JPS6044916B2 - 新抗生物質ｓｆ−２０５０ｂ物質及びその製造法 - Google Patents
新抗生物質ｓｆ−２０５０ｂ物質及びその製造法Info
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- JPS6044916B2 JPS6044916B2 JP53028324A JP2832478A JPS6044916B2 JP S6044916 B2 JPS6044916 B2 JP S6044916B2 JP 53028324 A JP53028324 A JP 53028324A JP 2832478 A JP2832478 A JP 2832478A JP S6044916 B2 JPS6044916 B2 JP S6044916B2
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規坊主物質及びその製造法に関する。
更に詳しく述べれば、放線菌を培養して得られる新坑生
物質ＳＦ−２０５Ｂ物質に関する。本発明者らは、既知
坑生物質の耐性菌を含む種々のグラム陰性菌及びグラム
陽性菌に坑菌活性を有する新規かつ有用な坑生物質を探
索した結果、ストレプトミセス属に属する放線菌を栄養
培地中で培養させることによつて、新坑生物鄭Ｆ一２０
５０Ｂ物質が生産されることを見出し、ＳＦ−２０５Ｂ
物質を単離してその理化学的、生化学的性状を確定する
ことによつて本発明を完成させた。本発明に使用される
ＳＦ−２０５Ｂ物質生産菌の一例としては茨城県の土壌
より新たに分離されたＳＦ−２０印株がある。ＳＦ−２
０５吋の菌学的性状は下記の通りである。Ｉ 形 態 気菌糸の着生は一般に貧弱である。
物質ＳＦ−２０５Ｂ物質に関する。本発明者らは、既知
坑生物質の耐性菌を含む種々のグラム陰性菌及びグラム
陽性菌に坑菌活性を有する新規かつ有用な坑生物質を探
索した結果、ストレプトミセス属に属する放線菌を栄養
培地中で培養させることによつて、新坑生物鄭Ｆ一２０
５０Ｂ物質が生産されることを見出し、ＳＦ−２０５Ｂ
物質を単離してその理化学的、生化学的性状を確定する
ことによつて本発明を完成させた。本発明に使用される
ＳＦ−２０５Ｂ物質生産菌の一例としては茨城県の土壌
より新たに分離されたＳＦ−２０印株がある。ＳＦ−２
０５吋の菌学的性状は下記の通りである。Ｉ 形 態 気菌糸の着生は一般に貧弱である。
比較的着生のよいスターチ寒天、チロシン寒天、シユク
ロース硝酸塩寒天等で観察すると分枝は単純分枝で車軸
分枝はみられず、気菌糸の先端は直状となる。菌核等の
特殊構造は観察されない。電子顕微鏡での観察による胞
子の表面構造は平滑型である。
ロース硝酸塩寒天等で観察すると分枝は単純分枝で車軸
分枝はみられず、気菌糸の先端は直状となる。菌核等の
特殊構造は観察されない。電子顕微鏡での観察による胞
子の表面構造は平滑型である。
胞子は惰円型ないし短円筒型で、大きさは０．５〜０．
８×０．８〜１．４ミクロンで通常１０胞子以上連鎖す
る。各種培地上の生育状態 色の記載について〔 〕内に示す標準はコンテイナ一
・コーポレーシヨン・オブ・アメリカ社製のカラー・ハ
ーモニイ一・マニユアルを用いた。
８×０．８〜１．４ミクロンで通常１０胞子以上連鎖す
る。各種培地上の生育状態 色の記載について〔 〕内に示す標準はコンテイナ一
・コーポレーシヨン・オブ・アメリカ社製のカラー・ハ
ーモニイ一・マニユアルを用いた。
培養温度は２８℃で、観察は１４〜２１ＥＩ培養後に行
つた。生理的性質 （１）生育温度範囲：スターチ寒天において２０培Ｃ〜
．３３゜Ｃの温度範囲て生育し、特に２５〜３０′Ｃが
最適温度てある。
つた。生理的性質 （１）生育温度範囲：スターチ寒天において２０培Ｃ〜
．３３゜Ｃの温度範囲て生育し、特に２５〜３０′Ｃが
最適温度てある。
（２）ゼラチンの液化：陽性（２０℃、１４日培養）（
３）スターチの加水分解：陽性（２８１Ｃ）（４）脱脂
乳の凝固：陰性（２８℃）脱脂乳のペプトン化：陽性（
２８℃） （５）メラニン様色素の生成：陰性 Ｉ 炭素源の利用性（ブリードハム・ゴツトリーブ寒天
培地、２８℃培養）（１）利用する：Ｄ−グルコース、
ラムノース、（２）利用が疑わしい：Ｄ−キシロース、
Ｌ−アラビノース、（３）利用しない：Ｄ−フラグドー
ズ、Ｄ−マンニトール、Ｉ−イノシトール、シユクロー
ス、ラフイノース、Ｖ全細胞加水分解物中のジアミノビ
メリン酸（ＤＡＰ）：ＬＬ型以上の性状を要約すると、
ＳＦ−２０５０株はストレプトミセス属に属し、気菌糸
先端は直状で胞子表面構造は平滑型の形態を有する。
３）スターチの加水分解：陽性（２８１Ｃ）（４）脱脂
乳の凝固：陰性（２８℃）脱脂乳のペプトン化：陽性（
