JPS59190664A - 生物学的流体の螢光イムノアツセイ用基材 - Google Patents
生物学的流体の螢光イムノアツセイ用基材Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
背景
本発明は生物学的流体の螢光イムノアッセイに関する。
よシ詳しくは、本発明は特異的蛋白質およびその他の生
物学的物体(例、DNA)と結合することのできる螢光
イムノアッセイ用基材に関する。この基材は螢光イムノ
アッセイ(FIA)の特異性および感度を高め、従って
、特異的抗原および抗体に随伴する病気の診断において
有用である。本発明は、愛玩動物、実験室用動物および
家畜を冒す病気に対する獣医学的アッセイ並びにヒトニ
オける病気2よび病態のアクセイに2いて有用である。
物学的物体(例、DNA)と結合することのできる螢光
イムノアッセイ用基材に関する。この基材は螢光イムノ
アッセイ(FIA)の特異性および感度を高め、従って
、特異的抗原および抗体に随伴する病気の診断において
有用である。本発明は、愛玩動物、実験室用動物および
家畜を冒す病気に対する獣医学的アッセイ並びにヒトニ
オける病気2よび病態のアクセイに2いて有用である。
8iハ光アツセイは複雑な混合物における少量の物質を
検出するための強力な技術である。特に、それを認識す
る少量の抗原および抗体を検出しなければならない血液
のような体液の螢光イムノアッセイ(FIA)にお込て
有用である。
検出するための強力な技術である。特に、それを認識す
る少量の抗原および抗体を検出しなければならない血液
のような体液の螢光イムノアッセイ(FIA)にお込て
有用である。
FIAはその病気の特徴的な特別の抗原又は抗体に対し
て特異的である病気の診断に有用である。
て特異的である病気の診断に有用である。
しかしながら、信頼性のある診断のためには、検出すべ
き物質がしばしば分析される流体中に極めて少量存在す
るために、特異的であるのみならず、又感度が高くなけ
ればならない。
き物質がしばしば分析される流体中に極めて少量存在す
るために、特異的であるのみならず、又感度が高くなけ
ればならない。
FIAの感度を高める従来の試みの中にt/′i選択的
に蛋白質と結合する基材の開発或l/′1は使用が台筐
れる。これらの基材は抗原抗体間の免疫反応がよシ容易
に観察されるように固体表面に固定することができる。
に蛋白質と結合する基材の開発或l/′1は使用が台筐
れる。これらの基材は抗原抗体間の免疫反応がよシ容易
に観察されるように固体表面に固定することができる。
しかしながら、これらの基材は、一般的に、強く蛋白質
と結合しないポリスチレン或すはポリプロピレンのよう
な重合体よりなシ、従って、複雑な生物学的流体から微
量の蛋白質免疫原を選択する際には、使用上限度がある
。有用な診断アクセイには特別の抗体或いは抗原を効率
的に吸収する基材が必要とされる。
と結合しないポリスチレン或すはポリプロピレンのよう
な重合体よりなシ、従って、複雑な生物学的流体から微
量の蛋白質免疫原を選択する際には、使用上限度がある
。有用な診断アクセイには特別の抗体或いは抗原を効率
的に吸収する基材が必要とされる。
FIAは特別の発蛍光団よシ発光される光の検出を含む
ものであるから、感度は又そのように発光された光の強
度、およびその背景或−は散乱光に対する関係にも依存
する。発蛍光団の励起周波数に適合する入射波長の選択
は、感度を増大する際の一つの重要な要因である。米国
特許第41.3’10、!zグ号明細書には、重合体ビ
ーズを光散乱中心2よび散乱光を高めるバインダーで被
覆することよシなる固相免に基材が開示されて層る。基
材を改良し、透過光の量を増大するその他の方法も活発
に探索されている(例えば、米国特許裁乞λjζ00−
号明細書参照)。
ものであるから、感度は又そのように発光された光の強
度、およびその背景或−は散乱光に対する関係にも依存
する。発蛍光団の励起周波数に適合する入射波長の選択
は、感度を増大する際の一つの重要な要因である。米国
特許第41.3’10、!zグ号明細書には、重合体ビ
ーズを光散乱中心2よび散乱光を高めるバインダーで被
覆することよシなる固相免に基材が開示されて層る。基
材を改良し、透過光の量を増大するその他の方法も活発
に探索されている(例えば、米国特許裁乞λjζ00−
号明細書参照)。
閣墨
本発明(グ、三次元のコロイド状枠組みを形成する膨潤
性蛋白質結合重合体ゲル状物質およびその中ICランダ
ムIC分布された光散乱中心よりなる螢光イムノアッセ
イ用基材を提供するものである。
性蛋白質結合重合体ゲル状物質およびその中ICランダ
ムIC分布された光散乱中心よりなる螢光イムノアッセ
イ用基材を提供するものである。
より具体的に1は1不発明1−ま三次元マトリックスを
形成っ−る謄測往蛋白質結合重合体物質、前記重合体マ
トリックス中1・τ方布された可視光線を散乱すること
のできる粒状の非特異的光散乱中心、および前記重合体
マトリックス中に分散された特定の狭帯域螢光励起光線
を反射し、非特異的光線を吸収することのできる粒状の
特異的光散乱中心、よシなることを特徴とする螢光イム
ノアッセイ用基材を提供するものである。
形成っ−る謄測往蛋白質結合重合体物質、前記重合体マ
トリックス中1・τ方布された可視光線を散乱すること
のできる粒状の非特異的光散乱中心、および前記重合体
マトリックス中に分散された特定の狭帯域螢光励起光線
を反射し、非特異的光線を吸収することのできる粒状の
特異的光散乱中心、よシなることを特徴とする螢光イム
ノアッセイ用基材を提供するものである。
殆んどの固体基材と異なシ、本発明の基材は同様な大き
さの面積を有する、例えばポリスチレンする再水和可能
なフィルムである。このフィルムの特性は水性物質に曝
された際に液体を迅速に吸収する能力であり、再水和の
過程中に膨潤し、これによシ蛋白質のフィルム内の移動
を可能にするものであシ、その結果、例えば、特異的抗
体がそれらの相補的抗原に到達し、結合することができ
、或−は又その逆も可能であり、酵素はそれらの特異的
基質に到達することができる。
さの面積を有する、例えばポリスチレンする再水和可能
なフィルムである。このフィルムの特性は水性物質に曝
された際に液体を迅速に吸収する能力であり、再水和の
過程中に膨潤し、これによシ蛋白質のフィルム内の移動
を可能にするものであシ、その結果、例えば、特異的抗
体がそれらの相補的抗原に到達し、結合することができ
、或−は又その逆も可能であり、酵素はそれらの特異的
基質に到達することができる。
本発明の基材を用いた螢光イムノアッセイの感度を高め
る。
る。
フィルム内に運び込壕れた第一の反応体として導入され
てしる抗原成しは抗体が同定標識としての螢光染料分子
と結合する螢光イムノアッセイの光学的体系において、
該染料分子は染料の光吸収スペクトルに適合する波長の
光で励起される。この染料分子がその特異的励起スペク
トル内の光の光子を吸収すると電子がより高いエネルギ
ー状態に窩められ、次−で三重項状態変換によシ、よシ
低論エネルギー(よ〕長い波長)の光子が再発光される
。螢光を伴う特別の光散乱物はそのような光の検出器へ
の移動を高めることであろう。しかしながら、そのよう
な粒子は、又、元の励起光を吸収し、従って消滅させ、
それによシ染料の励起を妨げることとなるであろう。従
って、本発明の非特異的光散乱体は、励起光は吸収しな
いが、染料からの発光螢光は散乱することができるよう
に選ばtたものである。
てしる抗原成しは抗体が同定標識としての螢光染料分子
と結合する螢光イムノアッセイの光学的体系において、
該染料分子は染料の光吸収スペクトルに適合する波長の
光で励起される。この染料分子がその特異的励起スペク
トル内の光の光子を吸収すると電子がより高いエネルギ
ー状態に窩められ、次−で三重項状態変換によシ、よシ
低論エネルギー(よ〕長い波長)の光子が再発光される
。螢光を伴う特別の光散乱物はそのような光の検出器へ
の移動を高めることであろう。しかしながら、そのよう
な粒子は、又、元の励起光を吸収し、従って消滅させ、
それによシ染料の励起を妨げることとなるであろう。従
って、本発明の非特異的光散乱体は、励起光は吸収しな
いが、染料からの発光螢光は散乱することができるよう
