JPH03173898A

JPH03173898A - 細菌コラゲナーゼの禁止剤として有用な新規ペプチド誘導体

Info

Publication number: JPH03173898A
Application number: JP2307366A
Authority: JP
Inventors: Vincent Dive; ヴァンサン・ディヴ; Flavio Toma; フラヴィオ・トマ; Athanasios Yiotakis; アタナスィオ・イオタキ
Original assignee: Commissariat a lEnergie Atomique CEA
Current assignee: Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
Priority date: 1989-11-15
Filing date: 1990-11-15
Publication date: 1991-07-29
Also published as: FR2654430B1; FR2654430A1; US5389612A; DE4036130A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】企呈上旦机址分立本発明は、亜鉛金属プロテアーゼのクラスに属する細菌
コラゲナーゼの禁止剤として有用な新規ペプチド誘導体
に関するものである。

更に詳細には、本発明は上記コラゲナーゼの活性部位の
亜鉛原子と強力に相互反応可能なホスホンアミドキレー
ト基を有するポリペプチドの誘導体に関するものである
。

ｋ来夏枝先コラーゲンは多細胞真核生物の細胞外マトリフクスの主
成分である。従ってコラーゲンは皮膚、腓、骨、軟骨お
よび組織の主構成成分であり、そして人体の全たん白質
の約４０％を占める。

コラーゲン分子はほとんどのプロテアーゼの作用に対し
て非常に強い抵抗力を有するが、これに特異性のあるプ
ロテアーゼ、すなわちコラゲナーゼによっては分解され
てしまう。

これまで２種類の異なるクラスのコラゲナーゼが同定さ
れており、そしてこれらはコラーゲン分子におけるその
切断特異性により特定される。この内第１のコラゲナー
ゼクラスは高等生物のコラゲナーゼから戊るものであり
、これらコラゲナーゼはＧｌｙ−＋１ｅ又はＧｌｙ−Ｌ
ｅｕ対を含有するペプチド結合を加水分解する。一方、
その第２のクラスは細菌コラゲナーゼから成るものであ
り、これらは配列Ｘ−Ｇｌｙを有するすべてのペプチド
結合を組織的に加水分解し、そして一般にすべてのコラ
ーゲン分子を分解する。

細菌コラゲナーゼは亜鉛金属プロテアーゼのクラスに属
し、そしてその基質のペプチド結合の加水分解反応に直
接関与する活性部位に亜鉛原子が存在し、この亜鉛原子
の存在故にこれら酵素に対する競合禁止剤の開発が可能
である。この様な禁止剤はペプチドの誘導体であって、
これらは酵素の結合剤部位と特異的に相互反応する機能
を有するペプチド部分と、その活性部位の亜鉛原子と強
力に相互反応するキレート基とを有している。

近年になって、亜鉛プロテアーゼ群に特異的なこの酵素
−基質相互反応モデルから、重要な薬理的性質を有する
強力な禁止剤の開発が可能となって来た。例えば、エン
セフアリナーゼとその変換酵素の禁士剤があり、例えば
ＴｈｏｒｓｅＬｔ等の’Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　Ｊ第７９巻（１
９８２年）第２１７６−２１８０真に記載のものが挙げ
られる。しかしながらこれらの化合物は細菌コラゲナー
ゼに対しては非常に弱い活性しか持っていない。このこ
とはこれら３種の亜鉛プロテアーゼ（エンセフアリナー
ゼ、変換酵素および細菌コラゲナーゼ）の各々はそれぞ
れ異なる特異性を有することから説明出来る。

細菌コラゲナーゼについては、その近年の研究によりこ
れまでに確立された仮説に基づいてこの種のクラスのプ
ロテアーゼについてもキレート基すなわちチオール、ケ
トン又はホスホルアミドを有する環ペプチド禁止剤を作
成することが出来ることがわかって来た。

例えば、ＹｏＬａｋｉｓ等（’１Ｅｕｒ、　Ｊ、Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ、　Ｊ第１６０巻、４１３−４１８頁（１９８
６年）、およびｒｌＥｕｒＪ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　」第
１７２Ｓ、７６１−７６６Ｑ　（１９８８年））は化合
物１ｔｓ−Ｃ）１２−ＣＨｚ−Ｃｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇお
よび０３−ＣＩ１２ＣＩ！、−Ｃｏ−Ｐｒｏ−Ｗａｒが
ＡｃｈｒｏｍｏｂａｃＬｅｒ　ｉｏｐｈａｇｕｓおよび
ＣＩｏｓＬｒｉｄｉｕｗ　ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕ−に
より産生されるコラゲナーゼを抑制することを立証した
。ここで彼らにより得られた該化合物の禁止定数にｉは
４００　Ｘ　１０−”および２１０Ｘ１０””Ｍである
。

又、Ｇａ１ａｒｄｙ等（ｒ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
　Ｊ第２２巻、１９号、４５５６−４５６１真（１９８
３年）および米国特許第４．５５６，０３４号）は、ホ
スホリル基を有するジペプチドおよびトリペプチドがＣ
ｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍのコ
ラゲナーゼを抑制することを立証した。

この場合に、最高のイソアミル化合物−ｐｏｔｃｒｙＰ
ｒｏ−Ａｌａについてその禁止定数Ｋｉが２０Ｘ１０−
ｂＭである。しかしながらこれらのペプチドは変換酵素
のより強力な禁止剤であるために、これらはコラゲナー
ゼに対しては特異性がない。

Ｍｏｏｋｈｔｉａｒ等（ｒＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」
第２７巻、４２９９−４３０４頁（１９８８年））はケ
トン機能を有するペプチド誘導体がＣＩｏｓｔｒｉｄｉ
ｕ＋ｍ　ｈｉｓＬｏｌｙｔｉｃｕｍコラゲナーゼを抑制
することを示した。この場合に、その禁止定数Ｋｉは最
高の化合物（シンナモイル−Ｌｅｕ　−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ
−Ａｒｇ）についてｌＸｌ０−＆Ｍである。この様に上
記の公知の禁止剤の中にはどれも約ｌナノモルの禁止定
数を示すものはなかった。

しよ゛と　る　　占そこで他のより活性な禁止剤、特にホスホリル基を有す
る禁止剤群の中のより活性な禁止剤を見出すために更に
研究を続けた。この様な化合物の利点は、これらはコラ
ゲナーゼ、Ｊ、９？′ｒの遷移状態と完全に類似した状
態をとり得ることモして槌ってその酔素と非常に強力に
相互反応し得ることである。

更に又、チオール基を有する化合物の場合と違って、こ
れらの化合物はそのホスホリル基の両側において変形可
能であり、従って該化合物のｔ１１１性および選択性の
両方を支配する因子をより更に検討することが出来る。

ｆｉ！１ｆｉｆＪＬｉ　　るｔ−めの　段従って本発明
は、これまでに知られた禁止剤よりもより強力な細菌コ
ラゲナーゼの禁止剤である新規ペプチドの誘導体に関す
るものである。

すなわち本発明は下記式（１）で表わされる新規ペブナ
ド講導体を提（Ｊｊするものである。

式中、Ｒ１はアリール基およびアラルキル基から選択さ
れた基を表わし、これらは非置換であるかあるいはその
アリール部分においてハロゲン、トリフルオロメチル基
、ｃ、−ｃ、アルコキシ基、ＣＩ　　Ｃａアルキル基、
Ｃ，−Ｃ，アルカノイルオキシ基、０２Ｃ，カルボニル
オキシアルキル基、二１−ロ基、カルボキシル基又はシ
アノ基から成る群から選択された少なくとも１つの置換
基によって置換されており、あるいはＲ１は式％式％で表わされる基を表わし、ここでＲ’はα−アξ）酸の
側鎖を表わし、Ｒ７は単結合であるかあるいは式　　　
　　　　　　（ＣＯ−ＣＩｌ　−Ｎ１１）。