２８℃） （５）メラニン様色素の生成：陰性 Ｉ 炭素源の利用性（ブリードハム・ゴツトリーブ寒天
培地、２８℃培養）（１）利用する：Ｄ−グルコース、
ラムノース、（２）利用が疑わしい：Ｄ−キシロース、
Ｌ−アラビノース、（３）利用しない：Ｄ−フラグドー
ズ、Ｄ−マンニトール、Ｉ−イノシトール、シユクロー
ス、ラフイノース、Ｖ全細胞加水分解物中のジアミノビ
メリン酸（ＤＡＰ）：ＬＬ型以上の性状を要約すると、
ＳＦ−２０５０株はストレプトミセス属に属し、気菌糸
先端は直状で胞子表面構造は平滑型の形態を有する。
気菌糸色調は初期白色一淡黄色で、成熟するにつれてシ
ェルピックとなり、時に黄色を帯びる。トレスナ一とバ
ッカス〔Ｈ．Ｄ．ＴＲＥＳＮＥＲａｎｄＥ．Ｊ．ＢＡＣ
ＫＵＳ：Ａｐｐｌ．ＭｌｃｒＯｂｊＯｌ．ｌｌ，３３５
（１９６３）〕のＲｅｄないしＹｅｌｌＯｗシリーズに
属する。裏面は黄色〜淡褐色で可溶性色素はいずれの培
地においても生成しない。本発明者らはＳＦ−２０５０
株をストレプトミセス◆エスピ一●ＳＦ−２０５０（Ｓ
ｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓＳｐ．ＳＦ一２０５０）と称す
ることにした。
ェルピックとなり、時に黄色を帯びる。トレスナ一とバ
ッカス〔Ｈ．Ｄ．ＴＲＥＳＮＥＲａｎｄＥ．Ｊ．ＢＡＣ
ＫＵＳ：Ａｐｐｌ．ＭｌｃｒＯｂｊＯｌ．ｌｌ，３３５
（１９６３）〕のＲｅｄないしＹｅｌｌＯｗシリーズに
属する。裏面は黄色〜淡褐色で可溶性色素はいずれの培
地においても生成しない。本発明者らはＳＦ−２０５０
株をストレプトミセス◆エスピ一●ＳＦ−２０５０（Ｓ
ｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓＳｐ．ＳＦ一２０５０）と称す
ることにした。
本菌株は微工研に寄託されており、その微工研申請書受
理番号は第４３５８号である。ＳＦ−２０印株は他のス
トレプトミセス属の菌株の場合にみられるように、その
性状が変化しやすく、例えば紫外部、エツクス線、高周
波、放射．能、薬品等を用いる人工的変異手段で変異し
うるものであり、いずれの変異株であつてもＳＦ−２０
５Ｂ物質の生産能を有するストレプトミセス属の菌はす
べて本発明の方法に使用することが出来る。
理番号は第４３５８号である。ＳＦ−２０印株は他のス
トレプトミセス属の菌株の場合にみられるように、その
性状が変化しやすく、例えば紫外部、エツクス線、高周
波、放射．能、薬品等を用いる人工的変異手段で変異し
うるものであり、いずれの変異株であつてもＳＦ−２０
５Ｂ物質の生産能を有するストレプトミセス属の菌はす
べて本発明の方法に使用することが出来る。
本発明の方法では、前記菌株を通常の微生物が利用しう
る栄養物を含有する培地で培養する。
る栄養物を含有する培地で培養する。
栄養源としては、従来のストレプトミセス属の菌の培養
に利用されている公知のものが使用できる。例えば、炭
素源として、グルコール、グリセロール、澱粉、水あめ
、糖みつ、大豆油等を使用しうる。また窒素源として、
大豆粉、小麦胚芽、肉工キズ、ペプトン、酵母工キズ、
コーンステイーブリカ一、硫酸アンモニウム、硝酸ナト
リウム等を使用しうる。その他、必要に応じて、炭酸カ
ルシーウム、食塩、塩化カリ、塩化コバルト、燐酸塩等
の無機塩類を添加するほか、菌の発育を助け、ＳＦ−２
０５能物質の生産を促進するごとき有機及び無機物適当
に添加することが出来る。特にコバルトイオンの添加は
生産性向上に有効である。培養法としては、一般坑生物
質生産の方法と同じく、液体培養法、特に深部培養法が
最も適している。培養は好気的条件下で行われ、培養に
適当な温度は２２〜３０℃であるが、多くの場合、２８
゜Ｃ付近で培養する。ＳＦ−２０５０Ｂ物質の生産は振
盪培養、タンク培養共に１〜４日で蓄積が最高に達する
。ＳＦ−２０５Ｂ物質の検定は次の方法で行つた。
に利用されている公知のものが使用できる。例えば、炭
素源として、グルコール、グリセロール、澱粉、水あめ
、糖みつ、大豆油等を使用しうる。また窒素源として、
大豆粉、小麦胚芽、肉工キズ、ペプトン、酵母工キズ、
コーンステイーブリカ一、硫酸アンモニウム、硝酸ナト
リウム等を使用しうる。その他、必要に応じて、炭酸カ
ルシーウム、食塩、塩化カリ、塩化コバルト、燐酸塩等
の無機塩類を添加するほか、菌の発育を助け、ＳＦ−２
０５能物質の生産を促進するごとき有機及び無機物適当
に添加することが出来る。特にコバルトイオンの添加は
生産性向上に有効である。培養法としては、一般坑生物
質生産の方法と同じく、液体培養法、特に深部培養法が
最も適している。培養は好気的条件下で行われ、培養に
適当な温度は２２〜３０℃であるが、多くの場合、２８
