JPS60234593A - 微生物によるプソイドジサツカライド化合物の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は微生物による抗菌活性を有するプソイドジサッ
カライド化合物の製造法に関する。

（解決手段） さらに詳細には９本発明はＹ−０３８７３Ｊ−Ａ、−Ｂ
。

−Ｃまたは−Ｄからなるプソイドジサッカライド化合物
の生産能を有するサツカロポリスポラ（Ｓａｃｃｈａｌ
ｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　）属に属する微生物を培地に培
養し、上記プソイドジサッカライド化合物を生成蓄積せ
しめ、これを採取することからなる上記プソイドジサッ
カライド化合物の製造法である。

（発明の背景） 本発明の製造法で得られるプソイドジサッカライド化合
物はつぎの構造式で示される。

Ｙ−０３８７３Ｊ−ＣＹ−０３８７３Ｊ−Ｄこれらの化
合物中、　Ｙ−０３８７３Ｊ−Ｂと−Ｃは立体異性体で
ある。また、Ｙ−０３８７３Ｊ＝Ａを除き他は公知化合
物である。これらの公知化合物は。

従来化学的合成法によって製造できることが報告されて
いる（特開昭５６−２９９７号公報および同５５−１６
４６９５号公報）。

本発明はこれらのプソイドジサッカライド化合物をサツ
カロポリスポラ属に属する微生物を用いて生物学的手法
により製造するものである。

（発明の詳細な説明） 本発明で使用されるサツカロポリスポラ属に属する微生
物の一例としては９本発明者等が沖縄県座間味島の土壌
より分離したＹ−０３８７３Ｊ株を挙げることができる
。以下、この菌株の菌学的性状を示す。

１形態 本菌株は、光学顕微鏡下で、基土菌糸は、比較的長く分
枝し、基土菌糸上に分枝した短か−・胞子柄の末端に９
通常１個、まれには２〜３個の基土胞子が観察される。

気菌糸は短かく、その先端に胞子の連鎖が認められる。

電子顕微鏡下では、胞子はほぼ長だ円形で、０５μ〜０
６μ×０７〜０８μ　の大きさで。

成熟した場合、１５〜２０個の連鎖を呈する。又。

胞子表面は毛様構造をもつさやにおおわれている。

２、各種寒天培地上の性状 各種寒天培地上の性状は以下に示すとおりである。

特に記載しない限り、２８℃で２１日間培養し、常法に
よって観察したものである。色調の記載については１色
の標準（日本色彩研究所）によった。

（注）　Ｇ；生育 Ａ；気菌糸の着生及びその色相 Ｒ；裏面の色相　Ｓ；可溶性色素 ３、生理的性質 （注）生育温度は各温度（ｓ、１ｏ、　１５．２０．２
５．２８．３０．３３．３７．４０゜４５．５０℃）で
７〜２１日までの観察結果。

ミルクに対する作用は３７℃で３〜２１日までの観察結
果。

それ以外は特に指摘のない限り２８℃で２週間後の観察
結果を示す。

４　炭素源の資化性（ブ２．゛・・・・：／ＭＶ−プ寒
天培地、２８℃培養）（注）丑：非常に良く生育する　
＋；生育する士、生育が疑わしい　−；生育しない ５　細胞−壁の分析 ■　メン・ジアミノピメリン酸を有し、糖としてアラビ
ノース及びガラクトースを含有することより■型と判断
される。

■　ＬＣＮ−Ａ（リビド・キャラクタリスティク・オプ
・メカルディア）および ’Ｎｏｃａｒｄｏｍｙｅｏｌｉｃ　ａｃｉｄのいずれも
含まない。

以上の結果に基づき、既知菌属を検索すると２本菌株に
類似の菌属として、ミクロポリスポラ（Ｍｉｃｒｏｐｏ
ｌｙｓｐｏｒａ　）属（バーシーズ港マニュアル。

オブ・ディターミネイティブ・バクテリオロジー。

第８版、８６１頁、’　１９７５年）及びサツカロポリ
スポラ（５ａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒ＆　）属（
Ｊ、　Ｌａｃｅｙら、ジャーナル・オブ・ゼネラルマイ
クロバイオニ９４，８８巻、７５頁。