９で表わされるα−アミノ酸又はペプチド由来の残基であ
って、ここでＲ９はα−アミノ酸の側鎖であり、ｎは１
〜２の整数であり、そしてＲ９はｎがｌより大きい時に
は互いに異なるものであっても良く、そして該残基とし
てのＲ７はそのＣＯによって式中のＮ１１に粘合してお
り、Ｒ８はα−アミノ酸のＮ−末端をブロンクする基で
あるか、あるいは非置換であるかあるいはハロゲン、ト
リフルオロメチル基、Ｃ１Ｃ４アルコキシ基、ＣＩ　　
Ｃ４アルキル基、Ｃ，−Ｃ。

アルカノイルオキシ基、Ｃｔ　　Ｃｓカルボニルオキシ
アルキルノ基から威る群から選択した少なくとも１つの置ｌｆｉ
　基によって置換されたアラルキル基を表わし；Ｒ２は
式％式％で表わされるプロリン、ヒドロキシプロリン、チアゾリ
ジンおよびデヒドロプロリンから成る群から選択したα
−アミノ酸由来の２価の残基であって、これはそのＮ８
部分により式中のＣＯに粘合しており；Ｒ１は水素原子
又はＣＩ　　Ｃａアルキル基であり：Ｒ４はＣＩ　　Ｃ
ｓアルキル基であるかあるいはα−アミノ酸の側鎖であ
り；そしてＲ５およびＲ５’は互いに同一であっても又は異なって
いても良く、それぞれ水素原子、金属、Ｃ，　−Ｃ。

アルキル基又はベンジル基であり；但しｌｉｔが非置換のアリール基又はアラルキル基であ
る場合には、Ｒ３は水素原子でありそしてＲ４はｎブチ
ル基である。

これらのペプチド誘導体においてそのＲ１をｆｆ１１尺
することにより、これまでにＧａｌａｒｄｙ等により得
られた禁止剤化合物（そのＲ１に相当する基は例えばエ
チル又はイソアミル基の様なアルキル尽である）よりも
より強力な禁止剤を得ることが出来る。

この様に本発明に従ってＲ１としてアルコール基又はア
ラルキル基、好ましくはそのアリール部分が置換された
アラルキルそのＲ１とコラゲナーゼの副部位Ｐｌとの間の相互作用
が改再され、これによりより強力な禁止剤を得ることが
出来、そしてアルキル基ならびにそのアリール部分上に
導入する置換基の種類を適当に選択することによりその
活性を特別に調整することが出来る。

又、ペプチド誘導体の禁止能は、１個又は２（固のアミ
ノ酸類似体を打する式％式％で表わされる基をホスホリル基に４人することにより高
めることが出来る。この場合、りん原子に置換している
基はアミノ酸であり従ってこれらは遷移状態のコラゲナ
ーゼ型基質の構造に極めて類似したものとなる。

本文中「アリール基」とは、例えばＯ，ＳおよびＮの様
なヘテロ原子を１個又はそれ以上含有していても良い複
素環式又は炭素環式芳香核を有する系を意味する。これ
らのアリール基は通常３〜ＩＯ個の炭素原子を有する。

アリール基の例としてはフェニル、ナフチル、フリル、
チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピリジル、ピリミ
ジル、インドリル、キノリル、オキサシリルおよびイソ
オキサシリル基を挙げることが出来る。

又本文中の「アラルキル基Ｊとはアリール基とアルキル
基とから構成される基を意味する．ここでアリール基は
上記した種類のもので良い。又アルキル基は直鎖状でも
又分枝状でも良く、そして好ましくは１〜４個の炭素原
子を有するものである。

本発明においてアラルキル基はその了りー山部分上にお
いてハロゲン原子（例えばふっ素、塩素、臭素又はよう
素原子）、トリフルオロメチル基、Ｃ．−Ｃ．アルコキ
シ基、（：＋　　Ｃａアルキル基、ＣＩ−Ｃ４アルカノ
イルオキシ基、Ｃ．−Ｃ．アルキル部分ををするカルボ
ニルオキシアルキル基、ニトロ基、カルボキシル基およ
びシアノ基から成る群がら選択された少なくとも１個の
置換基により置換されていても良い。

本発明においてＲ１がアリール基である場合には、これ
も又同様に上記の基により置換されていても良い。

本文中「αーアミノ酸Ｊとは通常たん白質中に作在しそ
して標準的なアミノ酸の名前で知られている２０のα−
アミノ酸および類似体を言うものである。これらアミノ
酸の側鎖としては、直鎖状および分枝状アルキル社、ヒ
ドロキシアルキル基、カルボキシアルキル基、アラルキ
ル基、アミノアルキル基、カルボキシアミドアルキル基
、メルカプトアルキル基、フェニルアルキル基、ヒドロ
キシフェニルアルキル基、グアニジノアルキル基、イミ
ダプリルアルキル基、インドリルアルキル払およびピロ
リジニル基が挙げられる。

使用可能なアミノ酸の例としては、アラニン、アルギニ
ン、アスパラギン、アスパラギン酸、ンステイン、グル
タミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロ
イシン、ロイシン、ノルロイシン、リシン、メチオニン
、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、
セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリ
ン、ニトロフェニルアラニン、ホモアルギニン、チアゾ
リジンおよびデヒドロプロリンが挙げられる。

本文中「α−アミノ酸のＮ−末端をブロックする基」と
は、アミノ酸およびペプチドのアミノ機能をブロックす
るのに有用な全てのブロック基を意味するものであり、
例えばＬ−ブトキシカルボニル、ベンゾイルオキシカル
ボニル、シンナモイル、ピバロイルおよびＮ−（９−フ
ルオレニル−メトキシカルボニル）基が挙げられる。

Ｒ″′およびｌｌ’５として使用可能な金属は特に薬学
的に許容される金属であって、例えばナトリウム又はリ
チウムの様なアルカリ金属が挙げられる。

本発明の第１の態様として、Ｒ１はアリール基およびア
ラルキル基から選択された基でありそしてこれらは非置
換であるかあるいはそのアリール部分においてハロゲン
、トリフルオロメチル基、ＣＣ４アルコキシ基、Ｃ，−
Ｃ．アルキル基、ＣＩ　　Ｃ４アルカノイルオキシ基、
ＣｚＣｓカルボニルオキシアルキル基、ニトロ基、カル
ボキシル基又はシアノ基から成る群から選択された少な
くとも１つの置換基によって置換されているものである
。

この態様の第１の形態として、Ｒ１が非置換のアリール
又はアラルキル基であり、そしてこの場合Ｒ３は水素原
子でありそしてＲ４はｎ−ブチル基である。

この様な誘導体の例としては、前記式（１）においてＲ
１がフェニルエチル又はフェニルメチル基である化合物
が挙げられる。

本発明のこの第１の態様の第２の好ましい形態は、Ｒ１
がそのアリール部分において上記した置換基の内の少な
くとも１つにより置換されたアリール基又はアラルキル
基を表わす場合である。この様な基の例としてはニトロ
フェニルエチルおよびトリフルオロメチルフェニルエチ
ル基が挙げられる。

この好ましい形態において、Ｒ３およびＲ４は異種のも
のであっても良い。従ってペプチド誘導体の下記式％式％の末端部は異なるアジノ酸に相応するものであって良い
２例えば、これはノルロイシンであることが出来、そし
てこの場合Ｒ３は水素原子でありそしてＲ４はｎ−ブチ
ル基である。

本発明のこの第１の態様の２つの形態において、Ｒ２は
プロリン、ヒドロキシプロリン、チアゾリジンおよびテ
トラヒドロフ゛ロリンがらｉ！１尺したアミノ酸由来の
基である。すなわち、Ｒ２は下記式で表わされる基に相
応するものである。

