JPS5985300A - α−アミラ−ゼ活性測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、共役酵素法を利用するα−アミラーゼ活性測
定試薬に関するものである。

血清、尿、膵液等の体液を対象とするα−アミラーゼ活
性の測定は臨床診断上重要な、ｔＩ義を有しておシ、特
に急性或は慢性の膵炎、膵臓癌、更には流行性耳下腺炎
等の鑑別診断に当っては必須の測定項目となっている。

従来提供されているα−アミラーゼ活性の測定試薬は、
次に示す様な測定原理を利用するものとして分類するこ
とができる。

（１）ヨニドデンプン反応を利用するア！ロクワスチッ
ク法 （２）デンプンよシ生成する還元糖Ｊ１ｋを？ＩＩＩＩ
宇するサツカロジェニック法 （３）色、１合、す、・７カ、ら。遊、１４色力を７１
１□６す。

クロモジェニック法 （４）デンプンによる淘シを？１１Ｊ定するタービドメ
トリック法 これらの方法における使用基質は、デンゾν、その修飾
体、或はデンプンか５誘導されるアミロ−スやアミロペ
クチン等であシ、いずれの場合モ天然のデンプンに頼る
ものである。しかし天然デンプンの場合はその品質、性
状が一定せず、α−アミラーゼ活性７１１！Ｉ定値に対
する信頼性が低くならざるを得ないという欠点があると
共に、ａ−アミラーゼによる嗣切断と測定される特性値
との開の量的間係が不明確であシ、更には測定操作が繁
雑であるという問題もあった。

そこでこれらの欠点を伴わない方法として、共役酵素法
が注目され、次に述べる様な測定方法が考えられている
。

＾デンプン、デキストリン或はオリゴ糖を基質とし、α
−アミラーゼによる鎖切断を行なった後、追随酵素糸と
してα−グルコシダーゼを作用させるととＫよってフラ
グメントからグルコースを遊離サセ、仁のグルコースを
公知の手段によってｊｉｌ定する方法。

（Ｂ）テ°ンプン、テ°キストリン或はオリゴ糖を基質
とし、α−アミラーゼによる鎖切断で生成するマルトー
スを、追随酵素（マルトースホスホリラーゼ）の作用に
よって分解し、生成したグルコース−１−燐酸を更にホ
スホグルコシダーゼのｆＩＴ用によって分解し、ここに
生成したグルコース−６−燐酸の量を、グルコース−６
−陽酸１況水素ｍ、素及び抽ｔｊＪＰ素の仔在下、紫外
ハ１ｓ吸光度測定法によってｎ（ｑ定する方法。

（６）ホスホリラーゼ及びβ−アミラーゼを用いて調製
したリミットデキストリンｆｆ：Ｍ　１、すとし、α−
アミラーゼの作用で生成したフラグメントにマルトデキ
ストリンｙＪｊスホリラーゼを作用させてグルコース−
１−燐酸を遊離せしめ、これを上記（１３）の方法で測
定する方法。

（ハ）カルボキシメチル化旬ンのイ（陥中をｈｌｉｌシ
ｌこチー゛ンフ。

ンを基質とし、α−アミラーゼの作用で生成したフラグ
メントにグルコシダ−ゼを作用させ、ここに生成したグ
ルコースを公知の手段によって測定する方法。

（Ｅ）、Ｐ−二トロフェニル基を還元末縞にグルコシド
結合させたマルトオリゴ糖をノ、（質とし、ａ−アミラ
ーゼによる鎖切断の後、追随酵素としてグルコシダーゼ
を作用させ、ここに生成したｐ−ニトロフェノールを比
色定量する方法。

（Ｉり置換或は非置換フェニル基を還元末端にグルコシ
ド結合させたマルトオリゴ糖を基質とし、α−アミラー
ゼによる鎖切断の後、追随酵素としてグルコシダーゼを
作用させ、こζに遊離したフェノール類に４−アミノア
ンチピリン等の色原体を酸化縮合させ、生成した色素を
比色定ム１する方法。

