JPS61165326A - 過酸化脂質形成抑制剤、リソゾーム放出・活性酸素産生抑制剤及びヒスタミン遊離抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、特定のイソキノリン誘導体またはその塩を有
効成分とする過酸化脂質形成抑制剤、リソシーム放出・
活性酸素産生抑制剤及び／又はヒスタミン遊離抑制剤に
関する。

（従来の技術及び発明の目的） （１）過酸化脂質の形成抑制 細胞膜は脂質の二重層により構成されているが、この脂
質が過酸化を受けることにより、膜の構造に変化が生じ
細胞膜の腕弱さが増加することは、よく知られた事軛で
ある。従って過酸化脂質の形成を抑制する薬物は、膜の
性状を正常に保ち外部刺激に対して細胞膜の安定性を保
持するのに有効であると考えられる。たとえば、動脈硬
化の発症因子としであるいは動脈硬化性疾患の引金因子
としての血清過酸化脂質の動向が最近注目されている。

これは過酸化脂質に関する基礎的研究が進歩すると共に
血清中の過酸化脂質が微量定量出来る様になり、動脈硬
化に関連した各種の病態や実験的動脈硬化症において過
酸化脂質の動向と１つの臨床的ないし実験的指標として
追うことが出来る様になってきたからである（最新医学
１．７４巻、ｔ、ｓｑ頁、秦葭哉）。

過酸イヒ脂質が動脈硬化症の病理発生や進展に関与する
ことを推測させる事実は、臨床統計、症例報告、血小板
機能の解析、実験生化学および病理的観察、動物実験な
どの分野から集積してきている。

その薬理作用機構としては、血小板の凝集や粘着の促進
が過酸化脂質により促進されることや、過酸化脂質から
のラジカル移動によって生じる異常低比重リポタンパク
（変性ＬＤＩ、）がマクロファージに貧食されやすく、
その結果泡沫細胞の形成を促進し、動脈壁に１、ＤＬ由
来のコレステロール蓄積が生じることが明らかにされて
おり、又最近、過酸化脂質による内皮細胞のタンパク変
性が内皮細胞の損傷、壊死、脱落を生ぜしめることが明
らかにされている（動脈硬化、ｊ巻、コｑｓ頁、／９１
コ年、泉田秀輝）。

これらの事実より、過酸化脂質形成の抑制作用を有する
化合物は、たとえば血管の硬化を抑制する抗動脈硬化剤
として作用することが示唆される。

また、過酸化脂質は細胞内に形成されて細胞膜破壊を引
き起こしたシ１組織に急性の障害を与える他に、細胞か
ら放出された過酸化脂質が大量で血清過酸化脂質の濃度
を上昇させ、血清過酸化脂質血症が末梢の諸組織に障害
を引き起こす場合や血小板におけるプロスタプランディ
ン生成を介しての血小板の凝集や血管の電線をきたすと
いった作用が考えられる。例えば血小板凝集促進は血栓
症を誘起し、リソシーム膜の破壊は炎症を引き起こし、
赤血球膜障害は溶血を引き起こす。肺胞膜の障害は肺気
腫を誘起する可能性が考えられる。

従って強い過酸化脂質形成抑制作用を示す化合物は、上
記記載の疾患の予防又は治療に有効であると考えられる
。

てのプロスタグランディン説に対する疑問が最近提出さ
れ、新しく活性酸素説が出てきた。

多形核白血球やマクロファージは貧食能を有し異物の侵
入に対して異物の消化や細菌の殺菌等を行う細胞とされ
ているが、多形核白血球やマクロファージが細菌や抗原
抗体複合体と反応すると活性酸素Ｏｒまたは・ＯＨを出
し。

直接組織傷害を与えたり、リソシーム酸素の放出をもた
らす。

炎症と白血球の放出するりソゾーム酸素や０■　　の間
の密接な関係を報告する論文は多い。

例えば実験動物炎症モデルにおいて炎症巣での活性酸素
の確認や、８０Ｄ（スーパオキシドディスムターゼ）に
よる動物のカラゲニン浮腫、アジュバント関節炎、ラッ
トの逆アルサス反応の抑制が認められている。人間にお
いても８０Ｄは代表的な慢性炎症であるリウマチ患者に
対し局所投与で有効であることが報告されている（最新
医学、３５巻７号、／Ｊ’ｌＪ頁〜／３弘ｆ頁、塩川優
−ら）。

