JPS5990052A - モノクロ−ナル特異抗体を用いたメラノ−マ診断薬 - Google Patents
モノクロ−ナル特異抗体を用いたメラノ−マ診断薬Info
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- JPS5990052A JPS5990052A JP20073082A JP20073082A JPS5990052A JP S5990052 A JPS5990052 A JP S5990052A JP 20073082 A JP20073082 A JP 20073082A JP 20073082 A JP20073082 A JP 20073082A JP S5990052 A JPS5990052 A JP S5990052A
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- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はモノクローナル抗メラノーマ抗体を用いたメラ
ノーマ診断薬に関する。
ノーマ診断薬に関する。
すでに木兄明考らは、メラノーマ細胞表面には動物種居
間に共通して存在するメラノーマ特異抗原が表現されて
いることを、Ｔ細胞レベルで見い出しζいる（ネ・イヂ
ーｒ−−（Ｎａ ｔ ＩＩ ｒ ｃ） ２９４ ；７
４Ｂ〜７５０．１９８１）。この抗原性は、抗体によっ
ても認識される。しかもそれは同系免疫によって１７ら
れた抗体が認識できるものであるためにメラノーマ特異
抗原であることが示された。ずなわら、Ｃ５７ＢＬ／６
マウス由来の８Ｉ１１胞をマイ１７・イシンＣで処理し
たのち、Ｃ５７ＢＬ／６マウス腹腔内に頻回免疫した。
間に共通して存在するメラノーマ特異抗原が表現されて
いることを、Ｔ細胞レベルで見い出しζいる（ネ・イヂ
ーｒ−−（Ｎａ ｔ ＩＩ ｒ ｃ） ２９４ ；７
４Ｂ〜７５０．１９８１）。この抗原性は、抗体によっ
ても認識される。しかもそれは同系免疫によって１７ら
れた抗体が認識できるものであるためにメラノーマ特異
抗原であることが示された。ずなわら、Ｃ５７ＢＬ／６
マウス由来の８Ｉ１１胞をマイ１７・イシンＣで処理し
たのち、Ｃ５７ＢＬ／６マウス腹腔内に頻回免疫した。
この動物の肝細胞をＩ） ３ Ｕ １ ｔエローマｍｌ
ｌ！とボリエヂレングリコールを用いて醐１合さ−Ｕる
ことにより、モノクローリ・ル抗体を作製した。この抗
体は１ｇＭクラスのマウス抗体であり、マウスメラノー
マで免疫し一ζ作った抗体であるにもかかわらず、マウ
スのめならず、ヒｌ−，ハムスターメラノーマと反応し
た。しかし、ヒ１−。
ｌ！とボリエヂレングリコールを用いて醐１合さ−Ｕる
ことにより、モノクローリ・ル抗体を作製した。この抗
体は１ｇＭクラスのマウス抗体であり、マウスメラノー
マで免疫し一ζ作った抗体であるにもかかわらず、マウ
スのめならず、ヒｌ−，ハムスターメラノーマと反応し
た。しかし、ヒ１−。
マウスの由来の神経芽細胞腫、１′１髄腫、線維肉腫。
扁平上皮癌、ｆ！細胞癌、子宮頚部３Ｗ、リンソＡ−マ
など、および正雷組Ａｍ（皮屑、眼、 １Ｉｉ４などを
含む。）とば全（反応しない特異性を（ｒするものであ
ることを見い出し先に出願した。体化′〒°的解４７Ｆ
から、ヒト、マウスメラノーマ抗原は ３１．０００の
う）予歪を持つ糖蛋白であることが判明した。とくにそ
のりＪでもＭ ２５９０抗体が識別している抗原性４Ｊ
アスパラギン結合型糖鎖であり、その末端にシアル酸を
持つ構造を有することが、エキソグリ′：ｌシダービ処
理およびツニカマ・イシン処理を１１な、った実験から
明らかにされた。
など、および正雷組Ａｍ（皮屑、眼、 １Ｉｉ４などを
含む。）とば全（反応しない特異性を（ｒするものであ
ることを見い出し先に出願した。体化′〒°的解４７Ｆ
から、ヒト、マウスメラノーマ抗原は ３１．０００の
う）予歪を持つ糖蛋白であることが判明した。とくにそ
のりＪでもＭ ２５９０抗体が識別している抗原性４Ｊ
アスパラギン結合型糖鎖であり、その末端にシアル酸を