Ｏ１＋好ましくはＲ１はプロリン由来の残基であって下記式で
表わされるものである。

本発明のこの第１の態様の２つの形態において、Ｒ５お
よびＲ１５は水素又は金属原子、又はアルキル又はベン
ジル基である。金属原子としては例えばリチウム又はナ
トリウムが挙げられる。

ここで使用するアルキル基は直鎖状又は分枝状のどちら
でも良く、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する。

本発明の第２の態様としては、Ｒ１は弐ＣＩｌ　−Ｎｌ
ｌ　−Ｒ’　−Ｒ’ ｊ・で表わされる基である。

この場合、Ｈｈはアミノ酸の側鎖であり、例えばメチル
、ベンジル又はイソブチル基である。

Ｒ？は単結合又はアミノ酸又はペプチド由来の残基であ
る。誘導体の構造をその抑制対象の酵素に適合させるた
めに多くのアミノ酸を使用することが出来る。例えば、
Ｒ７は式で表わされるプロリン由来の残基であって良い。

本発明のこめ第２の態様において、Ｒ′はα−アミノ酸
のＮ−末端をブロックする基、例えばベンジルオキシカ
ルボニル基である。又Ｒ８は場合により置換されていて
も良いアリール又はアラルキル基であっても良く、その
例としては第１の態様において上記した基を挙げること
が出来る。

本発明のこの第２の態様において、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ基、
Ｃ２−ＲゝおよびＲ７５は第１の態様において上記した
種々の基又は原子から成ることが出来る。例えばＲ２は
プロリン由来の基であり、Ｒ３およびＲ４はノルロイシ
ンに相応する基であり、Ｒ５はＨ，ＬＬ、　Ｎａ又はベ
ンジル基であり、そしてＲＩＢはＨ，Ｌｉ、又はＮａで
ある。

本発明のこの第２の態様において、従ってＲ６およびＲ
１をこれらがホスホリル基の他の側において別のアミノ
酸を有する様に、そして他の亜鉛金属プロテアーゼに対
するそのペプチド誘導体の選択性を向上させる様に選択
することが可能である。

細菌プロテアーゼに対して、これらのペプチド誘導体は
上記の本発明の第１の態様の誘導体とは異なる運動学的
性質を有する。すなわち、前者は酵素の活性部位に非常
にゆっくりと固定され、しかしながらその活性部位にお
いて非常に長い滞留時間を有し、従ってこの複合体の半
減期は例えば１２〜２５時間である。この様にこれら誘
導体は非常に限られた動作可逆性を有するという特徴が
ある。

更に又、これらの酵素への結合は過剰の酵素基質によっ
ては切断することはなく、このことはその薬理作用にと
って非常に重要である。そしてこのことは本発明の誘導
体の薬学向心用にあたり重要なことである。なぜならば
、目標とする酵素との複合体が過剰の酵素基質に不安定
化されないからである。しかも、これら本発明のベブチ
Ｆ’Ｖ：ｐ導体は変換酵素の抑制はしない。

本発明のペプチド誘導体はＴｔｌｏｒｓｅｔｔ等（ｒＰ
ｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡＪ第７９巻、
２１７６−２１８０頁（１９８２年））の方法の様な通
常の方法により作成することか出来る。

すなわち、本発明の第１の態様の誘導体は下記の工程から戒る方法により作成出来る。

（ａ）下記の反応工程（Ｃａｌｌｓ−ＣＨｘ−０−）＊ｆ’−１ｔ　　＋Ｎａ
”　　＋１（ＣＪＩｓ−ＣＨｚＯ）　ｚＰ−Ｎａ”＋ｈ（ＣＪｓＣＩｌｚＯ−）ｚＰ−Ｎａ’　十Ｒ’Ｂｒ（Ｃ
ｈｌｌｓ−ＣＨｚＯ−）ｇＰ−Ｒ’＋ＮａＢｒにより、式で表わされるホスホン酸ジベンジルを合成する。

（ｂ）下記の反応工程（Ｃａｌｌｓ−ＣＨｚＯ）　ｔ−Ｐ−Ｒ’＋ＰＣＩＳＣ＆ｌｌＳ−ＣＨ２Ｏ−Ｐ−Ｒ ■ Ｉ＋Ｃ，Ｈｓ−ＣＨｚＣＺ＋ＰＯ（Ｊｓにより、式（［［［）で表わされるホスホン酸ベンジルクロライドを合成する
。

（Ｃ）　　式（１）のクロライドとペプチドとを反応さ
せて、弐（式中、Ｒ５はベンジル基の様な保護基である）で表わ
されるペプチド誘導体を作成する。尚この反応工程は下
記の反応式で表わされる。

３誘導体（■）　＋　ＨＣＺこの工程の最後に、例えば場合により水酸化リチウム又
は重炭酸ナトリウムの存在下に接触水素化にまり式（Ｔ
Ｖ）の誘導体を脱保護して、式（式中、Ｒ５およびＲＩ
ＳはＨ，Ｌｉ又はＮａである）で表わされる誘導体を得
ることも出来る。

この方法において出発物質として使用される亜りん酸ジ
ベンジルは、下記の反応式に従ってベンジルアルコール
、ＰＣＢおよびフエニルジメチルアミンから作成するこ
とが出来る。

３ＣｂＩｔｓ−ＣＨｚＯｔｌ　＋　ＰＣＩ　３　＋　２
Ｃ６１１５−Ｎ−（Ｃ１ｌｓ）　２　　→それぞれ工程
（ａ）および（Ｃ）で使用する化合物Ｒ’ＢｒおよびＲ１は従来公知の方法により作成すること力咄来る。

次に本発明の第２の態桟のペプチド誘導体ＧこおいてＲ
７が単結合であり、モしてＲ＠がブロックノ占である化
合物は下記の工程から威る方法Ｇこより１乍１戊するこ
とが出来る。

（ａ）　　下記の反応式％式％により、式ｈで表わされる化合物を合成する。

（ｂ）　　ＣＩＩＪＮａとの反応により式（Ｖｌ）式の化合物を、６で表わされる化合物に変換する。

尚この反応は下記反応式により表わされる。

！・（Ｃ）下記反応式式で表わされる化合物を合成する。

（ｄ）下記反応式％式％式（■）の生成物と５ＯＣＩ。

とを反応させることにより、式を合成し、そして次いでこの式（ＩＸ）の化合物を、式％式％（式中、Ｒ５はアルキル又はアリール基を表わす）で表
わされるペプチドと反応させて、式で表わされる化合物を作成する。

そしてこの式（Ｘ）の誘導体は、例えば上記した様な接
触水素化により所望により脱保護して、式（式中、Ｒ’５はＨ，Ｎａ又はＬｉである）で表わされ
る誘導体を得ることが出来る。

又本発明の第２の態様のペプチド誘導体において、１７
１か単結合でありＲ３が場合により置換されたアラルキ
ル基であるか、あるいはＲ’？がα−アミノ酸又はペプ
チド由来の残基でありＲ８が場合により置換されたアラ
ルキル基である化合物は、上記と同様の方法であって、
更にＲＩ　　Ｒ８又はＲ１１を導入する工程を有する方
法により作成することが出来る。

この場合、上記と同し反応工程により式（式中、Ｒはベ
ンジルオキシカルボニル基の様な保護基である）で表わされるペプチド誘導体を作成し、次し）で式（Ｘ
［ｌ）の誘導体を接触水素化して、式で表わされる誘導
体とし、そしてこの式（Ｘｌｌｌ）の誘導体をＲ’−Ｒ
’−０１１と反応させて、式で表わされる誘導体を作成
する。

最後に所望によりこの式（ＸＩＶ）保護して、式の誘導体を脱（式中、ＨｌｉはＨ，Ｎａ又は１，１である）で表わさ
れる誘導体を得ることが出来る。

本発明のペプチド誘導体は細菌コラゲナーゼに対して抑
制能を有しているので、色々な用途に使用することが出
来る。特にこれらは、コラゲナーゼを産生ずる細菌の存
在によりひき起こされるある種の感染症の治療用の薬理
組成物の中に使用することが出来る。

