JPS5886081A - 発酵法によるウレア−ゼの製造法 - Google Patents
発酵法によるウレア−ゼの製造法Info
- Publication number
- JPS5886081A JPS5886081A JP18209481A JP18209481A JPS5886081A JP S5886081 A JPS5886081 A JP S5886081A JP 18209481 A JP18209481 A JP 18209481A JP 18209481 A JP18209481 A JP 18209481A JP S5886081 A JPS5886081 A JP S5886081A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- urease
- genus
- culture
- corynebacterium
- microbacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/58—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
- C12N9/80—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in linear amides (3.5.1)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発＠杜、コリネバタテリウム属，プレビパクテリクム
属，アースロパクター属，グー？クス属，ミクロバクテ
リウム属まえはｌルデテラ属κ属し、フレアアミドハイ
ドロラーゼ（以下ウレアーゼという）の生産能を有する
微生物を、栄養培地に培養し、ウレアーゼを培養物中κ
蓄積せしめ、該培養物からウレアーゼを採取することを
特徴とするウレアーゼの製造法に関する。
属，アースロパクター属，グー？クス属，ミクロバクテ
リウム属まえはｌルデテラ属κ属し、フレアアミドハイ
ドロラーゼ（以下ウレアーゼという）の生産能を有する
微生物を、栄養培地に培養し、ウレアーゼを培養物中κ
蓄積せしめ、該培養物からウレアーゼを採取することを
特徴とするウレアーゼの製造法に関する。
ウレアーゼ（ＩＬＣ．：｛１１．５社尿素を分解して、
アンモニアと炭酸ガスを生ずる反応を触媒する酵素であ
シ、植物，動物，Ｉ１生物等、天然界に広く存在するこ
゛とが知られておシ、すでにナタマメ由来のウレアーゼ
が、工業的に製造され、広く利用されている。微生物に
よるウレアーゼの研究も数多く報告されているが、微生
物由来のウレアーゼは、ナタマメ由来ウレアーゼに比し
、生産性悪く、未だ実用化には到っていない。
アンモニアと炭酸ガスを生ずる反応を触媒する酵素であ
シ、植物，動物，Ｉ１生物等、天然界に広く存在するこ
゛とが知られておシ、すでにナタマメ由来のウレアーゼ
が、工業的に製造され、広く利用されている。微生物に
よるウレアーゼの研究も数多く報告されているが、微生
物由来のウレアーゼは、ナタマメ由来ウレアーゼに比し
、生産性悪く、未だ実用化には到っていない。
一方ウレア−｛は、臨床検査薬等として、尿素ｍ＊素の
橢定に広く利用されているが、実用化されているナタマ
メ山東Ｏウンアーゼの性質は、Ｋｍ［が１−３Ｘ１１１
（１）Ｈ７．５リン酸緩衝液）であル、かかる性質
の酵素では、尿素態窒素嬢皺の測定範囲が狭い欠点を有
している．本発明者等は、棚定範囲の拡大κ着目し、Ｉ
ｌｌ値大なるＩＩＩＩ黴を有するウレアーゼの工業的製
造法を開発すべく、そＯ供給源を微生物界κ求め種々検
索を行った。ナタマメ由来のウレアーゼに比しＫｍ値大
なるウレアーゼの微生物における存在については、Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔ＠ｒｉｏｌｏｇｙ６８．６
７〜７３（１＠５４）に、バチルス・パストイリの報告
があるが、安定性が劣るため臨床酵素としての使用に難
点がある。
橢定に広く利用されているが、実用化されているナタマ
メ山東Ｏウンアーゼの性質は、Ｋｍ［が１−３Ｘ１１１
（１）Ｈ７．５リン酸緩衝液）であル、かかる性質
の酵素では、尿素態窒素嬢皺の測定範囲が狭い欠点を有
している．本発明者等は、棚定範囲の拡大κ着目し、Ｉ
ｌｌ値大なるＩＩＩＩ黴を有するウレアーゼの工業的製
造法を開発すべく、そＯ供給源を微生物界κ求め種々検