に選ばtたものである。
本発明の基材の特異的光散乱中心は染料の螢光励起波長
に対応する狭い帯域の光のみを散乱するものである。こ
れらの特別の光散乱体はその光散乱スペクトルが螢光染
料のスペクトルを吸収する光に適合する顔料である。螢
光標識を励起するとのスペクトル範囲の波長を有する入
射光の移動は、このようにして高められる。場合にょシ
、異った波長の干渉背景光が吸収され、かようにこれら
の特別の光散乱体によシ消滅される。螢光光線の移動が
高められる一方、背景光はこれらの特別の光散乱体によ
り減少するので、本発明の基材を用いたFIAの感度が
改良される。
に対応する狭い帯域の光のみを散乱するものである。こ
れらの特別の光散乱体はその光散乱スペクトルが螢光染
料のスペクトルを吸収する光に適合する顔料である。螢
光標識を励起するとのスペクトル範囲の波長を有する入
射光の移動は、このようにして高められる。場合にょシ
、異った波長の干渉背景光が吸収され、かようにこれら
の特別の光散乱体によシ消滅される。螢光光線の移動が
高められる一方、背景光はこれらの特別の光散乱体によ
り減少するので、本発明の基材を用いたFIAの感度が
改良される。
従って、本発明の基材は効率的に蛋白質と結合し、且つ
透過螢光を増強し、かようにして螢光測定を含むアッセ
イの感度を増大する。
透過螢光を増強し、かようにして螢光測定を含むアッセ
イの感度を増大する。
具体的説明
好ましくは、本発明の蛋白質結合重合体物質は好ましく
はアクリル共重合体樹脂の水をベースとするエマルジ冒
ン、である三次元重合体マトリッジスである。このコロ
イドフィルム中には二つのタイプ、即ち、l)非特異的
、および、2)特異的光散乱体の光散乱中心が埋め込ま
れている。各光散乱体はミクロン未満の径であシ、水性
媒体に不溶である。非特異的粒状光散乱中心としては、
個別或は結合した酸化亜鉛または二酸化チタン(ルチル
形)の粒子が最も好ましい。非特異的光散乱粒子は、ア
ナタース形成はルチル形二酸化チタン、酸化亜鉛、炭酸
カルシウムのような無機物質、或はカオリン(chin
a clay ) 、ベントナイトまたはフラー土な
どの粘土起源のものであってもよく、或はデンプンなど
の有機物起源のものであってもよい。これらの光散乱体
は、粒状であp1均一に分散されており、全ての光を効
率的に散乱し、たとえその元々の光路においてではなく
とも、反射後の励起光光子が発螢光団に到達する可能性
を増大するものである。
はアクリル共重合体樹脂の水をベースとするエマルジ冒
ン、である三次元重合体マトリッジスである。このコロ
イドフィルム中には二つのタイプ、即ち、l)非特異的
、および、2)特異的光散乱体の光散乱中心が埋め込ま
れている。各光散乱体はミクロン未満の径であシ、水性
媒体に不溶である。非特異的粒状光散乱中心としては、
個別或は結合した酸化亜鉛または二酸化チタン(ルチル
形)の粒子が最も好ましい。非特異的光散乱粒子は、ア
ナタース形成はルチル形二酸化チタン、酸化亜鉛、炭酸
カルシウムのような無機物質、或はカオリン(chin
a clay ) 、ベントナイトまたはフラー土な
どの粘土起源のものであってもよく、或はデンプンなど
の有機物起源のものであってもよい。これらの光散乱体
は、粒状であp1均一に分散されており、全ての光を効
率的に散乱し、たとえその元々の光路においてではなく
とも、反射後の励起光光子が発螢光団に到達する可能性
を増大するものである。
本発明の特異的光散乱中心も又粒状であシ、蛋白質結合
重合体ラテックス中にランダムに分布されており、最も
好ましくは、特別の所望の分光反射率を有する着色化合
物である。最も好ましいのは、金属フタロシアニン塩、
例えば、銅フタロシアニンである。7タロシアニン化合
物(以下、場合によシ、「顔料」と称する)は、そのス
ペクトル散乱分布が使用される螢光染料の励起スペクト
ルに適合し、従って自動螢光或は背景散乱の如何を問わ
ず任意の望ましくない波長の光を減少させる特別の光吸
収体である。即ち、そのスペクトル吸光度が4t7(1
)nmにおけるスペクトルの「青色」部分にピークがあ
る染料としてイソチオシアン酸フルオVセイン(FiT
c)を使用する場合には、その分光反射率或いは散乱が
≠70 nmにおいて最適であると示された銅フタロシ
アニンの粒子を使用することになる。使用される染料が
、スペクトルの「緑色」領域において吸収し、スペクト
ルの「橙色」領域において螢光を発するローダミン誘導
体である場合には、約!3θnmの波長において散乱が
最大になる最適の顔料を使用すべきであろう。酵素標識
化技術において使用される光度測定変化における如く、
非螢光光学的効果が決定され、励起および発光の両者が
同一である場合には、コロイドフィルムを形成するエマ
ルジ冒ンに何等の特異的スペクトル散乱粒子を添加する
必要はなへ非特異的光散乱中心は特異的光散乱中心に対
して約30対lの重量比で使用するのが好ましい。
重合体ラテックス中にランダムに分布されており、最も
好ましくは、特別の所望の分光反射率を有する着色化合
物である。最も好ましいのは、金属フタロシアニン塩、
例えば、銅フタロシアニンである。7タロシアニン化合
物(以下、場合によシ、「顔料」と称する)は、そのス
ペクトル散乱分布が使用される螢光染料の励起スペクト
ルに適合し、従って自動螢光或は背景散乱の如何を問わ
ず任意の望ましくない波長の光を減少させる特別の光吸
収体である。即ち、そのスペクトル吸光度が4t7(1
)nmにおけるスペクトルの「青色」部分にピークがあ
る染料としてイソチオシアン酸フルオVセイン(FiT
c)を使用する場合には、その分光反射率或いは散乱が
≠70 nmにおいて最適であると示された銅フタロシ
アニンの粒子を使用することになる。使用される染料が
、スペクトルの「緑色」領域において吸収し、スペクト
ルの「橙色」領域において螢光を発するローダミン誘導
体である場合には、約!3θnmの波長において散乱が
最大になる最適の顔料を使用すべきであろう。酵素標識
化技術において使用される光度測定変化における如く、
非螢光光学的効果が決定され、励起および発光の両者が
同一である場合には、コロイドフィルムを形成するエマ
ルジ冒ンに何等の特異的スペクトル散乱粒子を添加する
必要はなへ非特異的光散乱中心は特異的光散乱中心に対
して約30対lの重量比で使用するのが好ましい。
本発明の好ましい実施態様において、免疫吸着性基材は
固体支持体と組合わされる。最も好ましくは、固体支持
体は、例えば、試験スライドのそれのような本質的に平
坦な表面を有してなるものである。しかしながら、最も
好ましくは、免疫吸着性基材は固体支持体中の試験ウェ
ルの本質的に平たい底上に比較的厚い層(グθ〜soミ
クロンの深さ)として設けられる。これらの試験ウェル
は例えば同時係属中の米国特許出願第3タタ、tオj号
明細書(/YA−年7月79日出願、この出願内容は本
発明において準用する)に開示されているような急勾配
の壁を有する円形寸法のものである。
固体支持体と組合わされる。最も好ましくは、固体支持
体は、例えば、試験スライドのそれのような本質的に平
坦な表面を有してなるものである。しかしながら、最も
好ましくは、免疫吸着性基材は固体支持体中の試験ウェ
ルの本質的に平たい底上に比較的厚い層(グθ〜soミ
クロンの深さ)として設けられる。これらの試験ウェル
は例えば同時係属中の米国特許出願第3タタ、tオj号
明細書(/YA−年7月79日出願、この出願内容は本
発明において準用する)に開示されているような急勾配
の壁を有する円形寸法のものである。
本発明の免疫吸着性基材は、更に免疫原性試薬−抗原或
いは抗体のいずれかを含むものであってもよい。これら
の実施態様における基材は、病気、特にウィルス、細菌
或いは寄生虫の感染によって引き起こされる病気の特徴
を示す免疫原性試薬用の血液その他の体液の分析に特に
有用である。
いは抗体のいずれかを含むものであってもよい。これら
の実施態様における基材は、病気、特にウィルス、細菌
或いは寄生虫の感染によって引き起こされる病気の特徴
を示す免疫原性試薬用の血液その他の体液の分析に特に
有用である。
本発明の基材は、小さな愛玩動物、家畜および実験室用
動物の生物学的流体の普通のウィルス、寄生虫および細