゜Ｃ付近で培養する。ＳＦ−２０５０Ｂ物質の生産は振
盪培養、タンク培養共に１〜４日で蓄積が最高に達する
。ＳＦ−２０５Ｂ物質の検定は次の方法で行つた。
検定菌としてバチルス●ステアローモフイルス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓｓｔｅａｒＯｔｈｅｒｍＯｐｈｉｌｕｓ）を
用い、検定用培地としてグルコース０．１％、トリフト
ン０．５％、酵母工キズ０．２５％、寒天１．５％（Ｐ
Ｈ７．Ｏ）の組成からなる培地を使用した。検定はペー
パーデイスク平板法で行ない、、５５℃、１６〜比時間
培養後阻止円を測定した。ＳＦ−２０５巾物質は主とし
て培養ｐ液中に蓄積される。
ｉｌｌｕｓｓｔｅａｒＯｔｈｅｒｍＯｐｈｉｌｕｓ）を
用い、検定用培地としてグルコース０．１％、トリフト
ン０．５％、酵母工キズ０．２５％、寒天１．５％（Ｐ
Ｈ７．Ｏ）の組成からなる培地を使用した。検定はペー
パーデイスク平板法で行ない、、５５℃、１６〜比時間
培養後阻止円を測定した。ＳＦ−２０５巾物質は主とし
て培養ｐ液中に蓄積される。
培養液中のＳＦ−２０５Ｂ物質は、後記する理化学性状
を有するので、その性状に従つて抽出、精製することが
可能であり、以下に示す方法が効率的である。すなわち
、有効成分を含む培養物から固形分を淵去し、泊液を活
性炭に吸着させ、５０％アセトン水で溶出させる。有効
成分を含む分画を濃縮し、アセトンを留去後、ベンジル
ジメチルアンモニウム クロライドあるいはテトラ−ｎ
−ブチルアンモニウム ハイドロゲ゛ンスルフアートの
ような第四級アンモニウム塩を含むハロゲノアルカン、
例えばジグ町レメタンで有効成分を抽出後、ヨウ化ソー
ダを含む水で再抽出し、凍結乾燥してＳＦ−２０５（ト
）物質の粗製物を得る。さらに精製するにはＤＥＡＥ−
セフアデツクスＡ−２５、ＱＡＥ一セフアデツクスＡ−
２５、ＤＥＡＥ−セルロース、ダウエツクス１×２のよ
うな陰イオン交換担体を用いたクロマトグラフイ一を繰
返すことによりＳＦ−２０５Ｂ物質を得ることができる
。このほか、バイオゲルＰ−２のようなゲルろ過剤、ア
ンバーライトＸＡＤのような多孔性樹脂あるいはセルロ
ースカラム等を適宜使用することにより精製が可能であ
る。かくして得られたＳＦ−２０５Ｂ物質の粉末を各種
の溶剤系での薄層クロマトグラフイ一に付したところ、
いずれの系においても単一のスポツトを示した。ＳＦ−
２０５Ｂ物質は以下に示すごとく室温以上の高温及び酸
性では極度に不安定なため、培養液から単離するに当つ
ては溶液中のＰＨが酸性にならないよう細心の注意を払
い溶液操作はすべて低温でかつ迅速に行なうことが肝要
である。また、ＳＦ−２０５Ｂ物質は酸性では極めて不
安定なため遊離酸の形で単離することは実質的に困難で
ある。
を有するので、その性状に従つて抽出、精製することが
可能であり、以下に示す方法が効率的である。すなわち
、有効成分を含む培養物から固形分を淵去し、泊液を活
性炭に吸着させ、５０％アセトン水で溶出させる。有効
成分を含む分画を濃縮し、アセトンを留去後、ベンジル
ジメチルアンモニウム クロライドあるいはテトラ−ｎ
−ブチルアンモニウム ハイドロゲ゛ンスルフアートの
ような第四級アンモニウム塩を含むハロゲノアルカン、
例えばジグ町レメタンで有効成分を抽出後、ヨウ化ソー
ダを含む水で再抽出し、凍結乾燥してＳＦ−２０５（ト
）物質の粗製物を得る。さらに精製するにはＤＥＡＥ−
セフアデツクスＡ−２５、ＱＡＥ一セフアデツクスＡ−
２５、ＤＥＡＥ−セルロース、ダウエツクス１×２のよ
うな陰イオン交換担体を用いたクロマトグラフイ一を繰
返すことによりＳＦ−２０５Ｂ物質を得ることができる
。このほか、バイオゲルＰ−２のようなゲルろ過剤、ア
ンバーライトＸＡＤのような多孔性樹脂あるいはセルロ
ースカラム等を適宜使用することにより精製が可能であ
る。かくして得られたＳＦ−２０５Ｂ物質の粉末を各種
の溶剤系での薄層クロマトグラフイ一に付したところ、
いずれの系においても単一のスポツトを示した。ＳＦ−
２０５Ｂ物質は以下に示すごとく室温以上の高温及び酸
性では極度に不安定なため、培養液から単離するに当つ
ては溶液中のＰＨが酸性にならないよう細心の注意を払
い溶液操作はすべて低温でかつ迅速に行なうことが肝要
である。また、ＳＦ−２０５Ｂ物質は酸性では極めて不
安定なため遊離酸の形で単離することは実質的に困難で
ある。
このためＳＦ−２０５（ト）物質は最終的に中性水溶液
を凍結乾燥することによつて白色無定形粉末状の塩とし
て得られる。その純度は培養力価により左右されること
がある。塩の種類は精製に使用される陽イオンによつて
規定され、例えば５ＤＥＡＥ−セフアデツクスＡ−２５
