JPS60263858A - 分析要素及び全血ヘモグロビンアツセイへのその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は臨床化学及び全血用の乾燥（ドライ）化学アッ
セイに関する。さらに詳しくは、本発明は全血中のヘモ
グロビンの定量に有用な乾燥化学アッセイ及び該アッセ
イに有用な多帯域要素に関する。

〔従来の技術〕

グロ）ｙｌｅルフィリン■補欠分子族中に鉄を含む蛋白
質であるヘモグロビンは生理学的には肺から他の体組織
への全血中酸素の主要なキャリヤーとして機能する。ヘ
モグロビンはまた、全血中に最も高い濃度（正常値１２
〜１８グラムバーセントノで認められる蛋白質である。

正常値未満の濃度は貧血の症状であり、正常値より高−
い濃度は多血法血症または赤血球増多症の徴候である。

全血のヘモグロビン含１の測定は定期的にカされる、す
なわち、最も頻繁に実施される臨床実験室試験の１つで
ある。

ヘモグロビン定量のための多数の方法及び装置が知られ
ている。ヘモグロビンはタルクイスト（Ｔａ１ｌｑｕｌ
ｓｔ）法のように、ヘモグロビンの他ノ化学的変形を生
じずにオキシヘモグロビン（ヘモグロビンの１つの型）
によって寿えられる赤色の透過または反射吸光度を測定
することによって直接的に分析できる。

しかし々がら、ヘモグロビンは血中に、各・ン独特の吸
収スにクトルを有する数種の型〔たとえば、オキシヘモ
グロビン（ＨｂＯ２）　、デオキシヘモグロビン（ｎｂ
　）、メトヘモグロビン（ｍｅ　ｔＨｂ　）、カルブキ
シヘモグロビン（ＨｂＣＯ）及ヒスルフヘモグロビン（
ＨｂＳ）　）で存在する。

総ヘモグロビンを定量するためには１回の測定で全ての
型のヘモグロビンを測定するのが望ましいであろう。こ
のためには、種々の型のヘモグロビン番車−の検出可能
で安定な型に化学的に変換する必要がある。はとんどの
型のヘモグロビンを単一の検出可能な最終生成物に変換
する「間接的な」アッセイ法を用いる試みが′なされて
いる。常用される一方法においては、ヘモグロビン中の
鉄をフェリシアン化物によって酸化して（Ｆｅ２＋から
Ｆｅ　へ〕、ヘモグロビンの型をメトヘモグロビンに変
化し１次いでシアン化物によってメトヘモグロビンから
シアンメトヘモグロビンに変換ｆる。このよく知られた
ドラブキン（Ｄｒａｂｋｉｎ）の方法はかなり迅速であ
り、溶液アッセイに適当である０この方法がヘモグロビ
ン測定のための承認された標準的方法としてこれまで国
際的に採用されてきた。

乾燥化学アッセイが知られている。このアッセイは化学
試薬を種々の実質的に「指触乾燥状態の」要素、たとえ
ば、試験片及び多帯域分析要素に混合する分析法である
。湿潤（ウェット）化学゛ｆアッセイす、なわち、溶液
中の試薬を用いる手法〕よりも優れた乾燥化学アッセイ
の利点もまた知られており、このような利点としては使
用容易性、経済的節約及び迅速な分析が挙げられる。た
とえば、米国特許第３，９９２，１５８号［１９７６年
１１月１６日にゾルツィビロビッッ（Ｐｒｚｙｂｙｌ　
ｏｗｌ　ｅｚ）らに対して発行〕を参照されたい。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、現存する乾燥化学アッセイに間接的ドラ
ブキン法を適合させようとする場合にはいくつかの問題
に直面する。溶液アッセイにおいては血液サンプルの２
５０倍稀釈が必要である。

しかしながら、このような稀釈は分析を複雑にするので
自動分析の場合には望ましくない。従って、ヘモグロビ
ンの濃度は未稀釈の乾燥アッセイの場合の方がはるかに
高く、稀釈された溶液アッセイに常用される少量のドラ
ブチン試験（すなわち。

シアン化物）は正確な乾燥アッセイを提供するのに不充
分である。乾燥要素のこの欠陥を相殺するためにはフェ
リシアン化物及びシアン化物の景をかなシ増加させなけ
ればならない。しかしながら、ドラブチン試験に赴いて
常用されるシアン化カリウムは特に比較的高濃度におい
て極めて有毒である。多量のシアン化カリウムを含む乾
燥分析要素を製造または使用する人々に対する危険は許
容され得ないものである。

酸化型のヘモグロビンと反応する他の薬剤が知られてい
る。たとえば、イルッ（Ｐｅｒｕｔｚ）らはＢｉｏｃｈ
ｅｍ、　１７　、３６４０〜３６５２”！−ノ（１９７
８）にｂｖて種々の型のヘモグロビンとチオシアネート
との反応についての研究を述べてイル。乾燥要素を用い
たベモグロビンアッセイはこの文献には記載されて旨な
い。