又現在、リソシームと関係あると考えられている慢性炎
症としては、慢性関節リウマチ。

腎炎、偽似痛風などが考えられる。いずれの疾患も病的
にリソシームの放出が生じる結果痛みを伴う炎症性症状
を呈する疾患であシ、持続的なりソゾームの細胞外放出
がある時、慢性型炎症を呈すると考えられる。この時同
時に多形核白血球によって産生されるＯｌ　　を含む活
性酸素によっても組織損傷が生じ炎症巣拡大及び炎症の
慢性化の原因となりうると考えられる。

これらリソシームの放出や活性Ｉ！累の産生を抑制する
ことは、延いては炎症の慢性化の大通の抑制につながる
と推察される。

ＯｉＤ　　ヒスタミン遊離抑制 肥満細胞は結合繊内に広く分布する塩基性色素にメタク
ロマジー陽性を示す好塩基性顆粒細胞であシ、アレルギ
ー反応のメディエータ タであるヒスタミンやロイＩトリエンを放出することが
知られている。結合織が生体の支持組織としての機能の
みから把握されていた時代から、現在は細胞栄養の供給
、細胞代謝の排出、細胞環境の保全、炎症の場となるこ
とによる外因性侵襲に対する細胞群の保護等細胞諸活動
を支配する場として捕えられる様に変化して来た。肥満
細胞自体も最近の細胞生物学、生化学の進歩により程々
の生理活動を負う重要な細胞として再認識されて来てい
る（代謝、／Ｊ巻ｊ号、肥満細胞特集、中白書店）。

たとえば、近年、潰瘍性大腸炎の病因をめぐって新しい
知見が集積され、重症の主症状である大腸粘膜の持続性
炎症の発現には、腸管からの細菌等の抗原侵入（対する
防御機構の破綻と大腸粘膜に対する自己免疫の成立が基
盤となっていると考えられている。重症には、即時型ア
レルギーと遅延型アレルギーの双方が関与している。急
性期には、大腸粘膜における即時型アレルギーの成立が
病態の前景に立っている。即ちこの時期には、血漿ヒス
タミン高値、大腸粘膜好酸球増多、肥満細胞減少等が認
められる。この即時型アレルギーに対応して、血管作動
物質の誘発、腸管の微小循環障害が生じ、腸粘膜の透過
性光通、筋レン縮の増強による急性期の諸症状が発現す
る。肥満細胞の脱顆粒を抑制する、即ちヒスタミン遊離
抑制剤であるクロモグリケートが、潰瘍性大腸炎に有効
であることは既に報告されている。すなわち、肥満細胞
からのヒスタミン遊離の強い抑制作用を示す化合物は潰
瘍性大腸炎の治療に非常に有効であることが期待される
。

ヒスタミンは急性炎症の初期段階のメディエータ−とし
てだけでなく炎症の慢性化の調節因子として重要な働き
をしていることが最近知られてきている。例えば、線維
芽細胞にはヒスタミンに対する受容体が存在し、ヒスタ
ミンによってコラーゲンの産生が促進されるとされてい
る。又、線維組織内に肥満細胞が増加してくる事実も確
認されている。従って、肥満細胞に作用しヒスタミンの
遊離を抑制することは、炎症の慢性化が進んでいる組織
において線維化の先進、即ちコラーゲン産生の促進を間
接的に抑制することになると考えられる。例えば線維の
異常増殖を伴う疾病。

