JPS60163824A - 薬物担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は薬物をその中に包含し、血液中から目標組織へ
の移行を容易ならしめる薬物担体に関する。

水に難溶な薬物を注射剤として使用する場合、従来は種
々の水可溶性の溶媒や界面活性剤を用いて可溶化する方
法が一般に行われていた。この方法によれば、投与され
た薬物は血液によって可溶化剤が希釈されて次第に可溶
化能を失い、時に血管内で薬物の結晶が析出し若しくは
可溶化剤そのものが血管に働いて血管障害を引き起こす
こと等の弊害が知られていた。

近年、リン脂質で調製したリポソームを担体として薬物
の可溶化等を図る試みが行われている。しかし、脂質の
みからなるリポソームを血液中に投与すると、リポソー
ムは比較的長時間血中に保たれ、その殆どは、肝、１ｌ
Ｑｉ、肺等の網内系細胞に取り込まれてその他の組織に
は僅かしか分配されないことが明らかになっており、薬
物の組織への移行速度と効率については改善されるべき
余地がまだまだ残されていた。

また最近の研究によって、リポソーム表面にモノクロナ
ール抗体を埋め込むことによりリポソームの細胞選択性
が向上する可能性が示されたが、細胞への取込み機構や
抗原決定基の選択など、なお多くの問題点を有していた
。

本発明者らは、かかる事情に鑑み、薬物の薬理作用その
ものに影響を与えることなく薬物を選択的に組織内に移
行せしめてその投与量を減じつつしかも血管障害の少な
い安全性の高い薬物投与方法を検討し続けた結果、撓倖
ではあったが、終に本発明を想到するに至ったものであ
る。

本発明者らは、まず血液中から組織への薬物移行を上昇
せしめる上で有効な薬物担体について種々検討を試みた
。そして、薬物が組織に移行する際の最初の段階である
血管壁細胞への移行を上昇せしめることにより、薬物の
組織への移行が改善されると考えた上、検討を続けたと
ころ、血中リポタンパクの構成成分であるアポリポタン
パクを含有する担体が前述の目的を完全に達成し得るこ
とを見いだしたものである。

本発明の要旨は、薬物をタンパクと脂質とからなる薬物
担体に包含せしめることにある。

本発明においては、ヒト及び動物由来の血中リポタンパ
クの構成成分であるアポリポタンパクをその薬物担体に
おけるタンパクとして使用することができる。

血中リポタンパクは脂質とタンパクとの複合体であり、
生体内で脂質の運！般を行うという生理的役割を担うこ
とが知られている。また、このものは、超遠心法による
粒子密度により或いは電気泳動法による粒子荷電等によ
り数種に分類され、それぞれ特有の生体内挙動をとるこ
とが知られている。これらの血中リポタンパク特有の性
質は、その構成成分であるアポリポタンパクに由来する
ものであると考えられ、アポリポタンパクに対する受容
体が細胞表面に存在することが判っている。

すなわち、組繊細胞の表面において存在する受容体がア
ポリボクンバクを認識し、その上で結合し、リポタンパ
クを細胞内に取り込むのである。本発明ば、このアポリ
ポタンパクの生理学的性質を薬物担体として応用せんと
するところに特徴を有するものである。

本発明に使用するアポリポタンパクは、公知の方法によ
り血中リポタンパクを分画し脱脂することにより得るこ
とができる。

従来から、性質の異なるアポリポタンパクの存在が知ら
れており、それらは一般に、Ａｐｏ−Ａ。

Δｐｏ−Ｂ、　Ａｐｏ−Ｃ，Ａｐｏ−Ｄ及びＡｐｏ−Ｅ
と大別されている。これらは単味で用いても数種混合し
て用いても、或いは限定加水分解や種々の化学修飾を行
っても、いずれでも使用することができる。

