JPS5869224A - ポリβ―ヒドロキシ酪酸エステル共重合体及びその産生方法 - Google Patents
ポリβ―ヒドロキシ酪酸エステル共重合体及びその産生方法Info
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この宅明け、ポリβ−ヒドロキシ酪酸(以下PHBと略
記する)に関している。
記する)に関している。
PHBは、微生物、細胞内部士粒子伏のエネルギー貯蔵
物質として、種々の微生物、′王としてバクテリアによ
り蓄積される。
物質として、種々の微生物、′王としてバクテリアによ
り蓄積される。
このような細l@から抽出したPH8は、次の繰返し単
位の熱可塑性ポリエステルであシ、−〇・CH(CH3
) CH2C0− 急速に比較的高いレベル例えば70%またはそれμ上の
オーダーまで結晶化する。この結晶化挙動は、重合体k
Vyllえば成形用材料として使用すると傘には、し
ばしば欠点となる。
位の熱可塑性ポリエステルであシ、−〇・CH(CH3
) CH2C0− 急速に比較的高いレベル例えば70%またはそれμ上の
オーダーまで結晶化する。この結晶化挙動は、重合体k
Vyllえば成形用材料として使用すると傘には、し
ばしば欠点となる。
このPI(Bの(ル晶化は、重合体鎖に非頑似拳置体の
学位を組み入れることで変性できることが判明した。
′: かぐして微生物をある種の有機酸の存在下において特定
の条畔下で培養することにより小割合のコモノマ一単位
を重合体鎖中へ導入することができる。そのような酸の
一例はプロピオン酸である。
学位を組み入れることで変性できることが判明した。
′: かぐして微生物をある種の有機酸の存在下において特定
の条畔下で培養することにより小割合のコモノマ一単位
を重合体鎖中へ導入することができる。そのような酸の
一例はプロピオン酸である。
この発明は以下の理論に何ら拘束されるものではないが
、そのような重合体をもたらす代謝経路は下記の如くで
あると考えられる。下記において、 CoASHは、末エステル化補酵素Aである。
、そのような重合体をもたらす代謝経路は下記の如くで
あると考えられる。下記において、 CoASHは、末エステル化補酵素Aである。
したがってCH3CO8CoAは補酵素Aのアセチルチ
オエステルで、一般にアセチルCoA と称されている
。
オエステルで、一般にアセチルCoA と称されている
。
NADPは、酸化状態のニコチン酸アミドアデニンジヌ
クレオチドホスフェートである。
クレオチドホスフェートである。
N A D P Hzは、還元されたNADPである。
微生物によるPHHの生合成における第1工程は、アセ
チルCoAの合成と考えられる。これは、例えば補酵素
Aと酢酸エステルから、またはピルベートcjk水化物
のグリコリシス(解糖)生成物であるか、またはオキサ
ロアセテート(トリカルボン酸(TCA)サイクルまた
はクレブスサイクルの一員である)の脱カルボキシル化
で生成する〕の脱カルボキシル化により形成される。
チルCoAの合成と考えられる。これは、例えば補酵素
Aと酢酸エステルから、またはピルベートcjk水化物
のグリコリシス(解糖)生成物であるか、またはオキサ
ロアセテート(トリカルボン酸(TCA)サイクルまた
はクレブスサイクルの一員である)の脱カルボキシル化
で生成する〕の脱カルボキシル化により形成される。
したがって、アセチルCoA源としての酢酸エステルで
、PHBは次の諸反応を含む代謝経路で産生される: チオキナーゼ (1) CH3・CO・0−+coAIISHCH8I
IC011SIICoA+OH−β−ケトチオラーゼ +21 2Ct(3*C05SsCoAC&lIC0・
CH2・CO@S・CoA+COA@SHすダクターゼ +3) CkI3・CO・C1(211CO・S
@CoA+NADPH,−−−一一−−m−CH8@C
HOH・CH2ΦC0−8@CoA+NADP(6−ヒ
ドロキシブチリルCoA) ポリメラーゼ (4) CH3・CHOHIICl(2IICO@5
LICOA−〇〇C1((CH3)・CH2@CO−+
CoASH(重合体中の繰返し単位) 従って反応(4)は、主長中の重合体鎖に一つの−0・
CH(C)13)・CI(2拳C〇−単位を付加する。
、PHBは次の諸反応を含む代謝経路で産生される: チオキナーゼ (1) CH3・CO・0−+coAIISHCH8I
IC011SIICoA+OH−β−ケトチオラーゼ +21 2Ct(3*C05SsCoAC&lIC0・
CH2・CO@S・CoA+COA@SHすダクターゼ +3) CkI3・CO・C1(211CO・S
@CoA+NADPH,−−−一一−−m−CH8@C
HOH・CH2ΦC0−8@CoA+NADP(6−ヒ
ドロキシブチリルCoA) ポリメラーゼ (4) CH3・CHOHIICl(2IICO@5
LICOA−〇〇C1((CH3)・CH2@CO−+
CoASH(重合体中の繰返し単位) 従って反応(4)は、主長中の重合体鎖に一つの−0・
CH(C)13)・CI(2拳C〇−単位を付加する。
関与する酵素類がプロピオン酸に関して特異性を欠くの
で、対応する経路は下記の如(であると考えられる。
で、対応する経路は下記の如(であると考えられる。
(1a)CI(3+1C几−Coo″″+coAIIS
H−−一−CH3脅C1(2・CO・S@COA+ 0
H(2a)CI(8・CHQ・CO・511CoA+C
H8・CO・S・CoA−→C1(3・CH2・CO・
Cf(2働CO・SΦCoA+CoAeSt((3a
) CI(a@ C5・CO・C1(211Co ・
S Co A+NADPH2→Cル@C1(2@CED
f(’CkI2@■・5IICOA+NAI)P(4a
) CHs ・CH2・a(肘sci% ”■・S
@CoA −m−→−()”CM(C2f(s) ”C
H2”CO−+COA”SHすなわち、PH8がペンダ
ント状メチル基を有するのと対照的にペンダント状メチ
ル基を有する繰返し単位が重合体鎖中へ導入される。
H−−一−CH3脅C1(2・CO・S@COA+ 0
H(2a)CI(8・CHQ・CO・511CoA+C
H8・CO・S・CoA−→C1(3・CH2・CO・
Cf(2働CO・SΦCoA+CoAeSt((3a
) CI(a@ C5・CO・C1(211Co ・
S Co A+NADPH2→Cル@C1(2@CED
f(’CkI2@■・5IICOA+NAI)P(4a
) CHs ・CH2・a(肘sci% ”■・S
@CoA −m−→−()”CM(C2f(s) ”C
H2”CO−+COA”SHすなわち、PH8がペンダ
ント状メチル基を有するのと対照的にペンダント状メチ
ル基を有する繰返し単位が重合体鎖中へ導入される。
6−ヒドロキシ醋酸1fff、即ち次の学位−0CH(
C)L、)Ct(2CO− および他の単位金そ、り池の学位と共に含むある種の重
合体は、既に文献に記載されている。
C)L、)Ct(2CO− および他の単位金そ、り池の学位と共に含むある種の重
合体は、既に文献に記載されている。
エチレン性不飽和を示すといわれる赤外バンドを示す重
合体が、1)avis によりrAppliedMi
crobio1ogyj±2(1964)p、5U1〜
3U4に宅表されている。1)avisによって、6−
ヒドロキシ船酸単位および次の6−ヒドロキシ−2−ブ
テノン酸重信 −QC(CH3)= CHCO− を含む共重合体であるとされているこれら重合体は、N
ocordiaをn−ブタンで培養して産生された。
合体が、1)avis によりrAppliedMi
crobio1ogyj±2(1964)p、5U1〜
3U4に宅表されている。1)avisによって、6−
ヒドロキシ船酸単位および次の6−ヒドロキシ−2−ブ
テノン酸重信 −QC(CH3)= CHCO− を含む共重合体であるとされているこれら重合体は、N
ocordiaをn−ブタンで培養して産生された。
Wallen外はrEnvironmentel 5c
ienceand Technology6 (197
2)p、 161〜164および旦(1974)p、5
76〜579に、活性汚泥から学離し反覆洗浄後融点9
7〜100℃で、β−ヒドロキシ酪酸単泣および次の6
−ヒトロキシバレリ了ン酸単位 −OCR(C2H3) CH2CO− を1:5の比で富む重合体e%表している。
ienceand Technology6 (197
2)p、 161〜164および旦(1974)p、5
76〜579に、活性汚泥から学離し反覆洗浄後融点9
7〜100℃で、β−ヒドロキシ酪酸単泣および次の6
−ヒトロキシバレリ了ン酸単位 −OCR(C2H3) CH2CO− を1:5の比で富む重合体e%表している。
Marchessault外は、rIUPAc IV
Iacr。
Iacr。
Florence 1ソ80 Internati
nalSymposium On lVhcromol
es Preprints J2(1980)p、27
2〜2.75に、この重合体の研究を報告し、王として
6−ヒトロキシノ(レリアン醸嘔位を言むことを碓認し
ている。
nalSymposium On lVhcromol
es Preprints J2(1980)p、27
2〜2.75に、この重合体の研究を報告し、王として
6−ヒトロキシノ(レリアン醸嘔位を言むことを碓認し
ている。
USP3275610には、ある種の微生物、特にNo
cardia salmonicolor を炭素原
子4個を含むカルボン酸で培養することによるポリエス
テルの微生物学的産生法が示されている。
cardia salmonicolor を炭素原
子4個を含むカルボン酸で培養することによるポリエス
テルの微生物学的産生法が示されている。
その実施例2および3では、それぞれ6−ブテノン酸お
よび2−ヒドロキシ酪酸を用い、重合体は示された融点
の178〜184℃のオーダーからポリ6−ヒドロキシ
酪酸エステルであると見られる。しかし、実施例1では
、2−メチルアクリル酸(すガわちメタクリル酸)を用
い、得られた重合体は同定してないが、融点215〜2
20℃ヲ有シかつメチルエチルケトンに可溶性と説明さ
れている。これと対照的に、この発明の主とし6−ヒド
ロキシ酪酸残基を含む共重合体は、融点180℃以下で
冷メチルエチルケトンに不溶性である。
よび2−ヒドロキシ酪酸を用い、重合体は示された融点
の178〜184℃のオーダーからポリ6−ヒドロキシ
酪酸エステルであると見られる。しかし、実施例1では
、2−メチルアクリル酸(すガわちメタクリル酸)を用
い、得られた重合体は同定してないが、融点215〜2
20℃ヲ有シかつメチルエチルケトンに可溶性と説明さ
れている。これと対照的に、この発明の主とし6−ヒド
ロキシ酪酸残基を含む共重合体は、融点180℃以下で
冷メチルエチルケトンに不溶性である。
PHB蓄積性微生物を、適当な基質、即ちエネルギーお
よび炭素源で好気培養すると、微生物は増殖のための必
須要素の一つまたはそれ以上が消尽されるまで増殖する
。以下においてこの微生物の増殖を、′繁殖″と称する
。11:T4必須要素の一つが消尽されたと傘、その後
の繁殖は、もしあったとしても極めて限られた程髪であ
るが、基質が消尽されない限り、PH8は微生物に蓄積
される。
よび炭素源で好気培養すると、微生物は増殖のための必