上記四〜（Ｆ’ｌＤ共役酵共役酵素−ても、天然デンプ
ンを利用するもの（デキストリン、−リミットデキスト
リン或は修飾デンプン辱を基質とする場合を含む）では
、前記１１）〜１４）において述べたのと同様の欠陥が
ある。しかしオリゴ糖自体、若しくはこれの末端基に発
色基（アグリコン）をグルコシド結合させたものを晶質
とする場合は、構造式が明確しζ杷握され且つ高度に精
製されたものを使用するので、天然デンプンの場合に述
べた様な父動がな（、α−アミラーゼによる鎖切断回数
と計測４、！ｆ性値との間の化学輩論的な関係も明確と
なル。

ｉＶ６１ｉ’４度で信頼性の高い結果を得ることができ
る。

この様な観点からすると、（Ａ）、（［υ、　（Ｆ、）
及びαり法が良いことになるが、体液特に１６目′〜及
び尿中にはグルコースやマルトースが存在する為、これ
らを反応中間体として経由する方法（（Ａ）　、　ＣＢ
）及び（Ｉ刃）では、計測特性値が高めＫあられれ、レ
ート法（ＲａｔｅＡ８８＆７　）等の特殊な消去法を用
いてもそれらの影醤を完全に解消することは困φｌであ
る。

従ってこれらを勘案すれば、（Ｅ）法及び鋸）法が残さ
れるが、これらについても次に述べる様な欠陥がある。

即ち（Ｅ）法の場合、体面中に存在するα−アミラーゼ
の至適ｐ　Ｈが、アイソザイムによって異なるものの、
一般的には６．８前後であるのに対し、Ｐ−二トロフェ
ノールの４１０！曲における吸光Ｊ卦。

がｐ　Ｈ６，５〜７．５の範囲で急激に菱化する為、発
色の変動が顕著になるという欠点がある。又（Ｆ）法の
場合α−アミラーゼの反応をＪ１１！続的に】口ｈ′６
Ｉ′Ｆするというレート法には適さないという欠点があ
る。

本発明者等は、これら従来法の欠点に鑑み、−＾質によ
る不女定さがなく、レート法による連続的な反応追跡が
可能であシ、史に吸光月ｒがｐ　１１によつて急激な変
動を見せない様な測定を１Ｊなうことのできるａ−アミ
９−ゼｌ市性１１１１１宇試薬の４’ｊＭ　（１”を目
的として抽々４ｇｌ１″Ｊを行なった結果本発明を完成
するに至った。

上記目的に適う本発明の測定試薬とは、共役酵素法によ
る測定を行なう様に構成されたものに」？いて、カルボ
キシフェニル基（少なくとも１つのオルト位を除く位置
が任意の置換基によって１１Ｈ＾されていてもよい）が
還元末端にα−グルコシド結合してなるマルトオリゴ糖
を裁置成分として含有し、更に追随酵素系として、グル
コシダーゼ、ヒドロキシＶ息香酸水ｄβ化酵紫並びに還
元型補酵素（必要により更にプロトカテキュ酸ジオキシ
ゲナーゼ）を含有するものであることを要旨とするもの
である。

本発明試薬によるα−アミラーゼ活性の測定原理は、ａ
−アミラーゼの作用及びグルコシダーゼの作用によって
遊離されたとドロキシ安息＊酸を、次式で示す様に、ヒ
ト四キｖ安息香酸水酸化６！ｉ、素及び還元型補酵素に
よってジヒドロキシ安息香酸に変換する時の吸光度変化
を追跡することからなるものである。

但し上記化学式において、ヒドロキシ、！人から見て少
なくとも一方のオルト位１１ｔを除く他の位置には、任
意のｉｆｆ換基を有していてもよいものとする。

尚ヒドロキン安息香酸水酸化醇宏としては、ｐ−ヒドロ
キシ安息査酸水り々化酵素やサリチル酸水酸化醇累等が
あシ、これらはいずれも本発明に適用できるが、以下の
説明においては、便冗上Ｐ−ヒドロキシ女息香酸水酸化
…′７４．を用いる場合のｉ、ｌｄ成について述べる。

従ってマルトオリゴ４ｒｊｉにおける還元末端に結合さ
れるカルボキシフェニル基としては％ｐ−カルボキシフ
ェニル基である場合を述べることになる空、該フェニル
ノ、〜における１ｉｉＸ換基の種類、数及び位置が変更
されるときは１、ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の種類
もそれに応じて変更すべきであることはピう迄もない。