肺線維症、術後のケロイド処理、外傷による線維の異常
増殖等の抑制に有用である。

本発明者らは、このような抑制作用を有する化合物を見
出すべく種々、検討した結果、本発明に到達した。

すなわち１本発明の要旨は、一般式（Ｉ）で示されるイ
ソキノリン誘導体またはその塩ｎ宣゛ 〔式中、Ｙは０又は８を示し、Ｒ１、Ｒ１、Ｒ１、Ｒ４
、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ″及びＲｏは水素原子、ハロゲン原子
、アルキル基、水酸基、アルコキシ基、ハロゲン置換ア
ルキル基、チオアルコキシ基、アミノ基又はニトロ基を
示し、炉は水素原子、アルキル基、水酸基又はアルコキ
シ基を示す。また、Ｒ１−１４又はＲ＠〜Ｒ＠は、とな
り合うコ個がアルキレン基〉ＣＨ，）ｆｆｌ（、！　ｊ
もしくはり）又はアルキレンジオキシ基り：ＩＣＨ１）
ｎ（！Ｌ−／　、コもし〈はＪ）によシ環を形成しても
よい。〕を有有効分とする（１）過酸化脂質形成抑制剤
、　（ＩＩ）リソシーム放出・活性酸素産生抑制剤、及
び／又は（１１）ヒスタミン遊離抑制剤にある。

（発明の構成） 以下、本発明の詳細な説明する。

上記一般式（■）においてアルキル基又はノ１０ゲン置
換アルキル基のアルキル基としては１通常炭素数ｌ〜Ｊ
のアルキル基が挙げられ、特にメチル基、エチル基が好
ましい。

また、アルコキシ基、チオアルコキシ基としては、通常
炭素ａ／−３が挙げられる。

さらに、ハロゲン原子としては１通常、臭素、塩素が挙
げられ、ハロゲン置換アルキル基におけるハロゲンとし
ては、通常、フッ素、臭素。

塩素が挙げられる。

この一般式（Ｉ）で示されるイソキノリン誘導体は、た
とえば次のような方法により得られる。

すなわち、一般式（１）で示される化合物中、Ｂ６ｔた
はＲ９がノ・ロゲンまたはニド四基の場合、一般式（１
）： したとおりである、、）で表わされる化合物と一般式（
Ｉ）： 番　　　Ｐ （式中、Ｒ・〜Ｒｔ及びＹは既に定義したとおりである
が、Ｂ：及びＲ：の少なくとも一つはハロゲンまたはニ
トロ基を示す。）で表わされるフタリド類との縮合反応
化よシ得られ、Ｒ＃または！ Ｒ１がアミノ基の場合は、得られた縮合体のニトロ基を
アミノ基に還元する事により得られる。

縮合反応は通常、メタノール、エタノールなどのアルコ
ール溶媒中、ダＯ〜／　００Ｃの温度にｌ−１０時間加
熱する事忙より行なわれる。

ニトロ基の還元は通常のニトロ基の還元剤、たとえば塩
化第−スズ、スズー塩醗、鉄−塩酸等を用いるかまたは
接触水添等により行なわれる。

一般式（１）で表わされる化合物は一部公知であり、Ｊ
ａａｔ＋ｓｓ　Ｌｌ＠ｂ１ｇ’ｍ　Ａ＋５ｎａｌｅｎ　
ｄ＠ｒ　Ｃｈｓｍｌｅ　９　ｔ　。

ＩＩｃ＜ｔｔｂｏ）などに示される方法に従って、一般
式（■）： （式中、Ｒ：　％−Ｒ；及びＹは既に定義したとおりで
あるが、Ｒ；またはＲｚは水素原子を示す。）で表わさ
れるフタリド類をニトロ化またはハロゲン化する事によ
り得られる。

一般式（Ｉｆ）で表わされる置換ジヒドロイソキノリン
のアンモニウム塩は一部公知であす、一般式（Ｖ）： （式中、Ｒ１−叶は既に定義したとおυである。）で表
わされる置換ジヒドロイソキノリンにＲ；ｘ（畔は既に
定義したとおシである。）で表わされる化合物を常法に
従って反応させる事によシ得られる。

一般式（Ｖ）の化合物は、たとえば、　Ｏｒｇａｎｌｅ
Ｒ＠ａｃｔｉ＠ｎｓ　、　ＶＩ　、　７１１　（／　９
　！　／　）　　の方法により合成できる。

さらに、一般式（１）の化合物中、Ｒ′とＲ７が共にハ
ロゲン、ニトロまたはアミノ基でない場（式中、輻〜社
、Ｒ二〜ｉｊ及びＹは既に定義したとおりである。）で
示される化合物を還元する事によシ得る（ＲＧ−Ｈ）か
、または得られた一般式（１）において畔が水素原子の
化合物をＨ−アルキル化、Ｎ−ヒドロキシル化またはＮ
−ヒドロキシル体をＯ−アルキル化すること等により得
られる。