菌に拠る病気の免疫原的アッセイによる診断に有用であ
シ、その診断はネコ白血病ウィルス、ネコ感染性腹膜炎
、トキソプラズマ症、ネコ感染性貧血、心臓虫イヌプル
セラ症、イヌパルボウィルス、抗核抗体、!J、−マチ
様因子およびイヌジステンパーに対する生物学的流体の
免疫原性アッセイによシ行われ、又ウマ類動物について
は、ウマ感染性貧血、ウマ妊娠、ウマ腺疫、ウマ肺炎、
ウマ子宮炎およびウマインフルエンザに対する診断に、
実験室用のマウスおよびラットについてはウィルスパネ
ルの診断に、ウシプルセラ症の診断に、ニーーカッスル
病ウィルス、オウム病および白血病を含むトリの障害、
旋毛虫症、胃腸炎、凝性狂犬病およびアフリカブタ熱の
ようなブタの病気の診断に有用である。
動物の生物学的流体の普通のウィルス、寄生虫および細
菌に拠る病気の免疫原的アッセイによる診断に有用であ
シ、その診断はネコ白血病ウィルス、ネコ感染性腹膜炎
、トキソプラズマ症、ネコ感染性貧血、心臓虫イヌプル
セラ症、イヌパルボウィルス、抗核抗体、!J、−マチ
様因子およびイヌジステンパーに対する生物学的流体の
免疫原性アッセイによシ行われ、又ウマ類動物について
は、ウマ感染性貧血、ウマ妊娠、ウマ腺疫、ウマ肺炎、
ウマ子宮炎およびウマインフルエンザに対する診断に、
実験室用のマウスおよびラットについてはウィルスパネ
ルの診断に、ウシプルセラ症の診断に、ニーーカッスル
病ウィルス、オウム病および白血病を含むトリの障害、
旋毛虫症、胃腸炎、凝性狂犬病およびアフリカブタ熱の
ようなブタの病気の診断に有用である。
本発明の基材を用いて使用するのに適したトキソブラス
マ症のアッセイは次の文献に記載されている: A、 B、サビン、H,A、フェルトマン、「WC生動
物寄生虫(トキソブラスマ)に影響を及ぼす新らしい免
疫現象のミクロ化学指示薬としての染料」[5abin
、 A、 B+、 Feldman、 H,A、 *
Dyes asMicrocbemj、cal
Indicators of a New Imm
unityPhenomenon Affecting
Protozoan Parasite (Tox
oplasma )、−5cience 、 10
ざ tlrO−643/りpIrl。
マ症のアッセイは次の文献に記載されている: A、 B、サビン、H,A、フェルトマン、「WC生動
物寄生虫(トキソブラスマ)に影響を及ぼす新らしい免
疫現象のミクロ化学指示薬としての染料」[5abin
、 A、 B+、 Feldman、 H,A、 *
Dyes asMicrocbemj、cal
Indicators of a New Imm
unityPhenomenon Affecting
Protozoan Parasite (Tox
oplasma )、−5cience 、 10
ざ tlrO−643/りpIrl。
L、ヤコプス、M、N、ルンデ、「トキソプラスマ症の
血球凝集試験J [Jacobs、 L、 、 Lun
de、 M、N、 。
血球凝集試験J [Jacobs、 L、 、 Lun
de、 M、N、 。
A hemagglutination Te5t
for Toxoplasmosis 。
for Toxoplasmosis 。
J、 Parasitol、 173301−3/II
/り!7〕。
/り!7〕。
A、 J、 サルツアー、E、 C,ホール、「寄生
虫病に対する間接螢光抗体試験■、トキソブラスマ症に
対する間接螢光抗体(IFA)における変化の統計的研
究J [5ulzer、 A、 J、 、 Hall、
E、 C,。
虫病に対する間接螢光抗体試験■、トキソブラスマ症に
対する間接螢光抗体(IFA)における変化の統計的研
究J [5ulzer、 A、 J、 、 Hall、
E、 C,。
Indirect Fluorescent Anti
body Testg forParaaitia D
iseases ■、 5tatistical 5t
udy ofVariation in tbe
Indirect Fluorescent A
ntibody(I F A ) for Tox
oplasmosig、 Am、 J、 Epide
mio。
body Testg forParaaitia D
iseases ■、 5tatistical 5t
udy ofVariation in tbe
Indirect Fluorescent A
ntibody(I F A ) for Tox
oplasmosig、 Am、 J、 Epide
mio。
ざ& 110/−≠07 /り67 ]。
A、D、 ボラ−1G、ピッドウェル、E、ハルト、
A。
A。
エングバル、「トキソブラスマ抗体に対する酵素結合イ
ムノアッセイのマイクロブV−)方法」[Voller
、 A、D、、 Bidwell、 G、 Huldt
、 E。
ムノアッセイのマイクロブV−)方法」[Voller
、 A、D、、 Bidwell、 G、 Huldt
、 E。
Engvall A、、 Microplats Me
thod of EnzymeLinked Immu
noasaay for Toxoplasma An
tibody 。
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noasaay for Toxoplasma An
tibody 。
J、C11n、 Pathnl、 2タ /!0−/
13 /りqa ] 。
13 /りqa ] 。
本発明の基材を用いた使用に適するネコ感染性腹膜炎に
対するアッセイは次の文献に記載されている: ヘターソン等、「ネコ感染性腹膜炎ウィルスのその他の
種のコロナウィルスに対する抗原的関係」[Pedar
son et ml+、 ” Antigenic
Re1ationshipof the Fe1in
e Infectious Peritonitis
Virusto Coronaviruses of
0ther 5pecies n、 Archlve
sof Vlrolo Jざ、 弘s −y
、、? (1y7r ) :) 。
対するアッセイは次の文献に記載されている: ヘターソン等、「ネコ感染性腹膜炎ウィルスのその他の
種のコロナウィルスに対する抗原的関係」[Pedar
son et ml+、 ” Antigenic
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e Infectious Peritonitis
Virusto Coronaviruses of
0ther 5pecies n、 Archlve
sof Vlrolo Jざ、 弘s −y
、、? (1y7r ) :) 。
ペダーンン、「自然発生的ネコ感染症腹膜炎の血清学的
研究J [Pederson、 ” Serolog
ic 5tudiesof Naturally
Occurring Fe1ina Infect
iousPeritonitis ”、 Am、 Jo
urnal of Vet、 Res、、 、?7Nn
/コ、 lグ弘ター/4133 (/り7 )〕
。
研究J [Pederson、 ” Serolog
ic 5tudiesof Naturally
Occurring Fe1ina Infect
iousPeritonitis ”、 Am、 Jo
urnal of Vet、 Res、、 、?7Nn
/コ、 lグ弘ター/4133 (/り7 )〕
。
ホルチネック等、「ネコ感染性腹膜炎のウィルス学およ
び病原論J [Horzlnek、 at al、、V
irolog)’and Pathogeneais
of Fe1ine Infeatiou+5Per
itonitis ++、 Archives of
Virology !;9 / −/3(lり7タ
) 〕 。
び病原論J [Horzlnek、 at al、、V
irolog)’and Pathogeneais
of Fe1ine Infeatiou+5Per
itonitis ++、 Archives of
Virology !;9 / −/3(lり7タ
) 〕 。
本発明の基材を用いて使用するに適したネコ白血病につ
いてのアッセイは次の文献に記載されている: ジャノット等、「ネコ白血病ウィルス診断ノ三つの方法
の比較J [:Jarrett、 et al、、
