JPS59135366A - 免疫学的自動分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫学的自動分析方法に関するものである。

近年、医療の進歩に伴ない極微量の生体成分の分析が可
能となり、各種疾患の早期診断等に役立っている。例え
ば、α−フェトプロティン、癌胎児性抗原等で代表され
る悪性腫瘍、インシュリン、サイロキシン等で代表され
るホルモンの異常分泌疾患、免疫グロブリン等で代表さ
れる免疫疾患等の難病とされていた各種疾患の診断が早
期にできるだけでなく、それら疾患の治療後のモニタ、
あるいは最近では薬物等の低分子のハプテン〈不完全抗
原）も測定可能となり薬物の投与計画作成にも役立って
いる。

これらの生体成分の多くは抗原抗体反応を利用した免疫
化学的な方法で分析され、このような免疫化学的反応を
利用した分析方法として、従来種々の方法が提案されて
いる。例えば、抗原抗体反応の結果体じる抗原抗体複合
物の凝集塊等の有無を、凝集法、沈降法、比濁法等によ
って検出して所望の生体成分を分析する方法がある。し
かし、これらの分析方法は多量の抗原抗体複合物を必要
とし、感度的に劣るため、専ら定性分析あるいは半定量
分析に採用されている。また、このような分析方法の欠
点を補うために、抗体または抗原を炭素粒子や合成樹脂
等の微粒子に結合させて被検物質との抗原抗体反応を行
なわ□せて凝集法あるいは比濁法により被検物質を分析
する方法や、抗体または抗原に放射性同位元素、蛍光性
物質、発光性物質あるいは酵素等の検知感度の高いマー
カを標識した標識抗体または抗原を用いて抗原抗体複合
物を高感度で検出して被検物質を分析する方法も提案さ
れている。しかし、前者の微粒子を用いる方法は後者の
マーカを用いる方法に比べ感度的に劣るため、最近では
後者の検知感度の高いマーカを用いる分析方法が主流に
なっている。

このようなマーカを用いる分析方法としては、マーカと
して放射性同位元素を用いる放射免疫分析法、螢光性物
質を用いる螢光免疫分析法、酵素を用いる酵素免疫分析
法等が知られているが、なかでも酵素免疫分析法は特殊
な設備や測定技術を必要とせず、一般に普及している比
色計を用いて容易に行なうことができるので、最近特に
注目を集めている。この酵素免疫分析法は、免疫化学的
反応の有無により標識されている酵素の活性の変化量を
直接求めて被検物質を定量するホモジニアス（Ｈｏｍｏ
ｇｅｎｅｏｕｓ）酵素免疫分析法と、不溶性の担体、例
えばプラスチック等の合成樹脂やガラスピーズを用い、
抗原または抗体と反応した酵素標識抗体または酵素標識
抗原と未反応のそれとを洗浄操作によりＢ−Ｆ分離し、
このＢ−Ｆ分離後の標識酵素の活性量を求めて被検物質
を定量するペテロジニアス（＠　ｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏ
ｕｓ）酵素免疫分析法との２つの方法に分類される。し
かし、前者のホモジニアス酵素免疫分析法は、単純な操
作で行なうことができるが、薬物等の低分子のハブテン
しか分析できず、高分子である生体成分の分析ができな
い欠点がある。これに対し、後者のへテロジニアス酵素
免疫分析法はＢ−Ｆ分離を行なうための洗浄操作を必要
とするが、被検物質が低分子であっても高分子であって
も適正に分析でき、その分析対象が極めて広範囲である
ところから一般化されつつある。

かかるヘテロジニアス酵素免疫分析法としては、競合法
、サンドインチ法等が知られている。競合法は、第１図
に示すように、不溶性の担体１にサンプル中の被検物質
と抗原抗体反応を起す抗体または抗原を予め固定化し、
この担体１とサンプルおよびその被検物質２と同一物質
に酵素標識した標識試薬３との抗原抗体反応を行なわせ
、その後洗浄を行なって抗原抗体反応により担体１に競
合して結合した被検物質２および標識試薬３と、結合し
ていないそれらとをＢ−Ｆ分離してから、標識試薬３中
の標識酵素と反応する発色試薬を加えて反応させた後そ
の反応液を比色測定して標識酵素の酵素活性を求めて被
検物質２を定量するも゛のである。また、サンドインチ
法は、第２図に示すように、競合法と同様にサンプル中
の被検物質と抗原抗体反応を起す抗体または抗原を予め
固定化した不溶性の担体５を用い、先ずこの担体５とサ
ンプルとの抗原抗体反応を行なわせてサンプル中の被検
物質６を担体５に結合させ、次に洗浄を行なってＢ−Ｆ
分離した後、その担体５に被検物質６と抗原抗体反応を
起す物質を酵素で標識した標識試薬７を作用させて抗原
抗体反応を行なわせ、その後再び洗浄を行なってＢ−Ｆ
分離してから標識試薬７中の標識酵素と反′応する発色
試薬を加えて反応させた後、その反応液を比色測定して
標識酵素の酵素活性を求めて被検物質６を定量するもの
である。