一般式（Ｖｌ）の化合物の還元は１通常、パラジウム、
酸化臼−金、ラネーニッケルなどを触媒とする接触水添
またはメタノール、エタノールなどの溶媒中、水素化ホ
ウ素ナトリウムを用いて行なわれる。Ｎ−アルキル化は
通常、ノ・ロゲン化アルキルを用いるか、特にＮ−メチ
ル化ではホルマリン−ギ酸などを用いて行なわれる。Ｎ
−ヒドロキシル化は退散化水素などの酸化剤を用いて行
なう事ができる。Ｎ−ヒドロキシル体のＯ−アルキル化
は、ハロゲン化アルキルなどを用いて行なう事ができる
。

一般式（Ｖｌ）の化合物は通常、一般式（■）：Ｒ番 （式中、Ｒシ〜Ｒ’ｊ、Ｒ：〜Ｒ；及びＹは既に定義し
たとおシである。）で表わされる化合物をＪｏｕｒｎａ
ｌ　ｆｉｒ　ｐｒｍｋｔｉａｓｈ＠Ｃｈｓｍｉ＊　、　
　Ｊ　／　Ｊ　、　９コＪ（ｔ　ｑ、、りｌ）に記載の
方法などに従って縮合する事により得られる。縮合反応
は一般に縮合剤としてオキシ塩化リン、丘陵化リンなど
を用い、無溶媒ま九はベンゼン、トルエン、塩化メチレ
ン、クロロホルムなどの溶媒中、加熱する事によシ行な
われる。

一般式（■）の化合物は通常一般式（■）：（式中、崎
〜ＲＩｔは既に定義したとおりである。）で表わされる
化合物と一般式（■）： （式中、Ｒ；〜Ｒよ及びＹは既に定義したとおシである
。）で表わされるカルボン酸を縮合する事により得られ
る。縮合反応は通常の縮合剤たとえばジシクロ−へキシ
ルカルボジイミド、クロロ炭酸アルキルなどを用いるか
、カルボン酸を酸クロリドにする事により行なわれる。

（［）の化合物はたとえばＪａｔ＋ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ
ｈｓｍｌａｍｌＳｏｃｉ＠ｔｙ、／Ｊ７　、ｔｌＩＯ（
／９コり４Ｃ記載の方法などに従って合成される。

上記方法によシ得られ１本発明において用いられるイソ
キノリン誘導体を以下に例示する。

コータチル−６−メトキ ニーメチルー６Ｉｔ、ｇ−ト ロイソキノリン コータチル−６，フーメチ ヒドロイソキノリン ニーメチルー６．７−エチ ヒドロイソキノリン ニーメチルー１−（ダ＋’＋ ニーヒドロキクール、７− コ、Ａ、？　−）リメトキシー コータチル−４，フージメ ニーメチルー６、クージメ コータチル−６，フージメ キノリン ニーメチルー６．７−ジメ ユーメチルー６．７−ジメ コーメチル−６−ヒドロ また、本発明において用いられる上記イソキノリン誘導
体の塩としては、薬理的に許容される塩、たとえば塩酸
、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝醗、リン陵等の
無機醗塩、酢酸、クエン酸、フレイ；４１．フマル酸、
コハク酸、乳酸、酒石酸、安息香酸等の有機駿塩などが
挙げられる。

本発明に係る過酸化脂質等の形成抑制剤はいかなる方法
でも投与しうるが、好適には以下のような方法が実施さ
れる。

すなわち皮下注射、静脈内注射、筋肉注射。

腹腔内注射等の非経口投与もまた経口投与も可能である
。

投与量は患者の年令、健康状態、体重、同時処理がある
ならばその種類、処理頻度、所望の効果の性質等てより
決定されるが、一般的に有効成分の１日投与量は！Ｏ〜
コ、ｏｏｏｙｓｇ、特に１００−ｊＯθダが好適であり
、１回あるいは数回に分けて投与（好適には経口投与）
される。

