JPS59219239A - Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の精製方法 - Google Patents
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の精製方法Info
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- JPS59219239A JPS59219239A JP9449583A JP9449583A JPS59219239A JP S59219239 A JPS59219239 A JP S59219239A JP 9449583 A JP9449583 A JP 9449583A JP 9449583 A JP9449583 A JP 9449583A JP S59219239 A JPS59219239 A JP S59219239A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＢ型肝炎ウィルスの表面抗原Ｃ以下、ｌ−ｌＢ
ｓ′抗原と略称する）の精製法、さらに詳しくはセルロ
ースを硫酸エステル化層て得られるセルロース硫酸エス
テルを用いてカラムクロマトグラフィーによりＨＢｓ抗
原を高度に精゛製する方法に関する。
ｓ′抗原と略称する）の精製法、さらに詳しくはセルロ
ースを硫酸エステル化層て得られるセルロース硫酸エス
テルを用いてカラムクロマトグラフィーによりＨＢｓ抗
原を高度に精゛製する方法に関する。
発明の技術的背景と産業上の利用分野
Ｂ型肝炎は主として血液を介してＪＥ染するＤＮＡ型の
核酸を持つ直径４２ ｎｍのウィルスによって引き起こ
される。このＢ型肝炎ウィルスは急性肝炎を引き起こす
だけでなく、ウィルスの持続感染により慢性肝炎、肝硬
変、また恐らく肝細胞ガンをも引き起こす。Ｂ、５肝炎
は凹界中に広く分布し、全く自覚症状なしに長い間ウィ
ルスを保持している潜在的ウィルス保菌者（以下単にキ
ャリアという）も非常に多く存在する。そのウィルスの
キャリアは日本人の総人口の２〜３％、すなわち２００
〜３００万人いると言われ、東南アジア・アフリカでは
その住民の１０〜１５％に達しており、世界中では約２
億人がこのウィルスのキャリアであると推定されている
。
核酸を持つ直径４２ ｎｍのウィルスによって引き起こ
される。このＢ型肝炎ウィルスは急性肝炎を引き起こす
だけでなく、ウィルスの持続感染により慢性肝炎、肝硬
変、また恐らく肝細胞ガンをも引き起こす。Ｂ、５肝炎
は凹界中に広く分布し、全く自覚症状なしに長い間ウィ
ルスを保持している潜在的ウィルス保菌者（以下単にキ
ャリアという）も非常に多く存在する。そのウィルスの
キャリアは日本人の総人口の２〜３％、すなわち２００
〜３００万人いると言われ、東南アジア・アフリカでは
その住民の１０〜１５％に達しており、世界中では約２
億人がこのウィルスのキャリアであると推定されている
。
Ｂ型肝炎を予防するには、通當高度に精製した１−１８
ｇ抗原を不活化してＢ型肝炎ワクチンとして用いる方法
が有効であり、このようなり３肝炎ワクチンは医療従事
者等のＢ型肝炎に感染する危険性が高い人々をＢ型肝炎
の感染から守るだけでなく、キャリアの新しい発生を防
ぎ、最終的には地上からＢ型肝炎を消滅させることも期
待される。
ｇ抗原を不活化してＢ型肝炎ワクチンとして用いる方法
が有効であり、このようなり３肝炎ワクチンは医療従事
者等のＢ型肝炎に感染する危険性が高い人々をＢ型肝炎
の感染から守るだけでなく、キャリアの新しい発生を防
ぎ、最終的には地上からＢ型肝炎を消滅させることも期
待される。
ところでこのＨＢｓ抗原は３種類のＢ型肝炎ウィルス関
連粒子、すなわち直径４２ｎｍで核酸を含有する直径２
７ｎｍのコアを内部に持つＢｌｐ肝炎ウィルスそのもの