須要素の一つまたはそれ以上が消尽されるまで増殖する
。以下においてこの微生物の増殖を、′繁殖″と称する
。11:T4必須要素の一つが消尽されたと傘、その後
の繁殖は、もしあったとしても極めて限られた程髪であ
るが、基質が消尽されない限り、PH8は微生物に蓄積
される。
ある樺の微生物では、PHB誘宅抑制因子(例えば1つ
またはそれ以上の繁殖必須要素の制限)が存在しなくて
も、微生物の繁殖中にPHBは蓄積するであろう;しか
じ、構造的にPHBを産生する微生物の場合を除き、こ
のように蓄積したPL(Bの址は一般に少量で、代表的
には得られる細胞の約10wt%以下である。
またはそれ以上の繁殖必須要素の制限)が存在しなくて
も、微生物の繁殖中にPHBは蓄積するであろう;しか
じ、構造的にPHBを産生する微生物の場合を除き、こ
のように蓄積したPL(Bの址は一般に少量で、代表的
には得られる細胞の約10wt%以下である。
したがって、/匂チ式培養で繁殖したとき kg構造的
PHBを産生じない微生物は、1つまたはそれ以上の繁
殖必須要素が消尽される壕では、殆んどまたは全くPH
Bを蓄積せず繁殖し、その鎌做生吻はPHBを合成する
。
PHBを産生じない微生物は、1つまたはそれ以上の繁
殖必須要素が消尽される壕では、殆んどまたは全くPH
Bを蓄積せず繁殖し、その鎌做生吻はPHBを合成する
。
従って共重せ体を産生させるには、6−ヒドロキシ酪酸
単位μ外のコポリマー学位を与える酸またはその誘導体
を、重合体蓄積期間中に存在する基質の少な(とも一部
として1吏用することが必要である。6−ヒドロキシ酪
酸重信頃外のコポリマー重信を与える酸またはその誘導
体を、この明細書では「基質のコモノマー成分」(また
は単に「コモノマー成分」)と称することがある。
単位μ外のコポリマー学位を与える酸またはその誘導体
を、重合体蓄積期間中に存在する基質の少な(とも一部
として1吏用することが必要である。6−ヒドロキシ酪
酸重信頃外のコポリマー重信を与える酸またはその誘導
体を、この明細書では「基質のコモノマー成分」(また
は単に「コモノマー成分」)と称することがある。
培養条件が、ポリエステル(例えばPHB)が顕著には
蓄積されないような培養条件でりると基質のコモノマー
成分は、しばしば微生物により別の経過で代謝3れ、例
えは了セチルCoAまたはTCAサイクルの一員になり
、共重合体は産生されなくなる。したがって、−例とし
て、何らの繁殖制限なしてはプロピオン酸は微生物によ
り代謝され、プロピオニルCoA を経て次いで炭酸ガ
スを取り込みメチルマロニルCoA、次いでTCAサイ
クルの一員であるサクシネートになる。
蓄積されないような培養条件でりると基質のコモノマー
成分は、しばしば微生物により別の経過で代謝3れ、例
えは了セチルCoAまたはTCAサイクルの一員になり
、共重合体は産生されなくなる。したがって、−例とし
て、何らの繁殖制限なしてはプロピオン酸は微生物によ
り代謝され、プロピオニルCoA を経て次いで炭酸ガ
スを取り込みメチルマロニルCoA、次いでTCAサイ
クルの一員であるサクシネートになる。
そのような別の経路による「基質のコモノマー成分」の
代謝は、PHBkfJ造的に産生ずる微生物を用いる場
合にも起こる。従って、f11@的PHB蓄積微生物を
用いる場合でさえも、繁殖のためには必須であるがPH
B蓄積のためには必須ではない−またはそれ以上の要素
の縦が制限された条件下で微生物を培養することによシ
重合体を蓄積させるのが好ましい。繁殖のための必須要
素を制限し、かくして重合体が微生物によって蓄積され
る条件下で、微生物を培養する場合でさえも、基質のコ
モノマー成分の幾分かは、アセチルCoAまたはTCA
サイクルのメンバーをもたらす経路により代謝されるこ
とがある。このことにより、コモノマー成分が重合体蓄
積段階中の唯一の基質であるときにさえも、微生物は、
共重合体へ導入されるだめの6−ヒドロキシ幅酸争位な
らびにそれ以外のコポリマ一単位を合成しうるのである
。またプロピオネ−171−ラの6−ヒドロキシバレレ
ートの産生について上記に示唆した代謝経路によって示
されるように、一つの工程、すなわち反応(2a)では
、プロピオニルCoAとアセチルCoA との反応が行
われる。従って、プロピオネートが唯一の基質であると
Aには、プロピオネートの幾分かは代謝されて了セチル
CoA となシ、6−ヒトロキシバレリ了ン酸嘔位が
産生されつる。
代謝は、PHBkfJ造的に産生ずる微生物を用いる場
合にも起こる。従って、f11@的PHB蓄積微生物を
用いる場合でさえも、繁殖のためには必須であるがPH
B蓄積のためには必須ではない−またはそれ以上の要素
の縦が制限された条件下で微生物を培養することによシ
重合体を蓄積させるのが好ましい。繁殖のための必須要
素を制限し、かくして重合体が微生物によって蓄積され
る条件下で、微生物を培養する場合でさえも、基質のコ
モノマー成分の幾分かは、アセチルCoAまたはTCA
サイクルのメンバーをもたらす経路により代謝されるこ
とがある。このことにより、コモノマー成分が重合体蓄
積段階中の唯一の基質であるときにさえも、微生物は、
共重合体へ導入されるだめの6−ヒドロキシ幅酸争位な
らびにそれ以外のコポリマ一単位を合成しうるのである
。またプロピオネ−171−ラの6−ヒドロキシバレレ
ートの産生について上記に示唆した代謝経路によって示
されるように、一つの工程、すなわち反応(2a)では
、プロピオニルCoAとアセチルCoA との反応が行
われる。従って、プロピオネートが唯一の基質であると
Aには、プロピオネートの幾分かは代謝されて了セチル
CoA となシ、6−ヒトロキシバレリ了ン酸嘔位が
産生されつる。
上記に示した共重合体中に6−ヒトロキシバレリアン酸
重信をもたらす諸代謝経路に加えて、基質のコモノマー
成分として1重々の池の物質を用いることによりその也
の反応が起こりうる。
重信をもたらす諸代謝経路に加えて、基質のコモノマー
成分として1重々の池の物質を用いることによりその也
の反応が起こりうる。
例えは、その曲のヒドロキシ置換カルボン酸は、(もし
例えば了セチルCoA またはプロピオニルCoA k
もたらす他の経路によって代謝されなければ)場合によ
っては、゛ポリメラーゼによって重合体中へ導入するこ
とも可能であり、例えば、 HOllCRR・(CRR)n@C0IICOA−m−
→−0・CRR(CRR)n @CO−+ CoAS、
t(〔ここにnはゼロ−1−たり整数であり、R,R。
例えば了セチルCoA またはプロピオニルCoA k
もたらす他の経路によって代謝されなければ)場合によ
っては、゛ポリメラーゼによって重合体中へ導入するこ
とも可能であり、例えば、 HOllCRR・(CRR)n@C0IICOA−m−
→−0・CRR(CRR)n @CO−+ CoAS、
t(〔ここにnはゼロ−1−たり整数であり、R,R。
RおよびRは同一かまたは相異なっていてよ(、炭化水
素基(例:アルキル、アラルキル、了り−ルまたはアル
カリール基);ハローおよびヒドロキシ−置換炭化水素
;ヒドロキシ;ハロゲン原子;および水素原子;から選
択される〕。
素基(例:アルキル、アラルキル、了り−ルまたはアル
カリール基);ハローおよびヒドロキシ−置換炭化水素
;ヒドロキシ;ハロゲン原子;および水素原子;から選
択される〕。
もちろん、n=1およびR=R=R=水素である場合、
もしRがメチル基であるならば、ヒドロキシカルボン酸
は、代謝されて直接に6−ヒドロキシ酪酸単位を与える
6−ヒドロキシ酪酸である。
もしRがメチル基であるならば、ヒドロキシカルボン酸
は、代謝されて直接に6−ヒドロキシ酪酸単位を与える
6−ヒドロキシ酪酸である。
好ましくは、基R,R,RおよびRのそれぞれは、4よ
り少ない炭素原子を含む。一般に1 11 1
+’ 4R、R、RおよびRのうちの少
な(とも一つは水素である。nはゼロ、1または2であ
るのが好ましい。
り少ない炭素原子を含む。一般に1 11 1
+’ 4R、R、RおよびRのうちの少
な(とも一つは水素である。nはゼロ、1または2であ
るのが好ましい。
そのようなヒドロキシカルボン酸は、そのままの状態で
基質のコモノマー成分の一部または全部として添加され
ても、あるいはその他のコモノマー成分材料から微生物
によって合成されてもよい。
基質のコモノマー成分の一部または全部として添加され
ても、あるいはその他のコモノマー成分材料から微生物
によって合成されてもよい。
アクリル酸、6−クロルプロピオ/酸および6−ヒドロ
キシプロピオン酸のような酸は、6−ヒドロキシtW5
n単位とその他の単位を含む重合体を与えうろことが判
明した。若干の場合に、コレラの他の学位のすべては、
6−ヒトロキシバレリアン鍍単位であるが、別の場合に
は他の単位(すなわち前記定義の第位Aであって、6−
ヒトロキシバレリ了ン酸単泣と関連して生じうるもの)
は、就中、下記(i) 、 (ii)を示すプロトンお
よび Cnmrスペクトルによって同定される。
キシプロピオン酸のような酸は、6−ヒドロキシtW5
n単位とその他の単位を含む重合体を与えうろことが判
明した。若干の場合に、コレラの他の学位のすべては、
6−ヒトロキシバレリアン鍍単位であるが、別の場合に
は他の単位(すなわち前記定義の第位Aであって、6−
ヒトロキシバレリ了ン酸単泣と関連して生じうるもの)
は、就中、下記(i) 、 (ii)を示すプロトンお
よび Cnmrスペクトルによって同定される。
(i) 4.5 ppmにおけるプロトンnmr
)リプレット。
)リプレット。
(ii) 59.89および63.86ppm にお
ける3 Cnmrノヒーク(テトラメチルシラン[4対照)。
ける3 Cnmrノヒーク(テトラメチルシラン[4対照)。
これらのnmr データから、これらの単位は6−ヒ
ドロキシプロピオン酸学位(n=1、R=R=R−R=
H)であると確1ぎされる。
ドロキシプロピオン酸学位(n=1、R=R=R−R=
H)であると確1ぎされる。
共重合体は4−ヒドロキシカルボン酸φ位(n−= 2
、R’=CI(、、R=R=FL =H)”k含むこと
もある。
、R’=CI(、、R=R=FL =H)”k含むこと
もある。
6−ヒドロキシプロピオン酸革位および/または4−ヒ
ドロキシバレリ了ン酸拳位は、中間体の CHa・OH@Cル・CO・S・CoAおよびCH13
@CHOHIIC几・C八・CO・S・CoAから由来
することもありうる。前者は6−ヒドロキシプロピオネ
ートおよびCoA11SHから生成されうる。それ自体
で供給されるμ外に、6−ヒドロキシプロピオネートは
アクリレートの水和反応 CH,=CH”Coo−+H,0−CHOH−CH,−
COO−により、または6−クロルプロピオネートのυ
0水分解 C几α・CH,・αη−+OH−→皿くル・σσにrに
よシ生成されうる。4−ヒドロキシバレリルCoAId
、アセチルCoAとアクリルCoAの縮合、それに続く
還元、すなわち aL・CO@5L1CoA十CI(lI=部・CO・5
11COA−一−C市・co−cH=cH−C6−s□
・COA+C0A−8H−・C011CH=CH−CO
・S@COA+2NADPHr−今(1(、・CHOH
・Cf(2CH2働CO・S*CoA+ 2NADPに
よって生成されうる。