経口投与する場合は錠剤、カプセル剤、粉剤、エリキシ
ル剤等の形態で、また非経口投与の場合は液体あるいは
懸濁等の殺菌し九液状の形態で用いられる。上述の様な
形態で用いられる場合、固体あるいは液体の毒性のない
製剤的担体が組成に含まれ得る。

固体担体の例としては通常のゼラチンタイプのカプセル
が用いられる。また有効成分を補助薬とともにあるいは
それなしに錠剤化、粉末包装される。

これらのカプセル、錠剤、粉末は一般的に３〜９５％、
好ましくはコ！〜ｑｏ％重量の有効成分を含む。

液状担体としては水あるいは石油、ピーナツ油、大豆油
、ミネラル油、ゴマ油等の動植物起原の、または合成の
油等が用いられる。

また、一般に生理食塩水、アキスト四−スあるいは類似
のショ糖溶液、プルピレングリコール、ポリエチレング
リコール等のグリコール類が液状担体として好ましく、
とくに生理食塩水を用いた注射液の場合には通常（７，
ｊ−コｏ　％　ｓ好ましくはｔ　−ｔ　ｏ　４重量の有
効成分を含むようＫする。

経口投与の液剤の場合、ｏ、５−ｔｏ４重量の有効成分
を含む懸濁液あるいはシロップがよい。

この場合の担体としては、香料、シロップ、製剤学的ミ
セル体等が用いられる。

（発明の効果） 本発明において中退酸化脂質形成抑制剤は、細胞膜の安
定性を保持するのに有効であシ、過酸化脂質に関連する
疾病、たとえば動脈硬化症ま九、（ｉＤ！ｊソゾーム放
出・活性酸素産生抑制剤は、その細胞反応性が炎症性細
胞に特異的であり、例えば血液細胞である赤血球、血小
板等に対しては殆ど作用を示さない。

炎症性細胞に対して強い親和性を有し、細胞膜内脂質に
溶は込むことＫよシ、外部刺激に対する炎症性細胞の反
応を抑制し、炎症組織において活性酸素による組織障害
、リソシーム酵素による組織破壊等による炎症の悪化あ
るいは持続による炎症の慢性化を抑制する。ＥＩＯＤは
高分子タンパクであるが故に経口投与が不可能であり、
又、高分子であるため抗原抗体反応誘起の危険性も考え
られ、従って適応範囲が限られてくるが、本則は経口投
与可能であり、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、偽似
隔風、るるいは各種慢性炎症に対して有効であることが
期待される。

さらに％ＧｉＤヒスタミンの遊離抑制剤は肥満細胞に作
用し、ヒスタミンの遊離を強く抑制することから、ヒス
タミンが原因で生じる様々な疾病に対して有効性を示す
ことが期待される。即ち、抗アレルギー剤として有用で
あるばかシでなく、最近ｒＪ＆埋メカニズムの解析が進
み、肥満細胞がその病因に関与していると推察されてい
る疾患、たとえば潰瘍性大腸炎に対しても有効である。

（実施例） 以下、実施例により、さらに本発明の詳細な説明するが
、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に
限定されない。

６．７−メチレンジオキシ−ｔ−メトキシ−ＪＩＩ−ジ
ヒドロイソキノリン（１）弘、Ｑ弘ｆ（／９．７ミリモ
ル）をアセトン１ｊｄＧｃ溶解し、これにヨク化エチル
４．／　ｊ　）　（Ｊ　９４９９モル）を加え、ｉ、ｚ
時間加熱還流する。約ｔｏｃＩｌｃ冷却後析出結晶をＦ
取し、アセトンコ―で洗う。乾燥スルトコ−エチル−６
、クーメチレンジオ−１１’シーＳ−メトキシ−Ｊ、タ
ージヒドロインキノリニウムヨージド１２）　ｊ、ｊ　
ｊ　）が得られた。（収率ｔざ％）エタノールよシ再結
晶するとｍｐ、／ｊ？ｃｆＲ（Ｋｌｌｒ、　ｃＭ−’）
　：　２９１０　、　／４！！　、　／　Ａ／ｊ　。