この場合用いられるマルトオリゴ勃は１．次の一般式（
Ｉ）で示される様に、還元末端にｐ−カルボキシフェニ
ル基がグルコシド結合してなるものである。

（但しｎ＝２〜１０であシ、マルトオリ、ゴ糖の還元末
端とｐ−カルボキシフェニルｊｆ　トハ、α−及ヒ／又
はβ−グルコシド結合しているものとする） この、！ｔ（’ｌ＆に対し、α−アミラーゼ含有試料を
作用させると、マルトオリゴ糖鎖におけるいずれかのα
−グルコシド結合が切断され、１）−カルボ５キシフエ
ニル＾ｔを有するフラグメントが生成する。

これに苅して迫随醇素であるグルコシダーゼを、作用さ
せると、非遍元末喘側から遂次グルコースを遊Ｎしてい
き、最後に曲成で示されるｈ’＋’覇５の化合物を生成
する。

（但しグルコース車位と１）−カルボキシフェニル基と
は、α−及び／又はβ−グルコシド結合しているものと
する） そしてグルコシド結合がα−結合の場合はα−グルコシ
ダーゼを作用させ、β−結合の場合はβ−グルコシダー
ゼを作用させることにより、ｐ−ヒドロキリ安息香酸を
）ｂｎ　離する。

次いでこのｐ−ヒドロキシ安息香酸に、ｐ−ヒドロキシ
安息杏酔水酸化６７索及び」・よＬ元型補酵素を作用さ
せると、次の反応式によシプロトカテキュ酸が生成する
。　　　　　　　　− １１（１ 州ｊｒｉｐ素　ｆｌｉｌｌｌ＋′素 そしてこの反応を、趙７Ｉｌ；型佃酵緊の吸光用°変化
（ＮＡＩ）ＰＨやＮＡＩＪＨでば８４０ｒｎｎ　）をｙ
ｕ跡することによってα−アミラーゼ活性を測定する。

。 上ｕ１′！が１本発明における共役酵素反応の４ｉａ略
であるが、次に晶質及び追随酵素群についで説明を加え
る。

まずＪ＋ｖ’ｔｌとして用いる物ｒ：Ｉ、即ちマルトオ
リゴ糖のｉ４Ｌ元末端に１）−カルポキシフェニルノ、
（カグリコシド結合した物資〔以下車にＪ１ｇ質（１）
という〕は、ｌ）−ヒドロキシ安息香酸とマルトオリゴ
糖を常法に準じて反応させることによって製造する。例
えば丸養発行、日本化学会編：賽験化学購座第２４　ｑ
、：ン生物化学Ｈの第８０４頁（１９５８年）に記載さ
れた方法に従ってマルトオリゴ糖をアセチル化し、次い
で触媒の存在下ｐ−゛ヒドロキシ安息香酸を飢元性末端
に結合させ、最後に保良アセチル基を脱離、させれば、
上記の基質（Ｉ）を製造することができる。但し該反応
におけるグルコシド結合の形成を。

α−結合又はβ−結合の一方のみ選択的に進行させるこ
とは因噛であるから、基質（Ｉ）として両者を混合状態
で使用することが用具される。従って追随酵素として用
いられるグルコンダーゼについてモ、α−グルコシダー
ゼとβ−グルコシダーゼを併用することが推奨される。

もっとも、上記反応又はその後の処世によって、α−結
合体又はβ−結合体が選択的に得られるならば、夫々に
対応してａ−又はβ−グルコシダーゼを利ハＪずればよ
い。

この様なα−グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼに
ついては、動物起源、４’ｐｔ物起源或は微生物起源等
の如何を問わないが、り、１？に好；ｔ’３なものを説
明すると、σ−グルコシダーゼについては％紙質特異性
の面から見て酵母起りｔｉｔのものがイノ利である。