ドロキシバレリ了ン酸拳位は、中間体の CHa・OH@Cル・CO・S・CoAおよびCH13
@CHOHIIC几・C八・CO・S・CoAから由来
することもありうる。前者は6−ヒドロキシプロピオネ
ートおよびCoA11SHから生成されうる。それ自体
で供給されるμ外に、6−ヒドロキシプロピオネートは
アクリレートの水和反応 CH,=CH”Coo−+H,0−CHOH−CH,−
COO−により、または6−クロルプロピオネートのυ
0水分解 C几α・CH,・αη−+OH−→皿くル・σσにrに
よシ生成されうる。4−ヒドロキシバレリルCoAId
、アセチルCoAとアクリルCoAの縮合、それに続く
還元、すなわち aL・CO@5L1CoA十CI(lI=部・CO・5
11COA−一−C市・co−cH=cH−C6−s□
・COA+C0A−8H−・C011CH=CH−CO
・S@COA+2NADPHr−今(1(、・CHOH
・Cf(2CH2働CO・S*CoA+ 2NADPに
よって生成されうる。
同様に4−ヒドロキシバレリルCoA Id、6−ヒド
ロキシ−または6−クロル−プロピオネートから、アセ
チルCoA との縮合およびj脱水(6−クロルプロ
ピオネートの場合には中間の加水分解工程を行う)の反
1忍により生成しうる。
ロキシ−または6−クロル−プロピオネートから、アセ
チルCoA との縮合およびj脱水(6−クロルプロ
ピオネートの場合には中間の加水分解工程を行う)の反
1忍により生成しうる。
従って、この発明の方法により、6−ヒドロキシ酪酸単
位 1 −0・CH(CH3)・CH2−C0−を下記式の
単位 11 −0・CRR・(CRR)n@CO−と共に含む
共重合体τ得ることが可能である。
位 1 −0・CH(CH3)・CH2−C0−を下記式の
単位 11 −0・CRR・(CRR)n@CO−と共に含む
共重合体τ得ることが可能である。
〔上記式においてnはゼロまたは整数であり、R、R、
RおよびRのそれぞれは、炭化水素基(例えばアルキル
、アラルキル、了リールまたはアルカリール基);ハロ
ーおよびヒドロキ’、’−v換炭化水素基;ヒドロキシ
基:ノーロゲン原子;および水素原子;力・ら選択され
るが、n−が1、そしてR,RおよびRがそれぞれ水素
原子であるならばRはメチル基でないことを条件とする
〕。好ましくは、R、R、RおよびRのそれぞれは4個
より少ない炭素原子を含む。好ましくはnはゼロ、1ま
たは2である。
RおよびRのそれぞれは、炭化水素基(例えばアルキル
、アラルキル、了リールまたはアルカリール基);ハロ
ーおよびヒドロキ’、’−v換炭化水素基;ヒドロキシ
基:ノーロゲン原子;および水素原子;力・ら選択され
るが、n−が1、そしてR,RおよびRがそれぞれ水素
原子であるならばRはメチル基でないことを条件とする
〕。好ましくは、R、R、RおよびRのそれぞれは4個
より少ない炭素原子を含む。好ましくはnはゼロ、1ま
たは2である。
共重合体は単位Hの2μ上のタイプを含むことがある。
好ましくは単位Hの少な(とも幾分かにおいてn=1、
R=R=R=HそしてR−エチルである。
R=R=R=HそしてR−エチルである。
プラスチック材料として実用的であるためには、重合体
はio、uo、o以上の重址平均分子敏Mw (例えば
ゲル滲透クロマトグラフ法によって測定)を有すべきで
ある。
はio、uo、o以上の重址平均分子敏Mw (例えば
ゲル滲透クロマトグラフ法によって測定)を有すべきで
ある。
共重合体中の燥返し単位11の割合は、共重合体の全繰
返し単位の0.1ないし50モル係、軛特に1ないし4
0モル係である。場合によっては、微生物により得られ
る重合体は、繰返し単位Iのホモ車合体と繰返し単位I
および■を含む共重合体との混合吻である。この場合、
重合体中の繰返し単位■の全体の割合は、全繰返し単位
の0.1ないし50モルチである。蹟も好ましくは、繰
返し単位11の40合は、6ないし60モルチである。
返し単位の0.1ないし50モル係、軛特に1ないし4
0モル係である。場合によっては、微生物により得られ
る重合体は、繰返し単位Iのホモ車合体と繰返し単位I
および■を含む共重合体との混合吻である。この場合、
重合体中の繰返し単位■の全体の割合は、全繰返し単位
の0.1ないし50モルチである。蹟も好ましくは、繰
返し単位11の40合は、6ないし60モルチである。
顕著な割合のコモノマー卓立11を得るには、基質のコ
モノマー成分中の化学結合炭素の敵は、微生物によって
重合体が蓄積されつつあるような培養条件期間中に存在
する基質中の全化学結合炭素の少なくとも2重1%、好
ましくは少なぐとも10重量%であるべAである。
モノマー成分中の化学結合炭素の敵は、微生物によって
重合体が蓄積されつつあるような培養条件期間中に存在
する基質中の全化学結合炭素の少なくとも2重1%、好
ましくは少なぐとも10重量%であるべAである。
そのような期間中は、コモノマー成分は基質中に存在す
るカルボン酸(またはその誘導体)のみであるのが好ま
しいが、場合によってはアセテートが存在することもあ
る。
るカルボン酸(またはその誘導体)のみであるのが好ま
しいが、場合によってはアセテートが存在することもあ
る。
この発明によれば、ポリエステルを4積で傘る微生物を
、水性培地中において水溶性の資化性炭素含有基質で培
養し、その際に培養の少な(とも一部期間昧その1救主
吻によってポリエステルが蓄積される条件下で培養を行
うことにより、熱可塑性ポリエステルを離生させる方法
において、少なくともポリエステルが4積する培養期間
部分中は、該資化性炭素含有基質は、該ポリエステル蓄
積条注下で微生物によって代謝されて、−o@cH(C
H’a)・CH,・CO−繰遅し単位からもっばら構成
されるもの以外のポリエステルとなる有域酸もしくは有
機酸誘導体を含むこと、かつ該酸もしくは酸誘導体中の
化学結合炭素の敵は該ポリエステル蓄積期間中に存在す
る基質中の全化学結合炭素の少なくとも2重徽係をなす
ことを特徴とする上記熱可塑性ポリエステルの微生物学
的産生方法が提供される。
、水性培地中において水溶性の資化性炭素含有基質で培
養し、その際に培養の少な(とも一部期間昧その1救主
吻によってポリエステルが蓄積される条件下で培養を行
うことにより、熱可塑性ポリエステルを離生させる方法
において、少なくともポリエステルが4積する培養期間
部分中は、該資化性炭素含有基質は、該ポリエステル蓄
積条注下で微生物によって代謝されて、−o@cH(C
H’a)・CH,・CO−繰遅し単位からもっばら構成
されるもの以外のポリエステルとなる有域酸もしくは有
機酸誘導体を含むこと、かつ該酸もしくは酸誘導体中の
化学結合炭素の敵は該ポリエステル蓄積期間中に存在す
る基質中の全化学結合炭素の少なくとも2重徽係をなす
ことを特徴とする上記熱可塑性ポリエステルの微生物学
的産生方法が提供される。
水性培地中のコモノマー成分の濃度はLl、Ll5 f
/lμ上であるべきであり、好ましくは0.1〜52/
lのl$に度であろう。従って、コモノマー成分の水溶
解度は0.05f#μ上であるべきで、また培養を品度
において所望のコモノマー成分濃度を与えるのに充分で
なければならないことは明かであろう。
/lμ上であるべきであり、好ましくは0.1〜52/
lのl$に度であろう。従って、コモノマー成分の水溶
解度は0.05f#μ上であるべきで、また培養を品度
において所望のコモノマー成分濃度を与えるのに充分で
なければならないことは明かであろう。
コモノマー成分は、酸自体であっても、あるイハ、塩、
エステル(ヒドロキシ置笑酸の場合、ラクトン類を含む
)、無水物、了ミドまたはノ・ライドであってよい。
エステル(ヒドロキシ置笑酸の場合、ラクトン類を含む
)、無水物、了ミドまたはノ・ライドであってよい。
前述のように、培養AA間の少な(とも一部は、微生物
の増殖にとって必須であるがポリエステルの蓄積のため
には必須でない要素を制限した条件下で培養を行うのが
好ましい。最も便宜な増殖要素の制限は窒素の制限であ
る。この理由のため、窒素制限を採用する場合、基質は
窒素を含まないことが好ましく、従ってアミド類は余り
好ましい基質ではない。
の増殖にとって必須であるがポリエステルの蓄積のため
には必須でない要素を制限した条件下で培養を行うのが
好ましい。最も便宜な増殖要素の制限は窒素の制限であ
る。この理由のため、窒素制限を採用する場合、基質は
窒素を含まないことが好ましく、従ってアミド類は余り
好ましい基質ではない。
共重合体を生じうる酸は、培養が重合体蓄積段階にある
と底に慄返し単位1のみを与えない酸であるべきである
。従ってこの点から望甘しくない酸の例としては、酢酸
、5−ヒドロキシ酪酸、TCAサイクルのメンバー、な
らびに培養が重合体蓄積段階にあるときにアセチルCo
Aおよび/またはTCAサイクルのメンバーのみを与え
る酸類がある。かぐして、不鴫当な酸としては、ホスホ
グリセリン酸、ピルビン酸、クエン酸、イソクエン酸、
σ−ケトグルタル酸、サクシン酸、フマル酸、マレイン
酸、リンゴ酸、オキサル酢酸、オキサロサクシン酸、ア
コニチン酸、およびメチルマロン酸がある。アミノ酸も
同様に不適当である。共重合体を与えないことが判明し
たその他の酸としては、ギ酸、酪酸、フェニル酢酸、安
息香酸、クロル酢酸、2−クロロプロピオン酸、6−ヒ
ドロキシ酪酸、4−ヒドロキシ酪酸、2−クロロ酪酸、
2−メチルアクリル酸、2,6−シメチルアクリル酸、
6.6−シメチルアクリル酸、乳酸、グリオキシル酸お
よびグリコール酸がある。
と底に慄返し単位1のみを与えない酸であるべきである
。従ってこの点から望甘しくない酸の例としては、酢酸
、5−ヒドロキシ酪酸、TCAサイクルのメンバー、な
らびに培養が重合体蓄積段階にあるときにアセチルCo
Aおよび/またはTCAサイクルのメンバーのみを与え
る酸類がある。かぐして、不鴫当な酸としては、ホスホ
グリセリン酸、ピルビン酸、クエン酸、イソクエン酸、
σ−ケトグルタル酸、サクシン酸、フマル酸、マレイン
酸、リンゴ酸、オキサル酢酸、オキサロサクシン酸、ア
コニチン酸、およびメチルマロン酸がある。アミノ酸も
同様に不適当である。共重合体を与えないことが判明し
たその他の酸としては、ギ酸、酪酸、フェニル酢酸、安
息香酸、クロル酢酸、2−クロロプロピオン酸、6−ヒ
ドロキシ酪酸、4−ヒドロキシ酪酸、2−クロロ酪酸、
2−メチルアクリル酸、2,6−シメチルアクリル酸、
6.6−シメチルアクリル酸、乳酸、グリオキシル酸お
よびグリコール酸がある。
共重合体を与えることが判明した酸としては、プロピオ
ン酸、6−ヒドロキシプロピオン酸、6−クロロプロピ
オン酸、6−ニトキシプロビオン酸、2−ヒドロキシ酪
酸、イソ酪酸、およびアクリル酸がある。受用しうるそ
の他の酸としては、奇数の炭素原子を含む高級飽和カル
ボン酸、例えばバレリン酸、ヘプタン酸、ピバリン酸お
よび置換プロペン酸(例:2−および6−クロロプロペ
ン酸)がある。
ン酸、6−ヒドロキシプロピオン酸、6−クロロプロピ
オン酸、6−ニトキシプロビオン酸、2−ヒドロキシ酪
酸、イソ酪酸、およびアクリル酸がある。受用しうるそ
の他の酸としては、奇数の炭素原子を含む高級飽和カル
ボン酸、例えばバレリン酸、ヘプタン酸、ピバリン酸お
よび置換プロペン酸(例:2−および6−クロロプロペ
ン酸)がある。
