JPS59135887A - 生理活性物質固定化用担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野」 本発明は、生理活性物質固定化用４１体及び該相体に生
理活性物質を固定化し２だ選択吸着剤に関する１゜ 〔従来技術〕 生理活性物質固定化用担体とは、該１１４体に生理活性
物質を固定化［７、その表面で該生理活性物質が関Ｊｊ
する！（゛η顆的な生物化パを的反応を行わせるもので
ある。、 ここでいう生理活性物質とは組織、細胞、酵素、抗原、
抗体、抗Ｊす（抗体杓合物、補体等の血清蛋白質及びこ
れらと多糖））；ｑの枦合物の総称である、１ 固定化用体上で生理活性物質に関匂する反応を行わせる
ことにより、例えば酵素により反応する物質のみを選択
的に定晴又は除去するととや、ある特定の抗体又は抗原
のみを生体内又は生体外において特異的に検出又は除去
するとと、あるいけ化学反応の際に特定の物質のみを選
択的に除去又は取出すことが可能となり、理工学的及び
医学的分野に広範に応用することができる、 従来、との睡の担体としてはセファロ＝〜ス、多孔質ガ
ラスあるいけポリスチレンビーズなどの高分子軍合体に
生理活性物質と結合可能な官能基を導入したものが、広
く用いられてきた。

しかしながら、これらの担体は目的とする物質以外の物
質をも非特異的に吸着するという問題点があった３３ すなわちことでいう非特異吸着とは担体に官能基を導入
１〜、とれに目的とする生理活性物質を反応結合さ１（
る際に、官能基以外に未反応の該物質が吸着され、珪つ
反応終了後の洗浄によって充分除去できずに残留すると
いう問題と、更に該物質を固定化した１１１体に、とれ
と反応する他の物質（例えば酵素反応における基質、免
疫反応における抗原又は抗体）の溶液（例メーは血液、
血漿、血清、尿等の休′／Ｉｆｂ：も含む）を加えて反
応させる」４合に、目的の物右以外の物質の非特異的吸
着にょセ反応の特異性が低下するという欠点を有してい
る１、 特に−ト述の相体を治療に応用した場合、血液凝固因子
や血小板が吸着され、これによって凝血を誘起し、リン
パ系の不望の活性化、未反応物質の異種成分とｌ〜ての
体内への移行等の問題があり、実際の臨床にυ二い゛ま
だ適用されていない。

更にセファ１１−スのごとき親、水性ゲルを４［］体と
して治療用選択吸着剤として用いる場合、本来、血液中
の血漿成分に８洩れる有用成分、例えば、血Ｉｊ！蛋白
質、糖などが上記ゲルマトリックス内に取込まれて１７
寸い、この／ｉ−めに新たに輸液等によって補わねばな
らないという欠点も有し２ている　種だ、親水性ゲルマ
トリックスは千の強度は低く変形しやすい。このため本
来粒子を充てんすることで形成される空隙が変形により
閉そくするという欠点を有している。

更に、特開昭５７−１５０４５３号公報には、見料に、
ｉす、水性アクリレ−ト系又−、メタクリレート系卸晴
体及び不飽和カルボン酸又は不飽和アミンを共重合した
共重合体を被覆（〜だ吸着剤が記載されている、しかし
２ながらこれら表面を被覆し５た共重合体被膜は何ら基
Ｈに固定されたものではなく、はく離の危険性を有する
という欠点を有しＣいる０、また、同月公報中に、同一
１−共重合体にグリシジルメタクリレートを共７Ｂ合し
、三元集取合体とし基＋４にｊｐ　Ｉｑ−することが記
載されている５、ζｉ１．１．ｔグリシジルメタクリｌ
／　−トのエポキシ基と、カルボキシル基又はアミ２）
基との反応によって、分子内又は分子間反応を生起せ１
〜め、基ｔ（表面に強固に？皮けすると５れている、し
か１．なから上記共重合体は、重合過程でエボ１シ基と
カルボキシル基又は′アミノ基との反応を起り不溶性１
Ｆ合体を生成するという欠点を有する３更に表向のみの
架（１１反応では物理的外力に女寸して著しく弱く、は
く離し−セすいという欠点を有している。