持つ構造を有することが、エキソグリ′：ｌシダービ処
理およびツニカマ・イシン処理を１１な、った実験から
明らかにされた。
般にセック１．Ｊ−ナル抗体は抗原う３了の一つの抗原
決定基しか認識しない。特定の抗原決定基はそれが蛋白
である場合、二つと同しものが同一分子−１−に存在し
ないために、通常一つの抗原分子には−・分子のモノク
ローナル抗体しか結合できない。
決定基しか認識しない。特定の抗原決定基はそれが蛋白
である場合、二つと同しものが同一分子−１−に存在し
ないために、通常一つの抗原分子には−・分子のモノク
ローナル抗体しか結合できない。
ところがＭ ２５９０抗体は糖鎖によって構成される腫
瘍抗原を認識する。すなわち、−抗原分子」二に糖鎖が
多く存在し、そのため−分子の抗原」二に多くの抗体が
結合できることになる。このことはモノクローナル抗体
が持つ特異性の高い反応１（１とともに必然的に診断、
治療薬とし−どの高感度性を期待さ・Ｕる。このように
Ｍ ２５９０抗体は動物メラノーマ細胞とヒトメラノー
マ細胞と等価に反応できるので、動物モデルで実験した
結果は、ヒトに直接応用することが可能である点も考慮
に入れると、理想的なメラノーマ診断剤となることを見
い出し本発明を完成した。特にモノクローナル抗体にア
イソト−プあるいは酵素を結合したイムノアッセイば非
常にすぐれたものになることが期待される。
瘍抗原を認識する。すなわち、−抗原分子」二に糖鎖が
多く存在し、そのため−分子の抗原」二に多くの抗体が
結合できることになる。このことはモノクローナル抗体
が持つ特異性の高い反応１（１とともに必然的に診断、
治療薬とし−どの高感度性を期待さ・Ｕる。このように
Ｍ ２５９０抗体は動物メラノーマ細胞とヒトメラノー
マ細胞と等価に反応できるので、動物モデルで実験した
結果は、ヒトに直接応用することが可能である点も考慮
に入れると、理想的なメラノーマ診断剤となることを見
い出し本発明を完成した。特にモノクローナル抗体にア
イソト−プあるいは酵素を結合したイムノアッセイば非
常にすぐれたものになることが期待される。
本発明ば呻乳頬共通のメラノーマ抗原を認識するモノク
ローナル抗体を含有するヒトメラノー゛７絵断薬で特に
モノクローナル抗体がＭ ２５９０抗１＋である診断薬
である。
ローナル抗体を含有するヒトメラノー゛７絵断薬で特に
モノクローナル抗体がＭ ２５９０抗１＋である診断薬
である。
次に本発明に用いるメラノーマ抗体の々ｒ）ふなもので
あるＭ ２５９０抗体の製造例を参考例として挙げる。
あるＭ ２５９０抗体の製造例を参考例として挙げる。
参考例
（１） マウスへの抗原の感作
培養液ＲＰＭ Ｉ −１６４０（４％牛脂児血清を含む
。
。
）中で１ｘｌＱ ／ｍｌ！マウスメラノーマ独１胞に
１００８ｇ ／ ｍ Ｏ，のマイ１−マ・イシンＣを４
５勺間３’７ ’Ｃの条（２１丁で反応さ・Ｕる。この
マイトマ・イシンＣ処理したｌＸｌ０’個のＢ１６−メ
ラノー７ ｔｌｌｌ胞をＣ５７１３１、／６マウスの腹
腔内に週１回の割合で投り、１０週に亘ってこの免疫を
くり返ず。さらにイ■１胞昌１１合３日前に再び１×１
０ 個のマイＩマ・イシンＣ処理Ｂ１６−メラノーマ細
胞を静注する。さらに３〜４日後に、“７ウスより肝臓
を取り出し７、イ■１胞をばｒン）ばらにし、Ｒ１，）
Ｍ ｌ−１６４０細胞浮遊液をｆｌ Ｚｙ。
１００８ｇ ／ ｍ Ｏ，のマイ１−マ・イシンＣを４
５勺間３’７ ’Ｃの条（２１丁で反応さ・Ｕる。この
マイトマ・イシンＣ処理したｌＸｌ０’個のＢ１６−メ
ラノー７ ｔｌｌｌ胞をＣ５７１３１、／６マウスの腹
腔内に週１回の割合で投り、１０週に亘ってこの免疫を
くり返ず。さらにイ■１胞昌１１合３日前に再び１×１
０ 個のマイＩマ・イシンＣ処理Ｂ１６−メラノーマ細
胞を静注する。さらに３〜４日後に、“７ウスより肝臓
を取り出し７、イ■１胞をばｒン）ばらにし、Ｒ１，）
Ｍ ｌ−１６４０細胞浮遊液をｆｌ Ｚｙ。
（２］ ハ・イブリダイゼーション
ミエローマ細胞Ｐ３Ｕ１ （Ｃｕｒｒ、ｉ’ｏｐ。
Ｍｉ ｃｒｏｂ ｉ ｏ １． Ｉｒｎｒｎｕｎｏ