いくつかの界面活性剤が種々の型のヘモグロビンを検出
可能な生成物に変換できることもまた、観察されて因る
。たとえば、英国特許第２．０５２，０５６号（１９８
１年１月２１日公告）はアルカリ溶液中の水溶性非イオ
ン性洗浄剤を、ヘモグロビン及びその誘導体を５７５ｍ
ｍＩＣおいて測定可能な最終生成物に変換するのに使用
するこ　゛とを述べている。陰イオン性または陽イオン
性洗浄剤の同様な使用はこの文献の教示においては特に
よくないとされている。別の文献、すなわち。

オシロら、臨床肩側、２９（２）、２０３〜２０９ペー
ジ（１９８１年）はヘモグロビンの溶液アッセイにおけ
るドデシル硫酸ナトリウムの使用を述べている。

しかし々から、これらの公知の溶液アッセイ法を乾燥化
学アッセイに適応させようとする試みは許容され得る結
果を生じなかりた。チオシアネートマたは陰イオン性界
面活性剤試薬を含むヘモグロビンアッセイ用乾燥要素は
以前から製造されているが、これらの要素は精度が悪く
、すなわち。

これらを使用した場合には分析測定におけるランダム誤
差が許容され得ないほど高し。

〔問題点を解決するための手段〕

前述の問題点は記録帯域及び記録帯域上の展開帯域（Ｓ
ｐｒｅａｄｉｎｇ　ｚｏｎｅ）を含んでなる全血中ヘモ
グロビン定量用多帯域要素によって解決される。

記録帯域はブラッシ、２リマ−（ｂｌｕｓｈ　ｐｏｌｙ
ｍｅｒ）中に分配された粒状硫酸バリウムを含んでなる
。

展開帯域は全血を収容するのに有効な空隙容量及び平均
気孔寸法を有する。要素は実質的に全ての型のヘモグロ
ビンを１つの検出可能な物質に変換し得る相互作用組成
物を含む。この相互作用組成物はヘモグロビン酸化剤と
チオシアネートとの組み合わせであるか、またはイオン
性界面活性剤である。

本発明はさらに、全血中ヘモグロビンの定量方法を提供
する。この方法は、囚　全血のサンプルと前述の多帯域
要素とを物理的に接解させて全ての型のヘモグロビンを
１つの検出可能な物質に変換し、そして（Ｂ）　その検
出可能な物質を検出する工程を含んでなる。

〔実施態様〕

本発明のアッセイは全血中のヘモグロビンの高精度の分
析を提供する。さらに詳しくは、本発明は精度が改良さ
れた、すなわち、一般に公知アッセイより変動係数が小
さいアッセイを提供する。

これは１分析のランダム誤差が本発明によって低減され
ることを意味する。変動係数は（Ｓ÷Ｘ）Ｘ１００係、
すなわち、多数の反復試験を用いた平均値Ｘに関する標
準偏差「Ｓ」として定義される。

本発明のアッセイは０．３　Ｆ　１未満の望ましく低い
標章偏差を示す。精度の改良のほかに、本発明はヘモグ
ロビンに対する感度の高い分析要素を提供する。　′ 本発明のアッセイは稀釈されたまたは未稀釈の全血中の
ヘモグロビンの分析に適当である。その利点の１つは未
稀釈の全血を分析できることであり、従って、アッセイ
は非常に簡易で２且つ自動化が容易である。本発明のア
ッセイによって得られる利点は、２つの必須帯域、すな
わち、全血サンプル（たとえば、１〜１００μりを収容
できるかまたは飽和されずに完全に吸収できて過剰の血
液を拭き取る必要のない展開帯域とブラツシーポリマ−
（後述）中に分配された硫酸バリウムから成る記録帯域
とを有する多帯域要素の使用によって可能である。

一般に、未稀釈の全血サンプルを収容するためには、展
開帯域中の空隙容量は使用する材料に応じて２５〜８０
係、好ましくは４０〜６０憾である。平均気孔寸法は使
用する材料に応じて一般に少なくとも５μｍ、よυ適当
には１５〜６５μｍである。

展開帯域は、適当な空隙容量及び平均気孔寸法によって
全血を収容できるならば、任意の適当な繊維もしくは非
繊維材料またはそれらの混合物から製造できる。展開帯
域は有利には等方性多孔質であり、展開帯域が液体接触
している記録帯域に面する面にお込て単位面積当り均一
な濃度の全血を生ずる。このような濃度の均一性は濃度
測定法または当業界で公知の他の分析法によって測定で
きる。

所望の気孔率を有する有用な展開帯域は、米国特許第４
，２９２，２７２号（１９！’ｌ　ｉ年９月２９日忙キ
タジマらに対して発行）に記載されているように繊維材
料を用いて製造し、適当な結合剤と混合するかまたは多
孔質布帛に織ることができる。

あるいは、この帯域は米国特許第３，９９２，１５８号
Ｃ１９７６，１１月１６日にプルツイビロビツツ（Ｐｒ
ｚｙｂｙｌ　ｏｗｌ　ｃｚ）らに対して発行〕の教示に
従ってプラッシュポリマーを用いて製造できる。全血サ
ンプルを収容するのに適当な気孔率は、当業界で公知の
適当な「ブラッシング（ｂｌｕｓｈｉｎｇ）　Ｊ条件に
よって得られる。

