JPH0331298A

JPH0331298A - プロリルエンドペプチターゼ阻害ペプチド

Info

Publication number: JPH0331298A
Application number: JP1166402A
Authority: JP
Inventors: Minao Asano; 浅野　皆夫; Norimare Nio; 式希丹尾; Yasuo Ariyoshi; 有吉　安男
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1989-06-28
Filing date: 1989-06-28
Publication date: 1991-02-12

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、ペプチドおよび／またはその塩を含有する健
忘症の予防または治療に使用できる栄養組成物およびこ
れに使用できる新規ペプチドに関する。

〔従来の技術〕

近年、食品蛍白質の酵素分解物中に、オピオイドペプチ
ド、ＡＣＥ阻害ペプチドなどの種々の薬理活性ペプチド
が存在することが報告されてきた（　Ｖ、Ｂｒａｎｔｌ
、　Ｈ，Ｔｅｓｃｈｅｍａｃｈｅｒ、　Ａ、Ｈｅｎｃｈ
ｅｎ、　ａｎｄＦ、　Ｌｏｔｔｓｐｅｉｃｈ：　Ｈａ　
　ｅ−Ｓｅｉｌｅｒ　ｓ　Ｚ、　Ｐｈ　５ｉｏｌ。

■叩ユ　３６０，１２１１　（１９７９）。

Ｓ、　　Ｌｏｕｋａｓ、　　Ｄ、　　Ｖａｒｏｕｃｈａ
、　　Ｃ，Ｚｉｏｕｄｒｏｕ＋　　Ｒ，八。

５ｔｒｅａｔｙ、　ａｎｄ　Ｗ、　Ａ、　Ｋｌｅｅ　：
　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　、　　２２　。

４５６７　　（１９８３）。

Ｓ、Ｍａｒｕｙａｍａ、に、Ｎａｋａｇｏｍｉ、Ｎ、Ｔ
ｏｍｉｚｕｋａ、ａｎｄＨ，５ｕｚｕｋｉ　：　Ａ　ｒ
ｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、＋　　４９　（５）　
＋１４０５　（１９８５）、参照）。

この様なペプチドの実際の生理的意義は未だ明らかでは
ないが、食品として摂取される蛋白質中に、栄養という
一次的機能のほかに、生体制御の外来的因子の機能を果
たす可能性が見出されたことは興味深いことである。さ
らに母乳というヒトが最初に口にする唯一の“食品”は
様々な生体制御因子が含まれていて、健康に育っていく
源となっている。

最近Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇらによって人乳β−カゼインの
全アミノ酸配列が決定された（　Ｒ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒ
ｇ、　Ｍ。

Ｌ、　Ｇｒｏｖｅｓ、　ａｎｄ　Ｈ，Ｊ、　Ｄｏｗｅｒ
　：Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、＋２５９　（８Ｌ　
　５１３２　（１９８４）、参照）。

この蛋白質より合成的手法を用いてＡＣＥ阻害活性を持
つペプチドが報告されている（特開平１８３０９６号公
報参照）。

この様に天然、食品中の蛋白質のアミノ酸配列に薬理作
用を持つものが見出されれば、それは従来の医薬より穏
やかな薬理効果を期待でき、安全な医薬、あるいは機能
性食品成分として応用できるのではないかと考えられる
。

一方、近年、医療技術等の進歩に伴い、高齢者の増加が
進んでいるが、老年痴呆は大きな社会問題になりつつあ
る。痴呆の薬理側学的あるいは神経化学的機序に関する
研究では、アルツハイマー型痴呆における脳内コリン作
動性神経系の機能低下環、神経伝達物質の変動のほか、
各種の神経ペプチドの関与が報告されている。神経ペプ
チドのうち、バソプレッシンは学習・記憶の過程に関与
し、脳内の記憶の固定に関与すると言われている（鶴　
大奥、芳本　忠：　ＢＩＯＩＮＤＵＳＴＲＹ　　４　（
１０）７８８−７９６　（１９８７）、参照）プロリル
エンドペプチダーゼ（ＥＣ３，４゜２１．２６）はプロ
リンを含むペプチドのプロリンのカルボキシル側をｉｎ
　ｖｉｔｒｏ、　ｉｎ　ｖｉｖｏで特異的に切断する酵
素で、バソプレッシンも分解・不活性化する（　Ｔ、　
Ｙｏｓｈｉｎ＋ｏｔｏ、　Ｔ、　ＮｉｓｈＮ１５ｈｉ、
　Ｔ。

