JPS5945896A - Ｌ−トリプトフアンの分離方法 - Google Patents
Ｌ−トリプトフアンの分離方法Info
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- JPS5945896A JPS5945896A JP15404282A JP15404282A JPS5945896A JP S5945896 A JPS5945896 A JP S5945896A JP 15404282 A JP15404282 A JP 15404282A JP 15404282 A JP15404282 A JP 15404282A JP S5945896 A JPS5945896 A JP S5945896A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
プトファンの反応液よ，９Ｔ．−トリプトファンを単離
する方法に関するものである。
する方法に関するものである。
微生物を利用した反応方法では、反応生成物と微生物を
分離することが必要であり、反応液より微生物を除去し
、反応生成物を単離する方法として、従来、いくつかの
方法が知られている。例えば、Ｌ−グルタεン酸醗酵液
に界面活性剤を添加し、加熱するととで凝沈を容易にし
、珪藻土を加え沢別する方法（特公昭３Ｂ−１６４６０
） 、アミノ酸醗酵液などを限外沢過膜で沢過してか
ら晶析単離する方法（特開昭５３−２９９９６ ）など
がある。
分離することが必要であり、反応液より微生物を除去し
、反応生成物を単離する方法として、従来、いくつかの
方法が知られている。例えば、Ｌ−グルタεン酸醗酵液
に界面活性剤を添加し、加熱するととで凝沈を容易にし
、珪藻土を加え沢別する方法（特公昭３Ｂ−１６４６０
） 、アミノ酸醗酵液などを限外沢過膜で沢過してか
ら晶析単離する方法（特開昭５３−２９９９６ ）など
がある。
しかし、これらの方法は工業的には未だ十分に満足でき
る方法とは言い難い。すなわち、界面活性剤を添加する
方法では、微生物は容易に除去できるものの、界面活性
剤を反応生成物と容易に分離させることができず、生成
物中に混入してくる恐れがある。また、限外沢過膜を使
用する方法では、その装置の性質上洗浄に難点があシ、
工業的単離方法とは言えない。
る方法とは言い難い。すなわち、界面活性剤を添加する
方法では、微生物は容易に除去できるものの、界面活性
剤を反応生成物と容易に分離させることができず、生成
物中に混入してくる恐れがある。また、限外沢過膜を使
用する方法では、その装置の性質上洗浄に難点があシ、
工業的単離方法とは言えない。
本発明者らは、Ｌ一トリプトファンの単離法について、
これらの問題を解決すべく鋭意検討した結果、酸性液で
加熱すれば不安定であるとされていたＬ−）リプトファ
ンが、意外なことに微生物を含むＬ−）リプトファン反
応液を鉱酸姉よりｐＨ２〜５の酸性液とした後加熱して
も安定であり、同時に反応に使用した微生物が容易にｒ
別できる大きさに変性凝集し、Ｌ一トリプトファンの溶
解度以下でｒ過することにより容易に微生物を除去して
、Ｌ〜トリプトファンを単離できることを見出し、本発
明の方法を完成するに到った。
これらの問題を解決すべく鋭意検討した結果、酸性液で
加熱すれば不安定であるとされていたＬ−）リプトファ
ンが、意外なことに微生物を含むＬ−）リプトファン反
応液を鉱酸姉よりｐＨ２〜５の酸性液とした後加熱して
も安定であり、同時に反応に使用した微生物が容易にｒ
別できる大きさに変性凝集し、Ｌ一トリプトファンの溶
解度以下でｒ過することにより容易に微生物を除去して
、Ｌ〜トリプトファンを単離できることを見出し、本発
明の方法を完成するに到った。
すなわち、本発明は微生物を利用してＴ、 −１： Ｉ
Ｊブトファンを製造する方法において、Ｌ−トリプトフ