また、本発明の薬物担体に使用される脂質としては、天
然由来のリン脂質、中性脂質及びステロール類又はこれ
らの混合物が挙げられる。例えば、血中リポタンパク、
卵黄、大豆、綿花、ナタネ、Ｉ・ウモロコシ、落花生由
来のリン脂質、中性脂質及びステロール類又は純合成的
に製造されたリン脂質、中性脂質又はステロール類のい
ずれでもよい。本発明の薬物ｉｌ１体のタンパク及び脂
質の構成比は通常血中リポタンパクの一般的通常範囲が
好ましい。ずなわらタンパク２〜５０　（重量／重量）
％、リン脂質６〜５０　（重量／重量）％、中性脂質５
〜８５（重量／重量）％、ステロール類３〜４５　（重
量／重量）％、であるが、これらの構成比は本発明の目
的に対して臨界的ではない。

本発明におけるタンパク及び脂質から成る薬物担体には
それらの構成成分の混合物である血中リポタンパクその
ものが含まれる。これを用いて製剤するときは薬物を担
体中に分散状態或いは混合ミセル（複合体）状態で存在
させることができる。すなわち、本発明の要旨のひとつ
は、薬物を分散状態或いは混合ミセルの形態でタンパク
と脂質とからなる薬物担体に包含せしめることにある。

本発明の担体の粒径は薬物を包含した場合において５０
００Å以下のものが好ましく、とりわけ５００Å以下の
ものが良い。生体内に既存する血中リポタンパクの粒径
に近似するほど安全性が高くさらに体内での組織移行性
、薬理効果などが優れているからである。

本発明を適用しうる薬物としては、医薬上許容されるも
のであれば特に限定されることはないが、水に不溶若し
くは！ｉ溶な薬物であっても使用することができる。薬
物が担体と容易に複合体を形成するからである。水溶性
の薬物については担体の構成成分であるタンパク若しく
は脂質に化学的に結合させて使用することもできる。し
かしこの場合には、生体内で活性型の薬物が酵素的或い
は非酵素的に遊離することが要求される。

本発明を適用する場合の薬物濃度、すなわち担体に対す
る薬物量は、その薬物の生物学的活性によって種々に変
化させることができる。本発明に係る薬物担体を使用し
た製剤の製造においては、従来から実験的に行われてき
た既知の手法を応用することができる。例えば、薬物を
含む各構成成分を水に懸濁し超音波処理によって混合ミ
セル（複合体）を形成せしめる方法や、界面活性剤（例
えば胆汁酸）で可溶化した後、透析やゲルクＬ７マトグ
ラフイーにより界面活性剤を除去し混合ミセル（複合体
）を形成せしめる方法を用いることができる。また、血
中リポタンパクそのものや一１二記の手法で製造した担
体に対してシリカゲル、セライト、若しくは濾紙等の固
体表面上で薬物を担体中に移行せしめることにより製造
する方法をとることもできる。

更に、薬物と脂質の混合物にアポリポタンパクを添加し
て製造することもできる。

混合ミセル（複合体）の形成とその粒径は電子顕微鏡で
容易に確認することができる。

本発明に係る薬物担体の製剤の任意の成分としては、一
般注射剤に用いられる添加剤及び補助物質、例えば酸化
防止剤、防腐剤、安定化剤、等張化剤、緩衝剤等を挙げ
ることができる。これらの添加剤、補助剤の要求量及び
最適量は、所望により変化させることができる。

このようにして得られる薬物を包含した薬物担体は、滅
菌し窒素ガスとともにアンプル中に封入するごとができ
る。また所望により凍結乾燥することもできる。凍結乾
燥させた薬物担体は、使用前に常法に従って静脈内投与
に適当な溶液に水又は等張食塩水の添加により復元する
ことができる。

本発明の構成に欠くことのできない要素のひとつである
アポリポタンパクは公知の物質であり、その分画法や製
造法についても既に多くの研究がなされている。しかし
、リポタンパクの生理学的性質を応用し、これを薬物担
体として利用することを明らかにした報告は未だなされ
てはいない。

本発明によれば、血中から組織中への薬物の選択的かつ
迅速な移行を可能にし、薬物の応用価値を著しく高める
ことができるが、既に詳述したように、本発明のこの効
果は、本発明者らの研究によって初めて可能となったも
のである。

