JPS61155393A - アミノ酸からペプチドを合成する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明ハ、トリアルキルシアノシラン類の関与のもとく
アミノ酸からペプチド類を合成する方法に関する。

その−ＮＨ２官能基がブロックされそしてその−ＣＯＯ
Ｈ官能基が活性化されたアミノ酸と、トリメチルクロロ
シランの如きシリル化剤の関与でシリル化されている他
のもう一つのアミノ酸との反応によるペプチドｔ−詞製
するためのアミノ酸のシリル化ハ、クリヘルげルフ・エ
ーチ・アール、リービツヒス・アヌ、１９７２年、７６
５巻、１７−５８頁（Ｋｒ１ｃｈｅｌｄｏｒｆ　Ｈ，Ｒ
，、Ｌｉｅｂｉｇｓ　Ａｎｎ、。

１９７２．７６３．ＰＩ３−３８）に記述されている。

１！Ｉｃ、ヘキサメチルシラデン〔ピルコアエル・エル
、コンコールタテリュー及ヒリッター・ニー、ヘム・ベ
ル、１９６１年９４巻１２６５〜１２６７頁（８ｉｒｋ
ｏｆｅｒ　Ｌ、、　Ｋｏｎｋｏｌ　Ｗ、　ａｎｄ　Ｒｉ
ｔｔｅｒ　Ａ、。

Ｃｈｅｍ、　Ｂｅｒ、　１９６１　、９４．　ｐ、　１
２６３〜１２６７）及びピルコアエル・エル、リッター
・ニー、及ヒノイハウゼン・ビー、リービツヒス・アヌ
・ヘム、１９６２年６５９巻、１９０〜１９９貞（Ｂｉ
ｒｋｏｆｅｒ　Ｌ、、　Ｒｌｔｔｅｒ　Ａ、　ａｎｄ　
Ｎｅｕｈａｕｓｅｎ　Ｐ、。

Ｌｉｅｂｉｇｓ　Ａｎｎ、　Ｃｈｅｍ、＋　１９６２　
＋　６５９　ｒ　ｐ、１９０〜１９９））及びＮ−（ト
リメチルシリル）ノエチルアミン及びＮ、Ｏ−ビス（ト
リメチルシリル）アセトアミド〔ニス・ゲイ・ｃＩｆツ
ヒン、ニー・ニー・ダゲイドウイッチ、ニー・アイ・ユ
ルタノフ、セリャ・キミヘスカヤ、５号、６５７−６６
０頁、５月１９７７年−初版文献１０月２７日、１９７
６年（Ｓ、　Ｖ、　Ｒｏｇｏｚｈｉｎ、　Ｙｕ、　Ａ、
　Ｄａｖｉｄｏｖｉｃｈ、　Ａ、Ｉ。

Ｙｕｒｔａｎｏｖ、　５ｅｒｉｙａ　Ｋｈｉｍｉｃｈｅ
ｓｋａｙａ＋　Ｎ−５ｐ　ｐ、６５７〜６（５Ｑ　、　
Ｍａｒｃｈ　１９７７−　Ｏｒｉｇｉｎａｌ　ａｒｔｉ
ｃｌｅＯｃｔｏｂｅｒ　２７　、１９７６　）　）の如
き他のシリル化剤が同様にこの同じ反応にっ＾て知られ
ている。

従来用いられて＾る檀々のシリル化剤は、しかし種々の
欠点を有する。事実、これらの反応剤は、続−て除去し
なければならずそしてしばしばカッ７’　ＩＪソング段
階中ミノ酸のラセミ化又ｔエクベデチド段階で内部環化
を生起させる１基を一般に心安とする。更に１　シリル
化中副生物が形成されそして反応が一般に不完全であり
、そしてこのことＧ工しばしば５０％未＋１１の劣った
収率をも几らす。

従来技術のシリル化剤の他のもう一つの欠点は、水の存
在でもたらされ、これはアルキルシリル反応剤を分解し
対応するヘキサアルキルシフ０キサンを形成する。

虹に１このシリル化誘導体は分離段階で形成さ・れ、モ
してカップリング段階前に分離されなければならない。

従来技術の方法では、ペプチド合成は更にそれらの分子
量が増大するとき形成されるペプチドの溶解性の問題で
大きく制限されろうこの合成は、従ってしばしばカップ
リング反応の間中間生成物の低溶解度によって、そして
最終生成物ｔ−＃製する困ｙａＫよって制限される。ペ
プチド＃ＩＩが長ければ、ますますこの問題は複雑くな
る。

更に１従来のいくつかの愕定のシリル化剤ｈｘ、特定の
問題金示す。かくして、望ましいシリル化アミノ化合物
より１！に求核性反応剤であるヘキサメチルノシラヂン
の使用は、工程の収率を影１１ｔ−与える副反応を生起
する。トリメチルクａｃｘシランの使用は、アミノ酸の
一１ＶｒＨ２基のベンツルオキシカルボニル型基での保
護と非相醇性である。