１．８１． １−７、 １９７１’ｌ） Ｉ ＸＩＯ
個ノＲＰＭ Ｉ −１６４０浮遊液と前記（１）により
調整された肺細胞ｌＸｌ０ＥＩ個のｆｆ！−逆波（場合
によっては両者ともにＩＸＩｏ８個を用いてもよい。ず
なわら、ミエローマ細胞と胛に■１胞の混合比ば１：１
０〜１：１のいずれでもよい）を５０ｍ ｌ！ ０）遠
心管に入れ、室温Ｔ： ４００ Ｘ ｇ 、 １０３３
間遠心する。」二清を完全に除去し、３７℃恒温槽内に
入れる。ピペットの先端で細胞をゆっくりがき混ぜなが
ら、加温した５０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
ｉ液のｌ ｒｎ ｅを、１分間かりてゆっくりと加えて
いく。さらに１分間、同じピベソ１−でがき混ぎる。次
に、加温したＲＰＭＩｉ６４０の２ｍ ｌ！を、２分間
かりてゆっくりとがき混ぜながら加える。さらに、ＲＰ
ＭＴ−１６４０の７ ｒｎ ｊ！を２〜３分間かりて加
える。室温で４００Ｘｇ、Ｈｌう５間遠心する。上清を
除去して、ＲＰ Ｍ Ｉ １６４０１１Ｏ％ＦＣ３１
０ｍ４を加え、軽くかき混ぜる。りＧ穴平底マイクロテ
スｌ−プレー１−に０．１ｍｅずつ細胞浮遊液を分注し
、炭酸ガスふらん器内で培養する。
１．８１． １−７、 １９７１’ｌ） Ｉ ＸＩＯ
個ノＲＰＭ Ｉ −１６４０浮遊液と前記（１）により
調整された肺細胞ｌＸｌ０ＥＩ個のｆｆ！−逆波（場合
によっては両者ともにＩＸＩｏ８個を用いてもよい。ず
なわら、ミエローマ細胞と胛に■１胞の混合比ば１：１
０〜１：１のいずれでもよい）を５０ｍ ｌ！ ０）遠
心管に入れ、室温Ｔ： ４００ Ｘ ｇ 、 １０３３
間遠心する。」二清を完全に除去し、３７℃恒温槽内に
入れる。ピペットの先端で細胞をゆっくりがき混ぜなが
ら、加温した５０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
ｉ液のｌ ｒｎ ｅを、１分間かりてゆっくりと加えて
いく。さらに１分間、同じピベソ１−でがき混ぎる。次
に、加温したＲＰＭＩｉ６４０の２ｍ ｌ！を、２分間
かりてゆっくりとがき混ぜながら加える。さらに、ＲＰ
ＭＴ−１６４０の７ ｒｎ ｊ！を２〜３分間かりて加
える。室温で４００Ｘｇ、Ｈｌう５間遠心する。上清を
除去して、ＲＰ Ｍ Ｉ １６４０１１Ｏ％ＦＣ３１
０ｍ４を加え、軽くかき混ぜる。りＧ穴平底マイクロテ
スｌ−プレー１−に０．１ｍｅずつ細胞浮遊液を分注し
、炭酸ガスふらん器内で培養する。
（３） スクリーニング
培養開始翌日にＱ、ｌｒｒ＋ｊ２の［Ｉ Ａ ′ｒ培養
液を加える。２，３．５，８，１１日後に、各穴の」二
請を半分吸引し、新鮮な１１ Ａ Ｔ培養液を０．１ｒ
ｎβ加える。
液を加える。２，３．５，８，１１日後に、各穴の」二
請を半分吸引し、新鮮な１１ Ａ Ｔ培養液を０．１ｒ
ｎβ加える。
その後は、３〜４ Ｉ」ごとにＩＩ Ｔ培菟液で培地交
換を行・）。
換を行・）。
標的細胞には■８１Ｇマウスメラノーマれ１胞 ■ヒト
メラノーマ細胞 ■Ｃ５７ＢＬ／（ｉ由来ＩＥＬ−４リ
ンフメーマ細胞の３種を用いる。標的細胞５Ｘ１０５１
固と５０μβのハイフ′す１゛−マ培養上Ｙ青（抗体を
含む）とを０℃、５０分間反応さ−Ｕる。この反応は９
６穴マイクロタイタープし・−１・ （グイづチック社
製）」二で行なう。Ｉｎ＋胞を遠心によって洗ｄ１￥後
、５０μβの１２９■でラベルした抗マウス１ｇ抗体（
５００００ｃ ｐ ｍ ／穴）をＯ’ｃ１時間反応さ、
する。よく洗滌したのら、乾燥させ、ガンマ−カウンタ
ー（ダ・イナボード社製）に゛ζ放！ＩＪ活性を測定ず
ろ。
メラノーマ細胞 ■Ｃ５７ＢＬ／（ｉ由来ＩＥＬ−４リ
ンフメーマ細胞の３種を用いる。標的細胞５Ｘ１０５１
固と５０μβのハイフ′す１゛−マ培養上Ｙ青（抗体を
含む）とを０℃、５０分間反応さ−Ｕる。この反応は９
６穴マイクロタイタープし・−１・ （グイづチック社
製）」二で行なう。Ｉｎ＋胞を遠心によって洗ｄ１￥後
、５０μβの１２９■でラベルした抗マウス１ｇ抗体（
５００００ｃ ｐ ｍ ／穴）をＯ’ｃ１時間反応さ、