” AComparison of Tbree M
etboda of FelineLeukemia
Virua Diagnosis a、 Tbe V
eterinaryRecord 、 3.2! −
32g(/yrs ) :]。
いてのアッセイは次の文献に記載されている: ジャノット等、「ネコ白血病ウィルス診断ノ三つの方法
の比較J [:Jarrett、 et al、、
” AComparison of Tbree M
etboda of FelineLeukemia
Virua Diagnosis a、 Tbe V
eterinaryRecord 、 3.2! −
32g(/yrs ) :]。
ヒルシー等、「ネコの血液におけるネコ白血病ウィルス
抗原の検出のためのELISAおよび免疫螢光アッセイ
の比較J [Hirscb、 et *1.。
抗原の検出のためのELISAおよび免疫螢光アッセイ
の比較J [Hirscb、 et *1.。
Comparison of ELISA and I
mmunofluorasceneeAssays
for Detection of Falin
e LeukemiaVirus Antigen
s in Blood of Cats ”、
Journalof the Amer、 A
nimal Hog 1tal As5oc、1g
り33−タ3ざ (lり♂2 )〕 。
mmunofluorasceneeAssays
for Detection of Falin
e LeukemiaVirus Antigen
s in Blood of Cats ”、
Journalof the Amer、 A
nimal Hog 1tal As5oc、1g
り33−タ3ざ (lり♂2 )〕 。
この様に、例えば、ネコ白血病ウィルスのP−27抗原
が基材に結合されている本発明の好ましい実施態様を使
用して、ネコの血液のネコ白血病ウィルスの存在を診断
することができる。同様に、TGEピリオン(viri
on、ウィルス粒子)が基材内に結合されている実施態
様を使用して、ネコ感染性腹膜炎を診断することができ
、トキソブラスマ拳ゴンデイ−(toxoplaama
gondii ) 抗原が結合されている好まし
い実施態様を使用して、ネコの血液のトキンプラスマ症
抗体の分析を行うことができる。
が基材に結合されている本発明の好ましい実施態様を使
用して、ネコの血液のネコ白血病ウィルスの存在を診断
することができる。同様に、TGEピリオン(viri
on、ウィルス粒子)が基材内に結合されている実施態
様を使用して、ネコ感染性腹膜炎を診断することができ
、トキソブラスマ拳ゴンデイ−(toxoplaama
gondii ) 抗原が結合されている好まし
い実施態様を使用して、ネコの血液のトキンプラスマ症
抗体の分析を行うことができる。
蛋白質結合免疫基材は、50チの樹脂および50%のp
H約t〜りの水よシなるアクリル系共重合体(成分A)
を、二酸化チタンおよび酸化亜鉛の懸濁液と混合したア
クリル系樹脂と水とのエマルジョン(成分B)、および
二酸化チタンおよび銅フタロンアニンの懸濁液と混合し
たアクリル系樹脂と水とのエマルジョン(成分C)と混
合することによシ製造することができる。成分Bは更に
流動性改良剤、例えば、トールエステル樹脂を含むこと
もできる。好筺しくは、成分Bは約3〜!係の1−−ル
エステル樹脂を含有する。これらの成分は好1しくはA
: B : C=、2J:、2.j:/の比で組合わ
せるのがよく、使用前に5部の蒸留水で希釈する。
H約t〜りの水よシなるアクリル系共重合体(成分A)
を、二酸化チタンおよび酸化亜鉛の懸濁液と混合したア
クリル系樹脂と水とのエマルジョン(成分B)、および
二酸化チタンおよび銅フタロンアニンの懸濁液と混合し
たアクリル系樹脂と水とのエマルジョン(成分C)と混
合することによシ製造することができる。成分Bは更に
流動性改良剤、例えば、トールエステル樹脂を含むこと
もできる。好筺しくは、成分Bは約3〜!係の1−−ル
エステル樹脂を含有する。これらの成分は好1しくはA
: B : C=、2J:、2.j:/の比で組合わ
せるのがよく、使用前に5部の蒸留水で希釈する。
アクリル系共重合体は、アクリル系エマルジョン源、例
えば、メタクリル酸又はポリメチルメタクリレート或い
はこれらの組合せの共重合体よシ得ることができる。
えば、メタクリル酸又はポリメチルメタクリレート或い
はこれらの組合せの共重合体よシ得ることができる。
、M 4A−は又、酢酸ビニル類およびその誘導体、或
−はブタジェン−スチレンおよびこれらとその他の重合
体との共重合体から得ることができる。それは又エポキ
シ重合体物質、塩化ビニル物質および上記の任意および
全ての共重合体であシ得る。
−はブタジェン−スチレンおよびこれらとその他の重合
体との共重合体から得ることができる。それは又エポキ
シ重合体物質、塩化ビニル物質および上記の任意および
全ての共重合体であシ得る。
成分A、BおよびC中の樹脂は、好葦しくはビーズ状形
態がよく、ビーズの直径は約0./−/−0ミクロンで
あシ、最も好ましくは約0.2ミクロンである。成分B
およびC中の酸化物は試料に向けられる光線の波長の約
半分の径であるように選ばれた粒子である。本発明の螢
光アッセイのためには、例えば、粒子は好ましくは、約
0.2ミクロンである。重合体マトリックス中にランダ
ムに分布するフタロシアニン化合物は0./ミクロン未
満であシ、好ましくはo、or〜0,1ミクロンである
。
態がよく、ビーズの直径は約0./−/−0ミクロンで
あシ、最も好ましくは約0.2ミクロンである。成分B
およびC中の酸化物は試料に向けられる光線の波長の約
半分の径であるように選ばれた粒子である。本発明の螢
光アッセイのためには、例えば、粒子は好ましくは、約
0.2ミクロンである。重合体マトリックス中にランダ
ムに分布するフタロシアニン化合物は0./ミクロン未
満であシ、好ましくはo、or〜0,1ミクロンである
。
好ましい実施態様は染料標識としてFITCを含み、散
乱性顔料粒子として銅フタロシアニンを含有する。粒子
の最適寸法は、mie散乱理論に基づいておシ、これは
粒子直径が光の波長のほぼ半分である場合に最適の散乱
が起こることを示す。
乱性顔料粒子として銅フタロシアニンを含有する。粒子
の最適寸法は、mie散乱理論に基づいておシ、これは
粒子直径が光の波長のほぼ半分である場合に最適の散乱
が起こることを示す。
FITCを染料分子として用いた場合には波長≠2θ〜
グIOnmr肯色」光線がフィルムに向けられるので0
.2〜0.3ミクロン直径の粒子を有することが理想的
である。
グIOnmr肯色」光線がフィルムに向けられるので0
.2〜0.3ミクロン直径の粒子を有することが理想的
である。
アクリル系重合体ビーズおよび二酸化チタンは最大約θ
、2ミクロンの直径分布を有するのが好ましい。銅フタ
ロシアニンは幾分よシ小さな粒子からなるが、なお効率
のよい散乱断面を示すものが好ましい。
、2ミクロンの直径分布を有するのが好ましい。銅フタ
ロシアニンは幾分よシ小さな粒子からなるが、なお効率
のよい散乱断面を示すものが好ましい。
本発明の好ましい実2II!i態様において、基材は固
体支持体上に固定されている。固体支持体は、その上に
少なくとも一つの分離された領域に基材が置かれる本質
的に平坦な表面を有することが好ましい。最も好ましく
は、固体支持体は、更に、実質的に平坦な底面および放
散する側壁を有する1以上の試験ウェルを含むものであ
る。基材は、好ましくは、ウェルの平坦な底面上に固定
される。
体支持体上に固定されている。固体支持体は、その上に
少なくとも一つの分離された領域に基材が置かれる本質
的に平坦な表面を有することが好ましい。最も好ましく
は、固体支持体は、更に、実質的に平坦な底面および放
散する側壁を有する1以上の試験ウェルを含むものであ
る。基材は、好ましくは、ウェルの平坦な底面上に固定
される。
基材を置いたウェルは、このように、流体を収容する領
域を与え、そこで流体のアッセイが進行する。:lj制
御された温度および湿度糸外(例6g″F(約20’C
)および70%湿度)で固定されると、コロイド状フィ
ルムはqo−soミクロンの厚さで形成され、水透過性
である。
