JPS60133893A - Ｌ−フエニルアラニンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＬ−フェニルアラニンの改良された製造方法に
関する。より詳細には、本発明はｔ−桂皮酸およびアン
モニウムイオンについてのフェニルアラニンアンモニア
−リアーゼ（ＰＡＬ）−触媒反応ニよるＬ−フェニルア
ラニンの製造における改良に関する。

Ｌ−フェニルアラニンは人間の必須アミノ酸の製品の重
要な成分でｂる。更にＬ−フェニルアラニンは重要な化
学物質、たとえばジペプチド甘味料、アスパルターゼ製
造用出発原料として用いることができる。Ｌ−フェニル
アラニン製造について各種微生物法が知られている。た
とえば、米国特許第３，６６０，２３５号にはプレヴイ
バクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、コリ
ネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅ−ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
、アルトロバクター（Ａｒｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、バ
チＡ／　ス（Ｂａｃｉ　１１ｕａ）およびカンジダ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ）についてのし−フェニルアラニン同族体
−抵抗菌株（ａｎａｌｏｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　５ｔ
ｒａｉｎｓ）によるＬ−フェニルアラニンの製造が記載
されている。プレヴイバクテリウム、コリオ、バクテリ
ウム、アルトロバクターおよびエシェリヒア（Ｅｓｃｈ
ｅｒｌｃｈｌａ）の成る種の菌株のチロシン必須ミュー
タント（突然変異体）による前記アミノ酸の製造方法も
また、知られている（米国特許第３，６５４，０７９号
および同第３゜９０９．３５３号参照）。

フェニルアラニンアンモニアリアーゼＨＬ−７、＋□、
〒４−１ｌｎ番−仕力ｂセ、と１１マ〜ノエーマΔの分
解を触媒する。この酵素反応は可逆的で、１１）、そし
て英国特許第１，４８９，４６８号はＬ−フ・エニルア
ラニンの製造方法を開示しておシ、これはアンモニウム
イオンを伴うｔ−桂皮酸のＰＡＬ触媒反応によりＬ−フ
ェニルアラニンを得る方法を包含している。この反応は
Ｌ−フェニルアラニンの工業的生産によって有用である
ことが知られておシ、従って工業的生産設定に関する全
工程に適合させる必要性は依然として続いている。この
点に関し、特に生物反応（ｂｉｏｒｅａｃｔｉｏｎ）混
合物からし一フェニルアラニンを回収することについて
改良の必要性がある〇 前述の英国特許において、Ｌ−フェニルアラニンは、最
初その等電点（ｐＨ５，５）においてそれを沈殿させる
か、多るいは低ｐＨにおいてＬ−フェニルアラニンをカ
チオン交換樹脂上に吸収させ、引続き高ｐＨにおける水
酸化アンモニウムの溶離によシ回収されている。このＬ
−フェニルアラニンは引続き溶液を加熱することによジ
アンモニウムイオンから解放される。上記特許にはまた
、Ｌ−フェニルアラニンをその場所でメチルエステルに
変換し、そしてそれを塩酸塩として結晶させる工程を含
む回収方法も開示されている。英国特許第１゜４８９．
４６８号に記載されている回収方法は工粟規模の操業に
関して完全な満足を得るに到ってはいない。その等電点
におけるＬ−フェニルアラニンの単純な沈殿は理想収率
および生成物純度を下まわる。イオン交換クロマトグラ
フ法は比較的純粋な生成物を生成することが可能である
が、この方法は大規模操業にとって都合が悪い。

Ｙａｍａｄａ、Ｓ、等による「応用環境微生物学（Ａｐ
ｐｌｉｅｄａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）　Ｊ　ｌ　９８１年１１月、第
７７３〜７７８ページには、アンモニウムイオン中のｔ
−桂皮酸のＰＡＬ−触媒反応によるし一フェニルアラニ
ンの実験室的製造方法が記載されている。この文献中に
記載された方法においてＬ−フェニルアラニンは細胞含
有生物反応混合物から多段工程によシ回収されるが、こ
の多段工程には細胞および固形物質を除去するための遠
心分離、減圧下での上澄液からの過剰アンモニアの除去
、を−桂皮酸を沈殿（次いで沈殿物はい過により除去さ
れた）させるだめのｐＨ１，８への調整、Ｌ−フェニル
アラニンを吸収させるためのカチオン交換クロマトグラ
フ法、および塩基によるし一フェニルアラニンの溶離が
包含されていた。著者等はこの方法を用いて６９チの収
率を報告している。この方法によシ製造されたフェニル
アラニ／は上記したように非常に純粋であったが、カラ
ムクロマトグラフィ一工程は大規模生産に関しては不都
合である。