のクロマトグラフイ一で食塩水を溶離液として用いれば
ナトリウム塩として得られる。ナトリウム塩以外の医薬
的に受容可能な塩としてカリウムのごときアルカリ金属
塩、カルシウムの如きアルカリ土類金属塩、アＯルミニ
ウム、アンモニウム塩等の無機塩又は置換アンモニウム
塩等の有機塩を上記ナトリウム塩を同様な方法で調製す
ることができる。また、ナトリウム塩から他の塩への変
換はダウエツクス５０Ｗのような陽イオン交換樹脂をあ
らかじめ交換する陽イオンて置感した後、ナトリウム塩
の水溶液を通過させることによつても可能である。次に
、これまでに得られた最純品と思われるＳＦ−２０５Ｂ
物質のナトリウム塩の理化学的性状について述べる。
を凍結乾燥することによつて白色無定形粉末状の塩とし
て得られる。その純度は培養力価により左右されること
がある。塩の種類は精製に使用される陽イオンによつて
規定され、例えば５ＤＥＡＥ−セフアデツクスＡ−２５
のクロマトグラフイ一で食塩水を溶離液として用いれば
ナトリウム塩として得られる。ナトリウム塩以外の医薬
的に受容可能な塩としてカリウムのごときアルカリ金属
塩、カルシウムの如きアルカリ土類金属塩、アＯルミニ
ウム、アンモニウム塩等の無機塩又は置換アンモニウム
塩等の有機塩を上記ナトリウム塩を同様な方法で調製す
ることができる。また、ナトリウム塩から他の塩への変
換はダウエツクス５０Ｗのような陽イオン交換樹脂をあ
らかじめ交換する陽イオンて置感した後、ナトリウム塩
の水溶液を通過させることによつても可能である。次に
、これまでに得られた最純品と思われるＳＦ−２０５Ｂ
物質のナトリウム塩の理化学的性状について述べる。
但し、凍結乾燥粉末として得られるため数パーセントの
水または他の不純物が含まれるこもありうる。１ＳＦ−
２０５Ｂ物質は元素分析及び電気泳動の結果から２塩基
性酸と考えられ、そのナトリウム塩は実質的にジナトリ
ウム塩である。
水または他の不純物が含まれるこもありうる。１ＳＦ−
２０５Ｂ物質は元素分析及び電気泳動の結果から２塩基
性酸と考えられ、そのナトリウム塩は実質的にジナトリ
ウム塩である。
２ｐＨ６．４のピリジン一酢酸緩衝液中の高圧戸紙電気
泳動でＳＦ−２０５０？吻質は陽極へ移動し、セフアマ
イシンＡの移動度を１．０とした場合の相対移動度は１
．５８である。
泳動でＳＦ−２０５０？吻質は陽極へ移動し、セフアマ
イシンＡの移動度を１．０とした場合の相対移動度は１
．５８である。
３粉末は乾燥剤存在下て低温保存すれは比較的安定であ
るが、その水溶液は酸性で極めて不安定、アルカリ性で
不安定であり、ＰＨ６．５〜８付近が最も安定であるが
、中性でも高温では速やかに分解する。
るが、その水溶液は酸性で極めて不安定、アルカリ性で
不安定であり、ＰＨ６．５〜８付近が最も安定であるが
、中性でも高温では速やかに分解する。
また中性水溶液に０．０２Ｍの中性ヒドロキシルアミン
溶液を等量加え、室温に３０ノ分以上放置すると坑菌活
性は完全に失活し、３０５ｎｍの紫外部吸収極大も消失
する。４水に易溶、メタノールに若干可溶、クロロホル
ム、酢酸エチルににはほとんど不溶である。
溶液を等量加え、室温に３０ノ分以上放置すると坑菌活
性は完全に失活し、３０５ｎｍの紫外部吸収極大も消失
する。４水に易溶、メタノールに若干可溶、クロロホル
ム、酢酸エチルににはほとんど不溶である。
５ＳＦ−２０５０取吻質は明瞭な融点を示さず、１５０
２゜Ｃ以上で徐々に分解する。
２゜Ｃ以上で徐々に分解する。
６元素分析値は炭素３３．５％、水素３．９％、窒素５
．７％、硫黄１３．８％であつた。
．７％、硫黄１３．８％であつた。
７１／１００Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ６．５）中、２５μ
Ｇｌｍｌでの紫外部吸収スペクトルは第１図に示３すと
おりで、２２８ｎｍと３０５ｎｍに極大吸収を示す。
Ｇｌｍｌでの紫外部吸収スペクトルは第１図に示３すと
おりで、２２８ｎｍと３０５ｎｍに極大吸収を示す。
８臭化カリウム錠での赤外部吸収スペクトルは第２図に
示すとおりである。
示すとおりである。
９重水中に測定した核磁気共鳴スペクトルは第３３図に
示とおりである。
示とおりである。
１０１／１００Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ６．５）中で測定
した円偏光二色性曲線は第４図に示す通りである。
した円偏光二色性曲線は第４図に示す通りである。
１１セルロース薄層クロマトグラフイ一における４３Ｒ
，値はつぎのとおりである。
，値はつぎのとおりである。
（ａ） ｎ−ブタノール−ｎ−プロバノール一水（７リ
JメF６）、Ｒ，＝０．４２（ｂ） ８０％プロパノール