本発明の方法←工、公知方法の不利益をもたないシリル
化剤によってアミノ酸からペプチド合成を実施すること
に関する。

（に特に、本方法を工迅速なカップリング反応１ｒ連続
的に行なうことを可能にし、この反応はラセミ化なしく
＠９そして１基性共反応剤の存在下に、任、ｔＫ水の存
在下にそして公知の保護剤の存在下に行なうことができ
る。ｌｊ！に、これは公知のシリル化剤で得られる−の
より高い収率で高分子量のペプチドを１造することを可
能くする。だに、本発明方法は、水を化学的に消費しそ
して揮発性シリル誘導体を得ることを可能ならしめ、こ
のことは後者の除去を促進する。

この目的のために、本発明ハ、トリアルキルシラン類と
して一般式（Ａ） Ｒ２−８ｉ−ＣＨＮ　　　　　　　（Ａ）（式中、Ｒ１
、Ｒ２及びＲ３）”ｊ、、それぞれ個々に同じであるか
又は異なって−てもよいそして１〜５炭素原子を含有す
るアルキル基を示す。）のトリアルキルシアノシランＩ
Ｉ　６Ｅ用いられる、トリアルギルシラン誘導体を用い
る伝音に組合された及び／又は置換されたアミノ酸から
ペプチド類を合成する方法に関する。最終的Ｋ）工、Ｒ
１、Ｒ２及びＲ３ハ好ましくは同じアルキル基を示す。

トリメチルシアノシランが最も好マしい。

本発明に従う方法に粘いて用いられるトリアルキルシア
ノクラン類は、好ましく←工容易Ｋｋ去することができ
る揮発性物質である。これらのシリル化剤は、普通のシ
リル化剤より優れた溶解性を有し、そしてこのことはア
ミノ酸間のペプチド結合を形成させる反応剤として及び
アミノ酸とペプチド類の溶剤としてこれを同時に用いる
ことを可能にする。

トリアルキルシアノシラン類は、単独で又は介在溶媒の
存在下に用いることができる。そしてこの優者のものｔ
工、列えば活性化段階から生成するか又はカップリング
段階に一緒に加えることがでｊる。シＯ）シ、カップリ
ング段Ｉ４を介在溶媒を加えることなしく行うことが好
ましい。

トリメチルシアノシランと一緒に用匹られるとき良好な
結果を与える溶媒媒介物ｔｚ、％にソクロロメタン及び
テトラヒトミフランである。

本発明に従５方法に於いて用いられるトリアルキルシア
ノクラン類の量は、広範に変えるこトカできる。一般に
１アミノ酸ミリモル当り２０〜０．０１のトリアルキル
シアノシランが用いられる。トリメチルシアノシランの
場合には、用いられるアミノ酸ミリモル当り５〜Ｑ、１
ｔｔｔｌのトリメチルシアノシランが好ましく用いられ
る。

アミノ酸としては、知られた天然アミノ酸類又は天然産
でない合成アミノｅ！ｊｌの如き、少なくとも一つのカ
ルボキシル官能基及び少なくとも一つの一級又は二級ア
ミノ官能基含有する組合わされた及び／又舎工置換され
たアミノ酸のいずれをも用いることができる。天然アミ
ノ酸としては、一般に炭化水素鎖を有するアミノ酸、ヒ
トミキモル化又は硫Ｒ含有アミノ酸、ノカルざキシル糸
アミノ酸、１基性アミノ酸及び芳香族又は複素環式アミ
ノ酸の如き、線状、分校状又はｌ状アミノ酸が用いられ
る。

組合わされたアミノ酸とは、官能基がそれと反。

応性である成分と、上記の少なくとも一つのカルざキシ
ル官能基及び／又はアミノ基を介し之アミノ酸との反応
から得られる化合物のいずれかである。そのうち好まし
い組合せアミノ酸として、化学的に同じか又は異なる２
、５又はそれ以上のアミノ酸の連鎖を有する小さいペプ
チドの如き分子である。

置換されたアミノ酸とは、炭素原子に結合した一つ又は
それ以上の水素原子の代！７に有機又は無機置換基を含
有する、上記の如きアミノ酸又は組合せアミノ酸型の化
合物のいずれかである。これらの有機又は無機置換基は
、単純でも又は複雑でも、そして置換又は非ｌｔ喚であ
ってもよく、そして特に１素及び弗素原子、同様にアル
キル、アルケニル、ククａアルキル、ベンツル、フェニ
ル、ナフチル及びビリツル基及び類似のものの如き脂ａ
族及び芳香暎基を含む。

本発明方法に用りられる他の操作条件は臨界的でなく、
かくして、本方法が実施される圧力は一般に０．１〜１
０パールである。大気圧で良好な繕来が得られる。本方
法が実施される！１度は、用いられるシリル化剤が問題
の圧力で液体を保つ如き温度である。これは普通１００
℃以下である。大気圧で、トリメチル７アノシランがシ
リル化剤トして用いられ今ときは、カップリング段階の
温度は４０℃以下であり、そして室温で良好な結果が得
られる。

本方法は、この目的に設計されたいかなる設備でも行う
ことができる。

本発明方法のための合成機構を以下に示す。

この機構では％Ａ１％　袷及びＡ２は天然又は合成の＾
ずれもの種類のアミノ酸残基を表わす。この機構の原理
は一級アミン官能基を有す゛るアミノ酸に確立されてい
るが、同様に二級アミン官能基を含有するアミノ酸、例
えばプロリン及びヒトα中シデロリンの場合にも適用さ
れ、この場合には、以下の計画で官能基−”Ｒ２ｔ−官
能基ン間〈よって置き換えることで充分であることに質
量すべきである。