１９７５年）があげられる。前者は、胞子が毛様構造を
呈さず２本菌株とは明らかに異なる。一方、後者と本菌
株とは、形態的に極めて類似している。

次に実際にサツカロポリスポラ　ヒルスタ（Ｓ。

ｈｉｒｓｕｔａ　）　ＫＣＣＡ　−０１７０株を入手し
２本菌株と比較検討した結果を以下に記す。

表に示す様にＹ−０３８７３Ｊ株とＫＣＣＡ−０１７０
株とは形態的に表面の毛様構造、気菌糸および基土菌糸
の形状などで良く一致する。又。

コロニー表面の色調等も、はぼ類似している。

相違点としては、ゼラチン液化能力に差かある事、及び
糖（イノシトール、Ｌ−ラムノース、ラフィノース）の
利用性の相違があげられる。特に、　Ｙ−０３８７３Ｊ
株はラフィノース添加培地上できわめて良好な発育を示
す点が　′特徴としてあげられる。これらの知見に基づ
き、Ｙ−０３８７３Ｊ株はサツカロポリスボラ属に属す
る菌であり、サツカロポリスポラ　とルスタに極めて近
縁な種であると考えられる。

以上の事から本菌株をす・ンカロボリスボラヒルスタ（
５ａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　ｈｉｒｓｕｔａ
　）　Ｙ　−０３８７３Ｊ株とした。

なお本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所に　受
託番号　微工研菌寄第７３５３号として受託されている
。

つぎにＹ−０３８７３Ｊ−Ａ、　−Ｂ、−Ｃまたは−Ｄ
化合物の生産はサツカロポリスホラ　ヒルスタＹ−０３
８７３Ｊ　（微工研菌寄第７３５３号）株を培地に培養
し、培養物より採取することにより行なわれる。培養方
法は一般微生物の培養方法に準じて行なわれるが２通常
は液体培地による深部培養法が有利である。培養に用℃
・られる培地としては、サツカロポリスホラ　ヒルスタ
Ｙ−０３８７３Ｊ株が利用する栄養源を含有する培地で
あれはよ（・。

すなわち２合成培地、半合成培地あるいは天然培地が用
（・られ、培地の組成は例えは炭素源としてはグルコー
ス、ラフィノース、アラビノース、フラクトース、デン
プン、バカス、水アメ、植物油等力ｆ、窒素源としては
肉エキス、ペプトン、グルテンミール、綿実粕、大豆粉
、落花生粉、魚粉、コーンスチープリカー、乾燥酵母、
酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿
素その他の有機、無機の窒素源が用いられる。また、金
属塩としてはＮａ、　Ｋ、　Ｍｇ。

Ｃａ、　Ｚｎ、　Ｆｅなとの硫酸塩、硝酸塩、塩化物。

炭酸塩、燐酸塩などが必要に応じて添加される。

また、必要に応じてメチオニン、システィン。

シスチン、チオ硫酸塩、オレイン酸メチル、ラード油、
シリコン油、界面活性剤などの抗生物質生成促進物質又
は消泡剤を添加することもできる。

培養条件としては好気的条件下に培養するのが一般的に
有利で、培養温度は約２５〜３５℃の範囲が望ましく、
好ましくは約３０℃附近で行なわれる。培地のｐＨは約
５〜１０．好ましくは約５〜７の範囲に保持すると好結
果が得られる。

培養期間は培地の組成、温度条件に応じて適宜設定され
る。

培養物より目的とする　Ｙ−０３８７３Ｊ−Ａ、　−Ｂ
、−ＣまたはＤ化合物を単離採取するには通常の微生物
の培養物より抗生物質を単離する方法が適用される。目
的物は主に培養液中に含有されるので、遠心分離又は濾
過により菌体を除去した後、濾過液から有効物質の分離
を行なう。

すなわち、適当な溶剤に対する溶解性及び溶解度の差、
溶液からの析出性及び析出速度の差。

目的物質の塩基性の強弱を利用する吸着剤からの溶出度
の差２種々の吸着剤に対する吸着親和性の差、２種の液
相間における分配の差などを利用する一般の抗生物質の
製造に用いられる手段によって５分離、採取、精製され
る。これらの方法は必要に応じて単独に用いられ、ある
いは任意の順序に組合せ、また反覆し適用できる。

