４　（ＡＪ　３４３２）を接種し、３１．５
℃で２０時間振盪培養を行い種培養液を得た。一方、２
８５−のＬ−フェニルアラニン生産用培地を１．０！容
のジャー７アーメンター２基に張り込み１２０℃で１０
分間滅菌し、これに上記種培養液を夫々１５−宛接種し
、アンモニアにてｐＨｔ−６，５〜７．５にコントロー
ルしつつ３１．５℃で、回転数１＃０００　ｒｐｍで通
気は空気（０，３ＶＶＭ　）だけの場合および空気（０
，２５ＶＶＭ　）と酸素（０，０５ＶＶＭ）の混合ガス
の場合について行った。後者については乳酸の生成がｚ
ｏｍ９／ｄｇを超えないように通気する酸素量をコント
ロールしてそれぞれ１２０時間培養した。

第６表培地組成 培養液中のＬ−フェニルアラニン生成量は第７表に示す
通りであった。

第　　７　　表 実施例６ グ）ｖ　コース５７７　／　ｄｌ　、　（ＮＨ４）２８
０４　０．２１／ｄｌ　ｓ尿素０．２１１／ｄｌ、　Ｋ
Ｈ２ＰＯ４０，１５１１／ｄｉ。

ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，０４、Ｓｌ　／ｄｇ、　Ｆ’
＠ＳＯ４”７Ｈ２０１勢省、サイアミ７−ＨＣｌ　　１
００　Ａｌｌ／ｌ　、ヒオｆ７３００μｌ／！、大豆蛋
白酸加水分解液全窒素として１４０ダ／ｄｔｔ−含む種
母培地を−７，０に調節し、（−の５０−を５００ｄ容
肩付フラスコに入ｔＬ加熱殺菌した。コリネバクテリウ
ム・グルタミクムＦＥＲＭ−Ｐ　５８３５　（ＡＪ　１
１６５４）およびエセリヒア・コリル腹−Ｐ　４９００
　（ＡＪ　１１３３４）　ｔ−夫々接種し、３１．５℃
に保ちつつ、１２時間振盪培養し種母培養液を得た。

一方、グルコース１１１１／ｄｉ、　ＫＨ２ＰＯ４０，
２５１１・／　ｄｊ　−Ｍｇ５ｏ４・７Ｈ２０４０’９
　／　ｄｔ　％　　（Ｎ８４）２８０４１、　ＯＡ’　
／　ｄｊ　ｓ　Ｍｎ８０ａ　”；ｌＨ２Ｏ１Ｑ　／　ａ
　ｓ　　ＦｅＳＯ４’７Ｈ２０１＃　／　ｅｘｔ　％Ｌ
−イソロイ’／　ン４０　Ｉ！９／　ａ　ｓ　ピオチン
５０　ＢＥ／ｄｌ　％サイア　ミ７−ＨＣｌ　５０００
　Ａｌ１７ｄａ　。

大豆蛋白酸加水分解液を全窒素として３２ｒｌＱ／ａを
含むｐＨ６，５に調製した培地の２８５ｓｄを１！容フ
ァーメンタ−に入れ殺菌した。これに上記種母培養液を
それぞれ１５７ずつ接種した。培養は３１．５℃にてア
ンモニアガスにてｐＨ６，５ないし７、０に保持しつつ
、回転数１０００　ｒｐｍで培養を開始した。培養は空
気（ｏ、　ｓ　ｖｖＭ）だけを通気した場合と空気（０
，３Ｖ’ＶＭ　）を酸素（０，２Ｖ’ＶＭ　）を同時に
通気して乳酸の生成が５ｏｍｇｔｌｔｔｔを超えないよ
うに酸素量をコントａ−ルし九場合の２通シについて実
験した。培養１２時間目からは培養液中のグルコース濃
度が２〜４１７ｄｌの範囲にコントｏ−ルされるように
、別に殺菌したグルコース７０．９　／ｄ、　ＫＨ２Ｐ
Ｏ４０，２５Ｎ　／ｄ、　ＭｇＳＯ４−７Ｈ２０４０Ｉ
ＩＩｇ／　ｄｌ　、　　（ＮＨ４）２ＳＯａ　　１．　
ＯＩ／　ｄ４、Ｍｎ　ＢＯａ　ｌＨ２Ｏ１１１１９／　
ｄｉ　％Ｆ＠ＳＯ４４Ｈ２０１９／　ｄｌ、ピオチン５
０μｍ１／ａ　ｓサイアミンＨＣ１５，０００ｆｉｌｌ
／智、Ｌ−インロイシン４０Ｉｎｇ／ｄｔｔ−含む溶液
を連続的にフィードしながら７２時間培養を行った。培
養後に得られたＬ−スレオニンの生成は第８表に示す通
りであった。