であるディン（Ｄａｎｅ）粒子、核酸を含まない直径２
２ ｎｍで長さ数十〜数百ｎｍの桿状粒子、および直径
２２ ｎｍの小型球型粒子の表面に保有されており、こ
のＨＢｓ抗原に対する抗体が該Ｂ型肝炎ウィルスの防御
抗体となり、かかる作用機構を利用してＢ型肝炎ワクチ
ンとして用いられる。
連粒子、すなわち直径４２ｎｍで核酸を含有する直径２
７ｎｍのコアを内部に持つＢｌｐ肝炎ウィルスそのもの
であるディン（Ｄａｎｅ）粒子、核酸を含まない直径２
２ ｎｍで長さ数十〜数百ｎｍの桿状粒子、および直径
２２ ｎｍの小型球型粒子の表面に保有されており、こ
のＨＢｓ抗原に対する抗体が該Ｂ型肝炎ウィルスの防御
抗体となり、かかる作用機構を利用してＢ型肝炎ワクチ
ンとして用いられる。
従来技術
このようなり型肝炎ワクチンを製造するには、Ｂ型肝炎
ウィルスキャリアの血漿、遺伝子操作技術を利用した組
換え体の培養物や培養上澄などからＨＢｓ抗原を高度に
精製する必要がある。このＨＢｓ抗原の精製には一般に
その換作上高度の熟練を要し、それが工業的規模でのワ
クチンの製造を阻害する大きな原因となっている。
ウィルスキャリアの血漿、遺伝子操作技術を利用した組
換え体の培養物や培養上澄などからＨＢｓ抗原を高度に
精製する必要がある。このＨＢｓ抗原の精製には一般に
その換作上高度の熟練を要し、それが工業的規模でのワ
クチンの製造を阻害する大きな原因となっている。
現在ＨＢｓ抗原の最も一般的な精・製法として知られて
いるものに密度勾配改心法［Ｖｙａ ｓ 、Ｇ、Ｎ等、
Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０８ 、１１１４（１９
７２） ；Ｉ（ｉｒｓｌｘｍａｎ Ｓ、Ｚ 、Ｐｒｏ
ｃｅｅｄｉｎｇ ｏ［ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍ
ｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅ ＵＳＡ、７１ 、３３４５
（１９７４）〕があるが、この方法には多量の塩化セシ
ウムおよび蔗糖を必要とするほか、超遠心機ならびに精
製段階およびその規模に応じて各種のローターを必要と
し、多量の経費がかかる欠点を有する。
いるものに密度勾配改心法［Ｖｙａ ｓ 、Ｇ、Ｎ等、
Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０８ 、１１１４（１９
７２） ；Ｉ（ｉｒｓｌｘｍａｎ Ｓ、Ｚ 、Ｐｒｏ
ｃｅｅｄｉｎｇ ｏ［ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍ
ｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅ ＵＳＡ、７１ 、３３４５
（１９７４）〕があるが、この方法には多量の塩化セシ
ウムおよび蔗糖を必要とするほか、超遠心機ならびに精
製段階およびその規模に応じて各種のローターを必要と
し、多量の経費がかかる欠点を有する。
また抗原抗体反応を利用したアフィニティークロマトグ
ラフィーによりＨＢｓ抗原を精製する方法［Ｈｏｕｗｅ
ｎ、Ｂ等、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＩｍｍｕｎｏＪｏ
ｇｉｃａＪＭｅｔｈｏｄ、 ８．１８５（１９７５））
も提案されており、この方法は精製効率がきわめて良好
である反面、工業的規模で行なう場合にはクロマトグラ
フィーゲル用ＨＢｓ抗体を得るために大計のｌ−Ｉｎ
ｓ抗体陽性人血清が必要であるうえ、さらにＨＢｓ抗体
を精製し、シアノゲンブロマイドなどを用いてゲルマト
リックスに結合させアフィニティーゲルを作らなくては
ならない。またこのアフィニティーゲルを用いたカラム
クロマトグラフィーでは、 ＨＢｓ抗体とゲルとの結合