Ｗｉｔａ、　　ａｎｄ　Ｄ、　Ｔｓｕｒｕ　：　Ｊ、　
Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　　９４　＋　　１１７９（１９８
３）参照）。また抗痴呆薬として開発されたアニラセタ
ム（ロシュ社）がこの酵素に対して阻害活性をもつこと
も報告され（Ｔ、　Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ＋に、　Ｋａｄ
ｏ、　Ｆ、　Ｍａｔｓｕｂａｒａ、　Ｎ、　Ｋｏｒｉｙ
ａｍａ、　Ｈ，Ｋａｎｅｔｏ。

ａｎｄ　Ｄ、　Ｔｓｕｒｕ　：　Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｂｉｏ　［）　ｎ、＋　　１０　＋７３０　（１９８
７）参照）、プロリルエンドペプチダーゼがバソプレッ
シンと共に記憶−健忘との関わりがあることを示唆して
いる。

さらには、ラット、マウスを用いた実験でプロリルエン
ドペプチダーゼに特異的な阻害剤が抗健忘症作用を示す
ことが報告されている。

プロリルエンドペプチダーゼの活性部位のサブサイトに
ついてはＳ３、Ｓ２．５１　、Ｓｔ　　、Ｓｔサイトが
酵素と基質の結合に関与すると報告されている（　Ｒ，
Ｗａｌｔｅｒ、　ａｎｄ　Ｔ、　Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ：
　Ｂｉｏ−句匹見■１ひ工１７　（２０）、、４９３９
　（１９７８）参照）。その基質特異性はＰ、にＬ−プ
ロリン、Ｐｚ、Ｐ＋’にＬ体の光学特異性があり、Ｐ３
に疎水性基が存在すると反応は高くなり、Ｐ４あるいは
Ｐ、’へ鎖長を延ばすと反応性は低下する。

最近、鶴らは、非競争阻害を示すＺＰｒｏ−ＸＩＯ−’
μＭ）を合成しており、酵素阻害剤としてはＰ３からＰ
＋までの鎖長を持つものが有効であるとしている（鶴　
大奥、芳本　忠、山元面子。

郡山信宏、池沢竜平、古川　淳、赤羽健司、倉科喜−：
第１６回構造活性相関シンポジウム講演要旨集２３０−
２３３　（１９８８）。

Ｄ、　Ｔｓｕｒｕ、　Ｔ、　Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ＋　Ｎ
、　Ｋｏｒｉｙａｍａ、　ａ−ｎｄ　Ｓ。

Ｐｕｒｕｋａｗａ　：　Ｊ　　Ｂｉｏｃｈｅｍ、＋　１
０４．５８０（１９８Ｂ）、参照）。

既に新しい抗健忘薬のターゲットとして、プロリルエン
ドペプチダーゼ阻害剤の研究が進められている。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明は、プロリルエンドペプチダーゼの阻害活性を有
するペプチドを検索し、健忘症の予防または治療の効果
を有する栄養組成物及び安全性の高い薬剤を開発するこ
とを目的としている。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、上記課題につき鋭意検討を行ない、人乳
β−カゼイン中の薬理活性を検討した結果、下記構造式
で示されるペプチドが、プロリルエンドペブチターゼ阻
害活性を有することを見出し、本発明を完成した。

Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＡｌａ−Ｉｌｅ−ＰｒｏＡｌａ−Ｐｈｅ−ＰｒｏＰｈｅ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ１１ｉｓ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＶａｌ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＶａｌ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＬｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｒｏ−ＰｈｅＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＶａｌＩｌｅ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＧｌｕＩｌｅ−Ｔｙｒ−
Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　−Ｇｌｕ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ｒｌｅ
Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇｌｕ−
Ｐｒｏ−１ｅ−ＰｒｏＴｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　
−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ４　ｅＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｉ　　ｅＶａ　　−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅに１ｌ−ｐｒｏ−ＩｌｅＬｅｕ−１１ｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＶａｌ−Ｇｌｕ
−Ｐｒｏ−Ｔｉｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＧｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉ
ｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｒｏ−ｒｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒこのうち、下記構造式で示されるペプチドは新規である
。

Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−ＰｒｏＡｌａ−Ｉｌｅ−ＰｒｏＡｌａ−Ｐｈｅ−ＰｒｏＰｈｅ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＨｉｓ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＶａｌ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　ｕｅ−Ｔ
ｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　　ｕ−Ｐｒｏｅ
−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　ｕ−Ｐｒｏ
−１ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　ｕ−
Ｐｒｏ−ＩＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　　ｕ−Ｐｒ
ｏ−ＩＰｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　　ｕ−ＰｒｏＶａ　　−Ｇ　　ｕ−Ｐｒｏ− Ｇ　　ｕ−ＰｒｏＬｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
　　ｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ＩＧｌｕ−Ｐｒｏ−１ｅ−Ｐｒｏｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ即ち、本発明は上記新規ペプチド及びプロリルエンドペ
プチターゼ阻害活性を有するペプチドおよびその塩の少
なくとも一種を含有する栄養組成物である。

塩の形態の場合、その塩類としては、塩酸塩、臭化水素
酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩
および酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、マレ
イン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、メタンスル
ホン酸塩、Ｐ−）ルエンスルホン酸塩等の有機酸塩が挙
げられる。なお、医薬に含有する場合は、医薬上許容さ
れる塩の形態をとる。

ペプチドを構成するアミノ酸は、天然に存在するという
点でＬ一体が望ましい。

本発明のペプチドはペプチド合成に通常用いられる固相
法で、ペプチド結合の任意の位置で二分される２種のフ
ラグメントの一方に相当する反応性カルボキシル基を有
する原料と、他方のフラグメントに相当する反応性アミ
ノ基を有する原料をジシクロへキシルカルボジイミド法
を用いて縮合させ、生成する縮合物が保護基を有する場
合、その保護基を除去させることにより製造し得る。

この反応工程において反応に関与すべきでない官能基は
、保護基により保護される。アミノ基の保護基としては
、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル、Ｐ−ビフェニルイソプロピルオキシカルボ
ニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル等が挙
げられる。Ｃ端のカルボキシル基はクロルメチル樹脂、
オキシメチルＰＡ脂、ｐ−アルコキシベンジルアルコー
ル樹脂等の担体に結合している。

縮合反応は、ジシクロへキシルカルボジイミド等の縮合
剤の存在下にて実施する。

縮合反応終了後、保護基は除去され、さらにペプチドの
Ｃ端と樹脂との結合を切断する。

さらに、本発明の新規ペプチドは通常の方法に従い精製
される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相液
体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフ
ィー等が挙げられる。