等方性多孔質展開帯域はまた、粒子間の連続空間によっ
て等方性多孔質が作られる粒状材料によっても製造でき
る。望ましくは全血成分中で非膨潤性であり、しかも全
血成分に対して化学的に不活性であり且つ不浸透性であ
る種々の型の粒状材料が有用であシ、その例としては、
たとえば、顔料（たとえば、二酸化チタン、硫酸バリウ
ムなど）、珪藻土、コロイド物質（たとえば、微品質セ
ルロース）、樹脂またはガラスピーズなどが挙げられる
。選択はれる粒状材料が粘着性でない場合には、隣接す
る粒子の最も接近している表面領域上で互いに粘着して
、全血中で非膨潤性である凝着性の三次元格子を形成す
る粒子を得るために処理することができる。

他の有用な粒状材料の例としては、粒子の接触点におい
て粒子中に取り込まれた反応性基を介して化学的に結合
する、西ドイツ国特許出願公開第３．１５０，１０２号
公報（１９８２年７月２９日に公開され、小西六写真に
譲渡された）に記載されたポリマー粒子を挙げられる。

他のポリマー粒子は特開昭５７−１０１７６０号公報（
１９８２年６月２４日に公開され、小西六写真に譲渡さ
れた）に記載されており、接触点において低分子量接着
剤化合物（たとえば、ビスフェノール、ジカルゼン酸及
び／またはアミン化合物の反応生成物など〕と化学的に
結合する。

特に有用な展開帯域は、米、国特許第４，２５８，００
１号［：１９８１年３月２４日に）４−ス（Ｐｉｅｒｃ
ｅ）らに対して発行〕に記載されたような、有機ポリマ
ー粒子及びポリマー接着剤によって形成された粒状構造
を有するものである。このような構造の隣接する粒子間
の連続空隙は全血の血球成分及び高分子量成分を収容し
、ヘモグロビンの輸送をする。

ポリマー接着剤によって粒状構造中の有機ポリブー粒子
の粒子結合性を保持することにより、これらの材料の凝
集及び空隙への流入が防止され、隣接する粒子に相接す
る粒状構造の粒子表面領域に訃けるこの接着剤の濃度は
接着剤が空隙中に流入したり空隙をふさいだりしないこ
とを保証するものである。

このような展開帯域の製造に使用される材料はパースら
の特許にかなり詳細に記載されている。

本明細書の開示は帯域の一般的記載に関し１本発明の好
ましい実施態様に言及する。記載した粒状構造の厚さは
有機ポリマー粒子の寸法に応じて広く変化させることが
できる。しかしながら、厚さは一般に１０〜５００μｍ
で券る。

本発明の実施に有用な熱安定性有機ポリマー粒子は一般
に、粒度１〜２００μｍの球形ビーズである。好寸しく
は、それらは２０〜８０μｍの粒度を有する。

粒子は必要な特性を有する、天然及び合成ポ１尤マーを
含む種々の有機ポリマーから成ることができる。しかし
ながら、好ましくは、粒子は１種または複数のエチレン
系不飽和重合性モノマーから形成された１種または複数
の付加ポリマー、たとえば、単一のモノマーの付加ホモ
ポリマーまたは２種もしくはそれ以上のこのよう々モノ
マーから形成されたコポリマーから成る。これらのポリ
マーは種々の常用の重合法（たとえば、溶液重合、乳化
重合、分散重合、懸濁重合などンのいずれかによって製
造できる。所望ならば、ポリマーは１個まだは複数の反
応部位を含んで種々の相互作用組成物を粒子に結合させ
ることができる。

特に有用な付加ポリマーは１種または複数の以下のエチ
レン系不飽和重合性モノマーを重合させることによって
形成されたものであシ、詳細は前記のノヤースらの特許
に記載されている：（ａ）ノ４−スらの特許に記載され
たスチレンモノマーを含む１種または複数のアミン置換
基非含有ビニル炭素環式芳香族モノマー及び同様なアミ
、ノ置換基非含有ビニルナフチルモノマー〇〜１００重
量係、好ましくは０〜９９重量係。

（ｂ）１腫または複数のアクリル酸エステルＯ〜２５７
ｊｉｉ憾、 （ｃ）１種または複数のメタクリル酸エステルＯ〜１０
０重量係、好ましくはＯ〜７５重量係、（ｄ）１種また
は複数のエチレン系不飽和カルボン酸０〜３０重量係、 （ｅ）１種または複数のエチレン系不飽和ニド’ＪルＯ
〜７５重量彊、 （ｆ）ハースらの特許に記載されたスチレンモノマーを
含む１種または複数のアミン置換ビニル炭素環式芳香族
炭化水素及び同様なアミノ置換ビニルナフチル０〜２０
重量係、 （ｇ）　アミンまたはゼラチン硬化剤によって架橋させ
ることのできるもの及びセ個またはそれ以上のエチレン
系不飽和重合性基を有するものを含む１種または複数の
エチレン系不飽和架橋性モノマー〇〜２０重量係、好ま
しくは０〜１０重を係。

