JPS61132195A - 発酵法による５′−イノシン酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈発明の目的〉 〈産業上の利用分野〉 本発明は発酵法による５′−イノシン酸の製造法に関す
る。

５′−イノシン酸は調味料として利用できる。

〈従来の技術〉 調味料として広く使用されている５′−イノシン酸のａ
ｆＬ法とし、てはヒポキサンチ／又はイノシ／を微生物
の作用によシ５′−イノシン酸に変換する方法（特公昭
４５−３７０３７　、特公昭４９−４４３５０　。

特公昭５５−４３９９等）がある。

又、近年、糖類よシ直接５′−イノシン酸を発酵・生産
する方法（４！開昭５５−１５０８９９　、特公昭５６
−３２９１８　ｅ特開昭５８−１１１６９５等）が開発
されている。しかしながらこれらによ）製造される５′
−イノシン酸の蓄積は必ずしも満足すべきものではなく
、発酵法で更に高収量で５′−イノシン酸を得る製造法
が望まれている。呈味物質でらる５′−イノシン酸を発
酵法で安価かつ大量に供給することは工業上きわめて意
義深いことである。

く本発明が解決しようとする問題点〉 本発明者等は、発酵法によυ更に効塞良＜５′−イノシ
ン酸を生産する方法を開発すべく鋭意研究を重ねた結果
、培養の途中でイノシ／又は及びヒポキサンチンと糖類
を添加する事によシ、高蓄積で５′−イノシン酸が得ら
れる事を発見した。本発明はこの知見に基づいて完成さ
れたものであシ、かかる製造法は本発明をもって初めて
とする。

〔発明の構成〕

く問題点を解決するための手段〉 本発明の最も特徴とする点は培養の途中で糖類とイノシ
／又は及びヒ４キサンチ／を添加することにあるが、糖
類は当該微生物が資化でき５′−ヌクレオチドを製造し
得るものであれば何でもよい。

好適にはグルコース、フラクトース、シュークロース、
澱粉加水分解液、糖蜜などが使用できる。

糖類、イノシンなどの添加時期は、微生物がある程度増
殖した時期でらればどこでもよいが、定常期に達する２
４時間以降が好ましい・添加方法はそれぞれ一括して、
あるいは分割して又は連続的にフィードすることができ
る。イノシン又はヒポキサンチンの添加濃度は　５７−
イノシン酸への転換活性が続く限シ添加する事ができる
が、各々５０〜２０００１１Ｐ／ｄｊ　、　２５〜１０
００１１１１９／＃Ｏ範囲が望ましい。

糖類の添加濃度はイノシン又はヒポキサンチンに対し１
又は２倍以上の比率で添加すればよいが、６又Ｆｉ１２
倍以上にすると最大の転換率が得られる。

本発明で使用する微生物はコリネバクテリウム属、ブレ
ビバクテリウム属又はバチルス属に属し、５′−イノシ
ン酸を生成する能力を有する微生物である。５Ｉ−イノ
シン酸生産能は該属に属する微生物に少なくともアデニ
ン要求性を付与することによシ達成される。

具体的に例示すれば次のような変異株が挙げられる。

コリネバクテリウム・５ｐ ＡＪ　１１３５２　（ＦＩＲＭ−Ｐ４９７３）　Ａｄｓ
−、Ｄ＠ｃ’、８Ｇｒコリネノ肴クテリウム・エキイ ＡＪ　１１３４７　（ＦＥＲＭ−Ｐ４９６８）ムｄ・−
ＡＪ　１１３５０　（ＦＥＲＭ−Ｐ４９７１）　Ａｄｓ
−、Ｄ＠ｏ’、ＳＧ’ＡＪ　　　１１５５２　　　（Ｆ
ＥＲＭ−Ｐ　　５３９７）　　Ａｄｓ−、Ａｄ＠’、Ｒ
１ｆ’ＡＪ　　１１７４９　　（Ｆ）ｉｉＲＭ−Ｐ　６
２６１）Ａｄｓ−、ＤＯＮ’ＡＪ　１１７４３　（ＦＩ
ＲＭ−Ｐ６２５５）　Ａｄｓ−、ＳＧ’、２０Ｒ’ブレ
ビバクテリウム・アンモニアダネスＡＪ　１２１９２　
（ＦＩＲＭ−Ｐ７９４９）　Ａｄ＠−、ＳＧ’バチルス
φズプチルス ＡＪ　１１１５８　（ＦＩＲＭ−Ｐ４１２０）　Ａｄ＠
−、Ｘａｎ−、Ｄ＠＠’。