従って、ＰＡＬ−触媒によるＬ−フェニルアラニンの生
成によシ得られた生物反応混合物からのし一フェニルア
ラニンの回収方法に関する改良の必要性が依然として存
在する。

本発明によれば、を−桂皮酸とアンモニウムイオンとｉ
Ｌ−フェニルアラニン生成条件下に、フェニルアラニン
アンモニアリアーゼの存在下で結合し、そしてこのよう
にして生成したＬ−フェニルアラニンを回収することに
よ、９Ｌ−フェニルアラニンを製造する改良された方法
は、アンモニウム源として炭酸アンモニウムを用いるこ
とを包含している。アンモニウム源としての、この塩の
使用は塩のアニオンおよびカチオン両成分の揮発によシ
これらを生物反応混合物から除去させることができると
いう点で回収工程を非常に容易にするものである。

本発明方法においては、微生物的に生成したフェニルア
ラニンアンモニアリアーゼをｔ−桂皮ｉおよびアンモニ
ウムイオンと接触させてＬ−フェニルアラニンｆ　Ｈ造
スる。フェニルアラニンアンモニアリアーゼは微生物的
細胞含有水性肉汁、それから分離された細胞内に、ある
いは単離された酵素として存在していてもよい。更に全
細胞捷たは単離された酵素は固形支持体上に固定しても
よい。ＰＡＬはＰＡＬ−生成微生物を適切な栄養培地で
培養することによフ生成される。ＰＡＬを生成する微生
物菌株およびこれらの菌株を用いる微生物学的方法は周
矧であり、そしてこれらはたとえば上記英国特許および
Ｙａｍａｄａの論文、更に米国出願第４３２＋１８２号
（出願日：１９８２年１０月１日）、第５４７．＋２’
１　号（出願日：１９８３年１０月３１日）、および第
５４７，１３９　号（出願日：１９８３年１０月３１日
）中に記載されてお９、これらの各々は参考としてここ
に引用するものとする。

酵素反応は一般に基質溶液をＰＡＬと接触させることに
よシ行われる。この発明に先立って基質溶液を典型的に
はｔ−桂皮酸を濃水酸化アンモニウム溶液中に溶解する
ことにより調製しておく。次いで水および鉱酸を添加し
て基質容量およびｐＨを夫々調節しておく。あるいはア
ンモニウムイオンを予め基質溶液にアンモニウム塩、た
とえば塩化アンモニウムの形態で供給しておく。前述の
米国特許第４３２，１８２号はハロゲン化物イオンがフ
ェニルアラニンアンモニアリアーゼに対し有害な影響を
有することを述べておｐ１従って実質的にハロゲンを含
まない基質溶液の使用を教示している。このような訳で
好ましいアンモニウム塩類には、硫酸アンモニウム、硝
酸アンモニウム、くえん酸アンモニウム、酢酸アンモニ
ウムおよびリン酸アンモニウムが包合される。

本発明は基質溶液中のアンモニウムイオン源として炭酸
アンモニウムの使用を伴っている。通常、基質溶液はア
ンモニアを、気体状または水酸化アンモニウムとして、
炭酸アンモニウムと組合ワせて所望の炭酸アンモニウム
濃度を得ることにより調製することができる。基質溶液
を調製するための他の好ましい方法はアンモニア水溶液
中にｔ−桂皮酸を溶解し、次いで所望のｐＨが得られる
まで溶液を介して二酸炭素気体を泡？たてて通気するも
のである。この基質溶液中のアンモニウムの濃度は効果
的には約０．１モル／Ｌ乃至約９．０モルフｔ。

好ましくは約５．０モル／Ｌ乃全約８．０モル／ｌの範
囲に及んでいる。基質溶液もまた、を−桂皮酸を含有し
ている。この溶液中のｔ−桂皮酸の濃度は、酵素触媒反
応が有用な速度で進行するが、その濃度は基質に酵素活
性を抑制させる程高くはならないように制御される。通
常、を−桂皮酸の濃度は約５乃至約２５１／ｌ、好まし
くは約１０乃至約２０　ｔ／ｌの範囲に及んでいる。ｐ
ＨはＰＡＬ触媒を基質溶液と接触させるとき、フェニル
アラニン生成条件が維持されるように制御される。この
ｐＦＩは効果的には約９乃至１１、好１しくけ約１０．
４乃至１０．８の範囲である。を−桂皮酸の可成りの量
をＬ−フェニルアラニンに転化するに足る時間にわた５
　ＰＡＬを基質溶液と接触させた後、Ｌ−フェニルアラ
ニンは回収および精製することができる。

