JPS60163895A - グリチルレチン酸の製造法 - Google Patents
グリチルレチン酸の製造法Info
- Publication number
- JPS60163895A JPS60163895A JP1828584A JP1828584A JPS60163895A JP S60163895 A JPS60163895 A JP S60163895A JP 1828584 A JP1828584 A JP 1828584A JP 1828584 A JP1828584 A JP 1828584A JP S60163895 A JPS60163895 A JP S60163895A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- diglucuronidase
- glycyrrhizin
- enzyme
- glycyrrhetinic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、グリチルリチン（グリチルリチン酸またはそ
の塩）を原料としてグリチルレチン酸を製造する方法に
関するものである。
の塩）を原料としてグリチルレチン酸を製造する方法に
関するものである。
グリチルリチン酸は、下記のようにグルクロン酸の２量
本であるジグルクロン酸を糖成分とし、グリチルレチン
酸をアグリコン成分とする配糖体である。
本であるジグルクロン酸を糖成分とし、グリチルレチン
酸をアグリコン成分とする配糖体である。
したかって、グリチルリチンを加水分解してアグリコン
部分と糖部分との結合を切断すれば、グリチルレチン酸
が得られる。このようなりリチルリチンの加水分解によ
ってグリチルレチン酸を製造する方法としては、従来、
グリチルリチンを酸加水分解する方法が代表的なもので
ある。しｈ化なが呟この製法は純度の高いクリチルリチ
ンを原料にしないと収率が悪く、また副反応生成物が多
いため精製に手間がかかるという欠点があった。更に、
シ゛グルクロン酸部分は、加水分解された後フルフラー
ルに変化するため、有効に利用することができなかった
。また特開昭５６−１３７８９８号公報には、グリチル
リチン、窒素源、リン酸を原、およびカリ源を含有する
水溶液にＡ ｅｒｏ＋ｎｏｎａｓ属バクテリアを接種し
て培養し、その産生する酵素にクリチルリチンを加水分
解させるグリチルレチン酸の製造法が記載されているか
、この製法は発酵法であるため反応に長時間を要するば
かりか反応条件の制御か容易でなく、更に、反応後期に
おいて、生成したグリチルレチン酸が分解してしまうこ
ともある。また、この方法においてもジグルクロン酸部
分はグルクロン酸単位で加水分解されてグルクロン酸を
生しるが、グルクロン酸は回収しても経済的に利益がな
いのでやはり廃棄するしかない。
部分と糖部分との結合を切断すれば、グリチルレチン酸
が得られる。このようなりリチルリチンの加水分解によ
ってグリチルレチン酸を製造する方法としては、従来、
グリチルリチンを酸加水分解する方法が代表的なもので
ある。しｈ化なが呟この製法は純度の高いクリチルリチ
ンを原料にしないと収率が悪く、また副反応生成物が多
いため精製に手間がかかるという欠点があった。更に、
シ゛グルクロン酸部分は、加水分解された後フルフラー
ルに変化するため、有効に利用することができなかった
。また特開昭５６−１３７８９８号公報には、グリチル
リチン、窒素源、リン酸を原、およびカリ源を含有する
水溶液にＡ ｅｒｏ＋ｎｏｎａｓ属バクテリアを接種し
て培養し、その産生する酵素にクリチルリチンを加水分
解させるグリチルレチン酸の製造法が記載されているか
、この製法は発酵法であるため反応に長時間を要するば
かりか反応条件の制御か容易でなく、更に、反応後期に
