JPS61155959A - 免疫学的診断試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は免疫学的診断試薬に関し、詳しくは、免疫活性
物質を固定化した水分散型高分子重合体粒子の水性分散
液からなり、ラテックス凝集反応において非特異的凝集
反応がなく、且つ、凝集反応の判定が容易である′と共
に、保存安定性にすぐれる免疫学的診断試薬に関する。

（従来の技術） 近年、人間や動物の病理的状態或いはその他の状態の医
学的診断のために、血液、尿その他の体液中の生理活性
物質が有する免疫活性を利用する免疫学的診断方法が広
く用いられている。この方法は、免疫学的な反応を起こ
す抗原又は抗体のいずれか一方、又は両者を組合せて体
液等の被検液と反応させ、抗原又は抗体と、これらに対
応する抗体又は抗原との間の特異的な反応、即ち、抗原
抗体反応に基づく凝集反応又は凝集阻止反応によって、
上記のような免疫活性成分の存在を決定する方法である
。この場合、肉眼による観察を容易にするために、一般
に、抗原又は抗体は微粒子状の担体、例えば、ラテック
ス、赤血球等に担持されて、診断試薬とされ、このよう
な粒子の凝集反応を利用して、血清等の体液中の被検成
分が測定される。

例えば、微粒子がラテックスからなる診断試薬の凝集反
応について説明すると、抗原又は抗体を担持させた微粒
子を含有する水性分散液からなる診断試薬を被検液と混
合すると、上記抗原又は抗体に対応する被検液中の抗体
又は抗原は、微粒子上の抗原又は抗体と特異的に反応し
、ラテックス凝集反応、即ち、肉眼的に観察し得る微粒
子の凝集反応が生じる。しかし、被検液中に測定すべき
抗原又は抗体が存在しない場合は、肉眼的に観察し得る
凝集は起こらない。このようにして、抗体又は抗原を感
作させた微粒子の凝集反応の有無によって、被検液中の
抗体又は抗原の存在を測定することができる、 このような免疫学的診断試薬は、免疫活性物質、即ち、
抗原又は抗体が微量にでも被検液中に存在すれば、これ
を検出し得る高い感度と、目的とする免疫活性物質との
み反応する高い特異性を有することが要求される。更に
、長期間の保存によつても、高い検出感度及び特異性を
保持することが要求される。

このような免疫学的診断試薬における微粒子担　体とし
ては、従来、ポリスチレンラテックス粒子が広く用いら
れている。このポリスチレンラテックスは、殆どの場合
、乳化剤及び水溶性ラジカル重合開始剤の存在下に、ス
チレンを乳化重合させて製造されている。ここに、上記
乳化剤は、一般に、乳化重合時における重合安定性を確
保すると共に、粒径が小さく、分散安定性のよい重合休
校子を含むラテックスを得るのに効果がある。乳化剤が
このようにして得られるラテックスの分散安定性を高め
る効果については、必ずしも明らかではないが、一般に
は、乳化剤の一部がラテックス粒子に吸着されており、
残余はラテックス中に遊離の状態で存在し、このように
ラテックス中において、重合体粒子に吸着された乳化剤
と遊離の乳化剤との間に吸着脱着平衡が存在し、かかる
平衡の結果として、ラテックスの安定化が達成されると
されている。

従って、このように乳化剤を含むポリスチレンラテツク
スに前記したように抗原又は抗体を固定化させる場合に
、ラテックスが遊離の乳化剤を含むときは、ラテックス
粒子がこの固定化掻作の段階で凝集することがある。更
に、抗原又は抗体を固定化したポリスチレンラテックス
を用いて免疫学的診断を行なう際に、対応する抗体又は
抗原を含む陽性血清のみならず、ポリスチレン粒子表面
大粒子が疎水性であることと相俟って、対応する抗体又
は抗原を含まない陰性血清に対しても凝集反応を起こす
ことがある。このような凝集反応は非特異的凝集反応と
呼ばれる。また、ボリスチレンラテツクス粒子への抗原
又は抗体の固定化は、ポリスチレン粒子表面に単に抗原
又は抗体を吸着させるのみであり、その一部はラテック
ス粒子から脱着して、上記特異的凝集反応を妨害するこ
とがある。このように、従来より用いられているポリス
チレンラテックス粒子を担体とする免疫学的診断試薬は
、診断精度に欠ける問題を有する。

このため、官能基を有する単量体を乳化共重合させ、得
られるラテックス粒子が有する上記官能基を利用して、
この粒子に抗原又は抗体を共有結合にて固定化させた免
疫学的診断試薬が既に提案されている。例えばカルボキ
シル化ポリスチレンラテックスやカルボキシル化スチレ
ンーブタジエン共重合体ラテックスにカルボジイミドを
用いて免疫活性物質を固定化してなる診断試薬が既に提
案されている（特開昭４７−１６６２３号公報）。

しかし、この診断試薬は環境の変化に対して不安定であ
り、後述するように、診断試薬の非特異的凝集を抑制す
るための添加剤を加えたときに容易に沈殿を生じるほか
、保存安定性に劣る問題がある。

また、例えば、水溶性ラジカル重合開始剤を用いて、メ
タクリル酸アルキルエステルを親水性のメタクリル酸、
２−ヒドロキシエチルメタクリレート及び多官能性単量
体と共に乳化剤の存在下に乳化共重合させて、メタクリ
ル酸エステルラテツクスを得る方法も既に知られている
（Ｐｏｌｙｍｅｒ。

Ｖｏｌ．１９、　Ａｕｇｕｓｔ、　８６７−８７１　（
１９７８））　、しかし、この方法により得られるラテ
ックスも乳化剤を含有するために、上記と同様の問題を
有し、更に、得られる共重合体粒子が水酸基を有するた
めであるとみられるが、特に、固定化の段階でラテック
ス粒子が容易に凝集する傾向がみられる。

そのために、近年、乳化剤の不存在下にアクリル酸エス
テルラテックスを得る方法も提案されているが（化学技
術研究所報告第７５巻第８号３４１頁（１９８０））、
この方法によるラテックスも分散安定性が十分でなく、
特に、機械的な剪断応力下に容易に凝集する。

従って、従来、ラテックス粒子の非特異的凝集を防ぐこ
とを目的として、ラテックス凝集反応の有無の判定を行
なう際に、血清をグリシン等の緩衝液で希釈したり、或
いは血清中の補体を失活させる非働化処理を施すことが
行なわれている。しかし、このような処理によっては、
非特異的凝集を十分に抑制することは困難であり、また
、手間を要して、診断に時間がかかるという問題がある
。