が比較的弱いためにＩ−ＩＢ ｇ抗体およびＨＢｓ抗体
−抗原反応物が溶出時に脱離する恐れがある。これらが
ワクチンに混入した場合には自己免疫疾患や、腎臓病を
引き起こす恐れがある。
ラフィーによりＨＢｓ抗原を精製する方法［Ｈｏｕｗｅ
ｎ、Ｂ等、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＩｍｍｕｎｏＪｏ
ｇｉｃａＪＭｅｔｈｏｄ、 ８．１８５（１９７５））
も提案されており、この方法は精製効率がきわめて良好
である反面、工業的規模で行なう場合にはクロマトグラ
フィーゲル用ＨＢｓ抗体を得るために大計のｌ−Ｉｎ
ｓ抗体陽性人血清が必要であるうえ、さらにＨＢｓ抗体
を精製し、シアノゲンブロマイドなどを用いてゲルマト
リックスに結合させアフィニティーゲルを作らなくては
ならない。またこのアフィニティーゲルを用いたカラム
クロマトグラフィーでは、 ＨＢｓ抗体とゲルとの結合
が比較的弱いためにＩ−ＩＢ ｇ抗体およびＨＢｓ抗体
−抗原反応物が溶出時に脱離する恐れがある。これらが
ワクチンに混入した場合には自己免疫疾患や、腎臓病を
引き起こす恐れがある。
また池の方法として、スルホン基を有する多糖類のデキ
ストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリンなどをシ
アノゲンブロマイドを用いてセファロースＣＬ−４Ｂ（
スウェーデン・ファルマシア社製）あるいはセファロー
スＣＬ−６Ｂ（同上）に結合させてアフィニティー、ゲ
ルとし、これを用いてＨＢｓ抗原を精製する方法が提案
されているが［Ｍ、 Ａｎｄｅｒ：５ｓｏｎ等、 Ｖｏ
ｘ Ｓａｎｇｅ ４１ ＊ ９１〜９７（１９８１）ｉ
米国特許第４．１３８．２８７冊；特開昭５２−１１４
０１８］、そのようなアフィニティーゲルはその製造工
程が複雑であり、またシアノゲンブロマイドを取り扱う
ことには危険が伴なに、これらの化合物をセファロース
などの担体ゲルに結合させるには限界があり、均一な品
質のアフィニティーゲルおよび高度精製度をもたらすゲ
ルは得がたい。さらにシアノゲンブロマイドを用いた結
合は、その結合が比較的弱いので、スルホン基を有する
多糖類が脱離し、精製ＨＢ ｓ抗原に混入する恐れもあ
る。
ストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリンなどをシ
アノゲンブロマイドを用いてセファロースＣＬ−４Ｂ（
スウェーデン・ファルマシア社製）あるいはセファロー
スＣＬ−６Ｂ（同上）に結合させてアフィニティー、ゲ
ルとし、これを用いてＨＢｓ抗原を精製する方法が提案
されているが［Ｍ、 Ａｎｄｅｒ：５ｓｏｎ等、 Ｖｏ
ｘ Ｓａｎｇｅ ４１ ＊ ９１〜９７（１９８１）ｉ
米国特許第４．１３８．２８７冊；特開昭５２−１１４
０１８］、そのようなアフィニティーゲルはその製造工
程が複雑であり、またシアノゲンブロマイドを取り扱う
ことには危険が伴なに、これらの化合物をセファロース
などの担体ゲルに結合させるには限界があり、均一な品
質のアフィニティーゲルおよび高度精製度をもたらすゲ
ルは得がたい。さらにシアノゲンブロマイドを用いた結
合は、その結合が比較的弱いので、スルホン基を有する
多糖類が脱離し、精製ＨＢ ｓ抗原に混入する恐れもあ
る。
発明の目的
本発明者等は、カラムクロマトグラフィーにより、より
簡単により安価に１−ＩＢｓ抗原を精製する方法を見い
出すべく種々研究を重なた結果、一定重合度を有するセ
ルロースを硫酸エステル化して得られるセルロース硫酸
エステルがＨＢｓ抗原と特異的に親和性を有することを
見い出し、このセルロース硫酸エステルを用いて血清お
よび血漿などの生化学物質からＨＢｓ抗原を精製すると
、きわめて高い精製度かつ高収率で、しかもきわめて簡
単に目的とする高度精製ＨＢｓ抗原が得られることを知