、Ｒ，＝０．３２（Ｃ｝ アセトニトリル一水（７：３
）、Ｒ，＝０．６５１２ウオータス社のマイクロボンダ
バツク（ＮＨ２）（４ｒｆｒＩＩ１×３０ｃＴｎ）を用
いた高速液体クロマトグラフイ一ては、１／１００Ｍリ
ン酸緩衝液（ＰＨ６．＼流速０．３ｍ１Ｉｍ１ｎ）で展
関すると保持時間２２分２０８′て溶出されてくる。
JメF６）、Ｒ，＝０．４２（ｂ） ８０％プロパノール
、Ｒ，＝０．３２（Ｃ｝ アセトニトリル一水（７：３
）、Ｒ，＝０．６５１２ウオータス社のマイクロボンダ
バツク（ＮＨ２）（４ｒｆｒＩＩ１×３０ｃＴｎ）を用
いた高速液体クロマトグラフイ一ては、１／１００Ｍリ
ン酸緩衝液（ＰＨ６．＼流速０．３ｍ１Ｉｍ１ｎ）で展
関すると保持時間２２分２０８′て溶出されてくる。
１３呈色反応
陽性 過マンガン酸カリウム、ヨード反応 陰性 ニ
ンヒドリン１４比旋光度〔α〕２２Ｄ−４６ヨ（Ｃ＝０
．１、Ｒｉ２Ｏ）ＳＦ−２０５Ｂ物質の坑菌活性をペー
パーデイスク法で測定した結果はつぎのとおりである。
ンヒドリン１４比旋光度〔α〕２２Ｄ−４６ヨ（Ｃ＝０
．１、Ｒｉ２Ｏ）ＳＦ−２０５Ｂ物質の坑菌活性をペー
パーデイスク法で測定した結果はつぎのとおりである。
又、ＳＦ−２０５０Ｂ物質はサージエンドの方法〔Ｍ．
Ｇ．Ｓａｒｇｅｎｔ，ＪＯｕｒｎａｌＯｆＢａｃｔｅｒ
ｉＯｌＯｇｙ，９５，ｌ４９３（１９６８）〕に従つて
測定すると、β−ラクタマーゼ阻害活性を有することが
判明した。すなわち試薬として、Ａ液：ペニシリナーゼ
（米国、カルビオケム社 製）をＰＨ７．Ｏ，Ｏ．
ｌＭリン酸緩衝液にて 溶解し、下記の測定条件下
で測定し、 ４９０ｎｍの吸光度が約０．５を与え
る活性 になるよう希釈する。
Ｇ．Ｓａｒｇｅｎｔ，ＪＯｕｒｎａｌＯｆＢａｃｔｅｒ
ｉＯｌＯｇｙ，９５，ｌ４９３（１９６８）〕に従つて
測定すると、β−ラクタマーゼ阻害活性を有することが
判明した。すなわち試薬として、Ａ液：ペニシリナーゼ
（米国、カルビオケム社 製）をＰＨ７．Ｏ，Ｏ．
ｌＭリン酸緩衝液にて 溶解し、下記の測定条件下
で測定し、 ４９０ｎｍの吸光度が約０．５を与え
る活性 になるよう希釈する。
Ｂ液：１．３％ペニシリンＧカリウム塩の水溶液Ｃ液：
ＰＨ７．Ｏ，Ｏ．ｌＭリン酸緩衝液Ｄ液：ヨード・酢酸
緩衝液、サージエンドの方 法に従い調整する。
ＰＨ７．Ｏ，Ｏ．ｌＭリン酸緩衝液Ｄ液：ヨード・酢酸
緩衝液、サージエンドの方 法に従い調整する。
測定操作として、試験管にＢ液０．５ｍ１とＣ液２ｍ１
を合せ３０℃に予め５分保ち、Ａ液０．５ｍ１を加え３
０゜Ｃで３紛反応させた後、Ｄｌ５ｍＬを加え、１紛後
４９０ｎｍにおける吸光度を測定する。
を合せ３０℃に予め５分保ち、Ａ液０．５ｍ１を加え３
０゜Ｃで３紛反応させた後、Ｄｌ５ｍＬを加え、１紛後
４９０ｎｍにおける吸光度を測定する。
ブランク試験としては活性測定と同じてあるが、Ａ液の
みをＤ液を加えた直後に添加し、以下同様に操作する。
阻害力測定試験としては、そのブランク試験も上記と全
く同様に操作するが、阻害物質をＣ液で適当に希釈した
液をＣ液として用いる。上記測定法によりＳＦ−２０５
巾物質のペニシリナーゼ活性を５０％阻害するに要する
濃度を求めると、その値は０．６６μＧｌｍＬであつた
。
みをＤ液を加えた直後に添加し、以下同様に操作する。
阻害力測定試験としては、そのブランク試験も上記と全
く同様に操作するが、阻害物質をＣ液で適当に希釈した
液をＣ液として用いる。上記測定法によりＳＦ−２０５
巾物質のペニシリナーゼ活性を５０％阻害するに要する
濃度を求めると、その値は０．６６μＧｌｍＬであつた
。
このようにＳＦ−２０５Ｂ物質は種々のグラム陽性菌及
び陰性菌に対して活性であるばかりでなく、β−ラクタ
マーゼ産性で耐性菌にも有効な価値ある坑生物質てあり
、人間及ひ家畜動物の医薬として、又食品保存や医療器
具の殺菌剤として利用てきる。ＳＦ−２０５Ｂ物質は単
独ての使用の外、他の坑生物質、特にβ−ラクタム坑生
物質との併用が効果的である。又、以上述べた理化学的
、生物学的性状を有するＳＦ−２０５０Ｂ物質は文献上
該当するものがなく、従つて本物質の新規性は明らかて
ある。
び陰性菌に対して活性であるばかりでなく、β−ラクタ
マーゼ産性で耐性菌にも有効な価値ある坑生物質てあり
、人間及ひ家畜動物の医薬として、又食品保存や医療器
具の殺菌剤として利用てきる。ＳＦ−２０５Ｂ物質は単
独ての使用の外、他の坑生物質、特にβ−ラクタム坑生
物質との併用が効果的である。又、以上述べた理化学的
、生物学的性状を有するＳＦ−２０５０Ｂ物質は文献上
該当するものがなく、従つて本物質の新規性は明らかて
ある。
実施例
｛１）ＳＦ−２０５吋の培養
種菌として、ストレプトミセス・エスピ一●ＳＦ−２０
５唯（微工研菌寄第４３５８号）を用い、種培地として