このような免疫学的診断試薬における問題を解決するた
めに、従来より、非特異的凝集反応を抑制することを目
的として、診断試薬に添加剤を添加することが一般に行
なわれており、かかる添加剤として、例えば、グリコー
ル類や、ゼラチン、アルブミン等のタンパク質、或いは
ポリアニオン等が知られている。しかし、これらの添加
剤の効果は一般に十分ではないので、近年、添加剤とし
て、例えば、ショ糖及び塩化コリン（特開昭５４−０２
６３２７号公報）　、Ｎ、Ｎ−ジアルキルアミドやジ低
級アルキルスルホキシド（特開昭５５−１６０８５３号
公報）等が提案されている。

更に、近年になって、種々の無機塩類が非特異的凝集を
抑制する効果をもつ添加剤として提案されている。例え
ば、特開昭５６−１５８９４７号、公報には、グアニジ
ン、グアニジン塩酸塩、グアニジニウムチオシアン酸塩
、尿素等を代表例とするケイオトロピツク（ｃｈａｏｔ
ｒｏｐｉｃ）剤と共に、似ケイオトロピック剤として塩
化リチウム、臭化リチウム、臭化ナトリウム、臭化カリ
ウム、ヨウ化リチウムのようなハロゲン化アルカリ金属
や、塩化カルシウムのようなハロゲン化金属が記載され
ており、また、特開昭５７−３５７５４号公報にも同様
にハロゲン化アルカリ金属が記載されている。

しかし、ハロゲン化アルカリ金属は、一般に陰性血清に
対する非特異的凝集が顕著であり、また、塩化カルシウ
ムも陰性血清に対する非特異的凝集が顕著であるのみな
らず、診断に際して、例えば、陰性血清と混合して数分
後の初期の凝集の程度が縦隔性であるとき、時間の経過
につれて非特異的凝集が強くなり、凝集の程度が時間に
よって変動、するので、正確な診断を行なうことが不可
能である。更に、塩化カルシウムを添加剤として含有す
る免疫学的診断試薬は、長期間にわたって保存するとき
、診断試薬に沈殿を生じ、使用に際しては診断試薬を十
分に振盪して均一にする必要がある等、保存性や使用性
に劣る。このように、従来、種々の無機塩が添加剤とし
て提案されているが、尚、非特異的凝集を抑制する効果
に劣ると共に、診断試薬が保存安定性に劣る問題がある
。

（発明の目的） 本発明者らは、免疫学的診断試薬における上記の問題を
解決するために鋭意研究した結果、それ自体が従来の微
粒子担体に比べて格段に分散安定性にすぐれる水分散型
高分子重合体粒子を見出すと共に、かかる重合体粒子に
共有結合により免疫活性物質を固定化し、更に、かかる
重合体粒子の水性分散液に臭化カルシウムを共存させる
とき、臭化カルシウムが上記した無機塩類系の添加剤を
含めて、従来より知られている添加剤に比較して、非特
異的凝集を抑制する効果に格段にすぐれるため、非特異
的凝集が完全に抑制されて、高い検出感度及び高い特異
性を有すると共に、保存安定性にも格段にすぐれる免疫
学的診断試薬を得ることができることを見出して、本発
明に至ったものである。

従って、本発明は、血清を希釈することなく、しかも、
非働化処理も行なわずに、非特異的凝集反応が抑制され
、且つ、凝集反応の有無の判定が容易であると共に、保
存安定性にすぐれる免疫学的診断試薬を提供することを
目的とする。

（発明の構成） 本発明による免疫学的診断試薬の第１は、（ａ）一般式 ％式％ （但し、Ｒ１は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒｔ は （但し、ｍは０〜１２の整数を示し、ｚ＋ｙ＝ｍ−１で
あり、Ｒ３は水素又はアセチル基を示す。）を示し、Ａ
はそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣｈを示し、ｎは０
〜１２の整数を示す。

で表わされるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導
体６０〜９９．８重量％、 （ｂ）一般式 ％式％ （但し、Ｒ４は水素、低級アルキル基又はカルボキシル
基を示し、Ｒ５は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ４
が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ５はカルボ低級
アルコキシ基であってもよい。） で表わされるアクリル酸誘導体０．１〜２０重量％、及
び （Ｃ）多官能性内部架橋用単量体０．１〜２０重景％、
からなる単量体混合物を水性媒体中で乳化共重合させて
なる水分散型高分子重合体粒子が、共有結合により免疫
活性物質を固定化されて、水性媒体中に分散されてなる
免疫学的診断試薬において、臭化カルシウムが配合され
ていることを特徴とする。

また、本発明による免疫学的診断試薬の第２は、上記本
発明による第１の免疫学的診断試薬において、前記アク
リル酸フルオロアルキルエステルの一部を一般式 ％式％ （但し、Ｒ６は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ７は
炭素数が１〜８のアルキル基を示す。）で表わされるア
クリル酸アルキルエステル誘導体に置換し、ここに、前
記アクリル酸フルオロアルキルエステルと上記アクリル
酸エステル誘導体との混合物に基づいて上記アクリル酸
アルキルエステル誘導体が９０重量％以下である混合物
６０〜９９．８重量％を用いる以外は、第１の診断試薬
と同じである。

本発明の方法において用いるアクリル酸フルオロアルキ
ルエステル誘導体は、一般式 ＧＨｚ＝ＣＲ’Ｃ０ＯＲ”（Ｃｈ）＋５ＣＦＡｔ（但し
、Ｒ１は水素又は低級アルキル基、くは水素又はメチル
基を示し、Ｒ２は 好まし く但し、ｍはＯ〜１２の整数を示し、Ｘ＋３Ｆ＝ｍ−１
であり、Ｒ３は水素又はアセチル基を示す。）を示し、
Ａはそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣＦ、を示し、ｎ
は０〜１２の整数を示す。）で表わされ、好ましくは、
一般式 ％式％（１１ （但し、Ｒ’　、Ｒ′１％　ｍ及びｎは前記と同じであ
る。） 従って、特に、本発明において好ましく用いることがで
きるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体の具体
例として、例えば、 ＣＨ＊＝Ｃ（ＣＬ）ＣＯＯＣＨｚＣＰ＋　　　　　　　
　　　　（５１ＣＯｔ・Ｃ（Ｃ１ｌｚ）ＣＯＯＣＨｚ（
ＣＦｚ）Ｊ　　　　　　　　（６１Ｃ１ｈ＝Ｃ（ＣＨ３
）ＣＯＯＣＲＺ（ＣＦ２）　４Ｎ　　　　　　　　（７
）ＣＨｚ＝Ｃ（ＣＨ＋）ＣＯＯ（ＣＪ）　ｚ　（ＣＦ　
ｚ）　ｓＦ　　　　　　　（８）等を例示することがで
きる。

かかるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体を単
量体成分として有する乳化共重合体は、フルオロアルキ
ルエステル基が粒子の表面張力を低下させ、例えば、後
述するように、粒子に免疫活性物質を固定化する際に、
この免疫活性物質の粒子への吸着を妨げるので、固定化
を容易にすると共に、固定化後の粒子、を高感度及び高
特異性とする。

本発明の方法においては、水性媒体中での分散安定性に
すぐれる上記のようなアクリル酸フルオロアルキルエス
テル誘導体の乳化共重合体粒子水性分散液を得るために
、単量体成分として、上記アクリル酸フルオロアルキル
エステル誘導体に加えて、カルボキシル基を有するアク
リル酸誘導体を用いると共に、多官能性内部架橋用単量
体を用いる０本発明によれば、かかる単量体成分の所定
の割合の混合物を乳化共重合させることにより、特に乳
化剤を用いずとも、凝集物の発生なしに安定に乳化共重
合させ得て、水性媒体中で分散状態が安定に保持され、
且つ、非膨潤性である共重合体粒子の水性分散液を得る
ことができるのである。

本発明において用いる上記アクリル酸誘導体は、一般式 ％式％ （但し、Ｒ４は水素、低級アルキル基又はカルボキシル
基を示し、好ましくは水素又はメチル基、Ｒ４は水素又
は低級アルキル基を示し、好ましくは水素又はメチル基
を示し、Ｒ″が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ４
はカルボ低級アルコキシ基であってもよい。） で表わされ、例えば、アクリル酸、メタクリル酸、イタ
コン酸、クロトン酸、マレイン酸、フマル酸、モノアル
キルマレイン酸、モノアルキルフマル酸、モノアルキル
イタコン酸等を好ましい例として挙げることができるが
、特に、アクリル酸、メタクリル酸及びイタコン酸の１
種又は２種以上の混合物が好ましく用いられる。

このようなアクリル酸誘導体は、後述するように、重合
体粒子に免疫活性物質を共有結合にて固定化するための
官能基を提供し、また、重合体粒子に共有結合にてスペ
ーサ基を供給させるための官能基を提供するのみならず
、重合体粒子に陰性荷電を与えて、粒子の水性分散液に
おける安定性を増加させる。

また、本発明において、多官能性内部架橋用単量体は、
重合体に架橋構造を導入するので、診断試薬中に含まれ
れば好ましくない水溶性重合体の生成を抑制すると共に
、得られる重合体粒子のガラス転移温度を高めることが
できる。更に、内部架橋剤は、水分散型高分子重合体粒
子を非膨潤化して、重合体粒子の水性媒体中での分散安
定性を高めるのに効果がある。

かかる多官能性内部架橋用単量体としては、例えば、脂
肪族多価アルコールのポリ（メタ）アクリレートが好ま
しく用いられる。具体例として、例えば、エチレングリ
コールジメタクリレート、ジエチレングリコールジメタ
クリレート、トリエチレングリコールジメタクリレート
、ジエチレングリコールジメタクリレート頁１．３−ブ
チレンゲリコールジメタクリレート、トリエチレングリ
コールジアクリレート、トリメチロールプロパントリメ
タクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレー
ト、テトラメチロールメタンテトラアクリレート等が好
ましく用いられる。また、ジビニルベンゼンやＮ、　Ｎ
’−メチレンビスアクリルアミド等も多官能性内部架橋
用単量体として用いることができる。

本発明において微粒子担体として用いる水分散型高分子
重合体粒子の水性分散液の製造に際しては、乳化共重合
のための単量体組成は、アクリル酸フルオロアルキルエ
ステル誘導体６０〜９９．８重量％、好ましくは７０〜
９５重量％、アクリル酸誘導体０．１〜２０重景％重量
ましくは１〜２０重量％、内部架橋用多官能性単量体０
０１〜２０重量％、好ましくは１〜１０重量％である。

上記アクリル酸誘導体は、前記したように、重合体粒子
に免疫活性物質を共有結合にて固定化し、又はスペーサ
基を共有結合にて結合させる際の官能基を提供するのみ
ならず、陰性基であるカルボキシル基によって粒子に陰
性荷電を与えて、アクリル酸フルオロアルキルエステル
誘導体の乳化共重合時の重合安定性と、得られるエマル
ジョンの安定性を図るために必須の単量体である。従っ
て、アクリル酸誘導体は、これらの効果を有効に発現さ
せるために、単量体組成において、少なくとも０．１重
量％を必要とする。しかし、過多に共重合単量体成分と
して用いるときは、却って重合安定性と、得られる共重
合体粒子の水分散液の安定性を損なうので、２０重量％
以下の範囲で用いる。

また、内部架橋用多官能性単量体も、前記したように、
重合を安定に進行させ、また、得られる共重合体粒子の
安定な分散状態を保持すると共に、粒子を非膨潤性とす
るために必要な単量体であり、単量体組成において少な
くとも０．１重量％が必要　　　限はギであるが、しか
し、過多に使用するときは、却つ　　　オロ７て重合安
定性と粒子分散液の安定性を損なうので　　　ルキノ１
好ましくない。　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　１重１更に、本発明においては、上記単量体混合物の
　　　Ｏ重上乳化共重合時の重合安定性と得られる共重
合体校　　　　上ｉｔ子の水分散安定性を一層高めるた
めに、一般式　　　　ば、ＣＨｚ＝（：Ｒ’ＧＯＯＲ’
　　　　　　　　　　　　　　ル酸コ（但し、Ｒ６は水
素又は低級アルキル基好ましく　　　夕）、７は水素又
はメチル基を示し、Ｒ？は炭素数１〜８　　　シル、の
アルキル基を示す。）　　　　　　　　　　　　　　　
こと力で表されるアクリル酸アルキルエステル誘導体を
　　　　ま大前記アクリル酸フルオロアルキルエステル
誘導体　　　分散パの一部に代えて単量体成分として用
いることがで　　　い範朗きる。その好適な使用量はア
クリル酸フルオロア　　　１体、ルキルエステル誘導体
とこのアクリル酸アルキル　　　２−ヒエステル誘導体
の混合物の重量に基づいて９０重　　　酸基苓量％以下
であり、これよりも多量に使用すると、　　　　のよう
却って重合安定性を損じない、また、得られる粒　　　
ブロヒ子の水分散安定性に劣るようになる。有効量の下
　　　ニル、ミに制限されないが、通常、アクリル酸フ
ルルキルエステル誘導体とこのアクリル酸ア・エステル
誘導体の混合物の重量に基づいて１％以上である。特に
、好ましくは１０〜９！％の範囲である。