〔発明の目的〕

本発明ｉ１１、上記欠点を克服−するノ′ζめに鋭意検
討を暇ねた結果完成し／ζもので、その］」的は、上記
欠点を改良した新たな生理活性物質固定化用世体及び１
’ｉｔｉ択吸着剤を４ｆ−供するものであく〕、〔発明
の構成Ｊ 本発明の第１の発明は生理活性物質固定化用和体の発明
でｔ・す、液体不浸透作目、つ液体不膨潤性の疎水１１
′有機合成高分子ｉＬ合体から成る粒子であって、目つ
その粒子表面に反応性）−二を有する粒子の表面を、親
水性高分子・小合体で被覆し、■一つそれが該反応性基
によって架橋しているものであることを’ｌ’ｉ徴とす
る１、壕だ、本発明の第２の発明は選択吸着剤の発明で
あって、本発明の第１の発明の生理活１１１１’＋１質
固定化川和体の表面に牛■Ｐ活性物７ハを固定１゜たも
のであるととをｌ［に微とする、 本発明の液体不浸透性［−１つ液付不Ｍイー１性疎水性
合成高分子重合体料了ｄ、少なくとも該粒子表面に反応
性基を有するものである。本発明に係る反応性法とは少
なくとも該粒子の表面を被々”１′〉する？（＋水性高
分子重合体中の基と反応を起し共有結合によ″つて架橋
され、該親、水性■１を８休の脱１’ｉｆ＃を防止する
ものである。

このよう表反応性基は、該疎水性重合体の表面に高分子
反応を用いて導入することが可能であるが、ｆＩ−Ｉま
しくけあらかじめ反応性基又はその前、駆体を有する１
１ｉ量体を共重合することで容易に達成することができ
る。

本発明に用いられる反応性基としては、エポキシ基、ア
ジリジル基、ホルミル基、・イソンアノ−−−）基、チ
オール基、ビニルスルホニル基、ヒドロキシメチル基等
が挙げられる。

また、チオール基、ビニルスルホニル基ハその前駆体で
ある゛ｒセヂル化ヂオール基、ノ・ロエチルスルホニル
基の形で用いてもよい。

エポキシ基を有するｉｌｉ、　、（５４一体とじて（よ
、例えばグリシジルアクリレート、グリシジルメタクリ
レート、アリルグリシジルニーデル、４−ビニルシクロ
ヘキセンモノエポキシド等が挙ケラれる。アジリジル基
をイｊする単量体とし２ては、例えばアジリジルエチル
、メタクリレート、１−エチレンスルボニルアジリジン
、１−エチレンスルボニルアジリジン、アジリジルエチ
ルアクリレ〜　トが挙げられる３、ホルミル基を有−ｔ
−る午早体としては、例えばアクロレイン、メタクロレ
イン等が挙げられる。ヒドロキシメチル茫を有する単量
体としては、例えばＮ−メチロールアクリルアミド、Ｎ
−メチロールアクリルアミド、Ｎ−メチロールジアセト
ンアクリルアミド等が挙げられる　イソシアナー　ト基
を有する単量体としてＵ」１、例えばビニルイソシアネ
ート、アリル−イソシアネートが挙げられる。チオール
基を有する単ｌ１体としては、例えばビニルチオール、
ｐ−チオールメチ１．／ン、ｍ−チオールスチレン、ビ
ニルベンジルチオール及ヒζレラノアセヂル体笠が挙げ
られる１、 ハロエチルスルホニル基を有する中、　Ｕ　体トしてｌ
ｄ：　、例Ｌ　Ｉｒ！クロロエチルスルホニルエチルメ
タクＩＪレート、プロモエチルスルホニルエチノ１ンメ
タクＩＪ　ｌ／　−、）。ビニルスルホニル基を有する
単量体としては、例えばビニルスルホニルエチルメタク
リレ−ト等が挙げられる。

上述の反応性基を有する単量体は該疎水性車自体の約０
１へ・約３０重Ｍチ、灯゛ましくは約０５〜約２５重晴
パーセント含有することができる。

上；メＢの反応性基を有する学早体と共重合する、本発
明における疎水性高分子重合体を生成するのに好ましい
他の単量体の例を以下に示す。

〔式中Ｒ１’ｌ＋　　Ｒ９は同一であっても異なっても
よく、水素原子、ハロゲン原子あるい（よ、アミノ基を
含まない１〜１０個の炭素原子を有する置換若しくは未
置換のアルギル基、又はアリール基のごとき非障害性４
換７５を表わし、ＲＩＯは水素原子、・・ロゲン原子、
あるいは、アミノ基を含まない炭素原子１〜１０個の置
換、若しくは未置換の脂肪族基、若しくは芳香族４．（
を表わす５．〕脂肪族基及び芳香族基としては例えばア
ルキル基、アルコキシ基、アリール基、アリールオキシ
基が挙げられる１３式（Ｖ）で示されるｍ１体としては
、例えばスチレン、ビニルトルエン、ビニルベンジルク
ロライド、ｔ−ブチルスチレン等がある３、その他のｒ
ｌｔ　量休の例には下記のものがある７、 ０ＨＩＩ”−ＣＲ”　−ＣＯＩＩ２　　　　　　・・・
（■）〔式中ＲＩ　３は式（Ｖ）におけるＲ８　　と同
義であり、ＲＩ　ｌは水素原子又ｔよメヂル基、Ｒ１２
は置換又は未置換のそれぞれ炭素原チ１〜１０個を有す
る了り−ル基、アルキル基、アルカリール基及びアラル
キル基を示す〕。