第　　８　　表 Ａ；コリネバクテリウム・グルタミクム　ＡＪ　１１６
５４Ｂ；エセリヒア・コリ、ＡＪ　　１１３３４実施例
７ グルコース２．０．９　／ｄｌ　、　ＫＨ２ＰＯ４０，
１５１／ｄｔ　。

Ｍｇ８０４・７８２０　０．０４　ｌｉｄ、　ＦｅＳＯ
４・７Ｈ２００，００１１／　ｄｌ　％ＭｎＳＯ４−７
ｎ２ｏ　　ｏ、　００１　Ｊ’　／　Ｊ　ｘ尿素０６２
Ｉ／〃、大豆蛋白酸加水分解液を全窒素として２０　ｏ
ｍｙ／ｄａ、サイアミ７３０１１１／’ｄｌ　％ビオチ
ン２０　ｔｔｌ々、フマール酸０．！Ｍｌ／ｄｊを含む
種母培地をＰＪ（８，０に調節し、そｏｓｏ−を５ｏｏ
−容肩付７ラスコに入れ、加熱殺菌した。これに菌株ブ
レビバクテリウム・フラバムＦＥＲＭ−Ｐ　８０５　（
ＡＪ３２７１　）をそれぞれ接種し、３１．５℃に保ち
つつ、１８時間振盪培養し九。

一方、グルコースｌ　３１／ｄｉ、　　ＫＨ２ＰＯ４０
，１，５１／ｄｉ　、　Ｍｇ８０４−７Ｈ２００，０４
＃　／ａ　５ＦｅＳＯ４’７Ｈ２００、００１１／　ａ
　１Ｍｎ８０ａ　・４Ｈ２００，００１１１／　ｄｇ　
１硫安１．０　ｙ　／　ａ　ｓ大豆蛋白酸加水分解液を
全窒素として２５ダ／　ａ　ｓサイアミン・ＨＯ２３０
０μｍ１／ｄｌ　。

ピオチンＳ、　ＯμＮ／ｄｔを含み、ｐＨ７，２に調節
した培地の２８５ｄｔ−ＬＡ容ファーメンタ−に入れ、
殺菌した。これに上記種母培地をそれぞれ１５ｒＲ１ず
つ接種した。培養は３１．５℃、回転数１１００Ｏｒｐ
でアンモニアガスにてｐＨ７，３〜７．５に保持しつつ
行った。通気は空気（ｏ、ｓ　ｖｖＭ）だけの場合と空
気（Ｑ、　４　ＶＶＭ　）と酸素（０，Ｉ　ＶＶＭ　）
の混合がスを用いて、乳酸の生成が５１１９７ｄｇ’ｊ
”超えないように通気する酸素量をコントロールする方
法の２通９について実施した。培養３６時間目からは培
養液中のグルコース濃度が１〜３１７ｄｔの範囲にコン
トロールされるように７ｏ１／ｄｔグルコース溶液を連
続的にフィードしながら７２時間まで培養を続けた。生
成したＬ−イソロイシン量は第９表に示す通りであった
。

第　　９　　表 実施例８ 第１０表の組成の種母培地を５００４容の！盪フラスコ
に５０−充分注し１２０℃、２０分間カロ熱滅菌した後
、菌株プレピノくクテリウム・フラノ（ムＦ’ｇＲＭ−
Ｐ　２３１６　（ＡＪ　３６２０）　１に接種し、３１
．５℃で、１６時間振盪培養を行い、種培養液を得た。

一方、２８５−のＬ−ヒスチジン生産用培地ｔ−１，０
−ｇ容のジャーファーメンタ−２基に張り込み１２０℃
で、３０分間滅菌し、これに上記種培養液を各々Ｌ５ｄ
ｆつ接種し、アンモニアにてｐＨｔ−７，０〜７゜５に
コントロールしつつ３１．５℃で回転１ｉ１Ｊ）００ｒ
ｐｍで培養した。なお、通気は、空気（Ｑ、５　ＶＶＭ
　）だけの場合および空気（０，４ｖｖＭ）と酸素（０
，ＩＶＶＭ）の混合ガスの場合の２通妙について行った
Ｏなお酸素との混合がスの場合は乳酸の生成が５０ｔｎ
ｇ　／　ｄｔを超えないように通気する酸素１ｔｔ−コ
ントロールした。７２時間培養後生成したＬ−ヒスチジ
ンは第１１表に示す通りであった。