ァンおよび微生物を含有する反応液を鉱酸でｐＨ２〜５
とし、この反応液を加熱処理した後、Ｌ−トリプトファ
ンの溶解度以下でＰ別することを特徴とするＬ−）リプ
トファンの分離方法である。
Ｊブトファンを製造する方法において、Ｌ−トリプトフ
ァンおよび微生物を含有する反応液を鉱酸でｐＨ２〜５
とし、この反応液を加熱処理した後、Ｌ−トリプトファ
ンの溶解度以下でＰ別することを特徴とするＬ−）リプ
トファンの分離方法である。
本発明の方法が適用される微生物を利用して製造しだＴ
、 −） ＩＪブトファン反応液とは、例えば、エシェ
リヒア・コリの存在下、Ｌ−セリンとインドールより合
成されるもの、また、この方法でＬ−セリンのかわりに
ＤＬ−セリンを用いセリンラセマーゼとしてシュードモ
ナス・ブチイータ”（ＭＴ−１０１８２） ！ｆ、たけ
シュードモナス・プンクタータ（Ｍ Ｔ−１０２４３）
を併用して合成されたもの、また、バチルス・ズプチル
スの存在下、アンスラニル酸よシ合成されるもの、アエ
ロバクタ−・アエロバクタの存在下、インドールとピル
ビン酸、アンモニアより合成するものなどがある。
、 −） ＩＪブトファン反応液とは、例えば、エシェ
リヒア・コリの存在下、Ｌ−セリンとインドールより合
成されるもの、また、この方法でＬ−セリンのかわりに
ＤＬ−セリンを用いセリンラセマーゼとしてシュードモ
ナス・ブチイータ”（ＭＴ−１０１８２） ！ｆ、たけ
シュードモナス・プンクタータ（Ｍ Ｔ−１０２４３）
を併用して合成されたもの、また、バチルス・ズプチル
スの存在下、アンスラニル酸よシ合成されるもの、アエ
ロバクタ−・アエロバクタの存在下、インドールとピル
ビン酸、アンモニアより合成するものなどがある。
これ等の製造法で合成されたＬ−）’Ｊブトファンは、
いずれも反応に使用した微生物の懸濁した水溶液中に存
在し、その微生物とＬ−）ＩＪブトファンの分離が従来
きわめて困難で工業上その精製工程にかかるコストが太
きかった。
いずれも反応に使用した微生物の懸濁した水溶液中に存
在し、その微生物とＬ−）ＩＪブトファンの分離が従来
きわめて困難で工業上その精製工程にかかるコストが太
きかった。
また、これらの方法は、反応媒体として有機溶媒を併用
してもよい。このような反応方法の場合、本発明の方法
に適用するに先立って、分液または蒸留等の適切な手段
によシ有機溶媒を除去する。
してもよい。このような反応方法の場合、本発明の方法
に適用するに先立って、分液または蒸留等の適切な手段
によシ有機溶媒を除去する。
本発明の方法において使用される酸は、硫酸、塩酸、燐
酸等の鉱酸である。これらの鉱酸を用いて、、Ｌ−）リ
プトファ／反応液のｐＨを２〜５、好ましくは６〜４に
調整する。
酸等の鉱酸である。これらの鉱酸を用いて、、Ｌ−）リ
プトファ／反応液のｐＨを２〜５、好ましくは６〜４に
調整する。
このｐＨ調整したＬ−トリプトファン反応液を加熱する
。加熱は６０〜１２０℃、好ましくは８０〜１０５℃で
実施する。
。加熱は６０〜１２０℃、好ましくは８０〜１０５℃で
実施する。
このｐＨ調整および加熱処理によって、Ｌ−トリプトフ
ァンは変化することはなく安定に存在し、一方、微生物
は変性して容易にｒ別できる大きさに凝集する。
ァンは変化することはなく安定に存在し、一方、微生物
は変性して容易にｒ別できる大きさに凝集する。
したがって、加熱処理時間はとくに限定されるものでは
々く、微生物が適度に凝集した時点で終了すればよい。
々く、微生物が適度に凝集した時点で終了すればよい。
本発明の方法では、反応液へのＬ−ＭＪブトファンの溶
解を促進させるためにアルコールを溶媒として加えても
よい。アルコールとしては、メタノール、エタノール、
イソプロノくノール等の低級アルコール、とくにイソプ
ロノくノールが好ましい。
解を促進させるためにアルコールを溶媒として加えても