ｉアクリル酸エステル誘導体としては、例え；メタ）ア
クリル酸メチル、（メタ）アクリ、チル、（メタ）アク
リル酸プロピル、（メ゛クリル酸ブチル、（メタ）アク
リル酸ヘキ（メタ）アクリル酸オクチル等を例示する（
できる。

１、乳化共重合時の重合安定性や得られる水！高分子重
合体粒子の分散安定性を損なわな１内において、その他
のラジカル共重合性単例えば、ヒドロキシエチルアクリ
レート、ドロキシメチルメタクリレートのような水・有
する単量体、グリシジルメタクリレートなグリシジル基
を有する単量体、エチレン、°レン等のα−オレフィン
系単量体、酢酸ビ塩化ビニル等のビニル系単量体、スチ
レン、これら過硫酸塩と千オ硫酸ナトリウム、チオ硫酸
カリウム、チオ硫酸水素ナトリウム等のようなチオ硫酸
塩、又は亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸水
素ナトリウム等のような亜硫酸塩とのレドックス系重合
開始剤が好ましく用いられるが、これらに限定されるも
のではない。これら重合開始剤の使用量は、単量体混合
物に対してｏ、０１〜１重景％重量囲が好適である。重
合の雰囲気も、特に制限されないが、好ましくは酸素を
除いた不活性ガス雰囲気が用いられる。また、重合温度
は、特に制限されないが、通常、２０〜１ｏ。

℃、好ましくは４０〜９０℃の範囲である。

本発明による免疫学的診断試薬において、免疫活性物質
を固定化するための担体であって、上記のようにして得
られる水分散型高分子重合体粒子の平均粒径は、好まし
くは０．０３〜２μｍ、特に好ましくは０．１〜１μｍ
である。平均粒径が小さすぎると、免疫活性物質を固定
化した水分散型高分子重合体粒子の抗原抗体反応による
凝集を肉眼で観察することが困難であり、一方、大きす
ぎるときは、重合体粒子に安定な分散状態を保持させる
のが困難となるからである。また、重合体粒子の比重は
、０．９〜１．５の範囲にあることが好ましく、更に、
後述するように、免疫活性物質を固定化した後の比重が
１．０〜１．３の範囲にあることが好ましい。重合体粒
子が免疫活性物質の固定化の前後に上記範囲よりも小さ
い比重を有するときは、重合体粒子がその水性分散液に
おける水性媒体表面に浮遊して、分散安定性に劣るよう
になり、一方、上記範囲よりも大きいときは、粒子が分
散液の水性媒体中に沈降し、凝集しやすくなって、同様
に分散安定性に劣るようになるからである。

以上のように、本発明によれば、特に、乳化剤を用いる
ことなく、重合安定性を確保しつつ、アクリル酸フルオ
ロアルキルエステル誘導体及びアクリル酸誘導体を単量
体成分として含む単量体混合物の乳化共重合を行なうこ
とができ、且つ、得られる共重合体粒子は非膨潤性であ
って、しかも、水性媒体中で安定にその分散状態を保持
する。更に、一般に微粒子担体に免疫活性物質を固定化
する場合、粒子表面の荷電状態が変化し、粒子の分散安
定性が不安定の方向に変化するが、上記したような本発
明による水分散型高分子重合体粒子によれば、粒子がカ
ルボキシル基及びフルオロアルキルエステル基を有する
ので、粒子への免疫活性物質の固定化時及び固定化後に
も安定な分散状態を保持することができ、かくして、分
散安定性及び保存安定性にすぐれる免疫学的診断試薬を
得ることができるのである。

本発明による免疫学的診断試薬においては、免疫活性物
質が水分散型高分子重合体粒子にスペーサ基を介して共
有結合にて固定化されていることが好ましい。即ち、重
合体粒子に共有結合によってスペーサ基が結合され、こ
のスペーサ基に共有結合によって免疫活性物質が固定化
されていることが好ましい。スペーサ基を介さずに、直
接免疫活性物質を重合体粒子に固定化し、この水性分散
液に臭化カルシウムを添加するときは、免疫活性物質に
よっては、その活性を殆ど失ない、陽性血清に対しても
凝集反応を示さない場合があるがらである。前記したよ
うに、本発明において用いる水分散型高分子重合体粒子
は、アクリル酸誘導体を単量体成分として含む単量体混
合物を乳化共重合させることにより得るので、このアク
リル酸誘導体に由来するカルボキシル基がスペーサ基を
重合体粒子に共有結合にて結合するための官能基として
機能する。

上記スペーサ基として用い得る化合物は、少なくとも二
官能性の有機化合物であり、多官能性の重合体を排除す
るものではないが、特に、炭素数１〜１２の炭素鎖を有
する二官能性の有機化合物が好ましい。このようなスペ
ーサ基として機能する化合物の具体例として、例えば、
ヘキサメチレンジアミン、ドデカメチレンジアミン、キ
シリレンジアミン等のジアミン類、グリシン、β−アミ
ノプロピオン酸、γ−アミノ酪酸、ε−アミノカプロン
酸、ε−アミノカプリル酸等のアミノアルキルカルボン
酸、リジン、グルタミン酸、β−アラニン、アルギニン
、グリシルグリシルグリシン等のアミノ酸類等が好まし
く用いられるが、これらに限定されるものではない。こ
のスペーサ基は、予め重合体粒子に結合させ、この後に
このスペーサ基と免疫活性物質とを結合させてもよく、
或いはスペーサ基を予め免疫活性物質に結合させ、これ
を重合体粒子に結合させてもよい。更に、必要に応じて
、重合体粒子及び免疫活性物質の両方に予めスペーサ基
を結合させ、これらを相互に結合させることもできる。

但し、免疫活性物質を共有結合にて直接に固定化した水
分散型高分子重合体粒子の水性分散液に所定濃度の臭化
カルシウムを配合したとき、免疫活性物質が所期の活性
を有する場合には、水分散型高分子重合体粒子に免疫活
性物質を直接に固定かしてもよいのはいうまでもない。

