JPS59219257A - 新規なペプチド誘導体とその製造方法並びにエラスタ−ゼ阻害剤としてのその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ”う７チ７は周知′）１うに・を椎を形成す６組　　　
。

織の弾性繊維状蛋白質であり、血管壁、皮ふ、肺、軟骨
、靭帯その他の組織内に存在している。エラスチンは生
物の最も強力な蛋白質である。七の反対に、成る病的状
態の下では、また一般に老化の過程において、工、ラス
チンの、多い組織例えば血管壁及び真皮のエラスチンの
劣化が急速に進行する　　　□（Ｌ、　Ｒｏｂｅｒｔ、
　”Ｐｒ４ｃｉｓ　ｄｅ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｅ　ｃ
ｕｔａｎ６ｅ”。

５ｏｕｓ　　ｌａ　　ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ　　ｄｅ　　
Ｊ、ＭＥＹＮＡＤＩＥＲｅｄ。

Ｐｏｒｔｅ　Ｖｅｒｔｅ　（１９ｇ０）、　Ｉ）　／３
！ｒ　−／７３参照）。

いくつかのプロテアーゼのみがエラスチンに作用するこ
とができ、これらのプロテアーゼはエラスターゼ又はエ
ラスターゼ型プロテアーゼと呼ばれている。これらの酵
素は、膵エラスターゼ、並びに細胞エラスターゼ；白血
球エラスターゼ及び血小板エラスターゼ、マクロファー
ジエラスターゼ、繊維芽細胞及び平滑な動脈筋肉細胞エ
ラスタ、−ゼである。

これらの酵素の活動は、前記の器官及び組織のエラスチ
ンを劣化させ、動脈硬化症、肺気腫、関節炎、糖尿病な
どの病気の悪化を早めると共に、生物の結合組織の老化
を促進する。

エラスターゼの活動は、組織分泌物例えば気管支分泌物
内及び血漿内に内在する天然の阻害物質例えばα−／−
アンチトリプシン及びα−コーマクログロブリンによっ
て制御され調節される（例えばＨＯＲＮＥＢ　ＦＪｃＫ
ほか、−ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｅｌａｓｔｉｃｔｉｓ
ｓｕｅ　ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｅｌａｓｔａ
ｓｅ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”。

ＤＥＹＬ＋　ＡＤＡＮ　Ｅｄｓ、　Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖ
ｅ　Ｔｉ５ｓｕｅＲｅｓｅａｒｃｈ　：　Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ＋　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏ
ｇｙ。

Ｐ　、２．３３−　ｕ４乙＋　Ａ、Ｒ，Ｌｉ５ｓ、　Ｉ
ｎｃ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　／９ｇ／参照）。

そのほかにも、種々の細菌は、生体中に浸透し、病理作
用に実質的に寄与する作用をもったエラスチン分解プロ
テアーゼを分泌する。

生物内の悪性腫よう（がん、肉腫）の進行と、病人にと
って屡々致命的な転移の形成とが、エラスターゼ型プロ
テアーゼの分泌によって条件付けられることも知られて
いる（例えばＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａ
ｎｃｅ　　ｏｆ　　Ｅｌａｓｔａｓｅ−１ｉｋｅ　　ｅ
ｎｚｙｍｅｓ　　１ｎＡｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉ
ｓ　　ａｎｄ　　Ｔ（ｕｍａｎ　　ｂｒｅａｓｔ　　Ｃ
ａｎＣｅｒｌＷ、ＨＯＲＮＥＢＥＣＫ、　　Ｄ、ＢＲＥ
ＣＨＥＭＩＥＲ，Ｇ。

ＢＥＬＬＯＮ、　Ｊ、　Ｊ、　ＡＤＮＥＴ及びり、　Ｒ
ＯＢＥＲＴ、　ｉｎ　Ｐ。

５ｔｒａｎｌｌｉ、Ａ、Ｊ、Ｂａｒｒｅｔｔ、Ａ、Ｂａ
１ｃｉ　　ｅｄｓ。

ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ　　ａｎｄ　　ｔｕｍｏｒ　　
１ｎｖａｓｉｏｎ、ｖｏｌ−ｂ。

０ＰＴＣＭｏｎｏｇｒａｐｈ　　５ｅｒｉｅｓ　　（／
ｑｇθ）　ｐｐ、　　／／７−／ＩＩ／（Ｒａｖｅｎ、
　ｐｒｅｓｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　）参照）０これ
らの酵素は、周囲の組織を破壊して病原体の細胞を血液
の循環に浸透し易くすると共に、腫ようの生体内侵入を
助ける。

これらの全ての理由により、エラスターゼの活動を制御
し得る阻害剤を利用可能とすることがたいせつである。

しかしエラスターゼの中には、例えばマクロファージに
よる食細胞細菌の消化のように、生物にとって有用な、
時には不可欠な活動をするものもある。

従−って、エラスターゼの阻害作用と共に、弾性繊維の
保護作用も利用可能とすることがたいせつと考えられる
。甘た生物の良好な機能にとってその完全性が不可欠な
弾性繊維のレベルに選択的に働きかけることのできるエ
ラスターゼ阻害剤を利用可能とすることが望ましいと考
えられる。

エラスターゼ（よるエラスチンの酵素加水分解は、弾性
組織の多くの病的状態例えば動脈硬化、肺気腫及び皮膚
の成る病気において、決定的な要因と考えられている。

生体組織において、この蛋白質の分解は、エラスチン分
解活性を示すプロテアーゼの割合と、血漿又は有機組織
を源とする自然の阻害物質の割合との間の不均衡に基因
する。

プロテアーゼの阻害剤β源が遺伝的又は機能的に不足し
ている場合の治療上の７つの試みは、自然の置換阻害剤
（α−／−アンチトリプシン）の使用であった。

しかし、自然の阻害剤の使用には、処置のコストが高く
、免疫学上の事故のリスクが大きいなどの、いろいろの
難点がある。他方では、気腫の症例で動物実験による治
療に用いられたエラスターゼの阻害物質には、毒性が高
いという難点がある。