索を行った。ナタマメ由来のウレアーゼに比しＫｍ値大
なるウレアーゼの微生物における存在については、Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔ＠ｒｉｏｌｏｇｙ６８．６
７〜７３（１＠５４）に、バチルス・パストイリの報告
があるが、安定性が劣るため臨床酵素としての使用に難
点がある。
本発明者等は、コリネバクテリウムｌＩ４．ブレビバク
テリウム属、アースｐバクター属、グロテウス属、ミク
ロバクテリウム属またはボルデテラ属に属する微生−に
、ナタマメ由来のウレアーゼに比し、Ｋｍ値大なる＊＊
を有するウレアーゼの存在することを見い出し良、これ
ら微生物よりＫｍ値大なる特徴を有す本ウレアーゼを工
業的安偵に製造する方法を確立し、取得したＫｍ値大な
る特徴を有するウレア−をは、尿素１１窒素濃度の測定
範囲として従来のナタマメ由来のウレアーゼに比し２〜
４倍となることを確關し本発明を完成し丸。
テリウム属、アースｐバクター属、グロテウス属、ミク
ロバクテリウム属またはボルデテラ属に属する微生−に
、ナタマメ由来のウレアーゼに比し、Ｋｍ値大なる＊＊
を有するウレアーゼの存在することを見い出し良、これ
ら微生物よりＫｍ値大なる特徴を有す本ウレアーゼを工
業的安偵に製造する方法を確立し、取得したＫｍ値大な
る特徴を有するウレア−をは、尿素１１窒素濃度の測定
範囲として従来のナタマメ由来のウレアーゼに比し２〜
４倍となることを確關し本発明を完成し丸。
以下本発明について詳細にｗ！、明する。
本発明に使用される菌株としては、プリネバクテリウム
ｍ、ブレビバクテリウムＪ１４．アースロバフタ−属、
プロテウス属、ミクロバクテリウムＭまたはボルデテラ
属に属するウレアーゼ生＊繭株があげられる。具体的菌
株の例として、コリネバク乎すウム・リリウム（Ｃｏｒ
ｙｎｅｂａａｔｅｒｉｕｍｌｌｌｌｕｍ ） ＡＴ Ｃ
Ｃ２１−４４ｅブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
（Ｂｒａｖｌｂａｃｔｅｒｉｕｍａｍｏｎｉａｇｅｎｅ
ｇ ） Ａ Ｔ ＣＣ６８７２＊アースロバフタ−・バ
ラフイネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｐａｒａｆ
ｉｎｅｕｓ）ＡＴＣＣ１５５９Ｌプロテウス・ブルガリ
ス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ） ＡＴＣＣ
６８９７＃ミクロバクテリウム・アンモニアゲネスム（
Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｐｈｉ
ｌｕｍ ） Ａ Ｔ ｃ ｃ１５３５４ およびボル
デテラ・ブロンチセプテイカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ
ｂｒｏｎｏｈｉａｅｐｔｉｃａ ）人ＴＣＣＱ１７ が
あげられる。
ｍ、ブレビバクテリウムＪ１４．アースロバフタ−属、
プロテウス属、ミクロバクテリウムＭまたはボルデテラ
属に属するウレアーゼ生＊繭株があげられる。具体的菌
株の例として、コリネバク乎すウム・リリウム（Ｃｏｒ
ｙｎｅｂａａｔｅｒｉｕｍｌｌｌｌｕｍ ） ＡＴ Ｃ
Ｃ２１−４４ｅブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
（Ｂｒａｖｌｂａｃｔｅｒｉｕｍａｍｏｎｉａｇｅｎｅ
ｇ ） Ａ Ｔ ＣＣ６８７２＊アースロバフタ−・バ
ラフイネウス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｐａｒａｆ
ｉｎｅｕｓ）ＡＴＣＣ１５５９Ｌプロテウス・ブルガリ
ス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ） ＡＴＣＣ
６８９７＃ミクロバクテリウム・アンモニアゲネスム（
Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｐｈｉ
ｌｕｍ ） Ａ Ｔ ｃ ｃ１５３５４ およびボル
デテラ・ブロンチセプテイカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ
ｂｒｏｎｏｈｉａｅｐｔｉｃａ ）人ＴＣＣＱ１７ が
あげられる。
使用菌株の培養においては、通常の栄養培地が用いられ