（ｈ）１種または複数の第三アミノアルキルアクリレー
トまたはメタクリレートＯ〜２０重＃係、（１）１種ま
たは複数の重合性Ｎ−複素環式ビニルモノマーＯ〜１０
０重量係、好ましくはＯ〜７５重量係、 （ｊ）１種または複数のアクリルアミドまたはメタクリ
ルアミドＯ〜２０重量係。

特に有用な付加ポリマーとしてはパースらの特許の第１
表に記載されたものが挙げられる。角括弧内の数字は、
ポリマーの製造に使用したモノマーブレンド中のモノマ
ーの重量比を表わす。ポリ（ビニルトルエンーコーｐ−
ｔ−プチルスチレンーコーメタクリル酸）（６１：３７
：２）が好ましいポリマーである。有機高分子粒子は所
望ならげ、当業界で公知の他の添加物を含むことができ
る。

本発明に有用なポリマー接着剤は有機ポリマー粒子を互
いに結合させて展開帯域中に凝着性の三次元格子を形成
する。この接着剤の詳細は前述のノ４−スらの特許に記
載されている。一般に、接着剤は粒子中に含まれる特定
のポリマーとは異々る　“有機ポリマーから成るが、粒
子のポリマー組成中に存在する反復単位のいくつかと同
一のまたは同様な多くの反復単位を含むポリマーである
のがごく普通である。

好ましくは、接着剤は１種または複数のエチレン系不飽
和重合性モノマーから形成された１種または複数の付加
ポリマー、たとえば、２種またはそれＶ上のこのような
モノマーから形成・された付加コポリマーから成る。粒
子と同様に、接着剤も種々の常用の重合法のいずれかに
よって製造できる。

一般に１粒状構造中に含まれる接着剤の量は、粒子の重
量に基づき１０４未満、好ましくは１〜５係である。

接着剤として使用される特に有用な付加ポリマーは以下
に記載したブレンドから選択されたエチレン系不飽和重
合性モノマーのブレンドラ重合させることによって形成
され、その詳細は前述のパースらの特許に記載されてｂ
る： Ａ、前述の１種または複数のアミノ置換基非含有ビニル
炭素環式芳香族炭化水素１〜３５重３％、好ましくは１
０〜３０重量係及び１種または複数のアルキルアクリレ
ートまたはメタクリレート６５〜９９重量係、好ましく
は７０〜９０重量係を含むブレンド、 Ｂ、１種または複数のアミン置換基非含有ビニル炭素環
式芳香族炭化尿素、アクリル酸またはメタクリル酸エス
テル及びエチレン系不飽和重合性架橋性モノマー２０〜
９５重量係、好ましくは５０〜９５重量係ならびに活性
水素を有する１種または複数のエチレン系不飽１−重合
性モノマーまたはその塩５〜８０重量係、好苫しくは５
〜５０重景係を含むブレンド。

Ｃ１１−ヒニルイミタソール、ビニルベンジルアルコー
ルアクリル酸エチル゛」たはアクリルアミドもしくはメ
タクリルアミドから成る群から選ばれた１種または複数
のエチレン系不飽和モノマー１５〜１００重量％及び１
種または複数のエチレン系不飽和重合性架橋性モノマー
Ｏ〜８５重量係を含むブレンド、ならびに り、１種または複数のアクリル酸またはメタクリル酸エ
ステル８０〜９８重量％、好ましくは８５〜９８重量係
及び１個または複数の陰イオン部分（たトエば、カルデ
キシ、スルフィノ、スルホ、ホスホノなどまたはそれら
のアルカリ金属もしくはアンモニウム塩）を含む１種ま
たは複数のエチレン系不飽和重合性モノマー２〜２ｎ重
量ｅｌ＝好ましくは２〜１５重量係を含むブレンド。

特に有用々付加ポリマーとしてはノ４−スらの特許の第
■表及び米国特許第４，２８３，４９１号［１９８１年
８月１１日ダッペン（Ｄａｐｐｅｎ）に対して発行］に
記載されたものを挙げることができる。角括弧内の数字
はポリマーの製造に使用したモノマーブレンド中のモノ
マーの重量比を表わす。

ポリ（メチルアクリレート−ニー２−アセトアセトキシ
エチルメタクリレートーコ−２−アクリルアミド−２−
メチルプロパンスルホン酸）［：８８ニア：５〕が好ま
しい接着剤ポリマーである。

前記粒子及び接着剤を用いて粒状構造を作るのに種々の
方法が使用できる。有用な方法の詳細は前述のｉ４−ス
らの特許に記載されている。

本発明の要素の２つの必須帯域は自立性であることがで
きる（すなわち、物理的保全性を有するのに充分な強度
を有する）が、好ましくは適当な支持体に支持される。

この支持体Ｆｉ、２００〜９００ｎｍの波長の電磁線を
透過させる任意の適当な寸法安定性、好ましくは透明（
すなわち、電磁線透過性）の材料であることがで−きる
。有用な支持体材料は公知である。好ましくは、記録帯
域が支持体に隣接するが、所望ならば、任意の下塗シ帯
域金介在させることができる。要素の帯域は互いに液体
接触しておシ、これは液体と液体中の試薬及び反応生成
物が隣接する帯域の重なった領域の間を通過できること
を意味する。好ましくは、帯域は独立した塗布層である
が、要素の単一の塗布層に１個または複数の帯域が、存
在することもできる。逆に、各帯域が２個またはそれ以
上の塗布層を含むこともできる。