り、本発明を完成するに至った。すなわち本発明はＢ型
肝炎ワクチンの工業的な製造に有用なＨＢｓ抗原の改良
精製法を提供ｊるものであり、セルロース硫酸エステル
を用いカラムクロマトグラフィーによるｌ−Ｉｎ５抗原
の高度精製法を提供するものである。
簡単により安価に１−ＩＢｓ抗原を精製する方法を見い
出すべく種々研究を重なた結果、一定重合度を有するセ
ルロースを硫酸エステル化して得られるセルロース硫酸
エステルがＨＢｓ抗原と特異的に親和性を有することを
見い出し、このセルロース硫酸エステルを用いて血清お
よび血漿などの生化学物質からＨＢｓ抗原を精製すると
、きわめて高い精製度かつ高収率で、しかもきわめて簡
単に目的とする高度精製ＨＢｓ抗原が得られることを知
り、本発明を完成するに至った。すなわち本発明はＢ型
肝炎ワクチンの工業的な製造に有用なＨＢｓ抗原の改良
精製法を提供ｊるものであり、セルロース硫酸エステル
を用いカラムクロマトグラフィーによるｌ−Ｉｎ５抗原
の高度精製法を提供するものである。
本発明は８ｇ肝炎ウィルスキャリアの血清または血漿、
遺伝子操作を利用した組換え体の培養物や培養上澄液な
どのＨＢｓ抗原含有液をカラムクロマトグラフ・ｆ−に
よりｌ−Ｉｎ５抗原を分離精製する方法において、クロ
マトグラフィー用ゲルとして一定重合度を有するセルロ
ースを硫酸エステル化して得うれるセルロース硫酸エス
テルを用いることを特徴とする。
遺伝子操作を利用した組換え体の培養物や培養上澄液な
どのＨＢｓ抗原含有液をカラムクロマトグラフ・ｆ−に
よりｌ−Ｉｎ５抗原を分離精製する方法において、クロ
マトグラフィー用ゲルとして一定重合度を有するセルロ
ースを硫酸エステル化して得うれるセルロース硫酸エス
テルを用いることを特徴とする。
本発明で用いられるセルロース硫酸エステルとは、セル
ロースを硫酸エステル化して得られるのであるが、好ま
しくは結晶セルロースあるいは、結晶領域および非結晶
領域からなるセルロースを硫酸エステル化したものが良
い。この場合、得られたセルロース硫酸エステルは原料
の形状を保持し、物理的安定性にすぐれ、クロマトグラ
フィー用ゲルとして好適である。これらの原料セルロー
類はすでに市販されており例えは、アビセル（旭化成社
製）、セルロファインｃｃ−１５、同ＧＨ−２５、同Ｇ
Ｃ−１００、同ＧＣ−２００（チッソ社製）などがある
。これらのゲルを例えばピリジンなどの有機溶媒の存在
下クロルスルホン酸、無水硫酸などを作用させることに
より所望のセルロース硫酸エステルが得られる。
ロースを硫酸エステル化して得られるのであるが、好ま
しくは結晶セルロースあるいは、結晶領域および非結晶
領域からなるセルロースを硫酸エステル化したものが良
い。この場合、得られたセルロース硫酸エステルは原料
の形状を保持し、物理的安定性にすぐれ、クロマトグラ
フィー用ゲルとして好適である。これらの原料セルロー
類はすでに市販されており例えは、アビセル（旭化成社
製）、セルロファインｃｃ−１５、同ＧＨ−２５、同Ｇ
Ｃ−１００、同ＧＣ−２００（チッソ社製）などがある
。これらのゲルを例えばピリジンなどの有機溶媒の存在
下クロルスルホン酸、無水硫酸などを作用させることに
より所望のセルロース硫酸エステルが得られる。
このセルロース硫酸エステルを用いてカラムクロマトグ
ラフィーによってＨＢｓ抗原を精製するには通常のカラ
ムクロマトグラフィーで採用される操作が適用されるが
、例えばカラムに該セルロース硫酸エステル（好ましく
は球状粒子に成形したゲル）を充填し、これをイオン強
度が０．００１〜１．０程度である適当な緩衝液、例え
ばマツキルベン（Ｍｃｌ １ｖａｉｎｅｓ ）緩衝液（
Ｐｉ−１，５，０）あるイハ０．０１Ｍリン酸緩衝食塩
水（ｐｉ−１７，２）、０．１Ｍ食塩を含むクエン酸緩
衝液（ｐＨ７，２）などで平衡化したのちに、カラムに
ＨＢｓ抗原含有液を通してＨＢｓ抗原を吸着させ、上記