前述の通り、場合によっては、微生物は酸に別の作用を
行うこともある。したがって、イソ酪酸はn=1、R=
R,= R=1(、R−イソプロピル基の繰返し嗅立
11を与える。n=1、R2=R=R=H,R−エチル
基の繰返し単位11は、微生iが共重合体への代謝、経
路中で、メチル基を水素で置換することを示している。
行うこともある。したがって、イソ酪酸はn=1、R=
R,= R=1(、R−イソプロピル基の繰返し嗅立
11を与える。n=1、R2=R=R=H,R−エチル
基の繰返し単位11は、微生iが共重合体への代謝、経
路中で、メチル基を水素で置換することを示している。
共重合体を与えうる好ましい酸は、プロピオン酸、イソ
ラフ醒およびアクリル酸である。そのような酸の適当な
誘導体としては、アルカリ金鴫塩および低級アルキルエ
ステル(アルキル基が1〜4個の炭素原子をよむもの)
がある。
ラフ醒およびアクリル酸である。そのような酸の適当な
誘導体としては、アルカリ金鴫塩および低級アルキルエ
ステル(アルキル基が1〜4個の炭素原子をよむもの)
がある。
特に適当なエステルとしては、プロピオン肩のメチル、
エチル、イソプロピル、プロピル、ブチルおよびイソブ
チルエステル更;イン市域のメチルおよびエチルエステ
ル類;ならびにアクリル酸のメチルおよびエチルエステ
ル類;がある。
エチル、イソプロピル、プロピル、ブチルおよびイソブ
チルエステル更;イン市域のメチルおよびエチルエステ
ル類;ならびにアクリル酸のメチルおよびエチルエステ
ル類;がある。
共重合体形成性の酸(または酸誘導体)の混合物は、基
質のコモノマー成分として1吏用できる。例えばプロピ
オン酸とアクリル酸との(混合物を用いて興味ある結束
が得られている。
質のコモノマー成分として1吏用できる。例えばプロピ
オン酸とアクリル酸との(混合物を用いて興味ある結束
が得られている。
前述のように、PHBを構造的に産生ずる微生物を用い
る場合でさえも、ポリエステル”が蓄積される微生物培
養期間を、増殖には必須であるがポリエステル蓄積には
必須でない栄養素の制限の条件下に実施するの力i好ま
しい。
る場合でさえも、ポリエステル”が蓄積される微生物培
養期間を、増殖には必須であるがポリエステル蓄積には
必須でない栄養素の制限の条件下に実施するの力i好ま
しい。
基質および酸素(これは一般に培養槽の水性培地に空気
を注入して供給される)に加えて、各種の栄養塩類が微
生物が繁殖で六るために必要である。したがって、一般
に資化できる形態の次の元素源(普通は水溶性塩)が必
要である:窒素、リン、イオウ、カリ、ナトリウム、マ
グネシウム、カルシウムおよび鉄とともに微量元素、例
えばマンガン、亜鉛および銅。酸素の醗酵器への供給を
制限してポリエステル蓄積を誘導することも可能である
が、1種またはそれμ上の栄#塩の−Iltを制限する
のが好ましい。市1]限するのに最も実用的な元素はP
窒素、リンであり、余シ好ましくないのはマグネシウム
、イオウまたはカリである。これらの中でも、窒素(こ
れはアンモニウム塩で供給するのが便利である)の量を
制限するのが最も好ましい。必要とされる資化性窒素の
緻は、ポリエステル4積の少ない細胞の所望直置の約8
〜15%である。
を注入して供給される)に加えて、各種の栄養塩類が微
生物が繁殖で六るために必要である。したがって、一般
に資化できる形態の次の元素源(普通は水溶性塩)が必
要である:窒素、リン、イオウ、カリ、ナトリウム、マ
グネシウム、カルシウムおよび鉄とともに微量元素、例
えばマンガン、亜鉛および銅。酸素の醗酵器への供給を
制限してポリエステル蓄積を誘導することも可能である
が、1種またはそれμ上の栄#塩の−Iltを制限する
のが好ましい。市1]限するのに最も実用的な元素はP
窒素、リンであり、余シ好ましくないのはマグネシウム
、イオウまたはカリである。これらの中でも、窒素(こ
れはアンモニウム塩で供給するのが便利である)の量を
制限するのが最も好ましい。必要とされる資化性窒素の
緻は、ポリエステル4積の少ない細胞の所望直置の約8
〜15%である。
醗酵は、水性培地11当りポリエステル含有細胞の乾燥
電歇が少なくとも5vになるように行うのが好ましい。
電歇が少なくとも5vになるように行うのが好ましい。
したがって、もし例えばPHB含有緻40蛸膚のPHB
含有、1胞を10f/lで作ろうとすれは、細胞繁殖量
制限のために培養槽に供給される必須栄養の盪け、PH
Bを含まない細胞62/lの繁4を支持するのに要する
量である;したがって、もし窒素を繁殖制限栄養として
用いれば、PHB’!1m含まない細胞の窒素含有数は
約8〜15wt%であるから、必要な資化性窒素の着は
約0.5〜0.9f/lでアリ、例えばアンモニアイオ
ンL1.6〜1.2r/lである。
含有、1胞を10f/lで作ろうとすれは、細胞繁殖量
制限のために培養槽に供給される必須栄養の盪け、PH
Bを含まない細胞62/lの繁4を支持するのに要する
量である;したがって、もし窒素を繁殖制限栄養として
用いれば、PHB’!1m含まない細胞の窒素含有数は
約8〜15wt%であるから、必要な資化性窒素の着は
約0.5〜0.9f/lでアリ、例えばアンモニアイオ
ンL1.6〜1.2r/lである。
培養は、例えばpH,温度および曝気の程度(酸素を制
限栄養源としないと微)を当該微生物に対し常用する条
件下で行う。同1チに、用いる栄養塩類(その−用曖は
上記の条件を考I、イして決定される繁殖制限栄養源以
外のもの)は、当該微生物の繁殖に通常用いる曖である
。
限栄養源としないと微)を当該微生物に対し常用する条
件下で行う。同1チに、用いる栄養塩類(その−用曖は
上記の条件を考I、イして決定される繁殖制限栄養源以
外のもの)は、当該微生物の繁殖に通常用いる曖である
。
微生物は、4易に代謝できる基質、例えば炭 ゛水化物
で、重合体蓄積段階で制限すべき繁殖に必要な栄養源の
充分な置の存在下に、培養にょ9所望の重量まで繁殖さ
せ、次いで重合体蓄積を生じさせるV:殖要素制限の条
件下で培養するのが好ましい。場合によシ、繁殖段階の
少な(とも一部(また−合によっては金時についての基
質は、重合体蓄積段階で繰返し単位1になる酸(または
その誘導体)であってよい。
で、重合体蓄積段階で制限すべき繁殖に必要な栄養源の
充分な置の存在下に、培養にょ9所望の重量まで繁殖さ
せ、次いで重合体蓄積を生じさせるV:殖要素制限の条
件下で培養するのが好ましい。場合によシ、繁殖段階の
少な(とも一部(また−合によっては金時についての基
質は、重合体蓄積段階で繰返し単位1になる酸(または
その誘導体)であってよい。
培養は、繁殖には必要であるが重合体蓄積には必要でな
い栄誉源の駿が不足ないし消尽したときに、重合体蓄積
が起こるバッチ式培養で行うことができる。別法として
、培養は、新鮮な水性培地および基質の添on速度に対
応する速度で、培養槽からバクテリア細@を富む水性培
地を連続的または間欠的に除去する連続式培養で行うこ
とができる。培養槽に供給する制限栄養源の曖は、槽か
ら除去した水性培地がこの栄養源を殆んど宮まぬような
せであり、そして槽から除去した水性培地を、次いでパ
ンチ戊または好ましくは連続式で操業する#J2培養槽
に供給し、コモノマー成分をきむ拶丁鮮な漬誓の添v口
で、通気培養全継続して重合体蓄積金蔵こさせるのが好
ましい。この追卯の培養工程で、追7.adの基質およ
び栄養塩dk添Uロシてよいが、追υ口累殖は一般に好
ましくないので、聚りuを制限するのに用いる栄誉源は
さらにjJDえるべをではない。
い栄誉源の駿が不足ないし消尽したときに、重合体蓄積
が起こるバッチ式培養で行うことができる。別法として
、培養は、新鮮な水性培地および基質の添on速度に対
応する速度で、培養槽からバクテリア細@を富む水性培
地を連続的または間欠的に除去する連続式培養で行うこ
とができる。培養槽に供給する制限栄養源の曖は、槽か
ら除去した水性培地がこの栄養源を殆んど宮まぬような
せであり、そして槽から除去した水性培地を、次いでパ
ンチ戊または好ましくは連続式で操業する#J2培養槽
に供給し、コモノマー成分をきむ拶丁鮮な漬誓の添v口
で、通気培養全継続して重合体蓄積金蔵こさせるのが好
ましい。この追卯の培養工程で、追7.adの基質およ
び栄養塩dk添Uロシてよいが、追υ口累殖は一般に好
ましくないので、聚りuを制限するのに用いる栄誉源は
さらにjJDえるべをではない。
しかし、第144に槽から別の1個またはそれμ上の培
養槽に供給した水性培地に、制限栄養源が若干の残′I
IItaまれることおよび/またはその少献を添すロす
ることが、幼未的な操業に好ましいことは了解されよう
。
養槽に供給した水性培地に、制限栄養源が若干の残′I
IItaまれることおよび/またはその少献を添すロす
ることが、幼未的な操業に好ましいことは了解されよう
。
別法として、培養は一段連続式プロセスとして実施する
こともできる。栄養制限によりポリエステル蓄積を達成
するには、培養槽における培地の滞留時間を、微生物が
増殖して培養槽に供給された制限栄誉全中いノ(シ、か
つ次いで微生物がポリエステルを蓄積するのに充分であ
るように、長くする。
こともできる。栄養制限によりポリエステル蓄積を達成
するには、培養槽における培地の滞留時間を、微生物が
増殖して培養槽に供給された制限栄誉全中いノ(シ、か
つ次いで微生物がポリエステルを蓄積するのに充分であ
るように、長くする。
上記のバッチ式または連続式の何れの場合も、共重合体
繰返し単位nを与えるのに用いる酸(またはその誘導体
)は、繁殖に必要な栄養が消耗したと傘に起きる重合体
蓄積段階中の基質の一部または全部として用いられる。
繰返し単位nを与えるのに用いる酸(またはその誘導体
)は、繁殖に必要な栄養が消耗したと傘に起きる重合体
蓄積段階中の基質の一部または全部として用いられる。
こΩ酸は、繰返し単位Iを与える基質(例えば炭水物)
との混合物で用いるか、または唯一の基質であることも
ある;後者の場合、十分なコモノマー成分が、アセチル
CoAへの別の経路で代謝されて繰返し単位Iを与え、
例えばもし別の経路が反応(2a)を含めば、繰返し単
位Ilを得るのに必要な任意のアセチルCoA、が用い
られる。
との混合物で用いるか、または唯一の基質であることも
ある;後者の場合、十分なコモノマー成分が、アセチル
CoAへの別の経路で代謝されて繰返し単位Iを与え、
例えばもし別の経路が反応(2a)を含めば、繰返し単
位Ilを得るのに必要な任意のアセチルCoA、が用い
られる。
しかし、コモノマー成分が唯一の基質であれば、重合体
収駿は往々にして低下する。
収駿は往々にして低下する。
コモノマー成分は、重合体蓄積段階の一部のみに存在さ
せることもで勇る;コモノマー成分が存在する重合体蓄
積段階の部分の前および/または後に起きる、重合体蓄
積段階の残部では、繰返し単位Iのみを与える捲質が、
唯一の基質であることがある。
せることもで勇る;コモノマー成分が存在する重合体蓄
積段階の部分の前および/または後に起きる、重合体蓄
積段階の残部では、繰返し単位Iのみを与える捲質が、
唯一の基質であることがある。
場合によっては、面層の経路に必要な酵素をブロックす
ることおよび/′または必要な酵素合成の能力のない1
政生物を用いることにより、酸のアセチルCoAへの曲