本発明の目的は、弾性繊維を保護すると共にエラスチン
分解活性を阻害するΩつの機能を備えていると考えられ
る新規な合成リポペプチドを提供することにある。これ
らの物質は実際に弾性繊維を識別してその上に定着でき
ると共に、エラスターゼを識別し、その活性な座を中和
することができる。

本発明によるエラスターゼ阻害剤は、特に、抗原性を示
さないこと、生体内で劣化し得ること、その作用個所に
到達してそこに定着し得ること、などの利点を備えてい
る。

本発明は、一般式 ％式％（１１ 〔上式において、又は数Ｏ又は／を表わし、Ｒは疎水性
カル？ン酸、例えば６〜λ左個の炭素原子を含み、場合
によって／〜左個の一重結合を有することのできる脂肪
族カルビン酸、６〜２３個の炭素原子を含有する脂環式
カルビン酸、アリール基が７〜２個の環を有し、脂肪族
基が／〜／ｇ個の炭素原子を有し、アリール基又は了り
−ル脂肪族基が場合にょジ置換されている、アリール脂
肪１Ｍカルボン酸、又はアリールヵルデン酸を表わし、 Ｐ２　は、アミノ酸及びジペプチド−Ｌ−Ａｌａ　−ｔ
−Ｌ−Ｖａｔ−、−Ｃ１ｙ−、Ｌ−Ｍ４ｔ−、−Ｌ−Ｐ
ｒｏ−、−Ｌ−Ｌｅｕ−＋−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｖａｌ−
＋　−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａ６、−　、−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ
−Ｐｈ＆−。

−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｌｅｕ、　−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｍ６
を−及び−Ｌ−Ｐｒ　ｏ　−Ｃ１ｙ　−から成る群中よ
シ選ばれた、隣接Ｌ−Ａｌａ基にＮ末端が結合されてい
るアミノ酸又はジペプチドの残基を表わし、 Ｐｌ　は、グリシン、アラニン、バリン、メチオニン、
ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン
、セリン、システィン、シスチン、アルギニン、チロシ
ン、オルニチン、リシン及びグルタミン酸から成る群中
より選ばれた左旋性の２〜５個のアミノ酸から成るオリ
ゴ４プテド又はアミノ酸の残基であシ、 ＰｌはそのＮ末端基によってＲＸ−に結合され、Ｐ２は
そのＣ末端基によってＡに結合されており、Ａｌａ　は
慣用的にアラニンを表わし、Ｘは、ｐｌ（ｘ＝ｚの場合
）の第１アミノ酸のＮ末端基（−ＮＨ−）に、又は式Ｉ
（ｘ＝θの場合）の左側に示された第１基ＡｈａのＮ末
端基（−ＮＨ−）にＲをそれぞれ結合している直接共有
結合を表わすか、又は、 Ｘは、基Ｒと式Ｉの分子の残りとの連結の手として働く
炭素原子数ユ〜ｌＯのコ価の基を表わし、Ａはペプチド
−（Ｐｌ）ｘ−（Ａｌａ−屁ａ−Ｐ２）−ＡのＣ末端部
分を表わし、Ａはカルボキシル基−ＣＯ２Ｈ又ハその誘
導体（塩、エステル）、−ＣＨｏ　、　−ＣＯＮＨ２、
−ｃｏｃＨ２（Ｊ　　及び−ＣＨ２０Ｈの中から選ばれ
たものである〕 によって表わされるリポペプチドを提供する。

式■によって示される誘導体において、Ｒは、６〜２θ
個の炭素原子を有する脂肪酸例えばラウリン酸又はオレ
イン酸のアシル残基、他の疎水性有機酸の基例えばヘノ
デオキシコリン酸又はコリン酸の残基を表わすか、又は
Ｒ−は例えばハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキ
シル又は炭素原子数７〜３個の低級アルキル基のような
置換基をベンゼン核に有し得るフェニルアルカノイル酸
のアシル基を表わすか、又はＲは、Ｘが結合の手の役目
をする２価の基である場合に、例えば基−Ｚ−（ＣＨ２
）ｎ−ＣＯ−（ココに、２は一〇−又は−Ｎ）Ｉ−２ｎ
は整数Ｓ〜、２０をそれぞれ表わす）を表わし、結合の
手Ｘは７以上の基例えば−ＯＨ。

−ＮＨ２、−Ｃ０ＯＨによって置換されることにより、
可溶化に寄与し、又は式■によって示される他の化合物
への転化を容易にし、好ましくは−（Ｐｌ　）ｘ　−（
Ｌ　−Ａｌａ　−Ｌ　−１１ａ−Ｐ　２　）によって示
されるオリゴペプチドは、７０以上のアミノ酸を有さす
、Ａによって示されるＣ末端基は、カルボキシル基もし
くはその誘導体、又は前述し友基のうちの７つであって
もよい。

Ａによって示される官能基のカルぎキシル基誘導体の例
としては、エステル、特に式−ｃｏ、ｏｙ　　（ここに
Ｙは、脂肪族基、アリール基又はアリール脂肪族基であ
り、置換基を有してもよい）によって示されるエステル
が挙げられる。

Ｙｌｄ特に、７〜５個の炭素原子を有するアルキル基、
又は置換基を有し得るフェニル又はフェニルアルキル基
である。

ＡＫよって示されるカルボキシル基の誘導体としては、
金属、特にアルカリ金属又はアルカリ土類金属（特にナ
トリウム、カリウム、カルシウムなど）の塩、アミン化
合物例えばエタノールアミンとの塩、リシン、アルギニ
ン、ベタイン、ピリドキシン（エラスチン合成において
介在するりシル−オキシダーゼのコファクターとして）
及びビタミンを含む他の塩基性分子が挙げられる。