上珈したようにヘテロジニアス酵素免疫分析法において
は、７つの被検物質の分析中に競合法においては１回、
サンドインチ法においては２回のＢ−Ｆ分離が必要とな
り、また抗原抗体反応を行なわせる反応容器を繰返し使
用する場合には、あるサンプルの分析終了後次のサンプ
ルの分析開始に先立って反応容器を洗浄する工程が加算
されることになる。このように、１つの被検物質の分析
にＢ−Ｆ分離を含む少なく共２回の洗浄工程を必要とす
る酵素免疫分析法を自動化するにあたっては、各洗浄工
程毎に専用の洗浄装置を配置することも考えられるが、
このようにすると装置が大形かつ複雑、高価になる不具
合がある。このような不具合は、マーカを用いる上述し
た放射免疫分析法、螢光免疫分析法等を自動化する場合
でも同様に生じるものである。

本発明の目的は上述した不具合を解決し、小形で、構成
が簡単かつ安価な分析装置によって実施できる免疫学的
自動分析方法を提供しようとするものである。

本発明は、所定の抗体または抗原を固定化した担体と、
所定の抗体または抗原を所定の物質で標識した標識試薬
とを用い、反応容器内で抗原抗体反応を行なわせてサン
プル中の被検物質を免疫学的に自動的に分析するにあた
り、前記反応容器を、該反応容器に収容したサンプル中
の被検物質の分析中に、反応ライン中に設けた洗浄装置
に少なく共２回搬送して、前記担体に結合した抗体また
は抗原と、担体に結合していない抗体または抗原とを分
離するＢ−Ｆ分離を含む洗浄を少なく共２回行なうこと
を特徴とするものである。

以下図面を参照して本発明の詳細な説明する。

第３図は本発明を実施する酵素免疫自動分析装置の一例
の構成を示す線図であり、第２図に示したサンドイツチ
法を採用するものである。本例では反応ラインをシング
ルとして単一項目を分析する。反応容器は大口部１１ａ
および小口部１１ｂを有するＵ字管１ゴを２４個用い、
これらを反応管ディスク１２の同一円周上に等間隔に保
°持する。

反応管ディスク１２はＵ字管１１を恒温槽１０（第４図
）に浸しながら水平面内で矢印で示す方向に所定のピッ
チ（例えば１５秒）で間欠的に回動さぜる。この反応管
ディスク１２の間欠的回動によるＵ字管１１の停止位置
を符号８１〜８２４で示す。本例では停止位置Ｓ１にあ
るＵ字管１１に、サンプル分注装置１３によりサンプラ
１４の所定のサンプル吸引位置にあるサンプルカップ１
５からサンプルを選択的に分注する。なお、サンプラ１
４は反応管ディスク１２に保持するＵ字管数と同数の２
４個のサンプルカップを同一円周上に等間隔に保持し、
反応管ディスク１２の回動と同期して矢印方向に間欠的
に回動する。また、停止位置Ｓ３にあるＵ字管１１には
試薬分注装置１６によりサンプル中の被検物質に応じた
酵素標識試薬１７を選択的に分注し、停止位置ｓ４にあ
るＵ字管１１には試薬分注装置１８により発色試薬１９
を選択的に分注する。更に、停止位置Ｓ＋７にあるＵ字
管１１にはその大口部１１ａがら担体投入器２ｏに多数
収容されているプラスチック等の合成樹脂やガラスピー
ズ等の不溶性の担体２１を１個選択的に投入する。なお
、担体２１はＵ字管１１の大口部１１ａから容易に出し
入れでき、かつ小口部１１ｂには入らない大きさとし、
その表面には上述したようにサンプル中の被検物質と抗
原抗体反応を起す抗体または抗原を予め固定化しておく
と共に、担体投入器２ｏ内においては緩衝液で湿潤させ
ておく。また、停止位置ＳａｇにあるＵ字管″１１がら
は、これに収容されている反応液を比色計２２に選択的
に吸引し、停止位置Ｓ２１にあるＵ字管１１がらは、こ
れに収容されている担体２１を担体取出器２３により選
択的に取出して排出する。更にまた、停止位置Ｓ２２に
あるＵ字管１１には洗浄ポンプ２４により、イオン交換
水、免疫分析用Ｍ’ｆｆＪ液、生理食塩水等の洗浄液を
選択的に注入し、また停止位置Ｓ２４にある０字管には
Ｍ衝液分注装置２５により緩衝液２６を選択的に分注す
る。更に、停止位置８２〜Ｓ５にある各々のＵ字管１１
は、その小口部１１ｂをそれぞれ共通の撹拌用エアーポ
ンプ２７に着膜自在に連結し、同様に停止位置８２２お
よびＳ　２．３にある各々のＵ字管１１はその小口８１
５１１　ｂをそれぞれ共通の排液ポンプ２８に＠脱自在
に連結する。