平衡化に用いた緩衝液にて洗浄する。このあとイオン強
度が０．１〜５．０程度で、そのイオン強度が上記平衡
化、洗浄時に用いた緩衝液のイオン強度より大である適
当な緩衝液（ｐＨ５〜１０）、例えば０，６Ｍ食塩を含
むマツキルベン緩衝液（ｐＨ４〜８）、０．６Ｍ食塩竹
むリン酸緩衝液（ｐｉ−Ｉ５〜９）などにて溶出するこ
とにより、高度に精製されたＨＢｓ抗原が得られる。
ラフィーによってＨＢｓ抗原を精製するには通常のカラ
ムクロマトグラフィーで採用される操作が適用されるが
、例えばカラムに該セルロース硫酸エステル（好ましく
は球状粒子に成形したゲル）を充填し、これをイオン強
度が０．００１〜１．０程度である適当な緩衝液、例え
ばマツキルベン（Ｍｃｌ １ｖａｉｎｅｓ ）緩衝液（
Ｐｉ−１，５，０）あるイハ０．０１Ｍリン酸緩衝食塩
水（ｐｉ−１７，２）、０．１Ｍ食塩を含むクエン酸緩
衝液（ｐＨ７，２）などで平衡化したのちに、カラムに
ＨＢｓ抗原含有液を通してＨＢｓ抗原を吸着させ、上記
平衡化に用いた緩衝液にて洗浄する。このあとイオン強
度が０．１〜５．０程度で、そのイオン強度が上記平衡
化、洗浄時に用いた緩衝液のイオン強度より大である適
当な緩衝液（ｐＨ５〜１０）、例えば０，６Ｍ食塩を含
むマツキルベン緩衝液（ｐＨ４〜８）、０．６Ｍ食塩竹
むリン酸緩衝液（ｐｉ−Ｉ５〜９）などにて溶出するこ
とにより、高度に精製されたＨＢｓ抗原が得られる。
本抛明の精製法によれば、用いるセルロース硫酸エステ
ルはセルロースのマトリックスに直接スルホン基が結合
しており、ｌ−Ｉｎ５抗原の特異的吸着能にすぐれ、Ｈ
Ｂｓ抗原の精製度は数十倍に及び、しかもカラムクロマ
トグラフィーによるＨＢｓ抗原の回収率は９０％以上１
００俤近くに達する。この方法は工業的規模においても
簡単な操作で行ないうるうえ、特別の高価な試薬も必要
とせず、きわめて安価にＨＢｓ抗原の工業的精製を行な
うことができ、ゲルの安定性にもすぐれ、しかも得られ
る製品に従来法におけるような抗原抗体反応物などの不
純物が混入する恐れのない利点を合わせ有する。本発明
の方法は従来の技術であ、Ｌ％心分離△ あるいはイオン交換クロマトグラフィーと組み合わせる
ことも可能であり、その際は従来の結果に比して非常に
すぐれた結果を得ることが出来る。
ルはセルロースのマトリックスに直接スルホン基が結合
しており、ｌ−Ｉｎ５抗原の特異的吸着能にすぐれ、Ｈ
Ｂｓ抗原の精製度は数十倍に及び、しかもカラムクロマ
トグラフィーによるＨＢｓ抗原の回収率は９０％以上１
００俤近くに達する。この方法は工業的規模においても
簡単な操作で行ないうるうえ、特別の高価な試薬も必要
とせず、きわめて安価にＨＢｓ抗原の工業的精製を行な
うことができ、ゲルの安定性にもすぐれ、しかも得られ
る製品に従来法におけるような抗原抗体反応物などの不
純物が混入する恐れのない利点を合わせ有する。本発明
の方法は従来の技術であ、Ｌ％心分離△ あるいはイオン交換クロマトグラフィーと組み合わせる
ことも可能であり、その際は従来の結果に比して非常に
すぐれた結果を得ることが出来る。
実施例
つぎに参考例および実施例を挙げて本発明をさらに具体
的に説明する。
的に説明する。
参考例１
０°Ｃ以下の温度にてピリジン６００＋＋ｙＪにクロル
スルホン酸１１７ｆを滴下し混合する。滴下終了後、混
液を加熱し、６５〜７０°Ｃに昇温する。この中に結晶
セルロースであるクロマト用アビセル（旭化成社製）８
（ｌを加え攪拌下６５〜７０°Ｃにて４時間保持する。
スルホン酸１１７ｆを滴下し混合する。滴下終了後、混
液を加熱し、６５〜７０°Ｃに昇温する。この中に結晶
セルロースであるクロマト用アビセル（旭化成社製）８
（ｌを加え攪拌下６５〜７０°Ｃにて４時間保持する。
反応終了後、冷却し、１０％水酸化ナトリウム水溶液を
加えて中和する。ゲルを沖過分離し、０．０１Ｍ！Ｊン
酸緩衝食塩液で充分に洗浄してセルロース硫酸エステル