要素の記録帯域は、相互作用組成物（後述）とヘモグロ
ビンとの相互作用によって形成される検出可能な物質が
検出される場所である。この帯域は「ブラッシー」碧す
マー全体に均一に分配された粒状硫酸バリウムを含む。

帯域中に混合される硫酸バリウムの量は広く変化させる
ことができるが、一般に５　（１）〜１５０１１／ｍ　
、好ましくは８０〜１２０　ｊＩ／ｍ　である。

記録帯域は「プラッシュ」ポリマーを含んで々る。この
ポリマーは一般に、２種の液体の混合物、すなわち、沸
点が相対的に低く、ポリマーに対して良好な溶媒である
液体と沸点が相対的に高く。

ポリマーに対して不良な溶媒である液体との混合物中に
２リマーを溶解させることによって製造する。次いで、
このポリマー溶液を支持体上に塗布し、制御条件下で乾
燥させる。沸点が低い方の溶媒の方が容易に蒸発し、塗
膜は不良な溶媒中で濃縮される。適当な条件下で蒸発が
進行するにつれて１．ＪＰ　ＩＪママ一連続気孔を有し
彦から等方性多孔質（この用語は当業界で使用されてい
る通りである）になる、しかしながら、この帯域の気孔
率は前記展開帯域の気孔率より低い。一般に、気孔率は
展開帯域のようには全血のサンプルを収容できないよう
なものである。このよシ低い気孔率は公知のブラッシン
グ法によって得ることができ、平均気孔寸法は一般に５
μｍ未満である。

プラッシュ号？リマーの製造にはポリカーゼネート、ポ
リアミド、ポリウレタン及びセルロースエステルのよう
な多くの種々のポリマーを単独でまた組み合わせて使用
できるが、酢酸セルロースが好ま１−い。プラッシュポ
リマー（またはその混合物）は一般に記録帯域中には４
〜１２．９／ｍ、好ましくは６〜１０１７ｍ２の量で存
在する。プラッシュポリマーの製造に有用な溶媒混合物
は当業界で公知である。

記録帯域は粒状硫酸バリウムを含むブラッシーポリマー
の単一塗布層であることができる。あるいは、記録帯域
は、その１個またはそれ以上がプラッシュポリマーを含
む２個またはそれ以上の独立した塗布層から成ることが
できる。たとえば、記録帯域はブラッシュホリマ一層及
びゼラチン層または試薬層から成ることができる。相互
作用組成物（後述）は所望ならば、記録帯域の１個また
は複数の層に存在してもよいし、あるいは全て展開帯域
に存在してもよい。

以下余白 本発明の要素はさらに、特殊な機能を有する、たとえば
、要素の製造をよシ便利にする追加帯域を任意に含むこ
とができる。たとえば、他の帯域間の粘着の促進また制
御に追加帯域を使用することは通常行なわれている。こ
のような帯域は通常、。

結合剤または下塗シ帯域と称され、当業界で公知である
。このような下塗シ帯域は一般に、ゼラチンもしくは他
の天然コロイドまたはホモポリマー及びコポリマー、た
とえば、ぼり（アクリルアミド）、ポリ（ビニルピロリ
ドン）、ポリ（ｎ−イソゾロビルアクリルアミ、ド）、
ポリ（アクリルアミド−ニーＮ−ビニル−２−ピロリド
ン）及び同様なコポリマーを含む１種または複数の天然
または合成高分子材料を含む。

本発明の要素はさらに相互作用組成物を含む。

ここに記載した要素形式及び成分と適合するヘモグロビ
ン酸化化学を本発明の実施に使用できる。

しかしながら、当業界で公知のドラプキン試薬とは異な
シ、本発明に特に有用な相互作用組成物は全ての型のヘ
モグロビン（ＨｂＣＯを含む）を単一の検出可能な物質
に迅速に変換できる。相互作用組成物全てを展開帯域か
記録帯域に配置してもよい。あるいは、組成物の個々の
成分がこれらのいずれかにまたは他の帯域に存在しても
よい。好ましくは、組成物の全成分が展開帯域に存在し
て、展開／試薬帯域とする。

一実施態様において、相互作用組成物は本質的に１種ま
たは複数のイオン性界面活性剤から成る。

すなわち、イオン性界面活性剤（または複数のイオン性
界面活性剤の混合物）は組成物の唯一の必須成分である
。陰イオン性及び陽イオン性の種々のイオン性界面活性
剤を本発明の実施に使用できる。陰イオン性界面活性剤
が好ましい。