る。嶽素源としては、グルコース。
る。嶽素源としては、グルコース。
シュークロース、７ラクトース、殿粉、廃糖蜜。
アルコ−゛ル類、有機酸類尋、天然栄養源とじてハ、ヘ
フトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステープリカー
（以下ＣＡＬという）轡、−素源としては、アンモニア
、ｍ安、硝安、塩安。
フトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステープリカー
（以下ＣＡＬという）轡、−素源としては、アンモニア
、ｍ安、硝安、塩安。
酢安、尿素等、無機塩類としては、リン酸カリウムを塩
化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸
亜鉛等をそれぞれ単独又は、組み合せてｍいられる。培
養は通常、振とりまたは通気攪拌培養で行う。培養１１
１度は２０〜４０℃、培地ｐＨは６〜８であることが好
適である。通常１〜４日間培養を行うと、菌体中にウレ
アーゼが生成蓄積する。培養を停止した発酵液よシ、遠
心分離などによシ、菌体を分離する。該菌体を適当な手
段で破砕し、破砕液から、□遠心分離などによって上清
を得る。上清液からのウレアーゼの精製単−紘、通常酵
素精＃！に用いられる方法、たとえば、塩析、有機漕媒
沈殿。
化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸
亜鉛等をそれぞれ単独又は、組み合せてｍいられる。培
養は通常、振とりまたは通気攪拌培養で行う。培養１１
１度は２０〜４０℃、培地ｐＨは６〜８であることが好
適である。通常１〜４日間培養を行うと、菌体中にウレ
アーゼが生成蓄積する。培養を停止した発酵液よシ、遠
心分離などによシ、菌体を分離する。該菌体を適当な手
段で破砕し、破砕液から、□遠心分離などによって上清
を得る。上清液からのウレアーゼの精製単−紘、通常酵
素精＃！に用いられる方法、たとえば、塩析、有機漕媒
沈殿。
透析９等電点沈殿、ａ着体な・どを用いるカラムクロマ
トグラフィー瞥凍結乾燥勢Ｏ方法を、組み合せて用いる
ことができる。
トグラフィー瞥凍結乾燥勢Ｏ方法を、組み合せて用いる
ことができる。
ウレアーゼの活性の測定は、種々あるが、事始１切にお
いては、臨床検査薬等で広く使用されている紫外部吸収
側定法を用いた。即ち尿素を基質としウレアーゼを作用
させ、発生したアンモニアとα−ケトグルタミン酸にグ
ルタメートデヒドロゲナーゼを作用させ消費する水素の
供与体として、還元型ニコチン酸アミドジヌクレオチド
ｐリン［（以下ＮＡＤＰＨという）を用い、ＮＡＤＰＨ
の減少による紫外部吸収暮の減少量を測定することによ
り酵素の力価を求めた。
いては、臨床検査薬等で広く使用されている紫外部吸収
側定法を用いた。即ち尿素を基質としウレアーゼを作用
させ、発生したアンモニアとα−ケトグルタミン酸にグ
ルタメートデヒドロゲナーゼを作用させ消費する水素の
供与体として、還元型ニコチン酸アミドジヌクレオチド
ｐリン［（以下ＮＡＤＰＨという）を用い、ＮＡＤＰＨ
の減少による紫外部吸収暮の減少量を測定することによ
り酵素の力価を求めた。
この測定法の詳細は以下の通りである。
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５） λ６−α
−ケトグルタｔ ：、ｙｅｌｌ （１ｓ１ｄ） ｏ
、ｔｙ尿 素 （２０農シー）
０．１５ａｊＮ Ａ Ｌ） Ｐ Ｈ（１”＠／ｉｕ）
０．１ｍグルタメートデヒドロゲナーゼ （１５００明’ａｇ） Ｑ、０２ｍ＋７これらを混
合し、３７℃ ５分間放置後、測定すべき酵素液＋１０
１−を添加し、３７℃１分後の吸光ｆＯＤ、、、工（Ｅ
□）および２分後の吸光ＭＥ、 ＯＤ ｓ ａ ｅｎＪ
ｎ（”ｚ ）を分光々変針により測定する。
−ケトグルタｔ ：、ｙｅｌｌ （１ｓ１ｄ） ｏ
、ｔｙ尿 素 （２０農シー）
０．１５ａｊＮ Ａ Ｌ） Ｐ Ｈ（１”＠／ｉｕ）
０．１ｍグルタメートデヒドロゲナーゼ （１５００明’ａｇ） Ｑ、０２ｍ＋７これらを混
合し、３７℃ ５分間放置後、測定すべき酵素液＋１０
１−を添加し、３７℃１分後の吸光ｆＯＤ、、、工（Ｅ
□）および２分後の吸光ＭＥ、 ＯＤ ｓ ａ ｅｎＪ
ｎ（”ｚ ）を分光々変針により測定する。
下記の式により酵素量を求める。