次に・第３ズ（こ示す酵素免疫自動分析装置の動作を第
１・ｌ１４Ａ−Ｄをも参照しながら説明する。

反応管ディスク１２の１回転目（こおいでは、先ず停止
位置５０７Ｇこおいて第４・図Ａに示すように担体投入
器２０から緩衝液で湿潤されている担体２１をｌｌｆｆ
ｌ次のＵ字管１１Ｑこ、その大口部］−］−ａから１個
ずつ投入する。担体２１か投入されたＵ字管１フには、
停止位置Ｓ２□において洗浄ポンプ２・１・の作動によ
りその大口部１　］、　ａから洗浄液をシャワー状に間
欠的に注入すると共に、この洗浄液を排液ポンプ２８の
作動Ｇこより小口部１１ｂを経て吸引排出してＵ字管１
１を洗浄し、次の停止位置５２３（こおいて更に小口部
１　ｌ　ｂを経て排液ポンプ２Ｂ＆こより吸引すること
により洗浄液をほぼ完全に排出する。このようにＵ字管
］１を洗浄することＱこより、予しめ担体２１に湿潤し
た緩衝液を洗い流し、後段の緩衝液分注後のＵ字管１１
内の緩衝液量を一定に保つ。次に、第４図Ｂに示すよう
０こ停止位置Ｓ２４において緩衝液分注装置２５により
緩衝液２６を大口部１．１　ａから一定量分注した後、
停止位置Ｓ□においてサンプル分注装置１３により、サ
ンプラ１４の所定のサンプル吸引位置Ｑこあるサンプル
カップ１５から一定量のサンプルを大口部１１ａから分
注する。停止位置Ｓ□においてサンプルが分注ぎれたＵ
字管１１は、吹の停止位置Ｓ２においてその小口部１１
．　ｂを攪拌用エアーポンプ２７に連結し、該エアーポ
ンプにより小口部］、］、ｂを経てエアーを唄ｌ出さぜ
ること０こよりＵ字管１］内に収容された担体２Ｊ、緩
衝液２６およびサンプルを攪拌して１回目の抗原抗体反
応を開始させる。この攪拌は停止位置Ｓ３．　、Ｓ。

およびＳ５においても順次行なう。なお、担体投入器２
０１．緩衝液分注装Ｍ２５、サンプル分注装置１３およ
びサンプラ］４は各Ｕ字管に対して］開作動させた後は
不作動にしておく。

Ｕ字管］１が停止位置Ｓ、　において担体２１を受けて
から１回転して再び停止位置ｓ１□に移動した後の２回
転目においては、先ず停止位置ｓ２２において第４図Ｂ
に示すようにＵ字管１１内の反応液を小０部１１ｂを経
て排液ポンプ２８により吸引して排出すると共に、大口
部１１−　ａから洗浄ポンプ２４．により洗浄液をシャ
ワー状に間欠的に分注し、この分注された洗浄液を、該
停止位置Ｓ２□および次の停止位置Ｓ２８において同様
に小ロ部Ｂ−Ｆ分＊Ｃを行なう。その後停止位置Ｓ３Ｑ
こおいて第・１４図Ｃに示ずようＯこ大口部１１　ａか
ら試薬分注装置１．　ｅｉ　Ｍより酵素標識試薬］７を
一定殴分訃すると共Ｇこ、該停止位置Ｓ、および次の順
次の停止位置’Ｌ　＋　Ｓ、＋こおいて小口部１．ｌｂ
から攪拌用エアーポンプ２７４こよりエアーを噴出させ
て担体２１と酵素標識試薬１７とを攪拌し、２回目の抗
原抗体反応を開始させる。

このように、停止位置Ｓ３において酵素標識試薬１７の
分注を受けて第２回目の抗原抗体反応を開始したＵ字管
１］か、停止位置Ｓ１７に移動して３回転目に入いった
ら、停止位置Ｓ２２およびＳ２８において上述したと同
様に洗浄ポンプ２４・による洗浄液の分注および排液ポ
ンプ２８によるＵ字管Ｆ分離を行なう。次に、停止位置
Ｓ４において第４図りに示すように大口部１．１　ａか
ら試薬分注装置１８により発色試薬１９を一定量分注す
ると共Ｇこ、該停止位置Ｓ４および次の停止位置Ｓ５に
おいて攪拌用エアーポンプ２７（こよりエアーを噴出ぎ
ぜて担体２１と発色試薬１９とを攪拌して、担体２１に
結合した酵素標識試薬１７中の標識酵素と発色試薬１９
との反応を開始ぎぜる。