本発明は、出発物質として、一般式■・Ｈ−Ｘｌ−（−
Ｐｌ　）ｘ−（Ｌ−ＡＡ’ａ−Ｌ−八／！ａ−Ｐ３−）
−Ａ　１　　　　　　　　（ｒ。

（上式においてｘｌ　　ｆ′ｉｘと同じ意味を有するか
、又はＨ−と−Ｐｌ−との間の直接共有結合を表わし、
Ｐ３はＰ２　　と同じ意味を有するか、又はＰ３　　は
基−Ｌ−Ｐｒｏ−を表わし、又はＰ３はＡ１　　と隣接
基−Ｌ−ＡＡ’ａ−との間の直接共有結合を表わし、Ａ
１は基−ＣＯ２Ｈ１−ｃｏ−ｏｙ（ｙは先に定義した意
味を有する）、−ＣＨＯ又は−ＣＯＮＨ２を表わし、又
は先に定義した意味を有する） によって示される化合物を使用し、 必要ならば付加塩例えば塩酸塩の形とした前記出発物質
を、式■ Ｒ−Ｘ２−Ｚｌ（ＩＩり （上式において、Ｒは、先に定義した意味を有し、Ｘ２
　は、Ｘｌ　が共有結合を表わす場合は、Ｘと同じ意味
を有し、Ｘ２　は、Ｘｌ　がＸと同じ意味を有する場合
は、Ｒと２１　　との間の直接共有結合を表わし、ｚｌ
　は、式■の化合物とのＲ−Ｘ２−Ｚ１反応を許容して
化合物ＺＩＨを除去すると共に式■Ｒ−Ｘ−（Ｐｌ）ｘ
−（Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−ＡＪａ−Ｐ３−）−Ａ１　　（Ｉ
Ｖ’）の化合物を生成させる活性基を表わす）によって
示される試薬と反応させ、 Ｐ３　が基−Ｌ−Ｐｒｏ−を表わす場合、バ、リン、ア
ラニン、フェニルアラニン、ロイシン、メチオニン及び
グリシンの中から選ばれた１つの左旋性アミノ酸又はこ
れらのアミノ酸のうち７つのものの誘導体と、式■の化
合物とを反応させて、弐Ｉの誘導体とし、所望ならば取
得化合物を、既知の方法により、特に末端基Ａ又はＡ１
　　を前記Ａの定義に対応した他の全ての末端基に置換
することによって、式■を有する他の全ての化合物に転
化させることを特徴とする、式■の化合物の製造方法も
提供する。

本発明の好ましい実施の態様による製造方法は、次の特
徴を単独Ｋか又は組合せとして備えていてもよい。

−２１は例えば塩素又は臭素のようなハロゲンである。

−Ａが−ＣＨ２０Ｈを表わす弐■の化合物を調製するた
めに、（Ｐ５　　＝Ｌ−Ｐｒｏ　　である）化合物■を
、Ｃ末端基が−ＣＨ２０Ｈ−であるアミノ酸誘導体と反
応させてもよい。例えば、（バリノールのような）前記
誘導体をＮ−メチルモルホリン及びｔ−プチルカルゴニ
ルクロリドの存在下に反応させてもよい（特にＧ、Ｗ、
　ＡＮＤＥＲ８ＯＮほか、Ｊ、　Ａ）７１ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、　ｇ９．３０／２　（／９Ａ７）参照）。

−Ａが−ＣＨ，Ｏを表わす式■の化合物をＨ＜製するた
めに、Ａが−ＣＨ２０Ｈを表わす式■の化合物を、ノク
ロロ酢酸又はリン酸のような適当な角虫媒〔Ｃ。

Ｒ，ＴＨＯＭＰＳＯＮ、ＢｉｏｃｈｅｒｎｉｓｔｒＶ＋
　　／、２ｒ　　弘７　（／９７．３）　）の存在下に
、ジメチルスルホキシドのような酸イヒ剤（ＰＦＩＴＺ
ＮＥＲほか、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ　、　Ｓｏｃ、　
ｇ７゜７Ａｌ、／（／ｑ乙り）の作用に付してもよい。

−Ａが−ＣＯＣＨ２Ｃ／を表わす式■の化合物を調製す
るために、Ｃ末端基が−ＣＯ−ＣＨ２−Ｃ１であるアミ
ノ酸誘導体〔例えばＣ，Ｒ，ＴＨＯＭＰ　ＳＯＮ　　ほ
か、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　Ｌ！：、　　４１（
／ｑ７．？）参照〕と、化合物ＴＶ　（Ｐ　５＝　Ｌ−
Ｐｒｏ　）　　とを反応させてもよい。

−Ａがエステル基−ｃｏ　−ｏｙを表わす式■の化合物
を調製するために、塩化チオニルのような脱水剤の存在
下に、弐Ｉの化合物（Ａｍ−ＣＯ２Ｈ）と、選定された
アルコールと反応させる。

−Ａが−ＣＯＮＨ２を表わす式■の化合物を調製するた
めに、式ＩＶの化合物（Ｐ５−Ｌ−Ｐｒｏ）と、Ｃ末端
基が一〇〇ＮＨ２であるアミノ酸とを、混合無水物法（
Ｔｈｏｍｐｓｏｎほか、Ｂｌｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　
／、２＋　３７（／９７．７）　）に従って反応でせる
。

式■の化合物は、有用な性質を備えている。こ力、らの
化合物は、エラスターゼ型グロテアーゼの活動を阻害す
ると共に、エラスチン繊維上に固定するという、二重の
機能を具えている。

また、式■の化合物は、活性用量において、毒性を示さ
ない。しかし、Ａが−ＣＯ−ＣＨ２−Ｃ１を表わす式■
の化合物は、一般に１．２ｏｒｎ９／ｋｙを超える用量
において、成る程度の毒性を示すが、この化合物のエラ
スターゼ阻害活性は非常に高いので、治療処置上の効用
が式■の他の化合物に比べて特に劣っているとは言えな
い。