前記した官能基を有する水分散型高分子重合体粒子に直
接に免疫活性物質を共有結合にて固定化し、又は重合体
粒子にスペーサ基を結合し、また、このスペーサ基に免
疫活性物質を共有結合にて固定化するための方法は、特
に制限されず、従来より知られている任意の方法による
ことができる。

例えば、好ましい方法の一つとして、アミノカルボン酸
をスペーサ基として用いる場合であれば、水溶性カルボ
ジイミドの存在下に、アミノカルボン酸の有するアミノ
基と水分散型高分子重合体粒子の有するカルボキシル基
とを反応させ、アミド結合を形成させることにより、ス
ペーサ基を重合体粒子に結合させ、次いで、同様に水溶
性カルボジイミドを用いてこのスペーサ基の有するカル
ボキシル基に免疫活性物質を共有結合にて固定化するこ
とができる。

かかる方法において用いる水溶性カルボジイミドとして
は、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）カルボジイミド塩酸塩、１−シクロへキシル−
３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド−メト−
ｐ−）ルエンスルホネート等を挙げることができる。こ
のような水溶性カルボジイミドを用いて、スペーサ基を
介して、又は介さずして直接に、共有結合によって免疫
活性物質を重合体粒子に固定化するには、従来より知ら
れている通常の方法及び条件によることができる。例え
ば、スペーサ基を用、いる場合であれば、重合体粒子の
水性分散液にスペーサ基と共に適宜量、例えば、水性分
散液の単位容量光りに０．０１〜１０ｍｇ／ｍｌとなる
ように水溶性カルボジイミドを添加し、通常の条件、例
えばｐｉを４〜１０に保持して、５〜６０℃程度の温度
で数分乃至数十時間、通常、１〜５時間程度反応させれ
ばよい。

次いで、このスペーサ基を結合させた重合体粒子に同様
にして免疫活性物質を固定化すればよい。

本発明において用いる免疫活性物質としては、特に制限
はなく、抗原、抗体及びハブテン等いずれを用いてもよ
い。例えば、ヒト及び動物免疫グロブリン、変性免疫グ
ロブリン、α−フェトプロティン、Ｃ反応性タンパク（
ＣＲＰ）や肝炎ウィルス関連抗原、風疹ＨＡ抗原等の各
種ウィルス抗原、トキソプラズマ、マイコプラズマ、梅
毒トレボネーマ等の種々の細菌、真菌、毒素等の微生物
抗原、アルブミン、補体成分等の各種血漿タンパク成分
、エストロゲン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）
等の各種ホルモン等が挙げられ、これらの抗原成分に対
する抗体等も使用することができる。

本発明による免疫学的診断試薬は、上記のように固定化
した免疫活性物質の失活が起こらないように、固定化し
た水分散型高分子重合体粒子が適当なｐＨ及び濃度のグ
リシン緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等の緩衝液
に分散されていると共に、°この重合体粒子の水性分散
液に粒子の非特異的凝集を抑制するための添加剤として
臭化カルシウムが配合されてなる。

臭化カルシウムは、免疫活性物質を固定化した水分散型
高分子重合体粒子の水性分散液において、０．０１〜１
．５モル／Ｉｔ、好ましくは０．１〜１．２５モル／ｌ
の濃度で含有される。水性分散液における臭化カルシウ
ムの濃度が０．０１モル／ｌよりも少ないときは、陰性
血清に対する非特異的凝集の抑制効果が乏しく、一方、
濃度が１．５モル／ｌを越えるときは、却って陽性血清
に対する特異的凝集が抑制されることとなるからである
。

更に、本発明による免疫学的診断試薬において、上記緩
衝液の濃度は、通常、０．０　Ｏ５〜０．２Ｍの範囲が
適当であり、好ましくはｏ、ｏｉ〜０．ＩＭの範囲であ
る。また、緩衝液のｐＨは、水分散型高分子重合体粒子
の分散安定性及び抗原抗体反応の活性を考慮して、通常
、６〜９、好°ましくは７〜８．５の範囲である。また
、診断試薬における重合体粒子の固形分濃度は、通常、
０．０１〜５重量％の範囲であるが、好ましくは０．１
〜３重量％の範囲である。尚、本発明による免疫学的診
断試薬には、防腐効果を与えるために、アジ化ナトリウ
ム等の防腐側を添加してもよい。

本発明による免疫学的診断試薬は、臭化カルシウムを緩
衝液に溶解含有させ、ｐＨを調整した後、免疫活性物質
を固定化した水分散型高分子重合体粒子の水性分散液に
添加混合し、必要に応じて更にｐＨを調整することによ
り得ることができる。

本発明による免疫学的診断試薬を使用する免疫学的診断
は、例えば、診断試薬と被検液とをガラス板又はプラス
チック板の窪み又は平面板上又はマイクロプレート上に
おいて混合し、肉眼又は顕微鏡観察によって、重合体粒
子の凝集の有無を判定することにより行なわれる。また
、凝集の有無を光学的な変化として判定することもでき
る。

（発明の効果） 以上のように、本発明の免疫学的診断試薬は、それ自体
が分散安定性にすぐれ、また、免疫活性物質の固定化に
対しても安定な分散状態を保持し得る水分散型高分子重
合体粒子に免疫活性物質を固定化し、この粒子の水分散
液に臭化カルシウムを含有させてなり、その結果、その
理由は必ずしも明らかではないが、粒子の非特異的凝集
が完全に抑制されると共に、高い感度と特異性とを有し
、従って、診断に際して、血清を緩衝液で希釈したり、
或いは非動化処理しなくとも、迅速に正確な判定を行な
うことができる。更に、本発明による診断試薬は、例え
ば、ガラス板上で血清と均一に混じりやす（、また、流
動性にすぐれるので、凝集の有無判定が容易で且つ正確
である。また、診断試薬が臭化カルシウムを含むために
、その比重が大きくなって、粒子の比重に近くなるため
とみられるが、従来の診断試薬に比較して、長期間にわ
たって何らの沈殿を生じることなく、重合体粒子の均一
分散性が保持され、その保存安定性に著しくすぐれる。