ｌ参９！、／ＪＩＯ，／Ｊダ０９ ｔｓｏｏ、ｔコ弘Ｑ、／１００゜ ニーエチル−６，クーメチレンジオキシ−ｔ　−メトキ
シ−ｊ、ｌＩ−ジヒドロインキノリニウムヨージド（２
）ダ、コダｆ　（ｔ　／、７ミリモル）Ｉｃ水６σ−を
加え約ｌＳＣに冷却後コ！多水酸化ナトリウム水溶液３
−を加える。塩化メチレン参１７ｄ、コ０ｗｔ１で抽出
し無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮する。残渣Ｋ
　４１．ｊ、ａ　−）リエトキシー？−ニトロフタリド
ｊ、４１　ｆ　（／　／、’１ミリモル）とメタノール
１．２−を加え３時間加熱還流する。

冷却後、メタノールを１．２−加え室温で１時間攪拌す
る。析出した結晶をＰ取しメタノール参−で−１洗６乾
燥するとニーエチルー乙、クーメチレンジオキシ−５−
メトキシ−／　−（Ｉｆ、！、＆−）　＋７１　）　＃
シー７−ニトロー３−フタリジル）−ｉ、ｓ、ｓ、ｕ−
テトラヒドロイソキノリンＪ、ｌＯ？が得られた。（収
率ダｔ％） ニーエチルー＆、７−メテレンジオキシー１−メトキシ
−／　−（４Ｉ、ｊ、Ａ−）リエトキシー７−二トロー
３−７タリジル）−ｌ、コ、Ｊ、ダーテトラヒドロイソ
キノリン（４）　Ｊ、Ｉ　ＯＰ　（ｌりＱミリモ液を加
える。室温でｊ、５時間攪拌後、水１１０−．クロセホ
ルム？Ｏ−を加え、水冷中コ！チ水酸化ナトリウム水溶
液を徐々に加えて水層のｐＨを約ｌｌとする。これにセ
ライト−５ｑｓ。

Ｉｆを加えて７６分間攪拌する。これを亀セライトーｒ
ｕｓ１層を通して濾過し、クロロホルムｊＯ−で１回セ
ライト層を洗い、Ｆ液と洗液を合わせ分液する。クロロ
ホルム層を飽和食塩水ｊＯ−で洗い、無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥する。溶媒を減圧留去し、残渣にメタノール
１０ｙｄ、ｔＳ％水酸化カリウム八〇へを加えてコ時間
加熱還流する。冷却後結晶をＰ取し、メタノ−ルー−で
一回洗う。これをクロロホルム３０−１水ｌ！−に溶解
し濃塩酸を加え水層のｐＨを約１とする。１０分間攪拌
後コｊｃｓ水醗化ナトリウム水溶液にて水層のｐＨを約
ｌ／とじ、分液する。水層をクロロホルム１０−で抽出
し、クロロホルム層を合わせ飽和食塩水ｌ！−を洗浄す
る。無水硫酸マグネシウムで乾燥後溶媒を減圧留去し、
残渣をエタノールから再結晶するとニーエチル−６，ク
ーメチレンジオキシ−ｔ−メトキシ−１−（グ、ｒ、ｂ
　−）リエトキシー７−アミノーＪ−フタリジル）−１
，コ、ｊ、＠　−テトラヒドロイソキノリン（５）ハ９
６？が得られた。（収率ルア％） この化合物の物性を表１のＡｔの化合物として記載した
。

同様にして、表１のＡ／、ｊ、４’及び６の化合物を得
た。

実施例１ イン　ヴイトロ（ｉｎ　ｖｌｔｒｏ　）　　における過
酸化脂質は、ラット肝臓ミクロゾームを用いて簡単に発
生させることが可能であり、この系を用いて化合物の過
酸化脂質形成阻害能を測定することが出来る。ミクロゾ
ームは、２ダ時間絶食させたラットより常法に従って調
製し、最終濃度を／、ｔ−／ｌｑ蛋白／−とし、この系
にＦ＊（ＮＯ３）１　、　Ａ　Ｄ　Ｐ　（アデノシンニ
リン酸）、ＮＡＤＰＨにコチンアミドアデニ／ジヌクレ
オチドフォスフェート）、クルコース６−リン酸。