合成経路 １．　以下の機ａＫ従う、潤えばベンゾイルオキシカル
ビニル（以下２と命名する）又は三級ブチルオキシカル
ビニル（ｔ　−Ｂｏｃ　）型基による保護の如き古典的
保護剤による第一アミノ酸のアミン基の保護。

アミノ酸−寸保護化アミ°ノ酸、 Ｎ）１２−Ａ１−ＣＯＯＨ−−すＺＮＨ−Ａ１−Ｃｏｏ
ｔ（２、以下の機構に従う、飼えば酸基化物又は無水物
（Ａｃｔ　）への転化による活性化の如き古典的活性化
剤によるカルボキル官能基の活性化。

Ｚ−ＮＨ−Ａ４−ＣＯＯＨ→Ｚ−ＮＨ−Ａ４−ＣＯＯＡ
Ｃｔ　　　（Ｉ）ｔ　−Ｓｏ　Ｃ−ＮＨ−Ａ１−　Ｃｏ
ｏｔ（→ｔ　−Ｂｏｃ　−ＭＦＺ−Ａ４−ＣＯＯＡｃ　
ｔ（Ｉ）′ しかし、ある場合には、カルざキシル官能基が置換され
ている保護化アミノ酸で開始しても活性化を行うことが
できることに苗量すべきである。

この型の列は、機構： ｔ　−８ｏ　Ｃ−ＮＨ−Ａ４−ＣＯＯＴＭＳ→ｔ　−Ｂ
ｏ　Ｃ−ＮＴ（−ＡＩ　−ＣＯＯＡｃ　ｔ（１）” Ｋ従って、トリメチルシアノシラン（Ｔ）ＪＳＣＮ）　
Ｉｃ　ヨる先行シリル化によって得られるシリル化Ｎ−
保護アミノ酸である。

よる二級アミノ酸のシリル化。

ＮＨ２−Ａ２−ＣＯＯＨ＋　ＴＭＳＣＮ−＋ＴＭ８−Ｎ
Ｈ−Ａ２−ＣＯＯＴＭ８＋ＨＣＮ　　　　　（ＩＩ）、 しかし、段階１．２及び３０間の区別は純粋く形式的な
ものであることは明らかであり、この各段階レエそれぞ
れ独立に行うことができるからである。かくして、例え
ば段階６が段階１及び２に続くか又を工先行するかはど
ちらでもよい。

４、以下の機構に従う、保護化及び活性化アミノ酸（１
）又を工（■）′とシリル化アミノＩ！！！　（ＩＩ）
　、！：の間の反応によるペデチｒの形成′５ｃ年うカ
ップリング。

Ｚ−ＮＨ−Ａ４−ＣＯＯＡｃｔ＋ＴＭ８　ＮＨＡ２　　
ＣＯＯＣ００Ｔ−−ヤＺ−ＮＨ−Ａ４−Ｃｏ−ＮＨ−Ａ
２−ＣＯＯＴＭＳ＋ＴＭ８−Ａｃｔ　　（ＩＩＩ）又は
、 ｔ−８ｏＣ−ＮＨ−ＡＩ−ＣＯＯＡｃｔ＋ＴＭＳ−ＮＨ
−Ａ２−ＣＯＯＴＩＪＥ３−一→ｔ　−Ｓｏ　Ｃ−ＮＨ
−Ａ４−Ｃ０−ＮＨ−Ａ２−Ｃｏｏ−ＴＭ８＋ＴＭＳ　
ＡＣｔ（ｍ）′ ５、飼えばメタノール系媒体中又は水の存在下の処理に
よる、トリアルキルシラン基の置換及びカルざキシル基
（−ＣＯＯＨ）の形成によって得られるペプチド（１）
又は（■）′の脱シリル化。

この反応は、次の機構に従って起る。

又は ｔ−Ｂｏａ−ＮＨ−Ａ４−Ｃｏ−ＮＨ−Ａ２−ＣＯＯＴ
ＭＳ−→ｔ−ＢＯＣ−ＮＨ−Ａｌ−Ｃｏ−Ｎｆ（−Ａ２
−ＣＯＯＨ（ｆｆ）’段階５及び６は、同時に又は継続
的に行うことができる。

６、　得られるベデチげ（ＩＴ）又は（■）′の脱保護
。

この脱保護は、例えばジクロロメタン及び／又はテトラ
ヒトミフラン溶液を通して塩化水素がスを連泡させるか
、又はジクロロメタン中の三弗化酢酸を続Ａて塩の形の
ペプチドを酸性イオン交換カラムに通すことＫよる如き
、知られたいずれの方法によっても、保護剤のｔ換及び
アミン基（−Ｎ［（２）の形成により行うことができる
。この操作は以下の一般的によって表わすことができる
。

Ｈ＋ 又は、 ｔ−８００−ＮＨ−ＡＩ−Ｃｏ−ＮＨ−ＡＨ−ＣＯＯＨ
−→ＮＨ，−Ａｌ−Ｇｏ−ＮＨ−Ａ２−Ｃ’０Ｏｔ（（
Ｖ）’アミノ酸の連続的カップリングを行つことが望ま
れるときは、段階５及び／又は６は常にトエ心安としな
い。この場合には、二つの経路が可能であり、即ちカル
ボキシル末端から開始しそしてアミン末端に向かって進
行するか、又はアミン末端から開始しそしてカルボキシ
ル末端に向って進むことによる。