このようにして得られた抗生物質Ｙ−０３８７３Ｊ−Ａ
、−Ｂ、−Ｃまたは−Ｄ化合物の理化学的性状は、つぎ
の通りである。

Ｙ−０３８７３Ｊ−Ａ化合物 １、紫外部吸収スペクトル　：末端吸収２、分子量　３
７４　（マススペクトルより）３、分子式　Ｃｌ７Ｈ３
４Ｎ４０゜ ４、マススペクトル　第、１図 ５、核磁気共鳴スペクトル（ｉｎ　Ｄ２０　）１．３　
ｐｐｍ　（３Ｈ、ｄ　）　Ｃ−ＣＨ３２，０５”　（３
Ｈ，ｓ）　ＣＯＣＨ３２，８ｐｐｍ　（３Ｈ、ｓ　）　
Ｎ−ＣＨ３３，４７〃（３Ｈ，ｓ）　０−ＣＨ３ ５，３１１（ＩＨ，ｄ）　アノメリックＨ６、薄層クロ
マトグラフィーのＲｆ値 ＨＰ　−ＴＬＣ鵡ｅ１ｇｅｌ　６０　Ｆ　−２５４（Ｍ
ｅｒｃｋ社）■；クロロホルム：メタノール：アンモニ
ア水（２０：１５：８）■；クロロホルム：メタノール
：アンモニア水（２：ｌ＝１　下層）■；クロロホルム
：メタノール＝１７％アンモニア水（１：８：３）７、
呈色反応 陽　性　：　ニンヒドリン反応 陰　性　：　坂口反応 Ｙ−０３８７３Ｊ−Ｂ化合物 １、紫外部吸収スペクトル：末端吸収 ２、　分子量３７５　（マススペクトルより）３、分子
式　Ｃ，６Ｈ３，Ｎ、０゜ ４、マススペクトル ｍ／ｅ　１４３．　ｒｎ／ｅ　２１６．　ｍ／ｅ　２３
４．　ｍ／ｅ　２６２５、薄層クロマトグラフィーのＲ
ｆ値 ＨＰ−ＴＬＣＫｉｅｓｅｌｇｅｌ　６０　Ｆ−２５４（
Ｍｅｒｃｋ社）■；クロ０水ルム：メタノール：アンモ
ニア水（２０：１５二８）■；クロロホルム：メタノー
ル：アンモニア水（２：１：１　下層）ｍ；クロロホル
ム：メタノール＝１７％　７ンモニ７（１：８：３）６
、呈色反応 陽性：ニンヒドリン反応 陰性：坂口反応 Ｙ−０３８７３Ｊ−Ｃ化合物 １　紫外部吸収スペクトル：末端吸収 ２、分子量　３７５　（マススペクトルより）３、分子
式　〇、、Ｈ３３Ｎ、０゜ ４　マススペクトル ｍ／ｅ　１４３ ｍ／ｅ　２１６ ｍ７’ｅ　２３４ ｍ／ｅ　２６２ ５゜薄層クロマトグラフィーのＲｆ値 ＨＰ−ＴＬＣＫｉｅｓｅｌｇｅｌ　６０　Ｆ−２５４（
ＭｅｒｃＫ社）Ｉ；クロロホルム：メタノール：アンモ
ニア　（２０：１５：８）■；クロロホルム：メタノー
ル＝アンモニア　（２：１：１　下層）■；クロロホル
ム：メタノール：１７％７ンモニ７（１：８：３）６、
呈色反応 陽性：ニンヒドリン反応 陰性：坂口反応 Ｙ−０３８７３Ｊ　−Ｄ化合物 １゜紫外部吸収スペクトル二末端吸収 ２、赤外吸収（臭化カリウム）　第２図３、分子量　３
８９’　（マススペクトルより）４、分子式　Ｃ，？Ｈ
３，Ｎ、０゜ ５、マススペクトル　第３図 ６、核磁気共鳴スペクトル（ｉｎ　Ｄ２０−　ＤＣＩ　
）１．３４（３Ｈ，ｄ）　Ｃ−ＣＨ。