常の代謝全阻止することも可能である。しかし、実質的
収酸の重合体を得るために、繁殖に要する栄養を制限し
、好ましくは消耗した条件下での一定期間の培養が、一
般に好ましい。
ることおよび/′または必要な酵素合成の能力のない1
政生物を用いることにより、酸のアセチルCoAへの曲
常の代謝全阻止することも可能である。しかし、実質的
収酸の重合体を得るために、繁殖に要する栄養を制限し
、好ましくは消耗した条件下での一定期間の培養が、一
般に好ましい。
培養は、蓄積ポリエステルの破が、バクテリア細胞の約
5U〜80wtqbになるように行うのが好ましい。
5U〜80wtqbになるように行うのが好ましい。
使用で六る微生物は、共重合体を製造しようとする酸ま
たはその塩會同化できる任意のポリ(6−ヒドロキシ陥
酸エステル蓄積性微生物である。バクテリアAlcal
igenes eutrophus(従来は)LYdr
ogenomonas eutropha として知ら
れていた)欅、例えばこの1の学術的研究に広(用いら
れたt−116株、[ATCCA17699、J Ge
neral Microbiology(197ソ)1
15、p、185〜192診照〕およびHI3株の変異
株、例えば1177B、8601/C5,55U1/C
29および5)01/C41(それぞれthe Nat
inal Co11ectionof Indust
rial Bacteria、TorryResea
rch 5tation、Aberdeen、5co
tlandに、1980年8月18日に寄託した、NC
I Bi21600. 1159ソ、11597 およ
び11598)が特に適している。ATCC番号は、t
he American Type Cu1tureC
ollection 、 12301 Park La
wnDrive 。
たはその塩會同化できる任意のポリ(6−ヒドロキシ陥
酸エステル蓄積性微生物である。バクテリアAlcal
igenes eutrophus(従来は)LYdr
ogenomonas eutropha として知ら
れていた)欅、例えばこの1の学術的研究に広(用いら
れたt−116株、[ATCCA17699、J Ge
neral Microbiology(197ソ)1
15、p、185〜192診照〕およびHI3株の変異
株、例えば1177B、8601/C5,55U1/C
29および5)01/C41(それぞれthe Nat
inal Co11ectionof Indust
rial Bacteria、TorryResea
rch 5tation、Aberdeen、5co
tlandに、1980年8月18日に寄託した、NC
I Bi21600. 1159ソ、11597 およ
び11598)が特に適している。ATCC番号は、t
he American Type Cu1tureC
ollection 、 12301 Park La
wnDrive 。
Rockville 、Maryland 20852
U−8,A。
U−8,A。
で与えられた番号である。上記の通り、繁殖段階中、炭
水化&’に基質として用いるのが好ましい。Alcal
igenes eutrophus H16株(AT
CCム17699)は、グルコースを資化しないが、そ
の変異株例えは上記の11/7B、8501/C’)、
55L11/C29およびSり01/C41は、グルコ
ースを資化で勇る。炭水化物、特にグルコースは、コス
トの面および微生物が効嚇的に−g4できるので、繁殖
段階での好ましい基質である。
水化&’に基質として用いるのが好ましい。Alcal
igenes eutrophus H16株(AT
CCム17699)は、グルコースを資化しないが、そ
の変異株例えは上記の11/7B、8501/C’)、
55L11/C29およびSり01/C41は、グルコ
ースを資化で勇る。炭水化物、特にグルコースは、コス
トの面および微生物が効嚇的に−g4できるので、繁殖
段階での好ましい基質である。
ポリエステルは、微生物細胞内部の顆粒として産生され
る。ポリエステルを含有する細胞は、例えばUSP31
07172に示すように、そのままで成形材料として用
いられるが、−役にポリエステル金、バクテリア細胞か
ら分離するのが好ましい。これは、細@を細胞破壊、次
いで適当な爵剤でポリエステル全抽出することで達成さ
れる。適当な抽出処理の例は、ヨー口・lバ特許出7第
1!:1126号に記載されている。
る。ポリエステルを含有する細胞は、例えばUSP31
07172に示すように、そのままで成形材料として用
いられるが、−役にポリエステル金、バクテリア細胞か
ら分離するのが好ましい。これは、細@を細胞破壊、次
いで適当な爵剤でポリエステル全抽出することで達成さ
れる。適当な抽出処理の例は、ヨー口・lバ特許出7第
1!:1126号に記載されている。
上記のa9、共徂廿体が実用で鳶るためには、共重合体
はゲル、参透クロマトグラフ法で測定した重量平均分子
t(Mw)10.LILIO1l上を有しなければなら
ない。好ましくは、ivlwは50、OUOμ上、より
好ましくはl0LI、0OL1μ上、特に2LlO,U
Oυμ上である。
はゲル、参透クロマトグラフ法で測定した重量平均分子
t(Mw)10.LILIO1l上を有しなければなら
ない。好ましくは、ivlwは50、OUOμ上、より
好ましくはl0LI、0OL1μ上、特に2LlO,U
Oυμ上である。
共重合体は、濱にυ−立体配置ヲ有し、6−ビドロキシ
酪酸ホモ重合体よりも低い娘点を示す。
酪酸ホモ重合体よりも低い娘点を示す。
共重合体は、溶融Fi5を形品の製造に特に有用であり
、この場合6−ヒドロキシ酪酸ホモ重合体に匹敵する還
元結晶化度が好ましい。
、この場合6−ヒドロキシ酪酸ホモ重合体に匹敵する還
元結晶化度が好ましい。
特に興味深いのは、少敞の共重合体の塩化ビニル系重合
体の高分子t 7Jl]工助剤としての用途である。こ
の応用では、共重合体の置は、塩化ビニル重合体に討し
Ll、5〜10wtチである。
体の高分子t 7Jl]工助剤としての用途である。こ
の応用では、共重合体の置は、塩化ビニル重合体に討し
Ll、5〜10wtチである。
この応用で最良の結果を得るには、共重合体はランダム
でなければならない。ランダム共重合体を得るには、コ
モノマ一単位lを得るのに用いる酸は、少な(とも繁殖
要素制限条件下での微生物の培#dl’Jl[じて唯一
の基質として存在するのが好ましい。
でなければならない。ランダム共重合体を得るには、コ
モノマ一単位lを得るのに用いる酸は、少な(とも繁殖
要素制限条件下での微生物の培#dl’Jl[じて唯一
の基質として存在するのが好ましい。
共重合体は、浴融押出し区、好ましくは重合体のガラス
転移点(Tg)と融点との間の温監で、−付またはそれ
以上のロールt−,IMさせて、フィルムの厚さを減少
しかつ若干の分子配向を導入するフィルムの製造にも用
いられる。
転移点(Tg)と融点との間の温監で、−付またはそれ
以上のロールt−,IMさせて、フィルムの厚さを減少
しかつ若干の分子配向を導入するフィルムの製造にも用
いられる。
この宅間を、以下の実施例で説明する。
実施例1゜
プロピオネートの1m虜の代謝では、プロピオネートは
サクシネートに5所し、これはTCAす°イクルのオキ
サロ酢酸への1化、次いで脱カルボキシル化により了セ
チルCoA になる。オキサロ酢酸の脱カルボキシル
化では、両方の末端酸基は炭酸ガスとして除去される。
サクシネートに5所し、これはTCAす°イクルのオキ
サロ酢酸への1化、次いで脱カルボキシル化により了セ
チルCoA になる。オキサロ酢酸の脱カルボキシル
化では、両方の末端酸基は炭酸ガスとして除去される。
したがって、もしカルボキシ基に放射性ラベルした炭素
原子ライするプロピオネート、即ちi−C−プロピオネ
ートを、アセチルCoAへの細胞変換に供給すれは、”
4CO2として放射化は失われる。
原子ライするプロピオネート、即ちi−C−プロピオネ
ートを、アセチルCoAへの細胞変換に供給すれは、”
4CO2として放射化は失われる。
重合体への何らかの140の組込みは、プロピオニルC
oAの6−ヒドロキシバレリルCoAへの変換、引へ続
(重合からもたらされる。
oAの6−ヒドロキシバレリルCoAへの変換、引へ続
(重合からもたらされる。
Alcaligenes eutrophus変異株N
ClB11599を、6.59/lの蓄積ポリエステル
を支持するに充分な資化性窒素および基質としてのグル
コースktむ水性培地A’に中いるバッチ式醗酵器で、
好気J@養により繁殖させた。水性培地Aは、脱イオン
水11当り次の組成を有していた。
ClB11599を、6.59/lの蓄積ポリエステル
を支持するに充分な資化性窒素および基質としてのグル
コースktむ水性培地A’に中いるバッチ式醗酵器で、
好気J@養により繁殖させた。水性培地Aは、脱イオン
水11当り次の組成を有していた。
(NH4)2 SO42f
MgSO,・フルOO,8t
Kt 804 0.45 fH3PO4
(1,1M) 12dF e SO4・7H
aO15IQ 微微光元素溶液 24m/ 微量元素溶液は、脱イオン水11当9次の組成を有して
いた。
(1,1M) 12dF e SO4・7H
aO15IQ 微微光元素溶液 24m/ 微量元素溶液は、脱イオン水11当9次の組成を有して
いた。
Cu SO4・5H20G、 02 tZnSO,*
6H2o o、 1fMn SO4” 4H
D0.1 ? CaC1,−2H,,02,6f バイオマス#度が4.5f/lに達したとき、即ち系の
資化性窒素が枯渇した後、1−140−プロピオネ一一
トヲ含むプロピオン酸ソーダ1f/lkグルコースとと
もに醗酵器に9口え、醗酵を5分間継続した。次いで、
細胞を濾過により回収し、重合体をクロロホルムで抽出
した。ラベルした炭素は、殆んど完全にクロロ、ホルム
溶液にあり、ラベルした末端炭素原子が炭酸ガスとして
損失しなかったこと金示した。したがって、少な(とも
幾らかのプロピオネートは、了セチルCoA として
以外に重合体に組み込まれた。
6H2o o、 1fMn SO4” 4H
D0.1 ? CaC1,−2H,,02,6f バイオマス#度が4.5f/lに達したとき、即ち系の
資化性窒素が枯渇した後、1−140−プロピオネ一一
トヲ含むプロピオン酸ソーダ1f/lkグルコースとと
もに醗酵器に9口え、醗酵を5分間継続した。次いで、
細胞を濾過により回収し、重合体をクロロホルムで抽出
した。ラベルした炭素は、殆んど完全にクロロ、ホルム
溶液にあり、ラベルした末端炭素原子が炭酸ガスとして
損失しなかったこと金示した。したがって、少な(とも
幾らかのプロピオネートは、了セチルCoA として
以外に重合体に組み込まれた。
実施例2.(比較例)
Alcaligenes eutrophus 変異
株NClB11599i、脱イオン水17!当9次の組
成を有する水性培地B40(JL]alを含む51バッ
チ式醗酵器で、pH6,8,64℃で好気培養にょシ繁
殖させた。
株NClB11599i、脱イオン水17!当9次の組
成を有する水性培地B40(JL]alを含む51バッ
チ式醗酵器で、pH6,8,64℃で好気培養にょシ繁
殖させた。
(NH4)2 SO44y
MgSO4・7H200,8f
KtSO,0,4b?