この様な細菌が存在するとコラーゲンが著しく破壊され
、その結果感染した生物の結合組織の正常な状態が外力
の攻撃を受けやすくなる。この現象はＣｌｏｓｔｒｉｄ
ｉｕｍ　ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍおよびＰｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる感染症を供な
う場合に著しい。従って本発明のペプチド誘導体は、特
にコラゲナーゼの分解の原因となるコラーゲン分解微生
物と関連のある歯周病の治療用に使用することが出来、
例えばガムの組成物中に配合することが出来る。

この様に本発明のペプチド誘導体はコラーゲン分解微生
物に対しては直接の作用を持たないが、ある種の病理学
（例えば、壊屓や歯科感染症）的見地から重要な治療効
果を有するものである。というのはこれらは細菌コラゲ
ナーゼに対する強力なかつ特異的な禁止剤であるからで
ある。又この様な薬理的用途において、本発明のペプチ
ド誘導体をコラーゲンの代謝に関与する細菌コラゲナー
ゼと類似した特異性を有する他の金属プロテアーゼのｆ
ｉｌｌ制にも使用することが出来る。

従って本発明は又、前記式（Ｉ）（ここでＲ’５は水素
又は金属である〕で表わされる本発明のペプチド誘導体
の薬理的有効量を含有する薬理組成物に関するものであ
る。この組成物は、賦形剤中あるいは適当な生理的に許
容される支持担体中において、そのペプチド誘導体の生
理的に許容される塩の形であることが出来る。又これは
注射により？８７夜叉はけん濁液の形で投与しても良い
。

好ましい投与看はｌＩＩＩｇ／ｋｇ／日から約５　ｍｇ
　／　ｋｇ／日である。

本発明の組成物は錠剤又はカプセルの様な経口投与用の
組成物の形であっても良く、これらは例えば本発明のペ
プチド誘導体を通常の支持担体、賦形剤および添加剤、
例えば炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、
タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、
でんむ）、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロ
ース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カカオ
バター等と混合わせて作ることが出来る。又希釈剤、香
料、可溶化剤、潤滑剤、むすん層剤、結合剤、崩壊剤等
を組成物に加えても良い。又活性成分を他の支持担体等
によりカプセル化しても良い。

本発明のペプチド誘導体はその他の分野において、例え
ば皮革製造分野において、皮および皮工Ｗの保護用に、
あるいはゼラチン製品を使用する種との分野においてゼ
ラチンの保護等にも使用することが出来る。

細菌コラゲナーゼの天然基質は主として天然コラーゲン
であるが、このプロテアーゼはその１’Ｈコラーゲンと
してその変成形すなわちゼラチンを利用することが知ら
れている。現在ゼラチンは色々な分野で使用されており
、この様な用途分野においてゼラチンを完全に正常な状
態に保持することは重要なことである。このために本発
明のペプチド誘導体を、ゼラチンを分解する細菌コラゲ
ナーゼの競合禁止剤として使用することが出来る。

又本発明のペプチド誘導体は、特に高等生物の中で細菌
コラゲナーゼに近似した特異性を有する新規亜鉛プロテ
アーゼを単離するのにも使用することが出来る。この場
合、本発明のペプチド誘導体を他の亜鉛プロテアーゼを
分離する作用を持つアフィニティーカラムを作成するた
めのリガンドとして使用することが出来る。

又本発明のペプチド誘導体は、例えば肉をやわらかくす
るためのコラーゲン分解細菌を使用したりあるいは沈降
タンク中の沈でんを消化したりする生物工学的方法にお
いて細菌コラゲナーゼの活性を制御ｎするために使用す
ることも出来る。

その他の本発明の特徴や利点は以下に記載する実施例か
ら明らかとなろう。但し以下の実施例は本発明をより詳
しく開示するものであって、これにより本発明の範囲は
限定されるものではない。

尚これらの実施例において、実施例１〜５は本発明の第
１のＪｌ！を様のペプチド誘導体の作成を開示するもの
であり、実施例６〜８は本発明の第２の態様のペプチド
誘導体の作成を開示するものである。

ｌｈＨ（化合物　１）この誘導体は、前記式（１）においてｌｉｔがフェニル
エチル基、Ｒ２がプロリン由来残基、Ｒ３が水素原子、
Ｒ４がｎ−ブチル基、そしてＲ５か水素原子である化合
物である。

（ａ）　　　スホン　ジベンジルフェニルエチルの１ミ
リモルの水素化ナトリウムを一１５°Ｃで窒素雰囲気下
に注意深くジメチルホルムアミド中に混ぜ入れ、そして
ジメチルホルムアミド１ミリモルの亜りん酸ジベンジルをゆっくりとこれに加
える。全ての水素か放出されきるまで反応を続ける。

次いで撹拌しながら、ジメチルホルムアミド中の１ミリ
モルの臭化フェニルエチルを尚窒素雰囲気下のままで加
え、そしてこの添加は充分にゆっくりと行なって温度を
一１０°Ｃから０°Ｃとする。この臭化フェニルエチル
溶液を全部加え終ったら、反応混合物を２５゛Ｃに戻す
。窒素を除去して更に３時間撹拌を続ける。

次いでこのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）混合物を高
真空下に３５〜４０℃で蒸発させて残留物をエーテル中
に採る。有機相を２回水洗しそして硫酸ナトリウム上で
乾燥する。溶媒を蒸発後に、所望のホスホン酸ジヘンジ
ルフェニルエチルを収率８０％で得る。

次いでこの生成物を、エーテルと酢酸エチルの混合物（
容量比として２：３）を溶離剤として使用してシリカ上
のフラッシュクロマトグラフィーにより精製する．こう
して４０％の収率で精製ホスホン酸ジベンジルフェニル
エチルを得る。

ベンゼン中の１ミリモルの五塩化りんを、先の工程によ
り得られたホスホン酸ジベンジルフェニルエチル１旦リ
モルのベンゼン溶液中に加える。

この混合物を無水雰囲気下に７０’Ｃで３〜４時間、所
望のクロライドが完全に得られるまで還流する。

次いでこの混合物のベンゼンを蒸発させ残留物をジクロ
ロメタン中に採る。この溶液を直ちにペプチドとの反応
に使用する。

（Ｃ）　　ヱｔ±上上立反息先に得られたジクロロメタン中の１ミリモルのホスホン
酸モノベンジルフェニルエチルクロライドの溶液に、ジ
クロロメタン中の０．９ミリモルのペプチド１Ｉｃｆ　
、　Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｎｌｅ−ＯＣｌｌｘ−ＣｂＨｓお
よび２当量のトリエチルアミンを加える。撹拌しなから
０°Ｃにおいて３０分間、次いで２５°Ｃにおいて更に
３０分間反応させる。次にジクロロメタンを蒸発させ、
そして残留油分を酢酸エチル中に採り、これを水、０、
　ＩＮ塩酸、５％Ｎａ１ｌＣＯｓとして更に水で中性に
なるまで洗浄する。この有機相を乾燥して蒸発させる。

こうして９０％の収率で保護ペプチド誘導体が得られる
。この誘導体を、ジクロロメタン−メタノール混合物（
容量比として９：１）と溶離剤として使用してフラッシ
ュクロマトグラフィーにより持製する（ｄ）　　履−保一差上記の誘導体の脱保護は触媒としてパラジウムを使用し
て接触水素化により行なう。こうして上記化合物ｌを得
る。

この化合物はりんおよびプロトンの核磁気共鳴により特
定される。特に、りんの選択照射により生成物のプロト
ンスペクトルにおいてグリシン残基およびりん置換基Ｒ
１の各プロトンが同定出来る。