以下に本発明の実施例をあげて本発明を更に詳しく説明
する。

実施例１ （１）−夜絶食した雄性ウィスター系ラット（体重的２
５０ｇ　）より得た血清よりリポタンパクを、密度１．
０６３の溶媒中で、１００．０００Ｇ・２４時間の超遠
心処理を施しリポタンパクを浮上させることにより得た
。このリポタンパクをそのまま薬物担体として以下の実
験に用いた。

（２）被験薬物として、血管強化、止血、膜透過性抑制
等の薬理作用を有する化合物であるβ−シトステリル−
β−Ｄ−グルコサイドを用いた。

試験管にセライトＮｏ５４５　（和光純薬製）を５０ｍ
ｇとり、α−トコフェロール０．５μｇ及びβ−シトス
テリル−β−Ｄ−グルコサイド１００μｇをそれぞれク
ロロホルム溶液として加え、減圧下溶媒を完全に除去し
た。

上記の薬物担体溶液２．Ｏｎ＋Ｉを加え穏やかに攪拌し
ながら３７℃で２０時間保温した。３６００ｒｐｍ。

１０分の遠心処理によりセライトを沈毅せしめ、」二清
にβ−シトステリル−β−Ｄ−グルコサイドを取り込ん
だ薬物担体溶液を得た。

この溶液は０．２μｍのメンブレンフィルターを通過さ
せることにより巨大粒子を除去し、同時に滅菌した。

上記操作により、約１０μｇ／ｍｌのβ−シトステリル
−β−Ｄ−グルコザイドかりボタンバク内に導入され、
β−シトステリル−β−Ｄ−グルコサイドを含有する薬
物担体の製剤が得られた。

（３）ウィスター系ラット（体重的２００ｇ　）を用い
て、上記のβ−シトステリル−β−Ｄ−グルコナイドを
導入した薬物担体製剤を検体試料として静脈内投与し、
その後の血中β−シトステリル−β−Ｄ−グルコサイド
濃度の経時的な推移を測定した。比較のために、以下の
ような組成のβ−シトステリル−β−Ｄ−グルコサイド
リポソーム製剤と、対照試料として２％ＨＣＯ−６０に
より可溶化したβ−シトステリル−β−Ｄ−グルコサイ
ド／８？ｐｉ、についても同様に静脈内投与し、血中濃
度の推移を測定した（第１図）。

なおリポソーム製剤はβ−シトステリル−β−Ｄ−グル
コサイド７ｍｇ、卵黄ホスファチジルコリン２９ｍｇ、
コレステロール７ｍｇ、　１ｉｃｋ−６０１００ｍｇ、
グルコース４５０ｍｇが等張リン酸緩衝液１０ｍ１中に
含有されるものであり、常法に従って超音波処理により
調製したものである。

○印線は、検体試料を投与した場合のもの、Ｘ印線はリ
ポソーム製剤を投与した場合のもの、・印線は対照試料
を投与した場合のもので、それぞれ３例の平均値を示す
。

第１図から検体試料中のβ−シトステリル−β−Ｄ−グ
ルコサイドの血中からの消失はリポソーム製剤中や対照
試料中のβ−シトステリル−β−Ｄ−グルコサイドの消
失より極めて速やかであり、検体試料中のβ−シトステ
リル−β−Ｄ−グルコサイドは組織移行性が優れている
ことが判る。

（４）検体試料の静脈内投与後３０分と６時間に得た血
液を、常法に従って前記のように超遠心処理１ により血中のりボタンバクを分画した。その結果、検体
試料中に含有されたβ−シトステリル−β−Ｄ−グルコ
サイドはいずれの測定時間においてもすべて血中リポタ
ンパク画分に存在していることが判った。

ｉ５）　ｆａｔ　ｄ　ｄ　Ｙ系雄性マウス（体重的３０
ｇ）の尾端止血時間を指標として止血効果を判定した。

上記β−シトステリル−β−Ｄ−グルコサイドを導入し
た薬物担体製剤を検体試料とし、生理食塩水で種々の濃
度に希釈して、尾静脈内に投与した。投与後一定時間に
鋭利な刃物で尾端を切断し出血が認められなくなる時間
すなわち止血時間を分光光度計を用いて測定した。対照
試料として１ｉｃｋ−６０により可溶化したβ−シトス
テリル−β−Ｄ−グルコサイド溶液についても同様に静
脈内投与して止血時間を測定した。検体試料又は対照試
料を投与した場合のβ−シトステリル−β−Ｄ−グルコ
サイド用量と、投与後１時間後の止血時間との関係すな
わち用量作用曲線を第２図に示した。