第１０表培地組成 第　　１１　　表 実施例９ 第１２表の組成の種母培地を５００−容の振盪７ラス；
に５０−充分注し、１１５℃、１５分加熱滅菌した後、
ブレビバクテリウム・７ラバムＦＩＲＭ−Ｐ　５３３２
　（ＡＪ　１１５１２）　　を接種し、３１．５℃で１
２時間振盪培養を行い、種培養液を得世。一方２８５−
のＬ−プロリン生産培地を１．０１容のジャー７アーメ
ンター２基に張り込み１１５℃、１５分間滅菌し、これ
に上記種培養液を各々１５ｍｔｆつ接種し、アンモニア
にてｐ）（’ｉ　６．５　カラ７、０にコントロールし
つつ３１．５℃で回転数１，０００ｒｐｍで通気は空気
（０，５ＶＶＭ　）だけの場合および空気（０，４ＶＶ
Ｍ　）と酸素（０，１ＶＶＭ　）の混合ガスの場合は乳
酸の生成が５０１Ｑ／ｄｔｔ−超−えないように通気す
る酸素の量をコントロールして、夫々７２時間培養した
。

第１２表培地組成 培養液中のＬ−プロリン生成量は第１３表に示す通りで
あった。

第　　１３　　表 実施例１０ グルコース３１／ｄｌ％ＫＨ２ＰＯ４０，１１１／ｄｌ
。

ＭｇＳＯ４−７１（２００，０４１／ｄｌ、　　Ｆｅ２
Ｏ２−７Ｈ２０１，０ｙｈＨｔ。

ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０１，ｏ　ｍｙ　／　ｃｒｔ　、尿
素０．３１　／　ｔｔｔ　、大豆蛋白酸加水分解液を全
窒素として６０１９／ｄｔ、サイアミン・塩酸塩２０７
７ｄｌ、ピオチンｌγ／ｄｔ１Ｌ−メチオニンｌＯ＃９
／ｄｔを含む種母培地を−６，５に調節し、その５０−
を５００−容肩付フラスコｌｌＣ入し加熱殺菌した。ブ
レビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＦ母圓−Ｐ　
１９４５　（ＡＪ　３４４６）を接種し、３１．５℃に
保ちつつ、１２時間振盪培養した。

一方、グル＝ｒ−ス１４１　／　ｄｌ　％ＫＨ２ＰＯ４
０，１１１／ａ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０４１１／
ｌＵ、　　Ｆ＠ＳＯ４・７Ｈ２０１ダ乙亀Ｍｎ５Ｏａ　
・４）１２０　１　ｍ９　／　ｄｔ１硫安２　ＩＩ／　
ｄｌ　％大豆蛋白酸加水分解液を全窒素として６５ダ／
　ｒｉｇ　、サイアミン−ＨＣｌ　　３０　ｒ／ｄ＋！
ｓ　ピオチｙ　５　ｒ　／ａ、　Ｌ　−メチオニン６０
ＩＩ！ｇ／〃を含むｐＨ７，０に調節した培地の２８５
ＩＩＩｇを１．ｅ容７アーメンターに入れ殺菌した。こ
れに上記種母培地を夫々１５ｄずつ接種した。培養は３
１．５℃、回転数１００　Ｏｒｐｍでアンモニアガスに
てｐ）１６．５ないし７．０に保持しつつ行り九。通気
は空気（０，２ＶＶＭ　）だけの場合およびｑ％（０，
１ｓ　ｖｖｙｘ　）と酸素（０，０５ＹＶＭ　）　（７
）混合ガスの場合は乳酸の生成が２０ダ／ｄを超えない
ように通気する酸累量をコントロールして夫々培養した
。培養２４時間目からは培養液中のグル：＝ｔ−ス濃度
が１〜３ｇ／ｄｔの範囲にコントロールされるように、
７０ｇ／ｄｔのグルコース溶液又は７０９／ｄｌグ、Ｉ
Ｉ／　コ−ス＋　２０　ｍ９　／　ｄｌ　ｌ−メチオニ
ンの混合溶液を連続的にフィードしながら、７２時間ま
で培養を続けた。その結果、生成したし一バリン量は第
１４表に示す通りであっ友。