（実施例） 以下に本発明の実施例を示し、具体的に説明するが、本
発明はこれら実施例に限定されるものではない。

実施例１ （ａ）　　水分散型高分子重合体粒子の調製前記式（５
）で表わされる２、　２．２−トリフルオロエチルメタ
クリレート９０．０重量％、アクリル酸５．０重量％及
びトリエチレングリコールジメタクリレート５．０重量
％からなる単量体混合物６０ｇを蒸留水３３０ｇに加え
、過硫酸カリウム０．３ｇを水１０ｍ１に溶解した重合
開始剤水溶液を７５℃の温度で窒素気流下に加え、１２
０ｒｐ＋ｗで攪拌しつつ７時間重合させて、重合率９９
．０％にて平均粒径０．３３μｍの共重合体粒子の水性
分散液を得た。重合は非常に安定に行なわれて、凝集物
は皆無であった。尚、凝集物の測定は、重合終了後、生
成した樹脂エマルジョンを３０℃まで冷却し、濾布で濾
過し、濾布上に残された凝集物を乾燥し、その重量を測
定することによって求めた。

この粒子分散液を最初、蒸留水にて４回遠心洗浄し、次
いで、０．０１　Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ７，５）にて２
回遠心洗浄して、水相中の水溶性高分子を除去し、重合
体粒子を精製した後、この重合体粒子を０．０１Ｍホウ
酸緩衝液（ｐＨ７，５）に固形分が５重量％となるよう
に再分散させた。

中）　重合体粒子へのスペーサ基の結合上で得た水分散
型高分子重合体粒子の水性分散液１００ｍ１とε−アミ
ノカプロン酸水溶液（０，０２Ｍ）１００ａ＋１とを混
合し、ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ７，５に調
製した。０．ＯＩＭホウ酸緩衝液＜ｐＨ７，５）に溶解
させた１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル
）カルボジイミド塩酸塩水溶液（２５ｍｇ／ｍｌ）　２
０ｍｌを上記水性分散液に加え、室温で３時間、攪拌下
に反応させた。−夜、冷蔵庫に放置した後、０．０１Ｍ
ホウ酸緩衝液（ｐＨ８，２）にて３回遠心洗浄して、ス
ペー　　　重・。

す基を結合させた重合体粒子を得、これを０．０１　　
　体ＩＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８，２）に固形分５重量％
にな　　　（ｄ）るように再分散させた。　　　　　　
　　　　　　　　　　１（０１ウサギＩｇＧの固定化　
　　　　　　　　　　　　　衝９上で得たスペーサ基を
有する水分散型高分子型　　　リ１合体粒子の水性分散
液５ａ＋１．０．０１Ｍホウ酸緩衝　　　整１液（ｐＨ
，２）２ｍｌ及び蒸留水１１ｎ＋１を混合し、これに１
−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ　　　記１ピ
ル）カルボジイミド塩酸塩水溶液（５ｍｇ／ｍｌ）　　
　　　臭４２ｍ１を加え、１０分後にウサギＩｇＧ水溶
液（５ａ＋ｇ　　　　共番／　ｍ　１　）を５ｍｌ添加
し、１５℃で２時間反応させた。　　　試Ｉ次に、反応
混合物中の余剰の水溶性カルボジイミ　　　（ｅ）ドを
消費するために、１０重量％Ｌ−アルギニン　　　　ち
水溶液（ｐＨ８，２）　５　ｎｉｌを加え、１時間イン
キュベ　　　試石−トした。次いで、０．ＯＩＭホウ酸
緩衝液（ｐＨ８，がコ２）にて遠心洗浄を３回行なった
後、０．ＱＩＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８，２）に分散させ
て全量１０ｍ１に　　　血ｔ１調整し、かくして、ウサ
ギＩｇＧを前記スペーサ基　　　混イを介して共有結合
にて固定化した水分散型高分子　　　そ０１体粒子の水
性分散液を得た。固定化量は重合立子１ｇ当り５５ｍｇ
であった。

免疫学的診断試薬の調製 醸々の量の臭化カルシウムを０．ＯＩＭホウ酸緩ＩＣｐ
Ｈ８，２）に溶解させた後、ＩＮ水酸化ナトンム水溶液
を加えて、緩衝液のｐＨを８．２に調また。

：れらの臭化カルシウムを含有する緩衝液と前７たウサ
ギＩｇＧ固定化粒子分散液とを混合して、ｂカルシウム
を種々異なる濃度にて含有すると二、重合体粒子濃度１
．０重量％の免疫学的診断ｌを調製した。

免疫学的診断試薬の評価 ａ疫活性物質としてウサギＩｇＧを固定化した零ｌは、
リウマチ因子検出試薬として用いることコきる。

二の診断試薬とリウマチ因子陽性血清及び陰性緊を原液
のままそれぞれガラス板上にて等容量１攪拌しながら、
２分後に凝集状態を判定した。

）結果を第１表に示す。

第１表 （注）判定の基準は以下による。以下の判定においても
同じである。

−：顕微鏡観察（１００倍）によっても凝集が認められ
ない。

−“　　：肉眼にては凝集が認められないが、顕微鏡観
察（１００倍）によって僅 かに凝集が認められる。

±　　：肉眼にて少し凝集が認められる。

＋　　：肉眼にて凝集が明らかに認められる。

＋゛：：肉眼凝集が十よりやや強い程度に明らかに認め
られる。

＋＋：少し強い凝集が認められる。

＋＋＋：激しい凝集が認められる。

本発明による診断試薬においては、非特異的凝集応が起
こらないが、臭化カルシウムを含有し）対照診断試薬で
は、非特異的凝集が生じた。

また、臭化カルシウム濃度がそれぞれ０．８５七／１及
び０．１モル／ｌである上記リウマチ診断薬について、
４℃の温度にて経口安定性を調べた。評価方法は上記と
同じである。結果を第２表に示す。

本発明の診断試薬によれば、６か列後にも均一な外観を
有すると共に、陰性血清に対して何ら非特異的な凝集を
起こさず、保存安定性にすぐれることが明らかである。

更に、本発明の診断試薬によれば、凝集の程度は反応時
間によらずに実質的に一定している。しかし、臭化カル
シウムを含有しない診断試薬によれば、早期に沈殿が生
じ、また、非特異的凝集が認められる。

また、添加剤として塩化カルシウムを含有する対照診断
試薬によれば、陰性血清に対して非特異的凝集反応が生
じるのみならず、早期に沈殿を生じて、保存安定性に著
しく劣る。但し、この沈殿は粒子が沈降して生じるもの
であり、粒子が凝集するのではないので、十分に振盪し
て均一にすれば、診断試薬として使用することができる
。更に、塩化カルシウムを含有する診断試薬によれば、
陰性血清と混合して数分後の初期の凝集の程度が（±）
、即ち、縦隔性であるとき、時間の経過につれて非特異
的凝集が強くなり、例えば、約１０分後には凝集の程度
が（＋＋）程度となって、凝集の程度が時間によって変
動し、かくして、正確な診断が不可能である。