おいて、生成したグリチルレチン酸が分解してしまうこ
ともある。また、この方法においてもジグルクロン酸部
分はグルクロン酸単位で加水分解されてグルクロン酸を
生しるが、グルクロン酸は回収しても経済的に利益がな
いのでやはり廃棄するしかない。
なお糖成分かングルクロン酸である配糖体を加水分解す
る酵素としては、動植物起源のβ−グルクロニダーゼが
知られているか、この酵素も、クリチルリチンに作用さ
せた場合はングルクロン酸単位を端から１個ずつ切離し
、最終的に、グルクロン酸′２分子とグリチルレチン酸
１分子を生成させるものである。アグリフン部とジグル
クロン酸部分との結合部位で加水分解しン゛グルクロン
酸を生しさせる酵素は知られていなかった。
る酵素としては、動植物起源のβ−グルクロニダーゼが
知られているか、この酵素も、クリチルリチンに作用さ
せた場合はングルクロン酸単位を端から１個ずつ切離し
、最終的に、グルクロン酸′２分子とグリチルレチン酸
１分子を生成させるものである。アグリフン部とジグル
クロン酸部分との結合部位で加水分解しン゛グルクロン
酸を生しさせる酵素は知られていなかった。
本発明者らは、従来のグリチルレチン酸の製造法力弓―
述のような欠点を持つものであったことに鑑み、グリチ
ルリチンのジグルクロン酸部分も有効に利用可能でしか
もグリチルレチン酸の収率もよいグリチルレチン酸の製
造法をめて研究を重ねｔこ結果、この目的に適合する新
規な加水分解酵素を発見し、本発明を完成するに至った
。
述のような欠点を持つものであったことに鑑み、グリチ
ルリチンのジグルクロン酸部分も有効に利用可能でしか
もグリチルレチン酸の収率もよいグリチルレチン酸の製
造法をめて研究を重ねｔこ結果、この目的に適合する新
規な加水分解酵素を発見し、本発明を完成するに至った
。
すなわち本発明は、糖成分としてノグルクロン酸を有す
る配糖体をそのアグリフン部とジグルクロン酸部分との
結合部位のみで加水分解する基質特異性を有する加水分
解酵素・ジグルクロニグーゼを用いてグリチルリチンを
加水分解することを特徴とするものである。
る配糖体をそのアグリフン部とジグルクロン酸部分との
結合部位のみで加水分解する基質特異性を有する加水分
解酵素・ジグルクロニグーゼを用いてグリチルリチンを
加水分解することを特徴とするものである。
ノグルクロニグーセはアスペルギルス・ニガーかその菌
体外に生産する酵素の中から本発明者らが初めて見いだ
して命名した酵素であって、次のような特性を有するも
のである。
体外に生産する酵素の中から本発明者らが初めて見いだ
して命名した酵素であって、次のような特性を有するも
のである。
■ グリチルリチンに作用させるとグリチルレチン酸を
生成するか、クルクロン酸は生成しない。本酵素処理物
を更に加水分解酵素・β−グルクロニダーゼで処理する
と初めて３− グルクロン酸か生成する。
生成するか、クルクロン酸は生成しない。本酵素処理物
を更に加水分解酵素・β−グルクロニダーゼで処理する
と初めて３− グルクロン酸か生成する。
■β−グルクロニダーゼの基質である１〕−二Ｆロフェ
ニルーβ−Ｄ−グルクロニドに作用させても加水分解は
起こらない。
ニルーβ−Ｄ−グルクロニドに作用させても加水分解は
起こらない。
■ 至適ｐ＋４ ： ４． 、 Ｏ〜４．５安定なｐｉ
（（加熱４０°Ｃ×１時間）：４〜７（ｐＨ］ （１、
ｆ’、ｌで失活する）（１）至適温度：約、４５°Ｃ 安定な温度（Ｉ＋ Ｉ−１５、（’、ｌ 、加熱０．５
時間）：約４７°Ｃ以下（約５８°Ｃ以上で失活する） ■ 分子量（Ｓｅｐｔ＋ａｄｅｘ Ｇ−２００を用いた
ゲル濾過法による）象り］ ５ ０ 、（ｌ ＯＯ ■ 等電点：約５．７ この酵素は、有機炭素源および有機窒素源を含有する培
地でアスペルギルス・ニガーを培養すると、培養物中に