本発明は、特に適当な賦形剤と共に式Ｉの化合物を含有
した組成物において、エラスターゼ阻害剤及び（又は）
弾性繊維保換剤として式Ｉの化合物を使用することも対
象としている。

式■の化合物は、動脈硬化症、肺気腫、関節炎、糖尿病
及びエラスターゼが関係していることのある成る種の腫
ようの症例において、主処置剤又は副処置剤として使用
することができる。

本発明による組成物は、式■の少くとも一つの化合物を
、必要ならば適当な賦形剤との混合物の形で、活性成分
として含有することを特徴とする医薬用組成物である。

、これらの組成物は、非経口的に、又は肛門から、又は
外用薬として、又は経口的に、又はエーロゾルによる吸
引によって投与する゛。

このために、前記の組成物は、水溶液（注射又は飲用可
能な溶液）、乳化体のエーロゾルとして加圧した溶液、
半固体調製物（クリーム、座薬）又は希釈用の凍結乾燥
粉末も［２〈は消化性カプセルに入れた粉末とすること
ができる。

本発明による医薬用調製物（凍結乾燥粉末を除く）にお
いて、式Ｉの化合物は、一般に、θ、／〜ｊ　：Ｎｔ　
量％の濃度において存在させる。

用量は特に、投与形態と、所要の病療効果とに依存する
。例えば成人の場合、この用量は、７日当り有効成分Ｓ
Ｏ■〜５ｇの範囲でおる〇式■の化合物は、皮膚に適用
した場合に有用な性質、特に皮膚のエラスチン分解を阻
害する性質を備えている。即ち、式Ｉの化合物は皮膚の
柔軟性を保存又は回復し、特に顔前及び手のしわを阻止
し又は遅延させることができる。従って本発明は、この
目的のために式Ｉの化合物を使用するとさも対象として
いる。

式■の化合物は、このように、皮膚の外観を改善するこ
とができるので、本発明は、式■を有する少くとも一つ
の化合物を含有することを特徴とする化粧品組成物も対
象としている。

この化粧品組成物は、皮膚用化粧品組成物に普通に使用
される少くとも７種類の補助薬又は賦形剤を含有しても
よい。

皮膚用化粧品組成物は、例えばクリーム、ゲル、エマル
ジョン、水溶液、アルコ−ル溶液又ｉ水−アルコール溶
液としてもよい。

皮膚用化粧品組成物に含１れる式■の化合物の濃度は、
一般に、Ｏ０／〜−重量係である。

化粧品組成物に含まれる一般的な補助薬の例としては、
香料、着色剤、保存剤、増粘剤又は乳化剤が挙げられる
。

皮膚用組成物は、特に身体、手又は顔用のクリーム、乳
液又はローションであり、これには日やけ防止用クリー
ム、乳液又はローションが含まれる。

本発明は、式Ｉを有する少くとも一つの化合物を前記化
粧品組成物として皮膚に適用することを特徴とする化粧
処置方法も対象としている。

次に本発明を限定的でない例によって説明する。

例　　／ オレオイル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−ゾロリ
ルーＬ−アラニンの製造 既知の方法により調製したＬ−アシエル−Ｌ−アラニル
−Ｌ−７’ロイル−Ｌ−アラニン（塩酸塩）３．１．！
；　ｇ（０，０１Ｍ　）を、９０％　！　夕／　−＃　
４０ｍｌとトリエチルアミン３．．３ｋ　ｌとの混合物
中に溶解させた。塩化オレオイル／ｇ（θ、０；ｔ、ｓ
　Ｍ　）　全攪拌下にＩＩＬｏｃで７３分間滴下して加
えた後、室温でｔ時間攪拌した。

エタノールを真空下に追出し、水／　００　ｍｌを残留
物に加えた。トリエチルアミンを加えて、ｐＨをｇ、夕
に調節し、過剰なオレイン酸を石油エーテルによって抽
出した。酢酸を加えて水相のｐＬｌを弘に調節した。酢
酸エチルによってオレオイルペプチドを抽出した。

溶剤を真空下に追出し、最少量の酢酸エチルに残留物を
溶解させ、石油エーテルの添加により結晶化を開始させ
た。

Ｆ＝／／！ｒ　〜／；ｌθ’Ｃ；　　αＤ＝−７６°　
（Ｃ＝θ、ｓ係、エタノール）。

例　　コ ラウロイル−トリアラニンの調製 トリアラニン／ｇをざθチエタノール／３ゴ中に、トリ
エチルアミン０．４９　（０，ｇ３プ）の存在下に溶解
させた。塩化ラウロイル／、／　ｇ　（ハ／９ｎＬｌ）
を周囲温度で攪拌下に滴下して加えた。

混合物を２時間室温に放置した。水Ｊｍｌを加え、石油
エーテルに混合物を抽出し、水３θ１ｎｔを下部の相に
加え、７時間室温にて静置した。濾過後に結晶を石油エ
ーテル及び水で洗浄した。

この物質をｇＯ係アルコールにより再結晶させたＯ Ｆ：　コ／デ（αＤ　　＝−ｇｔｃｃ　（Ｃ＝θ、３係
、エタノール） 例　　３ オレオイル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリ
ル−Ｌ−アラニナル 、、？ａ）　　オレオイル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニ
ル−Ｌ−ゾロリンのメチルエステル オレイン酸３．５ｇをテトラヒドロフラン／、コーに溶
解させた◇ Ｎ−メチルモルホリン／、３；１ｍｌとｔ−プチルーカ
ルデニルクロリド／Ａ；０−とを、−／、ｔ’Ｃで、こ
の溶液に添加した。

混合物をこの温度で７０分間攪拌し、ジメチルホルムア
ミド１０ｍ１とＮ−メチルモルホリンへコゴとの混合物
に溶解させたＬ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−ゾロリ
ンメチルエステル塩酸塩３．０ｇ９をこれに添加した。