この第一の経路に従えは、生成物（Ｖ）は、機構朋２−
Ａｌ−（？０−ＮＥ（−Ａ、−ＣＯＯＨ＋ＴＭ８ＣＮ　
−一→ＴＩＪＳ−ＮＨ−Ａ４−Ｃｏ−ＮＨ−Ａ２−ＣＯ
ＯＴＭＳ　　　　（ｙＩ）に従ってシリル化され、そし
てこの生成物（■）が型（１）及び（Ｉ）′の保護化及
び活性化アミノ酸と次に結合される。

第二の経路に従えば、得られる生成物（ｖ）は上記の段
階１及び２に記述した機構（従って保護及び活性化され
、そして得られる生成物を式（Ｉｔ）のアミン及びカル
ざキシル官能基についてトリメチルシリル化されている
新しいアミノ酸と反応させる。

この第二の場合の機構の例は以下の如くである。

ｔ−ＢＯＣ−ＮＨ−Ａｌ−ＣＯＮＨ−に−ＣＯｏＡｃｔ
過剰のＴＭＳＣＮ ｔ−Ｓｏ　Ｃ−ＮＨ−Ａ４−Ｃ０ＮＨ−Ａ’ｌ　−Ｃ０
ＯＡｃ　ｔ＋ＴＭｓ　ＮＨ−Ａ　２−ＣＯＯＴＭＳ−→
ｔ、−Ｂｏｃ−ＮＨ−Ａ−ＣＯＮＨ−Ａ７１−ＣＯＮＨ
−Ａ２−α）ＯＩＭＳ一般式（Ａ）のトリアルキルシア
ノシラ７類ヲ用いる結果として、上に模式的く示した方
法は、天然型のにデチド類又は天然には同等のものがな
い合成にデチド類を得ることを可能にする。

本発明の方法に従って得られるこれらの公知の又は折し
いペプチド類を工、待に酵素触媒、栄養剤成分、又は獣
医用又ｔエヒト用の医薬品としての如く、種々の用途に
用いることができる。

以下の実施例は、本発明を説明するためのものである。

これらの実施列中、以下のｑＩＭを用いた。

Ａｔａ　　アラニン Ａｓｐ　　アスパルチン戚 Ｃｙｓ　　システィン Ｃ）ｔ７　　グリシン Ｍｅｔ　　メチオニン Ｐｈｅ　　フェニルアラニン Ｐｒｏ　　ｙ°ａリン Ｓｅｒ　　セリン Ｔｈｒ　　スＶオニン Ｔｈｚ　　ｆンマーチアデロリン Ｔｙｒ　　チロシン Ｖａｔ、　　ゲアリン ＯＰｉｖピゲアロイルオキシ（トリノチルアセチルオキ
シ） ○５ｕＣｃ　Ｎ−ヒトミキシスクシンイミド水利システ
ィン１．１ミリモルに１ストツパーを備えた肉厚試験管
中０．５ｄのトリメチルシアノシランを加える。この混
合物音、清泄液が得られるまで超音波（ノニケーター）
に曝す。この混合物を、アミノ酸が溶解するまで６０〜
８０℃に５分間加熱する。

Ｚ（ペンクルオキシカルボニル基）で保護されモしてＮ
、Ｎ’−クシクロヘキシルカルボッイミドの存在下にＯ
５ｕｃｃ　Ｋよって活性化され、そして前の段階で得ら
れるグリシン１ミリモルを加える。

シリル化システィン及び保護化及び活性化グリシンの間
のカップリングは、４０°ＯＫ緩かに加熱することＫよ
って促進され、そして１時間袋に室温で終結される。

この反応シエ１Ｑｄの水を加えることによって停止され
る。溶液を次に凍結乾燥されそしてこの凍結乾燥物はｎ
−へキチンと混合される。

生成物を再懸濁するためｒｃ’ｒｏｍｔの水の添加後、
生成物を円心分離しそして捕集した沈＄Ｊｔ−乾燥する
。

保護ペプチド形成の収率は、エビスーの混入なしｌＩＣ
！ｉ！質的に定量的（Ｚ−Ｇｔｙ−ＣｙｓＯＨ）　テあ
り（核磁気共鳴ＮＭＲ＜　５　ｑｂ　）　、そして保護
剤Ｚは保護に／チｒｔ−含有するジクａａメタン中Ｋｌ
化水素がスを泡立たせることによって最終的に遊離され
、ソペデチド（）ｔｙ−ＣｙｓＯ計ＨＣＺ　（ソペデチ
ドの堪化水素堪〕を形成する。

１、ｂ＝ニブリシングリシン Ｚ−Ｇｔｙ−ＧｔｙＯＨの形成は、実施例１．ａに記載
したと同じ方法によって得られるが、しかしシスティン
の代りに１ミリモルの凍結乾燥水利グリシンが用いられ
る。

Ｚ−Ａｔａ−８ｅｒＯＨの形成は実施例１．ａｌＣ記載
したと同じ方法によって得られるが、しかしシステイン
の代りに１．１ミ！Ｊモルの凍結乾燥水和セリン、及び
グリシンの代ＱＩＣｊミｌＪモルの、ｔ−Ｂｏｃで保護
されそして活性化されたフェニルアラニンが用いられる
。