２ ０印線は検体試料を投与した場合のもの、・印線は対照
試料を投与した場合のもので、それぞれ５例の平均と標
準誤差値を示す。

対照試料は、約１０μｇ　／ｋｇの用量を変曲点とした
シグモイド形の用量作用曲線が得られ、２５μｇ／ｋｇ
の用量で明確な止血作用が得られた。

一方、検体試料は約０．１μｇ／ｋｇの用量を変曲点と
したシグモイド形の用量作用曲線が得られ、０．２３μ
ｇ／ｋｇの用量で明確な止血作用が得られることが判っ
た。すなわち、検体試料中のβ−シトステリルーβ−Ｄ
−グルコサイドば、対照試料の１／１００以下の投与量
で同等の薬理効果をあげることができる。

（ｂｌウィスター系雄性ラット（体重的２００ｇ　）の
ヒスタミン皮肉投与による血管透過性亢進に対する抑制
作用を指標にした。検体試料又は対照試料を頚静脈内に
投与した。投与１時間後に股静脈内にエバンスブルー（
１０ｍｇ１０．５ｎ＋ｌ　）を投与し直ちに腹部皮肉に
ヒスタミン（１，６μｇ／２０μｌ）を注入した。３０
分後室白肉漏出したエバンスブルーを６２０ｎｍで比色
定量した。検体試料と対照試料を投与した場合の血管透
過性抑制効果を第１表に示した。

第１表 ４２μｇ／ｋｇのβ−シトステリル−β−Ｄ−グルコサ
イドの投与で対照試料に血管透過性抑制効果は得られな
かったが、検体試料中のβ−シトステリル−β−Ｄ−グ
ルコサイドは同用量でエバンスブルーの漏出を約２に抑
制し、明確な血管透過性抑制効果を現した。

実施例２ ｄｄＹ系雄性マウスを用い、実施例１と同様の方法で薬
物担体を得た。

また、健常男子ボランティアより得た血液より分画した
りボタンバクを担体として用い、実施例１と同様の方法
で薬物担体を得た。

これらの薬物担体についても、マウスに対する止血効果
を調べたところ、実施例１で得た薬物担体の最低有効投
与量０．２３μｇ／ｋｇのβ−シトステリル−β−Ｄ−
グルコサイドと同じ用量で同様の明確な薬理効果が得ら
れることが判った。

担体に用いるアポリポタンパクの由来は、本発明を限定
するものではないことが判明した。

実施例３ 実施例１と同様にラット血中リポタンパクをそのまま薬
物担体として用いた。

被験薬物として心機能の改善に有効な医薬品として臨床
的にも利用されている化合物ユビデカレノン（別名コエ
ンザイム０１Ｇ　）を用いた。

担体へのユビデカレノンの導入は濾紙を用いて行った。

ワットマン阻１濾紙をユビデカレノンのクロロホルム溶
液にいったん浸し、窒素ガス気流で完全に乾燥させる。

このユビデカレノンを含んだ濾紙を担体溶液中に投入し
４℃で９０分分間中かに振盪しながら保温する。その後
濾紙ｂ を取り出し担体溶液を０．２μｍメンブレンフィルター
を通過させ滅菌する。この操作によりユビデカレノンが
約１００μｇ／ｍｌの濃度でリポタンパク中に導入され
、ユビデカレノンを包含する薬物担体の製剤が得られる
。

上記薬物担体製剤を検体試料とし、雄性モルモット（体
重約３００’ｇ）に静脈内投与して血中ユビデカレノン
濃度の経時的推移を測定した。投与したユビデカレノン
量は０．６ｍｇ／ｋｇであった。