HsPO4(1,1M ) 12m1FeS0
4・7H2015In9 実施例1で用いた 24m1 微緻元素溶液 グルコースを、8グ/hrの割合で醗酵器に供給した。
4・7H2015In9 実施例1で用いた 24m1 微緻元素溶液 グルコースを、8グ/hrの割合で醗酵器に供給した。
培地Bの資化性窒素の量は、262のPHBを含まぬ細
胞を支持するに充分であった。
胞を支持するに充分であった。
40時間後、細胞を遠心分離で回収した。細胞を凍結乾
燥し、重合体をクロロホルムで抽出した。
燥し、重合体をクロロホルムで抽出した。
実施例6゜
実施例2を繰返したが、細胞型@54fに達したとき、
グルコースの代りにプロピオン酸を2.8f/hrの割
合で醗酵器に供給した。
グルコースの代りにプロピオン酸を2.8f/hrの割
合で醗酵器に供給した。
実施列4゜
実施例6を繰返したが、プロピオン酸の供給は細胞重量
391に達したときに開始した。
391に達したときに開始した。
実施例5゜
実施例6を繰返したが、プロピオン酸の供給は、細胞重
置561に達したときに始めた。
置561に達したときに始めた。
実施例6゜
実施例6を繰返したが、細胞重量48fに達したとき、
プロピオン酸12fを一度に添加した。
プロピオン酸12fを一度に添加した。
実施例Z
実施例2を繰返したが、培地Aを用い、グルコースの代
シにプロピオンdk4r/hrの割合で、醗酵中を全体
を通じて供給した。
シにプロピオンdk4r/hrの割合で、醗酵中を全体
を通じて供給した。
実施例a
実施例2を繰返したが、a胞重凌が687になっタト缶
、グルコースの代りに、グルコース5.2r/’hr、
プロピオン酸2.8?/hrの割合で、グルコースおよ
びプロピオン酸の混合物を醗酵器に供給した。
、グルコースの代りに、グルコース5.2r/’hr、
プロピオン酸2.8?/hrの割合で、グルコースおよ
びプロピオン酸の混合物を醗酵器に供給した。
実施例9
実施例8を繰返したが、細胞重量28fに達したとき、
グルコース6.89/hrおよびプロピオン酸1.2f
/hrの割合で、混合物の供給を開始した。
グルコース6.89/hrおよびプロピオン酸1.2f
/hrの割合で、混合物の供給を開始した。
実施例2〜9では、プロピオン酸は400 t/1を含
む溶液として添加した。
む溶液として添加した。
実施例10゜
実施例2を繰返したが、細胞重量が2Elに達したと負
、グルコースの代りにイソ酪酸を醗酵器に2f/hrの
割合で供給した。イソ酪酸は、1502/lを含む溶液
で添加した。
、グルコースの代りにイソ酪酸を醗酵器に2f/hrの
割合で供給した。イソ酪酸は、1502/lを含む溶液
で添加した。
実施例6〜6および8〜10では、「醗酵器に供給した
酸の重置」討「細胞重量が269に達した後(即ち系の
窒素が枯渇したとき)に醗酵器に供給したグルコースの
重量および醗酵器に供給した酸の重置の合計」の比が、
表1に示す値に達するまで、醗酵を継続した。
酸の重置」討「細胞重量が269に達した後(即ち系の
窒素が枯渇したとき)に醗酵器に供給したグルコースの
重量および醗酵器に供給した酸の重置の合計」の比が、
表1に示す値に達するまで、醗酵を継続した。
実施例11゜
実施例2を繰返したが、細胞重置が26.4fに達した
とき、グルコースの代りに3−クロロプロピオン酸i4
f/hrの割合で5時間醗酵器に供給した。
とき、グルコースの代りに3−クロロプロピオン酸i4
f/hrの割合で5時間醗酵器に供給した。
実施例12゜
実施例11を繰返したが、6−クロロプロピオン酸の供
給は、細胞型1134.4fに達したと会に開始した。
給は、細胞型1134.4fに達したと会に開始した。
実施例16゜
実施例12を繰返したが、細胞型t60fに達したト専
、6−クロロプロピオン酸4ft一度に添加し、次いで
グルコースに6.8f/hrの割合で7時間供給した。
、6−クロロプロピオン酸4ft一度に添加し、次いで
グルコースに6.8f/hrの割合で7時間供給した。
実施例11〜16では、6−クロロプロピオン酸は、5
0 f/13を含む溶液で添加した。
0 f/13を含む溶液で添加した。
実施例14゜
実施例2を繰返したが、細胞重置612になったとき、
グルコースの代りにアクリル酸全4f/hrの割合で5
時間醗酵器に供給した。アクリル酸は、100g!/A
をきむ溶液の形で添加した。
グルコースの代りにアクリル酸全4f/hrの割合で5
時間醗酵器に供給した。アクリル酸は、100g!/A
をきむ溶液の形で添加した。
実施例2〜140屯合体中の各コモノマ一単位の量は、
(a)加水分解およびガスクロマトグラフ法および(b
) C核磁気共鳴スペクトル法によシ決定した。
(a)加水分解およびガスクロマトグラフ法および(b
) C核磁気共鳴スペクトル法によシ決定した。
重合体の分子喰は、ゲル滲透過クロマトグラフ法で決定
した。
した。
塩素分析も、実施例2,11.12および16の重合体
について行った。
について行った。
結果全表2に示した。
表2において、6−f(Vは6−ヒトロキシバレリアン
酸拳位葡示し、ま現単泣Aは前述の単位で、6−ヒドロ
キシプロピオン酸学位と考えられるものである。
酸拳位葡示し、ま現単泣Aは前述の単位で、6−ヒドロ
キシプロピオン酸学位と考えられるものである。
6−クロロプロピオン酸からの塩素は、殆んど重合体に
見出されなかった。したがって、6−クロロプロピオン
酸の代謝中に塩素が失なわれて、その結果の生板物が代
謝δれて単位Aおよび6−ヒトロキシバレリ了ン酸単位
を与えるiうである。実施例11〜15の重合体の塩素
含量は、若干の塩素が単位■中に塩素含有基Rとして存
在していることを示し、おそらく、R=ジクロロチル、
R=R=R=H,n=1となっているのであろう。
見出されなかった。したがって、6−クロロプロピオン
酸の代謝中に塩素が失なわれて、その結果の生板物が代
謝δれて単位Aおよび6−ヒトロキシバレリ了ン酸単位
を与えるiうである。実施例11〜15の重合体の塩素
含量は、若干の塩素が単位■中に塩素含有基Rとして存
在していることを示し、おそらく、R=ジクロロチル、
R=R=R=H,n=1となっているのであろう。
高分解能 CN+ARを用いて、実施例6〜10の共重
合体の単敞体配列を調べた。カルボニル基の炭素原子か
ら得られるシグナルは、その環境に応じて、異なる化学
シフトで起Aることが判明した。したがって、11およ
び■(n=1、R’=C2H,、R2=R3=H)を含
む重合体では、可能な配列は次の通りである。
合体の単敞体配列を調べた。カルボニル基の炭素原子か
ら得られるシグナルは、その環境に応じて、異なる化学
シフトで起Aることが判明した。したがって、11およ
び■(n=1、R’=C2H,、R2=R3=H)を含
む重合体では、可能な配列は次の通りである。
A、ブチレート−ブチレート
B、バレレート−バレレート
C,ブチレート−バレレート
実施例2〜100重合体のNMR試験は、それぞれ16
9.07.169.25および169.44Fpm で
起きる6つの共鳴を示した。M、 I i d a外(
Macromoles 11 (1978)p490]
によれば、169.07 ppm での共鳴は、ブチ
レート−ブチレートの配列Aであり、169.44pp
mはバレレート−バレレートの配列Bである。推論によ
れば、169.25ppm でのシグナルは、ブチレ
ート−バレレートの配列Cから生じる。
9.07.169.25および169.44Fpm で
起きる6つの共鳴を示した。M、 I i d a外(
Macromoles 11 (1978)p490]
によれば、169.07 ppm での共鳴は、ブチ
レート−ブチレートの配列Aであり、169.44pp
mはバレレート−バレレートの配列Bである。推論によ
れば、169.25ppm でのシグナルは、ブチレ
ート−バレレートの配列Cから生じる。
実施例10の重合体のNMRの結果の定量的分析は、次
の結果を与えた。
の結果を与えた。
配列A(ブチレート−ブチレート) 55チ配列B(
バレレート−バレレート) 14%配列C(ブチレ
ート−バレレート) 、51%これらの結果は、実
施例10の重合体が単位IおよびIf(n=1、R=C
,H5、R=R=R=H)の共重合体を実質的量で含む
ことを、明らかに示している。しかし、繰返し単位1の
ホモ重合体の若干も存在する可能性がある。
バレレート−バレレート) 14%配列C(ブチレ
ート−バレレート) 、51%これらの結果は、実
施例10の重合体が単位IおよびIf(n=1、R=C
,H5、R=R=R=H)の共重合体を実質的量で含む
ことを、明らかに示している。しかし、繰返し単位1の
ホモ重合体の若干も存在する可能性がある。
実施例2〜14の重合体は、全部D(−)立体配置を有
していた。
していた。
抽出したままの共重合体の溶融挙動は、コンピューター
データー分析骨のシュポン1090システムを用いて、
先ず差動走査熱計量法(DSC)で決定した。DSC法
を、190℃で圧縮成形し、完全に結晶化した製品を得
るために、プレス中に冷却した鎌の試料でも実施した。
データー分析骨のシュポン1090システムを用いて、
先ず差動走査熱計量法(DSC)で決定した。DSC法
を、190℃で圧縮成形し、完全に結晶化した製品を得
るために、プレス中に冷却した鎌の試料でも実施した。
それぞれの場合、見本は空気中で20℃/分で加熱し、
吸熱溶融のスター)(Ts)およびピーク(Tp )の
温度をその面積とともに記録した。了ニーリングした試
料の0口熱を200℃まで継続し、完全に浴融させるた
め1分間等温にした後、試料を液体窒素中で急冷した。
吸熱溶融のスター)(Ts)およびピーク(Tp )の
温度をその面積とともに記録した。了ニーリングした試
料の0口熱を200℃まで継続し、完全に浴融させるた
め1分間等温にした後、試料を液体窒素中で急冷した。
非晶領域のガラス転#温変(Tg) k決定するために
、DSC試験に再び行った。最後に、密度勾配浮遊法に
より、了ニーリングした共重合体の密度を測定した。
、DSC試験に再び行った。最後に、密度勾配浮遊法に
より、了ニーリングした共重合体の密度を測定した。
結果を1表6に示す。
各共重合体の広い融点範囲は、共重合体がむしろ不均質
組成物であることを示している。しかし、溶融吸熱がよ
りシャープになりかつ面積が僅かに減少しているので、
了ニーリングしたとき、エステル交換による顕著なラン
ダム化が起きている。このことは、重合体はホモ重合体
の物理的混合物でな(、真玉共重合体であることの指標
である。
組成物であることを示している。しかし、溶融吸熱がよ
りシャープになりかつ面積が僅かに減少しているので、
了ニーリングしたとき、エステル交換による顕著なラン
ダム化が起きている。このことは、重合体はホモ重合体
の物理的混合物でな(、真玉共重合体であることの指標
である。
多重DSCピークが、実施例6,5.8および10の抽
出したままの重合体で観察された。
出したままの重合体で観察された。
溶融吸熱面積は、結晶化度の指標である。了ニーリング
後の実施例6〜14の重合体は、全部実施例2の対照ホ
モ車合体よりも、著るしく結晶化度は低かった。
後の実施例6〜14の重合体は、全部実施例2の対照ホ
モ車合体よりも、著るしく結晶化度は低かった。
実施例15゜
Alcaligenes eutrophus 変異
株NClB11599を、水性培地C(これはi地Bと
同じであるが、PH8を含まぬ細胞8.5fllを支持
するのに充分な硫酸アンモニア5.2f/1であった)
40 (J CJm、lf含む51バ・ノチ式醗酵器
で、pH6,8,54℃で好気培養により繁殖させた。
株NClB11599を、水性培地C(これはi地Bと
同じであるが、PH8を含まぬ細胞8.5fllを支持
するのに充分な硫酸アンモニア5.2f/1であった)
40 (J CJm、lf含む51バ・ノチ式醗酵器
で、pH6,8,54℃で好気培養により繁殖させた。
基質は、5.5f/l/hrの割合で供給するグルコー
スであった。細胞濃度が7f/lに達したとき、グルコ
ースに加えてプロピオン酸を1.58f/l/hrの割
合で供給した。細胞乾燥重置が15f/lに達したとき
、細胞を回収した。細胞懸濁液を噴霧乾燥し、脂質を乾