域を与え、そこで流体のアッセイが進行する。:lj制
御された温度および湿度糸外(例6g″F(約20’C
)および70%湿度)で固定されると、コロイド状フィ
ルムはqo−soミクロンの厚さで形成され、水透過性
である。
制御された割合での乾燥(温度および湿度は変動せず、
或いは極端にならず、又風への曝露が許容されない)に
おいて、且つ配合組成に示された適当な稀釈率での蒸留
水での稀釈において、約7Sミクロンの高さのエマルジ
ョンの液状堆積物は合一シ、電子顕微鏡写真に示される
ように約グo −43ミクロンの厚いフィルムを形成ス
る。
或いは極端にならず、又風への曝露が許容されない)に
おいて、且つ配合組成に示された適当な稀釈率での蒸留
水での稀釈において、約7Sミクロンの高さのエマルジ
ョンの液状堆積物は合一シ、電子顕微鏡写真に示される
ように約グo −43ミクロンの厚いフィルムを形成ス
る。
乾燥時には、典型的には、フィルム重量は乙θ〜tSミ
リグラムである。水性溶液に10分間曝した後(例えば
水或いは体液の滞シ液中の予備浸漬後)、フィルムの重
量は、/l!ミリグラム、即ち水分による75%増加分
までに増加する。引続いて室温において/34時間乾燥
した後においても、t〜7チ水分の残存過剰量が存在し
、これは漸次消滅する。
リグラムである。水性溶液に10分間曝した後(例えば
水或いは体液の滞シ液中の予備浸漬後)、フィルムの重
量は、/l!ミリグラム、即ち水分による75%増加分
までに増加する。引続いて室温において/34時間乾燥
した後においても、t〜7チ水分の残存過剰量が存在し
、これは漸次消滅する。
本発明の固定化基材は、基材およびその上およびその中
に吸収されている反応物質が透過する特別の波長の光の
量を測定する試験装置と共にイムノアッセイに使用する
ことができる。参考迄に本願明細書に記載する同時係属
中の米国特許出願第36.2.API、号明細書</り
12年3り’29日出1iJA)には、そのような試験
機械の一つが開示されている。
に吸収されている反応物質が透過する特別の波長の光の
量を測定する試験装置と共にイムノアッセイに使用する
ことができる。参考迄に本願明細書に記載する同時係属
中の米国特許出願第36.2.API、号明細書</り
12年3り’29日出1iJA)には、そのような試験
機械の一つが開示されている。
ダリルラボラトリーズ社(Daryl Laborat
ories )からTRACK XI の商標名で市販
されているこの試験装置および系を用いると、発螢光団
の励起モードと実質的に同様な波長を有する光線が基材
に向けられる。入射光は基材上および基材中に存在する
反応物質の量に比例する量で反射、透過或いは吸収され
る。入射光が螢光標識の励起スペクトルにある波長のも
のである場合には、基材中の粒状物質、好ましくはフタ
ロシアニン顔料、例えば銅フタロシアニンは、この特別
の入射光を反射し、任意の非螢光活性化光線を吸収する
。望ましくない反射光線の背景水準が減少し、反射螢光
光線の信号対背景比が高くなるので、分析の感度はこの
ように極めて増大する。
ories )からTRACK XI の商標名で市販
されているこの試験装置および系を用いると、発螢光団
の励起モードと実質的に同様な波長を有する光線が基材
に向けられる。入射光は基材上および基材中に存在する
反応物質の量に比例する量で反射、透過或いは吸収され
る。入射光が螢光標識の励起スペクトルにある波長のも
のである場合には、基材中の粒状物質、好ましくはフタ
ロシアニン顔料、例えば銅フタロシアニンは、この特別
の入射光を反射し、任意の非螢光活性化光線を吸収する
。望ましくない反射光線の背景水準が減少し、反射螢光
光線の信号対背景比が高くなるので、分析の感度はこの
ように極めて増大する。
固定化基材は又、その他の発色団を含む分析、例えば酵
素イムノアッセイ(EIA)、の感度も高める。EIA
においては、入射光は液体媒体中を移動して免疫反応が
起こる固定化基材に至シ、そこから色変化を行う酵素反
応体である液体媒体を通じて戻される。
素イムノアッセイ(EIA)、の感度も高める。EIA
においては、入射光は液体媒体中を移動して免疫反応が
起こる固定化基材に至シ、そこから色変化を行う酵素反
応体である液体媒体を通じて戻される。
本発明の好ましい実施態様においては基材は更に7以上
のその他の物質と反応して螢光生成物を形成することの
できる第一の物質を含有することができる。例えば、基
材は適当な発螢光団の標識を付されたそれぞれの配位子
と反応することのできる抗原又は抗体を結合して有する
ことができる。
のその他の物質と反応して螢光生成物を形成することの
できる第一の物質を含有することができる。例えば、基
材は適当な発螢光団の標識を付されたそれぞれの配位子
と反応することのできる抗原又は抗体を結合して有する
ことができる。
この実施態様においては、基材は特定のウィルス、寄生
虫或いは細菌感染症に特徴的な抗原又は抗体を含有する
生物学的流体の分析に有用であシ、従って有用な診断道
具となる。高感度の分析をスピードおよび再現性をもっ
て行うことができるので、感染の疑われた動物からの多
量の試料の日常のスクリーニングに有用である。本発明
の基材に結合することのできる物質のその他の例として
は、ペプチド類、ホルモン類、薬品類或いは酵素基質な
どがある。これらの物質は発螢光団で標識された試薬に
よる直接分析によシ、或いはサンドイッチ技術などの間
接分析によシ、検出することができる。
虫或いは細菌感染症に特徴的な抗原又は抗体を含有する
生物学的流体の分析に有用であシ、従って有用な診断道
具となる。高感度の分析をスピードおよび再現性をもっ
て行うことができるので、感染の疑われた動物からの多
量の試料の日常のスクリーニングに有用である。本発明
の基材に結合することのできる物質のその他の例として
は、ペプチド類、ホルモン類、薬品類或いは酵素基質な
どがある。これらの物質は発螢光団で標識された試薬に
よる直接分析によシ、或いはサンドイッチ技術などの間
接分析によシ、検出することができる。
以下の具体例は病気の診断における流体のイムノアッセ
イにおける本発明の用途を例示するものである。しかし
ながら、本発明はこれらの具体例によっては限定されな
いものと理解されるべきである。
イにおける本発明の用途を例示するものである。しかし
ながら、本発明はこれらの具体例によっては限定されな
いものと理解されるべきである。
!LL
基材を、グリル・ラボラトリーズ社によシ商標コリミュ
ーン(COLLIMMUNE)として提供され、本発明
において基材組成物および米国特許出願第37”yy、
:zo号(/りrコ年/り/り日出願)の試験方法に関
して説明されたのと同様にして調製された固体支持体内
の試験ウェルの底面上に固定した。ネコ白血病ウィルス
の核抗原の一つであるP−27抗原を成長細胞系統F/
−〃から収穫し、第一試験ウェル上に置込た。
ーン(COLLIMMUNE)として提供され、本発明
において基材組成物および米国特許出願第37”yy、
:zo号(/りrコ年/り/り日出願)の試験方法に関
して説明されたのと同様にして調製された固体支持体内
の試験ウェルの底面上に固定した。ネコ白血病ウィルス
の核抗原の一つであるP−27抗原を成長細胞系統F/
−〃から収穫し、第一試験ウェル上に置込た。
補助試験ウェル中において、P−27抗原を含有する試
料をウサギ中で発育させた抗−P −,27抗体と共に
インキュベートさせた。70分間のインキュベーシヨン
後、この混合物の一部を第一の試験ウェル中に移し、試
料抗原に未だ結合して込ない遊離の抗体を基材中のP−
,27抗原と結合させた。75分のインキユベーション
および簡単な洗浄後、イソチオシアン酸フルオレセイン
(FITC)標Bk化されたヤギ抗−ウサギイムノグロ
ブリンG (IgG)を基材に添加した。10分間のイ
ンキ二ベーション後、基材を洗浄し、本発明で説明した
グリル・トラック夏装置中に挿入し、透過螢光光線を測
定した。白血病ウィルスの検量試料は、公知濃度のP−
27抗原を含有する正常なネコ血清であった。
料をウサギ中で発育させた抗−P −,27抗体と共に
インキュベートさせた。70分間のインキュベーシヨン
後、この混合物の一部を第一の試験ウェル中に移し、試
料抗原に未だ結合して込ない遊離の抗体を基材中のP−