温度を００に高め、この温度で混合物を７時間攪拌し、
周囲温度で一夜放置した。

Ｎ−メチル−モルホリン塩酸塩の沈殿した結晶を乾燥さ
せた。

母液から溶剤を真空下に追出し、酢酸エチル−ヘキサン
混合物中において結晶化させた。

α、　＝−７６°ＣＣＣ＝０．．！ｒ％エタノール）Ｒ
ｆ：　０．３　、シリカ層、メタノールークロロホルム
タ：ｑりｖ　／　ｖｏ ３ｂ）　オレオイル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ
−プロリル オレオイル−Ｌ〜アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリ
ンメチルエステル／、θ７ｇをメタノールｉｏｍｔに溶
解させた。ＮａＯＨ水溶液（／Ｍ）、？ｍＪを添加し、
３時間周囲温度に放置し、ＨＣｌによりｐＨをダに調節
し、真空下に溶剤を追出した。

残留物を酢酸エチルに吸収させ、酢酸エチル−エーテル
中に、生成物を再結晶させた。

αＤ　；−７ざ０（Ｃ−θ、左係エタノール）３ｃ）　
オレオイルーアラニルーアラニループロリルーアラニノ
ール ジメチルホルムアミドコＱ　ｍｌにオレオイル−アラニ
ル−アラニル−プロリン／、θ’ｌ　ｉ　（，２ｍＭつ
を溶解させた。

これに、−７５°Ｃで、Ｎ−メチルモルボリン０．２１
１ｍ１（コ、Ωｍ　Ｍ　）及びｔ−ブチルカル？ニルク
ロリド０．２９　ｍｌ　（２，２ｍ　Ｍ　）を加えた。

コノ温度で１０分間混合物を攪拌した後、Ｌ−アラニノ
ール０．／！；Ａ　ｍｌを加えた。温度をｏｏｃＶＣ高
め、この温度でａ時間混合物を攪拌した。次に周囲温度
にｌ夜装置した。溶液を真空下に追出し、残留物を酢酸
エチルに吸収させ、この相を、水、５％塩酸水溶液及び
ｊ％炭酸水溶液で順次洗浄した。

溶剤を真空下に追出した。残留物を最少量の酢酸エチル
に溶解させ、石油エーテルの添加により結晶化を開始式
せた（潮解性結晶）。

α１）　＝　−７２”　　（Ｃ＝０．！；　％、　：ｒ
−タ／　−＃）３ｄ）　　、ｔｌｚオイルーアラニルー
アラニループロリルーアラニナル オレオイルーアラニルーアラニループロリルーアラニノ
ール！、？、！ｉ’（＆ｍＭ）をクロロホルム１ｇｍ１
に溶解させた。これにジメチルスルホキシド、２−とジ
シクロへキシルカルボジイミド３．／Ｉ（／　！；　ｍ
　Ｍ　）を加えた。

次に、攪拌した溶液に、等しい４用量に分配して、？０
チリン酸０．ｇＡｒｎｌｃ　１５ｍＭ）を１時間かけて
添加した。

弘時間攪拌した後、真空下に溶液を追出した。

クロロホルム３ｏｍｌに残留物を吸収でせ、溶液を−、
？　ＯＯＣに冷却し、結晶（ジシクロヘキシル尿素）を
別々に乾燥させ、母液を水で洗浄した。この物質は、調
製用薄層クロマトグラフィーによって水相から分離する
ことができた。

αＤ＝−７０°　＜Ｃ＝Ｏ，５係、エタノール）Ｒｆ＝
０．ｇ　、シリカ層、クロロホルム−メタノール＝／左
：／。

例　　弘 オレオイル−トリアラニンの調製 Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニン２ｇをｇｏ
係エタノール３ＯＮ中に、トリエチルアミン八りｇの存
在下に溶解させた。

これに塩化オレオイルダ、０ＪＪＣ先４ｔｍｌ　）を攪
拌下に滴下した。

混合物をコ時間周囲温度で攪拌し、これに水左Ｏｍノと
酢酸／―とを順次加えた。

沈殿物を乾燥させ、石油エーテルと水とで洗浄した。

この物質をアルコール中において再結晶させた。

Ｆ　：　２００°　ＣＩＤ＝−１，Ｑｏ（Ｃ＝　０．！
；　％−１−タ／　−ル） 例　　３ カプロイル−Ｌ−アラニル−Ｌ−７ラニルーＬ−アラニ
ンの調製 トリエチルアミン／、！；ｌ、ｍｌを含有するり５％エ
タノール、ｌ　Ｑ　ｒｎｌに、Ｌ−アラニル−Ｌ−アラ
ニル−Ｌ−アラニン八Ｓｇを溶解させた。

これに周囲温度で攪拌下に塩化カプロイル八３３Ｎを滴
下させて加えた。

混合物を周囲温度に２時間放置した後、水３θゴと酢酸
、２　ｍｌとを順次加えた。

混合物をコ時間θ°に放置した後、結晶を乾・燥させ、
エーテル及び氷水２　ｘ　３　ｍｔで洗浄した。

この物質を７θ係アルコール中に再結晶させた。

Ｆ’：：！、コロＱ　αＤ＝−弘３°　（Ｃ＝　Ｏ，Ｓ
％エタノール） 例　　６ オレオイルーＬ−アラニルーＬ−アラニル−Ｌ−プロリ
ル−Ｌ−バリン トリエチルアミン１１を含有した無水エタノ−／Ｉ／／
左Ｎに、Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−
Ｌ−バリン（塩酸塩）θ、ｑｇｇを溶解させた。

これにｌＩＯで攪拌下に塩化オレオイル八２６Ｎを１５
分かけて滴下させて加え、周囲温度で更に弘時間攪拌し
た。

ＮａＯＨを加えて、−を５．５に調節し、溶剤を真空下
に追出した。残留物を石油エーテルによってすりつぶし
、石油エーテルをデカンテーションによって除去した。

残留物を水３θ−に吸収させた後、酢酸を加えて、ｐ１
１弘に調節した。酢酸エチルにオレオイルペゾチドを抽
出した。溶剤を真空下に追出し、酢酸エチル＝石油エー
テルの混合物中に生成物を再結晶でせた。

