JPS59500498A - １ａ型乳頭腫ウイルスゲノムのＬ１及びＬ２領域由来のＤＮＡ断片 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 乳頭腫ウィルス特にＨＰＶＩａ型の抗原決定基の少取くとも１つを含有するポリ ペプチドをコードするＤＮＡ断片、及賊対応するポリペプチド 本発明ハ、乳頭腫ライ）Ｉ、ｒス（ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒ、ｕｓ）特にＨＰ Ｖｌａ型の抗原決定基の少なくとも１つを含有するポリペプチドをコードするＤ ＮＡ断片に係る。本発明はまた前記の如きポリペプチドの形質転換産物（ｐｒｏ ｄｕｉｔｓ　ｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）に係る。

このような産物は、例えばポリペプチドを共有結合によって担体高分子（ｍａｃ ｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　５ｕｐｐｏｒｔ）に結合させたものであり、免疫原性 を有する。このような免疫原性を有するため、形質転換産物は、生物サンプル中 の乳頭腫ウィルスの存否についての診断手段として、又は乳頭腫ウィルスに対す る免疫を宿主に与え得るワクチンの活性成分として使用され得る。

乳頭腫ウィルスが、ヒトも含めて多数の生物種に感染し得ることは公知である。

これらのウィルスは、良性腫瘍の原因となる。特に上皮にコロニーを形成してイ ボになる。これらの腫瘍は殆んどの場合は退行性であるが、ある場合には悪性゛ 変換が生じ得る。更に、形態学的見地から乳頭腫ウィルスは、例えばＳＶ４０． ＢＫＶ、等の名称で知られるポリオーマウィルス群に属すると考えられていた。

実際、これらの種々のタイプのウィルスは、ヒストンと結合した二重らせんＤＮ Ａを包む二十面体形カプシド構造を共通に有している。組織培養では上皮ｍ胞又 は他の細胞上での乳頭腫ウィルスの培養は不可能であるとされていたが、最近○ 、ＤＡＮＯ３等は１ａ型のヒト乳頭腫ウィルスの完全ゲノムを大腸菌（Ｅｓｃｈ ｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）株中でクローニングすることに成功した（　Ｅ　ｕ ｒ、Ｊ、　３　ｉｏｃｈｅｍ、、　１０９．４５７−４６１（１９８０）　）。

本発明は、この乳頭腫ウィルスのゲノム内の、抗原決定基を含み得るペプチド又 はポリペプチドをコードし得る成る種の配列を発見したことに基くものである。

このため、前記ペプチド又はポリペプチドを、必要な場合には担体高分子と結合 した後に、ワクチンの活性成分として使用し得るようになる。少なくとも前記ペ プチド又はポリペプチドが最小の場合には担体高分子との結合が行なわれる。

この場合注目されるのは、前記配列が、前出のポリオーマウィルスのゲノム内に 含まれる全配列とは全く異なることである。

乳頭腫ウィルスの完全ゲノムの配列解析によれば、前記配列が乳頭腫ウィルスの ゲノムのストランドのうちの唯１つのストランドに担われていることが判明した 。

最も普遍的な定義によれば、本発明のＤＮＡ断片は、適当な微生物中での発現産 物町くヒト乳頭腫ウィルスの抗原決定基の少なくとも１つを含むようなりＮＡ断 片から成る。本発明のＤＮＡ断片の特徴は、このＤＮＡ断片に含まれるヌクレオ チド配列が、乳頭腫ウィルス、例えば１ａ型の乳頭腫ウィルス（ＨＰＶｌａ）の ゲノムのストランドのうちの該ヌクレオチドを含むストランドの領域Ｌ１内又は 領域Ｌ２内又は一部が領域Ｌ１及び一部が領域Ｌ２に含まれているか又はこれら 領域に含まれるヌクレオチド配列に類似（ａｎａｌｏｇｕｅ）　Ｌ／ており、該 ヌクレオチド配列がＨＰＶｌａの構造タンパクをコードし得ることである。