本発明の栄養組成物は、医薬又は食品の形態で提供でき
る。医薬は、経口的に又は非経口的に適用され得る。

本発明の医薬が提供される形態としては、経口投与用に
は、例えば、散剤、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル、液
剤等、非経口投与用には例えば、懸濁液、液剤、乳剤、
アンプル及び注射液等が挙げられ、或いは、これらを組
合せた形態でも提供できる。組合せ得る希釈剤としては
、固体、半固体及び液体のいずれでもよく、例えば、水
、ゼラチン、ｖＮ類、澱粉類、脂肪酸、その塩、アルコ
ール、油脂、タルク、生理食塩水等又はこれらの２種以
上の組合せが挙げられる。本発明医薬におけるペプチド
及び／又はそれらの塩の総重量が占める比率は、一般に
０．０１〜１００重景％であ重量一方、本発明組成物は
、食品として極めて有効に提供し得る。本発明の食品に
おけるペプチド及び／又はそれらの塩の総重量の占める
比率は、−般に０．０１〜１０％である。官能面で、本
発明のアミノ酸の高濃度での使用が好ましくない場合、
例えば、比較的高融点の油脂、蛋白、澱粉等でカプセル
化して用いる、或いは、マスキング剤を併用する等の方
法の採用が好ましい。

１土■ 以下、実施例により本発明を具体的に説明する。

なお、本明細書中で用いた略号は、次の意味を有する。

Ａｌａ、　ＡＡｒｇ、　ＲＡｓｎ＋　ＮＡｓｐ、　ＤＧｌｎ、　ＱＧｌｕ、　ＥＧｌｙ、　Ｇ旧ｓ、！！Ｉｌｅ、　！Ｌｅｕ、　ＬＬｙｓ、　ＫＰｈｅ＋　’ アラニン（以下アミノ酸は全てＬ体）アルギニンアスパラギンアスパラギン酸グルタミングルタミン酸グリシンヒスチジンイソロイシンロイシンリジンフェニルアラニンＰｒｏ、　　ＰＳｅｒ、　　５Ｔｈｒ、　　ＴＴｒｐ、　　ＷＴｙｒ、　　ＹＶａｌ、　　Ｖ一ｍｏｃ− ｐＮＡＯＮｐ０ＮＳｕＯＢｔ０ＮＳｕＤＣＧＳＣＤＣＵｒｅａＭＡＰＤＭＦプロリンセリンスレオニントリプトファンチロシンバリンベンジルオキシカルボニル聾−フルオレニルメチルオキシカルボニルｐ−ニトロア
ニリドｐ−二トロフェノールエステルスクシンイミドエステル１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＮ−ヒドロキシスクシンイミドジシクロへキシルカルボジイミド水溶性カルボジイミド（１−エチル−５−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）−カルボジイミド２ジシクロヘキシル尿素ジメチルアミノピリジンジメチルホルムアミドＤＭＳＯジメチルスルホキシドＴＦＡ　　　　）リフルオロ酢酸ＴＭＳＯＴｆ　　）リフルオロメタンスルホン酸トリメ
チルシリルＢｕｔｔ−ブチルＭｔｒ　　　４−メトキシ−２，３，６−メチル−ベン
ゼンスルホニルＡｃｍ　　　アセトアミドメチルＭｂｈ　　　　ジメトキシベンズヒドリルＭｅＯＨメタ
ノールＡ　ｃ　ＯＨ酢酸ｎ−ＢｕＯＨｎ−ブタノールＡＣＥ　　　アンジオテンシン変換酵素実施例１．　１
１Ｂ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏの合成樹脂１　ｇ　（ＯＨＯ，３
５ｍｍｏｌ　）を手動用固相合成用反応容器（５０ｍｆ
）に入れ、塩化メチレン１５ｍｊｌ！、塩化メチレン−
ＤＭＦ１５ｍＡ！で洗浄後、ＦｍｏｃＰｒｏＯＨ０，１
８ｇ　（０，５３ｍｍｏｌ　、　　１．５当量）、ＤＣ
Ｇ　Ｏ，１２ｇ　（０，５８ｍｍｏｌ　、　　１．７当
１）、ｐ−ジメチルアミノピリジン０．０６　ｇ　（０
，５３ｍｍｏｌ。

１、５当量）を塩化メチレン−ＤＭＦに溶解し、添加、
３時間振盪した。これを順次、塩化メチレン、ＤＭＦお
よびイソプロパツールで洗浄後、導入量の定量を行った
（０．１５μｍｏｌ／ｇ）。なお塩化メチレンは安定剤
として７９１７０．０００５〜０．００５％含有のもの
を使用した。