ｔ−Ｂｏｃで保護された基は、トリフルオロ酢酸による
処理、続く蒸発によって遊離される。

１、ｅ　：デロリンーフエ二ルアラニンｔ−Ｂｏｃ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｈｅ　ＯＨの形成）工、同じ方法によって、し
かしシスティンの代１ｃ１．１ミリモルの凍結乾燥水相
フェニルアラニン及びグリシンのｆｌにｔ−８００によ
って保護されそして活性化されたデａす７１ミリモルを
用いて得られる。

合、 １．１ミリモル（１１６’／Ｉｆ）の粉末水和セリンを
６０〜８０℃に５分以内加熱することによって１ａのト
リメチルシアノシランφＣ溶解する。

この混合物に、１［］＃Ｉｌのゾクａａメタン又ナエテ
トラヒドロフラン中の１ミリモル（３６２η）のｔ−Ｂ
ｏｃ−Ｐｈｅ　Ｏ５ｕｃｃ　（ｔ−Ｂａｃ基によって保
護されモしてＮ−ヒトミキシスフシイミドによって活性
化されたフェニルアラニ／）の溶液を加える。

６０分後、活性エステルは消失した。

この混合物を、５ｇのシリカデルを仕込んだがラスシン
ターを通して注入し、これは予め１ｄの水で湿潤されそ
して２０嵯のツクａａメタンで２回洗滌される。

１化水素を、濾液を通して３０秒間泡立たせ、濾液は次
に蒸発される。

捕集されたノペデチ−＋１を、室温で２ｄのトリメチル
シアノシラン中に再溶解する。

０．９８ミリモル（２７５ダ）のＺ４ｔｙ　Ｏ８ｕｃｃ
（２基によって保護されモしてＮ−ヒドロキクスフシイ
ミド〈よって活性化されたグリシン）を、次に１［１ｄ
１７）ククロロメタンにＭＬる。

室温で５０分子ｆｌ、ＩＯＮ／の水を加えることによっ
て反応を停止し、そして捕集した沈澱物を乾燥する。

Ｚ−Ｇｔｙ−Ｐｈｅ−８ｅｒ　ＯＦＩの収−ｉｌ’）Ｘ
、８８　優（Ｚ−ＧｔｙＯ８ｕｃｃ　Ｋついて計算され
た）（５５０％’）であり、・生成ｒＰ！ＩｆＸＮＭＲ
規準のすべてに従って純粋である。

１５０９（１，１ミリモル）の水利アスパルチンｇＩｌ
ｔ−１８０℃で６分間中に肌５４のトリメチルシアノク
ランに溶解する。

５４６％’（１，０ミリモル）のｔ−８ｏｃ−ＭｅｔＯ
８ｕｃｃを加えそしてこの混合寄金４０℃に加熱する。

１時間ｆｆｌ、２ｍのアセトニトリル中の２５０ダの水
の混合ｑ＊ｆ、加える。生成物を、上記実施的２に於け
る如く５１の８１０２上で濾過し、そして得られる生成
物ｔ−９０％のアセトニトリル及び１０襲のメタノール
を含有する溶液５３ｓｊで溶出する。

残渣を蒸発する。

これは、寺量のＮ−ヒドロキシスクシンイミド及びｔ−
Ｂａｃ基によって保護された所望の７ベデチドを含有す
る。

得られるノペデチドを工、以下の縮合段階に於ける如く
用いられる。

第２段階：　ｔ−Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−ＡｓｐＯＨ
第１段階のｔ−Ｂｏｃゾベデチｒの脱保護は、０．５ｄ
のトリフルオロ酢酸で１時間室温で処理することによっ
て行われる。

この溶液を次に蒸発させそして残渣、を１．Ｏｄのトリ
メチルシアノシラン中にとる。

１当量のｔ−ＢｏＣ−Ｐｈｅ　Ｏ５ｕｃｃを加える。

−カップリングは、ソペデチＶのための第１段階につい
て上記した如く行われる。

ｔ−Ｂｏｃによってトリ（デチドが９５チより高い収率
で得られる。

第３段階：　ｔ−Ｂａｃ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ａ
ｓｐ　ＯＨ上記の方法を縮合段階でｔ−８ａｃ−Ｐｒｏ
Ｏ５ｕｃｃを用いて繰り返し、そして第１段階につｈて
記載した如く操作を繰り返す。

形成されるに一ヒトａキシスクシンイミドを工、０．５
　Ｒ１のトリメチルシアノシランを加えることくよって
トリメチルシリル化され、モして次に真空下に蒸発され
る。

ｌ！Ｊ直を水で処理しそして次に真空乾燥する。

純粋な保護テトラにデチドが定量的収率で得られる。

方法を工実施列６に記載した如くであり、最初の二つの
段階は同じであり、しかし第三段階ではｔ−８ｏｃ−Ｔ
ｈｚ−Ｏ８ｕｃｃ　ｆｊｉ　ｔ−Ｂｏｃ−ＰｒｏＯ８ｕ
ｃｃの代りく用いられる。