基質溶液のｐＨにおいて、を−桂皮酸およびＬ−フェニ
ルアラニンの両者は可溶である。従って、細胞およびそ
の固形物は遠心分離寸たは濾過により除去して透明な液
体を得ることができる。次いで、この溶液は、アンモニ
アならびに基質溶液に最初添加された炭酸アンモニウム
とアンモニアかう生じた二酸化炭素を揮発させることに
より都合良く脱塩することができる。揮発により溶液か
らこれらのイオンを除去する能力が炭酸アンモニウムを
アンモニウム源として用いることの主要利点でおる。本
発明の別の重要な効果はアンモニアおよび炭酸アンモニ
ウムが再使用のために回収可能であることである。これ
ら化学物質の回収は本方法の全経済的効率を向上させる
と共にこれら物質の環境中への放出を最小とするもので
ある。脱塩操作は通常、透明溶液を、炭酸アンモニウム
の揮発を容易とする温度に加熱することによシ行われる
。

反応容器内の圧力によって約１０乃至１２０℃、好まし
くは約４０乃至６０℃の範囲に及ぶ温度をこの目的のた
めに利用することができる。真空蒸発、空気ストリッピ
ング、または蒸気ストリッピングは炭酸アンモニウムの
アンモニアと二酸化炭素への揮発を有効に加速すること
ができる。温度約４０℃乃至６０℃における真空蒸発は
好ましい技法である。特に好ましい方法は絶対圧約１０
０ｍｍＨｆで、約５０℃の温度に溶液を加熱し、そして
揮発によりアンモニアおよび二酸化炭素を除去するとい
うものである。最初にアンモニアガスが放出され、アン
モニア除去の結果溶液のｐＨは低下する。ｐＩ（が成る
点に達すると、二酸化炭素が揮発し始め、これはｐＨの
低下を相殺する。この方法を用いれば、所望によシ浴液
から本質的に全アンモニアおよび二酸化炭素を有効に除
去することが可能であｐｌそしてこれらのガスは蒸気の
凝縮によシ回収することができる。

揮発による溶液からの塩の除去は、得られた塩を含まな
い溶液を濃縮して更にＬ−フェニルアラニンを高収率で
結晶させることを可能にする。

Ｌ−フェニルアラニンの結晶化は溶液を、たとえば約１
０℃乃至約１２０℃の温度で、Ｌ−フェニルアラニン濃
度が約７５乃至約３００１／ｌ、好ましくは約１５０乃
至約２００　？／ｌとなるまで蒸発させることにより達
成される。好ましい方法は、望ましいＬ−フェニルアラ
ニン濃度が得られるまで溶液を減圧において温度約２０
℃乃至約７０℃で蒸発させるものである。この蒸発の間
、アルカリ性ｐＨが維持されて溶液中に残留する如何な
るｔ−桂皮酸の沈殿も回避し、かつＬ−フェニルアラニ
ンの収率をも最大とするものである。このｐＨは通常約
６乃至９、好ましくは約７．０〜８．５の範囲に及ぶも
のである。次に得られたＬ−フェニルア・ラニンスラリ
ーを、Ｌ−フェニルアラニンの実質的な結晶化を生ずる
温度に徐々に冷却する。溶液は好ましくは約−５℃乃至
約２５℃の温度に冷却する。得られたし一フェニルアラ
ニン結晶は次いで、たとえば濾過または遠心分離によっ
て回収し、冷水で洗浄し、かつ乾燥することができる。

結晶の第２回目の収量は、所望により母液を更に濃縮し
、かつ冷却することにより回収することが可能である。

母液中に残存する如何なるｔ−桂皮酸も酸性化および沈
殿により回収することができ、そしてこのｔ−桂皮酸は
生物反応器へ有利に再循環される。

本発明の別の実施態様において、Ｌ−フェニルアラニン
の回収に先立って反応混合物中の凡ゆるｔ−桂皮酸を除
去および回収することが時により都合がよい。

Ｌ−フェニルアラニンの沈殿に先立って脱塩溶液を強鉱
酸、たとえば硫酸または塩酸によ、６ｔ−桂皮酸沈殿ｐ
Ｈに酸性化することが有利である。このようなｐＨは通
常約１．０乃至約３．０、好ましくは約１．５乃至２．
５の範囲に及んでいる。を−桂皮酸の実質的に定量的な
沈殿は浴液を約−５℃乃至約２５℃、好ましくは約０℃
乃至５℃の温度に冷却することによシ達成することがで
きる。次に沈殿した桂皮酸は濾過または遠心分離により
回収することができ、また所望によシ再使用することも
可能である。