ウレアーゼ力価の表示は、１分間に１マイクロモルのＮ
Ｈ３を生成する酵素量を１単位（Ｕ）とする。
Ｈ３を生成する酵素量を１単位（Ｕ）とする。
次に本発明の実施例をボす。
実施例１ ．
１次槽培地として、ペプトンｉ ｆＡｔ、 肉エキス１
ｆｌｉｔ、裏地０．３ ｆｌｉｔ、 ｐＨ７，２から
なる培地３０Ｉ１．ｌを２５０１容三角フラスコに盆注
し、１２０℃ １５分分画−る。（以下培ｍはすべて、
該条件で殺菌する。）種菌としてコリネバクゾリウム・
リリウム人ＴＣＣ２１６４４を１白金斗、１次棟培地に
嵌柚し、２８℃で２４時間振とり培資する０次に１次〜
培地と同じ組成の培地３００１を２ｊ谷三片フラスコに
分注し、１次橡培Ｖ液３０屓ｊを移し、２８℃、２４時
…ｊ振とう培簀する。かくして得られた２次ｓｔ＠養液
１１を、３０１′６ジヤーフアーメンター中、１５４の
発酵培地（グルコース１０ ｆｌｉｔ 。
ｆｌｉｔ、裏地０．３ ｆｌｉｔ、 ｐＨ７，２から
なる培地３０Ｉ１．ｌを２５０１容三角フラスコに盆注
し、１２０℃ １５分分画−る。（以下培ｍはすべて、
該条件で殺菌する。）種菌としてコリネバクゾリウム・
リリウム人ＴＣＣ２１６４４を１白金斗、１次棟培地に
嵌柚し、２８℃で２４時間振とり培資する０次に１次〜
培地と同じ組成の培地３００１を２ｊ谷三片フラスコに
分注し、１次橡培Ｖ液３０屓ｊを移し、２８℃、２４時
…ｊ振とう培簀する。かくして得られた２次ｓｔ＠養液
１１を、３０１′６ジヤーフアーメンター中、１５４の
発酵培地（グルコース１０ ｆｌｉｔ 。
Ｃ８Ｌ ２０か安、（１１［安１ ｆｌｉｔ 、リン酸
１カリウム０．５ｆ、４４．塩化カリウムα５ ｒ／’
ｄｊ、硫酸マグネシウム０．５ ｒ／ｌｉｔ、 ｐ
Ｈ７，２）に移し、３００ ｒ−ｐ、 ｍ、通気１ｉ１
５仏１ｎｙ２ｇ℃で４８時間培養する。かくして得られ
た培養液のウレアーゼ力価は、、 １１ ル釘であった
。培養液１６１を遠心分離し、菌体を集め、０．０３
Ｍ ＩＪンｋｍ衝液液１ｊフィルアップし、マントンガ
ラリン菌体破砕機で菌体を破砕する。菌体破砕液を遠心
分離して、粗酵素液を得る。との粗酵素液に７（ｌ飽和
まで硫安を添加し、生成してくる沈殿物を遠心分離によ
って集める。この沈殿物をα０３Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，０）５０−に溶解し、これをセロファンチューブを
透析族として、０．０３Ｍリン酸緩術液５１を外液とし
７て、４℃１夜透析する。この濃縮酵素液をＤ Ｅ Ａ
Ｅ−セルロースカラム２００１Ｉｊに通塔し吸宸させ
、α４Ｍ食塩にて耐重する。このときの！！＃累活性は
４０ Ｕｋ蛋白であった。溶出液は、安定化削として、
アルブミンまたはラクトースをｏ、 １１９／Ｕ ム加
し、濃縮後、凍結１１Ｌ燥し約４ｏｏＩＩＩＩＦを得た
。
１カリウム０．５ｆ、４４．塩化カリウムα５ ｒ／’
ｄｊ、硫酸マグネシウム０．５ ｒ／ｌｉｔ、 ｐ
Ｈ７，２）に移し、３００ ｒ−ｐ、 ｍ、通気１ｉ１
５仏１ｎｙ２ｇ℃で４８時間培養する。かくして得られ
た培養液のウレアーゼ力価は、、 １１ ル釘であった
。培養液１６１を遠心分離し、菌体を集め、０．０３
Ｍ ＩＪンｋｍ衝液液１ｊフィルアップし、マントンガ
ラリン菌体破砕機で菌体を破砕する。菌体破砕液を遠心
分離して、粗酵素液を得る。との粗酵素液に７（ｌ飽和
まで硫安を添加し、生成してくる沈殿物を遠心分離によ
って集める。この沈殿物をα０３Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，０）５０−に溶解し、これをセロファンチューブを
透析族として、０．０３Ｍリン酸緩術液５１を外液とし
７て、４℃１夜透析する。この濃縮酵素液をＤ Ｅ Ａ
Ｅ−セルロースカラム２００１Ｉｊに通塔し吸宸させ
、α４Ｍ食塩にて耐重する。このときの！！＃累活性は
４０ Ｕｋ蛋白であった。溶出液は、安定化削として、
アルブミンまたはラクトースをｏ、 １１９／Ｕ ム加
し、濃縮後、凍結１１Ｌ燥し約４ｏｏＩＩＩＩＦを得た
。
ここで得られた酵素の性質は以下のとおりである。
ｌ）作用
１モルの尿素より１モルの水を消費し、２モルＣＤ ７
７モニアと１モルの炭酸ガスヲ生成する。
７モニアと１モルの炭酸ガスヲ生成する。
２）至適ｐＨ
７，５〜８．０
３）Ｉ）Ｈ安定性
３７’Ｃ，３０分間の処理でｐＨ７〜１０で安定・
４）至適温度
４５〜５０℃
５）温菱安定性