より詳細には、本発明のＤＮＡ断片の特徴は、ＤＮＡ断片が、ウィルスの１つ以 上の構造タンパクをコードし得るか、又は乳頭腫ウィルス特有の抗原決定基の少 なくとも１つを含む配列を該タンパクと共通して有する１つ以上のポリペプチド をコードし得るヌクレオチド配列から構成されており、このヌクレオチド配列は 、乳頭腫ウィルスのゲノムのストランドのうちでこれらのヌクレオチドを含むス トランドの、領域Ｌ１内又は領域Ｌ２内又は一部が領域Ｌ１及び一部が領域Ｌ２ に含まれており、この配列は、必要な場合には、乳頭腫ウィルスのゲノムに由来 し且つ通常は乳頭腫ウィルス内でこのゲノムに結合しているＤＮＡ断片により補 完されており、約１００以下のヌクレオチドを含むことである。

説明し易いように、図面に関して以下に説明する。

−第１８，１ｂ、ＩＣ図は、ＨＰＶｌａのゲノムストランドの１つ、特に５′末 端から対応する３′末端までの配列が解読されるストランドの一部の構造を示す 説明図、 −第２ａ図及び第２ｂ図は、ＨＰＶｌのゲノムの各ストランド内の、ポリペプチ ドとして発現され得る部分の概略説明図、第２Ｃ図は、ウシ乳頭腫ウィルスＢＰ Ｖ１のゲノムの概略説明図、−第３図は、ＨＰＶ１ａ由来の本発明の好ましいＤ ＮＡ断片とＢＰＶｌ型ウシ乳頭腫ウィルスのゲノムの対応する断片との構造の比 較を示す概略説明図である。

一方で第１ａ図、他方で第１ｂ図及び第１ｃ図は、乳頭腫ウィルスＨＰＶ１ａに 担われるゲノムのストランドのうちの１つの領域Ｌ１及びＬ２の構造を示す。こ れらの図はまた、該当するストランドのヌクレオチドが規定する連続トリプレッ トによってコードされるアミノアシル残基を示す。これらのタンパクは、対応す るヌクレオチド配列の別々の解読フェーズ（ｐｈａｓｅｓ　ｄｅｌｅｃｔｕｒｅ 　）に対応する。このことは特に第１ａ図、より詳細には（第１図に図示しない ）５１末端から数えて１８７０番目から１８８１番目のヌクレオチドの処に明ら かに示されている。このストランドの５′末端から対向３′末端に伸びる解読方 向でこのストランドに於ける領域Ｌ１とＬ２との相対位置は第２ａ図を検討する ことより理解されよう。第２ａ図は、特に、予めベクターに挿入された対応する ＤＮＡ断片を用いて適当な微生物の形質転換を行なうとき、発現が生起し得る領 域の分布を示す。

第２ａ図は、５′末端が左側で３′末端が右側にある対応するストランドの可能 な３つの解読フェーズを示す。コドンは１０個ずつのグループとして検査され、 点棒の各々はこれらグループのうち該当解読フェーズで停止コドン（ｃｏｄｏｎ 　ｄ’ａｒｒｅｔ）を含むグループに対応する。縦の点線は、停止コドンを含ま ない後続の各配列中に存在する第一コドンＡＴＧに対応する。４２３７位と５２ ４０位の２つのＥＣｏＲＩ部位は、図の左側に符号３．　２．　１で示す可能な ３つの解読フェーズより得られた配列の配向を分り易くするために示した。上記 の如く第２ａ図から領域Ｌ１とＬ２との相対位置が理解される。

第２ｂ図は、同じ条件下でＨＰＶｌａのゲノムのＤＮＡの相補ストランド（ｂｒ ｉｎ　ｃｏＩＩＤ１６ｍｅｎｔａｉｒｅ）が解読可能であルコトヲ示す。いかな る解読フェーズが予定されるかに関わり無く、対応するストランドのほぼ全体に 亘ってかなりの数の停止コドンが存在することが理解されよう。