ゲルを得る。
加えて中和する。ゲルを沖過分離し、０．０１Ｍ！Ｊン
酸緩衝食塩液で充分に洗浄してセルロース硫酸エステル
ゲルを得る。
参考例２
０℃以下の温度にてピリジン６００ｍ１にクロル−、ス
ルホン酸１１７ｆＩを滴下し混合する。滴下終了後、混
液を加熱し、６５〜７０°Ｃに昇温する。この中にセル
ロファインＧＣ−１５（チッソ社製）８０ｇを加え、攪
拌下６５〜７０°Ｃにて３時間保持する。反応終了後、
冷却し、１０％水酸化ナトリウム水溶液を加えて中和す
る。ゲルを沖過分離し、０．ＯＩＭＩＪン酸緩衝食塩水
で充分に洗浄してセルロース硫酸エステルゲルヲ得ル。
ルホン酸１１７ｆＩを滴下し混合する。滴下終了後、混
液を加熱し、６５〜７０°Ｃに昇温する。この中にセル
ロファインＧＣ−１５（チッソ社製）８０ｇを加え、攪
拌下６５〜７０°Ｃにて３時間保持する。反応終了後、
冷却し、１０％水酸化ナトリウム水溶液を加えて中和す
る。ゲルを沖過分離し、０．ＯＩＭＩＪン酸緩衝食塩水
で充分に洗浄してセルロース硫酸エステルゲルヲ得ル。
実施例１
前記参考例１で得られたセルロース硫酸エステルゲルを
カラム（２６，４ｍｙｎφｘ１ｏｓ龍）に充填し、これ
に０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２７Ｍクエン
酸緩衝液（ｐＨ７，４０）を通液し平衡化する。このカ
ラムにＨＢｓ抗原陽性人血漿（ＨＢｓ抗原力価１ ：
２６．０００ＲＰＩ−ＩＡＣ逆受身血球凝集反応）、蛋
白質台ｉｔ７４．５ｔｎｆ！／ｍｌ（ｏ−り一法）、比
活性（ＲＰＨＡ／蛋白質含量）３４９）１（１＋Ｊを上
記緩衝液で３倍に希釈した液を通液する。その後に、上
記緩衝液を通し、充分に洗浄する。ついで０．６Ｍ塩化
ナトリウムを含む０．０２７Ｍクエン酸緩衝液（ＰＨ７
，２０）で溶出し、溶出画分４５．０がｌを得る。
カラム（２６，４ｍｙｎφｘ１ｏｓ龍）に充填し、これ
に０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２７Ｍクエン
酸緩衝液（ｐＨ７，４０）を通液し平衡化する。このカ
ラムにＨＢｓ抗原陽性人血漿（ＨＢｓ抗原力価１ ：
２６．０００ＲＰＩ−ＩＡＣ逆受身血球凝集反応）、蛋
白質台ｉｔ７４．５ｔｎｆ！／ｍｌ（ｏ−り一法）、比
活性（ＲＰＨＡ／蛋白質含量）３４９）１（１＋Ｊを上
記緩衝液で３倍に希釈した液を通液する。その後に、上
記緩衝液を通し、充分に洗浄する。ついで０．６Ｍ塩化
ナトリウムを含む０．０２７Ｍクエン酸緩衝液（ＰＨ７
，２０）で溶出し、溶出画分４５．０がｌを得る。
この溶出画分のＨＢｓ抗原価は１ ： ５．１２０ＲＰ
ＨＡであり、蛋白質含量１．２５〜／ｍｌで比活性４．
０９６であった。ＨＢｓ抗原の回収率は８８．６％で、
精製度（溶出画分の比活性／原料血漿の比活性）は１１
．７倍に達した。
ＨＡであり、蛋白質含量１．２５〜／ｍｌで比活性４．
０９６であった。ＨＢｓ抗原の回収率は８８．６％で、
精製度（溶出画分の比活性／原料血漿の比活性）は１１
．７倍に達した。
実施例２
前記参考例２で得られたセルロース硫酸エステルゲルを
カラム（２６，４ｍｍφｘｉｏｓｍｍ）に充填し、これ
に０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２７Ｍクエン
酸緩衝液（ｐＩ−１ｓ、ｏ Ｏ）を通液し平衡化する。
カラム（２６，４ｍｍφｘｉｏｓｍｍ）に充填し、これ
に０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２７Ｍクエン
酸緩衝液（ｐＩ−１ｓ、ｏ Ｏ）を通液し平衡化する。
このカラムにｌ−ｌＢ５抗原陽性人血漿（ＨＢｓ抗原力
価１ ： ２６０００ＲＰＨＡ、蛋白質含量７４．５ｆ
ｆｆ／πム比活性３４９］１６ｍ？を上記緩衝液で３倍
に希釈した液を通液する。この後に上記緩衝液を通し、