３．１４　（３Ｈ、ａ　）　Ｎ−ＣＨ３３，４５（３Ｈ
９ｓ）　ＯＣ）（３ ５，３８（ＩＨ，ｄ）　アノメリックＨ７、薄層クロマ
トグラフィーのＲｆ値 １ピｅ１ｇｅｌ　６０　Ｆ−２５４（Ｍｅｒｃｋ社）Ｉ
；クロロホルム：メタノール：アンモニア　（２０：１
５：８）１１；　ｔｔ　：　ｕ　：１７％７ンモニ７水
（ｌ：ｓ：３）ｉｌｌ　ＨＩＩ　：　ＩＩ　：アンモニ
ア水　（２：１：１下層）８、呈色反応 陽性：ニンヒドリン反応 陰性：坂口反応、　ＦｅＣｌ３反応 （発明の効果） 本発明の製造法で得られるプンイドジサツカライド化合
物は、ダラム陽性および陰性に属する種々の細菌に対し
て抗菌活性を示す。たとえばＹ−０３８７３Ｊ−Ｄ化合
物の抗菌活性をディスクプレート法（濃度１０００　ｍ
ｃｇ／ｎｌ、直径８　ｍｍディスク使用）で測定した結
果は以下の通りであるＯ 菌　株　名　阻止円径（ｍｍ） スタフィロコッカス　アウレウス　２２１７　１２．０
バチルス　ズブチリス　ＡＴＣＣ６６３３３０，５マイ
コバク苓リウム　６０７　２４．８ニジユリチア　コリ
　Ｋ−１２１３，８プロテウス　ミラビリス　ＩＭＦ−
０Ｍ９　１５．０クレブシエラ　ニューモ＝７　Ａ−１
１５１２，０シユードモナス　エルギノーザ　ＮＣＴＣ
１０４９０２０，２（実施例） ポテト・スターチ３．０％、大豆粉１．５％、コーンス
テイブ・リカー０．５％、酵母エキス０．２％、　Ｎａ
Ｃ１０３％、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ０，０５％、ＣｏＣ
ｌ２０．００１％。

消泡剤（加電化社製アデカノール　ＬＧ１２６）０．０
０３％からなる培地（滅菌前ｐＨ７，１）を５００ｍ１
三角フラスコに６０ｍｔづつ分注し、常法通り滅菌した
後、べ不ノト寒天培地上に生育させか〜ソ サク力ロポリスポラ　ヒルスタＹ−０３８７３Ｊ４％（
微工研菌寄第７３５３号）の菌糸をかきとって接種し、
３２℃で４８時間振盪培養を行った。

次に３０ｔジヤー　ファーメンタ−を用い同一組成の培
地を、滅菌後２０ｔになるよう調製して。

１２０°Ｃで３０分間蒸気滅菌を行った後、先の培養液
を２％の割合で接種して、３２°Ｃで４０時間通気撹拌
培養を行う。次に１５０ｔタンク３基を用い、同一組成
の培地を、滅菌後約１００ｔになるように調整して１２
０°Ｇ３０分間蒸気滅菌を行った後、上記のジャーファ
ーメンタ−培養液を３％の割合で接種して３２３７０時
間２通気量毎分１ｏｏｚ。