する。よく洗滌したのら、乾燥させ、ガンマ−カウンタ
ー（ダ・イナボード社製）に゛ζ放！ＩＪ活性を測定ず
ろ。
１′す定は■に反応し、■、■の標的細胞に反応しなか
った抗体を一応マウスノラノーマ特異的抗体としくＭ５
６２抗体）、次のステンブー・進む。■及び■と反応す
るが■と反応しない４）のは種属共通メンノーマ抗原を
認識する抗体（Ｍ ２５９０抗体）としてあつかう。■
、■、■いずれと１）反応しないもの、およびいずれと
も反応したもの４Ｊ非特異抗体として除外した。
った抗体を一応マウスノラノーマ特異的抗体としくＭ５
６２抗体）、次のステンブー・進む。■及び■と反応す
るが■と反応しない４）のは種属共通メンノーマ抗原を
認識する抗体（Ｍ ２５９０抗体）としてあつかう。■
、■、■いずれと１）反応しないもの、およびいずれと
も反応したもの４Ｊ非特異抗体として除外した。
（４） 目的抗体産生細胞のクローニング限界希釈法
（ｌ ｉｍｉ ｔ ｉｎｇ ｄｉｌｕｔｉｏｎ）が使われる。スクリーニング′ζＪ
１）異抗体産生ハイブリ１゛−マ細胞が存在するつ１ル
（ｗｅｌｌ）が↑ｃ１明したら限界希釈法によってクロ
ー・ン化を行な・）。その際には、３０個／２０ｍ ７
！の濃度になるように細胞を調整し、その０．２ｍβづ
つを９６穴平底マイクロタイタープレートに播く。クロ
ーニング５日後にＯ，Ｉｍ／のＩｒＡ培養波を加え、１
２日１投に半分の培地の交換を行う。その後は３〜４０
ごとに培地交換を行なう。
（ｌ ｉｍｉ ｔ ｉｎｇ ｄｉｌｕｔｉｏｎ）が使われる。スクリーニング′ζＪ
１）異抗体産生ハイブリ１゛−マ細胞が存在するつ１ル
（ｗｅｌｌ）が↑ｃ１明したら限界希釈法によってクロ
ー・ン化を行な・）。その際には、３０個／２０ｍ ７
！の濃度になるように細胞を調整し、その０．２ｍβづ
つを９６穴平底マイクロタイタープレートに播く。クロ
ーニング５日後にＯ，Ｉｍ／のＩｒＡ培養波を加え、１
２日１投に半分の培地の交換を行う。その後は３〜４０
ごとに培地交換を行なう。
Ｍ５６２抗体産生細胞の識別名を１）２とし、Ｍ ２５
９０抗体産生細胞の識別名をＩ） 、、とじた。
９０抗体産生細胞の識別名をＩ） 、、とじた。
（５）抗体の精製
それぞれのハイブリドーマ１Ｘ１０８個を（ＩＩ３ Ａ
Ｌ Ｂ ／ Ｃｘ Ｃ５７Ｂ Ｌ ／ ６ ） Ｆ ＋
マウス腹腔内に投与し、抗体を含む腹水を採取した。
Ｌ Ｂ ／ Ｃｘ Ｃ５７Ｂ Ｌ ／ ６ ） Ｆ ＋
マウス腹腔内に投与し、抗体を含む腹水を採取した。
この腹水１０ｍ１ｌを遠心分離後、透析チューブに入れ
、０．００１Ｍリン酸緩衝液（Ｐ）１６．５）で４８時
間透析した。この操作でモノクローナル抗体はすべて沈
頭させることができる。沈澱したモノクローナル抗体は
すべて沈澱させることができる。沈のしたモノクローナ
ル抗体は少量の３％ＮａＣぐ溶液に／’ａ Ｒ’ｌさ−
ｌ、０．１Ｍリン酸食塩緩１１行１１ｐＨ７，２で透析
すると、他の殆どの蛋白質は上清とともに除去できる。
、０．００１Ｍリン酸緩衝液（Ｐ）１６．５）で４８時
間透析した。この操作でモノクローナル抗体はすべて沈
頭させることができる。沈澱したモノクローナル抗体は
すべて沈澱させることができる。沈のしたモノクローナ
ル抗体は少量の３％ＮａＣぐ溶液に／’ａ Ｒ’ｌさ−
ｌ、０．１Ｍリン酸食塩緩１１行１１ｐＨ７，２で透析
すると、他の殆どの蛋白質は上清とともに除去できる。
この操作を２〜３度くり返すことによって、９５９６以
上の純度のモノクローナル抗体を（ｑるご吉ができる。
上の純度のモノクローナル抗体を（ｑるご吉ができる。
Ｍ ２５９０及びＭ５６２抗体の免疫グロブリンクラス
はＩｇＭであり、しかも、ユーグｉコブリン（ｅｕｇｌ
ｏｌ） ｕｌｉｎ）−で あ っ ノこ。
はＩｇＭであり、しかも、ユーグｉコブリン（ｅｕｇｌ
ｏｌ） ｕｌｉｎ）−で あ っ ノこ。
以上の如くしてｉｑられたメラノーマ抗体は溶液状とし
てメラノーマ診１１Ｊｉ 薬としζ用いることができる
。
てメラノーマ診１１Ｊｉ 薬としζ用いることができる
。
次に本発明のメラノーマ診１折薬を用い−Ｃメラノーマ