アクリロニトリル、メタクリレートリルのごとき、重合
性不飽和ニトリル＋１１．量体　・・・（＼・１１）ジ
ビニルベンゼン、Ｎ、Ｎ−・メチレンビス（アクリルア
ミド）、エチレンジアクリレ・−ト及びエチレンジアク
リレートのごとき、二つの付加重合性基を有する粒子内
架橋性単量体−・・６４！１）これらの＊′＋量体及び
前記反応性基を有する単量体を適宜組合わせて共重合さ
せることで、本発明の高分子重合体粒子単位を構成する
ことが可能である。粒子即位は、これらのＭ’−１ｉ体
単位を（Ｖ）、（Ｖｌ）及び（■）のものについては、
それぞれ０〜９９．５重最チ、（■）のものについては
０〜１０后針係、好壕しくは０〜５重情係含有すること
が好せしい。３ 本発明に係る疎水性高分子重合体は通常用いられる公知
のラジカル重合法を用い、容易に重合することが可能で
あるが、好ましくは懸濁重合法を用いることで重合後に
別に加工することなく粒状高分子重合体を得ることがで
きる１、該粒子表面を被覆する親水性高分子重合体は、
下記一般式（■）： Ｒ１ ＜Ｅ　００．Ｒ，、０Ｒ３ （イ［１ｊ７、式中ｎ、　　は水素又はメヂル基、Ｒ。

は置換基を０冒７、又はＩＹｔ、ない炭素数２〜６の二
価のアルキレン基又はポリ（オキシアルキレン）基、Ｒ
３は水素又は炭ｒＰ：数１〜３のアルキル基であって、
更に水酸基、アミノ基等の極性Ｑｖ換県をｆ１シて良い
、〕 で示さノア、る中位を約５ｏ〜約９９爪計ギ、一般式ｃ
ｎ＞、（ＩＩＩ）及び（■） １ （１５） 〔世し、式中Ｒ，け前記式Ｉと回着であり、Ｒ４は炭素
数２〜３の二価のアルキレン基、Ｒ５は水素又は炭素数
１〜３のアルキル基、Ｒ６は中なる結合手又は炭素数１
〜２の二価のアルキレン基、Ｒ７は水素又は炭素数１〜
５のアルギル基を示す。〕 よりなる群から訳択した少なくとも１種の一単位を約１
〜約５０重量係の割合で含有するものが好適である１、 一般式（１）のＱ’＋位を生成するための中継体として
Ｕ５、一般式（１’）： ％式％（１） 〔式中Ｒ１〜Ｒ３は式夏と同・塊である３、〕で表わさ
れるアクリル酸又はメタクリル酸誘導体を使用すること
ができる。具体例とし−こｔよ、β−ヒドロギシエチル
アクリレート、γ−ヒドロキシプロピルーｒクリレ〜ト
、β−アルコギシエチルアクリｌ／　−ト、γ−アルコ
キシプロピルアクリレート、アミノアルコキシエチルア
クリレート、アミノアルコキシエチルアクリレート、ヒ
ドロキシアルコキシエチルアクリレート、ヒドロキシア
ルコキシエチルアクリレート及び相当するメタクリル酸
誘導体が挙げられる、一般式（ＩＩ）の単位を生成する
だめのツヤ聞体としては、一般式（ｎ’）　： １ 喀 ＯＨ，、−ｃ　　　　　　　　　　・・・（■′）００
Ｈ 〔式中、Ｒ１は式■と同義である、〕 で示されるアクリル酸又はメタクリル酸が挙げられる。