よい。アルコールとしては、メタノール、エタノール、
イソプロノくノール等の低級アルコール、とくにイソプ
ロノくノールが好ましい。
これ等のアルコールは反応液中のアルコール濃度として
７０ｗｔ％以下、好ましくは４０〜６０ｗｔ％で用いれ
ばよい。
７０ｗｔ％以下、好ましくは４０〜６０ｗｔ％で用いれ
ばよい。
アルコールを併用する場合、本発明の方法は水−アルコ
ール混合溶媒中で行なうことになるので、Ｌ−トリプト
ファンぎ有反応液、有機溶媒を反応に使用したときは、
これを除去したＬ−）リプトファン含有反応液に、所要
量のアルコールを添加して本発明の方法を実施する。
ール混合溶媒中で行なうことになるので、Ｌ−トリプト
ファンぎ有反応液、有機溶媒を反応に使用したときは、
これを除去したＬ−）リプトファン含有反応液に、所要
量のアルコールを添加して本発明の方法を実施する。
本発明の方法では一ヒ記の処理後、凝集した微生物とＬ
−）リプトファン水溶液とをｆ別する。このｒ別操作は
Ｌ−ＭＪブトファンの取得率を高めるために、反応液中
のＬ−）リプトファンが溶解している状態、すなわち液
中のＬ−）リプトファン濃度が溶解度以下で実施する。
−）リプトファン水溶液とをｆ別する。このｒ別操作は
Ｌ−ＭＪブトファンの取得率を高めるために、反応液中
のＬ−）リプトファンが溶解している状態、すなわち液
中のＬ−）リプトファン濃度が溶解度以下で実施する。
したがって、通常、Ｌ−トリプトファン溶液を加熱して
熱ｒ過したり、また十分に希釈１−てｅ別する。通常、
作業能率の面から、ｐＨ調整、加熱処理の後、直ちに熱
ｒ過するのが好ましい。
熱ｒ過したり、また十分に希釈１−てｅ別する。通常、
作業能率の面から、ｐＨ調整、加熱処理の後、直ちに熱
ｒ過するのが好ましい。
沢別に際して、活性炭またはシリカ系ｒ過助剤の単独ま
たは混合したものを用いてもよい。
たは混合したものを用いてもよい。
以下、実施例により本発明を説明する。
実施例１
エシェリヒア・コリＭ Ｔ−１０２４２を培地組成Ｉの
培地５ＯＷｌに一白金耳接種し、３０℃にて２０時間振
盪培養した。
培地５ＯＷｌに一白金耳接種し、３０℃にて２０時間振
盪培養した。
培地組成■ 肉エキス １．Ｏｗｔチペプトン
（３，５ｗｔチ 酵母エキス Ｏ，ｊｗｔ％ ＫＨ２Ｐ０． ０．２ ｗｔ％初期ｐＨ７，０ 培養液１ｔを遠心分離して菌体を集め、これをトリプト
ファン シュードモナス・ブチ−ダニＦＯ １２９９６を培地
組成Ｈの培地５０ｍｌに一白金耳接種し、３０℃にて２
０時間振帰培養した。培養液１ｔを遠心分離して菌体を
集め、これをセリン・ラセマーゼの酵素源としだ。
（３，５ｗｔチ 酵母エキス Ｏ，ｊｗｔ％ ＫＨ２Ｐ０． ０．２ ｗｔ％初期ｐＨ７，０ 培養液１ｔを遠心分離して菌体を集め、これをトリプト
ファン シュードモナス・ブチ−ダニＦＯ １２９９６を培地
組成Ｈの培地５０ｍｌに一白金耳接種し、３０℃にて２
０時間振帰培養した。培養液１ｔを遠心分離して菌体を
集め、これをセリン・ラセマーゼの酵素源としだ。
培地組成■ 肉エキス １．ＯＷｔチペプトン
０．５ｗｔ％ Ｎａ０７ ０．５ ｗｔ％ 初期ｐＨ ７０ 攪拌機を備えた３００ｍＡ’フラスコにＤＬ−セリン１
１、３ｆ、硫酸アンモニウム６２、ピリドキサールリン
酸１０ｍ９および水６６グを加えて良くかきまぜる。濃
アンモニア水でｐＨを８５に調整し、エシェリヒア・コ
リ湿潤ｒ塊６．Ｂ？（固形分１７グ）およびシュードモ
ナス・プチーダ湿潤ｒ塊３４１（固形分ｏ．ａｓ ｆ／
）を水に懸濁させ全体の体積を２０ｔｒｔｌとして加
える。
０．５ｗｔ％ Ｎａ０７ ０．５ ｗｔ％ 初期ｐＨ ７０ 攪拌機を備えた３００ｍＡ’フラスコにＤＬ−セリン１
１、３ｆ、硫酸アンモニウム６２、ピリドキサールリン
酸１０ｍ９および水６６グを加えて良くかきまぜる。濃
アンモニア水でｐＨを８５に調整し、エシェリヒア・コ
リ湿潤ｒ塊６．Ｂ？（固形分１７グ）およびシュードモ
