JPS6094917A - Ｂ型肝炎感染予防用ワクチンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、Ｂ型肝炎表面抗原（以下Ｈ　Ｂ　ｓ　Ａ　ｇ
　）を主成分とするＢ型肝炎感染予防，用ワクチンの製
造方法に関し、さらに詳しくは、ｌ■Ｉ’３　ｓ　Ａ　
ｇの感染性を不活化するだめに、至適ｐ’Ｈ、および≠
Ｍ安定剤の存在下で加熱処理を行うことを特徴とするＢ
型肝炎感染予防用ワクチンの製造方法に関する。

ＩＩＢｓＡｇは、Ｂ型肝炎を起すウィルス（　１−Ｔ　
Ｂ　Ｖ　）の構成成分として知られているが、その大部
分は感染性のない小型粒子として存在しており、ヒトや
チンパンジーの血漿中に見出される。Ｉ−１　１３　ｓ
　Ａ　ｇは電気泳動的には、ヒ１・の血漿のグロブリン
蛋白に属している。

１１１３Ｖによる感染の予防としては、ＩＩＢｓ抗体を
含むグロブリン製剤を投与して受身免疫を獲得させる方
法もあるが、その効果は短期間であり一般のウィルス感
染の予防にみられるようにワクチンによる能動免疫が最
も優れていることはいうまでもない。

理論的にはＢ型肝炎に対するワクチンは、まずｌ３型肝
炎ウイルス物質を単離し、それを適当な方法で不活性化
きせるか、寸たけＩＩＢｓＡｇから未変化ウィルスを分
離し、補充的に不活化処理することにより提供される。

このワクチンは、生体に投与された時、１３型肝炎ウイ
ルスに対する抗体の産生がもたらされる結果、１３型肝
炎の感染を予防することができる。

１１ＢＳＡ、、ワクチンの製造には、これまで数多くの
方法が試みられてきた。ウィルスの感染性を不活化する
方法としては、６０℃、１０時間或は１００℃、２分間
の加熱処理を行う方法がある。

しかし、この加熱処理を施こすことにより、感染性は不
活化されるが、一方、Ｉ−１１３、’Ａ　ｇの抗原性の
失活がおこる。そこで本発明者等は、ＨＢ　ｓＡ　、の
感染性は不活化するが、抗原性の低下を導びかない条件
を種々検削しだ。

その結果、適当な安定剤を添加することによって抗原性
の低下のないことを見いだし本発明を完成した。

本発明は、Ｈ１３ｓ　Ａ　ｇを主成分とするＢ型肝炎感
染予防用ワクチンを製造する方法においてｔＴ　Ｂ　、
　Ａ　ｇの感染性を不活化するために加熱処理を安定剤
の存在下で行うことを特徴とするＢ型肝炎感染予防用ワ
クチンの製造方法からなる。

加熱処理を行寺う■浦ｓ　Ａ　ｇの精製の度合は特に限
定されるものではない。よって、Ｉｌ１３ＳＡｇ陽性混
合血漿、精製旧１ｓＡｇなどが広くその対象に含まれる
。

加熱処理溶液はｐ　Ｈを６〜８に保つことが好ましく、
塩〃、゛冒ケが０．０１〜０３Ｎ４の緩衝液、例えばリ
ン酸緩術液を用いて調整することか好まｌ−い。

このような条件の下で加熱安定化剤を添加する場合、ア
ミノ酸または糖類か好適である。アミノ酸としてはグリ
シン、リジン、アルギニン等が、４）１１ｉ　４”ａ″
４としては／ヨ糖、マンニット等が例示される。

添加量としては５〜３Ｑｗ／ｖ係の範囲がより好捷しい
が、これ以下においても急激にその効果が消失するもの
てはなく漸減的である。

加熱条件としては加熱温度５０〜７０℃、加温時間８〜
１２時間が好ましい。具体的には６０℃、１０時間とい
う条件が例示される。

このようにして加熱処理されたＩＩ　Ｂ　Ｓ　Ａ　ｇは
必要に応じて透析などで塩類および加熱安定化剤を除去
し、高度精製されたものではそのまま分注し、凍結乾燥
し製剤化する。粗製ＨＢｓＡｇの場合は、公知の分画処
理法、ゲルθヨ過法等を利用して高度に精製した後、同
様に製剤化する。

本発明によれば、１１１３３　Ａ　ｇ活性の損失が比較
的少なく、シかも、ウィルスを不活化できるだめＢ型肝
炎感染予防用ワクチンを工業的規模で効率良く製造しう
る効果を有する。

以下に本発明を実験例、実施例により証明するが本発明
はこれらに限定されるものではない。

実験例１　加熱処理溶液のｐ　Ｈの検問１１１３ｓＡＩ
Ｔ陽性混合血漿（旧”　ｌＩＡ価１　：　４，０００）
を各ｐｉ（に調整した後、６０℃、１０時間の加熱処理
を行なった。その後、ＩＬＰＩＩＡ価を測定し、回収率
（％）を算出した。〔表１〕 なお、安定化剤は添加しなかった。同様にして精製１１
Ｂ、Ａｇ（＋：ＬｐＩＪＡ価１：　４，０００）につい
ても検則した。