燥細胞のメタノール還流で抽出し、重合体をクロロホル
ム還流で抽出した。クロロホルム溶液をメタノール/水
混合物に添加する沈澱法により、重合体を回収した。
スであった。細胞濃度が7f/lに達したとき、グルコ
ースに加えてプロピオン酸を1.58f/l/hrの割
合で供給した。細胞乾燥重置が15f/lに達したとき
、細胞を回収した。細胞懸濁液を噴霧乾燥し、脂質を乾
燥細胞のメタノール還流で抽出し、重合体をクロロホル
ム還流で抽出した。クロロホルム溶液をメタノール/水
混合物に添加する沈澱法により、重合体を回収した。
共重合体は、反覆単位II (R=C*H5、R=R=
R=H,n= 1 )20 モル%を含んでいた。
R=H,n= 1 )20 モル%を含んでいた。
共重合体は、分子量、550,000 を有し、冷メ
チルエチルケトンに不溶性であった。共重合体22を、
メチルエチルケトン100m1で1時間還流すると、全
を溶解した。溶液を冷却すると、ゼラチン状マスを生じ
た。これに対し、6−ヒドロキシ酪酸エステルホモ重合
(ja2ffメチルエチルケトン100m1と還流した
とき、溶解したホモ重合体は0.12以下であった。メ
チルエチルケトンの代りにエタノールで、溶解度テスト
を反覆すると、1時間還流後、共重合体は約0.71が
、ホモ重合体はU、04fμ下が溶解した。
チルエチルケトンに不溶性であった。共重合体22を、
メチルエチルケトン100m1で1時間還流すると、全
を溶解した。溶液を冷却すると、ゼラチン状マスを生じ
た。これに対し、6−ヒドロキシ酪酸エステルホモ重合
(ja2ffメチルエチルケトン100m1と還流した
とき、溶解したホモ重合体は0.12以下であった。メ
チルエチルケトンの代りにエタノールで、溶解度テスト
を反覆すると、1時間還流後、共重合体は約0.71が
、ホモ重合体はU、04fμ下が溶解した。
これに付し、Wallen 外によt) Envir
onmen−tal 5cience and Tec
hnology 81(1974)p、576〜579
に記載の重合体は、熱エタノールに可溶性とされている
。
onmen−tal 5cience and Tec
hnology 81(1974)p、576〜579
に記載の重合体は、熱エタノールに可溶性とされている
。
実施例16゜
水性培地り、EおよびF’k、脱イオン水11当り次の
組成で作った。
組成で作った。
IL
(kl)、 804 12 yMgS04j
7H201,22 に230. 1.5fCaC1,0,
12f FeSO,−7H,,00,1? ZnSO4@ 7H,、OO,OO6fMn SO4・
4H200,0069 CuSO,・5H200,0015f H2SO4(濃厚) 1ml培地E Ha PO4(1,1M ) 2.4 ml
グルコース 40f 培地F HsPO4(1,1M) 2.4mlプロピ
オン酸 402 殺菌した公称容量2501バッチ式醗酵器に。
7H201,22 に230. 1.5fCaC1,0,
12f FeSO,−7H,,00,1? ZnSO4@ 7H,、OO,OO6fMn SO4・
4H200,0069 CuSO,・5H200,0015f H2SO4(濃厚) 1ml培地E Ha PO4(1,1M ) 2.4 ml
グルコース 40f 培地F HsPO4(1,1M) 2.4mlプロピ
オン酸 402 殺菌した公称容量2501バッチ式醗酵器に。
培地りおよびEのほぼ等容置混合物を、1601のマー
クまで満たした。醗酵器中の培地の少量の試料で、窒素
含有量を分析した。次いで。
クまで満たした。醗酵器中の培地の少量の試料で、窒素
含有量を分析した。次いで。
培養器にAlcaligenes eutrophus
変異株NCIB 11599を接種し、醗酵を6
4°Cで、苛性ソーダm液の添加でpHを6.8に自動
的にコントロールして好気的に行った。
変異株NCIB 11599を接種し、醗酵を6
4°Cで、苛性ソーダm液の添加でpHを6.8に自動
的にコントロールして好気的に行った。
醗酵器に存在した資化性窒素の量は、PHBを含まぬ細
胞的1.2Kfのみまでの微生物繁殖を行うのに充分で
あった。細胞重量が約1.05Kfに達したと転培地E
の供給を、6.51/hrの割合で開始した。
胞的1.2Kfのみまでの微生物繁殖を行うのに充分で
あった。細胞重量が約1.05Kfに達したと転培地E
の供給を、6.51/hrの割合で開始した。
細胞重置が約1700rに達したとき、培地Eの供給を
停止し、培地Fの供給を6.51/hrの割合で開始し
、細胞約2.6 Kpが産生されるまで醗酵を継続した
。
停止し、培地Fの供給を6.51/hrの割合で開始し
、細胞約2.6 Kpが産生されるまで醗酵を継続した
。
次いで、細胞懸lit液を、遠心分離により濃度的60
f/l−4−CIjNaL、、WfA1’1jjl&
I Gt&1.2−ジクロロエタン(DCE) 2f
tとシルバーソンミキサーで20℃で15分間接触させ
て重合体を抽出した。DCE相を、細胞の残骸を含む水
性相から分離し、濾過した。濾過したDCE相1容敏を
、メタノール/水(4/1.6藏)混合vIJ4容置に
加えて5重合体を沈澱させた。
f/l−4−CIjNaL、、WfA1’1jjl&
I Gt&1.2−ジクロロエタン(DCE) 2f
tとシルバーソンミキサーで20℃で15分間接触させ
て重合体を抽出した。DCE相を、細胞の残骸を含む水
性相から分離し、濾過した。濾過したDCE相1容敏を
、メタノール/水(4/1.6藏)混合vIJ4容置に
加えて5重合体を沈澱させた。
沈澱重合体を炉別し、メタノールで洗浄してから、オー
ブンで100℃で4時間乾燥した。
ブンで100℃で4時間乾燥した。
重合体は、DSC法で決定して168℃で溶融吸熱のピ
ークを有し約10O〜180℃の溶融範囲を有していた
。
ークを有し約10O〜180℃の溶融範囲を有していた
。
実施例1Z
実施列16の醗酵処理を反覆したが、培地Eの供給から
培地Fの供給への切換えは、細胞重量が約6.5に9に
達したときに行った。培地Fは、11.41/hrの割
合で4時間供給してから5.21/hrに低下させ、こ
のレベルをさらに9時間維持し、この段階で細胞重置は
約5.9 K、。
培地Fの供給への切換えは、細胞重量が約6.5に9に
達したときに行った。培地Fは、11.41/hrの割
合で4時間供給してから5.21/hrに低下させ、こ
のレベルをさらに9時間維持し、この段階で細胞重置は
約5.9 K、。
であった。
この実施例では、醗酵器に存在した資化性窒素の量は1
重合体を含まぬ細胞わずか約1.5kgに微生物を繁殖
させるに充分であった。
重合体を含まぬ細胞わずか約1.5kgに微生物を繁殖
させるに充分であった。
細胞懸濁物を遠心分離で濃縮し、次いで実施列15の方
法で、重合体t−濃縮細胞懸濁液から抽出した。
法で、重合体t−濃縮細胞懸濁液から抽出した。
実施例1a
実施例16のようにして、2501醗酵器に装入、接種
を行った。資化性窒素の量は、重合体をよまぬ細胞わず
か約1.9 Kgに、微生物を繁殖させるに充分であっ
た。実施例16のようにして、醗酵を64°C,pH6
,8・で好気的に行った。
を行った。資化性窒素の量は、重合体をよまぬ細胞わず
か約1.9 Kgに、微生物を繁殖させるに充分であっ
た。実施例16のようにして、醗酵を64°C,pH6
,8・で好気的に行った。
細胞重量が約1.OK9に達したとき、培地Eおよび培
地Geそれぞれ8.71/hrおよび4.61/hrの
割合で供給を開始し、細胞重量が3、9 K、になるま
で継続した。
地Geそれぞれ8.71/hrおよび4.61/hrの
割合で供給を開始し、細胞重量が3、9 K、になるま
で継続した。
培地Gは、脱イオン水111当り次の組成を有していた
: H3PO3(1,1M ) 1.2 ml
プロピオン酸 209 細胞懸濁液を遠心分離で濃縮し、実施例15の方法で、
重合体を濃縮細胞懸濁液から抽出した。
: H3PO3(1,1M ) 1.2 ml
プロピオン酸 209 細胞懸濁液を遠心分離で濃縮し、実施例15の方法で、
重合体を濃縮細胞懸濁液から抽出した。
実施例19゜
実施例17の処理を大規模で反覆し、公称各種1000
1の醗酵器を用い、はぼ等容敏の培地りおよびEでbo
oxマークまで満たした。
1の醗酵器を用い、はぼ等容敏の培地りおよびEでbo
oxマークまで満たした。
この実施例では、培地Eの供給は細胞重量的49になっ
たと六に251/hrの、41合で開始し、培地Fの供
給は細胞重量的Bxyになったと轡6“7.51/hr
の割合で開始した。培地EおよびFの供給は、細胞重置
が約10Kgに達するまで継続した。存在する資化性窒
素の曖は、重合体を含まぬ細胞約4.1 Kgまで微生
物を繁殖させるに充分であった。
たと六に251/hrの、41合で開始し、培地Fの供
給は細胞重量的Bxyになったと轡6“7.51/hr
の割合で開始した。培地EおよびFの供給は、細胞重置
が約10Kgに達するまで継続した。存在する資化性窒
素の曖は、重合体を含まぬ細胞約4.1 Kgまで微生
物を繁殖させるに充分であった。
実施例20゜
実施例19を反覆したが、培地Fの供給割合は25A’
/hrで、醗酵は細胞重量的11KgKなるまで継続し
た。この場合、資化性窒素の瞳は、重合体を含まぬ細胞
約4匂まで微生物が繁殖するに充分であった。
/hrで、醗酵は細胞重量的11KgKなるまで継続し
た。この場合、資化性窒素の瞳は、重合体を含まぬ細胞
約4匂まで微生物が繁殖するに充分であった。
実施例16〜20の重合体は、それぞれ6−ヒドロキシ
酪酸(t(B)単位およびβ−ヒドロキシバレリ了ン酸
(HV)単位?、含す共重合体であり1重置平均分子敏
は300,0OLI以上であった。共重合体は、それぞ
れD(−)立体配aを有していた。
酪酸(t(B)単位およびβ−ヒドロキシバレリ了ン酸
(HV)単位?、含す共重合体であり1重置平均分子敏
は300,0OLI以上であった。共重合体は、それぞ
れD(−)立体配aを有していた。
実施列16〜20の各共重合体および6−ヒドロキシ酪
酸ホモ重合体100重を部を、クロロホルム約10重量
部およびタルク1重を部でスラリー化し、家庭用向ひき
機で室温で粒状化した。次いで、組成物を乾燥してクロ
ロホルムを除去し、190℃で抽出してから、再び粒状
化した。得られる粒状物を、185℃で試験用バーに射
出成形し、型温度65℃および冷却時間20秒を用いた
。引張特性を、ASTMI)638−77aによpbL
Lras1分の速度で測定し、衝撃強度をASTM
D256−78により了イゾヴト衝撃試験で評1曲した
。
酸ホモ重合体100重を部を、クロロホルム約10重量
部およびタルク1重を部でスラリー化し、家庭用向ひき
機で室温で粒状化した。次いで、組成物を乾燥してクロ
ロホルムを除去し、190℃で抽出してから、再び粒状
化した。得られる粒状物を、185℃で試験用バーに射
出成形し、型温度65℃および冷却時間20秒を用いた
。引張特性を、ASTMI)638−77aによpbL
Lras1分の速度で測定し、衝撃強度をASTM
D256−78により了イゾヴト衝撃試験で評1曲した
。
結果を、表4に示した。
実施例21゜
下記成分を室温で乾式混合し、PVC配合物を作った:
重量部
(1) 塩化ビニルホモ重合体(K62) 1
[JO(ii) ジ−N−ジチオグリコール酸エステ
ルベースのチオオクチ ルスズ錯体の安定化剤 1.5(…
)メチルメタクリレート/ブタ ジェン/スチレンpvc衝撃 改善剤 8(1v)ワ
ックス(外部油滑剤) 0・8(v)
グリセリルモノエステル (内部油滑剤) 1(Vl)
HB重合体(加工助剤) 2HB
重合体υロエ助剤は、次のものであった:(a) 実
施例2で得た6−ヒドロキシ酪酸エステルホモ重合体
。
[JO(ii) ジ−N−ジチオグリコール酸エステ
ルベースのチオオクチ ルスズ錯体の安定化剤 1.5(…
)メチルメタクリレート/ブタ ジェン/スチレンpvc衝撃 改善剤 8(1v)ワ
ックス(外部油滑剤) 0・8(v)
グリセリルモノエステル (内部油滑剤) 1(Vl)
HB重合体(加工助剤) 2HB
重合体υロエ助剤は、次のものであった:(a) 実
施例2で得た6−ヒドロキシ酪酸エステルホモ重合体
。
(b) 実施例7の共重合体(共重合体A)(c)