グルコース６−リン酸脱水累酵素をそれぞれ最終濃度が
コＯＯμ鼠、７　ｍＭ　、７　＠よｒｍＭ　、−〇　ｍ
Ｍ　。

コ。Ｏインターナショナルユニットになるよ５に加える
。これをＪ？Ｃでインキュベートして過酸化脂質を生成
させ表１に示す化合物とグイタミンＥの過酸化脂質形成
抑制効果を測定した。

過酸化脂質の定量はＴＢＡ（チオパルピッレート法、バ
イオケミカルメデイスン、ｔｚ％。

２１２頁、１９７６年、八木１夫）法に従って行い、蛋
白／　ｒｎ９中のＭＤＡ（マロンジアルデヒド）の量（
ｎｍｏｌ・）で表わした。

結果を表−に示す。

表　　コ 実施例コ Ｉｎ　ｖｌｔｒｏでコラ−ゲナーゼによって分離した分
離肝細胞を用いて肝細胞膜に過酸化脂質を形成させるこ
とも可能である。

フエノバルビタールを飲料水に加え、１週間飼育したラ
ット（−３０−３０Ｏｆ’）の肝臓よシコラーゲナーゼ
潅流法によシ分離肝細胞を調製した。／Ｘ１０”個／−
の分離肝細胞をｔ％Ｂ８Ａ及び／　ＯｍＭ　　ＨＩＰ］
Ｃ８含有ハンクス液（ｐｕ７．ｐ）を入れた三角フラス
コに入れ。

３７℃でインキュベートし、四塩化炭素添加（ｒ　ｍＭ
　）　　により過酸化脂質を形成させ、表１に示す化合
物とヴイタミンＥの過酸化脂質形成抑制効果を測定した
。、過酸化脂質の定量は三原らの方法（薬学雑誌、ｉｏ
−巻、７号、Ａｔ０−６ｔｔ（ｔｑｒコ））に従って行
い、四塩化炭素添加後、過酸化脂質の形成阻害率（吟で
表わした。

結果を表３に示す。

表　　Ｊ 実施例Ｊ 全動物で過酸化脂質を形成させる系としては、四塩化炭
素を用いたラット四塩化炭素肝障害モデルがある。四塩
化炭素（オリーブオイルに対しコｒ　％　’ｉ／Ｖ　）
ニー／　ｋｔを経口でラットに投与するとコリ時間後に
肝臓中の過酸化脂質は未処理解に比較して約６倍に増加
する。肝臓中の過酸化脂質は前述の三原らの方法によっ
て定量し肝Ｍ／Ｓｌ’−中のＭＤＡの一１ｔ　（ｎｍｏ
ｌｅ　）で表わした。

表／に示す化合物は、界面活性剤１トウイーンざθｌで
懸濁させて、四塩化炭素投与前３時間にコ！、ｇｏ％　
１００ｒｎ９／’？で経口投与した。

結果を表９に示す。

表　　グ ＊　　ｐ＜ｏ、ｏ　ｓ　　　　＊＊　　ｐ＜ｏ、ｏ　を
実施例ダ モルモットの腹腔にｔ％カゼインを１０−注射後、２０
時間で腹腔内には多数の多形核白血球が出現する。この
多形核白血球を用いてｌｎマ１ｔｒｏの系で多形核白血
球の活性を測定することが可能である。即ち試験管内に
緩衝液と共に多形核白血球を入れ刺激剤としてホルボー
ルミリステートアセテート（ＰＭＡ）を加えると、多形
核白血球は０１　　の産生を開始する。又この時にリソ
シーム酵素の放出やロイコトリエンの産生も生じている
ことが文献的にも知られている。　（Ｎａｔａｒ＠、　
　ユ９Ｑ（コＪ）、ｒｔＯ〜７ｔＪ（ｌｑｇ／　）　、
　ＷＩｌ　Ｈｍａｅｈら）この実験系に化合物群を存在
させてプレインキユベーシミンしてから刺激剤ＰＭＡを
加えるとＯＸ　　の産生は強く抑制された。