一般式ＣＩｌｌ　）の中位を生成するための単皐体とし
ては、一般式（Ｉｌｌ’）　： ｃＴ（、、−（：　　　　　　　　　　　　　　・・・
　（ＩＩＩ’）醤 （’！００Ｒ４ＮＨＲ５ 〔但し式中の記号は弐■と同義である。〕で示される不
飽和アミン、例えを」：、アミノエチルアクリレ−１−
、アミノプロピルアクリｌ／−１−、モノアルキルアミ
ノエチルアクリレ−ト、モノアルキルアミノエチルアク
リレ−ト及び相当するメタクリル酸誘導体が挙げられる
、一般式（ＩＶ）の単位を生成するための重唱゛体とし
ては、一般式（ＩＶ’）　： ＩＩ し但Ｉ７式中の記号は式■と同義である。〕で示される
不飽和アミン、例えばアミノスチレン、モノメチルアミ
ノスチレン、ビニルベンジルアミン、ビニルベンジルメ
チルアミン、ビニルベンジルエチルアミン、ビニルベン
ジルグロビル−アミン等を挙げることができろ。

本発明に係る親、水性高分子重合体は前述の一般式（１
）、（■）及び（Ｉｎ　’Ａ以外に必要に応じて、他の
親水性共重合ｉ１１’　ＶＨ−Ｑｊ　Ｍ体を含有するこ
とができる。

他の１（ｊ、水性共重合ＩｉＪ能即扇体としては、例え
ばアクリルアミド、メチルアクリルアミド、イソプロピ
ルアクリルアミド竹のアクリルアミド誘導体類及び相当
するメタクリルアミド誘導体類、Ｎ−ビニルピロリドン
、Ｎ−ビニルイミダゾール等のビニル異節惧化合物等が
挙げらｔする、これＩ’、　？ｌ’叶休１体’ｒ、約ｓ
　ｃｐ　重＠　％　ｌ−４−Ｆ、ｘＩマＬ　＜　ａ約２
０重１１係以下含有することができる。

上記の本発明に係る￥覗水性重合体し１．種（中の公知
のか法を用いて、本発明に係る疎水性重合体粒子表面に
被覆することができる１ 被覆方法、！＝１〜では、該￥す、水性高分子重合体の
溶液を例えばスプレー法、浸漬法、−フィクロカプセル
化法（例えば、相分離法等）笠を用いることによって容
易に達成することができる。

被（１処理の後、疎水性イ１′機合成高分子重合体粒子
壱面の反応性基と１−記親水性高分子重合体のアミノ基
又はカルボキシル基と架橋反応を行わすることに、ｒす
、被覆ｌまた観、水性高分子重合体層からの溶出を防止
することができる５、上記のごとく被覆処理された１１
体は、カルボキシル基又は−ｒミノ基を有する親、水性
表面で覆われておりこのカルボキシル基又はアミノ基に
直接生理活性物質を固定することも、−！！、だ、他の
基を介して固定することも可能である２、直接法として
はジシクロへギシル力ルポジイミド（−丁）ＣＣ）、１
−ニブ−ル−５−（３−ジメヂルアミノブロビル）カル
ボジイミド塩酸塩（、ｐ■）ｃ　）等の脱水縮合剤で４
１ｊ体と生理活性物質のアミノ基とカルボキシル基を結
合させる方法、１１休のカルボ・Ｖ−シル基を活性Ｎ−
ヒドロキシコハク酸イミドエステルとしとれに生Ｐ１１
活性物質を置換させる方法等がある。

間接法としては、上記力ルボギシル基に６−アミノカプ
ロン酸を結合させ、更にこの末端カルボン酸（ζ上記活
性ニスデル法によゆ生理活性物質を固定する方法、同じ
くカルボキシル基にジーγミノへブタンを結合させた後
、更に末・喘アミノ基と生理活性物質をグルタルアルデ
ヒド又はカルボジイミドにより結合する方法あるいは相
体のアミノ基と生理活性物質をグルタルアルデヒド架橋
する方法等がある。

このようにして担体に生理活性物質を固定化した後、適
当な緩衝液で洗浄することにより容易に未反！ｔ；物ｒ
［を除去することが可６１へである、このように１．で
生成しＩｔ牛埋活性物質Ｐｉしｉ−化担体は、治療用選
択吸着剤１．アフイ：−ティークロマトグラフィー用吸
着剤、分析几１カラム等に用いることが可能である、 例えば、治療用選択吸着剤とし”［用いる鳴合、該生理
活性物質２二ζ・よ、抗原、抗体、ｒ１￥素、補体、レ
セプタ・−笠が挙Ｖ）゛られるが、本発明の吸着剤によ
シ治療を行う場合、治療する疾患によって」二記生理活
性物質を適宜選択すれば良い。