これらのプロトンはりんにスカラー結合している。

この様なスカラー結合の存在から、グリシン残基とりん
にＨＡした基Ｒ１との間にホスホンアミド結合が存在す
ることが明らかとなった。各スペクトルは５００Ｍ１ｌ
ｚにおいて記録した。プロトンの化学置換量は、テトラ
メチルシラン（ＴＭＳ）を！４４としてｐｐｍで表示し
た。得られたデータは次の様に表示した（化学置換、多
重度、ｌｌｚにおける結合定数）。

炭素（ＣＢ３）およびりん化学置換量はそれぞれジオキ
サンおよびＨ，ＰＯ，に関して８５％において標準とし
た。Ｃ１３プロトンスペクトルの表示は２次元プロトン
−プロトンおよびプロトン−Ｃ１３相関法により行なっ
た。

ＮＭＲ特性値は次の通りである。

１１　ＮＭＲ（Ｄ！Ｏ）；　ＣＨｔ　ＭＬｅ　Ｏ，８８
（ｔ、３．７Ｈｚ）；　Ｃ１ｌδ。

ＴＮｌｅ　　１．２７−１．３２（ｍ、４）；　ＣＩＩ
ＢＮＩｅ　　１．６５（ｍ、１）；ＣＩＩｇＮｌｅ　１
．７６（＋＊、１）；　　φ−ＣＨｚ−ＣＪＩｚ　１．
８８（ｍ、２１１ＰＩＱＩＩｚ）；　ＣＩＩｒＰｒｏ　
２（ｍ、２）；　ＣＨｆ１Ｐｒｏ　２．（１５（ｎ＋、
Ｉ）；Ｃ１ｌβＰｒｏ　２．２５（ｍ、１）；　　φ−
ＣＨｚ−ＣＨｉ　２．８２（ｍ、　２）　：ＣＩｌδＰ
ｒｏ　　３．５５（ｗ、２）；　　ＣＨλＧｌｙ　　３
．２５−３．６２（ＡＢＸ、２’ＪＩＩＰ　９１１ｚ、
”ＪＡＲ１６Ｈｚ）；　ＣＨ１７ＮＩｅ−４，１３（Ｑ
、１）；ＣＨαＰｒｏ　４．４０（ｑ、ｌ）；Ａｒ　７
．２５−１．４０（ｍ、５）。

３ＣＮＭＲ（ＤｚＯ）：　ＣｚＮｌｅ　１４；　ＣｅＮ
Ｉｅ　２２．５；　ＣｌＰｒ。

２５．１；　（、ｒＮＩｅ　２８．１；　ＣａＰｒｏ　
３０．１；　φ−Ｃ１ｂ−ＣＦｌｔ３０．４；　　φ−
Ｃ１ｌｚ−Ｃ１ｂ　３１．５（’ＪＣＰ　１２１Ｈｚ）
　：　ＣＢ　Ｎ１ｅ３２．２：　ＣａＧＩｙ　４４．２
；　ＣａＰｒｏ　４７．６；　ＣｅＮＩｅ　５６．１；
ＣａＰｒｏ　６１．５；　Ｃｏ　Ｇｌｙ　１７２．　Ｃ
ｏ　Ｐｒｏ　１７４．３；Ｃｏ　Ｎ１ｅ１４４；　Ａｒ
　１２９．５．　１２９．１２６．９．　１８０゜３１
ρＮＭＲ（ＤｚＯ）：　２８．３゜ｌｈ ■ Ｈ（化合物２）化合物２は前記式（１）においてＲ１がフェニルメチル
基、Ｒ２がプロリル由来残基、Ｒ３が水素原子、Ｒ４が
ｎ−ブチル基、そしてＲ５が水素原子であるペプチド講
導体である。

第１工程において１１リモルの臭化フェニルエチルの代
りに１ミリモルの臭化フェニルメチルを使用する以外は
実施例１と同様の操作を行なって、上記の化合物を得る
。

こうして得られた生成物の特性値は次の通りである。

ＩＩ　ＮＭＲ（０２０）；　ＣＨ２Ｎｌｅ　Ｏ，８８（
ｔ、３．７Ｈｚ）；　Ｃｌｌδγ１ｊｌｅ　１．３２（
＋ｗ、４）；　Ｃ１ｌ／？ＮＩｅ　１．６５（ｍ、Ｉ）
；　Ｃ１ｌβＮ１ｅ１．７６（ｓ＋、Ｉ）；　ＣＩＩｒ
Ｐｒｏ　１．９５（Ｉ＋＋、２）；　Ｃ１ｌβＰｒｏ　
２．１２（ｍ、１）；　ＣＨβＰｒｏ　２．２５（ａ＋
、１）；　　φ−ＣＨｚ３（ａ＋、２）；ＣＩｌδＰｒ
ｏ　３．４（１ｍ、２）；　ＣｌｌαＧｌｙ　３．５−
３．５３（Ａ［ｌＸ、２゜’Ｊ１１Ｐ７．２−８．０５
１−１ｚ、　”ＪＡＢ　１６１１ｚ）；　ＣＩＩｃｒＮ
ｌｅ　４．１３（ｑ、１）Ｃ１ｌ　ｃｒＰｒｏ４．４０
（Ｑ、１）；　　八ｒ　　７．２５−７．４０（＋＋、
５Ｌ。

３ＣＮＭＲ（ＤｚＯ）；　ＣｅＮＩｅ　１４；　Ｃδ旧
ｅ　２２．５；　ＣｙＰｒ。

２５．１；　ＣｒＮＩｅ　２ｇ、１：　ＣａＰｒｏ３０
．１：　ＣａＡＩＩｅ３２．２φ−Ｃｔｌｚ　３７．９
−　（’ＪＣＰ　１２１１１ｚ）　；ＣａＧＩｙ　４４
．２：　ＣａＰｒｏ　４７．６；　ＣｅＮＩｅ　５６．
Ｉ・ＣｃｒＰｒｏ　６１．５；　’ＣＯＧｌｙ　１７２
．　Ｃｏ　Ｐｒｏ　１７４．３；Ｃｏ　Ｎｌｅ　１４４
；　Ａｒ　１２６．８．１２９．１２６．９．１８０ｆ
ｆｌρＮ旧（ＤＪ）；　２３．９８゜１封０組よ０Ｌｉ（化合物３）この化合物は、前記式（１）においてＲ’がｐ−ニトロ
フェニルエチル基、Ｒ２がプロリン由来残基、Ｒ３が水
素原子、Ｒ４がｎ−ブチル基、そしてＲ５がリチウム原
子である化合物である。

第１工程において１ミリモルの臭化フェニルエチルの代
りにｌミリモルの臭化Ｐ−ニトロフヱニルエチルを使用
する以外は実施例１と同様の操作を行なって、上記の化
合物を得る。

更に最終工程において、水酸化リチウムの在在下に生成
誘導体の脱保護を行なって、リチウム塩として生成物を
得た。こうしてＩＩ＃られた生成物の特性値は次の通り
である。

ＩＩ　ＮＭＲ（０２０）；　Ｃ）ｌｅＮｌｅ　Ｏ，８８
（Ｌ、３．７１１ｚ）；　Ｃｌｌδ、γＮＩｅ１．２７
−１．３２（ｍ、４）；　Ｃ１ｌβＮｌｅ　１．７Ｈｎ
＋、ｌ）；　Ｃ１ｌβＮ１ｅ１．８０（ｍ、１）；　Ｎ
Ｏ２−φ−Ｃ１ｌｚ−Ｃ１ｌｚ　１．９２（ｍ、２，２
ＪＭＰ　１６１１ｚ）；ＣＩＩｙＰｒｏ　２．０８８ｍ
、２）；　Ｃ１ｌβＰｒｏ　２．１８（ｍ、１）；　Ｃ
１ｌβＰｒｏ　２．３５（ｍ、１）；　Ｎ０ｚ−φ−Ｃ
Ｈｇ−Ｃｆｌｚ　２．９５（ｍ、２）　；ＣＩｌβＰｒ
ｏ　３．６（ｍ、２）；　Ｃｌｌ１ｙＧＩｙ　３．７０
−３．７５（ＡＢＸ　２コＪＩＩＰ　　８Ｈｚ、　　”
ＪＡＲ１６１１ｚ）；　　ＣＨｃｒＮｌｅ　　４．１３
（ｑ、１）ＣＩＩαＰｒｏ　４．４０（ｑ、１）；　　
Ａｒ　７．２５（ｄ、２）；　　８．２（ｄ、２）。