有用々陰イオン性界面活性剤はアルキル基の炭素数が６
〜２０で少なくとも１個の酸性陰イオン置換基、たとえ
ば、スルフェート、スルホネート、ホスフェート、ホス
ホネートなどを有するアルカンのアルカリ金属またはア
ンモニウム塩である。

有用な陰イオン性界面活性剤の例はオクチル硫酸ナトリ
ウム、ノニル硫酸ナトリウム、デシル硫酸ナトリウム、
ウンデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、
トリデシル硫酸ナトリウム及びテトラデシル硫酸ナトリ
ウムである。

有用な陽イオン性界面活性剤は少ガくとも１個の第四ア
ンモニウム陽イオン及び炭素数が８またけそれ以上のア
ルキル基を含む。有用な陽イオン性界面活性剤の例とし
てはデシルトリメチルアンモニウムプロミド、ドデシル
トリメチルアンモニウムプロミド及びドデシルトリメチ
ルアンモニウムクロリドが挙げられる。

ドデシル硫酸ナトリウム及びオクチル硫酸ナトリウムが
本発明の実施に最も好ましい界面活性剤である。

本発明の別の一実施態様において、相互作用組成物は、
一般に塩の形態のチオシアネート試薬（たとえば、チオ
シアン酸ナトリウム、チオシアン酸カリウムなど）を含
む。このチオシアネート試薬は、ドラプキン試薬の変形
であシ、ヘモグロビン酸化剤と組み合わせて用いられる
。有用なヘモグロビン酸化剤としてはフェリシアン化物
、亜硝酸塩（たとえば、亜硝酸ナトリウム）及び当業界
で公知の仙１の酸化剤が挙けられる。フェリシアン化物
が好ましく、一般に塩（たとえば、フェリシアン化ナト
リウム、フェリシアン化カリウムなど）の形態で存在す
る。この相互作用組成物は以下の式に従ってヘモグロビ
ンの測定を可能にすると考えられる： λ−〜５２０〜５８０ｎｍ ａｘ 陰イオン性界面活性剤またはチオシアネート試薬によっ
て得られた物質は、下記の例に示すように分光光度法で
測定できる。

本明細書中に記載した相互作用組成物の各成分または試
薬の量は広範囲に変化させることができる。これらの量
は一般に下記の通りである一イオン性界面活性剤は、使
用するならば、一般に１５ｇ／ｍ”以下、好ましくは５
〜１２ｇ／？ＦＩ２の量で存在し、 ヘモグロビン酸化剤は、使用するならば、一般に８ｆ！
／ｍ２、好ましくは１〜４　ｇ／ｍ　２の量で存在し、
そしてチオシアン酸イオンは、使用するならば、一般に
８ｇ／ｍ”以下、好ましくは１〜４　、ｊ９　／　ｍ　
２の量で存在する。

本発明の要素の１個または複数の帯域（または層）は当
業界で公知の界面活性剤、増粘剤、緩衝剤（たとえば、
声５〜９に対する）、結合剤、硬化剤などを含む他の種
々の所望の成分を含むことができる。これらの成分は轟
業者に知られた量で存在することができる。本発明の要
素は任意の所望の幅の細長いテープ、シートまたはよシ
小さいチップを含む種々の形態を取ることができる。

本発明のアッセイは手動式でも自動式でもよい。

一般に全血中のヘモグロビンの量は、供給用巻取、チッ
プパケットまたは他の供給源から要素を引き取り、次い
で要素を全血のサンプル（たとえば、１〜１００μ））
と物理的に接触させることによって測定する。この接触
は任意の適当な方法で、たとえば、要素をサンプル中に
浸漬することによって、−！たは好ましくは、ビくット
もしくは他の適当な計量分配手段によって１滴のサンプ
ルを要素の展開帯域に手動または機械でスポットするこ
とによって実施することができる。

サンプル適用後、要素は試験結果を迅速または容易に得
るために望ましいインキーベーション、加熱などのよう
な任意の状態調整に暴露する。

次いで、ヘモグロビンが存在するならば、ヘモグロビン
が相互作用組成物と相互作用し、サンプル中のヘモグロ
ビン濃度が検出可能な物質の形成と正比例して測定でき
る。この物質の量は、この物質を検出するだめの適当な
装置が設けられたゾーンに要素を通すことによって測定
する。たとえば、この物質は当業界で公知の適当な分光
光度測定装置及び方法によって検出できる。