即ち酵母起源のものは一般にノ＾質特異性が広範囲Ｋ及
びアグリコンによる影衿が少ないと共に、マルトトリオ
シト以下のグルコシドには良く作用するが、マルトテト
ラオシド以上のグルコシドＫ１１１作用しないという特
性があり、アミラーゼ活性の測定という本発明の趣旨に
適合し有利である。−□方β−グルコシダーゼについて
も、同様の趣旨から見て、例えばアーモンド起ｄ１．（
のものがもつとも強＜ｍ奨される。冑α−グルコシダー
ゼとα−グルコシダーゼは、前述の様にしばしば併用さ
れ、仁の場合におけるｌ！ｊｉｌ！合割合は、基質の神
多Ｊ１及び、該基ｌｊＭＶＣおけるグルコシド結合のａ
／β□比等によって異なるが、一般的に言えばα−アミ
ラーゼによって生成したマルトトリオースやｐ−カルボ
キシルフェニル化マルトースを非常に早く分解する結で
あれば十分であシ、通常はα−グルコシダーゼを２０単
位／ｌｎＩ！以上、β−グルコシダーゼを４単位／　ｍ
ｅ以上存在させることが望まれる。

次Ｋｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化ｆＩｔ素七は。

フリビン関与の外部電子供給体要求性−原子酸シ♂添加
酵紫に属し、酵素番号ＥＣＩ。１４．ＩＪｌ、２で１１
＜されるものを含む。該酵素の起源についても格別の限
定を蛍ける訳ではないが、もつとも好ましいのは細菌起
源殊にシュードモナス属に属する菌を起源とするもので
あって、よ）具体的に別τべるなラバ、ンユードモナス
會デスモリテイカ、シュード叱ナス・フルオレッセンス
、シュードモナス響プチダ嶋から得られるものが本発明
に適している。

又同じく追随酵禦糸の一員を４１′青成する還元型補酵
素としては、一般にＮ　’Ａ　Ｉ）　Ｉ’　）ｌやＮ　
Ａ　Ｄ夏夏′晰弔（好んで用いられる。　　　　　□ 本発明に係る測□定□試薬は、原則的に上記）、（質及
び追随酵素群から描成されるが、必要によシプロトカテ
キュ酸ジオキＶゲナーゼを含有させてｆ？（方が良い場
合もある。即ち上述のＰ−ヒドロキシ安息香酸測定系に
おいて、既知ぼのアミラ′−ゼを作用させて種々実験し
ていたとζろ、ｐ−ヒドロキシ安ｉ沓酸水酸化酵素のｌ
公用１ｒｔが多くなるにつれてα−アミラーゼ活性のン
１！！ｌ定＆ｒ：ｉが晶めに現われてくるといり現象に
気がイ・１いた。そこでそのＩＪｌ（囚を神々の角度か
ら検討したところ、ｔμ素反応ｒｃよって生成したプロ
トカテキュＩＩＪが、Ｐ−ヒドロキシ安息香”酸水酸化
酵素に対する脱共役剤（アンカブツー）として作用し、
還元型補酵素の酸化を更に促進させその結果として測定
値を正誤差の方向に誤らせるという・背景を見吊した。

七二でこの（°１１な不都合を解消゛することを目的に
して更に使「１を行ない、プロトカテキ−＋＋７　＝　
８．４−ジオキシゲナ−構成はプロトカテキュ酸−４，
５−ジオキシゲナーゼの様なプロトカテキュ酸ジオキシ
ゲナーゼを作用させてプロトカテキュ酸の影衿を消失さ
・Ｂるという構成に到達した。即ち上記基質及びＪｌｕ
随酵素系からなる測定用組成物に１０トカテキユ「Ｖジ
オキシゲナーゼを添加しておｉｔは、反応系中に生成し
てくるプロトカテキュ酸が消去され、α−アミラーゼ活
性の測定精度が向上するということを見出した。

ところで上記プロトカテキュ酸−３，４−ジオキシゲナ
ーゼとは、プロトカテキュｒ１νを、８−カルボキシ−
シス−シス−ムコン酸（β−カルボＡシムコンｒ＋１　
）　Ｋ変排する酵素であル、非ヘムビに開与の二原子酸
＝体添ハ団Ｆ素に属し、ｔｒｉ　；ｇｇ　ｆｌ報；・：
　ｃ　、　１゜１Ｂ、ｌ、８のことである。彩酊然の作
用をよ下記式で示される。

該酵素としては細菌、ｑ１νにシュードモナスＭ、ノカ
ルジア属の−およびノイロスボアから得られたものが好
ましい。又プロトカテキュｎβ−４，５−ジオキシゲナ
ーゼとはプロトカテキュ酸ｔｌ”　２−ハイドロキシ−
４−カルボキシムコン酸セミアルデヒドに髪換する酵素
であυ、非ヘム鉄関与の二原子酸累添加酵素に属し、酵
禦香号ＥＣ１，１Ｂ。