）［のためユビデカレノンのリポソーム製剤及びＩＩＧ
Ｏ−６０により可溶化したユビデカレノン溶液を対照試
料として検体試料と同様に静脈内投与し血中ユビデカレ
ノン濃度推移を測定した（第３図）。ユビデカレノンリ
ポソーム製剤は、常法に従って卵黄ホスファチジルコリ
ン、コレステロール、ユビデカレノンをそれぞれモル比
で３０：１０１で混合し生理食塩水を加えて超音波処理
を行い次にセファデックスＧ−５０カラムに負荷してリ
ポソーム分画を集めて調製した。

○印は検体試料を投与した場合のもの、×印６ はりボソーム製剤を投与した場合のもの、・印は対照試
料を投与した場合のものである。それぞれ３例の平均値
を示す。第３図に示すように検体Ｅ料中のユビデカレノ
ンの血中からの消失は投与後９０分で折れ曲がる２本の
直線で示され、その消失半減期は第１相目が１３．１分
、第２相目が１１．９時間であった。また、リポソーム
製剤中のユビデカレノンの血中からの消失は投与後１５
０分で折れ曲がる２本の直線で示され、その消失半減期
は第１相目が３５．３分、第２相目が１７．７時間であ
った。対照試料中のユビデカレノンの血中からの消失は
１本の直線で示され、その消失半減期は２３．７時間で
あった。

これらのことから、検体試料の中のユビデカレノンの血
中からの消失、すなわち組織への移行は、リポソーム製
剤や対照試料に比べて極めて速やかであることが判った
。

実施例４ 被験薬物としてコレステロール低下剤である４、４−　
（イソプロピリデンジチオ）ビス−（２，６＝ジーｔｅ
ｒ　ｔ−ブチルフェノール〕　（−船名プロブコール）
を用いた。実施例１と同様にラットより得た血中リポタ
ンパク溶液にヘプタンを加えて振盪することにより脂質
を抽出しりボタンバクを脱脂する。水層を凍結乾燥しア
ポリポタンパクを得た。試験管に卵黄ホスファチジルコ
リン１０ｍｇ、コレステロール３ｍｇ、及びプロブコー
ル１ｍｇをとり、生理食塩水２ｍｌを加えて１０分間超
音波処理を行い脂質−薬物複合体を作成する。

別に凍結乾燥したアポリポタンパク１ｍｇを生理食塩水
１ｍｌに懸濁しこれを先の脂質−薬物懸濁液に加えて３
０秒間の超音波処理の後１時間３７℃で穏やかに振盪す
る。この溶液を０．２μｍのメンブレンフィルターを通
して巨大粒子を除くと同時に滅菌する。上記の操作によ
り約３００μｇ／ｍｌのプロブコールを包含した薬物担
体製剤が得られた。

このプロブコールを包含する薬物担体溶液の凍結乾燥物
は、凝集して外観上はブロック状を呈している。

実施例５ 抗炎症剤として臨床的に利用されている合成副腎皮質ホ
ルモン剤であるデキサメタシンを被検薬物とした。担体
への導入を容易にするために、デキサメタシンに脂肪酸
であるバルミチン酸を化学的に結合させたデキサメタシ
ンパルミテートを用いた。

実施例４で得られたアポリポタンパクの凍結乾燥物２ｍ
ｇと卵黄ホスファチジルコリン８ｍｇとコレステロール
２ｍｇ及びデキザメタゾンパルミテー）１ｍｇを試験管
にとり、０．５％コール酸ナトリウム水溶液を５ｍｌ加
え穏やかに攪拌しながら４℃で２０時間保温する。次に
透析用セルロースチューブを用い、生理食塩水を外液と
して透析を行い、コール酸ナトリウムを除去した。透析
終了後０．２μｍのメンブレンフィルターを通し巨大粒
子を除去するとともに濾過滅菌する。