Ｆ＝７００Ｃ（潮解） ｄＤ＝−７２”　　（Ｃ＝０．！ｒ　％：ｒ−タ／　　
＃）同様にして、式Ｉの下記の誘導体を調製した。

式１の化合物の性状研究 １．　ガ゛ラス器内の実験 １ａ８式Ｉの化合物と可溶性エラスチンとのイ目互作用 沸騰中の０．７Ｎナトリウムを使用する方法によって成
牛の厚い靭帯からの可溶性エラスチンを精製した（　Ｌ
、ＲＯＢＥＲＴ及びＷ、ＨＯＲＮＥＢＥＣＫ。

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　１ｎｓｏｌｕｂｌｅ　
ａｎｄ　５ｏｌｕｂｌｅｅｌａｓｔｉｎｓ、Ｔｈｅ　Ｍ
ｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＣｏｎｎｅｃｔｉｖｅＴ
Ｊｓａｕｅ　Ｒｅｌ］ｅａｒｃｈ″、　Ｅｄ、Ｄ、Ａ、
　Ｈａｌｌ（Ｊｏｙｎｓｏｎ−Ｂｒｕｖｖｅｒｓ　　Ｌ
ｔｄｏ　０ｘｆｏｒｄ）＋　　ｐｐ、ｇ／　　−ＩＯ’
ｌ　　（／ｑ７乙）参照）。こ力、らのポリマーに対す
るオレオイル銹導体の吸収を研究するために、放射線マ
ークのオレイン酸を用いて、誘導体オレオイル−（ＡＺ
ａ　）２−Ｐｙｏ　−Ａｌａ　及びオレオイル−（Ａｌ
ａ）２−　Ｐｒｏ　−Ｖａｔを合成した。

ＯＪ”　−（Ａｈａ）　Ｐｒｏ　Ａｈａ　　比活性度二
２．３１０５ｃｐｍ／ナノモル ０〆−（Ａｈａ）　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　比活性度：　、２
．．２１０３ｃｐｍ／ナノモル 注：　”Ｏｌ”は「オレオイル」の略記エラスチン（濃
度の異なるもの）とその放射性化合物（濃度の異なるも
の）とを、緩衝溶液（／　００　ｍ　Ｍ　）リスＨＣ１
、ＣａＣｌ２３　ｍ　Ｍ　、　ＮａＮ　３０、θ、２　
％　ｐＨｇ、ｏ）　／　ｍｌ中において、３７Ｃ′ＣＴ
２１１時間培養した。

管をｉｏ、ｏｏｏ　！！　　で遠心作用にかけ、残留物
をｇＯ％エタノールの存在下に７Ｍカリウムにより加水
分解した。加水分解生成物中に含まれる放射能を定量分
析し、エラスチン／　ｍｑにより吸収された物質のミ＋
）モル量で結果を表わした。

この結果から、化合物がエラスチン上に固だされたこと
が示きれた。

１ｂ、前記物質及び特にそのアラニナル誘導体はエラス
ターゼの阻害剤として作用する 使用した精製エラスターゼ：豚の肺エラスターゼ（／ツ
ＯＵ／■）及び牌臓からＭＡした人の白血球エラスター
ゼ。

これらの酵素のモル濃度 弊エラスターセ１、弘６１０Ｍ 白血球エラスターゼ、１０・１０　　Ｍこれらのエラス
ターゼの酵素活動は、緩衝液トリス／　ＨＣ１，ｐＨｇ
　−ｇ、乙においての最終濃度／、；！りｍ　Ｍまでの
、特異性の合成基質Ｎスクシノイルトルアラニンーバラ
ニトロアニリド、アーヒチル−ビスーアラニループロリ
ルーアラニン　ノｅラニトロアニリドの加水分解に従っ
ている。光学ｉ１度の’Ｉ　／　Ｏｎｍ　’ＩＩＣ＊−
いての灰化は、ペックマン型Ａｃｔａ　ＣＩＩＩ　分光
光既計に直接従っている。

阻害％　Ｑ’Ｊ＋において、オレイル化合物をエラスタ
ーゼと共に７３分間予め培養した後、残留酵素活性を定
めた。

この結果を次表１に示す。

１、Ｃ１これらの物質によって予め処置したエラスチン
は、エラスターゼによる酵素加水分解に部分的に耐性に
なっている この実験のため、エラスチンを、トリチウム処理したホ
ウ化水素Ｎａ　Ｂ　３Ｈ４で放射線マークした（　Ａｃ
ｔ、　ｓｐ、ム？！ｒ　　１０　　ｃｐｍ　／　ｍｆ／
　）。

ｐｌ−１ｆ、０のトリスＨ（Ｊ緩衝液／　ｍｌにいろい
ろの化合物を溶解でせた溶液１０Ｆｄによって、エラス
チン／■を、２４を時間処理した。混合物を遠心分離に
かけ、不溶のエラスチンを緩衝液／ゴにより洗浄し、腟
エラスターゼθ、ｏｓ１ｎ９　を加え、加水分解の間に
放出された放射性ペプチドの測定によって、ポリマーの
加水分解を定量分析した。

その結果を次表−に示す。

表　　ユ ２、悴エラスターゼの皮肉注射によって誘起される皮膚
の弾性繊維の酵素劣化に対するオレオイル−ビスアラニ
ル−プロリン−アラニンの阻害作用の生体内研究 この実験には、野うさぎの子（／か月）を使用し、３種
類の皮肉注射液（容積、θ、、２ｔｍ；　　溶剤、リン
酸塩緩衝液、ｐＨ７，θ）を、実験動物の背中に注射し
た。