本発明の詳細な説明するために以下の例を示す。

これらの例中、ポリウレタン樹脂ニスタンＴＭ（Ｅｓｔ
ａｎｅ　ＴＭ）はＢ、Ｆ、グツドリッチ・ケミカル社（
Ｂ、Ｆ、　Ｇｏｏｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ
、、オハイオ州クリーブランド）から入手し、ゾニル（
Ｚｏｎｙｌ　）ＦＳＮＴＭ界面活性剤はデーポン（Ｄｕ
ｐｏｎｔ、プラウエア州つィルミントン）から入手し、
トリト／（Ｔｒｉｔｏｎ）　Ｘ　−１００′ｒＭ界面活
性剤はローム＆ノ・−ス（Ｒｏｈｍ　＆　Ｔ（ｇａｓ、
ペンシルバニア州フィラデルフィア）から購入した。他
の全ての試薬及び材料はイーストマン・オーガニック・
ケミカルズにューヨーク州ロチェスター）から入手した
。全血サンプルは地方の研究所から入手した。参照ヘモ
グロビンレベルはその研究所が米国特許第３．８７４，
８５２号［１９７５年４月１日にハミル（Ｈａｍｌ　１
１　）に対して発行〕に記載された方法でコールタ−・
ヘモグロピノメーター（Ｃｏｕ　ｌ　ｔｅ　ｒＨｅｍｏ
ｇｌｏｂｉｎｏｍｅｔｅｒ：フロリダ州）１イアリーア
のコールタ−・ダイアグノスティックス社（Ｃｏｕｌｔ
ｅｒＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｉｎｃ、）から入手可能
〕を用いて測定した。

例１ 相互作用組成物中にチオシアネートを用いたヘモグロビ
ン要素及び従来の要素との比較 本例はヘモグロビン測定用の本発明の要素と従来のヘモ
グロビン要素とを比較するものである。

本発明の分析要素は、粒状硫酸バリウムが分配された酢
酸セルロースとポリウレタンとのプラッシュポリマー混
合物を塗布してポリ（エチレンテレフタレート）フィル
ムを支持体上に記録層を形成することによって製造した
。記録層の上にポリマービーズ展開／試薬層を塗布した
。要素の形式及び成分は以下に示す通シである： 以下余白 ２０〜８０μホ１ハムルトルエンーコーｐ−ｔ−ブカル
スチレンーコーメタクリル酸）〔重量比６１　：　３７
　：２）　１４５ｇ／ｍ２ポリ（メチルアクリレート−
ニー２−アセトアセトキシエチルメタクリレートーコー
接着剤 トリトンＸＸ−１００Ｔ界面活性剤　４ｆｌ／ｍ”燐酸
カリウー要衝剤（ｐＨ＝　’；　）　１．５ｇ／Ｗ？フ
ェリシアン化カリウム　２１１／Ｗ？チオシアン酸カリ
ウム　２９／ｍ” 酢酸セルロース　９ｆｉ／ｍ２ ポリウレタン　１ｇ／ｍ２ 記録層　硫酸・・リウム　１０８ｇ／ｍ”・トリトンＸ
Ｘ−１００Ｔ界面活性剤　４ｇ／？Ｆ！２以下の形式及
び成分を有する対照Ａ〜Ｆ要素を同様にして製造した： 対照Ａ 以下の成分から成る粒状構造； 〔重量比６１　：３７：２）　１４５９／ｍ’ノリ（メ
チルアクリレート−ツー２−アセトアセトキシエチＨ）
タクリレートーコー接着剤　４．３９７ｍ２ トリトンＸＸ−１００Ｔ界面活性剤　４ｇ／−燐酸カリ
ウム緩債済Ｊ　（ＩＩＪ（＝’７　）　１．５Ｖｎ１’
ゾニルＦＳＮＴＭ界面活性剤　０．２ｇ／ｍ”フェリシ
アン化カリウム　２ｇ／ｍ２ チオシアΔ題カリウム　２め乙一 対照Ｂ この要素は、トリトンＸ　−１００ＴＭの量が０７５ｇ
／ｍ２で且つフェリシアン化物及びチオシアン酸塩の代
わりにドデシル硫酸ナトリウム（１０，！ｉ！／ｍ”）
を試薬として含む以外は対照Ａど同様であった。

対照に の要素は、展開／試薬層にさらに二酸化チタン（１１Ｆ
／ｍ”）を含む以外は対照Ａと同様であった。

対照り この要素は展開／試薬層にさらに硫酸バリウム（１１５
’／ｌｎ”）を含む以外は対照Ａと同様であった。

対照Ｅは以下に示す通シである： 以下余白 対照Ｅ 以下の成分から成る粒状構造： ２０〜８０μポリ（ビニルトルエンーコーｐ−ｔ−プチ
ルスチレンーコーメタクリル酸〔重量比６１　：　３７
　：　２：］　１４５．ｊｉ’／ｒｎ２ｙｆ！ｌバメチ
ルアクリレートーコ−２−アセドア薬層　〔重量比８８
ニア：５）の接着剤　４．３ｚ乙−トリトンＸＸ−１０
０Ｔ界面活性剤　４ｊ；ｌ／ｒｒ？燐酸カリウム緩衝剤
（ｐＨ＝　７　＞　１．５ｉ／ｒｒ？ゾニルＦＳＮ　界
面活性剤　０．２ｇＡｎト１テ℃θレトリメチルアンモ
ニウムブロミド界面活性剤／試薬　１０ル併 酢酸セルロース　９９乃− 二酸化チタン　１０８．ｌｉ’／ψ 対照Ｆ この要素はドデシルトリメチルアンモニウムプロミドの
代わシにドデシル硫酸ナトリウム（１０１・９７ｍ”　
）を用いた以外は対照Ｅと同様であった。