の診断方法を実施例として説明する。
の診断方法を実施例として説明する。
実施例
（１）同相イムノアッセイ法
２ｍｇ／ｍｊ＋の濃度の精製したＭ ２５９０抗体（等
電沈鱈法により精製）溶液を０．０１ Ｍリン酸食塩緩
１第ｊ液、Ｎ７．２で作製する。抗体溶液６０μｐを９
６穴Ｕ型プレート（グイナテソク社製）に加え、室温で
１時間反応させる。その後、０．５％ウシ血清アルブミ
ン（ＢＳΔ）添加、リン酸食塩緩ｆ＃ｉ （Ｂ Ｓ Ａ
−ＰＢＳ）にて三回洗滌して、プレートに結合しなか
った抗体を除去する。さらにＢＳ八−Ｐ Ｔ３５１００
１７Ｉｌを加えて、室温で１時間反応さ・Ｕ、プレー１
・」二の蛋白反応基をふさぐ（ステップ１）。よく洗滌
したのち、別記した腫瘍抗原抽出液あるいは、癌細胞培
養」二清４０μｌを加え°Ｃ１４℃で４時間反応させる
（ステップ２）、４時間後プレートはＳ Ｔ Ｎ１ｊｔ
ｉｉｊｒ＆ｐＨ７，６（２０ｒｎ Ｍ ｌ・リス、０．
１５Ｍ食塩、 ０．２％窒化ソーダ、５ｍＭＥＤＴΔ
、２ｍＭフェニルメチルスルフメニール スルオラ、（
！−’。
電沈鱈法により精製）溶液を０．０１ Ｍリン酸食塩緩
１第ｊ液、Ｎ７．２で作製する。抗体溶液６０μｐを９
６穴Ｕ型プレート（グイナテソク社製）に加え、室温で
１時間反応させる。その後、０．５％ウシ血清アルブミ
ン（ＢＳΔ）添加、リン酸食塩緩ｆ＃ｉ （Ｂ Ｓ Ａ
−ＰＢＳ）にて三回洗滌して、プレートに結合しなか
った抗体を除去する。さらにＢＳ八−Ｐ Ｔ３５１００
１７Ｉｌを加えて、室温で１時間反応さ・Ｕ、プレー１
・」二の蛋白反応基をふさぐ（ステップ１）。よく洗滌
したのち、別記した腫瘍抗原抽出液あるいは、癌細胞培
養」二清４０μｌを加え°Ｃ１４℃で４時間反応させる
（ステップ２）、４時間後プレートはＳ Ｔ Ｎ１ｊｔ
ｉｉｊｒ＆ｐＨ７，６（２０ｒｎ Ｍ ｌ・リス、０．
１５Ｍ食塩、 ０．２％窒化ソーダ、５ｍＭＥＤＴΔ
、２ｍＭフェニルメチルスルフメニール スルオラ、（
！−’。
１％Ｎ Ｐ−４０を含む）で３回洗滌したのら、５゜Ｉ
Ｉ ＩＩ （＋０．０００ ｃ ｐ ｍ）の１２９１標
識Ｍ ２５９０抗体と反応させた（ステップ３）。４０
″ｃ、１時間反応さ−Ｃたのち、よく洗滌し、ガンマカ
ウンター放射活性を測定した（ステップ４）。この１榮
作を第１図に示す。
Ｉ ＩＩ （＋０．０００ ｃ ｐ ｍ）の１２９１標
識Ｍ ２５９０抗体と反応させた（ステップ３）。４０
″ｃ、１時間反応さ−Ｃたのち、よく洗滌し、ガンマカ
ウンター放射活性を測定した（ステップ４）。この１榮
作を第１図に示す。
〔別記〕腫瘍抗原の細胞あるいは組織からの抽出２×１
０ に相当する１１！！瘍独１胞あるいは１００■重量
相当の外科切除組繊細切片をｉｍｉのＳ Ｔ Ｎ緩衝液
−１７，６と４℃で１時間反応させる。これらはＩＱ、
０００ ｒ ｐ ｍ、 ５分間遠心して上清を得る。
０ に相当する１１！！瘍独１胞あるいは１００■重量
相当の外科切除組繊細切片をｉｍｉのＳ Ｔ Ｎ緩衝液
−１７，６と４℃で１時間反応させる。これらはＩＱ、
０００ ｒ ｐ ｍ、 ５分間遠心して上清を得る。
この上〆ｎ中に癌抗原が抽出される。
また、２×１０ の癌細胞を２４時間４％仔牛血ｌｌ′
１添加ＲＰ Ｍ Ｉ −１６４０で培養し、その−１−
清を用いノ１：。
１添加ＲＰ Ｍ Ｉ −１６４０で培養し、その−１−
清を用いノ１：。
（２）検量線の作製と固相イムノアッセイ法の精度（１
１の別記の要領で、さまざまな数のＣ５７［３１，、／
６メラノーマ（８１６）細胞、あるいはヒトメラノーマ
細胞（Ｐ−３９）から腫瘍抗原を作東ソした。これら抗
原濃度の異なる腫瘍細胞抽出液を（１１に記載した−イ
ムノアッセイ系に加え調べた。その結果は第２図に示す
よりに１０ 個／ｍρの腫ｊｆｉＪＩＩ＋胞に相当す
る抽出液から１／ｌＯ希釈すると、＋０６／ｍ７！濃度
からほぼ直線的にＴ降し、その最低検出限界はＩ（１３
−１０２／ ｍ ７！であった。
１の別記の要領で、さまざまな数のＣ５７［３１，、／
６メラノーマ（８１６）細胞、あるいはヒトメラノーマ
細胞（Ｐ−３９）から腫瘍抗原を作東ソした。これら抗