蓄積されるから、これを適当な精製手段により採取する
こと１こより製造することかできる。培養に用いるアス
ペルギルス・ニガーはなんて゛もよいか、その具体例を
示すと、アスペルギルス・二〃−Ｇｌ＜Ｍ３（微工研菌
寄第７３０１号）、同ＩＦ０．１０ 、’ｌ ３、同Ｉ
ＦＯ４（’）６６、同ＩＦ０４０６７などがある。培地
にはコーン人ティープリカー、大豆粕抽出物、牛肉４− エキス、フスマ、ポリペプトン、デンプン、シタ糖、ブ
ドウ糖、ミカン果皮、棟花、−け草抽出物なとの有機炭
素源および有機窒素源、その他、補助的な無機成分とし
て硝酸ナトリウム、炭酸カルシウムなどを添加しておく
ことか望ましい。培地１〕ＩＩは５．０〜８．０が適当
である。上記の培地を用いて行うアスペルギルス・ニガ
ーの培養は、この菌の培養の常法に準じて行えばよい。
（（加熱４０°Ｃ×１時間）：４〜７（ｐＨ］ （１、
ｆ’、ｌで失活する）（１）至適温度：約、４５°Ｃ 安定な温度（Ｉ＋ Ｉ−１５、（’、ｌ 、加熱０．５
時間）：約４７°Ｃ以下（約５８°Ｃ以上で失活する） ■ 分子量（Ｓｅｐｔ＋ａｄｅｘ Ｇ−２００を用いた
ゲル濾過法による）象り］ ５ ０ 、（ｌ ＯＯ ■ 等電点：約５．７ この酵素は、有機炭素源および有機窒素源を含有する培
地でアスペルギルス・ニガーを培養すると、培養物中に
蓄積されるから、これを適当な精製手段により採取する
こと１こより製造することかできる。培養に用いるアス
ペルギルス・ニガーはなんて゛もよいか、その具体例を
示すと、アスペルギルス・二〃−Ｇｌ＜Ｍ３（微工研菌
寄第７３０１号）、同ＩＦ０．１０ 、’ｌ ３、同Ｉ
ＦＯ４（’）６６、同ＩＦ０４０６７などがある。培地
にはコーン人ティープリカー、大豆粕抽出物、牛肉４− エキス、フスマ、ポリペプトン、デンプン、シタ糖、ブ
ドウ糖、ミカン果皮、棟花、−け草抽出物なとの有機炭
素源および有機窒素源、その他、補助的な無機成分とし
て硝酸ナトリウム、炭酸カルシウムなどを添加しておく
ことか望ましい。培地１〕ＩＩは５．０〜８．０が適当
である。上記の培地を用いて行うアスペルギルス・ニガ
ーの培養は、この菌の培養の常法に準じて行えばよい。
目的とする酵素の生産は菌の増殖の定常期に起こるので
、通常は定常期に達したあと適当な時期に培養を打切る
。培養を終わった後は直ちに遠心分離して菌体を分離す
る。菌体を分離しただけの培養物でも、前述のようなジ
グルクロニグーゼとしての活性を示し、本発明の製法に
使用することかできるが、これを任意の手段により精製
すれば、より活性の強い酵素を得ることかできる。精製
手段としては酵素精製にしばしば採用される塩析、ゲル
濾過、限外濾過、イオン交換樹脂処理などが有効である
。
、通常は定常期に達したあと適当な時期に培養を打切る
。培養を終わった後は直ちに遠心分離して菌体を分離す
る。菌体を分離しただけの培養物でも、前述のようなジ
グルクロニグーゼとしての活性を示し、本発明の製法に
使用することかできるが、これを任意の手段により精製
すれば、より活性の強い酵素を得ることかできる。精製
手段としては酵素精製にしばしば採用される塩析、ゲル
濾過、限外濾過、イオン交換樹脂処理などが有効である
。
ジグルクロニグーゼは、冷蔵庫で保存した場合、数十日
ＩｉＩ］安定であり、冷凍庫では更に長期間保存するこ
とができる。
ＩｉＩ］安定であり、冷凍庫では更に長期間保存するこ
とができる。
ングルクロニダーゼによる加水分解に用いるグリチルリ
チンとしては、グリチルリチン酸のほか、そのアンモニ
ウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩などの水溶性塩か適
当である。原料のグリチルリチンは、濃度約２０％以下
の水溶液または懸濁液にし、液のｐ ｌ七ま約４．０〜
７．Ｃ）に調整しておく。
チンとしては、グリチルリチン酸のほか、そのアンモニ
ウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩などの水溶性塩か適
当である。原料のグリチルリチンは、濃度約２０％以下
の水溶液または懸濁液にし、液のｐ ｌ七ま約４．０〜
７．Ｃ）に調整しておく。
ジグルクロニグー七による加水分解反応の温度は２５〜
５０°Ｃか適当であり、特に好ましいのは、４０〜５０
’Ｃである。
５０°Ｃか適当であり、特に好ましいのは、４０〜５０
’Ｃである。
反応終了後、反応液を酢酸エチル、クロロホルム、ジク
ロルメタン等の有機溶媒で抽出処理すると、有機溶媒層
にグリチルレチン酸を、水層にジグルクロン酸を、それ
ぞれ得ることか゛でとる。
ロルメタン等の有機溶媒で抽出処理すると、有機溶媒層
にグリチルレチン酸を、水層にジグルクロン酸を、それ
ぞれ得ることか゛でとる。
ジグルクロニダーゼによるグリチルリチンの加水分解は
、上述のような溶液状態で行うほか、酵素をガラスピー
ズ、Ｋ−カラギーナン、アルギン酸、ＳＰ−セファデン
クスＣ−５０等に固定したものを充填したカラムを用意
し、ここにグリチルリチン溶液を流して連続的にイ〒う
こともで外る。
、上述のような溶液状態で行うほか、酵素をガラスピー
ズ、Ｋ−カラギーナン、アルギン酸、ＳＰ−セファデン
クスＣ−５０等に固定したものを充填したカラムを用意
し、ここにグリチルリチン溶液を流して連続的にイ〒う
こともで外る。
以−１−のような本発明によるグリチルレチン酸の製造
法は、」］草油抽出に簡単な精製を施しただけの柑グリ
チルリチンを原料としでも高収率をあげることかでき、
また副反応を生ヒないから、製品の精製か容易である。
法は、」］草油抽出に簡単な精製を施しただけの柑グリ
チルリチンを原料としでも高収率をあげることかでき、
また副反応を生ヒないから、製品の精製か容易である。
しかも、グリチルレチン酸とともに２グルクロン酸をも
取得することかでと、ノグルクロン酸は医薬品原料、甘
味配糖体原料、健康食品原料等の用途か期待されるので
、グリチルリチンかむだなく利用されるという長所かあ
る。まｔこ古くから食品製造に利用されていて安全性の
点で心配のないアスペルギルス・ニガーの生産する酵素
を使用する製法であることも、医薬品、食品等の原料と
なるグリチルレチン酸およびノグルクロン酸の製造法と
してはきわめて有利な点である。
取得することかでと、ノグルクロン酸は医薬品原料、甘
味配糖体原料、健康食品原料等の用途か期待されるので
、グリチルリチンかむだなく利用されるという長所かあ
る。まｔこ古くから食品製造に利用されていて安全性の
点で心配のないアスペルギルス・ニガーの生産する酵素
を使用する製法であることも、医薬品、食品等の原料と
なるグリチルレチン酸およびノグルクロン酸の製造法と
してはきわめて有利な点である。
以下実施例を示して本発明を説明するか、各側において
、パ％″は重量％を意味し、また酵素活性の測定は次の
方法により行なった。
、パ％″は重量％を意味し、また酵素活性の測定は次の
方法により行なった。
屏氷盾外０赳定広
適当に希釈した試料液１０１１と５ｍＭ−グリチルリチ
ン酸モノアンモニウム溶液（＋） ｌ−１５、ｔ）の酢
酸緩衝液に溶解したもの）１０１１とを混合し、／Ｉｆ
ｌ’Ｃで１時間反応させたのも反応液２（１／Ｊ ｌを
とり、高速液体クロマトグラフィーによりグリチルレチ
ン酸生成量をめる。上記条件で１分間に１μモルのグリ
チルリチン酸塩を変化させる酵素量を１単位とする。
ン酸モノアンモニウム溶液（＋） ｌ−１５、ｔ）の酢
酸緩衝液に溶解したもの）１０１１とを混合し、／Ｉｆ
ｌ’Ｃで１時間反応させたのも反応液２（１／Ｊ ｌを
とり、高速液体クロマトグラフィーによりグリチルレチ
ン酸生成量をめる。上記条件で１分間に１μモルのグリ