１１．８のことである。該酵素の作用は下記式で示され
る。

１へ。２′ 該ｅ素としては、細Ｃ１）、特にシュードモナスＨの菌
から得られたものが好ましい。

本発明の測定試薬組成物は上記の如＜　４ｔ（：成され
るが、これを用いてα−アミラーゼ活性の測定を行なう
に当っては、次の様に行なう。即ちｄｌｌＩ定試薬全試
薬な緩釘液に溶解し、該試薬に検体を加え、て混合し、
２５℃〜８７℃に亘る一定の温度条件下で８４ＯｎＩｎ
の波長における吸光度の髪化速度（ΔＥ／鰭）を測定し
、次式によってα−アミラーゼ活性値を算出する。

α−アミラーゼ活性値（単位／１）１ １ＡＪ測定試薬液は上記の如く１液型としても良いが、
時に応じて２液型にすることも口Ｉ能である。

特に基質（Ｉ）が、同大においてｎ（，４の場合は、ｕ
、（薬保イを中にａ−グルコ、シダーゼによって基質（
Ｉ　）が分解されることがＴｏシ、測定誤差の原因とな
るので、この様なことが恐れられる場合には、４．（賀
（Ｄとα−グルコＶダーゼを分けるべく２面型とず　・
ることか望まれる。反応液のｐＨは、６．２〜７．４に
紡’Ｉｆ整するのが良く、特に６．５〜７．１にｃＪｉ
ｌ察することが望まれる。又反応液中に°セける各成分
の好適濃度範囲は次の通シである。

Ｍｉ’ｌｉ　：　０．４〜２０　ｍＭ、好ましくは１．
０〜４．０Ｍ グルコシダーゼ：既述 ヒドロキＶ安息沓酩″水岐化１”１１素：０．０１〜５
０単位／ｌ１ｌｅ、好ましくｔｌｏ、　２〜５　＃ｉ位
／献 還元型補酵素：遊離又はＪｉ４とし？　０．　（１５〜
１．０ｍＭ％ｔ）ｆましくは０．１〜．０．８ｎｔ　Ｍ
プロトカテキ、：Ｌｈｅジオキシゲナー−＊　：　０．
００１〜１０単位／　ｍｆ、好ましくは０．０２〜１単
位／　ｍｅ 本発明のａ−７ミリーゼｌ古１／１ミ泗”４？＃Ａ　Ｊ
ｉ”！は上ｉｆｔ’の様に構成されているので、以下＋
に３　ｆ：Ｊする１、な効果が発揮される。

＋１ｊα−アミラーゼの作用なｊ＋４３１．．５−的に
ｊｌｌ跡することができる。

（２）測定時のＰ　Ｈによる吸光ハシの沈動が少ない。

（３）基質の特性が既知で４５シ、且つ′ａ定１でいる
から、測定値に対する信頼１１：が１＋７１い。

（４）α−アミラーゼによる細切断と計ｒＪ１１１０性
（紫外線吸光度）を、化学＋ｉ論的に正Ｊｉ（ｇに対応
させることができる。

次に本発明の実施例を示す。

ヒトの唾ｒｆ（８１ｍｅ）に、２−オクタツール数滴ト
蒸留７．．ｋ　１　’Ｏｍｅ　’ｆ”　ｓｓ加し、１０
０００　ｒｌ）ｍ−ｅ１５分間ｉＭ心分繭した。その上
澄み４０献に、氷冷アセト：／４０ｒｎｅを添加し、更
に１００　’００’ｒｐｎｔで１５分曲遠心分Ｍした１
、得られた上澄み７−２　ｍｅに１１）び氷冷アセトン
１６８ｍｅを添加し、１０００　（ｌｒｐｍで１５分分
間上分離した。沈殿物を分１．・１Ｆシ、０８０７Ｍの
ダ１ト酸ナトリウム水浴赦を加え、部分Ａ１１ｊ　’Ｊ
”Ｊ　ｌｌン’　”ｔ　ｉ”＋た〔参考文献：　Ｐ、Ｂ
ｅｒｎｆｏｌｄ　ＨＭｅｔｈｏｄｓ　　　ｉｎ　　　Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　　　Ｖｏｌ、　　１ｐ１５１　　
（１９５５）　　Ａｃａｄｅｔｎｉｕ　　　ｐｒｅ９８
　　Ｉｎｃ、　：Ｌ。