例えば、自己免疫疾患として総称される全身性紅斑性狼
瘡、慢性関節リウマチ、自己免疫性溶血性貧血、　糸球
体Ｎ　ｆｚ　Ｗ　ｆ　ｉ−］１、自己抗体アルいは免疫
７５１合体が疾患１う（置物７’ｉである仁とが知られ
ているので、とれらを血液中より除フッする心数がちる
。

これら自己抗体あるいは■、免杵腹自体を１全夫−）−
るだめに（−］１、とれらと特異的にＩｊ’ｉ合する例
えばスタフィロコッカス−アウレウスのある神の株が１
１で；生するプロディンＡや　リンパ球τ’　１（ｕ小
イ）１￥ｒの細ｌｌ：’＋ｌ賠にｒｒ在するＦ（・　　
レセプタ・−１オ１ｉｒト自　成分、抗免ｇｊ＋）グｒ
１プリン抗体、ψ−１・にトイｌノグロプリン、６１隼
γ−グロブリンへ１を４［１体に固定化したものを治療
用選択吸着剤と１．て使用する６、また腎不全患者にお
いては、血液中の尿素が代謝されずに体内に蓄積される
ので、尿塁を分解するｎ’ｓ’素であるウレアーゼを固
定化した担体を用いる、 更に、癌患者においてｌＪ、癌卸１胞に対する免疫作用
を抑制するいくつかの因子が血中に存在することが証明
されているが、これらの免疫抑制因了は抗体分画と抗原
の１万〜１０）５程度の分子刊を有する蛋白質分画に存
在するので、これらの抗原に封する抗体、プロティンＡ
Ｘｉｌｌ胞壁Ｆｃ　　レセプター、抗免疫グロブリン抗
体を固定化して治療用・′へ択吸着剤として使用する。

−１Ｆ：記治療用吸着剤において蛋白質等が該１［１体
表面に非特異的吸着を起し、生理活性物質を固定化する
際に共有結合以外に、物理的吸着さ）＞−だものが共存
し、後で吸着剤に血液又は血：」キ等を接触させだ」掲
合、とれらが脱着を起し体内に移行し、抗原となり免疫
反応を誘起する。仁のような担体を繰返し使用した場合
、アナフィラキシ−ショックを起すことがあり非常に危
険である。

本発明の担体（、Ｌ本発明に係る共千体被覆によυ蛋白
質の非特異的吸着がなくこのような危険が全く無い。

更に本発明の選択的吸着剤（ｄ、吸着の特異性が高くπ
口前又は血堕中の有用成分を同時に吸着するという欠点
もない。

本発明の担体を４ｆ白質、核酸、多糖類、ホルモン、ビ
タミン、細胞等の分１’ｌ［ｃ精製を目的とするアフィ
ニティークロマトグラフィー用吸着剤に用いる場合、精
製しようとする目的物質に応じて固定化する生理活性物
質を選択して使用する。

例えばリンパ球のＴ細胞とＢ細胞の分離を行う場合、ま
ず、密度勾配遠心法等の公知の手段により血液中よりリ
ンパ球成分を取出す。次に抗免疫グロブリン抗体を固定
化した本発明のアフィニティークロマトグラフィー用吸
着剤に上記リンパ球成分の浮遊液を接触させるとＢ細胞
が選択的に吸着されるので、Ｔ細胞のみが溶出する。吸
着されたＢ細胞は、免疫グロブリン溶液によって脱離溶
出される。

また、１ｆｌＪえはアルブミン、免疫グロブリン、ヌは
ホルモンやビタミンに対する抗体若しくはレセプターを
固定化した本発明のアフィニティークロ−７トグラフイ
ー用吸着剤に、抗血清、ホルモン、ビタミン等を含む溶
液を各各の対応において１ｙ触さ一＋ｉ、−２＞　；−
１抗而清中の抗Ｔルグミン抗体、抗免疫力゛ロブリンｆ
ｌｉ’、体、あるいはホル・モン、ビタミン′Ｍ、９；
　、＋、−それで！れ１゛４択白■ζ１１外、音斉１１
−４−に吸着さ１１る。−１−の後、生伸的ｐＨ以外の
緩衝液、高濃度塩溶液、界面活性剤溶液等により目的物
質を溶出することができる。

上記のように本発明のＩへ択的吸着剤をアクイニディー
クロマトグラフィー用吸１１剤として用いた場合も、吸
着剤表面−・、の７Ｉ貸白７１（等の非特異的吸着がな
いた〜′）不純物の混入のない高、ｉ′Ｊ１１度の精製
物が７１）られることは言う寸でもない、、。