、可溶性澱粉１．０％、大豆粉３．０％（殺菌前ＰＨ７
．Ｏ）を用いた。
５唯（微工研菌寄第４３５８号）を用い、種培地として
、可溶性澱粉１．０％、大豆粉３．０％（殺菌前ＰＨ７
．Ｏ）を用いた。
種菌１白金耳を５０ｍ１太型試験管中、１０ｍＬの上記
種培地に接種し、２８゜Ｃで４８時間培養する。この種
培養を、５００ｍ１坂ロフラスコ中の１００ｍｔの種培
地５本に、それぞれ１ｍｔずつ接種し、２８℃で２７時
間培養する。得られた種培養５００ｍ１を更に３０ｅジ
ヤーフアーメンタ一中の２０′の種培地に接種し、２８
℃て２４時間通気攪拌培養を行なう。この種培養１５１
を３００１容量のフアーメンタ一中の生産培地２００′
に接種する。生産培地の組成はグルコース２．０％、、
大豆粉１．０％、Ｋ２ＨＰＯ４Ｏ．ｌ％、ＣａＣＲ３Ｏ
．Ｏ２％、ＣＯＣ′２／６１｛２００．０００１％（殺
菌前ＰＨ６．５）てある。培養は２８゜Ｃて４４時間通
気撹拌方式て行なう。培養後、ケイソウ土を用いて沖過
し、培養淵液１７７０ｅを得た。（２）ＳＦ−２０５Ｂ
物質の抽出、単離 上記のように得られた培養淵液１７０′を活性炭素（和
光純薬製）１０ｅの塔にかけ、、有効成分を吸着させ、
１２ｅの水て洗つた後、５０％アセトン水で溶出する。
種培地に接種し、２８゜Ｃで４８時間培養する。この種
培養を、５００ｍ１坂ロフラスコ中の１００ｍｔの種培
地５本に、それぞれ１ｍｔずつ接種し、２８℃で２７時
間培養する。得られた種培養５００ｍ１を更に３０ｅジ
ヤーフアーメンタ一中の２０′の種培地に接種し、２８
℃て２４時間通気攪拌培養を行なう。この種培養１５１
を３００１容量のフアーメンタ一中の生産培地２００′
に接種する。生産培地の組成はグルコース２．０％、、
大豆粉１．０％、Ｋ２ＨＰＯ４Ｏ．ｌ％、ＣａＣＲ３Ｏ
．Ｏ２％、ＣＯＣ′２／６１｛２００．０００１％（殺
菌前ＰＨ６．５）てある。培養は２８゜Ｃて４４時間通
気撹拌方式て行なう。培養後、ケイソウ土を用いて沖過
し、培養淵液１７７０ｅを得た。（２）ＳＦ−２０５Ｂ
物質の抽出、単離 上記のように得られた培養淵液１７０′を活性炭素（和
光純薬製）１０ｅの塔にかけ、、有効成分を吸着させ、
１２ｅの水て洗つた後、５０％アセトン水で溶出する。
８′ずつの分画を４本とり、活性分画２と３を合併し、
減圧下、３８℃でアセトンを留・去して７′に濃縮する
。ついで０．２％（Ｗ／）のベンジルジメチルセチルア
ンモニウムクロライドを含有するジクロルメタン７ｆを
この濃縮液に加え、撹拌して有効成分を抽出し、ジクロ
ルメタン層に１％（Ｗ／）のヨウ化ソーダを含有する水
７００ｍ１を加えて有効成分を再度水層に転溶する。こ
の水層を減圧下で濃縮してジクロルメタンを完全に留去
してから、予めＰＨ７．２のリン酸緩衝液で緩衝化した
ＤＥＡＥ−セフアデツクスＡ−２５（フアルマシア社製
）の１ｅの塔にかけて有効成）分を吸着させ、ＰＨ７．
２の２０ｒｒ１Ｍのリン酸緩衝液３′で洗浄し、さらに
同じ緩衝液で溶解した０．１Ｍの食塩水６ｅで洗浄する
。次いで同じ緩衝液で溶解した０．１４Ｍの食塩水でで
溶出すると、担体量に対して約１２〜１４倍量｛１５０
ｍ１一分画、フラクシヨンＮＯ．７８〜９８）にかけて
有効成分が溶出されてくる。この活性フラクシヨン（約
２．１ｅ）を活性炭素３０ｍｔの塔のかけて有効成分を
吸着させる。この活性炭塔を水５０ｍＬで洗つた後、５
０％アセトン水１２０ｍ１て有効成分を溶出させる。こ
の溶離液を減圧下で濃縮してアセトンを留去した後凍結
乾燥すると、６２ｍｇの粗ＳＦ−２０５Ｂ物質ジナトリ
ウム塩が白色粉末として得られた。（３）ＳＦ−２０５
Ｂ物質の精製 上記のごとく得られた粗ＳＦ−２０５能物質９２ｍｇを
２０ｒｒ１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．２）２ｍ１に溶か
し、予めリン酸緩衝液（ＰＨ７．２）で緩衝化したＤＥ
ＡＥ−セフアデツクスＡ−２５１２０ｍＬの塔に通して
有効成分を吸着させ、２０ｒＴ１Ｍン酸緩衝液（ＰＨ７
．２）６００ｍ１で洗浄した後、同じ緩衝液に溶解した
０．１Ｍ食塩水で展関すると、担体量に対して１８〜２
２倍量（１８ｍ１一分画フラクシヨンＮＯ．ｌｌ８〜１
４６）にかけて有効成分が溶離されてくる。
減圧下、３８℃でアセトンを留・去して７′に濃縮する
。ついで０．２％（Ｗ／）のベンジルジメチルセチルア
ンモニウムクロライドを含有するジクロルメタン７ｆを
この濃縮液に加え、撹拌して有効成分を抽出し、ジクロ
ルメタン層に１％（Ｗ／）のヨウ化ソーダを含有する水
７００ｍ１を加えて有効成分を再度水層に転溶する。こ
の水層を減圧下で濃縮してジクロルメタンを完全に留去
してから、予めＰＨ７．２のリン酸緩衝液で緩衝化した