,27抗原と結合させた。75分のインキユベーション
および簡単な洗浄後、イソチオシアン酸フルオレセイン
(FITC)標Bk化されたヤギ抗−ウサギイムノグロ
ブリンG (IgG)を基材に添加した。10分間のイ
ンキ二ベーション後、基材を洗浄し、本発明で説明した
グリル・トラック夏装置中に挿入し、透過螢光光線を測
定した。白血病ウィルスの検量試料は、公知濃度のP−
27抗原を含有する正常なネコ血清であった。
104を個の予め凍結したネコ血清試料についての臨床
試験は、比較としてのELISAの主観的サンドイッチ
アッセイ〔ヒツトマン・ムーア社製のリューカッセイ(
Leukassay ) FTM(商標)〕に対してr
ssの特異性およびりj係の感度を示した。
試験は、比較としてのELISAの主観的サンドイッチ
アッセイ〔ヒツトマン・ムーア社製のリューカッセイ(
Leukassay ) FTM(商標)〕に対してr
ssの特異性およびりj係の感度を示した。
FIP抗体に対するグリル・トラック℃ システムアク
セイは標準的な「サンドイッチ型」アツセイであるが、
各試料は抗原被覆ウェルおよび対照被覆ウェルの両者に
ついて行われる。コリミューン基材は例/で使用された
ものと同一であった。
セイは標準的な「サンドイッチ型」アツセイであるが、
各試料は抗原被覆ウェルおよび対照被覆ウェルの両者に
ついて行われる。コリミューン基材は例/で使用された
ものと同一であった。
交互のウェルに対照調剤および抗原調剤が適用された。
対照調剤は培養されたブタ腎臓(PK)細胞から得られ
た上溌液を0,1M重炭酸塩緩衝液(pH? )で/:
3に希釈したものであった。抗原調剤はTGEウィルス
(ミラー株)に感染した培apKa胞からの上と液から
得られたTGEピリオンであった。ネコ感染性腹膜炎抗
原けTGEウィルスと強く交差反応する。
た上溌液を0,1M重炭酸塩緩衝液(pH? )で/:
3に希釈したものであった。抗原調剤はTGEウィルス
(ミラー株)に感染した培apKa胞からの上と液から
得られたTGEピリオンであった。ネコ感染性腹膜炎抗
原けTGEウィルスと強く交差反応する。
ネコ血液試料を対照および抗原ウェルの両者に適用し、
10分間インキュベートした。洗浄後、FITC標識を
有するウサギ抗−ネコニgGをウェルに適用した。70
分間のインキュベーションおよび最終水跳後、ウェルの
螢光をトラックXI 螢光読み取り器で観察した。結果
を分析するに当り、対照例の蛍光を検量試料および未知
試料の両者の抗原ウェルから得られた螢光から差し引き
(正味の蛍光の読みを得た。検量試料は他の技術によシ
求められた公知のFIP力価のプールされた血清である
。予め凍結したネコ血清試料の/2’lの試料について
行われた臨床試験は、公知の動的酵素結合アッセイ(K
ELA)と対比して、♂0チの特異性を示した。トラッ
クXIアッセイはKELAアクセイに対比して70%の
感度を示した。
10分間インキュベートした。洗浄後、FITC標識を
有するウサギ抗−ネコニgGをウェルに適用した。70
分間のインキュベーションおよび最終水跳後、ウェルの
螢光をトラックXI 螢光読み取り器で観察した。結果
を分析するに当り、対照例の蛍光を検量試料および未知
試料の両者の抗原ウェルから得られた螢光から差し引き
(正味の蛍光の読みを得た。検量試料は他の技術によシ
求められた公知のFIP力価のプールされた血清である
。予め凍結したネコ血清試料の/2’lの試料について
行われた臨床試験は、公知の動的酵素結合アッセイ(K
ELA)と対比して、♂0チの特異性を示した。トラッ
クXIアッセイはKELAアクセイに対比して70%の
感度を示した。
旦
トキソプラズマ・ボンデイーは多くの異なった動物を冒
すが、ネコはその天然の貯蔵所として役立つ。家ネコか
ら妊娠した飼主への伝染は胎児における悲劇的出産欠陥
に導く可能性があるので、それは非常に臨床的に重要で
ある。従って、妊娠した女性および彼女のネコを、妖気
期間内に血清学によシ定期的に試験するべきである。
すが、ネコはその天然の貯蔵所として役立つ。家ネコか
ら妊娠した飼主への伝染は胎児における悲劇的出産欠陥
に導く可能性があるので、それは非常に臨床的に重要で
ある。従って、妊娠した女性および彼女のネコを、妖気
期間内に血清学によシ定期的に試験するべきである。
例/と同様な基材に粉砕したトキソプラズマ・ボンティ
ー菌から抽出した可溶性抗原を添加した。
ー菌から抽出した可溶性抗原を添加した。
基材および抗原を試験ウェル内で固定した。/ fMの
全未希釈血清或いは血液を各ウェル中に人!tだ。
全未希釈血清或いは血液を各ウェル中に人!tだ。
ウェルを室温で70分間インキュベートさせてT。
gondii VC対する抗体と固定抗原間の反応を行
わせた。ウェルな洗浄し、次いでイソチオシアン酸フル
オレセイン(FITC)で標識化した抗−ネコ抗体と接
触させた。70分間のインキュベーション後、ウェルを
洗浄し、螢光を観察した。公知の力価の対照試料を同時
に実験して検f2gを作成した。
わせた。ウェルな洗浄し、次いでイソチオシアン酸フル
オレセイン(FITC)で標識化した抗−ネコ抗体と接
触させた。70分間のインキュベーション後、ウェルを
洗浄し、螢光を観察した。公知の力価の対照試料を同時
に実験して検f2gを作成した。
旦ム
以下のアッセイは例/〜3の一般的方法、基材に予備適
用しなかった。血清はウェル内に10分間入れられた。
用しなかった。血清はウェル内に10分間入れられた。
全血清蛋白質は吸収された。洗浄後、FITC標識を伺
された抗−ネコIgG抗体を適用した。それは結合Ig
Gのみと反応した。70分間のインキュベーション後、
過剰の抗−ネコIgGを洗浄して除去し、螢光をトラッ
クXI装置内において読んだ。検量計は血液1ooml
当りのIgG 、Rで゛・−計量を与えた。
された抗−ネコIgG抗体を適用した。それは結合Ig
Gのみと反応した。70分間のインキュベーション後、
過剰の抗−ネコIgGを洗浄して除去し、螢光をトラッ
クXI装置内において読んだ。検量計は血液1ooml
当りのIgG 、Rで゛・−計量を与えた。
ウマIgGアッセイはネコIgGアッセイにおけるのと
同様に行われたが、ウマの新生児が免疫不全−メスウマ
から初乳を採っていない−かどうかを決定するために低
水準に対して検量が行われた。
同様に行われたが、ウマの新生児が免疫不全−メスウマ
から初乳を採っていない−かどうかを決定するために低
水準に対して検量が行われた。
イヌジステンパー抗体、イヌ・ζルボウイルス抗体およ
びプルセラに対するイヌ抗体は全て例3と同様にして行
われたサンドインチ技術であシ適当な抗原に向けられた
ものである。全て、二回の70分間のインキュベーショ
ンおよび二回の簡単な洗浄を使用した。いずれも例−の
FIP試験で必要としたような対照ウェルの使用を必要
としなかった。イヌにおけるリューマチ様因子試験につ
bては、抗原は、あるイヌの場合においては、IgM抗
体が向けられた「変化させられた」ウサギIgGであっ
た。抗−イヌIgMFITC標識化抗体が例7〜3と同
様にして使用された。イヌ抗核抗体試験につ−ては、二
本鎖および一本鎖DNAプラスリボ核蛋白質が抗原とし
て組合わされた。試験は例/〜3と同様にして行われた
。
びプルセラに対するイヌ抗体は全て例3と同様にして行
われたサンドインチ技術であシ適当な抗原に向けられた
ものである。全て、二回の70分間のインキュベーショ
ンおよび二回の簡単な洗浄を使用した。いずれも例−の
FIP試験で必要としたような対照ウェルの使用を必要
としなかった。イヌにおけるリューマチ様因子試験につ
bては、抗原は、あるイヌの場合においては、IgM抗
体が向けられた「変化させられた」ウサギIgGであっ
た。抗−イヌIgMFITC標識化抗体が例7〜3と同
様にして使用された。イヌ抗核抗体試験につ−ては、二
本鎖および一本鎖DNAプラスリボ核蛋白質が抗原とし
て組合わされた。試験は例/〜3と同様にして行われた
。
本発明に従って行うことのできるウェルズ、細菌、およ
び寄生虫の抗原又は抗体の検出を含む免疫学的試験には