ＳＧｒ　、　ＭＩ３０ｒ　、　Ｐａ　ｌ　ｒＡＪ　１１
８２０　（ＦＥＲＭ−Ｐ　６４４１）　Ａｄ＠−、Ｘａ
ｎ−、Ｄｓ＠’、Ｒ１ｆ’Ａｄ＠″″：　アデニン要求
性 Ｄ＠噛ｒ：　デコイニン耐性 ８Ｇ’　　：　　サルファグアニジン耐性Ａｄ＠’　：
　　アデニン耐性 Ｒｌｆｒ　：　　リファンピシン耐性 Ｍ８０７”　：　　メチオニンスルフナキシド耐性ＤＯ
Ｎ’　　：　　６−ジアシー５−オΦソーＬ−ノルロイ
シン耐性２ＤＲ’　　：　　２−７”オキシリが−ス耐
性Ｘａｎ−：　　キサンチン要求性 Ｐａｌ’　：　　？イコ７う二ン耐性 プレピノ々クテリウム・アンモニアガスＡＪ　１２１９
２（ｒｇｇＭ−ｐ　７９４９）は、プレピパクテリクム
・アンモニアダネスの野性味ＡＪ　１４４３（ＡＴＣＣ
６８７１）を親株とし、これにＮＧ　（Ｎ−メチル−Ｎ
′−二トローＮ−ニド日ソグアニジン）ｔ−用いる通常
の変異処理によ）得た。

本発明で使用する培地は、炭素源、窒素源、無機塩類、
アｒ＝ンおよび必要ならば更にその他の微量栄養素を含
有する通常の液体培地でｂる・炭素源としては、グルコ
ース、糖蜜、デンプン加水分解液などの炭水化物、酢酸
、グルコン酸などの有機酸、エタノールなどのアルコー
ル類が使用できる＠望素源としては硫安、塩安、リン安
等のアンモニウム塩、硝安等の硝酸塩、尿素、アンモニ
アガス等が使用できる・また栄養要求物質としてのアデ
ニンはアデニン、アｒニノ鉱酸塩、アｒノシン及びアデ
ニル酸、リケ核酸等の加水分解液が使用できる。また必
要に応じてビタミン類、アミノ酸、アデニン以外の核酸
塩基などの微量栄養素を添加すれば５′−イノシン酸の
蓄積量を増す場合が多い。

培養方法は好気的東件がよく、また、培養温度は２４な
いし４０℃の範囲がよい。場合によりては発酵途中に発
酵温度を若干変更させてもよい。

培養開始時および培養中に培養液のｐＨｔ−５，０ない
し９．０の範囲に調節するのが望ましい。−調整には無
＋ＩＡ酸、有機酸あるいはアルカリ、さらに尿素。

炭酸カルシウム、アンモニア水、アンモニアガスなどを
使用することが出来る。がくして２ないし８日間培養す
れば著量の５′−イノシン酸が培地中に蓄積される。

発酵液よシ５Ｉ−イノシン酸を採取するには通常の方法
、例えば菌体を分離除去し、そのＰ液を脱色樹脂とアニ
オン交換樹脂とを併用し、あるいはアニオン交換樹脂と
カチオン交換樹脂とを併用して処理すれば比較的純粋な
５Ｉ−イノシン酸含有水溶液が得られる。

以下、実施例にて説明する。

実施例１ 第１表に示す組成の培地を５００ｄ容肩付７ラスコに２
０ｓｊ宛分注し１２０Ｃで１ｏ分間加熱滅菌した・この
培地に、コリネバクテリウム・エキイＡＪ　１１７４９
　（ＦＩＲＭ−Ｐ　６２６１）をグル：ｒ　−ｘ　２０
１１／ｌ、醇母エキス１０１１／７１　、ペプトン１０
１／７３、食塩５Ｉ／！、寒天２０　ｔｔ／ｌ　（ｐＨ
７，２）の組成の斜面培地で３１．５℃にて１８時間培
養して得られた１第　　１　　表 −６，５ 体を３白金耳宛接種し、３４℃で２日間培養後、第２表
に示した濃度の塘、イノ７ノ又はヒ４キサンチンを添加
し、更に３日間振盪培養を行なりた・培養液中に蓄積し
た５１−イノシン酸の量を第２表に示した。

第　　２　　表 添加グルコース、イノシン又はヒＩキサンチンは滅函し
、第２表記戦績度になるように粉末で添加した。

実施例２ ′ｊＡ施例施色１様な方法で添加時期、添加濃度などの
検討を行なっ九〇 その結果を第３表に示し九〇 第　　３　　表 ＊Ｇニゲルコース ＊＊Ｈ：イノシン 実施例３ 第１表に示した成分のうち大豆蛋白酸加水分解物は３０
ｆＬｌ／ｌとし、酵母エキスを１０１／ｌ加えた培地を
調製した。