テトラペプチドの殆んど定量的収率が得られる。

生成物はＮＭＲ分析に従って純粋である。

ｔ−ＢＯＣ保護剤についてのウレタン異性体の４０：６
０混合物が０℃で観察される。

４４９ダのソＺ−ＴｙｒＯＦ（（’）　Ｚと命名サレル
ソヘンクルオキシ力ルざニル型基によって保護された水
利チロシン）を５ｄのテトラヒドロ７ランに溶解する。

０．０９６　ａ７のピリシン及び０．１７３ａ／のトリ
エチルアミンを加え、保護されたそして活性化アミノ酸
を得る之めに１続いて一１０℃で０．１４４ｍ１ノトリ
メチル酢酸クロライｒ（ピバロイルクロライド、Ｐｉｖ
−Ｃｔ）を加える。

１分後、遊離カルざキシル状で乾燥されたイオン交換体
（７７バー　９イｌ−”ＩＲＣ５０Ｈ）１ｆｌを、過剰
のピバロイルクロライドを捕収するために加える。

この混合物は、−１０℃で１分間攪拌される。

１０７ηのＤ−Ａムを、５ｔｌのトリメチルシラノシラ
ン中加熱しながら溶解し、シリル化アミノ酸を得、そし
てこれを上記混合物に加える。

得た混合物を、室温くもって行きそしてこの温度１ｃ３
０分間保持する。

イオン交換体を濾別しモして濾液を凍結乾燥する。

２ｄのメタノールを加え、そして混合物を蒸発する。ｄ
ｉＺ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｔａ−Ｇｔｙ　ＯＨを得、そして
これを工そのまま用いられる。

これを活性化するために、第１段階で得られる保護化ノ
ベデチドを、０．０９６ｍのビリクン及び０．１７５Ｍ
のトリエチルアミン中〈溶解し、続いて０．１４４１７
のピバロイルクロライドを添加する。

１分後、遊離カルざキシル状で乾燥されたイオン交換体
１１を加え、そしてこの混合物を−１（７’０で１分間
攪拌する。

シリル化を行うため？Ｃ，９０’ｌ１９のグリシンを５
ｄのトリメチルシアノシランに溶解する。得られるこの
シリル化生成物を混合物に加え、これを室温１／Ｃ５０
分間保持する。

このイオン交換体を濾別し、濾液を凍結乾燥しセして２
ｄのメタノールをｍｔ＝る。

蒸発後、トリペプチドゾＺ−Ｔｙｒ−Ａｔａ−ＧｔｙＯ
Ｈｆ！、エチルエーテル／酢酸エチル混合物中で急速に
結晶化し、ＮＭＲ分析で純粋であるトリペプチドを与え
る。収率は６８チである。

実施例６ （Ｍｅｔ、５）　−工ｙケファリｙｔ’ｚ、式Ｔｙｒ−
Ｇｔｙ−Ｇｔｙ−Ｐｈｅ−！Ｊｅｔのにンタペデチドで
ある。

Ｌ７！ＩＭ（１０ミリモル）のｔ−Ｂｏａ−ＧｔｙＯＨ
（ｔ−Ｂｏａ基で保護された水利グリシン）を、１．６
Ｊ（２０ミ’ｊモル）のピ’ＪＰン及ヒ１．Ｉ：１（１
０ミリモル）のトリエチルアミンと一緒Ｖｃ２ｏＲ１の
乾燥テトラヒドロ７ランに溶解する。、この溶液を一１
０℃に冷却し、そして活性化段階を実施するために、　
　１．２２ｄ（１０ミ’）モル）リピパαイルクロライ
ドをこれに加える。

１分後、グリシンをシリル化する九めに、（５Ｒ１のト
リメチルシアノシラン及び１ｏＲ１のｎ−ヘキサン中に
予め溶過した７５０ダ（１０ミ！７モル）のＨ−Ｇｔｙ
　ｏａを加える。

この混合物を６０℃を越える温度で蒸発する。

２０ｄのトルエン及び１ｄのトリメチルシアノシランを
加え、そしてその混合物を、過剰のピバロイルクロライ
ドを除去するために真空下に再び蒸発させる。

残渣を２０４１４のメタノールｌＣ溶解し、そして次ｌ
Ｃ蒸発する。

この残渣を２０ｍ１のトルエンに溶解しモして次に蒸発
する。

得られたソベデチドｔ−Ｂｏｃ−Ｇｔｙ−（）ｔｙＯＨ
７ｆｒ：ビバロイルクａライドで直接活性化しモして次
に上記の如くシリル化ＰｈｅＯＨとカップリングさせる
。

得たトリペデチＦ　ｔ−Ｂｏｃ−Ｇｔｙ−Ｇｔｙ−Ｐｈ
ｅ　ＯＨを活性化し、そして？′ＫＫ上記と同じ条件下
にシリル化ＭｅｔＯＨトカツデリングさせる。

この最終残渣をｉ　ｏ　ｏ　＃Ｉｔの酢酸エチル及び１
０ｍ１のエタノールに溶解し、そして次Ｋ　５０　ｍｌ
の５０チ濃度クエン酸水溶液で洗滌する。

酢酸エチル相を硫酸マグネシウム上で乾燥しモして次に
蒸発する。残渣を工酢酸エチル／エチルエーテル混合物
中で再結晶する。

ＮＭＲの規準に従って純粋なテトラヒドロｒｔ−８ｏｃ
−Ｇｔｙ−Ｇｔｙ−Ｐｈｅ−ＭｅｔＯＦ（ｄＥ得られる
。

収率は６５％（５，２５Ｆ　）である。

第２段ｆｑ　：　（Ｍｅｔｑ）−エンケファリンの合成
第１段階で得られるｔ−Ｂｏａ基で保護されたテトラペ
プチド５１０’ｌ＋９（１ミリモル）を、容量テ１５チ
のエタンチオールを含有するトリフルオロ酢ｒｌｌ　（
Ｔｆａ）　２　ｍｌ　ＶＣｆｌ＋解する。