発色試薬１９の分注を受けたＵ字管１１が、停止位置Ｓ
□７に移動して４回転目に人いったら・先ず停止位置Ｓ
工、においてＵ字管１１内の反応液を比色計２２Ｇこ吸
引して比色測定する。比色計２２は、例えば第４・図り
に示すように反応液を通すフローセル２２ａを介して光
源２２ｂおよび検知器２２Ｃを配置し、光源２．２ｂか
らの光を干渉フィルタ２２ｃｌを介してフローセル２２
ａに投射し、該フローセル２２ａからの透過光分ライト
ガイド２２ｅを経て検知器２２ｃで受光するよう構成す
ることかできる。次（こ、停止位置Ｓ２゜ＧこおＧ）で
Ｕ字管１１内に残存する担体２１を大口部］、ｌａから
担体取出器２３により取出す。その後、停Ｊｌ：。

位置５２２Ｔこおいて洗浄ポンプ２４・Ｑこより洗浄液
をシャワー状に間欠的に分注すると共Ｇこ、この分注ぎ
れた洗浄液を該停止位置Ｓ２□および次の停止位置ＳＯ
こおいて排液ポンプ２８Ｇこより吸引排ｄＳシ８ てＵ字管１１を洗浄し、次のサンプル る担体の投入に備える。

このように、本実施例においては反応ラインをエンドレ
スとし、この反応ライン中（こ設りた１つの洗浄ポンプ
２４・および排液ホンダ２８より成る洗浄装置Ｃ＝，Ｕ
字管１］を循環搬送してＢ−Ｆ分離を含む洗浄を行なう
よう６．Ｔ　Ｌ，だから、装置全体を小形かつ構成か簡
単で、しかも安価にてきーる。

第５図は本発明を実施する酵素免疫自動分析装置の他の
例の構成を示す線図である。本例では、停止位置Ｓ１７
において担体２１を投入するσ）Ｑこ先立って、停止位
置Ｓ工。（こおいてＵ字管１１に緩衝液分注装置８１に
より緩衝液３２を適当量子じめ分注するようにした点の
みが第３図に示す装置と異なるものであり、第３図に示
す符号と同一符号は同一作用を成すものを表わす。この
ように、担体２］の投入に先立ってＵ字管１．１１こ緩
衝液を分注しておけば、停止位置Ｓ□７においてＵ字管
１］−Ｇこ担体２］を投入したときの衝撃を軽減するこ
とかできる。なお、ここでの緩衝液３２の分注量は、担
体２１の投入後停止位置Ｓ２４’こおける緩衝液２６の
分注に先立って、停止位置Ｓ２。においてＵ字管〕］の
洗浄が行なわれるから、高精度に制御しなくても停止位
置Ｓ２４における緩衝液２６の分注後におけるＵ字管］
−１内の緩衝液量を一定にできる。

第６図は本発明を実施でる酵素免疫自動分析装■の更に
他の例の構成を示ず線図であり、第１図に示した競合法
を採用り−るものである。本例にａ３いては、第３図に
示した装置において、停止位置Ｓ４にあ（ソる発色試薬
の分注ａ３よび停止位置Ｓ。

に６ける攪拌を除ぎ、停止位置Ｓ３にＪ３い℃は酵素標
識試薬の分注に代えて試薬分注装置３５により発色試薬
３６を一定量選択的に分注し、また停止位置Ｓ２４にお
いては緩衝液の分注に代えて試薬分注装置３７（こより
サンプル中の被検物質と同一物質に酵素を標識した酵素
標識試薬３８を一定量選択的に分注するようにした点が
異なるものであり、その地組３図に示すものと同一作用
を成ｆ−ものは同一の符号を付して表わす。

以下、第６図に示す酵素免疫自動分析装置の動作を第７
図ＡーＣをも参照しながら説明する。

反応管ディスク１２の１回転目に８３いては、先ず停止
位置ＳＩ７において第７図Ａに示ずように担体投入器２
０から緩衝液で湿潤されている担体２１を順次のＵ字管
１１に１個ずつ投入する。担体２１が投入されたＵ字管
１１には、停止位置Ｓ２２において洗浄ポンプ２４によ
り洗浄液をシャワー状に間欠的に注入するど共に、この
洗浄液を該停止位置Ｓ２２ｃｔ．＞よび次の停止位置８
２３にｄ３いて排液ポンプ２８により小口部１１ｂを経
て吸引排出してＵ字管１１および担体２１を洗浄する。

次に、第７図Ｂに示ターように停止位置Ｓ２４において
試薬分注装置３７により酵素標識試薬３８を大口部’ｌ
ｌａから一定量分注した後、停止位置Ｓ１にＪ３いてサ
ンプル分注装置１３により、ランブラ１４の所定のサン
プル吸引位置にあるサンプルカップ１５から一定量のサ
ンプルを分注する。停止位置Ｓ１においでサンプルが分
注されたＵ字管］１は、次の順次の停止位置８２〜Ｓ４
において攪拌用エアーポンプ２７により小口部１１ｂを
経てエアーを噴出させることによりＵ字管１１内に収容
された担体２１、酵素標識試薬３８およびサンプルを攪
拌して抗原抗体反応を開始させる。なお、担体投入器２
０、試薬分注装置３７、サンプル分注装置１３およびサ
ンプラ１４は各０字管に対して１回作動させた後は不作
動にしておく。