、特に次のものが含まれる:小愛玩動物: ネコ白血病ウィルス ネコ感染性腹膜炎 ネコトキソプラスマ症 ネコ感染性貧血症 イヌ心;臓虫 イヌプルセラ症 イヌパルボウィルス イヌ抗−核抗体 イヌリューマチ様因子 イヌジステンパー ウマ: ウマ感染性貧血症 ウマ妊娠 ウマ腺、疫 ウマ肺炎 ウマ子宮炎 ウマインフルエンザ 実験室: マウスおよびラットに対するウイルスノ(ネル 食物および繊維: ウシプルセラ症 旋毛虫 ブタの胃腸炎 前古ウィルス病 トリ類: ニューカッスル病ウィルス オウム病 白血症 更に、IgG、IgA、 IgMおよびIgE、相補系
の血清蛋白成分およびC反応性蛋白質などのその他の血
清蛋白質の定量も可能である。
び寄生虫の抗原又は抗体の検出を含む免疫学的試験には
、特に次のものが含まれる:小愛玩動物: ネコ白血病ウィルス ネコ感染性腹膜炎 ネコトキソプラスマ症 ネコ感染性貧血症 イヌ心;臓虫 イヌプルセラ症 イヌパルボウィルス イヌ抗−核抗体 イヌリューマチ様因子 イヌジステンパー ウマ: ウマ感染性貧血症 ウマ妊娠 ウマ腺、疫 ウマ肺炎 ウマ子宮炎 ウマインフルエンザ 実験室: マウスおよびラットに対するウイルスノ(ネル 食物および繊維: ウシプルセラ症 旋毛虫 ブタの胃腸炎 前古ウィルス病 トリ類: ニューカッスル病ウィルス オウム病 白血症 更に、IgG、IgA、 IgMおよびIgE、相補系
の血清蛋白成分およびC反応性蛋白質などのその他の血
清蛋白質の定量も可能である。
出願人代理人 猪 股 清
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 /、 fi+ 三次元マトリックスを形成する膨潤性
再水和可能な蛋白質結合重合体物質、 (2)前記重合体マトリックス中に分布された、可視光
線を散乱することのできる粒状の非特異的光散乱中心、
および (3) 前記重合体7トリノクス中に分散された、特異
的螢光励起光線を反射し、非特異的光線を吸収すること
のできる粒状の特異的光散乱中心、を含んでなることを
特徴とする螢光イムノアッセイ用基材。 2、 該蛋白質結合重合体物質がアクリル系共重合体で
ある、特許請求の範囲第1項記載の基材。 3、 該アクリル系共重合体がメタクリル酸およびポリ
メチルメタクリレートを含んでなる、特許請求の範囲第
一項記載の基材。 t、 該非特異的光散乱中心がチタンおよび亜鉛の酸化
物の各々或いは組合せである、特許請求の範囲第1項記
載の基材。 !、 該特異的光散乱中心がフタロシアニン化合物であ
る、特許請求の範囲第1項記載の基材。 乙、 固体支持体に固定されている、特許請求の範囲第
1項記載の基材。 7、 該固体支持体が本質的に平坦な平面よシなる、特
許請求の範囲第2項記載の固定化基材。 r、 固体支持体が、実質的に平坦な底面および放散す
る側壁を有する7個以上の試験ウェルを含んでなり、前
記基材がその底に固定化されているものである9許請求
の範囲第7項記載の基材。 り、 7以上の他の物質と反応して螢光生成物を形成す
ることのできる第一の物質を結合して有する、特許請求
の範囲第1項記載の基材。 10、該第−の物質が抗原又は抗体である、特許請求の
範囲第7項記載の基材。 //、該全抗原酸いはその分画がTGEビリオン(vi
rion 、ウィルス粒子)、ネコ白血病ウィルスのP
−,27抗原、トキソブラスマ・ボンデイー(Toxo
plasma gondii ) 、イヌジステンノ
(−ウィルス、イヌパルホウィルス、イヌプルセラ菌(
canineBrucella organiama
) Xプルセラ流産菌・心臓虫酸いは旋毛虫属(Tri
chinella )である、特許請求の範囲第1O項
記載の基材。 /、2.下記の基材を用いることを特徴とする流体のイ
ムノアッセイ。 上記の基材は、 (1) 三次元マ) IJソックス形成する膨潤性再
水和可能な蛋白質結合重合体物質、 (2) 前記重合体マトリックス中に分布された。 可視光憩を散乱することのできる粒状の非特異的光散乱
中心、および (3)前記重合体マトリックス中に分散された、特異的
螢光励起光線を反射し、非特異的光線を吸収することの
できる粒状の特異的光散乱中心を含んでなる螢光用イム
ノアッセイ用基材である。 /3.螢光イムノアッセイよシなる、特許請求の範囲第
1−項記載のイムノアッセイ。 /4’、 酵素結合イムノアッセイよりなる、特許請
求の範囲第12項記載のイムノアッセイ。 /!、細菌、ウィルス、寄生虫或いは真菌の感染症によ
シ引起こされる病気に対する哺乳動物の診断法にお因て
、1m下記の基材を用−た該哺乳動物の体液のイムノア
ッセイよシなることを特徴とする診断法。 上記の基材は、 (1)三次元マトリックスを形成する膨潤性再水和可能
な蛋白質結合重合体物質、 (2) 前記重合体マトリックス中に分布された、可
視光線を散乱することのできる粒状の非特異的光散乱中
心、および (3)前記重合体マトリックス中に分散された、特異的
螢光励起光線を反射し、非特異的光線を吸収することの
できる粒状の特異的光散乱中心を含んでなる螢光用イム
ノアッセイ用基材である。 /z、 ネコ白血病ウィルス、ヒトその他の哺乳動物
におけるトキソプラスマ症、ネコIgG、イヌIgG。 イヌジスチンバー、イヌバルポウィルス或すはイヌプル
セラに対する、特許請求の範囲第7j項記載の診断方法
。
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/483,055 US4540660A (en) | 1983-04-07 | 1983-04-07 | Substrate for fluoroimmunoassay of biological fluids |
US483055 | 1983-04-07 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS59190664A true JPS59190664A (ja) | 1984-10-29 |
JPH0614046B2 JPH0614046B2 (ja) | 1994-02-23 |
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Family Applications (1)
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---|---|---|---|
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---|---|
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JP (1) | JPH0614046B2 (ja) |
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DE (1) | DE3412340C2 (ja) |
DK (1) | DK159175C (ja) |
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GB (1) | GB2138131B (ja) |
IT (1) | IT1179356B (ja) |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08211059A (ja) * | 1994-11-04 | 1996-08-20 | Boehringer Mannheim Gmbh | 生物発光および化学発光反応におけるシグナル検出を高めるための白色トリガー調製物 |
Families Citing this family (13)
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---|---|---|---|---|
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US4596723A (en) * | 1984-05-02 | 1986-06-24 | Daryl Laboratories, Inc. | Immunoassay substrate |
US4853325A (en) * | 1986-03-26 | 1989-08-01 | Synbiotics Corporation | Saliva test for feline leukemia virus |