この溶液を室＠　ＶＣ２時間保持し、そして次に４０℃
１５分間加熱する。

蒸発後、Ｔ　ｆａ−Ｈ３ＮＯ−Ｇｔｙ−Ｇｔｙ−Ｐｈｅ
−ＩＪｅ　ｔ　ＯＨの定量的形成力１得られる。

この生成物Ｋ、４１５９１９（１，１ミリモル）のｔ−
Ｂｏｃ−ＯＨ−Ｔｙｒ−Ｏ５ｕｃｃを２４のトリメチル
シアノシラン及び２ｄのテトラヒドロフランと共に加え
る。

テトラにブチげ＋ｉＬを次第に可溶化され、そして次Ｋ
Ｏ℃で真空下撹拌しながら超音波に６０分間曝し、そし
てそれＫよって清面なｌＷ液が得られる。

室温で２時間後、反応１工完了しそして混合物は固化す
る。

この固体を５　ｉｎｌのテトラヒドロフランに溶解する
。

１ｙのアミノ７°ｃ１ビル−シリカダル（５，４０μ。

５　ｍ　＠ｆ　ＮＨ２／　Ｉ　）を加えることによって
、過剰のｔ−Ｂｏａ−（ＯＴＭ８）Ｔｙｒ−０８ｕｃｃ
　ｆ除去する。

６０分後、生成物を濾過する。

濾液を２０ｄのメタノールで処理する。

生成物を蒸発する。

この第２段階で得られる収率を工、９５チである。

ｔ−８ａｃで保護されたペンタペプチドを、酢酸エチル
／エチルエーテル混合物中で再結晶する。

σＭＨの基準に従って純粋であるペンタベデチｆが得ら
れる。合計収率は６０チである。

ペンタペプチド（Ｍｅｔ５〕−エンケファリンをトリフ
ルオロ酢酸で処理することによって脱保護し、続いて真
空下に蒸発し、対応する頃が得られる。

（Ｌｅｕ５〕−−Ｃ７ケフアリンは、式Ｔｙｒ−Ｇｔｙ
−Ｇｔｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕのペンタペプチドである。

この合成は、上記実施列６．ａに記載したと同様ニシテ
、シかしメチオニンをロイシンで置換して達成される。

合成 実施例７は本発明に従って実施し、実施例７Ｒハ、トリ
メチルシアノシランの代りにトリメチルクロロシランを
用いる実施列７に対する比較例である。

５ミリモルのトリエチルアミン、５ミリモルのピリシン
及び２０ミリモルのテトラヒドロフラン中に溶解した５
ミリモルのｔ−Ｂｏｃ−ＧｔｙＱＥ（（ｔ−Ｂｏａ基に
よって保護された水利グリシン）を５００　ｍｌフラス
コにいれる。

′この溶液を一１５℃に冷却し、そしてこれに攪拌しな
がら５ミリモルのビバロイルクａ５イドｆ加え、活性化
段階を行う。

２　分ｅｌｋ、Ｆ（−Ｇｔｙを６ｄのトリメチルシアノ
シラン及び５ｄのｎ−ヘキサン中に溶解することＫよっ
て得られる５、５ミリモルの過シリル化グリシンを加え
る。

この溶液を室温に戻し、そして次に揮発性シリル化成分
を分離するために減圧下に蒸発する。

この溶液ｔ５０ｍｌのトルエンで処理しモして次に乾燥
するまでｉ！Ａ発し、これｔ−一に５０Ｒ１のトルエン
でもう一度繰り返す。

残渣全メタノール／トルエン（１：１）ｆｉ合物に溶解
しモして次に蒸発させる。

この残渣を再び５０１Ｌｌのトルエンで２度処理し、モ
して次に過剰メタノールの全痕跡を除去するため忙乾燥
状ゆまで蒸発する。

得られるノペデチドｔ　−Ｂｏ　ｃ−Ｇｔｙ−ＧｔｙＯ
Ｈをピパロイルクロライげで直接活性化し、モして次に
上記の如くシリル化ＰｈｅＯＨとカップリングさせる。

得られるトリペプチドｔ−Ｂｏｃ−σｔｙ−Ｇｔｙ−Ｐ
ｈｅＯＨを活性化し、そして欠く上記と同じ条件下にシ
リル化ＭｅｔＯＨとカップリングさせる。

蒸発での最終残渣は、ｔ−Ｂｏｃ−Ｇｔｙ−Ｇｔｙ−Ｐ
ｈｅ−ＭｅｔＯＨを含有する。

この後者のもの？１００ｄ酢酸エチルと２０ｄメタノー
ルに溶解し、そして水及び燐酸（−約２）で次に連続的
に洗滌する。

蒸発での残渣を、最初ククａロメタン中、そして矢に酢
酸エチル／エチルエーテル混合物中で再結晶する。

ＮＭＲの基準に従って純粋なテトラヒドロｒが得られる
。

収４は６６％である。

合成 第１ＲＦ４：各アミノ酸のシリル化 ａ）メチオニン ツゲイツターイオン状のメチオニン５ミリモルに、２ｎ
ｄのトリメチルクａａシラン中の１０ミリモルのトリエ
チルアミンを加える。この混合物Ｋ、２５ｍの乾燥トリ
クミロメタンを加える。この混合物を清漬な溶液が得ら
れる迄加熱する。