これを以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付した。

ａ）　　ＤＭＦ　１５ｍ１中、１分間振とう（１回）。

ｂ）　２０％ピペリジン−ＤＭＦ溶液１５ｍｊ！中、２
分間振とう。

ｃ）　２０％ピペリジン−ＤＭＦ溶液１５ｍ２中で１０
分間振とうし、Ｆｍｏｃ基を脱離。

ｄ）　　ＤＭＦ　１５ｍｆｆ１で４回洗浄。

ｅ）　イソプロパツール１５ｍ１！、で１回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法（Ｅ、Ｋａｉｓｅｒ　ｅｔ　ａ
ｌ、、　Ａｎａｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、ｆ土、５９５　（１９７０））に
より、Ｆ＋ｗｏｃ基が完全に除去したことを確認し、も
し、不完全ならば上記の除去サイクルを繰り返した。ま
た、完全に除去されているならば、以下に示す縮合サイ
クルに供した。

ｆ）　　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたＨ−Ｐｒｏ
樹脂をＤＭＰ１５ｍｌで２回振とうすることによって膨
潤させた。

ｇ）　　Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ−（ＢｕＬ）ＯＨ（２０７ｍ
ｇ、　０．４５ミリモル）　、ＨＯＢｔ　（７３ｍｇ、
　０．５４ミリモル）のＤＭＦ（１５ｍｌ）を加え、１
分間振とう。

ｈ）１Ｍジシクロへキシルカルボジイミド塩化メチレン
溶液０．５　ｍ　ｌを添加し、７００分間振う。

ｉ）　　ＤＭＦ　１５ｍｊ！で２回洗浄。

ｊ）　イソプロパツール１５ｍｆで２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によって縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルを繰り返した。

Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−樹脂を用いている場合は、ここでの
Ｐｍｏｃ基除去サイクルとして以下の方法を用いた。

ｋ）　　ＤＭＦ　１５ｍｆ中、１分間振とう（１回）。

１）０．２％ピペリジン−〇ＭＦ溶液１５ｍｌ中で５分
間振とう後、再び０．２％ピペリジン−〇ＭＦ溶液１５
ｍｌで３０分振とうし、Ｆｍｏｃ基を脱離。

ｍ）　　ＤＭＦ　１５ｍｆで２回洗浄。

ｎ）　イソプロパツール１５ｍ１で１回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によってＦｍｏｃ基が除去され
ていることを確認した、そしてｇ）ステップをＢｏｃ−
Ｉｌｅ−０）１で行なう縮合サイクルに付した。こうし
てＢｏｃ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ樹脂を得、ついで、
樹脂からの脱離工程に供した。

すなわち、塩化メチレン１５ｍ１で２回洗浄し、塩化メ
チレン（６ｍｆ）−アニソール（１，０ｍ　ｌ　）チオ
フェノール（０，３８ｍ／り混合溶液に懸濁、続いて、
トリフルオロ酢酸（１２ｍｆ）−塩化メチレン（１，４
ｍ　ｌ　）を加え、１時間振とうした。

樹脂をろ過し、得られたろ液を減圧濃縮して、残渣にエ
ーテルを加え、ろ過することによって、得られる白色粉
末を逆相液体クロマトグラフィーに供し、求めるＩｌｅ
−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ画分を分取し、得られる溶出画分を濃
縮乾固した。ついで、蒸留水を加え数回濃縮乾固を繰り
返した後、少量の蒸留水にとかし、凍結乾燥した。続い
て、これをイオン交換樹脂カラムに付しＴＦＡを除去し
た。再び、少量の蒸留水に溶解し、凍結乾燥した。こう
して精製されたＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏを得た。精製物
の一部をとりＦＡＢ質量分析器により分子量測定を行っ
てｔａ／ｚ　：３９２　（Ｍ゛十Ｈとなり理論値に一致
した。さらに、６Ｎ−Ｈ（／！水溶液で加水分解し、ア
ミノ酸分析に供したところＩｌｅ　　１．　Ｏ０１Ｔｙ
ｒ　　１．０２、Ｐｒｏ　１．１０の比となりこれもま
た理論値と一致した。従って、求めるペプチドが合成さ
れているこロマトグラフィーで純度よく合成されている
ことを確認した。