第　　１４　　　表 実施例１１ 第１５表の組成の種母培地を５００−容の振盪フラスコ
に５０＋ｄ宛分注し、１１０℃にて５分間加熱、滅菌し
た後コリネバクテリウム・グリシノフィラムＦＩＲＭ−
Ｐ　１６８８　（ＡＪ　３４１４）　ｔ−接、橿し、３
１．５℃で２０時間振盪培養を行い、種培養液を得た。

一方２８５−のＬ−セリン生産用培地を１．０！容のジ
ャーファーメンタ−２基に張り込み、１１０℃で１０分
間滅菌し、これに上記種培養液を夫々１５−宛接種しア
ンモニアにてＰＨを６．５〜７．０にコントロールしつ
つ３１．５℃でＯｏ転数ｔ、ｏ　ｏ　。

ｒｐｍで通気は空気（ｏ、　ｓ　ｖｖＭ）だけの場合お
よび空気（０，４ＶＶＭ　）と酸素（０，Ｉ　ＶＶＭ　
）　ノ混合ｙｘの２通りＫついて行った。空気と酸素の
混合ガスの場合は乳酸の生成が５０１Ｒ９／ｄｔを超え
ないように通気する酸素ｔｔ−コントロールして夫々４
日間培養した。生成したＬ−セリンは第１６表の通りで
あった。

第１５表培地組成 第　　１６　　表 実施例１２ グルコース３１１／ｄｌ、　ＫＨ２ＰＯ４０，１１／ｄ
ｔ。

ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，０４１／ｄｉ、　　？６８０
４−７Ｈ２００，００１ｐ　／ａ、　ＭｎＳＯ４−４Ｈ
２００，Ｏｏ　ｌＩ／１ｉｎｓ尿素０．３ｊ’／ｄＬ大
豆蛋白酸大豆蛋白液加水窒素として’　Ｏ１１ｇ／　ａ
　％　ｔイアミｙ　−Ｈｃｔ　　ａ　ｏ　ｐｉ／ｃｍ　
、　ビオチン２０μｍ１／ｄｌを含む種母培地を−６，
０に調節し、その５０ｄｔ−５００ｄ容肩付フラスコに
入れ、加熱殺菌した。

これに菌株ブレビバクテリウム番ラクトフェルメンタム
ＦＥＲＮ−Ｐ　５９３６　（ＡＪ　１１６７８）を接種
し、３１．５℃に保ちつつ、１３時間振盪培養した。

一方、グル：ｒ−８１８Ｎ　／ｄｔ、　ＫＨ２ＰＯ４ｏ
、ｔｙ／ｄｔ％ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０４１１／ｄ
ｌ、ＦｅＳＯ４’７Ｈ２００，００１ｊ／／ｄｔ％Ｍｎ
ＳＯ４−７８２０　０．００１１７ｄｌ、□硫安３．０
ｙ／ａｓ大豆蛋白大豆蛋白酸液水全窒素として６５ｒｖ
／ｄｌ、サイアミｙ　−ＨＣＬ　　２０　ａｌ／ｄｌ　
、ビオ□　　チン１０μｇ、にｆｆ、Ｌ−アルギニン７
０η／ｄｊｌ＆むｐＨ７，０に調節した培地の２８５−
をｌ！容ファーメンタ−に入れ殺菌した。これに上記種
母培地をそれぞれ１５−ずつを接種した。培養は３１．
５℃にてアンモニアがスにてｐＨ６，５ないし７．０に
保持しつつ攪拌数１．０００　ｒｐｍにて残グルコース
が０、！Ｍ’／ｄ６以下になる迄行った。なお通気は空
気（０，５ＶＶＭ　）だけの場合および空気（０，３Ｖ
ＶＭ　）と酸素（０，２Ｖ’ＶＭ　）の混合ガスの場合
の２通りについて行った。なお酸素との混合ガスの場合
は乳酸の生成が５０１Ｑ／ｄｊｉ超えないように通気す
る酸素量をコントロールした。７２時間培養後生成した
Ｌ−オルニチンは第１７表に示す通りであった。

第　　１７　　表 実施例１３ グ＃　コース３　＃　／ｄｔ、　ＫＨ２ＰＯ４０，１＃
　／ｄｌ。

ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０４，９／ｄｌ、Ｆ・ＳＯ４
・７Ｈ２０１，０＃　／　１１ｇ、Ｍｎ５Ｏａ　・４Ｈ
２０１，０”ｆ　／　ｄｌ　ｓ尿素０．３１／ｄｌ　。