ｆｆ１ｐ　Ｎ門Ｒ（ＤｚＯ）；　　２７．４゜１１（化合物４）この化合物は、前記式（１）においてＲ１がｐ　−トリ
フルオロフェニルエチルｇ、ＲＺがプロリン由来残基、
ｌｌｓが水素原子、Ｒ４がｎ−ブチル基、そしてＢＳが
水素原子であるペプチド誘導体である。

第１工程において１くリモルの臭化フェニルエチルの代
りにｌミリモルの臭化Ｐ−トリフルオロフェニルエチル
を使用する以外は実施例１と同様の操作を行なって、上
記の化合物を得る。

こうして得られた生成物の特性値は次の通りである。

Ｉｆ　ＮＭＲ（ＤｚＯ）　；　ＣＩＩｅＮｌｅ　Ｏ，８
８（Ｌ、３）　：　Ｃ１６，ｙＮｌｅｌ、２７−１．３
２（ｍ、４）；　ＣＨｅＮＩｅ　１．６５（Ｉｌｌ、１
）；　ＣＨｅＮＩｅ１．７３（Ｉｌｌ、１）；　ＣＦ３
−φ−Ｃ１１□−ＧＨｚ４．８８（ｌ１１２＋　”Ｊ　
ＩＩＰ　１６１１ｚ）　；　Ｃｔｌ　ｒ　Ｐｒｏ２（ｍ
、２）　；　Ｃ１ｌβＰｒｏ２．０５（ｍ、　１）　；
ＣＩｌβＰｒｏ　２．２５（ａ、ｌ）；　ＣＦ＋−φ−
Ｃｌｌｚ−Ｃ１ｈ　２．９０（ｍ、２）　；Ｃ１ｌβＰ
ｒｏ　　３．５５（ｍ、２）；　　ＣＩＩαＧＩｙ　　
３．２５−３．６２（八Ｂ×、２”ＪＩＩＰ　９１１ｚ
、”ＪＡＢ　１６１１ｚ）；　Ｃ：ＩｌαＮ！ｅ　４．
１３（ｑ、１）Ｃ１ｌβＰｒｏ　４．４０（ｑ、１）；
　Ａｒ　７．３３；　７．５２；　７．６３（ｍ、４）
。

３１　Ｉｌｌ　Ｎ門１１（０，０）：　２９，２９この
化合物は前記式（１）においてＲ１がメチル基、Ｒｔが
プロリン由来残基、Ｒ３が水素原子、Ｒ′がｎ−ブチル
基、そしてＲ５が水素原子であるペプチド誘導体である
。

第１工程（ａ）において１ミリモルの臭化フェニルエチ
ルの代りに１ミリモルの臭化メチルを使用する以外は実
施例１と同様の操作を行なって、上記の化合物を得る。

こうして得られた生成物の特性値は次の通りである。

ＨＮＭＲ（０２０）；　ＣＨｅＮＩｅ　Ｏ，８８（Ｌ３
）；　Ｃ１１ｚ−Ｐ　１．２５（ｄ。

３．２ＪＨＰ　１５！Ｉｚ）；　Ｃ１６，ｒ　Ｎｌｅ　
１．２７−１．３２（ｌ１１．４）；ＣＩｌβ旧ｅ　１
．６５（ｓ、１）；　ＣＨ／３Ｎｌｅ　１．７６（ｍ、
１）；　ＣｔｌｙＰｒｏ　２（ｍ　２）；ＣＨＢＰｒｏ
　２．０５（＊、］）；　ＣｌｌβＰｒｏ　２．２５（
ｍ、１）；　ＣＨＢＰｒｏ　３．５５（ｆｆｉ、２）；
　ＣＩｌαＧｌｙ　３．７−３．７３（ＡＢＸ、２．Ｊ
ＨＰ　８Ｈｚ、”ＪＡＢ　１６１１ｚ）；　ＣＨαＮＩ
ｅ　４．１３（ｑ、１）ＣＩｌｃｒＰｒｏ　　４．４０
（ｑ、１）；　　八ｒ　　７．２５−７．４０（情、５
）３ＩρＮＭＲ（ＤｚＯ）；　２７．８゜ユ」動並足王五ぞい彰肪企勿１乞夜ＣｂＨＳＣ１１３ ■ Ｌｉ（化合物５）この化合物は、前記式（１）においてＲ１が下記式Ｃ６
１１Ｓ−Ｃ１１□−〇Ｃ０−Ｎｉ１−Ｃ１１Ｃ１１□ Ｃ＆ＩＩＳで表わされる基、Ｒ２がプロリン出来残基、Ｒ３がＩ−
１、Ｒ４がｎ−ブチル基、そしてＲ５が１、ｉであるペ
プチド講導体である。

１．５ｍｌの氷酢酸に、２６ｍＮ（０，１モル）の亜り
ん酸トノフェニルと１５．１ｇ（０，１モル）の炭酸ベ
ンジルと０．１５モルのベンジルアルデヒドとを加える
。次いでこの？８戒を２５゛Ｃで１時間攪拌し、次に８
０”Ｃで更に１時間加熱する。高真空下に１００”Ｃで
芦発させて、残留物を１５０ｄのメタノール中に採りこ
れを４　’Ｃに冷却する。２．３時間後に、目的のホス
ホン酸エステルの沈でんが４０〜７０％の収率で得られ
る。

０．２モルの固体ナトリウムを良く注意しながら１５０
　ａｌｌのメタノルー中に希釈し、そしζ先に作成した
ホスホン酸ベンジルオキシカルボニルアラニルジベンジ
ル１０４９モルを５０ｍ１のメタノール中に溶かしたも
のをこれに加える。これを２５°Ｃで２時間撹拌し続け
、次いで京発させ、残留物をエーテル中に採り、これを
水洗し、そして有機相を乾燥しそしてさらに蒸発させる
。残留油物を４°Ｃに保持し、そして結晶化した生成物
そ採取する。この生成物をエーテル−ヘキサン混合物を
？８離剤どして使用してシリカ上のフランシュクロマト
グラフィーにより精製する。

先に得られたホスホン酸ベンジルオキシカルボニルフェ
ニルアラニルジメチル１０ミリモルを５５−のメタノー
ル中に溶かし、これに２０ミリモルのＮ　ａ　Ｏｔｌを
加える。この溶液を加熱して還流下に８時間沸とうさせ
る。次いでこの溶液を２５°Ｃに戻してから８〜１２時
間攪拌する。これに２８１１（Ｊを加えてｐｔ＋２とな
るまで酸性化し、次いで真空下にメタノールを蒸発させ
る。生成物を酢酸エチル中に採り、有機相を乾燥しそし
て蒸発させる。生成物を石油エーテル中に結晶化させる
。