表　１ 上表に示したように血漿、精製ｌｌＢ５Ａｇの回収率と
も、加熱処理溶液のｐ　Ｈは６〜８が最適であることが
判った。

実験例２　添加剤の検討 Ｈ１３Ｓ　Ａ　ｇ陽性混合血漿、精製則３．Ａ、　（共
にＩｔ　Ｐ　ＨＡ価１：　４，０００）をｐＨ７，２に
調整し、各種加熱安定化剤を添加混合後、再度ｐｌ＋を
７２に調整して、６０℃、１０時間加熱処理を行なった
後、ＲＰ　］（Ａ価を測定し、回収率（％）を算出した
。

表　２ 添加剤としては糖類、アミノ酸ともに有効であり、濃度
も５〜３０■・／・・チの範囲で効果の上昇が見ら実施
例−１ ｕＬｓＡ、陽性であって、几１）　ＨＡ価で１：４，０
００程度の混合血漿を、ｌＮ−ＮａＯＨにてｐＨ７，２
に調整して、終濃度２Ｑ　ｗ／ｖ％のマンニットを添加
後混合し、再度１）１１を７．２とした１ｒｌＬ　”Ｙ
　Ｋ　ライ”’Ｃ１６０℃、１０　時間の処理を行った
結果、１ｔＰＨＡ価で８７％の回収率を示した。

実施例−２ 混合１１１３　、　Ａ　ｇ陽性血凝（ＩＬＰＨＡ価で１
：　ｓ、ｏｏｏ　）工ｏｌ！を実施例−１の方法で加熱
して、これを硫安濃度１８　ｗ／ｖ襲で塩析して、遠心
分離した上清へ終濃度５０　ｗ／ｖ％として得た沈澱を
遠心分離で得て、この溶解液にエアロジル６５　ｇ＋吸
着し、洗滌してで ４係アンモニア溶液でＨＢ　、　Ａ　ｇを溶出し、この
液にポリエチレン・グリコール処理を施し終濃度１４ｗ
／Ｖ俸にて沈澱として粗製１団ＳＡｇを得た。

次いで、この粗製ＩＩ　Ｂ　Ｓ　Ａ　ｇをセファローズ
のゲル濾過にて分画し、これを塩化セシウムを用いた１
００．０００−ｇ−のゾーナル、超遠心分離法にて精製
ＨＢＳＡｇを得た。

以上の方法で得た精製ＨＢ　ｓ　Ａ　ｇをｍｅ当り４５
０μｇに調製して、２０　”／ｖ　％　濃度にグリシン
を加えてｐｌｌをＩＮ−ＮａＣ）Ｈで７．２に訓１察し
て、６０℃、１０時間の加熱処理を行った。

結果は、９５チのＲＰ　ＨＡ価の回収を得た。

５饗♀Ｊ−＃式会肚五トリ※＄ Ｉ代週３、昨ｘ１士　庄司　隆 手続ネ…正書（１″：ｌ光ン １、事件の表示 昭和５８年特許願第２０３５２２号 ２、発明の名称 Ｂ型肝炎感染予防用ワクチンのＷＪＪ造方法３、補正を
する者 事件との関係　特許出願人 氏名（名称）　株式会社　ミドリ十字 ４、代理人 住所　〒５４１　大阪市東区今橋１丁目１５番地の１株
式会社ミドリ十字内 ６、補正により増加する発明の数　なし７、補正の対象
　明細書の特許請求の範囲の欄発明の詳細な説明の欄 （１）　明ａｍの「特許請求の範囲 のとおりに訂正する。

（２）　回書第２頁、第３行及び、同書第３頁、最終行
の「不活化」を「防止」に訂正覆る。

（３）　同書第３頁、第１０行〜第１１行の「感染性は
不活化されるＪを「感染性を防止ずることが出来る」に
訂正する。

（４）　同書第４頁、最終行の「透析」の前に「ポルマ
リン、その他の処理を｛）ｌ用後、」を挿入する。

（５）　同書第５頁、第１行〜第２行の「そのまま分注
し、凍結乾燥し製剤化する。」を「免疫賦活剤と混合し
、分注して製剤化する。」に訂正′りる。

以　上 （別　紙） 特許請求の範囲 （１）　ＨＢＳＡ（ｌを主成分とするＢ型肝炎感染予防
用ワクヂンを製造する方法においてｌ−Ｉ　Ｂ　ｓＡ（
］の感染性を旌１ずるために加熱処理を安定剤の存在下
で行うことを特徴とずるＢ型肝炎感染予防用ワクチンの
製造方法。

（２）　ｐＨ６〜８の条件下において加熱処理すること
を特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の製造方法
。

（３）　安定剤としてアミノ酸または糖類を用いること
を特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の製造方法
。

（４）　安定剤を５〜３０ｗ／ｖ％濃度に添加すること
を特徴とづる特許請求の範囲第（１）項記載の製造方法
。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）　ＩＩＢ５Ａ、を主成分とするＢ型肝炎感染予防
   用ワクチンを製造する方法においてＩＩＢ、Ａｇの感染
   性を不活化するために加熱処理を安定剤の存在下で行う
   ことを特徴とするＢ型肝炎感染予防用ワクチンの製造方
   法。
2. （２）　ｐＨ６〜８の条件下において加熱処理すること
   を特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の製造方法
   。
3. （３）安定剤としてアミノ酸または糖９’ＪＥを用いる
   ことを特徴とする特許 の製造方法。
4. （４）安定剤を５〜３　０　ｗ／ｖ　％濃度に添加する
   ことを特徴とする４４ｆ許請求の範囲第（１）項記載の
   製造方法。