４襲としてＰ　Ｍ　Ａ　（Ｐｈｏｒｂｏｌ−／ニーＭｙ
ｒｉｓｔａｔｅ　−／ＪＡｅ・ｔａｔ・）を用いて測定
した。

まずリン酸緩衝液（ｐＨ７，ダ）／１３θμｔ、チトク
ｏ−ムＣ（ＣｙｔＣ）／　Ｂ　８　Ａ　　！ｒ　Ｏｐｌ
　、サンプル化合物コ０μｔおよびＰ　Ｍ　Ｎ　！ｒＯ
ｐｔを３７℃で攪拌し、ついでＰＭＡ５０ｐｔ　（最終
濃度ｌコ！ｒ　ｈｆ　／　ｒｔｒｌ　）を添加し、ｃｙ
ｔｃの還元の変化を！；　ｊ　Ｏｎｍ　　における吸光
度で追跡した。

（ＰＭＮ数はコ×ｌＯ６細胞／チューブ）結果を表３に
示す。

表　　５ 実施例！ ラットの腹腔より調製した肥満細胞を用いてｉｎ　ｖＨ
ｒｏで肥満細胞からのヒスタミン遊離を再現することが
可能である。即ち肥満細胞をＩｇｇ抗体と共にブレイン
キュベートしく例えば回虫の表皮より調製した蛋白をウ
サギに感作して作製したＩｇＫ抗体）、ついて１ｇｌ抗
原（例えば回虫の表皮よ！７ｖＩ４ＭＩ、た蛋白）を加
えると肥満細胞からヒスタミンの遊離が生じる。この様
なヒスタミンの遊離は人工刺激剤である化合物ｔＩｔ／
ざ（７，ＡＴＰ（アデノシンコリン酸）を肥満細胞に添
加することによっても生せしめることが可能である。刺
激剤として化合物ダざ／ざＯ及び回虫の表皮より抽出し
た蛋白を用いて試験管内での作用を調べると、強いヒス
タミンの遊離抑制作用のあることが確認された。

すなわち、体重ｇ００−４１ｊ（７ＳＬ雄性のウィスタ
ー系ラット腹腔より常法に従い肥満細胞を集めた。！Ｘ
１０’の細胞をクレプスリンゲル緩衝液（ｐＨ７，４＝
　）　　中で１０分間培饗した後に、化合物μざ／１０
　　ＪＯＯｆを加えた。更に１０分間培養した後に遠心
（ｊ　０００　ｒｐｍ　Ｘ　３分間）によって細胞を除
き、上清中のヒスタミンをショアらの方法（Ｊ、　Ｐｈ
ａｒ、　Ｅｘｐ、　Ｔｈ＠ｔ、Ｖｏｌ　／Ｊり。

ｔｇ２−ｔｇ６（ｔｑｓｑ））に従い定値した。肥満細
胞中に含Ｍされる総ヒスタミン量を別に求め。

刺激剤として化合物’Ｉｔ／８０処理を行い、その後放
出されたヒスタミン量を全ヒスタミン量に対する割合と
して求めた。即ち 表　　６ 出願人　　三菱化成工業株式会社 代理人　　弁理士　長谷用　　− ほか１名

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式（ I ）で示されるイソキノリン誘導体ま
   たはその塩 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（ I ） 〔式中、ＹはＯ又はＳを示し、Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３
   、Ｒ＾４、Ｒ＾６、Ｒ＾７、Ｒ＾８及びＲ＾９は水素原
   子、ハロゲン原子、アルキル基、水酸基、アルコキシ基
   、ハロゲン置換アルキル基、チオアルコキシ基、アミノ
   基又はニトロ基を示し、Ｒ＾５は水素原子、アルキル基
   、水酸基又はアルコキシ基を示す。 また、Ｒ＾１〜Ｒ＾４又はＲ＾６〜Ｒ＾９は、となり合
   う２個がアルキレン基▲数式、化学式、表等があります
   ▼（ｍ＝３もしくは ４）又はアルキレンジオキシ基▲数式、化学式、表等が
   あります▼ （ｎ＝１、２もしくは３）により環を形成してもよい。 〕 を有効成分とする（ｉ）過酸化脂質形成抑制剤、（ｉｉ
   ）リソゾーム放出・活性酸素産生抑制剤、及び／又は（
   ｉｉｉ）ヒスタミン遊離抑制剤