チルリチン酸塩を変化させる酵素量を１単位とする。
実施例 １
コーンステイープリカー２．５％、大豆粕アルカリ抽出
物２．５％、塊花粉末１．０％、炭酸カルシウム０．５
％、残部蒸留水からなる培地（ｐｌ４５ 、８ ）を７
０ｍ１ずっ５０ （，１１１１ｌ坂ロフラスフ１４０本
に分注し、１２ （１℃で１５分間加熱して滅菌する。
物２．５％、塊花粉末１．０％、炭酸カルシウム０．５
％、残部蒸留水からなる培地（ｐｌ４５ 、８ ）を７
０ｍ１ずっ５０ （，１１１１ｌ坂ロフラスフ１４０本
に分注し、１２ （１℃で１５分間加熱して滅菌する。
冷却後、アスペルギルス・ニガーＧＲＭ３（＠工研菌寄
第７３（１１号）を１白金耳ずつ植菌し、２７°Ｃで４
日間、毎分１２０回の往復振どう培養を行う。培養終了
後、培養液を集め、１０ 、 ｆ） ＯＯＸσで２０分
間遠心分離を行い菌体な除去する。得られた」二清に硫
酸アンモニウムを６０％飽和になるまで添加し、生した
沈殿を濾集して０ 、２ Ｍ−酢酸緩衝液（ｐ ＩＩ
／ｌ 、 ５ ｆｉ ）に溶解し、０．２Ｍ−酢酸緩衝
液（ｐＨ４，５０）で透析を行う。透析後、Ｓ Ｐ −
Ｓ ｅｌ）ｌ＋ａｄｅｘ Ｃ−５（ｌのカラム（直径３
０口１１０、高さ６６０ ｖｎ）に吸着させ、次いで０
〜０．６Ｍ−ＮａＣ１の濃度、−う配を持つ０．０２Ｍ
−酢酸緩衝液（ｐＨ４，５（＋）で傾斜溶離する。溶離
液について前記酵素活性の測定法に準してジグルクロニ
ダーゼ活性の有無を調べ、活性か認められる７ラクシヨ
ンを集めて限外濾過濃縮を行い、次いで透析を行い、更
にＳ ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ −２０（ｌのカラム（直径
２ （１ｍｌ＋１、高さ９８０１１１１１１）を用いて
ゲル濾過（０，０２Ｍ−酢酸緩衝液； ｐｉ−１４、５
０）を行う。ゲル濾過後、濃縮透析を行い、次いで・ｐ
ｌ−１３、（１〜１０．０のキャリヤーアンホラインを
用いてｊＬα電気泳動を行う。
第７３（１１号）を１白金耳ずつ植菌し、２７°Ｃで４
日間、毎分１２０回の往復振どう培養を行う。培養終了
後、培養液を集め、１０ 、 ｆ） ＯＯＸσで２０分
間遠心分離を行い菌体な除去する。得られた」二清に硫
酸アンモニウムを６０％飽和になるまで添加し、生した
沈殿を濾集して０ 、２ Ｍ−酢酸緩衝液（ｐ ＩＩ
／ｌ 、 ５ ｆｉ ）に溶解し、０．２Ｍ−酢酸緩衝
液（ｐＨ４，５０）で透析を行う。透析後、Ｓ Ｐ −
Ｓ ｅｌ）ｌ＋ａｄｅｘ Ｃ−５（ｌのカラム（直径３
０口１１０、高さ６６０ ｖｎ）に吸着させ、次いで０
〜０．６Ｍ−ＮａＣ１の濃度、−う配を持つ０．０２Ｍ
−酢酸緩衝液（ｐＨ４，５（＋）で傾斜溶離する。溶離
液について前記酵素活性の測定法に準してジグルクロニ
ダーゼ活性の有無を調べ、活性か認められる７ラクシヨ
ンを集めて限外濾過濃縮を行い、次いで透析を行い、更
にＳ ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ −２０（ｌのカラム（直径
２ （１ｍｌ＋１、高さ９８０１１１１１１）を用いて
ゲル濾過（０，０２Ｍ−酢酸緩衝液； ｐｉ−１４、５
０）を行う。ゲル濾過後、濃縮透析を行い、次いで・ｐ
ｌ−１３、（１〜１０．０のキャリヤーアンホラインを
用いてｊＬα電気泳動を行う。
１２月−の方法でジグルクロニグーゼの製造と精製を行
い、ディスク電気泳動上単一の精製酵素液（３８，７単
位／ ＩＩＩ ＋ ） ２ ｍ １８− を得た。
い、ディスク電気泳動上単一の精製酵素液（３８，７単
位／ ＩＩＩ ＋ ） ２ ｍ １８− を得た。
次に、」−記と同様の精製を限外濾過濃縮まで行なった
中間精製品を用いて、グリチルリチン酸モノアンモニウ
ム（純度９８ 、 （：１％）の加水分解を行なった。
中間精製品を用いて、グリチルリチン酸モノアンモニウ