ナス・プチーダ湿潤ｒ塊３４１（固形分ｏ．ａｓ ｆ／
）を水に懸濁させ全体の体積を２０ｔｒｔｌとして加
える。
６５℃に保温したのち、インドール１１．５Ｐを溶解し
たトルエン溶液５７．２１を加え６５℃、４８時間反応
させた。反応収率は定量的であった。トルエンを蒸留に
よシ除去し、水を加えて全量を４５０２とし、硫酸でｐ
Ｈを３．５に調整し、活性炭６１を加え、９５〜９８℃
に加熱する。１時間保温（７、Ｌ−）リプトファンが溶
解した状態で同温度で熱時沢過を行なう。このｒ液を濃
縮し、Ｌ−トリプトファン濃度を１０ｗｔ％にする。２
０℃に冷却し、晶出した結晶を沢別する。純度９９５係
のＬ−トリプトファンの結晶が８０％の単離収率（対イ
ンドール）で得られた。
たトルエン溶液５７．２１を加え６５℃、４８時間反応
させた。反応収率は定量的であった。トルエンを蒸留に
よシ除去し、水を加えて全量を４５０２とし、硫酸でｐ
Ｈを３．５に調整し、活性炭６１を加え、９５〜９８℃
に加熱する。１時間保温（７、Ｌ−）リプトファンが溶
解した状態で同温度で熱時沢過を行なう。このｒ液を濃
縮し、Ｌ−トリプトファン濃度を１０ｗｔ％にする。２
０℃に冷却し、晶出した結晶を沢別する。純度９９５係
のＬ−トリプトファンの結晶が８０％の単離収率（対イ
ンドール）で得られた。
実施例２
実施例１と同様にして培養したエシェリヒア・コリ（Ｍ
Ｔ−１０２３２）培養菌体およびシュードモナス・プン
クタータ（ＭＴ−ｉ０２４３）培養菌体を用い水溶媒で
実施例１と同様に反応させた。反応溶液を遠心を過によ
り反応溶液中に析出しているＬ−）’Ｊブトファン結晶
及び反応に使用した菌体濃度を４．ＯＷ優に調整する。
Ｔ−１０２３２）培養菌体およびシュードモナス・プン
クタータ（ＭＴ−ｉ０２４３）培養菌体を用い水溶媒で
実施例１と同様に反応させた。反応溶液を遠心を過によ
り反応溶液中に析出しているＬ−）’Ｊブトファン結晶
及び反応に使用した菌体濃度を４．ＯＷ優に調整する。
つぎにリン酸でｐＨ４０に調整し、活性炭２ｆｉ’及び
セライ） ５４５ （ジョンマンビル社製）２グを添加
し、９５〜９８℃で１時間加熱する。同温度で熱時ｒ過
を実施し、活性炭、セライトおよび凝集菌体をｒ別する
。こ−の沢液を濃縮し、Ｔ，−）リプトファン濃度を１
５ｗｔ％にし２０℃に冷却し、析出した結晶を沢過する
。Ｔ，−）リプトファンの単離収率は８７チ、純度は９
９７係であった。
セライ） ５４５ （ジョンマンビル社製）２グを添加
し、９５〜９８℃で１時間加熱する。同温度で熱時ｒ過
を実施し、活性炭、セライトおよび凝集菌体をｒ別する
。こ−の沢液を濃縮し、Ｔ，−）リプトファン濃度を１
５ｗｔ％にし２０℃に冷却し、析出した結晶を沢過する
。Ｔ，−）リプトファンの単離収率は８７チ、純度は９
９７係であった。
実施例３
実施例２と同様にして得られたＬ−１１ブト７アンおよ
び菌体からなる沢塊を水とイングロビルアルコールを体
積比１：１に混合した溶液に懸濁し、Ｔ，−）リプトフ
ァン濃度を７ｗｔ％に調整する。
び菌体からなる沢塊を水とイングロビルアルコールを体
積比１：１に混合した溶液に懸濁し、Ｔ，−）リプトフ
ァン濃度を７ｗｔ％に調整する。
濃塩酸を加えｐＨを３５とし、活性炭３グを加え８０〜
８４℃で１時間加熱する。同温度で熱時ｒ過し、Ｐ液を
５℃に冷却し、析出した結晶をｒ過する。Ｌ−トリプト
ファン単離の収率は７５％、純度は９８５％であった。
８４℃で１時間加熱する。同温度で熱時ｒ過し、Ｐ液を
５℃に冷却し、析出した結晶をｒ過する。Ｌ−トリプト
ファン単離の収率は７５％、純度は９８５％であった。
実施例４
実施例１と同様にして反応させ、トルエンを除去した反
応溶液を水でうすめＬ−）リプトファン濃度を１ ｗｔ
％にする。硫酸でｐＨを４．０に調整し、室温で２時間
かきまぜＬ−）リプトファンを溶解させる。活性炭３１