この操作により約１８０μｇ／ｍｌのデキサメタシンパ
ルミテートを包含する薬物担体製剤が得られた。

９ このものの生理活性を測定するため、以下の実験を行っ
た。

抗炎症作用の検討法として肉芽置注を用いた。

ウィスター系雄性ラット（体重約１２０ｇ）の背部に、
２％λカラゲニン４ｍｌを注入した。５日後、６日後、
７日後にそれぞれの薬剤を尾静脈内に計３回投与した。

被験薬剤としては、上記デキサメタシンパルミテートを
導入した薬物担体製剤を検体試料とし、比較のためアポ
リポタンパクを添加せず検体試料と同様の操作により得
られるデキサメタシンパルミテート−脂質複合体製剤及
び対照試料として水溶性のデキサメタゾンジソジウムホ
スフェートを生理食塩水に溶解したものを検体試料と同
様に静脈内に投与した。

実験開始後８日目に肉芽嚢を摘出し重量を測定した。

それぞれの薬剤の肉芽嚢形成の抑制率を第４図に示した
。

○印線は検体試料を投与した場合のもの、Ｘ印線はデキ
サメタシンパルミテート−脂質複合０ 体製剤を投与した場合のもの、・印線は対照試料を投与
した場合のもので、それぞれ５例の平均値を示す。

これから判るように、検体試料の抗炎症作用はかなり強
く、デキサメタシンとしてのＥＤｓＱを計算すると検体
試料は０．０３　ｍｇ／ｋｇでデキサメタシンパルミテ
ート−脂質複合体製剤のそれは０．４５　ｍｇ／ｋｇで
あり、対照試料の水溶性デキサメタシンは、０．６０　
ｍｇ／ｋｇであった。

同じ薬理効果を得るためには、検体試料はそれぞれの１
／１５．１／２０の投与量でよいことが判った。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１で製造した本発明の薬物担体の効果
を表わす。 縦軸は、血中β−シトステリル−β−Ｄ−グルコサイド
の量（血液１ｍｌ当たりの投与量に対する割合（％））
を表わす。 横軸は、投与後の経過時間（時間）を表わす。 ○印線は検体試料を、Ｘ印線はリポソーム製剤の場合を
、・印線は対照試料をそれぞれ表わす。 第２図は、実施例１で製造した本発明の薬物担体の効果
を止血作用を指標として表わす。 縦軸は＋Ｉ＝血時開時間）を表わす。 横軸は、投与したβ−シトステリル−β−Ｄ−グルコザ
イドの量（メｔ　ｇ　７ｋｇ　ｉ、ｖ、）を表わす。 ○印線は検体試料を、・印線は対照試料を、それぞれ表
す。 第３図は、実施例２で製造した本発明の薬物担体の効果
をユビデカレノン血中消失速度を指標として表わす。 縦軸は血中ユビデカレノン濃度（μｇ／ｍｌ）を、横軸
は投与後の経過時間（時間）を表わす。 ○印線は検体試料を、Ｘ印線はリポソーム製剤試料を、
・印線は対照試料を、それぞれ表わす。 第４図は、実施例５で製造した本発明の薬物３ 担体の効果を肉芽貴注による肉芽嚢形成抑制率でみた結
果を表わす。 縦軸ば肉芽嚢形成抑制率（％）を、横軸は投与したデキ
サメタシンの量（ｍｇ／ｋｇ）を表わす。 ○印線は検体試料を、Ｘ印線はデキサメタシンパルミテ
ート−脂質複合体製剤の試料を、・印線は対照試料を、
それぞれ表わす。 出願人　日本新薬株式会社 代理人　弁理士　片間　宏 ４

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）タンパクと脂質とから成る薬物１１体。
2. （２）静脈内に投与することができることを特徴とする
   特許請求の範囲第１項記載の薬物担体。
3. （３）タンパクが血清リポタンパクより得た生体由来の
   アポリポタンパク及びこれに適当な修飾を施したタンパ
   クである特許請求の範囲第１項又は第２項記載の薬物担
   体。
4. （４）脂質がリン脂質、中性脂質又はステロール類であ
   る特許請求の範囲第１項ないし第３項記載の薬物担体。
5. （５）タンパク及び脂質中において薬物が分散状態或い
   は混合ミセル（複合体）状態で存在することを特徴とす
   る特許請求の範囲第１項ないし第４項記載の薬物担体。
6. （６）薬物を化学的に脂質若しくはタンパクに結合させ
   てなることを特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第
   ５項記載の薬物担体。