ＤＥＡＥ−セフアデツクスＡ−２５（フアルマシア社製
）の１ｅの塔にかけて有効成）分を吸着させ、ＰＨ７．
２の２０ｒｒ１Ｍのリン酸緩衝液３′で洗浄し、さらに
同じ緩衝液で溶解した０．１Ｍの食塩水６ｅで洗浄する
。次いで同じ緩衝液で溶解した０．１４Ｍの食塩水でで
溶出すると、担体量に対して約１２〜１４倍量｛１５０
ｍ１一分画、フラクシヨンＮＯ．７８〜９８）にかけて
有効成分が溶出されてくる。この活性フラクシヨン（約
２．１ｅ）を活性炭素３０ｍｔの塔のかけて有効成分を
吸着させる。この活性炭塔を水５０ｍＬで洗つた後、５
０％アセトン水１２０ｍ１て有効成分を溶出させる。こ
の溶離液を減圧下で濃縮してアセトンを留去した後凍結
乾燥すると、６２ｍｇの粗ＳＦ−２０５Ｂ物質ジナトリ
ウム塩が白色粉末として得られた。（３）ＳＦ−２０５
Ｂ物質の精製 上記のごとく得られた粗ＳＦ−２０５能物質９２ｍｇを
２０ｒｒ１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．２）２ｍ１に溶か
し、予めリン酸緩衝液（ＰＨ７．２）で緩衝化したＤＥ
ＡＥ−セフアデツクスＡ−２５１２０ｍＬの塔に通して
有効成分を吸着させ、２０ｒＴ１Ｍン酸緩衝液（ＰＨ７
．２）６００ｍ１で洗浄した後、同じ緩衝液に溶解した
０．１Ｍ食塩水で展関すると、担体量に対して１８〜２
２倍量（１８ｍ１一分画フラクシヨンＮＯ．ｌｌ８〜１
４６）にかけて有効成分が溶離されてくる。
この活性フラクシヨン４８０ｍＬを活性炭素１０ｍ１の
塔にかけて有効成分を吸着させる。この活性炭素を４０
ｍｔの水で洗つた後、５０ｍＬの５０％アセトン水で有
効成分を溶出させ、ついで減圧下で約３ｍ１まで濃縮し
、凍結乾燥すると、ＳＦ一２０５能物質ナトリウム塩の
白色粉末２．２ｍ９が得られた。
塔にかけて有効成分を吸着させる。この活性炭素を４０
ｍｔの水で洗つた後、５０ｍＬの５０％アセトン水で有
効成分を溶出させ、ついで減圧下で約３ｍ１まで濃縮し
、凍結乾燥すると、ＳＦ一２０５能物質ナトリウム塩の
白色粉末２．２ｍ９が得られた。
第１図はＳＦ−２０５Ｂ物質（ナトリウム塩）の紫外線
吸収スペクトル（ＰＨ６．５ｌ／１００Ｍリン酸緩衝液
中２５μＧｌｍｌ）を示す。
吸収スペクトル（ＰＨ６．５ｌ／１００Ｍリン酸緩衝液
中２５μＧｌｍｌ）を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記の性質、すなわちｐＨ６．４の高圧濾紙電気泳
動において陽極に向つて移動し、セフアマイシンＡの移
動度を１．０とした場合に相対移動度１．５８を示す二
塩基性酸で、水溶液から凍結乾燥して得られるナトリウ
ム塩は白色粉末で、水に易溶、メタノールにやや可溶、
酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼンに難溶で、水溶液
中の紫外部吸収スペクトルは２２８ｎｍ、３０５ｎｍに
極大を有し、第２図で実質的に代表される赤外部吸収ス
ペクトルを有し、第３図で実質的に代表される核磁気共
鳴吸収スペクトルを有し、第４図で実質的に示される円
偏光二色性を有し、元素分析値、炭素３３．５％、水素
３．９％、窒素５．７％、硫黄１３．８％を示し、ウオ
ー太ーズ社の高速液体クロマトグラフィーにおいてマイ
クロボンダパック（ＮＨ＿２）４ｍｍ×３０ｃｍのカラ
ムで毎分０．３ｍｌのｐＨ６．５の０．０１Ｍ燐酸緩衝
液で展開すると、２２分２０秒の保持時間を有し、セル
ロース薄層クロマトグラムのＲｆ値は、ｎ−ブタノール
：ｎ−プロパノール：水＝７：７：６で展開した場合０
．４２、８０％含水プロパノールで展開した場合０．３
２、アセトニトリル：水＝７：３で展開した場合０．６
５を示し、ヒドロキシルアミンで容易に失活する性質を
有する新坑生物質ＳＦ−２０５０Ｂ物質及びその塩。 ２ ストレプトミセス属に属するＳＦ−２０５０Ｂ物質
生産菌を培養し、培養物からＳＦ−２０５０Ｂ物質又は
その塩を採取することを特徴とする新坑生物質ＳＦ−２
０５０Ｂ物質又はその塩の製造法。 ３ ＳＦ−２０５０Ｂ物質生産菌がストレプトミセス・
エスピー・ＳＦ−２０５０株である特許請求の範囲第２
項記載の製造方法。
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53028324A JPS6044916B2 (ja) | 1978-03-14 | 1978-03-14 | 新抗生物質ｓｆ−２０５０ｂ物質及びその製造法 |
| US05/006,873 US4220639A (en) | 1978-02-14 | 1979-01-26 | Antibiotics SF-2050 and SF-2050B substances and production and use thereof |