ム（純度９８ 、 （：１％）の加水分解を行なった。
グリチルリチン酸塩はｐＨ４，８の（１，５％溶液とし
、その３０００ｍｌに、上記ジグルクａ ニグーゼ４
Ｏｆｉｔ位を添加して４５°Ｃに保った。２４時間後に
反応を打切り、高速液体クロマトグラフィーによりグリ
チルレチン酸の生成量をめたところ、理論量の９８．２
％であった。反応液をクロロホルム３ （’ｌ （ｌ
ｍｌで３回抽出し、クロロホルム層を集めて：威圧濃縮
し、得られた固形物をメチルアルコールで再結晶精製し
てグリチルレチン酸７．３ｇを得た。このグリチルレチ
ン酸は、薄層クロマトグラフィーにおいて単一のスボン
トを与え、高速液体クロマトグラフィーによる分析で９
９．４％の純度を示し、旋光度［αｌｉ、’ ＝ １６
１、ｆ）（文献値１６３．１１）であった。
、その３０００ｍｌに、上記ジグルクａ ニグーゼ４
Ｏｆｉｔ位を添加して４５°Ｃに保った。２４時間後に
反応を打切り、高速液体クロマトグラフィーによりグリ
チルレチン酸の生成量をめたところ、理論量の９８．２
％であった。反応液をクロロホルム３ （’ｌ （ｌ
ｍｌで３回抽出し、クロロホルム層を集めて：威圧濃縮
し、得られた固形物をメチルアルコールで再結晶精製し
てグリチルレチン酸７．３ｇを得た。このグリチルレチ
ン酸は、薄層クロマトグラフィーにおいて単一のスボン
トを与え、高速液体クロマトグラフィーによる分析で９
９．４％の純度を示し、旋光度［αｌｉ、’ ＝ １６
１、ｆ）（文献値１６３．１１）であった。
また、水層側を水酸化す） ＩＪウムで用１和後、凍結
乾燥し、ジグルクロン酸６．２ｇを得た。なお反応生成
物からグルクロン酸は検出されなかった。
乾燥し、ジグルクロン酸６．２ｇを得た。なお反応生成
物からグルクロン酸は検出されなかった。
実施例 ２
コーンステイープリカー３．５％、脱脂大豆粉末２．０
％、棟花粉末１ 、０％、炭酸カルシウム１．０％、残
部蒸留水からなる培地（＋）ｌ−１５、８） ７ （ｌ
ｍｌを５００ＩＩ１１坂口７ラスフにとり、１２０℃
で１５分ｉＩ加熱して滅菌する。冷却後、アスペルギル
ス・ニガーを１白金耳稙菌し、２７℃で３日間、毎分１
１（）回の往復振どう培養を行う。
％、棟花粉末１ 、０％、炭酸カルシウム１．０％、残
部蒸留水からなる培地（＋）ｌ−１５、８） ７ （ｌ
ｍｌを５００ＩＩ１１坂口７ラスフにとり、１２０℃
で１５分ｉＩ加熱して滅菌する。冷却後、アスペルギル
ス・ニガーを１白金耳稙菌し、２７℃で３日間、毎分１
１（）回の往復振どう培養を行う。
培養終了後、培養液を１０，０ＯＯＸ（Ｊで２０分間遠
心分離することにより菌体を除去し、粗酵素液を得る。
心分離することにより菌体を除去し、粗酵素液を得る。
得られた訂１酵素液１ｍｌをとり、これに５ｍＭ−グリ
チルリチン酸モノアンモニウム溶液（ｐＨ５，（１の酢
酸緩衝液に溶解したもの）ｉｍｌを加え、４０℃で１時
間反応させたのち生成したグリチルレチン酸を定量する
。
チルリチン酸モノアンモニウム溶液（ｐＨ５，（１の酢
酸緩衝液に溶解したもの）ｉｍｌを加え、４０℃で１時
間反応させたのち生成したグリチルレチン酸を定量する
。
」１記のジグルクロニグーゼ製造試験において、培養に
用いるアスペルギルス・二〃−としてＧＲＭ３（実施例
１で用いたもの）その池１（〕種類の標準株を用いて得
られた結果を第１表に示す。
用いるアスペルギルス・二〃−としてＧＲＭ３（実施例
１で用いたもの）その池１（〕種類の標準株を用いて得
られた結果を第１表に示す。
第 １ 表
ＧＲＭ３ ０，９４
１（−） ４０４３ １．５４
ＩＦＱ ＝１０６６ １ ．８０
Ｔｆ二”０４０６７１，６３
］ＦＯ４０６８０，９６
ＩＦＯ４，０９１０，９０
ＩＦＯ４，３４３１，００
ＩＦＯ６３４２０，６６
ＨＩＮＴ ２（１５４１，００