およびｒ過助剤としてスタンダード・スーパーセル３グ
を加え、室温で沢過する。ｒ液を濃縮してＬ−）リプト
ファ／の濃度を１０ｗｔ％とじ、５℃まで冷却する。析
出した結晶を沢過する。Ｌ−）リプトファンの単離収率
は７９チ、純度は９８Ｂチであった。
応溶液を水でうすめＬ−）リプトファン濃度を１ ｗｔ
％にする。硫酸でｐＨを４．０に調整し、室温で２時間
かきまぜＬ−）リプトファンを溶解させる。活性炭３１
およびｒ過助剤としてスタンダード・スーパーセル３グ
を加え、室温で沢過する。ｒ液を濃縮してＬ−）リプト
ファ／の濃度を１０ｗｔ％とじ、５℃まで冷却する。析
出した結晶を沢過する。Ｌ−）リプトファンの単離収率
は７９チ、純度は９８Ｂチであった。
特許出願人
三井東圧化学株式会社
０
Claims (1)
- １）微生物を利用してＬ−）リプトファンを製造する方
法において２、Ｌ−）リプトファンおよび微生物を含有
する反応液を鉱酸でｐＨ２〜５とし、ついで加熱処理（
−だ後、Ｌ−トリプトファンの溶解度以下で沢別するこ
とを特徴とするＴ、−トＩＪブトファンの分離方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15404282A JPS5945896A (ja) | 1982-09-06 | 1982-09-06 | Ｌ−トリプトフアンの分離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15404282A JPS5945896A (ja) | 1982-09-06 | 1982-09-06 | Ｌ−トリプトフアンの分離方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5945896A true JPS5945896A (ja) | 1984-03-14 |
| JPH0435156B2 JPH0435156B2 (ja) | 1992-06-10 |
Family
ID=15575644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15404282A Granted JPS5945896A (ja) | 1982-09-06 | 1982-09-06 | Ｌ−トリプトフアンの分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5945896A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61165346U (ja) * | 1985-04-01 | 1986-10-14 | ||
| EP0770676A3 (en) * | 1995-10-23 | 1999-05-19 | Ajinomoto Co., Ltd. | Method for treating fermentation broth |
-
1982
- 1982-09-06 JP JP15404282A patent/JPS5945896A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61165346U (ja) * | 1985-04-01 | 1986-10-14 | ||
| EP0770676A3 (en) * | 1995-10-23 | 1999-05-19 | Ajinomoto Co., Ltd. | Method for treating fermentation broth |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0435156B2 (ja) | 1992-06-10 |
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