前記の如く、本発明は特に領域Ｌ１及び領域Ｌ２に共通なゾーンを含み得るＤＮ Ａ断片に係る。このような状態は、これらの領域の転写操作の際、形質転換細胞 の内部に於いても、２つの領域間で生じ得るスプライス（６ｐｉｓｓｕｒｅ）の 際に現れる。

しかし乍ら、好ましくは本発明は、ＨＰＶｌａの前記領域Ｌ１と共に共通ヌクレ オチド配列を有するＤＮＡ断片に係る。

前記領域Ｌ１とＬ２に含まれた配列のうち乳頭腫ウィルス特にＨＰＶｌａに特有 の抗原決定基を含み得る配列の位置をより特定的に検出するために、それ自体公 知の任意の方法で処理し得る。特に、適当な制限酵素によって又は化学的開裂に よって対応するＤＮＡ配列を断片化し、得られた断片をベクター内に組込み、こ れにより得られた発現を生じさせ得るベクターを用いて適当な微生物を形質転換 し、得られたペプチドを分離し、次いで必要な場合担体高分子と結合させた後、 ペプチドを用いて生体宿主中で抗体産生を誘発する。ＨＰＶ１ａ完全体を中和し 得る抗体を産生じ得る断片も本発明に含まれる。

本発明の好ましいヌクレオチド配列は、式１式％ で示されるペプチド配列をコードするヌクレオチド配列から成このペプチド配列 に限定されるペプチドは、特に、式％式％ で示されるヌクレオチド配列によりコードされる。

このヌクレオチド配列は、第１ｂ図の３１４８位から３１８０位まで伸びるヌク レオチドに対応する。

本発明による別の好ましい断片は、式 ％式％ て示されるペプチド配列をコードする断片を含む。

このペプチド配列に対応するペプチドは特に、式％式％ で示されるヌクレオチド配列によりコードされる。

本発明は勿論、他の乳頭腫ウィルス例えば乳頭腫ウィルスＣＲＰＶ（ワタオウサ ギ乳頭腫ウィルスの略号）又はＢＰＶｌ（ウシの１型孔頭腫ウィルスの略号）の 構造タンパクをコードする全てのＤＮＡ断片に係る。また、これらのＤＮＡ断片 によりコードされるペプチドに係る。これらのペプチドとして特に、前記ウィル スＣＰＲＶ及びＢＰＶＩが担うＤＮＡ配列に対応するペプチドを挙げることがで き、これらのペプチドの特徴はそれぞれ ＣＰＲＶ　：　Ｌ　ｅｕ−ＡＳＤ−Ｑｌｎ−７ｙｒ−ｐｒｏ　−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ 　−Ａ　ｒａ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｐ　ｈｅ　−１ｅｕＢ　ＰＶｌ　：　Ｌｅｕ−Ａ ｓｐ−Ｇ　Ｉｎ　−ｐｈｅ−ｐｒｏ　−Ｌ　ｅｕ−Ｇｌｙ　−Ａ　ｒｇ　−Ａ　 ｒｇ　−ｐ　ｈｅ　−１ｅｕなる配列を有することである。

また、前記に示したものとはヌクレオチド構造が異なるトリプレットを有するＤ ＮＡ配列でも、同一アミノ酸又は″均等の″アミノ酸をコードするならば、本発 明の一部を構成する。ここで“′均等″なる用語は、基本構造のアミノ酸の１つ と置換され得、しかも対応するペプチドの免疫原性を本質的に変化させない全て のアミノ酸を意味する。換言すれば、均等アミノ酸とは、変成ペプチド配列を形 成することができ、得られたペプチド配列が、必要な場合には適当な担体高分子 に結合されてから、ＨＰ　Ｖ　Ｉａの対応する基本ペプチドを中和する能力又は より普遍的には乳頭腫ウィルスを中和する能力を保、持する抗体を、インビボ（ ｉｎ　ＶｉＶＯ）誘発し得るようなアミノ酸を意味する。