（Ｊ字管１１が停止位置Ｓ１７において担体２１を受け
てから１回転して再び停止位置８１７に移動した後の２
回転目にＪ３いては、先ず停止位置Ｓ２２において第７
図Ｂに示すようにＵ字管１１内の反応液を排液ポンプ２
８により吸引して排出すると共に、洗浄ポンプ２４によ
り洗浄液をシャワー状に間欠的に分注し、この分注させ
た洗浄液を、該停止位置Ｓ２２および次の停止位置８２
３において同様に排液ポンプ２８により吸引排出するこ
とによりＵ字管１１および担体２１を洗浄してＢ−Ｆ分
離を行なう。その後第７図Ｃに示すように停止位置Ｓ３
において試薬分注装置３５により発色試薬３６を一定ｒ
分注すると共に、該停止位置Ｓ３および次の停止位置Ｓ
４において攪拌用エアーポンプ２７によりエアーを噴出
させて担体２１と発色試薬３６とを攪拌して発色反応を
開始させる。

発色試薬３６の分注を受けたＵ字管１１が、停止装置Ｓ
＋＞に゛移動して３回転目に入ったら、先ず停止位置Ｓ
Ｉ９においてＵ字管１１内の反応液を比色計２２に吸引
して比色測定する。次に、停止位置８２０においてＵ字
管１１内に残存する担体２１を大口部１１ａから担体取
出器２３により取出す。その後、停止位置８２２におい
て洗浄ポンプ２４により洗浄液をシャワー状に間欠的に
分注すると共に、この分注された洗浄液を該停止位置Ｓ
２２および次の停止位置８２３において排液ポンプ２８
により吸引排出してＵ字管１１を洗浄し、次のサンプル
分析にお（プる担体の投入に備える。

本実施例においても、上述した実施例と同様に反応ライ
ンをエンドレスとし、この反応ライン中に設けた１つの
洗浄ポンプ２４および排液ポンプ２８より成る洗浄装置
に、Ｕ字＠１１を循環搬送してＢ−Ｆ分離を含む洗浄を
行なうようにしたから、装置全体を小形かつ構成が簡単
で、しかも安価にできる。

上述した各実施例においては、サンプラ１４に保持づる
サンプルカップ１５の数が、反応管ディスク１２に保持
するＵ７？−ｔＪｌｌと同数であるため、サンプラ１４
に１呆持（−る１ナンブルカツブ数よりも多数のサンプ
ルを分析する場合には、一度すンブラ１４にセットした
サンプルに対する分析０）　ｍ冬了後、一旦装置を止め
て再びサンプラ１４に→ナンフ゛ルをセラ１〜する必要
があり、その分手間とｌＩｈ間ｈ＼かかる。

第８図はかかる不具合をも解決しｌ〔本発明を実施する
酵素免疫自動分析装置の更に他の例の４苫成を示すもの
である。本例においては、担体２１の投入位置とサンプ
ラ４１の構成とが第３図（こ示すものと異なるものであ
り、その信組３図（こ示す１′Ｊ号と同一符号で示すも
のは同一作用を成すものを表わす。すなわち、本例にお
いてはＵ字管１１ｈ罵ら担体を取出す停止位置Ｓ２０と
、Ｕ字管１１を洗浄する停止位置Ｓ２２との間の停止位
置３２１において担体投入器２０により担体２１を１１
固ずつ順次のＵ字管１１に投入する。また、サンプラ４
１は多数のサンプルカップ４２を保持するラック４３を
多数個装填でき、これらラック４３を各ラックに保持さ
れた多数のサンプルカップ４２が所定のサンプル吸引位
置を順次通るようにコの字状に搬送するよう構成する。

第８図においては、反応管ディスク１２に保持され、停
止位置＄２１において担体２１が投入された全てのＵ字
管１１にサンプルを分注したら、サンプラ４１における
ラック４３の移送を一旦停止させる。分注したサンプル
に対して、反応管ディスク１１を第３図において説明し
たように複数回転させて２回のＢ−Ｆ分離を行ない、最
初のサンプルに対して最終的な発色反応液を停止位置Ｓ
’ｓにおいて比色計２２に吸引して比色測定し、次に停
止位置Ｓ２０においてＵ字管１１内に残存する担体２１
を取出した後は、次の停止位置Ｓ２１においＣ次のサン
プル分析のための担体２１を投入し、同様に洗浄および
緩衝液２６の分注を順次に行なった後、再びサンプラ４
１におけるラック４３の移送を開始して順次のＵ字管１
１にサンプルを分注して同様の操作を繰返し行なう。

本実施例によれば、反応管ディスク１２に保持されてい
るＵ字管数よりも多数のサンプルカップ４２をサンプラ
４１に１度に装填づることができるから、サンプルをセ
ットする手間および時間を省くことができると共に、担
体２１の投入位置を担体取出し位置と洗浄位置との間に
設定し、あるサンプルの分析後のＵ字管１１の洗浄と、
該Ｕ字管１１へ投入した次のサンプルの分析のための担
体２１の洗浄とを１度に行なうようにしたから、処理ス
ピードを向上させることができる。