形成されるトリエチルアミン壇化水素ｆｘを、乾燥トル
エンでの沈＃後窒素下に濾過することによって除去する
。

濾過後、溶液を約２０１／の容邊まで減らしそしてその
まま用＾られる。

メチオニンのシリル化は、この方法によって室温で６時
間で達成される。

ｂ）グリシン グリシンのシリル化は、上記実施ｆＭＪａ）Ｉｃ記載し
たメチオニンのそれと同様にして行われるが、しかしこ
のアミノ酸は！！ｉ段階を必要とする。

Ｃ）フェニルアラニン フェニルアラニンのシリル化は、上記実施ｆｌ　ａ）Ｋ
記載したメチオニンのそれと同様にして行われるが、し
かしこのアミノ酸は還流段階を必要とする。

第２段階：活性化 ５ミリモルのトリエチルアミンに溶Ｍした５ミリモルの
ｔ−Ｂｏｃ−ＧｔｙＯＨ、５ミリモルのビリラン及び２
０ｍのテトラヒドロフランを、５００ｄフラスコにいれ
る。

この溶液を一１５℃に冷却し、そして５ミリモルのピパ
ロイルクロライドをそれＫＮ拌しながら加える。

２分凌、嬉１段階で得られる過シリル化グリシン５．５
ミリモルの溶液を加える。

この溶液を室温に戻し、そして次〈揮発性シリル化成分
を分離する九めに減圧下に蒸発される。

この溶液を５０１１１のトルエンで処理し、モして次に
乾燥するまで蒸発し、これは更に３０ｄのトルエンでも
う一度繰り返す。

残渣をメタノール／トルエン（１：１）混合物に溶解し
、これを次に蒸発する。

この残渣を再び５０ｍ１のトルエンで、２度処理し、そ
して次に過剰メタノールの全痕跡を除去するために乾燥
状恨まで蒸発する。

一蒸発での残渣は、続くカップリング段階にそのまま用
＾られる。

同じ方法をグリシンの代りに過シリル化フェニルアラニ
ンの溶液でフォローし、モして次に過シリル化メチオニ
ンの溶液で実施し、このｔａ合ノａ性化段ｖ４は一１５
℃で１０分間必要とする。

第５段階：カップリング 蒸発での最終残渣は、ｔ−Ｂｏｃ−Ｇｔｙ−Ｇｔｙ−Ｐ
ｈｅ−ＭｅｔＯＨを含有する。

この後者のものは１００４の酢酸エチル及び２ｎｄのメ
タノールに溶解され、そして次に水及び燐＆（−約２）
で連続的に洗滌される。

蒸発残渣を最初にソクロａメタン中、そして次いで酢酸
エチル／エチルエーテル混合物中で再結晶する。

悶ＭＲ規準で純粋であるテトラベデチーが得られる。

収！！は２８％である。

実施例７と実施例７Ｒ（比較例）の比較は、得られる収
率が明らかに異なることを示して粘り、更に、実施１列
７Ｒを行うことは実施例７よりも複雑な操作（加熱、濾
過、蒸発）をつなげる必要があジ、更に特に実施例７Ｒ
では、トリエチルアミン塩化水素（塩）の形成が尼介な
ことであり、この生成物はトルエンの添加後濾過によっ
て除去しなければならず、そしてこれらの操作は非常に
乾菓した雰囲気での操作条件を必要とする。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）トリアルキルシランとして、一般式（Ａ）▲数式
   、化学式、表等があります▼（Ａ） （式中Ｒ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿３は、互いに独立に、同
   じか又は異なつてもよいそして１〜３炭素原子を含有す
   るアルキル基を示す。） のトリアルキルシアノシラン類を用いることを特徴とす
   る、トリアルキルシラン誘導体を用いる、任意に組合わ
   された及び／又は置換されたアミノ酸からペプチド類を
   合成する方法。
2. （２）アミノ酸間のペプチド結合を形成するためにトリ
   アルキルシアノシランを用いることを特徴とする、上記
   第１項記載の方法。
3. （３）三つのアルキル基Ｒ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿３が１
   又は２炭素原子を含有することを特徴とする上記第１又
   は２項記載の方法。
4. （４）三つのアルキル基Ｒ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿３が同
   じであることを特徴とする、上記第３項記載の方法。
5. （５）用いられるトリアルキルシアノシランがトリメチ
   ルシアノシランであることを特徴とする、上記第４項記
   載の方法。
6. （６）アミノ酸ミリモル当り２０ｍｌ〜０．０１ｍｌの
   トリアルキルシアノシランを用いることを特徴とする、
   上記第１〜４項記載の方法。
7. （７）アミノ酸ミリモル当り５〜０．１ｍｌのトリメチ
   ルシアノシランを用いることを特徴とする、上記第５項
   記載の方法。