これらの均等アミノアシルは、構造の相同性（ｈｏｍｏｌｏｇｉｅ）に基くか、 又は得られた種々のペプチド配列が関与し得る免疫原性交差テスト（ｅｓｓａ！ Ｓ　ｄ’！ｍｍＬｌｎｏｔＪｅｎＩＣ！ｉｅＳ　ＣｒＯ！５５ｅＳ）の結果に基 いて決定し得る。

対応する変成ペプチドの深刻な免疫原性の変化を生じること無く、しばしば行な うことができる可能な置換の例を挙げると、バリン又はイソロイシンによるロイ シンの置換、グルタミン酸によるアスパラギン酸の置換、アスパラギンによるグ ルタミンの置換、リジンによるアルキニンの置換等があり、同じ条件下で逆の置 換も勿論可能である。

これに関して指摘すべきは、特に第３図の検討から明らかな如く、５ｐｖｉ型の ウシ乳頭腫ウィルスゲノム内にＨＰ　Ｖ　Ｉａの対応する配列と成る程度の相同 性を有する配列が存在することである。

実際第３図は、対応する解読コードによる領域Ｌ１の（ＨＰＶ１ａゲノムの５′ 末端から３２４６番目のヌクレオチドから３４７６番目のヌクレオチドまで伸び る）３′末端ゾーンと、ＢＰＶ１ゲノムの対応する領域との間にみられる相同性 を明らかにする。後者の領域は、ＲＯＴＨ８ＴＥＩＮ及びＷＬＩ　（Ｇｅｎ、、 １５，１９８１．１６７−１７６）及び／又はＪ、ＭＥＳＳ　ＩＮＧ等（Ｎ　Ｕ Ｃ＋、△ｃｉｄｓ　Ｒｅｓ。

（１９８１）　９．３０９−３２１＞により記載されたベクターＭ１３と、（第 ２Ｃ図に概略的に示した）ＢＰＶｌのＨｉｎｄｌＩ［部位末端の約１゜ヌクレオ チド手前から始まり且つ巳ｇｌＩＩ両末端によって限定されるＢＰＶ１断片との 間で得られた組換体の配列解析によって定義された。図示のヌクレオチド配列の 向い合った文字間に置かれた点は、該当するヌクレオチドの周一性を強調するた めのものである。各配列中に残された空白部分は、相同の存在を際立たせるため のものである。第３図で考察された断片の内部に含まれる対応配列によってコー ドされた共通ペプチド配列は、実線で囲まれた枠内に示されている。

式 ％式％（］ で示されるペプチドをコードするＤＮＡ断片もまた本発明の特定ＤＮＡ断片に属 する。

また、本発明の範囲に含まれる特定ヌクレオチド断片として勿論、前記ＢＰＶ１ 断片に含まれた断片、特にＴＴＡ　ＧＡＴ　ＣＡＡ　ＴＴＴ　ＣＣＣＴＴＧ　Ｇ ＣＡＡＧＡ　ＡＧＡ　ＴＴＴ　ＴＴＡ。

ＧＣＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡが挙げられる。

更に本発明は勿論、前記に定義した如き条件で均等な全てのＤＮＡ断片に係る。

上記の如き種々のＤＮＡ配列を得るためにも、前記の如きプロセスが使用され得 る。特に、ゲノムを断片化し、対応する適当な断片、即ち前記領域Ｌ１及びＬ２ に含まれる配列に対応するヌクレオチド鎖を含む断片、又はより小さい領域に対 応するが完全ウィルスの特異的抗原決定基を含んだヌクレオチド鎖を含む断片を 回収する。最小断片、特に例に挙げた如き少数のアミノ酸をコードする断片に関 しては、これまでによく知られた方法によって対応するヌクレオチドの化学合成 を利用することも可能である。この場合、得られた配列は、発現に適した微生物 を形質転換し得るベクター内にインサートとして組込まれるべく使用され得る。