得られた溶液は次いで、たとえば減圧下の蒸発によって
、比較的高いし一フェニルアラニン濃度が達成される捷
で濃縮される。所望の濃度というのは引続く結晶化に対
し溶液中に存在するＬ−フェニルアラニンの可成シの沈
殿を生ずるというものである。好ましくはＬ−フェニル
アラニンの実質的に定量的な沈殿が達成される。この目
標を達成するために、フェニルアラニン濃度は約２５乃
至約１５０９／ｌ、好ましくけ約５０乃至１５０　Ｖｔ
の範囲にある。

この溶液からのＬ−フェニルアラニンの結晶化は塩基を
用いてフェニルアラニンの略等電点に溶液のｐＨを調整
するごとにょシ有利に行われる。好ましくはアンモニア
または水酸化アンモニウムがこのｐＨ調整のために用い
られる。このｐＨは通常３．５乃至約６．５の範囲に及
んでいる。このｐＨ調整の間、この溶液を、ｐＨ調整中
の溶液内にＬ−フェニルアラニンを残留させる温度に加
熱することが好ましい。たとえば、約４０℃乃至約１０
０℃の温度を用いることができる。この溶液の開通的な
冷却が高収率のし一フェニルアラニンの結晶化をもたら
す。実質的に定量的な沈殿は約−５℃乃至約＋２５℃の
温度に冷却することによシ達成することができる。次い
でＬ−フェニルアラニン結晶をい過または遠心分離によ
シ回収し、冷水で洗浄し、ついで乾燥することができる
。

本発明の方法は特に大規模な工業的操業に適しているこ
とが判明している。この方法は高純度のＬ−フェニルア
ラニン結晶を好１ｔ７量で得るものである。

本発明を更に下記の実施例により例示するが、これらは
限定を意図するものではない。

実施例Ｉ 本実施例は本発明方法に従ってパイオリアクション培地
からＬ−フェニルアラニンを回収する方法を提示するも
のである。生物反応培地はＰＡＬ　−含有ロードトルラ
・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｒｕｂｒａ）細胞
の存在下、を−桂皮酸をアンモニアと反応させることに
よシ得た。酵素基質溶液はｔ−桂皮酸をアンモニア水溶
液中に溶解し、二酸化炭素を用いてｐＨを１０６４乃至
１０．８に調節することによシ調製した。最終反応容量
は１２３６／１．で、合計５１．９１２ＫｇのＬ−フェ
ニルアラニン（４２，０ｔ／ｌ）を含有していた。

この反応混合物は温度１０℃〜１５℃に冷却してアンモ
ニア損失を最小とし、かつＬ−フェニルアラニンの分解
を抑制した。混合物は遠心分離し、次いで圧力葉状濾過
器を介して濾過し、細胞を除去した。この時点で、い液
（１１９０ｔ）はフェニルアラニン濃度３８．２　Ｖｔ
を有していた。このｐ液を２５″ＨＶ（約６３５朔ｎｒ
）の減圧下で、４８５ｔに濃縮されるまで４０℃に加熱
した。アンモニアおよび二酸化炭素は、このようにして
溶液から除去され、かつ蒸気の凝縮により回収された。

得られた濃縮溶液のｐＨは約９．５で、Ｌ−フェニルア
ラニン濃度は８３．１　？／ｌであった。濃縮および塩
除去の間に溶液中に若干の粒状物質が生成した。

この粒状物質は次の工程に先立って圧力葉状濾過器を介
して濾過により除去した。透明濃縮物を再び減圧下（２
５”ｎｒ）で４０℃に加熱し、かつ容量２４０ｔに蒸発
した。このｐＨを８．７に調整し、かつこの濃縮物を５
℃に冷却した。Ｌ−フェニルアラニン結晶を遠心分離に
よシ回収し、そして冷水で洗浄した。当初、反応器中に
存在したし一フェニルアラニンの約５３チが略純粋な結
晶の形態で回収された。更に２５％のＬ−フェニルアラ
ニンが母液中に存在し、そして所望によりこの物質の一
部を結晶の第２の収量中に回収することができた。