充分に洗浄する。ついで０．６Ｍ塩化ナトリウムを含む
０．０２７Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ５，００）で溶出し
、溶出画分５２ｍ１を得る。
価１ ： ２６０００ＲＰＨＡ、蛋白質含量７４．５ｆ
ｆｆ／πム比活性３４９］１６ｍ？を上記緩衝液で３倍
に希釈した液を通液する。この後に上記緩衝液を通し、
充分に洗浄する。ついで０．６Ｍ塩化ナトリウムを含む
０．０２７Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ５，００）で溶出し
、溶出画分５２ｍ１を得る。
この溶出画分のＨＢｓ抗原価は１ニア６８０ＲＰＨＡで
あり、蛋白質含量２．１２Ｗｆｌｌπｌで比活性３．６
２３であった。ＨＢｓ抗原の回収率９６．０％で、精製
度は１０．４倍であった・。
あり、蛋白質含量２．１２Ｗｆｌｌπｌで比活性３．６
２３であった。ＨＢｓ抗原の回収率９６．０％で、精製
度は１０．４倍であった・。
実施例３
前記実施例２で用いたセルロース硫酸エステルゲルを充
填したカラムに、０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．
０２７Ｍマツキルベン緩衝液（ｐＩ−１７，２０）を通
し平衡化する。このカラムにｌ−ｌＢｓＢｓ抗原陽性人
血清２０含／記緩衝液で３倍量に希釈したものを通液す
る。その後、上記緩衝液で充分に洗浄する。ついで０．
６Ｍ塩化す） ＩＪウムを含む０．０２７Ｍマツキルベ
ン緩衝液（ｐＨ７，２０）で溶出する。
填したカラムに、０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．
０２７Ｍマツキルベン緩衝液（ｐＩ−１７，２０）を通
し平衡化する。このカラムにｌ−ｌＢｓＢｓ抗原陽性人
血清２０含／記緩衝液で３倍量に希釈したものを通液す
る。その後、上記緩衝液で充分に洗浄する。ついで０．
６Ｍ塩化す） ＩＪウムを含む０．０２７Ｍマツキルベ
ン緩衝液（ｐＨ７，２０）で溶出する。
この結果を第１表に示す。第１表に示すように、ｌ−ｌ
Ｂｓ抗原は溶出画分にはソ回収され、精製度は約１６倍
に達した。
Ｂｓ抗原は溶出画分にはソ回収され、精製度は約１６倍
に達した。
＊１）ラジオイムノアッセイ（ダイナボット社製、オー
セリアｌｌ−１２５）で測定。
セリアｌｌ−１２５）で測定。
（黒用正身、斉藤晴−： Ｊａｐａｎ−Ｊ９Ｍｅｄ。
Ｓｃｉ、 Ｂｉｏｌ、、 ３２ 、４７〜５２（１９７
９）を参照） ＊２）流出液と洗浄液を含む。
９）を参照） ＊２）流出液と洗浄液を含む。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１１ＢＷ肝炎ウィルス表面抗原含有液をカラムクロマ
トグラフィーにかけて精製Ｂ型肝炎ウィルス表面抗原を
得る方法において、クロマトグラフィー用ゲルとしてセ
ルロース硫酸エステルを用いることを特徴とするＢ型肝
炎つィルス表面抗原の精製方法。 （２＋ セルロース硫酸エステルが、結晶セルロース
または結晶領域および非結晶領域からなるセルロースの
硫酸エステル体である前記第（１）項記載の方法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9449583A JPS59219239A (ja) | 1983-05-28 | 1983-05-28 | Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の精製方法 |
| US06/586,702 US4515714A (en) | 1983-03-09 | 1984-03-06 | Method for purification of hepatitis B virus surface antigen |