これｔ−５００ｄ容肩付フラスコに２０１７宛分注し１
２０℃で１０分間加熱滅菌した。この培地にプレビパク
テリクム・アンモニアｒネスＡＪ　１２１９２（ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ　７９４９）をグルコース２０１１／ｌ、酵母エ
キス１０Ｉ／ノ、イデトン１０１１／ｌ、食塩５１／ｌ
。

アデニン１００ダ／ＩＩ、厚天２０　ｔｔ／ｌ　（ｐＨ
７，２）の組成の斜面培地で３１．５℃にて２４時間培
養して得られた菌体を３白金耳宛接種し、３４℃で４〜
６日間娠盪培養を行なった。培養の途中で第４表に示し
た条件で楯、イノシンを添加した。培養液中に蓄積した
５′−イノシン酸の量を第４表に示したＯ 第４表 注）グルコース、イノシ／は滅菌し、粉末で第４表記載
ｄ度になるように添加（同時）した。

実施例４ 第５表 第５表に示すシード培−５０Ｍを張込んだ５００ｄ容フ
ラスコ忙バチルス・ズプチルスＡＪ　１１１５８（ＦＩ
ＲＭ−Ｐ　４１２０）を１白金耳接橿し、３４℃にて１
６時間培養した。この培養液を、４７５表に示す主発酵
培地２０ａ／を張込んだ５００ａ／容フラスコにＩＲ１
添加して３４℃にて３〜５日間培養した＠循およびイノ
シンの添加方法と培養結果を第６表に示した。

第　　６　　表 濃度になるように添加（同時）した・ 実施例５ 第１表の液体培地３５　ＱＩＩＬｌを１．Ｏｌ小散散ジ
ャーファーメンタに張シ込み、１２０℃で１ｏ分間加熱
殺菌したりこれに実施例１と同様な方法で調製したコリ
ネバクテリウム・エキイＡＪ　１１７４９（ＦＩＲＭ−
Ｐ　６２６１）の種菌体（スラント３本の菌体）を接種
し、３４℃で５日間通気（１７８Ｖ、ＶＪｌ　）、攪拌
（８００ｒｐｍ）培養を行なった。培養期間中の培養液
の声はアンモニアガスを用いて６．８に調節した。楯お
よびイノシ／の添加方法は第７表に示した。

第　　７　　表 注）＊　　グルコースは４００１１／ｌのものを調製し
、１１５℃、１５分分熱熱滅菌後６ｄ添加した。ジャー
Ａ２では培養４８時時間上シ１、５　ａｉｇ、ｚｈの速
度で連続的に７２時間抜までフィードした。

注）＊＊　　イノ７ノは１００１１／ｌのものを調製し
、１１５℃、１５分分熱熱滅菌後９．２ａ（添加した・
ジャー墓３では培＄４８間抜目よシ０、８１１ｔｌ／ｂ
の速度で７２時間抜まで連続的にフィードした。

１２０時間の培養終了液にはジャー墓の順にそれぞれ５
ｔ−イノ７７　ｇ　（ＩＭＰ２Ｎａ　・７．５　Ｈ２Ｏ
として）が、２７．３１／ｌ　、　２６．６１／Ｉｔ　
、　２７゜８９／ｌ蓄積していた。

こ゛の培養液を集め、遠心分離で菌体を除去した清置液
ＩＡ’ｔ−ｐＨ３゜Ｏにｇ４整し、活性炭に吸着させた
。水洗後、５０慢メタノール水溶液１ｏｌで溶離させ、
容量１００ｄになるまで濃縮した。次にＮａＯＨで−７
，５にｇｓ！姫後同量のメタノールを加えると５’　−
ＩＭＰ　２Ｎａ　・７．５　Ｈ２Ｏの結晶２０Ｆが得ら
れた・ 実施例６ 実施例５と同様な方法で培養を開始し、培養液中のＳａ
Ｚが１０１／ｌまで消費された８２時時間上シ、 （１）１１５℃、１５分で加熱滅菌したグルコース溶ａ
４００１１／ｌを培養液中の糖一度が１０〜２０１１７
１になるように連続フィードし培養を継続させた。

（２）同様に加熱滅菌したイノシン溶液１００１／１を
１．　ｓ　ｍ１７ｈの速度で連続的にフィート９し、培
養を継続させた。

かくして培養１５０時間時間項養液には５１−イノシｙ
　峻（ＩＭＦ　２Ｎｍ　・７．５　Ｈ２Ｏとして）が３
２．８１１７１蓄積していた。

出　願　人　　味の素株式会社

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. コリネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属又はバチ
   ルス属に属し、糖から５′−イノシン酸を生成する能力
   を有する微生物を培養し、５′−イノシン酸を生成せし
   める際に、培養の途中でイノシン又は及びヒポキサンチ
   ンと糖を添加して更に培養し、培地中に５′−イノシン
   酸を生成・蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
   る発酵法による５′−イノシン酸の製造法。