実施例■ 実施例Ｉの手順を全ての本質的な詳細にわたシ反覆した
。当初の反応混合物容量ｕ１２４５ｔであシ、混合物は
フェニルアラニン濃度３９　ＶＬ　Ｖｔ有していた。全
ｉ　３８　ＫｐのＬ−フェニルアラニン（７８，３％）
が、濃縮され、脱塩された溶液から回収された結晶の第
１バツチから回収された。フェニルアラニン結晶化によ
シ得られた母液はＬ−フェニルアラニンｃ＋、０Ｋｒ（
１８，５％　）を含んでおり、そしてこれは次の醗酵に
ＰＡＬ−誘導質として再循環された。更に母液はｔ−桂
皮酸１６．５Ｋｖを含有しており、これもまた引続く生
物反応に再循＠された。

実施例ＩＩＩ 本実施例は本発明の実施態様による生物反応混合物から
Ｌ−フェニルアラニンを回収する方法を説明するもので
あるが、この場合を一桂皮酸はＬ−フェニルアラニンの
沈殿に先立って回収される。

ＰＡＬ−含有Ｒ，ルブラ細胞の存在下、を−桂皮酸をア
ンモニアと反応させることにより調製された生物反応混
合物を遠心分離および濾過して細胞を除去した。遠心分
離以前に混合物はｐ）Ｉｌｏ、５２、温度３４℃、そし
て容量１０００ｔを有していた。

この混合物はＬ−フェニルアラニン２１．０ｆ／ｌおよ
びｔ−桂皮酸１５．３　？／ｌを含有していた。

この反応混合物を遠心分離し、かつ濾過して細胞を除去
し、そしてこれを加熱および撹拌装置を備えた容器に移
した。透明溶液を９０℃に加熱し、そして空気で散布し
た。アンモニアおよび炭酸アンモニウムは空気を凝縮さ
せることにより回収した。空気散布はその容量が約３５
０〜３７５ｔとナシ、カつＬ−フェニルアラニンの濃度
が７０〜８０　？／ｌとなるまで継続した。次に、この
濃縮物を別の容器に移し、ここで５０％Ｈ２Ｓ０Ｉｌを
用いてｐＨを２．０〜２，１に調節した。酸性化した溶
液は０℃〜ｉｏ℃に冷却し、そして４時間保持した。得
られたｔ−桂皮酸結晶は遠心分離によりｉ液から除去さ
れた。母液を他の容器に移し、かつ１時間、２３〜２４
℃に保持し、そして濾過助剤８　Ｋｑを添加した。濾過
助剤および残留を一桂皮酸をフィルタープレスを介して
濾過することによシ除去した。

ろ液（含洗浄溶液）の容量は２７０ｔであり、を−桂皮
Ｈ１，’８８　ｔ／ＬおよびＬ−フェニルアラニン５９
．５ｔ／ｌｆｇ含有していた。このｐ液を２個の容器に
均等に移し、そこで２９％アンモニア水を用いてｐＨを
３．５〜３．６に調節し、そしてこの溶液を６０〜７０
℃に加熱した。減圧（１７５■Ｈｔ　）を適用して、そ
の容量を蒸発させ、Ｌ−フェニルアラニン濃度を２００
　ｔ／ｌとした。濃縮した混合物は１０℃／時間の割合
で１０℃未満に冷却し、かつその温度に４時間保持した
。得られたし一フェニルアラニン結晶は遠心分離によシ
除去され、冷脱イオン水で洗浄され、かつ乾燥された。