１（ＬＩＴ ２ｏ５５ Ｌｌｌｌ
ＨＵＴ ２０７８ １．（’）１
実施例 ３
１１草根３ ＋） ｏ ｇを粉砕し、温水３０００＋１
１１で２回抽出して得られた抽出液を３ ｔ） （ｌ
ｍｌまで減圧濃縮し、ＤＨを５．５に調整した。この濃
縮液（グリチルリチン酸含有量１２ｇ）に、実施例１で
用いｊこのと同しジ゛グルクロニダーゼ１５０単位を加
え、４５°Ｃに保った。２４時間後に反応を打切り、高
速液１１一 体クロマトグラフィーによりグリチルレチン酸の生成量
をめたところ、理論量の９８．０％であった。反応液を
クロロホルム］００ｍ１で３回抽出し、クロロホルム層
を集めて減圧濃縮し、得られた固形物をメチルアルコー
ルで再結晶精製して、グリチルレチン酸６．１ｇを得た
。このグリチルレチン酸は、高速液体クロマトグラフィ
ーによる分析で９８．０％の純度を示し、旋光度［α）
９°＝１５９．３であった。
１１で２回抽出して得られた抽出液を３ ｔ） （ｌ
ｍｌまで減圧濃縮し、ＤＨを５．５に調整した。この濃
縮液（グリチルリチン酸含有量１２ｇ）に、実施例１で
用いｊこのと同しジ゛グルクロニダーゼ１５０単位を加
え、４５°Ｃに保った。２４時間後に反応を打切り、高
速液１１一 体クロマトグラフィーによりグリチルレチン酸の生成量
をめたところ、理論量の９８．０％であった。反応液を
クロロホルム］００ｍ１で３回抽出し、クロロホルム層
を集めて減圧濃縮し、得られた固形物をメチルアルコー
ルで再結晶精製して、グリチルレチン酸６．１ｇを得た
。このグリチルレチン酸は、高速液体クロマトグラフィ
ーによる分析で９８．０％の純度を示し、旋光度［α）
９°＝１５９．３であった。
代理人 弁理士 板弁−朧
１２−
Claims (3)
- （１）糖成分としてジグルクロン酸を有する配糖体をそ
のアグリコン部とングルクロン酸部分との結合部位のみ
で加水分解する基質特異性を有する加水分解酵素・ジグ
ルクロニダーゼを用いてグリチルリチンを加水分解する
ことを特徴とするグリチルレチン酸の製造法。 - （２）ジグルクロニダーゼがアスペルギルス・ニガーの
培養物から採取されたものである特許請求の範囲第１項
記載の製造法。 - （３）ジグルクロニダーゼによる加水分解をｐＨ４，０
〜７．（）で行う特許請求の範囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1828584A JPS60163895A (ja) | 1984-02-06 | 1984-02-06 | グリチルレチン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1828584A JPS60163895A (ja) | 1984-02-06 | 1984-02-06 | グリチルレチン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60163895A true JPS60163895A (ja) | 1985-08-26 |
Family
ID=11967355
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1828584A Pending JPS60163895A (ja) | 1984-02-06 | 1984-02-06 | グリチルレチン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60163895A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2616800A1 (fr) * | 1987-06-16 | 1988-12-23 | Pernod Ricard | Production d'une enzyme du type bglucuronidase, hydrolyse de la glycyrrhizine et production d'acide 18 b-glycyrrhetinique |