（１）参照用の注射。リン酸塩緩衝液Ｏ０，２３ゴのみ
の注射。

（２）　　豚の膵エラスターゼの注射。緩衝液Ｏ，ＳＳ
ｄに溶解させた／θμｇ（ハａ単位、グｉ　ｏｊ　０モ
ル）の注射。

（３）　　緩衝液θ、、ｌｊ　ｍｅに溶解させたＯＡ！
　−ＣＡｌａ）２−Ｐｒｏ　−Ａ／ａ　Ｃｇ、１０　−
．３．１０　　モ＃）ＳＯ−２ｊ５０μｓの注射と、そ
の後の同一の個所への、緩衝液０．；ｌ！ｒ　ｍｌに溶
解させた弊エラスターゼ１０μＩＩｃ／、２単位、ダ・
７０　モル）の注射。

次に弾性繊維を可視化するために、野うさぎの皮膚から
採取したいくつかの試料を組織学的に処置した。

組織学的観察と定量分析的な形態計測の研究により、次
のことが明らかになった。

−オレオイル誘導体によって予め処置した場合は、弾性
繊維の４Ｌｏ〜Ａθ係が保存される（阻害剤／醇素モル
比＝コ・１０　） 一オレオイル誘導体によって皮膚を予め処置した場合は
、弾性繊維の６Ｏ−９０ｅ！りが保存される（阻害剤／
酵素モル比＝７０　）。