大豆蛋白酸加水分解液を全窒素として６０　Ｗ　／　ｄ
ｌ　ｓサイアミｙ　・ＨＣｌ　　３０　ｒ　／　ｄｌ　
ｓ　ビオチン２０　ｒ／ｄａを含む種母培地を−６，０
に調節し、その５０−を５００ｍ容肩付フラスコに入れ
、加熱殺菌した。

コリネバクテリウム・グルタミクムＦＥＲｊ／１−Ｐ　
５６８（ＡＪ　１１５８８）を接種し、３１．５℃に保
ちつつ、１３時間振盪培養した。

一方、グルコース１３Ｆ／ｌｆｊ％ＫＨ，ＰＯ４０，Ｉ
１１／ｄｔ。

ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０４１／　ｄｉ　ｓ　　Ｆｅ
２Ｏ２・７Ｈ２０１，０１１１／ｄｇ、ＭｎＳＯ４−４
Ｈ２０１，Ｏ＃　／　ｄｌ　、硫安３．０ＪＩ／ｄｔ、
大豆蛋白酸加水分解液を全窒素として６５　ＩＱ　／　
ｄｔ　ｓサイアミｙ　−ＨＣＬ　　２０　ｒ／ｄａ、ピ
オチン１０　ｒ　／　ｄｊ　ｓＬ−アルギニン７０呼／
ｄｔを含む−７，０に調節した培地の２８５ａｄを１１
容ファーメンタ−に入れ殺菌した。これに上記種母培地
をそれぞれ１５−ずつ接種した。培養は３１．５℃、回
転数１１００ＯｒｐでアンモニアガスにてｐＪ（６，５
ないし７．　ＯＫ保持しつつ行った。通気は空気（０，
５ＶＶＭ　）だけの場合と空気（０，４ＶＶＭ　）と酸
素（０゜Ｉ　ＶＶＭ　）　ノ混合ガスを用いて、乳酸の
生成が５０９／ｄを超えないように通気する酸素量をコ
ントロールする方法の２通りについて実施した。培養２
４時間目からは培養液中のグルコース濃度が１１／ｄｌ
〜３１／ｄｌの範囲に；ントａ−ルされるように７゜１
１／ｄｔ／ルコース溶液を連続的にフィードしながら７
２時間まで培養を続けた。生成したＬ−シトルリン量は
第１８表に示す通りであった。

第　　１８　　表 実施例１４ 第１９表の組成の種母培地を５００ｍ容の振盪フラスコ
に５０−充分注し、１１０℃にて５分間加熱・滅直し死
後、菌株コリネバクテリウム・グルタミクムＦＥＲＭ−
Ｐ　５８３６　（ＡＪ　１１６５５）　（Ｐｈ・−１２
−ＴＡ’、　ＳＭ’　　）　ｔ”接１’ｌ　Ｌ　３１．
５℃で１２時間ｍ盪培養を行い種培養液を得た。

一方、２８５−のＬ−チロシン生産用培地を１．０１容
のジャーファーメンタ−２基に張り込み、１１０℃で１
０分間滅菌し、これに上記種培養液全夫々１５−宛接種
し、アンモニアにてｐＨｔ７．０〜７．５にコントロー
ルしつつ３１．５℃で回転数１＊０００　ｒｐｍにて、
通気は空気（０，５ＶＶＭ　）だけの場合および空気（
０，４ＶＶＭ　）と酸素（０，Ｉ　ＶＶＭ　）の混合が
スの２通りについて行った。空気と酸素の混合ガスの場
合は乳酸の生成が２０ダ／ｄｌｔ−超えないように通気
する酸素量をコントロールしてそれぞれ９６時間培養し
た。

第１９表培地組成 培養液中のＬ−チロシン蓄積量は第２０表に示す通りで
あった。

第　　２０　　表 実施例１５ グルコ−ス３１　／　ａ　、　ＫＨ２ＰＯ４０，０５１
／ａ。

ＲＮＡ　　Ｏ，２５１１／ｄｉ、大豆蛋白酸加水分解液
を全窒素として７０ｆＲ９７ｄｔを含む種母培地をｐＨ
７，０に調節し、その５０ｄを５００−容肩付フラスコ
に入れ１２０℃、１０分間加熱殺菌した。これにバチル
ム・ズブチリスＦＥＲＭ−Ｐ　５２８６　（ＡＪ　１１
４８３）を接種し、３ｔ、５℃にて１６時間振盪培養し
た。