ペプチド自体に関する場合、特に少数のアミノアシル残基しか含まないペプチド に関する場合、それ自体公知の化学合成技術を利用し得る。

この場合より詳細にはＨＯＵＢＥＮ−ＷＥＹＬ　”Ｍｅｔｈｏｄｅｍｄｅｒ　Ｑ ｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ　”　（有機化学の方法）、Ｅ。

Ｗ　１ｉｎｓｃｈ編、１５巻−■及びＩＦ、　ＴＨＩ　ＥＭＥ、シュツットガル ト１９７４に記載の均質溶液中の合成モードが利用される。

この合成方法によれば、連続するアミノアシルを所望順序で２つずつ順次縮合す るか、又は複数個のアミノアシル残基を適正順序で含むように予め形成した断片 とアミノアシルとを縮合するか、又は前記の如く予め形成された断片を複数個縮 合する。

但しこの場合には勿論、アミノアシル又は断片が担持する反応性官能基のうちで 、ペプチド結合の形成に正常に関与すべき一方のアミン官能基と他方のカルボキ シル官能基、又は逆に一方のカルボキシル官能基と他方のアミン官能基とを除く 全ての反応性官能基を、特にカルボキシル官能基の活性化後に、予め保護する必 要がある。これは、タンパク合成に於いて十分に公知の方法によって行なわれる 。更に、カルボジイミド型例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ ル）−カルボジイミドの如き従来の結合〈カップリング、　ｃｏｕｐｌａｇｅ） 試薬を用いた結合反応を利用することも可能である。使用されるアミノアシルが 付加的にアミン官能基（例えばリジンの場合）、又は別の酸官能基（例えばグル タミン酸の場合）を有するとき、これらの官能基については、例えばアミン官能 基はカルボベンゾキシ基又はｔ−ブチルオキシカルボニル基によって保護され、 カルボキシル官能基はｔ−ブチルエステル基によって保護されるであろう。他の 全ての反応性官能基の保護についても同様である。例えば、考察されるアミノア シルの１つがＳＨ官能基（例えばシスティン）を含むときはアセトアミドメチル 基又はボルムアミドメチル基を利用し得るであろう。

アミノ酸を１つずつ結合していく漸進的合成の場合には、好マシくはＣ−末端ア ミノ酸と所望配列中の隣接アミノアシルに対応するアミノ酸との縮合によって合 成を開始し、以後同様にして近い順に結合させてＮ−末端アミノ酸に到達させる 。本発明で利用し得る別の好ましい技術としては、Ｒ，Ｄ、ＭＥＲＲＩ　Ｆ　Ｉ 　Ｅ　Ｌ　Ｄ　”５ｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉ ｓ”　（Ｊ　、　Ａｍ。

Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、　４５．２１４９−２１５４）に記載のものがある。

ＭＥＥＲＩＦＩＥＬＤの方法でペプチド鎖を製造するためには、極めて多孔質の ポリマー樹脂が利用される。鎖のＣ−末端第一アミノ酸を該樹脂に固定する。こ のアミノ酸は、カルボキシル基を介して樹脂に固定され、アミン官能基は例えば ｔ−ブチルオキシカルボニル基によって保護される。

Ｃ−末端第一アミノ酸を前記の如く樹脂に固定したら、樹脂を酸で洗浄してアミ ン官能基の保護基を除去する。

アミン官能基の保護基がｔ−ブチルオキシカルボニル基の場合、この保護基は樹 脂をトリフルオロ酢酸で洗浄することによって除去される。

次に、所望配列中でＣ−末端アミノアシル残基がら２番目のアミノアシルを供給 する第２のアミノ酸を、鎖に固定され、たＣ−末端第一アミノ酸の脱保護アミン 官能基と反応させる。好ましくは、この第二アミノ酸のカルボキシル官能基を、 例えばジシクロヘキシルカルボジイミドで活性化し、アミン官能基を例えばｔ− ブチルオキシカルボニルで保護する。