各要素の５個のサンプルを、各展開層に種々の濃度（０
〜２０ｇ％）のヘモグロビンを含む未稀釈の全血の７〜
１０μｌサンプルを適用することによって試験した。サ
ンプル−要素接触後１〜５分してから室温において市販
の分光光度計で５４０ｎｍにおいて反射スペクトルを測
定した。参照アッセイを用いて各要素について標準検量
線を作製した。次いで、通常の統計的計算によって各ヘ
モグロビンサンプル測定値の標準偏差を計算してからこ
れらの標準偏差をプールすることによって各要素の精度
をめた。プールした標準偏差の許容値は約０．３１ｊチ
未満（ヘモグロビン濃度）である。

以下の第１表は試験した要素の精度データを示すもので
ある。例１（本発明の要素）及び対照Ｆは許容され得る
精度を示した。しかしながら、対照Ｆは製造が非常に困
難で、試験サンプル中のヘモグロビンの存在に対する感
度が極めて悪く、要素に試験サンプルをスポットした時
の展開時間が極めて遅い。このため、対照Ｆは商品化に
適当な要素ではないであろう。これに対して、例１は商
品化に適当な望ましい精度、ヘモグロビンに対する感度
及び迅速々展開時間を示し、しかも製奈が容易であった
。

第１表 例１０３０ 対照Ａ　Ｏ，７０ 対照Ｂ　Ｏ，８６ 対照ＣＯ，６８ 対照Ｄ　Ｏ，７０ 対照Ｅ　Ｏ，５３ 対照Ｆ　Ｏ，２５ 例２ 展開層にチオシアネート試薬及びフェリシアン化物試薬
の代わυにドデシル硫酸ナトリウム（１０ｇ／ｒｎ２）
を用い且つ記録層にトリトンＸ−１００１の代わシにト
リトンＸ−Ｘ−４０５Ｔ硬ンシルバニア州フイラデルフ
イアのローム＆ハースから入手可能＞　（２ｊｊ／ｒｎ
２）を用いた以外は例１と同様に−して分析要素を製造
した。

この要素を例１に記載した方法に従って評価したところ
、その精度は０．２０９％であった。

例３ 記録帯域中の試薬によるヘモグロビンアッセイポリ（エ
チレンテレフタレート）支持体上に以下の成分が塗布さ
れた以下の形式の全血中ヘモグロビン定量用要素を製造
した。記録帯域は２個の独立した塗布層を含んでいた。

この要素のサンプルを例１に記載した方法によって試験
した。精度は０．２ｇ％であった。

例４ ホリ（エチレンテレフタレート）支持体上に以下の成分
が塗布された以下の形式を有する全血中ヘモグロビン定
量用要素を製造した。記録帯域は２個の独立した塗布層
を含んでいた。しかしながら、ヘモグロビンと相互作用
する試薬は展開層中に配置し、展開／試薬層とした。要
素のサンプルを例１に記載した方法によって試験した。

精度は０１ｇチであった。

以下余白 発明の効果 本発明は、乾燥要素を用いた公知の全血アッセイに伴う
問題を克服する全血中ヘモグロビンの定量に有用な乾燥
化学アッセイを提供する。このアッセイは簡易且つ迅速
で、しかも極めて精度が高く、稀釈及び未稀釈のいずれ
の全血サンプルも収容できるため、過剰の血液を拭き取
る必要がない。

特に、本発明の多帯域要素は精度が高く、試験サンプル
中のヘモグロビンの存在に対する感度が高い。要素中に
混合された試薬が実質的に全ての型のヘモグロビンを単
一の検出可能な最終生成物に変換するため、とれらの実
施態様によって総ヘモグロビンの正確な読みが得られる
。

以下余白 第１頁の続き ■発明　者　リチャード　ダブリ　アメリカ合衆国。

ユ、スペイド　ダムセン　ロード ニューヨーク　１４６１２．　ロチニスター。

３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　プラッシュ？リマー中に粒状硫酸バリウムが分配
   されている記録帯域；該記録帯域上に、未稀釈の全血を
   収容するのに有効な空隙容量及び平均気孔寸法を有する
   展開帯域；ならびに実質的に全ての型のヘモグロビンを
   １つの検出可能な物質に変換するための相互作用組成物
   としてイオン性界面活性剤またはヘモグロビン酸化剤と
   チオシアネートとの組み合わせを含んでなる全血中ヘモ
   グロビン定量用多帯域要素。 ２、（Ａ）　全血サンプルと、プラッシ＝−ホリマー中
   に粒状硫酸バリウムが分配されている記録帯斌；該記録
   帯域上に、未稀釈の全血を収容するのに有効な空隙容量
   及び平均気孔寸法を有する展開帯域：ならびに実質的に
   全ての型のヘモグロビンを１つの検出可能な物質に変換
   するための相互作用組成物としてイオン性界面活性剤ま
   たはヘモグロビン酸化剤とチオシアネートとの組み合わ
   せを含む多帯域要素とを物理的に接触させ、そして（Ｂ
   ）　生じた検出可能な物質を検出する工程を含んでなる
   全血中ヘモグロビンの定量方法。