ｐＨ７，３０分間処理で５０℃まで安定６）基ＪＲ％異
性 基 實 相対活性←） 尿 素 １００ ビウレツト １３ アラントイン １１ ７）阻 害 剤 −１００ ＡｆＮＯ３１ＸＩＧ−’ １１ Ｃｕ８０４１ Ｘ １０ ”” １０グアニジン
塩酸 ４Ｘ１０−” ３１８）Ｋｍ値 本酵素の性質は、ｘｍ（ｉｚｘｔｏ−”（ｐＨ７，５リ
ン酸緩衡液）とナタマメ由来ウレアーゼのＫｍ値に比し
約１０倍を示すｔ￥ｆ倣を有している。
性 基 實 相対活性←） 尿 素 １００ ビウレツト １３ アラントイン １１ ７）阻 害 剤 −１００ ＡｆＮＯ３１ＸＩＧ−’ １１ Ｃｕ８０４１ Ｘ １０ ”” １０グアニジン
塩酸 ４Ｘ１０−” ３１８）Ｋｍ値 本酵素の性質は、ｘｍ（ｉｚｘｔｏ−”（ｐＨ７，５リ
ン酸緩衡液）とナタマメ由来ウレアーゼのＫｍ値に比し
約１０倍を示すｔ￥ｆ倣を有している。
９）本酵素は結晶化が困難である。
１０）分子量 約４４０，０００（セフ７デツクスＧ−
２００ゲルびｌ過流） ｌｉ）元素分析 結晶化困難の丸め測定せず。
２００ゲルびｌ過流） ｌｉ）元素分析 結晶化困難の丸め測定せず。
実施例２
表−１に不した各種−株について、実施例１と同様に培
齋し、菌体を取得し、粗酵素液を調製し、ウレアーゼ活
性およびＫｍ値を測定した。
齋し、菌体を取得し、粗酵素液を調製し、ウレアーゼ活
性およびＫｍ値を測定した。
結果は表−１に示すごとく、ナタマメ由来ウレアーゼに
比し５〜２０倍のＫｍ値を示した。
比し５〜２０倍のＫｍ値を示した。
表 −１
ノ（ｆシ！・
代表省木下祝部・Ｓ＜；・
第１頁の続き
０発 明 者 遠藤験−
三島市安久３１０−２
０発 明 者 勝又英雄
御殿場市北久原６１３−５
０発 明 者 新井雑光
静岡県駿東郡長泉町納米里４１０
１
手続補正書（自発）
昭和、Ｃ７年 を月 ２日
特許庁長官殿
１、事件の表示
昭和５６年特峰願第１８２０？４号
２−発明の名称
一発酵法によるウレアーゼの製造流
入補正をする者
事件との関係 特許出願人
郵便番号 １００
在 所 東京都千代田区大手町−丁目６番′１号名称
（１０２）協和醗酵工業株式会社（Ｔ肚：０３−２０
１−７２１１内線２７５１）明細書の発明の詳細な説明
の欄 ＆補正の内容 −（１）明細書第６頁１１−１６６行目次のとおシｒ
ｏ、 Ｉ Ｍリン酸緩衡液（１）Ｈ７，５） ｚｚ
ｄα−ケトグルタミン酸（１５？’ｉｕ） Ｑ、１
ｍ尿 素 （２１鴫／ｄ ）
０．５ ｄＮＡＤＰＩ（（１５■／ｊ） ０．１５
ｍグルタメートデヒドロゲナービ（ｔｓｏｏ′ＵＡ）
０．０３ｄＪ（２）明細書第８頁１−４行目を次
のとおり訂正する。
（１０２）協和醗酵工業株式会社（Ｔ肚：０３−２０
１−７２１１内線２７５１）明細書の発明の詳細な説明
の欄 ＆補正の内容 −（１）明細書第６頁１１−１６６行目次のとおシｒ
ｏ、 Ｉ Ｍリン酸緩衡液（１）Ｈ７，５） ｚｚ
ｄα−ケトグルタミン酸（１５？’ｉｕ） Ｑ、１
ｍ尿 素 （２１鴫／ｄ ）
０．５ ｄＮＡＤＰＩ（（１５■／ｊ） ０．１５
ｍグルタメートデヒドロゲナービ（ｔｓｏｏ′ＵＡ）
０．０３ｄＪ（２）明細書第８頁１−４行目を次
のとおり訂正する。
ｒ１５ｍｌ’の発酵培地（グルコース１ｆ肩、ｃｓｈ２
ｆ／＃、硫安０．１ ｔｉｌｌ 、リン酸−カリウム０
．０５ ｆＡＩ 、塩化カリウムｏ、 ｏ ｓ ｆ／ｄ
ｊ、硫酸マグネシウムｏ、 ｏ ｓ ｔ／ｄ１％ｐＨ７
，２） に移し、」 手続補正書 昭和５′Ｆ句〜、９月 ２７日 時計庁良官 殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１８２０９４号 ２、発明の名称 発酵法によるウレアーゼの製造法 ３、補止をする者 畢件との関係 ％軒出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番１号名称
（１０２）協和＃帥工業株式会社（’Ｉ’ｌＬ：０３−
２０１−７２１１内紐２７５１）酸」を「α−ケトゲル
タール酸」に訂正する。
ｆ／＃、硫安０．１ ｔｉｌｌ 、リン酸−カリウム０
．０５ ｆＡＩ 、塩化カリウムｏ、 ｏ ｓ ｆ／ｄ
ｊ、硫酸マグネシウムｏ、 ｏ ｓ ｔ／ｄ１％ｐＨ７
，２） に移し、」 手続補正書 昭和５′Ｆ句〜、９月 ２７日 時計庁良官 殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１８２０９４号 ２、発明の名称 発酵法によるウレアーゼの製造法 ３、補止をする者 畢件との関係 ％軒出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番１号名称