このようにして、所望のペプチド鎖の第一部分、即ち２つのアミノ酸を会んでお り、末端アミン官能基が保護された部分が得られる。前記同様にアミン官能基を 脱保護し、次に、Ｃ−末端第二アミノ酸の付加条件と同様の条件下で第三アミノ アシルの固定処理を行なう。

このように、ペプチド鎖を構成すべきアミノ酸を、樹脂に結合された形成済のペ プチド鎖部分のアミン基に順次固定する。

このアミン基は毎回予め脱保護される。

所望のペプチド鎖全体が形成されると、ペプチド鎖を構成する種々のアミノ酸の 保護基を除去し、例えばフッ化水素酸を用いてペプチドを樹脂から分離する。

本発明は更に、前記の如くペプチド間の（共有結合による）結合（共役、　ｃｏ ｎｊｕｇａｉｓｏｎ　）により得られた産物、及び免疫原性活性成分を構成すべ く使用され得る種類の高分子担体に係る。

このような担体は専門家に十分に公知である。例えば天然担体としては、血清ア ルブミンがある。ワクチンがヒトを対象とするときは、ヒト血清アルブミンが好 ましく、獣医用に動物を対象とするときは動物血清アルブミンが好ましい。更に 天然高分子担体の例として、好ましくは２０，０００を上回る分子量を有するオ バルブミン、破傷風毒素等がある。

更に、合成ポリペプチドの如き合成高分子担体も利用し得る。

例えば必要な場合、ポリアラニン側鎖（アラニル基本単位は右旋性及び／又は左 旋性）を担持するポリリジンが挙げられる。

また、例えばフランス特許出願第７９００８１９号に記載の如き合成鋼をも利用 し得る。

本発明の活性成分は特に、例えば免疫抑制処置の実施に先立って被検者を乳頭腫 ウィルスから保護するために有用である。

重要な用途は、より純粋な血清又は抗体を産生じ、これらを用いてルーチンテス ト、特に膣のスミアテスト（ｅｘａｍｅｎｓ　ｄｅｆｒＯｔｔｉｓ　ｖａｇｒｎ ａｕｘ）又は他の婦人科検診例えば成る種の子宮頚癌の検診の際に使用され得る 乳頭腫ウィルスの診断試薬を製造することである。更に、皮膚科の予防診断テス トにも使用され得る。

また本発明は勿論、前記活性成分が非経口的、経口的又はべつの経路で投与され 得るべく薬剤ベヒクルと組み合わされる全てのワクチン組成物に係る。必要な場 合これらの組成物は、ワクチン成分に対する免疫反応を強化し得るムラミル（ｍ ｕｒａｍｙｌ）−ペプチド型の免疫アジュバントを同時に含有する。

これらの組成物はヒト医薬又は獣医薬として使用され得る。

この場合使用される乳頭腫ウィルスの免疫原性配列は、特に多数のアミノアシル 残基を含む配列の場合には、ワクチンの対象たる種の組織中で優先的にコロニー 形成する乳頭腫ウィルスに由来している。

要約すれば本発明は勿論、適当な微生物中での発現産物がヒト又は動物の乳頭腫 ウィルスの抗原決定基の少なくとも１つを含むような全てのＤＮＡ断片に係る。

本発明のＤＮＡ断片め特徴は、この断片に含まれるヌクレオチド配列が、乳頭腫 ウィルスゲノムのストランドのうちこれらのヌクレオチドを含む１つのストラン ド内の、領域「１に含まれるか又は領域Ｌ２に含まれるか又は領域Ｌ１に一部及 び領域Ｌ２に一部含まれているか、又はこれらの領域に含まれるヌクレオチド配 列に類似しており、これらのヌクレオチド配列が、ウィルスの構造タンパクをコ ードし得るか又は乳頭腫ウィルス特有の抗原決定基の少なくとも１つを含む配列 を前記タンパクと共通して有するポリペプチドをコードし得ることである。