-
1984
- 1984-02-06 JP JP1828584A patent/JPS60163895A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2616800A1 (fr) * | 1987-06-16 | 1988-12-23 | Pernod Ricard | Production d'une enzyme du type bglucuronidase, hydrolyse de la glycyrrhizine et production d'acide 18 b-glycyrrhetinique |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105886573B (zh) | 一种连续胞外酶生物法制备海藻糖的方法 | |
| JPS6013677B2 (ja) | シュクロ−スの酵素的トランスフルクトシレ−ション法 | |
| JPH0236230B2 (ja) | ||
| JPS6013668B2 (ja) | グルタチオン・パ−オキシダ−ゼの製造法 | |
| JPS60163895A (ja) | グリチルレチン酸の製造法 | |
| US4990451A (en) | Process for the preparation of inulase | |
| JP2003070439A (ja) | イソフラボンアグリコンに富んだ納豆およびその製造法。 | |
| JPH089972A (ja) | 新規デアミノノイラミニダーゼとその製造方法 | |
| JPS60164484A (ja) | 新規加水分解酵素およびその製造法 | |
| JP2992830B2 (ja) | 新規β―グルクロニダーゼ | |
| WO1995034570A1 (fr) | Processus de production de disaccharides et de nouveaux saccharides | |
| JPS6279777A (ja) | ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼの製造方法 | |
| JPH0998779A (ja) | トレハロース合成酵素、その製法及びそれを用いたトレハロースの製造法 | |
| JP2887689B2 (ja) | グリチルレチン酸モノグルクロナイドの製造法 | |
| JPH0568239B2 (ja) | ||
| JP4336400B2 (ja) | 酵素誘導剤及びそれを用いる酵素製造方法 | |
| JPH0317839B2 (ja) | ||
| JPH01174383A (ja) | 酵素によるｎ−アセチルキトオリゴ糖の製造法 | |
| JP3601618B2 (ja) | ラミナリペンタオース生産酵素の製造方法 | |
| SU1406160A1 (ru) | Способ получени эндонуклеазы рестрикции Fок1 из FLаVовастеRIUм океаNокоIтеS | |
| JPH07203983A (ja) | 酵素合成によりトレハロースを製造する方法 | |
| JPS5863387A (ja) | 制限酵素の製造法 | |
| JPH05279377A (ja) | 新規二糖類化合物及びその製造法 | |
| JPH08168393A (ja) | ガラクトオリゴ糖の製造方法 | |
| JPH1028594A (ja) | ウリジン二リン酸−ｎ−アセチルグルコサミンの製造方法 |