（１０２）協和＃帥工業株式会社（’Ｉ’ｌＬ：０３−
２０１−７２１１内紐２７５１）酸」を「α−ケトゲル
タール酸」に訂正する。
（２）明細書〔昭和５７年９月２日付提出の手続補止１
１（自発）で訂正〕第６頁１２行目の「α−ケトグルタ
ミン酸」を「α−ケトゲルタール酸」に訂正する。
１（自発）で訂正〕第６頁１２行目の「α−ケトグルタ
ミン酸」を「α−ケトゲルタール酸」に訂正する。
Claims (1)
- コリネバクテリウム属、プレビバタテリウム属、アース
ロバフタ−属、プロテクメ属、ミクロバクテリウム属ま
九はボルデテラ属に属し、フレアアミドハイドロラーゼ
（以下ウレアーゼという）の生産能を有する微生物を、
栄養培地に培養し、ウレアーゼを培養物中に蓄積せしめ
、鋏培養物からウレアーゼを採取することを特徴とする
ウレアーゼの製造法・
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18209481A JPS6055119B2 (ja) | 1981-11-13 | 1981-11-13 | 発酵法によるウレア−ゼの製造法 |
| EP82306073A EP0079792B1 (en) | 1981-11-13 | 1982-11-15 | Process for production of urease |
| DE8282306073T DE3276708D1 (en) | 1981-11-13 | 1982-11-15 | Process for production of urease |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18209481A JPS6055119B2 (ja) | 1981-11-13 | 1981-11-13 | 発酵法によるウレア−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5886081A true JPS5886081A (ja) | 1983-05-23 |
| JPS6055119B2 JPS6055119B2 (ja) | 1985-12-03 |
Family
ID=16112241
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18209481A Expired JPS6055119B2 (ja) | 1981-11-13 | 1981-11-13 | 発酵法によるウレア−ゼの製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0079792B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6055119B2 (ja) |
| DE (1) | DE3276708D1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH664975A5 (fr) * | 1985-03-15 | 1988-04-15 | Battelle Memorial Institute | Procede analytique pour la determination d'un coenzyme reduit. |
| JPH0657149B2 (ja) * | 1986-01-13 | 1994-08-03 | サッポロビール株式会社 | ウレア−ゼ及びその製造法 |
| JPH088867B2 (ja) * | 1987-11-17 | 1996-01-31 | サントリー株式会社 | 新規ウレアーゼ及びその製造方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3338793A (en) * | 1964-09-18 | 1967-08-29 | Asahi Chemical Ind | Method for production of l-glutamic acid by microbacteria |
| US3527674A (en) * | 1966-06-30 | 1970-09-08 | Calbiochem | Reagent material and method for urea assay |