以下の特許請求の範囲は勿論、ＤＮＡ断片と対応するペプチ・ド断片のみでなく 、製造可能な全ての均等物をカバーするものであり、特に本文中に記載された方 針に準拠するが限定はされない。

本発明はまた、前記に挙げた配列以外の、乳頭腫ウィルスのゲノムから抽出され た全てのＤＮＡ配列にも係る。特に配列Ｅ１　（ヌクレオチド５４７３−６９１ ９　）及びＥ２　（ヌクレオチド　６８６３−ｉｅ）（第２ａ図の解読フェーズ １，２）に係る。これらの配列によって発現されるペプチドは、従来の免疫螢光 反応又は免疫酵素反応等により追跡（検診）可能な従来の抗原抗体反応に於いて 、乳頭腫ウィルス（タンパク断片とウィルスＤＮＡとを含む）によって生じた病 巣を検出するために役立つ抗体形成をインビボ誘発し得る。

浄書（内容（二変更なし］ 手続補正書 特許庁長官　若杉　和夫　殿 １、事件の表示　ＰＣＴ／ＦＲ８３１０００６３２、発明の名称　乳！！Ｎｕｌ ｌウィルス特にＨＰＶｉａ型の抗原決定基の少くとも１つを含有する ポリペプチドをコードするＤＮＡ断片、及び、対応するポリペプチド ３、ｍ正をする者 事件との関係　特許出項人 名　称　アンステイテユ・バストウール４、代　理　人　東京都新宿区新宿１丁 目１番１４号　山田ビル（郵便番号１６０）電話（０３）　３５４−８６２３７ 、補正の対象　特許法第１８４条の５第１項の規定による書面中、出頭人の代表 者の欄、図面の翻訳文及び委任状・法人格証明書 ８、補正の内容 （１）特許法第１８４条の５第１項の規定による書面中、出願人の代表者を別紙 の通り補充テる。