US4962021A (en) * | 1986-06-20 | 1990-10-09 | Personal Diagnostics, Inc. | Analyte determination using gel including a reagent system reacts with analyte to change transmissive property of gel detectable by light beam transmitted through gel by total internal reflectance |
US5494793A (en) * | 1986-12-15 | 1996-02-27 | British Technology Group Usa Inc. | Monomeric phthalocyanine reagents |
US5346670A (en) * | 1986-12-24 | 1994-09-13 | British Technology Group U.S.A. Inc. | Phthalocyanine and tetrabenztriazaporphyrin reagents |
US4837162A (en) * | 1987-06-05 | 1989-06-06 | Pall Corporation | Non-fluorescing, non-reflective polyamide for use in diagnostic testing |
DK269889A (da) * | 1988-06-06 | 1989-12-07 | Photest Diagnostics Inc | Heterogen immunoassay |
FR2747387B1 (fr) * | 1996-04-12 | 1998-07-03 | Conseil General De L Orne | Moyens pour la detection de bacteries du genre taylorella et applications biologiques |
US5795784A (en) | 1996-09-19 | 1998-08-18 | Abbott Laboratories | Method of performing a process for determining an item of interest in a sample |
US5856194A (en) | 1996-09-19 | 1999-01-05 | Abbott Laboratories | Method for determination of item of interest in a sample |
US7935539B2 (en) * | 2003-02-14 | 2011-05-03 | Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. | Generic method for latex agglutination assays |
WO2010052306A1 (de) * | 2008-11-07 | 2010-05-14 | Roche Diagnostics Gmbh | Feinkörnige füllstoffe für photometrische reaktionsfilme |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4061466A (en) * | 1974-10-16 | 1977-12-06 | Ingvar Gosta Holger Sjoholm | Biologically active composition and the use thereof |
SE388694B (sv) * | 1975-01-27 | 1976-10-11 | Kabi Ab | Sett att pavisa ett antigen exv i prov av kroppvetskor, med utnyttjande av till porost berarmaterial bundna eller adsorberande antikroppar |
DE2721267C2 (de) * | 1977-05-11 | 1985-05-02 | Hans A. Dipl.-Chem. Dr. 8000 München Thoma | Antikörpergel |
DE2733380A1 (de) * | 1977-07-23 | 1979-02-08 | Behringwerke Ag | Immunologisches analysenverfahren |
JPS5468696A (en) * | 1977-11-04 | 1979-06-01 | Int Diagnostic Tech | Method of making sampler for immunological quantity measurement |
US4363634A (en) * | 1980-07-18 | 1982-12-14 | Akzona Incorporated | Glass support coated with synthetic polymer for bioprocess |
US4340564A (en) * | 1980-07-21 | 1982-07-20 | Daryl Laboratories, Inc. | Immunoadsorptive surface coating for solid-phase immunosubstrate and solid-phase immunosubstrate |
AU7451481A (en) * | 1980-07-21 | 1982-02-16 | Harte, Richard A. | Immunoadsorptive surface coating for solid-phase immunosubstrate and solid-phase immunosubstrate |
US4483759A (en) * | 1982-07-02 | 1984-11-20 | Thermedics, Inc. | Actinic radiation cured polyurethane acrylic copolymer |
US4468371A (en) * | 1982-07-19 | 1984-08-28 | Daryl Laboratories, Inc. | Immunoassay test slide |
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- 1983-12-23 AU AU22841/83A patent/AU571476B2/en not_active Ceased
-
1984
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- 1984-01-23 JP JP59009929A patent/JPH0614046B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1984-01-31 BR BR8400396A patent/BR8400396A/pt unknown
- 1984-02-27 DK DK105984A patent/DK159175C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-03-15 FR FR8403987A patent/FR2544081B1/fr not_active Expired
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08211059A (ja) * | 1994-11-04 | 1996-08-20 | Boehringer Mannheim Gmbh | 生物発光および化学発光反応におけるシグナル検出を高めるための白色トリガー調製物 |
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