| CH496806A (de) * | 1966-12-28 | 1970-09-30 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Verfahren zur Herstellung von Zitronensäure |
-
1981
- 1981-11-13 JP JP18209481A patent/JPS6055119B2/ja not_active Expired
-
1982
- 1982-11-15 EP EP82306073A patent/EP0079792B1/en not_active Expired
- 1982-11-15 DE DE8282306073T patent/DE3276708D1/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0079792B1 (en) | 1987-07-08 |
| JPS6055119B2 (ja) | 1985-12-03 |
| EP0079792A3 (en) | 1983-11-09 |
| EP0079792A2 (en) | 1983-05-25 |
| DE3276708D1 (en) | 1987-08-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4039384A (en) | Creatinine amidohydrolase and creatine amidinohydrolase and process for producing them | |
| CN105274080B (zh) | 一种热稳定性提高的肌酸水解酶突变体 | |
| JPS5886081A (ja) | 発酵法によるウレア−ゼの製造法 | |
| JPS62175174A (ja) | ウレア−ゼ及びその製造法 | |
| JP3029868B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アラニンの製造法 | |
| JPS5917987A (ja) | ウレア−ゼおよびその製造法 | |
| JP2899071B2 (ja) | Ｌ―α―アラニンの製造法 | |
| JPS6251999A (ja) | ヒアルロン酸の製造法 | |
| JP3125954B2 (ja) | 新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法 | |
| JP3125955B2 (ja) | 耐熱性ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法 | |
| JPS5820273B2 (ja) | クレアチンの定量方法及びそのキツト | |
| JPS6349091A (ja) | トリプトフアンの製造方法 | |
| JPS62244386A (ja) | Ｌ−アミノ酸の製造法 | |
| JPH0236227B2 (ja) | Pirubinsanokishidaazenoseizoho | |
| JPS5820272B2 (ja) | クレアチニンの定量方法及びそのキツト | |
| JPH05236978A (ja) | Ｏ−メチル−ｌ−チロシン及びｌ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法 | |
| JPH0438398B2 (ja) | ||
| JPH07265074A (ja) | 新規なクレアチンアミジノハイドロラーゼおよびその用途 | |
| JPH0525476B2 (ja) | ||
| JPH0218067B2 (ja) | ||
| JPS5937947B2 (ja) | 新規ピログルタミン酸ヒドロラ−ゼ及びその酸素を用いたｌ−ヒログルタミン酸の定量方法 | |
| JPS62224287A (ja) | α−アセトラクテ−トデカルボキシラ−ゼの製造法 | |
| JPS6112296A (ja) | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 | |
| JPS623792A (ja) | Ｌ−アミノ酸の製造方法 | |
| JPH0224517B2 (ja) |