更に別の聾様とし−Ｃ分析用カラｌ、０４ｕ体として用
いることが可能でちる１、こび）場合の使用される牛理
活＋′１・物質ｋｔ、むの分析［−１的に応じて、抗原
、抗体、補体及び酵素の中から任意に選択するこ々がｉ
ｉｌ能である。

例えば、グルコ−ス］キシ〃゛−ゼ、・くルオヤシダー
ゼを前述の方法を用いて本発明の担体表面に固定化した
ものをカラムに充てんしグルコース濱液をカラム内に流
すば、グノトコー−−−スや」１、各酵素の作用によυ
グルコン酸と過酸化水素に分解され、過酸化水素は色原
体（例えば４−−Ｔミノアンヂビリン塩酸塩とフェノー
ル）を定Ｍ的に酸化縮合させ赤色色素を生成する。との
色素をフロー・セルに導き、分光光度ｒ１によって、？
を斤定波長の吸光度を測定することにより、グＡ・コー
ス濃度を測定することができる。

寸だ、抗原、抗体反応を用いた免疫学的測定法（例えば
放射免疫測定法、蛍光免疫測定法、酵素免疫測定法等）
も検知系を目的に応じて選択することで同様に可能であ
る。

特にΦ疫学的測定法においては測定径界面活性剤溶液又
は高濃度塩溶液等により洗浄することで、）・ラップさ
れた４１す宇物質が溶＋ｔｆ＃され、再生使用が可能で
ある。、 〔実施例〕 次に本発明を実施例により、更に杖体的に説明するが、
本発明はこれにより限定されない１、実施例１ 粒径０．８　Ｆ＋＋のコポリ（スチレンーグリシジノト
メタクリレ−１・）１重；、１比、スチレン：グリシジ
ルメタクリレ−）−９：１）に対してコポリ（２−ヒド
ロキシエチルメタクリレート・−゛アクリル酸）（重早
比２−ヒドロキシエチルメタクリレート：アクリル酸−
９＝１）及びコポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレ
−トーアミノエチルアクリレート）（重清比２−ヒドロ
キシエチルメタクリレ−ト：アミノエチルアクリレ−ト
−９：１）の各各０５悌含水エチルアルコニル溶液を用
意し、上記各溶液に浸漬後乾燥し、１２０℃で２時間加
熱することで、架橋を行い−Ｆ記高分子粒子に各コポリ
マーを被覆した。

上記の担体を前者を本発明の担体（１）、後者を本発明
の相体（２）とし、未被覆のものを叱較］［ｉ体とした
。

上記相体各省２７を牛血清アルブミンｓｙ／ｄ、ｔ、　
リン酸緩衝食塩溶液（ｐｎ−７６）、及ヒヒトγ−グロ
ブリン１．　ａ　ｖ／ｄｔのリン酸緩衝食塩溶液（ｐＨ
＝７．６）各各１０所ｅ浸漬し、３７℃で２時間保温し
た後溶液の−）二澄を分＋ｔ”ｌ：　Ｌ、　、ビウレッ
ト法により、？１（白７）（（や；を迎１定し２／、−
１ｌ牡［表−１に結果を示す１、 壱−１ 上記結果から明らかなように、比較担体である未被覆の
疎水性高分子重合体粒子は牛血清アルブミン、ヒト面清
γ−グロブリン共に非常に大量に非／ｌ’に異的吸着を
引起していることがわかる。

それに対して本発明の担体でちる親水性高分子重合体で
被ソ唖したものけほとんど吸着を起１〜ていないことが
明らかである。

実施例２ 前記実施例１で用いた、本発明の担体（１）全ジオギザ
ン中でＮ−ヒドロ虚シゴハクｒｉｅ−イミドと反応させ
活性エステルとし、とれに対し７てリン酸緩衝液中で抗
ヒトα−フェトプロディン抗体（ダコバツク社則Ｊデン
マーク）と反応固定化した。反応終了後リン酸緩衝牛理
食堪液（ｐＢｓ　）で数回洗浄を行つ／こ。抗ヒトα−
フェトプロティン抗体は本発明の相体（１）にス・１し
て１．８　ｍｙ　／　ｆポリマーの割合で固定化できて
いた、これを本発明の選択吸着剤とする。