υ’　ｊＡｊ例１ 下記浴面を混合ＩＵＩｄ製し、アミラーービｒ１１ｉ　
ＦＪ：　＋１ｉｌｌ定ル（楽とした。

（＃１ダＰｊＡ） ｐ−カルボキシフェニル−β− マルトペンタオシド　　　　２．ＯｎｔＭＭＥＳ緩闘液
ｐ　ＩＩ７．０　　　　　　　５０ＪＩＩＭ〔試薬Ｂ〕 α−グルコシダーゼ　　　　　　５０７（１１ηｉｍｅ
β−ｆ　／Ｌ／　：２　！／　ｐ”　−−Ｌ’　　　　
　　　１０１１５位／ｍｅｐ−ヒドロキシ′ゲ息ｕｊｌ
肢水酸化 酵雰　　　　　　　　　　４単し４ｅ プロトカテキユ「１１８，４−ジオキ シゲナーゼ　　　　　　（）、２単僧４ｅＮ　Ａ　Ｄ　
Ｐ　ＨＱ、５ｎｉＭ Ｎ　＆　Ｃｌ　　　　　　　　　　　　　３＊＋ｑ／ｒ
ｎ１７ＣＢ　ＣＩ　２　　　　　　　　　　　Ｑ、０５
ｍｇ／ｍ／ト　リ　ト　ンＸ−１０００，２９６ 前記賽験例で得だα−アミラーゼ部部分製製品溶液、５
チ牛血ｒ＋７アルブミン亀で２００　Ｏｆｉ：ｊに希釈
した液を原６′Ｉ７とし、別途５憾牛血Ｗ丁アルブミン
液を用いて、５１５．４１５．８１５．２１５’。

１１５．０１５の各希釈系列計を調製した。

まず試料５０μｌと試り一５８ＬＯｍ（’を混合し、８
７、℃で５．分聞予り加湿した後、試鶴’ｉ　Ａ　１．
　Ｏｍｅを添加した。そして８７℃にイ“１コ１゛、’
ｌ’Ｌ、　　８４０ｎ＋ｎ　　における吸光度の開化を
５分間ｊ１１跡ｒｌｌ！Ｉ定した。吸光用’＃Ｊ、０．
５〜１．０分間のラグタイムを１１′ｌいてそのα、怠
激に低下した１、この時のＩｌｌ　Ｎｄ　ｊｔｌｓ分に
おける変化）中度（Δｇ／＋ｗｉｍ）から、次式を用い
てα−アミラーゼ活性を算出した。

αニアミヲーゼ活性（ｕ　／ｌｎｅ　）６．２２　Ｘ　
Ｏ，０５ ＝　　６５９２ＸΔＥ／＝に （但しΔＥ　ｂ／ｗｉｇはｈ（薬の代シに水を添加した
試≧１２５プワンク値で、０．０１１であった。結４１
９１第１表に一括して示す通シであった。

＠１図はこれをグラフ化したものであり、希釈系列値と
α−−アミラーゼｄｉ性１１１★の間には、はぼ完壁な
１直線関保が７められた。

【図面の簡単な説明】

第一は希釈系列値とα−アミラーゼ活性の関係を示すグ
ラフである。 出願人　　東洋紡ＡｊＪｔ株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １１１少なくとも１つのオルト位を除く位１ｄが任意の
   置換基によって置換されていてもよいカルボキンフェニ
   ル基が還元末端にグルコシド結合してなるマルトオリゴ
   糖を基質成分として含有し、史にグルコシダーゼ、ヒド
   ロキシ安息香酸水酸化酵素並びに還元型補酵素を含有−
   するものであることを特徴とするα−アミラ・−ゼ活性
   測定試薬、。 （２）少なくとも１つのオルト位を除（位置が任意の置
   換基によってＩｅｆｆｉ　ｔｍされていてもよいカルボ
   キシフェニル基が還元末端にグルコシド結合してなるマ
   ルトオリゴ軸を基質成分として含有し、更にグルコシダ
   ーゼ、ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素、還元型補酵素並
   びにプロトカテキュ酸ジオキＶゲナーゼを含有するもの
   であることを特徴とするα−アミラーゼ活性測定試薬。