原濃度の異なる腫瘍細胞抽出液を（１１に記載した−イ
ムノアッセイ系に加え調べた。その結果は第２図に示す
よりに１０ 個／ｍρの腫ｊｆｉＪＩＩ＋胞に相当す
る抽出液から１／ｌＯ希釈すると、＋０６／ｍ７！濃度
からほぼ直線的にＴ降し、その最低検出限界はＩ（１３
−１０２／ ｍ ７！であった。
このことより、この抗体（Ｍ ２５９（１）を用いた固
相イムノアッセイは非密に正確な精度があることを示す
とともに、ごく微量のメラノーマ抗原を検出できること
を示している。
相イムノアッセイは非密に正確な精度があることを示す
とともに、ごく微量のメラノーマ抗原を検出できること
を示している。
（３）固相イムノアッセイの特異性
この方法の特異性を検削するために、３種類のヒトメラ
ノーマ細胞（Ｐ−３６，Ｉ） ３り、 Ｉ）−２２
） 。
ノーマ細胞（Ｐ−３６，Ｉ） ３り、 Ｉ）−２２
） 。
ハムスターメラノーマＲ■胞、２種類のマウスメラノー
マ細胞（Ｂ−１６，３９１） 、 ヒト子宮頚癌（１１
ｅｌａ）、 ヒＩ−メラノーマ患者外ｆ１１Ｊ除片（２
例）、ヒ１−皮膚癌（扁平上皮癌）、基底８■１胞癌。
マ細胞（Ｂ−１６，３９１） 、 ヒト子宮頚癌（１１
ｅｌａ）、 ヒＩ−メラノーマ患者外ｆ１１Ｊ除片（２
例）、ヒ１−皮膚癌（扁平上皮癌）、基底８■１胞癌。
す」除標本などから（１）の方法に従っζ、腫瘍抗原抽
出液を作製した。これらを（１）の方法で固相イムノア
ッセイを行なった。その結果は第３図に示づ゛よ・うに
、ヒト、ハムスター、マウス由来メラノーマ細胞の抽出
液は培養細胞株、外利切除標本を問わず、すべてイムノ
アッセイで検出されたが、ヒＩ・子宮頚癌、扁平上皮癌
、ｆ！細胞癌のようなメラノーマ細胞以外のものは全く
反応しなかった。以上の結果を第３図に示す。この結果
は次のことを示している。
出液を作製した。これらを（１）の方法で固相イムノア
ッセイを行なった。その結果は第３図に示づ゛よ・うに
、ヒト、ハムスター、マウス由来メラノーマ細胞の抽出
液は培養細胞株、外利切除標本を問わず、すべてイムノ
アッセイで検出されたが、ヒＩ・子宮頚癌、扁平上皮癌
、ｆ！細胞癌のようなメラノーマ細胞以外のものは全く
反応しなかった。以上の結果を第３図に示す。この結果
は次のことを示している。
■ 特異的にヒ１−メラノーマを細胞あるいは組織抽出
液を用いて、診断することが可能Ｃある。
液を用いて、診断することが可能Ｃある。
■ Ｍ ２５９０抗体を用いたイムノアッセイは感度が
高く、１０００〜５００１１ｍ存在するヒトメラノーマ
細胞抽出液中のメラノーマ抗原を検出できる。
高く、１０００〜５００１１ｍ存在するヒトメラノーマ
細胞抽出液中のメラノーマ抗原を検出できる。
第１図は本発明の診［新薬を用いてメラノーマを診断す
る操作を示す説明図である。 第２図はラジオイムノ゛ｊ′ソセイによるノラノーマ抗
原の検出を示す図である。 第３図はラジオイムノアッセイによるヒトノラノーマ抗
原の検出を示す図である。 イ丁３ １ ［≧１ ３２２− 第 ２ １；ｊｌ
る操作を示す説明図である。 第２図はラジオイムノ゛ｊ′ソセイによるノラノーマ抗
原の検出を示す図である。 第３図はラジオイムノアッセイによるヒトノラノーマ抗
原の検出を示す図である。 イ丁３ １ ［≧１ ３２２− 第 ２ １；ｊｌ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｊ２ 呻乳頬共通のメラノーマ抗原を認識するモノク
ローナル抗体を含有するヒトメラノーマ診ＬＩＪｉ薬。 ２、 モノクローナル抗体がＭ ２５９０抗体である特
許請求の範囲第１項記載のヒトメラノーマ診断薬。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20073082A JPS5990052A (ja) | 1982-11-16 | 1982-11-16 | モノクロ−ナル特異抗体を用いたメラノ−マ診断薬 |
| GB08330331A GB2133543A (en) | 1982-11-16 | 1983-11-14 | Monoclonal antibody specific to human melanoma |