一方グルコｘ　２５　ｇ　／　ｄｌ　１ＫＨ２ＰＯ４０
，２１１／ｄｉＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，３１／ｄ１％
　Ｄ　Ｌ　−メチオ＝ｙ　ｉ　　ｓ　。

ｍｙ＋　／　ｒｉｇ　、脱脂大豆酸分解液を全窒素とし
て１００ダ／ｄｔを含むｐＨ６，５に調節した培地の２
８５−を１形容ファーメンタ−に入れ１２０℃、１０分
間殺直した。これに上、記種母培養液を夫々１５ｄずつ
接種した。培地は３５℃にてｐ）１６．５〜７．０にア
ンモニアガスにて保持しつつ、攪拌数ｉ、ｏｏ。

ｒｐｍにて９６時間培養した。通気は空気（０，５ＶＶ
Ｍ　）だけの場合および空気（０，４ＶＶＭ　）と酸素
（０，ｌ　ＶＶＭ　）の混合ガスの場合の２通りについ
て行った。なお酸素との混合ガスによる通気の場合は乳
酸の生成が１０η／ｄｌ超先ないように通気する酸素量
をコントロールした。

培養後生成したＬ　−）　Ｕブトファンは第２１表に示
す通りであった。

第　　２１　　表 実施例１６ グルコース３　ｌＩ／ｄｉ、　ＫＨ２ＰＯ４０，１＆／
ｄＬ尿素０．３　＃　／　ｄａ　１Ｍｇ８０４・ｒＨ２
ｏ　Ｏ，０４ｙ／ｒｉｇ。

Ｐｅ５ｏ４−７ＥＩ２０　　ＬＩｎ９／ｄｉ、　ＭｎＳ
Ｏ４４Ｈ２０ｔ４／ｄｔ。

ＤＬ−メチオニｙ４ｏｍｙ／ｄｌ−ビオチｙＬＯｔｔｌ
／１３、サイアミン・塩酸塩２００μｂ句１大豆蛋白酸
加水分解液を全窒素として５０η／ａを含む種母培地を
ｐＨ６に調節し、その５０ｍを５００−容肩付フラスコ
に入れ、１２０℃、１０分間加熱殺菌した。これにブレ
ビバクテリウム・ラクト７アーメンタムＦ’ｌＲＭ−Ｐ
　Ｌ７６９　（ＡＪ　３４２７）　ｔ−接種し、３１．
５℃にて２０時間振盪培養した。

一方、グルコース２５．９　／ｄｌ、　ＫＨ２ＰＯ４０
，１１／ｄｔ　。

（ＮＨ４）２Ｓｏ４１．　ｏ　ｉ　／ｌｔｔ　、　　Ｍ
ｇＳＯ４・７Ｈ２００，０４１／ｄｉ　。

Ｆｅ３Ｏ３”７Ｈ２０１ｑ／ｄｌ、ＭｎＳＯ４−／ｆ（
２ｏ　　ｔ　ｍｙ　／　ａ　。

ＤＬ−メチオニン１００ｍ９／ｄｌｓ　ビオチン５０μ
ｍ１／４３　、サイアミン塩酸塩３００μｍ１／１３．
脱脂大豆酸分解液５０η／ｄｔを含むｐＨ７，０に調節
した培地の２８５ｄｔ−１，１３容ファーメンタ−に入
れ１２０Ｃ１１０分間殺菌した。これに上記種母培養液
を夫々１５−づつ接種した。培地は３１．５℃にて声７
．０〜７．５にアンモニアがスにて保持し９つ、攪拌数
１＃００．Ｏｒｐｍにて７２時間培養した。通気は空気
（０，３ＶＶＭ　）だけの場合オニび空気（Ｑ、２５Ｖ
ＶＭ）と酸素（０，０５ＶＶＭ　）　ノ混合Ｗ　ス’）
　ＡＩ　合’）２通りＫついて行った。なお酸素との混
合ガスによる通気の場合は乳酸の生成が５０ダ／ｄｔを
超えないように通気する酸素量をコントロールした。

培養後生成したＬ−ロイシンは第２２表に示す通りであ
った。

第　　２２　　表

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. Ｌ−アミノ酸生産菌をＬ−アミノ酸生産液体培地中に接
   種、培養し、該培養液中の乳酸が少なくとも１０ｍｇ／
   ｄｌに達した時期から、該培養液中の乳酸の量が１０〜
   ２００ｍｇ／ｄｌになるように、通常の空気よりも酸素
   濃度を高めた酸素を含む気体を培地に供給しながら培養
   することを特徴とする発酵法によるＬ−アミノ酸の製造
   法。