第９図は本発明を実施する酵素免疫自動分析装置の更に
他の例の構成を示づものであり、第３図と同様サンドイ
ンチ法を採用するものである。本例においては試験管状
の反応管５１を多数個用い、これらをエンドレスのベル
ト状の保持部材５２に等間隔に保持して、この保持部材
５２を一対の搬送装置５３Ａ、５３Ｂにより垂直面内で
間欠的に所定のピッチで矢印方向に回動させる。本例で
は、先ず担体投入装置５４により順次の反応管５１に担
体を投入し、二の担体の投入された反応管５１に緩衝液
分注装置５５により一定量の緩衝液５６を分注した後、
サンプル分注装置５７によりサンプラのサンプルカップ
５８から一定量のサンプルを分注して恒温槽５９を通過
する間に第１回目の抗原抗体反応を行なわせる。これら
担体投入装置５４、緩衝液分注装置５５およびサンプル
分注装置５７は、反応管数あるいはサンプル数連続作動
させた後はその作動を停止させる。恒温槽５９内で反応
管５１を搬送しながら所定時間第１回目の抗原抗体反応
を行なわせた後は、所定の洗浄位置において洗浄装置６
０により反応管５１を洗浄して第１回目のＢ−Ｆ分離を
行ない、反応管５１内に担体のみを残してこれをその開
口部を下方に向けて再び恒温槽５９に搬送する。なお、
反応管５１からの担体の落下を阻止するため、反応管５
１の開口部が下方を向く部分および下方に傾く部分には
板状またはメツシュ状の担体落下防止部材６１を延在し
て設ける。

第１回目のＢ−Ｆ分離が終了して１周した反応管５１に
は所定の試薬分注位置において試薬分注装置６２により
酵素標識試薬６３を一定Φ分注して恒温槽５９内を搬送
する間に第２回目の抗原抗体反応を行なわせｌご後、洗
浄装置６０により反応管５１を洗浄して第２回目のＢ−
Ｆ分離を行なう。

その後、３層目にＪ３いて所定の試薬分注位置で試薬分
注位置６４により発色試薬６５を一定量分注して恒）Ｂ
槽５９内を搬送する間に発色反応を行なわせてから、そ
の反応液を所定の吸引位置において比色計６６に吸引し
て比色測定する。反応液が比色測定された反応管５１は
洗浄装置６０により洗浄した後、その開口部が下方を向
く所定の位置において反応の終了しｌζ担体を担体収納
容器６７内に落下させて収納する。このため、担体収納
容器６７の開口と対向する担体落下防止部材６１の部分
には、反応管５１内の担体を選択的に担体収納容器６７
内に落−トさせるための担体排出装置６８を設ける。

本実施例においては反応ラインを垂直面内でエンドレス
とし、この反応ライン中に設けた１つの洗浄装置６０に
、反応管５１を循環搬送してＢ−Ｆ分離を含む洗浄を行
なうようにしたから、上述した実施例と同様装置全体を
小形かつ構成が簡単で、しかも安価にできる。

第１０図は本発明を実施する酵素免疫自動分析装置の更
に他の例の構成を示すものである。本例では同心円状に
３つの反応ラインを設け、サンドインチ法を採用して１
つのサンプルについて３項目の分析を同時に行なうよう
にしたものである。

水平面上で矢印方向に間欠的に回動する反応管ディス’
／７’ｌには各反応ラインについて２４４個の反応管７
２を放射状に並べて保持する。これら反応管７２のステ
ップ停止位置を符号８０〜Ｓ２．で示す。本例において
、各反応ラインにおける分析操作は第３図の場合と同様
であるが、以下簡単に説明する。先ず、停止位置Ｓ工、
において外周、中央および内周の反応ラインの各反応Ｗ
　７２に、担体投入装置７３Ａ、７３Ｂおよび７３０に
よりそれにおいて洗浄装置７４・により洗浄する。洗浄
装置７　＝ｔ、は反応管内の液を吸σ１する機構と、反
応管内に洗浄液を吐出する機構とを以って構成する。そ
の後、停止位置Ｓ２４において緩衝液分注装置７５Ｇこ
より各反応管７２にそれぞれ所定量の緩衝液７６を分注
した後、停止位置ＳＩＧこおいてサンプル分注装＠７７
により、反応管ディスフッ１０回動と同期して矢印で示
す方向に間欠的に回動するザンブラ７８に保持されたサ
ンプルカップ７９から同一サンプルをそれぞれ所定量分
注して、各反応ラインにおいてそれぞれ第１回目の抗原
抗体反応を行なわせる。

担体が投入され、緩衝液７６およびサンプルが分注され
た反応管７２か１周して害び停止位置Ｓ２２にきたら洗
浄装置７４により各反応管７２および担体を洗浄して第
１回目のＢ−Ｆ分離を行なった後、停止位＠ｓ３におい
て試薬分注装置８０Ａ。