回転数５０〜３００ｒｐｍ”’ｊ”撹拌培養を行う。培
養終了後ｐＨ２に調整し室温で３０分撹拌する。ラデオ
ライト１３　ｋｇを加え、　フィルタープレスで沢過し
、培養ｆ液２７０ｔを得る。培養ｆ液を希可性ソーダで
ｐＨ７，０に調整し沈殿した不溶物を沢去したのち、Ｐ
液をＩＲＣ−５０（ＮＨ：〕２０ｔを含むカラムに通導
する。そのカラムを１００ｔの水で洗い次いでＩＮ−ア
ンモニア水６０Ｚで溶出する。溶出液を少量になるまで
減圧下濃縮し濃縮液ノＩ）Ｈな６．ｃ＋に調ｕ後、　ｃ
ａ　−５０ＣＮＨ：　〕５ｏｏｃｃを含むカラムに上記
ｐＨ調整液を通導して１ｔの水で洗う。次いでアンモニ
アグラディエンド法で溶出しＡ、　Ｂ、　ＣおよびＤを
含む各画分をそれぞれ集め減圧下濃縮乾固した。まずＡ
画分をシリカゲル（和光紬薬）を充填した０１×５０６
Ｉｎカラムでクロロホルム拳メタノール・アンモニア水
（２：１：１）（容量比）の下層を用いてクロマトグラ
フィーを行う。目的画分を濃縮乾固し次いでＫｅｉｓｅ
ｌｇｅｌ　６０　Ｆ　２５４　ＣＭｅｒｃｋ社）により
プレパレイティプ　りロマトグラフィーに供し目的画分
を溶出し溶出液を濃縮する。濃縮液をＤｏｗｅｘ　１　
ｘ　２　（ＯＨ−）　１　ｍｌカラムに通過し水洗する
。その通過液及び水洗液を集め凍結乾燥するとＹ−０３
８７３Ｊ−Ａ化合物２．１５１１！ｇを得た。

Ｙ−０３８７３Ｊ−Ｂ化合物も同様の処理により１．９
５１４ｇを得た。Ｙ−０３８７３Ｊ−Ｃ化合物について
は　Ｙ−０３８７３Ｊ−Ｃを含む濃縮画分をプレパレイ
ティブクロマトグラフィーに供し、目的画分を溶出し溶
出液を濃縮した後濃縮液をＤ’ｏｗｅｘ　１　ｘ　２　
（ＯＨつ１　ｍｌカラムに通導し水洗する。その通過液
及び水洗液を集め凍結乾燥するとＹ−０３８７３Ｊ−Ｃ
物質０．７１１Ｑｇを得た。

更にＹ−０３８７３Ｊ−Ｄ化合物にライてはＹ−０３８
７３Ｊ−Ｄを含む濃縮画分をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー１１．７　ｘ　６６ｃｒｒＬに供し、クロロ
ホルム：メタノール：アンモニア（２：１：Ｉ下層）で
溶出する。目的画分を合わせ濃縮した後。

プレパレイティブクロマトグラフィー（シリカゲル）に
供し、目的画分を溶出する。溶出液を濃縮した後、濃縮
液をＤｏｗｅｘ　１　ｘ　２　（ＯＨ−）　３　ｃｃを
含むカラムに通導し′、水洗する。通過液、水洗液を集
め凍結乾燥すると　Ｙ−０３８７３Ｊ−Ｄ化合物６．３
６■を得た。

【図面の簡単な説明】

（１）第１図は、　Ｙ−０３８７３Ｊ−Ａ化合物ツマス
スベクトルを示す。 （２）　第２図は、　Ｙ−０３８７３Ｊ−Ｄ化合物の赤
外線吸収スペクトルを示す。 （３）　第３図は、　Ｙ−０３８７３Ｊ−Ｄ化合物のマ
ススペクトルを示す。 特許出願人　山之内製薬株式会社 代理人弁理士長井省三

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）　Ｙ−０３８７３Ｊ−Ａ、　Ｙ−０３８７３Ｊ−
   Ｂ、　Ｙ−０３８７３Ｊ−ＣまたはＹ−０３８７３Ｊ−
   Ｄからなるプソイドジサッカライド化合物の生産能を有
   するサツカロポリスボラ（Ｓａｃｃｈａｌｏｐｏｌｙｓ
   ｐｏｒａ）属に属する微生物を培地に培養し、上記プソ
   イドジサッカライド化合物を生成蓄積せしめ、これを採
   取することを特徴とする上記プソイドジサッカライド化
   合物の製造法。
2. （２）サツカロポリスポラ属に属する微生物がサノカロ
   ポリスポラヒルスタ（Ｓａｃｃｈａｌｏｐｏｌｙｓｐｏ
   ｒａｈｉｒｓｕｔａ）　Ｙ　０３８７３　Ｊ株（微工研
   菌寄第７３５３号）である特許請求の範囲第（１）項記
   載の製造法。