更に、臭化カルシウム濃度０．８５モル／Ｉｌの上記リ
ウマチ診断試薬を４℃の温度で保存したときの陽性活性
の変化を調べた結果を第３表に示す。

凝集の判定基準は前記と同じである。

次に、前記（ａ）の方法にて調製した水分散型高分子重
合体粒子にスペーサ基を結合させず、直接に（Ｃ）の方
法に従ってウサギＩｇＧを固定化した後、（ｄ）の方法
に従って種々の濃度で臭化カルシウムを含有する対照診
断試薬Ａを調製した。また、臭化カルシウムを含有しな
いほかは、本発明診断試薬と同じである対照診断試薬Ｂ
を調製した。

本発明による診断試薬及びこれらの対照診断試薬を（ｅ
ｌの方法に従って活性を判定した。結果を第４表に示す
。本発明による診断試薬によれば、非特異的凝集が起こ
らず、且つ、診断精度も高いが、スペーサ基を介してウ
サギＩｇＧが固定化されていない対照診断試薬Ａは陽性
血清に対しても明瞭な凝集反応を示さず、また、対照診
断試薬Ｂによれば、非特異的凝集が認められる。

実施例２ （ａ）　　水分散型合成高分子重合体粒子の調製単量体
として前記式（７）で表わされるＬＨ，ＩＨ。

５Ｈ−オクタフルオロペンチルメタクリレート１３゜９
重量％、メタクリル酸メチル３８．７重量％、メタクリ
ル酸イソブチル３８．７重量％、アクリル酸５．０重量
％及びトリエチレングリコールジメタクリレート３．７
重量％からなる混合物６０ｇを用いた以外は、実施例１
と同様にして、重合率９９％にて平均粒径０．３１μｍ
の水分散型高分子重合体粒子の水性分散液を得た。

この分散液を実施例１と同様に精製処理し、得られた重
合体粒子を０．　ＯＩ　Ｍホウ＃緩衝液（ｐＨ７，５）
に固形分濃度５重量％となるように分散させて、水分散
型高分子重合体粒子の水性分散液を得た。

（ｂ）　　重合体粒子へのスペーサ基の結合実施例１と
同様にして、上で得た重合体粒子にスペーサ基を結合さ
せた。

（Ｃ）　　ウサギＩｇＧの固定化 上で得たスペーサ基を結合した重合体粒子に実施例１と
同様にして、ウサギＩｇＧを共有結合にて固定化し、こ
の後、実施例１と全く同様に処理して、重合体粒子を０
．ＯＩＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８，２）に分散させて、全
量１０ｍ１に調製し、ウサギｒｇＧを固定化した水分散
型高分子重合体粒子分散液を得た。重合体粒子１ｇ当り
のウサギＩｇＧ固定化量は５０ｍｇであった。

（ｄ）　　免疫学的診断試薬の調製 上で得たウサギＩｇＧ固定化水分散型高分子重合体粒子
分散液を用いて、実施例１と同様にして、種々の濃度で
臭化カルシウムを含有する本発明による診断試薬を調製
した。

比較のために、臭化カルシウムに代えて、添加剤として
臭化ナトリウム、臭化カリウム、臭化リチウム又は塩化
カルシウムを用いて、対照診断試薬を調製した。

（ｅ）　　免疫学的診断試薬の評価 上で得た各種の免疫学的診断試薬について、実施例１と
同様にして活性の判定を行なった。結果を第５表に示す
。本発明による診断試薬によれば、非特異的凝集は全く
起こらないが、対照診断試薬の場合は、非特異的凝集が
認められる。

実施例３ 実施例２において調製したスペーサ基を有する水分散型
高分子重合体粒子に、実施例１と同様にしてカルボジイ
ミドを用いてヒトＩｇＧを固定化した後、臭化カルシウ
ム０．７５モル／ｌを含有する本発明による免疫学的診
断試薬を調製した。重合体粒子１ｇ当りのヒトＩｇＧ固
定化量は６０ｍｇであった。ヒトＩｇＧを固定化したこ
の診断試薬も、リウマチ因子の検出に用いることができ
る。

この診断試薬を何らの処理もしていない種々の血清と混
合攪拌し、２分後に凝集状態を判定した結果を第６表に
示す。本発明の診断試薬によれば、非特異的凝集がなく
、且つ、検出感度も高い。

比較のために、臭化カルシウムを添加しない対照診断試
薬Ａと、平均粒径０．３５μｍのカルボキシル化ポリス
チレンラテックス粒子にスペーサ基を結合させず、直接
にカルボジイミドを用いてヒ目ｇＧを固定化し、その分
散液に臭化カルシウムを０．７５モル／２：ａ度にて溶
解させて、対照診断試薬Ｂを調製した。

これら対照診断試薬の活性も第６表に示す。尚、免疫活
性物質として抗ＨＣＧを固定化した本試薬は妊娠診断試
薬として用いることができる。　上で得たそれぞれの診
断試薬と血清を原液のままガラス板上にて等量混合し、
３〜５分後の凝集の有無を判定したところ、いずれの診
断試薬の場合も、血清１ｍｌ中に１国際車位のＨＣＧが
あれば凝集が起こり、容易に且つ正確に妊娠の有無を判
定することができた。非特異的凝集は全く起こらなかっ
た。

他方、臭化カルシウムを含有しない対照診断試薬によれ
ば、妊娠していないヒト血清の場合も、縦隔性と判定さ
れる非特異的凝集が生じた。

実施例５ 以下の４種類の対照用及び本発明診断試薬用の単量体混
合物を用いて、実施例１と同様にして、それぞれ水分散
型高分子重合体粒子の水性分散液を調製した。

単量体混合物Ａ（対照） メタクリル酸メチル　　　　　　４５．０重量％メタク
リル酸イソブチル　　　　４５．０重量％アクリル酸　
　　　　　　　　　　５．０重量％トリエチレングリコ
ールジメタ クリレート　　　　　　　　　　　５．０重量％ｌ量体
混合物Ｂ（対照） メタクリル酸メチル　　　　　　９０．０重量％アクリ
ル酸　　　　　　　　　　　５．０重量％トリエチレン
グリコールジメタ クリレート５．０重量％ ｌ量体混合物Ｃ（対照） ＩＨ，ＩＨ，５Ｈ−オクタフルオロペンチルメタクリレ
ート　　　　　１５．０重量％メタクリル酸メチル　　
　　　　８０．０重量％アクリル酸　　　　　　　　　
　　５．０重量％ｌ量体混合物Ｄ １８、１Ｂ、　５Ｈ−オクタフルオロペンチルメタクリ
レート　　　　　１５．０重量％メタクリル酸メチル　
　　　　　８５．０重量％アクリル酸　　　　　　　　
　　　５．０重量％トリエチレングリコールジメタ クリレート　　　　　　　　　　５．０重量％次に、こ
のようにして得たそれぞれの水分散型高分子重合体粒子
に実施例１と同様にしてスペーサ基を結合し、ウサギＩ
ｇＧを固定化した後、０．７５モル／ｌ濃度にて臭化カ
ルシウムを含有する対照免疫学的診断試薬を調製した。