次いで、ヒトα　フェトプロディン（ダコバツク社製、
デンマー　り）を用いてヒト正常面ｌ！ρ２０−に対し
てヒトα−フェトプロティンが、１．５μ２／ｍ／にな
るように調整し、−に記相什２０２を充てんしたカラム
へ流速ｓ、　ｏ　ｍｅ　／分で２時間循環を行った１、
その血漿中のヒトα−フェトプロティン濃度をｒ１￥素
免疫測定法（カイノス社製）を用いて測定した１、結果
を表−２に示−１゜表−２ 以上表−２の結果から明らかなように本発明の吸着剤１
」有効にα−フェトプロディンを吸着していることが明
らかである３、 次にα−フェトプロティンを吸着させた本発明の選択吸
着剤２０１を１）ＢＳで十分洗浄した後にザボートネッ
ト付ポリグロビレン製カラムに充てんした一１ＰＢＦＦ
　（ｐＴ（−７，４）　　で十分洗浄の後３Ｍのヂオシ
アン酸カリウムーＰＢＦＪ溶液１００ｍ１を流し溶出液
をセロノ１ンチコーーーグで、ＰＢＳに対しく４℃２４
時間）遺析を行った。

」二Ｗｅ溶液を総蛋白質叶をミクロビウｌ／ット法で、
またα−フェトプロティンｌを酵素免疫測定法により測
定しα−フェトプロティンの純度及び回収率を求めた。

、 総蛋白質回収量　　　　　ｊ２３ｐ？ α−フエトフ゛口Σイン［１甲１又Ｑ　　　　１２．３
μりα−フエトブ■１ディン純度　　　　１０１１係α
−゛７エトグロテーイン回収ｙ％テＡｑ、　１係１″−
Ｊ、上の結果から明らかなごとく本発明の・”ｌｊｉ択
吸Ｒ剤ｋｉアフ・（＝ディークロマトグラフ・イー川の
ｔ４刺としても有用であることが明らかである。

実施例３ 実施例２で用いた４［１体の勲位Ｙ［Ｊ、水性１１合体
をメタクリル酸／２−ヒドロギシエチルメタクリレート
共重合体（重量１七１：９）からアミンエチルメタクリ
し／−ト２／２−ヒドロキン丁デルメタクリレート共重
合体（重腓比１：９）に代えて同（子の方法て謹伊し、
本発明の４１１体とした３、上記本発明の４１１体に凝
集ヒト−２″−グロブリンをグルタルアルデヒドを用い
常法に従い、表…ｉに固定化した後、ＰＢＳで十分洗浄
を行った、凝集ヒト−γ−グロブリン０、ヒトーγ−グ
ロブリン〔マイルスケミカル（ｈｑｔ１θｓ　ｃｈθｍ
　ｉ　ｃ　ａ、ｌ　）社製〕をＰＢＥＩ中に２０１Ｙ　
／　ｍｅの濃度に溶解した後ジメチルスルポギシド（■
）ＭＳＯ）を６Ｙ濃度で作用さ−Ｉす、ヒト−γ−グロ
ブリンの凝集体溶液を円ｔ４シた。この凝集体溶液にポ
リエチレングリコール６０００が４チ重Ｒ／容計になる
ように添如し閉年体を分別沈降さｕ１沈降物を分取（〜
可溶性凝集ヒトーｒ−グロブリンと１７で用いた。（純
度９８チ） このように１７て作ｉｐ、４した本発明の吸着剤は１７
８０　ｎｍ　の吸光度からｊ１ｆ隼ヒＩ・−γ−グロブ
リンの固定化も）は２８■／　１７’　、ｌｆｊ体であ
った１、上記本発明の吸着剤を５２カラトにつめ慢性関
節リウマブー患者の血清２０−を０５ｍｅ　７分の流速
で２時間室温で循環させ、その前後でＲＡＡｒ１総蛋白
質駁、γ−グロブリン量及びイムノグロブリンＧＸＭ及
びＡについて測定を行った。

イ１１シ、ＲＡＡｒ１ＲＡＨＡテスｌ−［富士臓器（１
１）製〕、イムノグロブリンＧ、Ｍ及びＡは単純免疫拡
散法〔５ＲＴＴ）三光純薬■製〕、総蛋白質はビユレッ
ト法、アルブミンはＢＯ３法を用いて測定１−また。結
果を表−６に示す。

表づ −」二記岩−３から明らかなように本発明の吸着剤はＲ
ＡＡｒ１著しい減少がみられるが、他の血漿蛋白質はは
、とんと減少することなく、標準値を維持していること
がわかる１、 〔発明の効果〕 以上の説明から明らかなように、本発明の生理活性物質
固定イヒ用担体は蛋白質等の非特異的吸着がなく、まだ
使用目的に応じて生理活性物質を固定化した選択的吸着
剤は、吸着の！１〒異性が高いという予想外に顕著な効
果を持っている１、そのため治療用火択吸着剤、アフィ
ニティークロマトグラフィー用吸着剤、分析用カラム、
免疫学的測定法等各方面への有用性が高いものである点
で顕著な効果が秦−ローられる３、’ｔ’１ｒＦＴ’出
願人　　　小西六写真工業性式会社代理人　中　本　　
′が