（ｄ）　　ペプチ　との　　および上記工程で得られたホスホン酸ベンジルオキシカルボニ
ルフェニルアラニルモノメチル１１リモルをジクロロメ
タン中に希釈し、２ミリモルの塩化ヂオニルをこれに加
える。この溶液を２５°Ｃで４時間撹拌する。高真空下
に蒸発乾燥し、再度ジクロロメタンを加え、更に蒸発を
とり返す。生成物をジクロロメタン中に採り、０°Ｃに
冷却し、そしてｌＳ９モルのＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｎｌｅ−
ＯＣｌｌｚＣ６１１ｓ塩酸塩と２ミリモルのトリエチル
アミンとを加える。０°Ｃで３０分間、次いで２５°Ｃ
で更に３０分間醍押金続ける。

ジクロロメタンを蒸発させて残留油分を酢酸エチル中に
採り、そしてこれを水、０．１Ｎ　ＩＩＣＺ、５％Ｎａ
１ｌＣＯ，そして更に水で順次中性となるまで洗浄する
。有機相を乾燥し次に蒸発させる。こうして保護された
生成物が得られ、次いでこれをジクロロメクンーメタノ
ール混合物（容量比として９：Ｉ）を溶出溶媒として使
用してフランシュクロマトグラフィーにより稍製する。

得られた誘導体は４つのジアステレオマーの混合物から
成るものであり、これはカイラル基を有するグラフトシ
リカカラムを使用しそしてヘキサン−クロロホルム−〇
−プロパツール混合物を溶出溶媒として使用してそれぞ
れの４画分に分離することが出来る。

次いで水酸化リチウムを使用して実施例１と同様の方法
で生成物の脱保護を行なう。脱保護の結果、フェニルア
ラニル基においてのみ単一の非対称中心が存在し、従っ
て４つの両分は２つのバッチ（Ａ）および（Ｂ）中に分
配出来る。

両分（Ａ）の核磁気共鳴分析の結果は次の通りである。

ＩＩ　ＮＭＲ（ＤｔＯ）：　ＣＨｅ　Ｎｌｅ　Ｏ，８Ｂ
（ｔ、３）；　Ｃ１６，γ旧ｅ１．３２（ｍ、４）；　
ＣＨβＮｌｅ　１．６５（ｍ、１）；　Ｃ１ｌβ旧ｅ　
１．７６（ｍ、Ｉ）；　　Ｃｆ１ｙＰｒｏ　２（ｎ＋、
２）；　　ＣＨａＰｒｏ　２．０５（ｍ、１）；ＣＨａ
Ｐｒｏ　２．２５（ｍ、ｌ）；　Ｃ１ｌβＰｒｏ　２．
６５（ｍ、１．”Ｊββ１４１１ｚ、　　”Ｊａβ１２
．６ｔｌｚ、　　’ＪＩＩＰ　６．３１１ｚ）；　ＣＨ
βＰｈｅ３．１９（ｍ、１．　　”Ｊββ１４Ｈｚ、　
　’Ｊ　ａβ３Ｈｚ、　　３ＪＭＰ　３ＨｚＨＣ１ｌβ
Ｐｒｏ　３．５５（ｍ、２）；　　ＣＩＩαＧｌｙ　３
．７Ｇ？−３，７６（ＡＢＸ、２’ＪＩＩＰ　　６ｔｌ
ｚ　　３ＪＡＢ　　１６１１ｚ）；　　ＣＩＩｃｒＰｈ
ｅ　　３．９１．　　ＣＩＩαＮＩｅ４．１３（ｑ、Ｉ
）ＣＩＩαＰｒｏ　４．４０（ｑ、Ｉ）：　　　φ−ｃ
１１．−ｏ　４．９８４．８５（ｄｄ、２）Ａｒ　７．
２５−７．４０（ｍ、５）。

３１ρ　Ｎ門Ｒ（ＤｚＯ）；　　２２．４゜Ｃ）（。

１　＼ＣＩ、ＯＬｉＨ（化合物６）このペプチド講導体は、前記式（１）Ｒ１が式Ｃ，１ＩＳＣＩＩ□０ＣＯＮＨ−ＣＩ＋ＣＩｌ。

Ｊｌ＋で表わされる基であり、Ｒ２がプロリン由来残基であり
、Ｒ３が水素原子であり、Ｒ４がロイシンのｎブチル基
であり、そしてＲ５が水素原子である化合物である。

第１工１　（ａ）において０．１５モルのベンジルアル
デヒドの代りに０．１５モルのイソブチルアルデヒドを
使用する以外は実施例５と同様の操作を行なって、上記
の化合物を得る。

こうして得られた生成物の両分（Ａ）特性値は次の通り
である。

’Ｉｔ　ＮＭＲ（ＤｚＯ）：　ＣＩｔｅ　Ｎｌｅ　Ｏ，
８８（Ｌ、３）；　Ｃ１６，γ旧ｅ１．３２（ｓ、４）
　；　Ｃ１ｌβＮｌｅ　１．６５（ｍ、ｌ）；　　Ｃｌ
βＮｌｅ　１．７６（ｗ、１）；　　ＣＨδＬｅｕ　　
１．２（ｇ＋、１）、　　ＣＩ（３Ｌｅｕ　　Ｏ，８８
−０，９１（ｄ、３）；　ＣＨｙＰｒｏ　２（ａ、２）
；　Ｃ１ｌβＰｒｏ　２．０５（ｓ、ｌ）；Ｃ１ｌβＰ
ｒｏ　　２．２５（ｍ、１）；　　Ｃ１ｌβ旧ｅｕ　　
１．５４（ａ＋、ｌ）；　　Ｃｌ（βしｅｕ　　１．６
７（ｍ、１）；　　ＣＨａＰｒｏ　　３．５５（ａ＋、
２）；　　ＣＨαＧｌｙ３．７６７−３．７６（ＡＢＸ
、２．　　”ＪＩＩＰ　８１１ｚ、　　”ＪＡＢ　１６
Ｈｚ）；　　ＣＨｃｒしｅｕ　　３．８５；　　Ｃ１１
ｃｒＮＩｅ　　４．１３（ｑ、１）　　ＣＨａＰｒｏ　
　４．４０（ｑ、１）；φ−ＣＩ＋□−０４．９８−４
．８５（ｄｄ、２）　Ａｒ　７．２５−７．４０（（５
）。

Ｌ＼Ｃｔ１３　０Ｌｉ（化合物７）この化合物は、前記式（１）において１１７１が式Ｒ’
−Ｒ’−ＮＨ−ＣＨ七Ｐｈで表わされる基であり、Ｒｈがメチル基であり、Ｒ７が
単結合であり、Ｒｅがベンジルオキシカルボニル基であ
り、Ｒ２がプロリン由来残基であり、Ｒ３が水素原子で
あり、Ｒ４がｎ−ブチル基であり、モしてＲ５が水素原
子である化合物である。

ｌミリモルのベンジルアルデヒドの代りに１ミリモルの
アセトアルデヒドを使用する以外は実施例５と同様の操
作を行なって、上記の化合物を得た。

こうして得られた生成物の画分（八〉の特性値は下記の
通りである。

’ＩＩ　ＮＭＲ（ＤｔＯ）；　Ｃ１１ｅ　Ｎｌｅ　Ｏ，
８８（ｔ、３）；　Ｃ１１ｃｒＮＩｅ１．３２（ｍ、４
）：　ＣＨβＮｌｅ　１．６５（ｍ、１）；　ＣＨβＮ
ｌｅ　１．７６（ｍ、ｌ）；　Ｃｌｈ　Ａｌａ　１．２
５（ｄ、３）；　ＣＨｙＰｒｏ　２（ｓ、２）；Ｃ１ｌ
βＰｒｏ　　２．０５（ｍ、１）；　　ＣＨａＰｒｏ　
　２．２５（ＩＩ、１）；　　Ｃ１ｌδＰｒｏ　３．５
５（ｍ、２）；　ＣＨαＧｌｙ　３．７６７−３．７６
（ＡＢＸ、２．’ＪＨＩ’８ｌ−１ｚ、”ＪＡＢ　１６
１１ｚ）；　Ｃ１１ｃｒＡｌａ　３．８０；　ＣＩＩｃ
ｒＮＩｅ　４．１３（ｑ。