（２）Ｍ明な図面の翻訳文を別紙の通り浦充する。

（内容に変更なし） （３）委任状・法人格証明書および翻訳文を別紙の通り浦充する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １．　適当な微生物中での発現産物が乳頭腫ウィルスの抗原決定基の少なくとも １つを含むようなりＮＡ断片であり、前記断片が、ウィルスの１つ以上の構造タ ンパクをコードし得るか又は乳頭腫ウィルス特有の抗原決定基の少なくとも１つ を含む配列を前記タンパクと共通して有する１つ以上のポリペプチドをコードし 得るヌクレオチド配列から構成されており、前記ヌクレオチド配列が、乳頭腫ウ ィルスのゲノムのストランドのうちで該ヌクレオチドを含むストランドの領域Ｌ １内又は領域Ｌ２内又は一部が領域Ｌ１及び一部が領域Ｌ２に含まれており、前 記配列が、必要な場合には、乳頭腫ウィルスのゲノムに由来しており通常は乳頭 腫ウィルス内でゲノムに結合しているＤＮＡ断片により補完されており、且つ前 記配列が約１００以下のヌクレオチドを含むことを特徴とするＤＡＮ断片。 ２、　ヌクレオチド配列が、ヒト乳頭腫ウィルス特に１ａ型（ＨＰＶｌａ）のゲ ノム内特にＨＰＶｌａの領ＭＬＩ内に含まれた配列であるか、又はこれに類似の 配列であることを特徴とする請求の範囲１に記載のＤＮＡ断片。 ３、　ペプチド Ｌ　ｅｕ　−Ａ　ｓｐ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｐ　ｈｅ　−ｐ　ｒｏ−Ｌ　ｅｕ　−Ｑ　 Ｉｙ　−Ａ　ｒｇ−Ｌ　ｙｓ　−ｐ　ｈｅ　−Ｌ　ｅｕ Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ　−Ｌ　ｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒａ−、Ａ ｒｇ−ｐ　ｈｅ”　ｌ　ｅｕ をコードするヌクレオチド配列を含むことを特徴とする請求の範囲１又は２に記 載のＤＮＡ断片。 ４、　ヌクレオチド配列 ＴＴＡ　ＧＡＣＣＡＡ　ＴＴＴ　ＣＣＡ　ＣＴＡ　ＧＧＡＡＧＧ　ＡＡＡ　ＴＴ Ｔ　ＣＴＡ 又はヌクレオチド ＴＴＡ　ＧＡＴ　ＣＡＡ　ＴＴＴ　ＣＣＣＴＴＧ　ＧＧＡＡＧＡ　ＡＧＡ　ＴＴ Ｔ　ＴＴ、へ であることを特徴とする請求の範囲３に記載のＤＮＡ配列。 ５、　ペプチド Ａ　Ｉａ−Ｌ　ｙｓ−Ａ　ｒａ−Ａ　ｒｇ−Ａ　ｒｇ−Ｌ　ｙｓ又はペプチド Ａ　１ａ−Ｌ　ｙｓ−’Ｌ　ｙｓ−Ｌ　ｙＳ−Ｌ　ＶＳ−Ｌ　ＶＳをコードする ヌクレオチド配列を含むことを特徴とする請求の範囲１又は２に記載のＤＮＡ配 列。 ６、　以下の２つのヌクレオチド配列 ＧＣＣＡＡＧ　ＣＧＣＡＧＧ　ＣＧＴ　ＡＡＧ　又はＧＣＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡ　 ＡＡＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡの１つを含むことを特徴とする請求の範囲５に記載のＤ ＮＡ配列。 ７、　請求の範囲１乃至６のいずれかに記載のヌクレオチド断片によってコード されるようなペプチド、特にＬｅｊ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ　−Ｐｈｅ　−Ｐｒｏ− Ｌ　ｅｕ−Ｇ　ＩＶ−Ａｒ（＋　−Ｌｙｓ’−Ｐ　ｈｅ　−Ｌ　ｅｕ ｌ　ｅｕ　−Ａ　５ｐ−Ｑ　Ｉｎ　−ｐ　ｈｅ　−ｐ　ｒｏ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｇ Ｉｙ　−Ａｒｇ−Ａｒｇ　−ｐ　ｈ、ｅ　−Ｌ　ｅｕ Ａ　Ｉａ−Ｌ　ＭＳ−Ａ　ｒＬ−Ａ　ｒｆｌ−Ａ　ｒｆｌ−Ｌ　ＶＳＡ　ｌａ− Ｌｙｓ−１ｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｌ／Ｓ−ｔｌｓ。 ８、　乳頭腫ウィルス特にＨＰＶＩａ型のウィルスに対して活性な抗体の産生を インビボ誘発することが可能であり、請求の範囲１乃至３のいずれかに記載のＤ ＮＡ断片の少なくとも１つ又は請求の範囲１乃至４のいずれかに記載のＤＮＡ配 列の少なくとも１つによってコードされ得るペプチド配列を少なくとも１種類含 んでおり、必要な場合高分子担体に結合されていることを特徴とする免疫原性ペ プチド。 ９、　請求の範囲７に定義されたようなペプチドの少なくとも１つに相当するペ プチド配列を含むことを特徴とする請求の範囲８に記載の免疫原性ペプチド。 １０、請求の範囲８又は９に記載の如き免疫原性ペプチドの１種を免疫原性活性 成分として含むワクチン組成物。 １１、請求の範囲８又は９に記載の免疫原性ペプチドによりインビボ誘発される ような抗体。 １２、乳頭腫ウィルス特にＨＰＶｉａ型のウィルスの発現産物のインビトロ生物 試薬又は診断薬として有用な組成物。