| CA000449009A CA1216790A (en) | 1983-03-09 | 1984-03-07 | Method for purification of hepatitis b virus surface antigen |
| AT84102501T ATE38152T1 (de) | 1983-03-09 | 1984-03-08 | Verfahren zur reinigung des hepatitis-b-virusoberfl|chenantigens. |
| KR1019840001160A KR880002586B1 (ko) | 1983-03-09 | 1984-03-08 | B형 간염 바이러스 표면 항원의 정제방법 |
| DE8484102501T DE3474775D1 (en) | 1983-03-09 | 1984-03-08 | Method for purification of hepatitis b virus surface antigen |
| EP84102501A EP0118885B1 (en) | 1983-03-09 | 1984-03-08 | Method for purification of hepatitis b virus surface antigen |
| SG88/89A SG8889G (en) | 1983-03-09 | 1989-02-14 | Method for purification of hepatitis b virus surface antigen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9449583A JPS59219239A (ja) | 1983-05-28 | 1983-05-28 | Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59219239A true JPS59219239A (ja) | 1984-12-10 |
| JPH0235726B2 JPH0235726B2 (ja) | 1990-08-13 |
Family
ID=14111877
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9449583A Granted JPS59219239A (ja) | 1983-03-09 | 1983-05-28 | Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59219239A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52114018A (en) * | 1976-03-18 | 1977-09-24 | Kabi Ab | Purification and isolation of hepatisis virus for producing vaccine |
-
1983
- 1983-05-28 JP JP9449583A patent/JPS59219239A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52114018A (en) * | 1976-03-18 | 1977-09-24 | Kabi Ab | Purification and isolation of hepatisis virus for producing vaccine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0235726B2 (ja) | 1990-08-13 |
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