| DE19833341367 DE3341367A1 (de) | 1982-11-16 | 1983-11-15 | Melanomdiagnosemittel mit gehalt an monoklonem spezifischen antikoerper |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20073082A JPS5990052A (ja) | 1982-11-16 | 1982-11-16 | モノクロ−ナル特異抗体を用いたメラノ−マ診断薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5990052A true JPS5990052A (ja) | 1984-05-24 |
Family
ID=16429228
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20073082A Pending JPS5990052A (ja) | 1982-11-16 | 1982-11-16 | モノクロ−ナル特異抗体を用いたメラノ−マ診断薬 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5990052A (ja) |
| DE (1) | DE3341367A1 (ja) |
| GB (1) | GB2133543A (ja) |
Families Citing this family (7)
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|---|---|---|---|---|
| CA1254846A (en) * | 1982-11-30 | 1989-05-30 | Anthony Albino | Monoclonal antibodies against melanocytes and melanomas |
| EP0529007A1 (en) | 1990-04-18 | 1993-03-03 | The Regents Of The University Of California | A 35kD TUMOR ASSOCIATED PROTEIN ANTIGEN: USES AND METHODS OF DETECTION |
| US5874560A (en) * | 1994-04-22 | 1999-02-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Melanoma antigens and their use in diagnostic and therapeutic methods |
| WO1995029193A2 (en) | 1994-04-22 | 1995-11-02 | The Government Of The United States Of America Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Melanoma antigens |
| US5843648A (en) * | 1995-01-10 | 1998-12-01 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | P15 and tyrosinase melanoma antigens and their use in diagnostic and therapeutic methods |
| US6951917B1 (en) | 1995-09-26 | 2005-10-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | MHC-class II restricted melanoma antigens and their use in therapeutic methods |