第７表に各水分散型高分子重合体粒子の調製における重
合率、平均粒径及び粒子１ｇ当りのウサギＩｇＧ固定化
量を示す。

第７表 これらの免疫学的診断試薬について、実施例１と同様に
してその活性を判定したところ、対照診断試薬Ａ及びＢ
の場合は、水分散型高分子重合体粒子にウサギＩｇＧを
固定化する際に粒子の自然凝集が起こり、その後の洗浄
によっても完全な均一状態に戻らず、常に（±）の凝集
が認められて、診断試薬としては使用し難いものであっ
た。

また、本発明診断試薬りと対照診断試薬Ｃについて、長
期保存したときの活性の変化を調べた。結果を第８表に
示す。

本発明による免疫学的診断試薬は、１２か月後にも均一
であると共に、陰性血清に対しては何ら非特異的凝集を
起こさないが、内部架橋用多官能性単量体であるトリエ
チレングリコールジメタクリレートを含有しない単量体
混合物Ｃから得た水分散型高分子重合体粒子を担体とす
る対照診断試薬Ｃの場合は、外観は１２か月後にも本発
明による診断試薬と同様に均一であるものの、経時的に
感度及び特異性が低下し、陽性血清に対しても縦隔性と
判断される程度の凝集（±）しか認められなかった。

実施例６

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）（ａ）一般式 ＣＨ＿２＝ＣＲ＾１ＣＯＯＲ＾２（ＣＦ＿２）＿ｎＣＦ
   Ａ＿２（但し、Ｒ＾１は水素又は低級アルキル基を示し
   、Ｒ＾２は −（ＣＨ＿２）＿ｍ−又は▲数式、化学式、表等があり
   ます▼ （但し、ｍは０〜１２の整数を示し、ｘ＋ｙ＝ｍ−１で
   あり、Ｒ＾３は水素又はアセチル基を示す。）を示し、
   Ａはそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣＦ＿３を示し、
   ｎは０〜１２の整数を示す。） で表わされるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導
   体６０〜９９．８重量％、 （ｂ）一般式 Ｒ＾４ＣＨ＝ＣＲ＾５ＣＯＯＨ （但し、Ｒ＾４は水素、低級アルキル基又はカルボキシ
   ル基を示し、Ｒ＾５は水素又は低級アルキル基を示し、
   Ｒ＾４が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ＾５はカ
   ルボ低級アルコキシ基であってもよい。） で表わされるアクリル酸誘導体０．１〜２０重量％、及
   び （ｃ）多官能性内部架橋用単量体０．１〜２０重量％、 からなる単量体混合物を水性媒体中で乳化共重合させて
   なる水分散型高分子重合体粒子が、共有結合により免疫
   活性物質を固定化されて、水性媒体中に分散されてなる
   免疫学的診断試薬において、臭化カルシウムが配合され
   ていることを特徴とする免疫学的診断試薬。
2. （２）免疫活性物質がスペーサ基を介して共有結合にて
   水分散型高分子重合体粒子に固定化されていることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の免疫学的診断試薬
   。
3. （３）臭化カルシウムが０．０１〜１．５モル／ｌの範
   囲の濃度で配合されてなることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項記載の免疫学的診断試薬。
4. （４）ｐＨが６〜９であることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項記載の免疫学的診断試薬。
5. （５）（ａ）一般式 ＣＨ＿２＝ＣＲ＾１ＣＯＯＲ＾２（ＣＦ＿２）＿ｎＣＦ
   Ａ＿２（但し、Ｒ＾１は水素又は低級アルキル基を示し
   、Ｒ＾２は −（ＣＨ＿２）＿ｍ−又は▲数式、化学式、表等があり
   ます▼ （但し、ｍは０〜１２の整数を示し、ｘ＋ｙ＝ｍ−１で
   あり、Ｒ＾３は水素又はアセチル基を示す。）を示し、
   Ａはそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣＦ＿３を示し、
   ｎは０〜１２の整数を示す。） で表わされるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導
   体と、一般式 ＣＨ＿２−ＣＲ＾６ＣＯＯＲ＾７ （但し、Ｒ＾６は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ＾
   ７は炭素数が１〜８のアルキル基を示す。） で表わされるアクリル酸アルキルエステル誘導体との混
   合物であって、この混合物に基づいて上記アクリル酸ア
   ルキルエステル誘導体が９０重量％以下である混合物６
   ０〜９９．８重量％、 （ｂ）一般式 Ｒ＾４ＣＨ＝ＣＲ＾５ＣＯＯＨ （但し、Ｒ＾４は水素、低級アルキル基又はカルボキシ
   ル基を示し、Ｒ＾５は水素又は低級アルキル基を示し、
   Ｒ＾４が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ＾５はカ
   ルボ低級アルコキシ基であってもよい。） で表わされるアクリル酸誘導体０．１〜２０重量％、及
   び （ｃ）多官能性内部架橋用単量体０．１〜２０重量％、 からなる単量体混合物を水性媒体中で乳化共重合させて
   なる水分散型高分子重合体粒子が、共有結合により免疫
   活性物質を固定化されて、水性媒体中に分散されてなる
   免疫学的診断試薬において、臭化カルシウムが配合され
   ていることを特徴とする免疫学的診断試薬。
6. （６）免疫活性物質がスペーサ基を介して共有結合にて
   水分散型高分子重合体粒子に固定化されていることを特
   徴とする特許請求の範囲第５項記載の免疫学的診断試薬
   。
7. （７）臭化カルシウムが０．０１〜１．５モル／ｌの範
   囲の濃度で配合されてなることを特徴とする特許請求の
   範囲第５項記載の免疫学的診断試薬。
8. （８）ｐＨが６〜９であることを特徴とする特許請求の
   範囲第５項記載の免疫学的診断試薬。