結論 ａ）検討された物質 Ｏｌｌ　−（Ａ／ａ）２−　Ｐｒｏ　−Ａｒａ　。

０ｌ（Ａ／ａ　）２７　Ｐｒ　ｏ　−Ｖａ　１゜Ｏｌｌ
　−（Ａ／ａ）　−Ｐｒｏ　−Ａｈａ　−ＣＨＯは、エ
ラスターゼ阻害剤として作用する。

ｂ）これらの化合物はエラスチンに結合し、弾性繊維に
吸収された形で、エラスターゼのエラスチン吸収作用を
著しく低減させることができる。

これは生体内においてもガラス器内においても同様であ
る。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ％式％（） 〔上式において、×は数０又は／を表わし、Ｒは疎水性
   カルボン酸、例えば６〜．２Ｓ個の炭素原子を含み、場
   合によって７〜５個のΩ重結合を有することのできる脂
   肪族カルボン酸、乙〜、２Ｓ個の炭素原子を含有す′る
   脂環式カルボン酸、アリール基が７〜２個の環を有し、
   脂肪族基が７〜７ｇ個の炭糸原子を有し、アリール基又
   はアリール脂肪族基が場合により置換されているアリー
   ル脂肪族カルボン酸又はアリールカルボン酸を表わし、 Ｐ２　は、アミノ酸及びジペプチドニ ーＬ−Ａｌａ−＋　　−Ｌ−Ｖａｌ−１−Ｇｌｙ−１−
   Ｌ−Ｍ６ｔ−１−Ｌ−Ｐｒｏ−、−Ｌ−Ｌｅｕ−、−Ｌ
   −Ｐｒｏ−Ｌ−Ｖａｌ−、−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｌａ−
   、−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｐｈ６−　、−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−
   Ｌｅｕ−。 −Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−ＭＭｔ−及び−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ
   −から成る群中より選ばれた、隣接Ｌ　−Ａｄａ基にＮ
   末端が結合されているアミノ酸又はジペプチドの残基な
   表わし、 Ｐ、は、グリシン、アラニン、バリン、メチオニン、ロ
   イシン１イソロイシン、フロリン、フェニルアラニン、
   セリン、システィン、シスチン、アルギニン、チロシン
   、オルニチン、リシン及びグルタミン酸から成る群中ま
   り選ばれた左旋性の２〜ｇ個のアミノ酸から成るオリゴ
   ペプチド又はアミノ酸の残基であり、 Ｐ、はそのＮ末端基によってＲＸ−に結合され、Ｐ２　
   はそのＣ末端基によってＡＫ重結合れており、 Ａ７！ａは慣用的にアラニンを表わし、Ｘは、Ｐｌ（×
   ＝／の場合）の第１アミノ酸のＮ末端基（−ＮＨ−）　
   　に、又は式Ｉ（ｘ二θの場合）の左側に示された第１
   基ＡｌａのＮ末端基（−ＮＨ−）にＲをそれぞれ直接結
   合している共有結合を表わずか、又は、 Ｘは、基Ｒと式Ｉの分子の残りとの連結の手として働く
   炭素原子数λ〜１０のコ価の基を表わし、 Ａはペプチド−（Ｐｌ）ｘ−（Ａｄａ−Ａｌａ−Ｐ２）
   −ＡのＣ末端部分を表わし、Ａはカルボキシル基−Ｃｏ
   ２日又はその誘導体（塩、エステル）、−ＣＨｏ。 −ＣＯＮＨ２，−ｃｏｃ＋２ｃｇ及び−ＣＨ２０Ｈの中
   から選ばれたものである〕 によって表わされるリポペプチド。
2. （２）Ｒが炭素原子数６〜２０個の脂肪酸例えはラウリ
   ン酸もしくはオレイン酸のアシ化残基、ヘノデオキシコ
   リン酸もしくはコリン酸の残基、又はベンゼン核に場合
   により置換基を有するフェニルアルカノイル酸のアシル
   残基な表わすことを特徴とする特許請求の範囲第（１）
   項記載のりポベゾチド。
3. （３）ｘが基−２−（ＣＨ２）。−Ｃｏ−を表わし、こ
   こにｚは一〇−又は−ＮＨ−を表わし、ｎは整数ｓ〜、
   ２０であることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項
   又は第（２）項記載の＋）　セペプチド。
4. （４）′−（Ｐ、）ｘ−（Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｐ
   ２）によって示されるオリゴペプチドが７０個よりも多
   くのアミノ酸を含有しないことを特徴とする特許請求の
   範囲第（１）〜（３）項のいずれか７項記載のりポペゾ
   チド。
5. （５）Ａが基−Ｃｏ−ＯＹ　　を表わし、ここにＹは脂
   肪族基、アリール基、又はアリール脂肪族基を表わし、
   場合により置換基を有することを特徴とする特許請求の
   範囲第（１）〜（４）項のいずれか７項記載のりポペプ
   チド。
6. （６）次の中から選ばれたものであることを特徴とする
   特許請求の範囲第（１）項記載のりポベプチド。 オレオイル−Ｌ−アラニル−Ｌ−７ラニルーし一プロリ
   ルーＬ−アラニン。 ラウロイル−トリアラニン。 オレオイル−アラニル−アラニル−プロリン。 オレオイルーアラニルーアラニルーグロリルーアラニノ
   ール。 オレオイルーアラニルーアラニルーゾロリルーアラニナ
   ル。 カシロイル−し−アラニル−し−アラ＝　ルーし一アラ
   ニン。 ラウロイル−Ｌ−アラニル−し−アラニルーし一アラニ
   ン。 オレオイル−Ｌ−アラニル−し−アラニル−し−アラニ
   ン。 ステアロイル−し−アラニル−し−アラニル−Ｌ−アラ
   ニン。 オレオイル−Ｌ−アシニルーし一アジニルーし一プロリ
   ン。 オレオイル−し−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリ
   ル−し−アラニン。 オレオイル−し−アシエル−Ｌ　−７ラニルーＬ−プロ
   リル−Ｌ−バリン。 オレオイル−し−アラニル−し−アラニル−し−プロリ
   ル−し−アラ二ノール。 オレオイル−Ｌ−アラニル−Ｌ−７ラニルーＬ−プロリ
   ル−Ｌ−バリノール。 オレオイル−Ｌ−アラニル−し−アラニル−し−プロリ
   ル−し−アラ二ノール。 オレオイル−Ｌ−アラニル−し−アラニル−し−プロリ
   ル−し−パリナール。
7. （７）出発物質として、一般式■ Ｈ−Ｘ　１−　（ｐ　ｔ　−）　ｘ−（Ｌ　−Ａ　ＩＪ
   　ａ−Ｌ−Ａ　ＩＪ　ａ　−ｐ　５−　）−Ａ　＋　　
   　（ｎ）〔上式において×１　　はＸと同じ意味を有す
   るか、又はＨ−と−Ｐ１−との間の直接共有結合を表わ
   し、Ｐ３はＰ２と同じ意味を有するか、又はＰ、５　　
   は基−Ｌ−Ｐｒｏ−を表わし、又はＰ３　はＡ、と隣接
   基−Ｌ−Ａｄａ−との間の直接共有結合を表わし、Ａ、
   は基−Ｃｏ２Ｈ、−Ｃｏ−ＯＹ　　（Ｙは先に定義した
   意味を有する）、−ＣＨｏ又は−ＣＯＮＨ２を表わし、
   ×は先に定義した意味を有する〕 によって示される化合物を使用し、 必要ならば付加塩例えば塩酸基の形とした前記出発物質
   を、式■ Ｒ−ｘ２−ｚｌ　　　　　　　（Ｉｎ）〔上式において
   、Ｒは、先に定義した意味を有し、×２　は、ｘ、が共
   有結合を表わす場合は、Ｘと同じ意味を有し、×２　は
   、Ｘ工がＸと同じ隔味を有する場合は、Ｒと２．との間
   の直接共有結合を表わし、ｚ、は、式０の化合物とのＲ
   −Ｘ２−２．反応を許容して化合物Ｚ、Ｈを除去すると
   共に式■ Ｒ−Ｘ　−（Ｐ　１）　ｘ−（Ｌ　−Ａ　ＩＪ　ａ　−
   Ｌ　−Ａ　ＩＪ　ａ　−Ｐ　３−　）Ａ　、（ＩＶ）の
   化合物を生成させる活性基を表わす〕によって示される
   試薬と反応させ、 Ｐ６　　が基畦−Ｐｒｏ−を表わす場合、バリン、アラ
   ニン、フェニルアラニン、ロイシン、メチオニン及びグ
   リシンの中から選ばれた７つの左旋性アミノ酸又はこれ
   らのアミノ酸のうち７つのものの誘導体と、式■の化合
   物とを反応させて、式Ｉの誘導体とし、所望ならば、取
   得化合物を、既知の方法により、特に末端基Ａ又はＡ、
   を前記への定義に対応した他の全ての末端基に置換する
   ことによって、式Ｉを有する他の全ての化合物に転化さ
   せることを特徴とする特許請求の範囲第（１）〜（６）
   項のいずれか７項記載のりポペプチドの製造方法。
8. （８）弾性繊維の保砕剤及び（又は）エラスターゼの阻
   害剤としての、特許請求の範囲第（１）〜（６）項のい
   ずれか７項記載のりポペプチドの使用。
9. （９）皮膚のエラスターゼの阻害剤又は皮膚の保進剤と
   しての前記リポペプチドの特許請求の範囲第（８）項記
   載の使用。 （１０１皮膚の柔軟性の保存又は回復或いはしわの予防
   又は遅延のための前記リポペプチドの特許請求の範囲第
   （９）項記載の使用。 αυ　特許請求の範囲第（１）〜（６）項のいずれか７
   項記載のリポペプチドの少くとも一つを適宜の賦形剤と
   の混合物として使用することを特徴とするエラスターゼ
   型のプロテアーゼの阻害組成物及び（又は）弾性繊維の
   保護組成物。 Ｑ２＋　　特に動脈硬化症、肺気腫、関節症、糖尿病及
   びエラスターゼが関係している成る種の肺ようの主処置
   剤又は副処置剤として使用可能な、前　　　　□記すポ
   ペプチドを活性成分として含有する医薬用組成物を形成
   することを特徴とする特許請求の範囲第（１１）項記載
   の組成物。 （１３１皮膚の化粧品組成物として普通に使用可能な賦
   形剤と共に少くとも一つの前記ペプチドを活性成分とし
   て含有した化粧品組成物を形成することを特徴とする特
   許請求の範囲第００項記載の組成物。