| GB7903093A GB2014129B (en) | 1978-02-14 | 1979-01-29 | Antibiotics sf 2050 ans 2050b substances and production and use thereof |
| SE7901094A SE447909B (sv) | 1978-02-14 | 1979-02-07 | Forfarande for framstellning av antibiotika sf-2050 och/eller sf-2050b genom odling av streptomyces sp sf-2050 (atcc 31450), antibiotikumet sf-2050b samt antibakteriell komposition innehallande sf-2050b |
| NL7901010A NL7901010A (nl) | 1978-02-14 | 1979-02-08 | Anti-biotisch werkzame produkten sf-2050 en sf-2050b, alsmede bereiding en toepassing ervan. |
| DE2905066A DE2905066C2 (de) | 1978-02-14 | 1979-02-10 | Antibiotikum SF-2050B, Verfahren zur Herstellung desselben und antibakterielle Mittel, welche dasselbe enthalten |
| CA000321333A CA1142468A (en) | 1978-02-14 | 1979-02-13 | Antibiotic sf-2050 and sf-2050b substances and production and use thereof |
| IT7909342A IT1207884B (it) | 1978-02-14 | 1979-02-13 | Sostaznze antibiotiche prodotte coltivando un microorganismo di streptomyces processo per la loro produzione e metodo di impiego delle stesse |
| FR7904461A FR2416900A1 (fr) | 1978-02-14 | 1979-02-13 | Substances antibiotiques nouvelles inhibant la b-lactamase, leur production et leur utilisation |
| CH141579A CH644151A5 (de) | 1978-02-14 | 1979-02-14 | Antibiotische substanzen sf-2050 und sf-2050b und verfahren zu ihrer herstellung. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53028324A JPS6044916B2 (ja) | 1978-03-14 | 1978-03-14 | 新抗生物質ｓｆ−２０５０ｂ物質及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS54122203A JPS54122203A (en) | 1979-09-21 |
| JPS6044916B2 true JPS6044916B2 (ja) | 1985-10-05 |
Family
ID=12245424
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP53028324A Expired JPS6044916B2 (ja) | 1978-02-14 | 1978-03-14 | 新抗生物質ｓｆ−２０５０ｂ物質及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6044916B2 (ja) |
-
1978
- 1978-03-14 JP JP53028324A patent/JPS6044916B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS54122203A (en) | 1979-09-21 |
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