実施例２〜３１上記実施例と同様の方法により下記化合物をそれぞれ合
成した。

実施例３２　活性評価活性の測定にはＦｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｍｅ
ｎｉｎ　ｏｓｅ　ｔｉｃｕｍ由来のプロリルエンドペプ
チダーゼ（ＥＣ３，４゜２１．２６）と合成基質Ｚ−Ｇ
ｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡを用いた。

試料のペプチドは酵素反応時に１ｍＭ、０．３ｍＭ、０
．１ｍＭ、０．０３ｍＭ、０．０１ｍＭとなる様に４０
％ジオキサン水溶液に溶解した。活性の強いものは更に
希釈して用いた。

試験は、まず０．５　ｍ　ｌの０．１　Ｍリン酸ナトリ
ウム系緩衝液（ｐＨ７）、上記試料溶液０．１２５ｍｊ
！、２ｍＭ　　Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ　４０％ジ
オキサン水溶液０．１２５ｍｆを混合し、３０°Ｃの恒
温槽に５分ブレインキュベートを行った。次に、０．２
　Ｕ　／　ｍ　ｌの酵素０．０５　Ｍリン酸ナトリウム
系緩衝液を０．０５ｍｊ２加え攪拌、３０°Ｃで１０分
間インキュベートした。反応の停止には１．０　ｍ　ｌ
のトリトンＸ−１００酢酸ナトリウム緩衝液（１０ｇ　
、　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００／９５ｍ１　１Ｍ酢酸ナ
トリウム緩衝液、ｐ　Ｈ４，０）を加えた。

活性は４１０ｎｍの吸光度を測定し、下の算式より酵素
活性を導き、対照の５０％の活性となる濃度をＩＣ，。

値とした。

既知の阻害剤も合わせて、表に示した。

活性データの一部を〔発明の効果〕以上より明らかなように、本発明のペプチドは、プロリ
ルエンドベプチターゼの活性阻害効果を有し、健忘症の
予防、治療剤としても使用できる栄養組成物として効め
で有用である。

Claims

【特許請求の範囲】１、下記構造式のいずれかで示されるペプチドおよびそ
の塩Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−ＰｒｏＡｌａ−Ｉｌｅ−ＰｒｏＡｌａ−Ｐｈｅ−ＰｒｏＰｈｅ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＨｉｓ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＶａｌ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−ＰｈｅＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＶａｌＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＧｌｕＩｌ
ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐ
ｒｏ−ＩｌｅＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ
−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖ
ａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
−Ｐｒｏ−ＩｌｅＶａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＧｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＬｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＧｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ２、下記構造式のいずれかで示されるペプチドおよび／
またはその医薬上許容される塩を有効成分として含有す
る栄養組成物。Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＡｌａ−Ｉｌｅ−ＰｒｏＡｌａ−Ｐｈｅ−ＰｒｏＰｈｅ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＨｉｓ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＶａｌ−Ｌｅｕ−ＰｒｏＶａｌ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＬｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−ＰｈｅＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＶａｌＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＧｌｕＩｌ
ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐ
ｒｏ−ＩｌｅＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ
−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−ＰｒｏＴｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｒｏ−Ｐｈｅ
−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＶａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＧｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＬｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＶａｌ−Ｇｌｕ
−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＧｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉ
ｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ３、健忘症の予防または治療効果を有するものである請
求項２記載の組成物。