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　液体不浸透性１−１一つ液体不浸透性の疎水性有
   機合成高分子重合体から成る粒子であって、且つその粒
   子表面に反応性基を有する粒子の表面を、親水性高分子
   重合体で被覆し、且つそれが該反応性基によって架橋１
   〜でいるものであることを特徴とする生理活性物７４固
   定化用ｔｒＪ体３． ２、　該粒子表面を被（ＹＳする親水性高分子重合体が
   、下記一般式（Ｉ）： １ ０００　Ｒ２０Ｒ。 〔但し、式中Ｒ１は水素又はメチル基、Ｒ２は１ｊり換
   基を有し、又は有しない炭素数２〜３の二価のアルキレ
   ン基又はポリ（オキシアルキレン）基、Ｒ３は水素又は
   炭素数１〜３のアルキル基であって、史に水酸基、アミ
   ン基等の極性ｒｉ換法を櫓（−７て良い。−１で示され
   るｔｙ位を約５０〜約９９小量チ、−・般式（ＩＩ）　
   、（Ｉｌｌ）及びａＶ＞：Ｉ Ｃ（］ＯＨ １１ ＣＯＯＲ４Ｎ、ｔＴＲ５ １ 〔但し、式中Ｒ１は前記式Ｉと同義であり、Ｒ４は炭素
   数２〜３の二価のアルキレン基、Ｒ５は水素又は炭素数
   １〜３のアルキル基、Ｒ６は単なる結合手又は炭素数１
   〜２の二価のアルキレン基、Ｒ７は水素又は炭素数１〜
   ５のアルキル基を示す１、〕 よりなる１、］Ｙから４択１−２だ少なくとも１種の中
   。 位を約１〜約５０重に、チの割合で潔有するものである
   特ｉｆ′「ｉｊ’？求の節１囲第１１Ｊ′１記載の牛理
   活性物質固定化用＃Ｖ！体、 ５　液体不浸透性且つ液体不膨１１°・１件の疎水１・
   ’ｉ　１機合成高分子市合体から成る粒子てあって、且
   つその粒子表面に反応性基金有する粒子の表面を、麹、
   水性高分子重合体−Ｃ被覆瞠目−っそれが該反応性基に
   よって架橋し５ている相体の表面に、生理活性物質を固
   定したものであることを特徴とする選択眼ネを剤。 ４　該粒子表面を彼（ユする親、水１１＝高分子■（合
   体が、丁配一般式（■）： １１゜ ０００　Ｒ２（、）、Ｒ。 〔世シ、式中Ｒ５は水４そ又はメヂル基、Ｒ２は置換基
   を有し、又は有ｌ〜ない炭素数２〜３の二価のアルキｌ
   ノン基又ｔＪ、ポリ（オギシアルギレン）基、Ｒ３け水
   素又は炭素数１〜５のアルキル基であって、更に水酸基
   、アミン基等の極性置換基を有して良い１、〕で示され
   る単位を約５０〜約９９重吐チ、−・般式（ＩＩ）　、
   （ＩＩ）及び偵）： １ ００Ｈ Ｉ Ｃ０ＯＲ４ＮＨＲ５ １ 〔但し、式中ＲＸ　　は前記式Ｉと同義であり、Ｒ４１
   ｔＪ’、　炭素数２〜５の二価のアルキレン基、Ｒ６は
   水素又は炭素数１〜３のアルギル基、Ｒ６は１１ｊなる
   結合手又は炭素数１．〜２の二価の“アルキレン基、Ｒ
   ７は水素又は炭素数１〜５のアルキル基を示す。」 よりなる群から４ぺ択りまた少なくとも１種の中位を約
   １〜約５０市畳１；係の割合−で沈有するものである’
   ｔ！ｉ’　、：Ｔ請求の９・１Σ囲ゾ”１）３項記載の
   ・１択吸着剤。、 ５　該生理活性物性が、抗原、（４１体、補体、ｌ／セ
   ブタ−及びｊ′＋’％　、７ｊ七から成る群より選択し
   た生理活性物質で、！″、る特「、′１請求のａ：ｎ、
   囲；′１〜３項又は第４項記載の１′弓択吸着剤。