１）；　ＣＨｃｒＰｒｏ　４．４０（ｑ、１）；　　φ
−ＣＩ＋！−０４．９８−４．８５（ｄｄ、２）　Ａｒ
　７．２５−７．４０（ｓ、５）。

知知４を本例では前記実施例１〜７および比較例１の化合物の活
性を測定する。まず化合物１〜４および比較例の化合物
についてはその禁止定数をｔｌｅｎｄｅｒｓｏｎ法によ
り測定した。

又化合物５〜７については、Ｋｏｎ　＆　Ｋｏｆｆの速
度定数の実験値に基づいてその禁止定数を決定した。

又コラゲナーゼの活性は、１１０１Ｉ　ＣａＣ１ｚを含
有するトリシン緩衝液（ｐｌ＋６．８）中のＦａ−Ｌｅ
ｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒ。

Ａｌａを発色基質として２５°Ｃにおいて使用し、そし
てＶｏＬａｋｉｓ等（’Ｅｕｒ、　Ｊ、　［ｌｉｏｃｈ
ｅｍ、　Ｊ　１６０．４１３−４１８、１９８６）の方
法に従ってＣＩｏｓｔｒｉｄｉｕｎ＋　ｈｉｓｔｏｌｙ
ｔｉｃｕｍコラゲナーゼ（１４Ｃ３，、！、２４．３）
を使用してＵＶ分光側定により測定した。これらそれぞ
れの化合物について得られた結果を下記の表に示す。

これらの結果から、公知の化合物よりもその禁止定数が
はるかに小さいことが分かる。

すなわち、Ｇａ１ａｒｄｙの方法により合成した最良の
化合物は１０−”Ｍの定数ｋｉを有しているが、本発明
の最良の化合物は０．５Ｘ１０−’Ｍの定数ｋｉを有し
ており、後者の活性は前者のそれの１０００倍である。

のによるＣＬＯ５ＴＲＩＤＩＶＭ　ＩＩＩＳＴＯＬＹＴＩ
ＣＵＭＰ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｎｌｅ−Ｒ’

Claims

【特許請求の範囲】１、式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）（式中、Ｒ＾１はアリール基およびアラルキル基から選
択された基を表わし、これらは非置換であるかあるいは
そのアリール部分においてハロゲン、トリフルオロメチ
ル基、Ｃ＿１−Ｃ＿４アルコキシ基、Ｃ＿１−Ｃ＿４ア
ルキル基、Ｃ＿１−Ｃ＿４アルカノイルオキシ基、Ｃ＿
２−Ｃ＿５カルボニルオキシアルキル基、ニトロ基、カ
ルボオキシ基又はシアノ基から成る群から選択された少
なくとも１つの置換基によって置換されており、あるい
はＲ＾１は式▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基を表わし、ここでＲ＾６はα−アミノ酸
の側鎖を表わし、Ｒ＾７は単結合であるかあるいは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるα−アミノ酸又はペプチド由来の残基であ
って、ここでＲ＾９はα−アミノ酸の側鎖であり、ｎは
１〜２の整数であり、そしてＲ＾９はｎが１より大きい
時には互いに異なるものであっても良く、そして該残基
としてのＲ＾７はそのＣＯによって式中のＮＨに結合し
ており、Ｒ＾８はα−アミノ酸のＮ−末端をブロックす
る基であるか、あるいは非置換であるかあるいはハロゲ
ン、トリフルオロメチル基、Ｃ＿１−Ｃ＿４アルコキシ
基、Ｃ＿１−Ｃ＿４アルキル基、Ｃ＿１−Ｃ＿４アルカ
ノイルオキシ基、Ｃ＿２−Ｃ＿５カルボニルオキシアル
キル基、ニトロ基、カルボキシル基又はシアノ基から成
る群から選択した少なくとも１つの置換基によって置換
されたアラルキル基を表わし；Ｒ＾２は式 ▲数式、化学式、表等があります▼　▲数式、化学式、
表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼　▲数式、化学式、
表等があります▼ で表わされるプロリン、ヒドロキシプロリン、チアゾリ
ジンおよびデヒドロプロリンから成る群から選択したα
−アミノ酸由来の２価の残基であって、これはそのＮＨ
部分により式中のＣＯに結合しており；Ｒ＾３は水素原
子又はＣ＿１−Ｃ＿４アルキル基であり；Ｒ＾４はＣ＿
１−Ｃ＿５アルキル基であるかあるいはα−アミノ酸の
側鎖であり；そしてＲ＾５およびＲ＾５は互いに同一であっても又は異なっ
ていても良く、それぞれ水素原子、金属、Ｃ＿１−Ｃ＿
５アルキル基又はベンジル基であり；但しＲ＾１が非置換のアリール基又はアラルキル基であ
る部分には、Ｒ＾３は水素原子でありそしてＲ＾４はｎ
−ブチル基である）で表わされるペプチド誘導体。２、Ｒ＾２が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基である、特許請求の範囲第１項に記載の
ペプチド誘導体。３、Ｒ＾１がフェニルエチルおよびフェニルメチル基か
ら成る群から選択した基であり、Ｒ＾３が水素原子であ
り、そしてＲ＾４がｎ−ブチル基である、特許請求の範
囲第１又は２項に記載のペプチド誘導体。４、Ｒ＾１がハロゲン原子、トリフルオロメチル基、Ｃ
＿１−Ｃ＿４アルコキシ基、Ｃ＿１−Ｃ＿４アルキル基
、Ｃ＿１−Ｃ＿４アルカノイルオキシ基、Ｃ＿２−Ｃ＿
５カルボニルオキシアルキル基、カルボキシル基又はシ
アノ基から成る群から選択した少なくとも１個の置換基
により置換されたアリール又はアラルキル基である、特
許請求の範囲第１又は２項に記載のペプチド誘導体。５、Ｒ＾１がｐ−ニトロフェニルエチル又はｐ−トリフ
ルオロメチルフェニルエチル基である、特許請求の範囲
第４項に記載のペプチド誘導体。６、Ｒ＾３が水素原子であり、そしてＲ＾４がｎ−ブチ
ル基である、特許請求の範囲第４又は５項に記載のペプ
チド誘導体。７、Ｒ＾５が水素リチウム又はナトリウム原子、又はベ
ンジル基である、特許請求の範囲第１〜６項のいずれか
に記載のペプチド誘導体。８、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＾１はフェニルエチル、フェニルメチル、ｐ−
ニトロフェニルエチル又はｐ−トリフルオロメチルフェ
ニルエチル基であり、そしてＲ＾５およびＲ′＾５がＨ
又はＬｉである）で表わされるペプチド誘導体。９、Ｒ＾１が式 −ＣＨ−ＮＨ−Ｒ＾７−Ｒ＾８（式中、Ｒ＾６、Ｒ＾７およびＲ＾８は、特許請求の範
囲第１項に記載のものと同意義のものである）で表わされる基である、特許請求の範囲第１又は２項で
記載のペプチド誘導体。１０、Ｒ＾６ガアラニン、ロイシン又はフェニルアラニ
ンの側鎖であり、Ｒ＾７が単結合であり、そしてＲ＾８
がベンジルオキシカルボニル基である、特許請求の範囲
第９項に記載のペプチド誘導体。１１、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾６は−ＣＨ＿３、−ＣＨ＿２−Ｃ＿６Ｈ＿
５又は−ＣＨ＿２−ＣＨ−（ＣＨ＿３）＿２である）で表わされる化合物である、特許請求の範囲第１項に記
載のペプチド誘導体。１２、特許請求の範囲第１〜１１項に記載の化合物であ
って、Ｒ′＾５が水素又は金属であるペプチド誘導体の
薬理的有効量を含有して成る、薬理組成物。