| US7501501B2 (en) | 1995-09-26 | 2009-03-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | MHC-Class II restricted melanoma antigens and their use in therapeutic methods |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54143513A (en) * | 1978-04-28 | 1979-11-08 | Wistar Inst | Production of antibody for malignant tumor |
| JPS57179124A (en) * | 1981-04-15 | 1982-11-04 | Sanofi Sa | Anticancer and preparation |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4132769A (en) * | 1974-10-30 | 1979-01-02 | Osther Kurt B | Cancer antigen, cancer therapy, and cancer diagnosis |
| US4146603A (en) * | 1977-02-18 | 1979-03-27 | Research Corporation | Tumor specific glycoproteins and method for detecting tumorigenic cancers |
| CA1157373A (en) * | 1980-01-04 | 1983-11-22 | Harris Busch | Detection of human cancer cells with antibodies to human cancer nucleolar antigen(s) |
| US4295400A (en) * | 1980-03-31 | 1981-10-20 | Baldwin-Korthe Web Controls, Inc. | Web severing device |
| IL60987A0 (en) * | 1980-09-05 | 1980-11-30 | Uni Ramot & Ind Dev Ltd | Detection of breast cancer |
-
1982
- 1982-11-16 JP JP20073082A patent/JPS5990052A/ja active Pending
-
1983
- 1983-11-14 GB GB08330331A patent/GB2133543A/en not_active Withdrawn
- 1983-11-15 DE DE19833341367 patent/DE3341367A1/de not_active Withdrawn
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54143513A (en) * | 1978-04-28 | 1979-11-08 | Wistar Inst | Production of antibody for malignant tumor |
| JPS57179124A (en) * | 1981-04-15 | 1982-11-04 | Sanofi Sa | Anticancer and preparation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3341367A1 (de) | 1984-05-24 |
| GB8330331D0 (en) | 1983-12-21 |
| GB2133543A (en) | 1984-07-25 |
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