８　、ＯＢおよび８００により各反応ラインで分析すべ
き項目に応じた酵素標識試薬８　”、ｉ、　Ａ　、　８
　’］、　Ｂおよび８　］、　Ｃをそれぞれ所定量分注
して第２回目の抗原抗体反応を行なわせる。その後、停
止位置Ｓ２□において各反応管７２および担体を洗浄し
て第２回目のＢ−Ｆ分離を行なってから、停止位置Ｓ。

において試薬分注装置８２Ｇこより各反応管７２に発色
試薬８３をそれぞれ所定量分注して発色反応を行なわせ
た後、それらの反応液を停止位置ｓ１９においてそれぞ
れ“比色計８４Ａ、８４Ｂおよび８４・Ｃに吸引して比
色測定する。茨に・停止位置Ｓ２０　’こおいて担体取
出器８５により各反応管７，２内に残存する担体を取出
した後、停止位置Ｓ２□において洗浄装置７４により各
反応管９１を洗浄して次のサンプルの分析に備える。

本実施例によれば、１つのサンプルについテ複数項目の
分析を同時に行なうことかできると共に、全ての反応ラ
インに共通の１つの洗浄装置７４．を設け、この−洗浄
装置７４に各反応ラインの反応管７２を循環搬送してＢ
−Ｆ分離を含む洗浄を行なうようにしたから、装置全体
も小形かつ構成が簡単で、安価にできる。

第１１図は、上述した各実施例Ｑこおいて、反応容器に
抗体を１個ずつ投入する担体投入装置の一例の構成を示
す線図である。この担体投入装置９］は多数の同一担体
９２を収容するロート状のホッパー９３をｕえる。この
ボンパー９３の出０には彎１１１１部および水平部を有
する通路９＝１・を連結し・この通路９４・を経てボッ
パル９３内の担体９２を自重により連らねて移送ぎぜる
ようにする。

通路９４・の水平部には、担体９２の移送を停止させる
ためのストッパとして作用する壁９５？垂直に設けると
共に、この壁９５ｉこ当接した担体を落下させるための
出口９６を形成する。本例では、通路９４の出０９６に
近接して、開口９７を有する回転板９８を設け、この回
転板９８の回転により、開口９７を経て担体９２を１個
ずつ反応容器９９内に落下させる。

かかる担体投入装置９］によれば、簡単な構成により担
体９２を１個ずつ確実に反応容器９９に投入することが
できる。

本発明は上述した実施例にのみ限定されるものではなく
、幾多の変形が可能である。上述した実施例では酵素標
識試薬を用いる酵素免疫分析を行なっているが、マーカ
として放射性同位元素を用いる放射免疫分析、マーカと
して螢光物質を用いる螢光免疫分析などＧこも同様に適
用することができる。また、反応容器は例えばスネーク
チェーンを用いて搬送することもできる。ざらに上述し
た例では最終的に得られる検液を比色計に導びいて比色
測定を行なったが、透明な反応容器を用い・検液か反応
容器内（こ存在する状態て比色測定を行なうダイレクト
測光方式を採用することもできる。

この場合、反応容器内に残存する担体が測光の妨げとな
るような場合には測光前に担体を取除くこともできる。

また、このようなダイレクト測光方式を採る場合には、
測光後担体を検液と共に排量てきるのて担体排出装置が
簡単となる。ざらに上述した実施例においては洗浄装置
を１個設けたが、複数個設けることもできる。例えば第
３図に示す実施例において・洗浄装置を２個対向する位
置に設け、一方の洗浄装置で最初の担体の洗浄と２回１
」のＢ−Ｆ分離とを行ない他方の洗浄装置で］回Ｉ」の
Ｂ−Ｆ分離とて終曲な反応容器の洗浄とを竹なうように
することもできる。この場合、酵素標識試薬や発色試薬
の分注位置を変更する必要かあるが、このよう（こして
も洗浄装置を４個設けるものＧこ比べれば装置は簡単か
つ小形になる効果は得られる。ざらＧこ−［二連した実
施例では反応容器を繰返し使用するようにしたが、分析
に使用した反応容器を使い捨てとすることもてきる。ま
た、上述した実施例では］つの反応ラインで同一の測定
項目の分析を行なうようにしたか、多項目の分析を行な
うようにすることもてきる。ざらに、分析結果の信頼性
を高めるため、反応ラインを２つ設けて同一項目を分析
するようにすることもてきる。