母液および洗浄溶液は別の回収実験からの対応する溶液
と共にプールし、そして第２の収量結晶を上記したよう
な混合物の濃縮および冷却によシ回収した。

第１の収量結晶に関する工程から得られた収率は約７０
％であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （ｌｉｔ−ａ皮酸とアンモニウムイオンとをＬ−フェニ
   ルアラニン生成条件下に、フェニルアラニンアンモニア
   リアーゼの存在下で結合させ、ついで生成された生物反
   応混合物からＬ−フェニルアラニンを回収することによ
   りＬ−フェニルアラニ／を製造する方法において、アン
   モニウム源トシて炭酸アンモニウムを使用することを特
   徴とする方法。 （２）Ｌ−フェニルアラニンの回収が揮発によりアンモ
   ニウムおよび炭酸塩イオンを除去する工程を包含してい
   る特許請求の範囲第１項記載の方法。 （３）　アンモニウムおよび炭酸塩イオンの揮発が蒸発
   、空気散布または水蒸気蒸留によシ達成される特許請求
   の範囲第２項記載の方法。 （４）　アンモニアおよび炭酸アンモニウムが、揮とに
   よシ再使用のために回収される特許請求の範囲第３項記
   載の方法。 （５）揮発が蒸発または空気散布により約１０℃乃至約
   １２０℃の温度で行われる特許請求の範囲第３項記載の
   方法。 （６）揮発が減圧下で、温度約４０℃乃至約６０℃にお
   いて蒸発により行われる特許請求の範囲第５項記載の方
   法。 ＋７）　（ａ）　上記生物反応混合物から固形分を除去
   して透明溶液を生成する工程、 （ｂ）　揮発によシ上記透明溶液からアンモニウムおよ
   び炭酸塩イオンを除去して脱塩浴液を生成する工程、 （Ｃ）　上記脱塩溶液のｐＨを約６乃至約９に調整する
   工程、 （ｄ）　上記脱塩溶液を、Ｌ−フェニルアラニンの濃度
   が約７５　？／を乃至約３００　Ｖｔの範囲となるまで
   蒸発して濃縮物を生成する工程、（ｅ）　濃縮物１Ｌ−
   フェニルアラニン沈殿温度成する工程、および （ｆ）　Ｌ−フェニルアラニン結晶をＬ−フェニルアラ
   ニンスラリーから除去する工程 を含んで成る方法によってＬ−フェニルアラニンを回収
   する特許請求の範囲第１項記載の方法。 （９）工程（ｂ）の揮発が減圧下で温度約４０℃乃至約
   ６０℃において蒸発にょシ行われる特許請求の範囲第７
   項記載の方法。 α０）工程（ｅ）において、ｐＨが約７．０乃至約８．
   ５の範囲に調整される特許請求の範囲第８項記載の方法
   ０ （ｉｌｌ　工程（ｄ）において、上記透明溶液が減圧下
   で温度約４０℃乃至約６０℃において蒸発され、かつ蒸
   発を、Ｌ−フェニルアラニン濃度が約１５０？／１乃至
   約２００　？／ｌの範囲となるまで継続する特許請求の
   範囲第８項記載の方法。 （１２工程（ｅ）において、上記濃縮物が温度約−５℃
   乃至約２５℃に冷却される特許請求の範囲第１１項記載
   の方法。 ｆ１３）　（ａ）　上記生物反応混合物から固形分を除
   去して透明溶液を生成する工程、 （ｂ）　揮発により上記透明溶液からアンモニウムおよ
   び炭酸塩イオンを除去して、脱塩溶液を生成する工程、 （ｅ）　上記脱塩溶液を、Ｌ−フェニルアラニンが溶液
   中に残存する程度に十分に低い酸性ｔ−桂皮酸沈殿ｐＨ
   に酸性化し、かつ沈殿したｔ−桂皮酸を除去してｔ−桂
   皮酸塩を含有しない透明溶液を生成する工程、 （ｄ）　ｐ）ＩＬ−フェニルアラニン−沈殿ｐｌ（に調
   整し、かつ溶液をＬ−フェニルアラニン沈殿温度に冷却
   することによりを一桂皮酸塩を含有しない透明溶液から
   し一フェニルアラニンを結晶化する工程、および （ｅ）それらの母液からし一フェニルアラニン結晶を散
   布する工程 を含んで成る方法によってＬ−フェニルアラニ／を回収
   する特許請求の範囲第１項記載の方法。 α滲　工程（ｂ）の揮発が温度約１０℃乃至約１２０℃
   における蒸発または空気散布によシ達成される特許請求
   の範囲第１３項記載の方法。 （ハ）工程（ｂ）の揮発が温度約４０℃乃至約６０℃に
   おける蒸発により達成される特許請求の範囲第１３項記
   載の方法。 （１６１工程（ｅ）において、を−桂皮酸沈殿ｐＨは約
   １乃至約３の範囲に及び、一方工程（ｄ）において、Ｌ
   −フェニルアラニン沈殿ｐＨは約３．５乃至約６．５に
   及んでいる特許請求の範囲第１４項記載の方法。 １１７）　Ｌ−フェニルアラニン沈殿温度が約−５℃乃
   至約２５℃に及ぶ特許請求の範囲第１６項記載の方法。