また、第３図、第５図、第６図および第８図に示す実施
例においては、同−位置例えば停止位置Ｓ２４で緩衝液
や酵素標識試薬および発色試薬の分注を行なうようにす
ることもてきる。このようにすれば攪拌を１箇所、例え
ば停止位置Ｓ２て行なうことができる。ざらに、第５図
に示す実施例においては新たに緩衝液分注装置３］を設
け、担体の投入に先立って緩衝液３２を分注するように
したが、この緩衝液の分注は下流側の緩衝液分注装置２
５を共用して行なうことにより、除くこともできる。ま
た、反応ラインはエンドレス（こ限らず、同一洗浄装置
に反応容器か複数回搬送されるものであればよい。ざら
に、各種分注位置、担体の投入、取出位置、比色測定位
置なども上述した実施例Ｇこ限定されるものではなく、
種々の変更が可能である。

以上説明したように、本発明の免疫学的自動分析方法に
おいては、各サンプルの分析中Ｇこ、反応ライン中に設
けた洗浄装置に反応容器を複数回搬送して、Ｂ−Ｆ分離
を含む洗浄を複数回行なうようにしたから、洗浄装置を
少なくてき、しかも反応ラインを短くすることができる
。したがって、自動分析装置全体を小形かつ安価で、し
かも構成を簡単にできる。

【図面の簡単な説明】 第１図は競合法による酵素免疫分析法を説明するだめの
図、 第２図はサンドインチ法による酵素免疫分析法を説明す
るだめの図、 第１３図は本発明を実施する酵素免疫自動分析装置の一
例の構成を示す図、 第４・図Ａ−Ｄはその動作を説明するための線図、第５
図は本発明を実施する酵素免疫自動分析装置の他の例の
構成を示す線図、 第６図は同じく更に他の例の構成を示す線図、第７図Ａ
−Ｃは第６図に示す酵素免疫自動分析装置の動作を説明
するための線図、 第８図、第９図および第１０図は本発明を実施する酵素
免疫自動分析装置の更に他の３つの例の構成をそれぞれ
示す線図、 第１１図は本発明を実施する自動分析装置に用いる担体
投入装置の一例の構成を示す線図である。 ］Ｏ・・・恒温槽　　　　　　１１・・・Ｕ字管１２・
・・反応管ティスフ　　１３・・・サンプル分注装置１
４・・・・サンプラ　　　　　１５・・・サンプルカッ
プ１６、１８・・・試薬分注装置　１７・・・酵素標識
試薬１９・・・発−色試薬　　　　　２０・・・担体投
入器２１・・・担体　　　　　　　２２・・・比色計２
３・・・担体取出器　　　　２４・・・・洗浄ポンプ２
５・・・緩衝液分注装置　　２６・・・緩衝液２７・・
・ｆｆｉ拌用圧用エアーポ ンプ３２・緩衝液　　　　　　３５．３７・・・試薬分
注装置３６・・・発色試薬　　　　　３８・・・酵素標
識試薬４１］・・・サンプラ　　　　　４２・・・サン
プルカップ４・３・・・ラック　　　　　　５１・・・
反応□管５２・・・保持部材　　　　　５３Ａ、　５３
Ｂ・・・搬送装置５４・・・・担体投入装置　　　５５
・・・緩衝液分注装置５６・・・緩衝液　　　　　　５
７・・・サンプル分注装置５８・°・サンプルカップ　
　５９・・・ｆａ　ａ　槽６０・・・洗浄装Ｍ　　　　
　　６］・・・担体落下防止部材６２、６４・・・試薬
分注装置　６３・・・酵素標識試薬６５・・・発色試薬
　　　　　６６・・・比色計６７・・・担体収納容器　
　　６８・・・担体排出装置７１・・・反応管ティスフ
　　７２・・・反応管７３Ａ〜７３０・・・担体投入装
置 ７４・・・・洗浄装置　　　　　７５・・・緩衝液分注
装置７６・・・緩衝液　　　　　　７７・・・サンプル
分注装置７８・・・サンプラ　　　　　７９・・・サン
プルカップ８０Ａ〜８０Ｃ，８２・・・試薬分注装置８
１Ａ〜８］、Ｃ・・・酵素標識試薬 ８３・・・発色試薬　　　　　８４．Ａ〜８４６Ｃ・・
・比色計８５・・・担体取出器　　　　９１・・・担体
投入装置９２・・・担体９３・・・ホッパ ９４・・・通路　　　　　　　９５・・・壁９６・・・
出口　　　　　　　９７・・・開口９８・・・回転板　
　　　　　９９・・・反応容器。 特許出願人　　オリンパス光学工業株式会社第５図 第６図 第１Ｏ図 第１１図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、所定の抗体または抗原を固定化した担体と、所定の
   抗体または抗原を所定の物質で標識した標識試薬とを用
   い、反応容器内で抗原抗体反応を行なわせてサンプル中
   の被検物質を免疫学的に自動的に分析するにあたり、 前記反応容器を、該反応容器に収容したサンプル中の被
   検物質の分析中に、反応ライン中に設けた洗浄装置に少
   く共２回搬送して、前記担体に結合した抗体または抗原
   と、担体に結合していない抗体または抗原とを分１ｉｉ
   １１ツるＢ−Ｆ分離を含む洗浄を少く共２回行なうこと
   を特徴とする免疫学的自動分析方法。