実施例16の共重合体(共重合体B)加工助剤は、約
10wt4 のクロロホルムでスラリー化し、家庭用
内ひき機で室温で粒状化し、乾燥し、190℃で溶融押
出し、再度粒状化し、PvC乾燥混合物に配合する前に
、粒子寸法150μmB下に粉砕した。
実施例16の共重合体(共重合体B)加工助剤は、約
10wt4 のクロロホルムでスラリー化し、家庭用
内ひき機で室温で粒状化し、乾燥し、190℃で溶融押
出し、再度粒状化し、PvC乾燥混合物に配合する前に
、粒子寸法150μmB下に粉砕した。
乾燥混合物を、次のようにして試験した:1、混合物5
01を、5Kpの重錘で負荷した圧力ラムの下で18r
pmで回転し、180℃に維持しfcBrabende
r Plastographの混合ヘッドに投入した。
01を、5Kpの重錘で負荷した圧力ラムの下で18r
pmで回転し、180℃に維持しfcBrabende
r Plastographの混合ヘッドに投入した。
ゲル化が起きるに要した時間を、記録した。
2、混合物を冷圧縮してキャンドルにし、これを170
℃に維持し、直径1鵡およびランド長20mの円形オリ
フィスを有するダイを取付けた押出しレオメータ−に装
入した。装入物が170℃にDo熱された後、速度を増
加させながら押出した。押出し吻の外観を記録し、押出
し吻をダイから引張って溶融伸長性を評価した。
℃に維持し、直径1鵡およびランド長20mの円形オリ
フィスを有するダイを取付けた押出しレオメータ−に装
入した。装入物が170℃にDo熱された後、速度を増
加させながら押出した。押出し吻の外観を記録し、押出
し吻をダイから引張って溶融伸長性を評価した。
結果ケ、表5に示す。
表 5
この実施例は、塩化ビニル重合体加工助剤として、 共
重合体は、6−ヒドロキシ酪酸ホモ重合体より優れてい
ることを示している。よりランダム共重合体Aは、明ら
かに共重合体Bよυ秀れている。
重合体は、6−ヒドロキシ酪酸ホモ重合体より優れてい
ることを示している。よりランダム共重合体Aは、明ら
かに共重合体Bよυ秀れている。
実施例22゜
培地Hを、次の組成で作った:
(NH,九5o4ir
KH1IPO42f
(Na )tHPo、 59MgS04拳7
H+!o O,2fCaC1,0
,01f FeSO,−71(,00,OQ 5 fMnSO,・
4H,、O(1,0021Na、CO,−10H,00
,1f (NHt)t co 1.5 f脱イオン
水 全体で11にする培地のpHは、7で
あった。
H+!o O,2fCaC1,0
,01f FeSO,−71(,00,OQ 5 fMnSO,・
4H,、O(1,0021Na、CO,−10H,00
,1f (NHt)t co 1.5 f脱イオン
水 全体で11にする培地のpHは、7で
あった。
予じめメタクリル酸0.5fを溶解した培地H3O0m
/!をそれぞれ含む8個の11振とうフラスコに、 N
ocardia aa1monicolor株ATCC
19149(7)種培養* 5 rnl f接種し、旋
回振とう磯で62℃で培養した。
/!をそれぞれ含む8個の11振とうフラスコに、 N
ocardia aa1monicolor株ATCC
19149(7)種培養* 5 rnl f接種し、旋
回振とう磯で62℃で培養した。
接種後24時間、48時間および72時間の間隔で、各
フラスコにメタクリル酸0.52づつを添加し、メタク
リル酸0.25rの最終添υ口を96時間後に行った。
フラスコにメタクリル酸0.52づつを添加し、メタク
リル酸0.25rの最終添υ口を96時間後に行った。
接種後108時間で、各フラスコヲ検査した。どのフラ
スコでも、微生物の繁殖は殆んどなかった。フラスコ内
d物を一緒にし、遠心分離して細胞のペレットにして、
オープンで乾燥してから計曖した。ベレ・ノド重置は、
2.81fであった。接種物の細@含有酸も決定し、6
9.7bt/lであった。したがって、接種物としてフ
ラスコに添υ口した細胞の全重量は、2.79yであっ
た。
スコでも、微生物の繁殖は殆んどなかった。フラスコ内
d物を一緒にし、遠心分離して細胞のペレットにして、
オープンで乾燥してから計曖した。ベレ・ノド重置は、
2.81fであった。接種物の細@含有酸も決定し、6
9.7bt/lであった。したがって、接種物としてフ
ラスコに添υ口した細胞の全重量は、2.79yであっ
た。
用いたメタクリル酸!1度では、この−株は。
メタクリル酸を貴化しなかった。
実施例23.−45゜
これらの実施では、ある範囲の酸および酸誘導体を、共
重合体ヶ与えうるか否かについてスクリーニング試験し
た。
重合体ヶ与えうるか否かについてスクリーニング試験し
た。
使用した方法は下記の通シであった。
Alcaligenes eutrophus 変異
株NClB11599を、悦イオン水14当り下記の組
成の水性培地5500〜4000m1f入れた51のハ
・ノチ戊醗酵器中でpH6,8および64℃において好
気培養した。
株NClB11599を、悦イオン水14当り下記の組
成の水性培地5500〜4000m1f入れた51のハ
・ノチ戊醗酵器中でpH6,8および64℃において好
気培養した。
グルコース 171
(NH,)2 SO449
MgSO4−71(200,8f
f(a P 04 (1,1M ) 12
m1FeSO4・フル0 15In?微量
元素溶液 66m1(実施例1のもの
) pHは4M水酸化カリウム溶液および4M水酸化す)
IJウムの9=1(容/容)混合物の自動添v口により
6.8に制御した。このようなpH制−のためのKOH
/NaOH混合物の添加は、培地にカリウムおよびナト
リウムを供給する機能も果した。
m1FeSO4・フル0 15In?微量
元素溶液 66m1(実施例1のもの
) pHは4M水酸化カリウム溶液および4M水酸化す)
IJウムの9=1(容/容)混合物の自動添v口により
6.8に制御した。このようなpH制−のためのKOH
/NaOH混合物の添加は、培地にカリウムおよびナト
リウムを供給する機能も果した。
資化性窒素(上記4t/lの硫酸アンモニウムによって
与えられる)の量は、わずかに約6.5f/lのHB重
合体不含有細胞を支持するに足る酸であった。約16
f/11のグルコースが6.5f/lのHB重合体不含
有細@全生じさせるのに必要とされるから、存在したグ
ルコースの看は、少しの炭素過剰を与えるのに足るもの
であった。残留グルコース濃度を監視し。
与えられる)の量は、わずかに約6.5f/lのHB重
合体不含有細胞を支持するに足る酸であった。約16
f/11のグルコースが6.5f/lのHB重合体不含
有細@全生じさせるのに必要とされるから、存在したグ
ルコースの看は、少しの炭素過剰を与えるのに足るもの
であった。残留グルコース濃度を監視し。
また溶存酸素張力を追跡することにより、系が資化性窒
素に・欠乏した時点の明かな指示が得られた。この段階
でコモノマー成分(すなわち試験用の酸または酸誘導体
)の供給を開始し、合計で約0.1〜57/lのコモノ
マー成分が添υ口されるまでその供給を続けた。
素に・欠乏した時点の明かな指示が得られた。この段階
でコモノマー成分(すなわち試験用の酸または酸誘導体
)の供給を開始し、合計で約0.1〜57/lのコモノ
マー成分が添υ口されるまでその供給を続けた。
コモノマー成分の添カON了後、細@を遠心分離で回収
した。遠心分離した細胞の試料を凍結乾燥し、その重合
体全クロロホルムで抽出した。
した。遠心分離した細胞の試料を凍結乾燥し、その重合
体全クロロホルムで抽出した。
を合iをガスクロマトグラフ/質敏スペクトル(GCI
ViS)法(これには予備的なエステル交換工程が含ま
れる)またはnmrスペクトル法(NMR)によって分
析した。
ViS)法(これには予備的なエステル交換工程が含ま
れる)またはnmrスペクトル法(NMR)によって分
析した。
結果を表6に示す。この表において、NfVIRの結果
は、NMR法がエステル交換工程を含まず一層明確であ
ると考えられるので、可能な揚台に表示しである。
は、NMR法がエステル交換工程を含まず一層明確であ
ると考えられるので、可能な揚台に表示しである。
同様な結束は、実施列26−44において屋素が用い尽
された鏝にグルコースおよびコモノマー成分の混合物を
連続的に添加するように改変した培養を繰返えして実施
したと衣にも得られた。
された鏝にグルコースおよびコモノマー成分の混合物を
連続的に添加するように改変した培養を繰返えして実施
したと衣にも得られた。
実施例46.−51゜
0.085/hrの稀釈率(滞留時間の逆数)で約41
の有効培地液容積を用いて、51’の醗酵器中でpH6
,8および64℃においてAlealigenes e
utrophu、 変異株NClB11599を連続好
気培養した。1更用水性培地は、脱イオン水11当り下
記の組成であった。
の有効培地液容積を用いて、51’の醗酵器中でpH6
,8および64℃においてAlealigenes e
utrophu、 変異株NClB11599を連続好
気培養した。1更用水性培地は、脱イオン水11当り下
記の組成であった。
MgSO4・7H100,8f
へSo、 0.45rNa2 S
O40,05? Ha PO4(1,1M ) flK 12m
l微量元素溶液(実施例1のもの) 66rnlま
た表7に示した各成分も醗酵器に連続的に供給した。
O40,05? Ha PO4(1,1M ) flK 12m
l微量元素溶液(実施例1のもの) 66rnlま
た表7に示した各成分も醗酵器に連続的に供給した。
表 7
窒素の量は、わずかに6.5t/lのHB重合体不含有
細胞を支持するに足る量であった。
細胞を支持するに足る量であった。
pHは、4M水酸化カリウム溶液および4M水酸化ナト
リウム溶液の9:1(容/容)混合物の自動添Onによ
って6.8に制御した。
リウム溶液の9:1(容/容)混合物の自動添Onによ
って6.8に制御した。
醗酵は唯一の基質としてプロピオン酸を用いて開始した
。定常状態に達してから6日後に、水性紙@懸濁生成物
のサンプルを採取し、次いでアクリル酸を、次第に増加
する量で補助基質として添加した。少なくとも6日間定
常状態下での醗酵を各アクリル酸濃度において実施し。
。定常状態に達してから6日後に、水性紙@懸濁生成物
のサンプルを採取し、次いでアクリル酸を、次第に増加
する量で補助基質として添加した。少なくとも6日間定
常状態下での醗酵を各アクリル酸濃度において実施し。
その後にそれぞれサンプル全採取した。水性細胞懸濁生
成物の各サンプルを遠心分離して細胞を回収し、次いで
凍結乾燥した。重合体を、クロロホルムで細胞から回収
し、次いでNMR法で分析した。結果を表8に示す。
成物の各サンプルを遠心分離して細胞を回収し、次いで
凍結乾燥した。重合体を、クロロホルムで細胞から回収
し、次いでNMR法で分析した。結果を表8に示す。
実施例52゜
この実施例では、窒素ではな(燐の制限下にAlcal
igenes eutrophus 変異株NClB
11599を64℃で好気培養した。’Jlの醗酵器に
、脱1オン水11当り下記の組成の水性培地を仕込んだ
。
igenes eutrophus 変異株NClB
11599を64℃で好気培養した。’Jlの醗酵器に
、脱1オン水11当り下記の組成の水性培地を仕込んだ
。
(NH,)2 SO46,2y
Ha PO4(1,1M ) 1.5m
1MgSO4・フルOO,8f FeSO4・7I(2015〃ip 微置元装溶液(実施例1のもの) 66tnl醗
酵時のl)Hは、4MのKOHおよび4MのNaOHの
9:1(g/容)混合物の添カロにより自動的に6.8
に制御した。燐の量は81/lのHB重合体不含有細胞
を支持するに足るものであった。
1MgSO4・フルOO,8f FeSO4・7I(2015〃ip 微置元装溶液(実施例1のもの) 66tnl醗
酵時のl)Hは、4MのKOHおよび4MのNaOHの
9:1(g/容)混合物の添カロにより自動的に6.8
に制御した。燐の量は81/lのHB重合体不含有細胞
を支持するに足るものであった。
醗酵器に48時時間表うフラスコ培養物を接種し1次い
でbt/lのグルコースを添加した。
でbt/lのグルコースを添加した。
十べてのグルコースが用い尽されたと負(この時点で細
胞濃度は約2.5f/l)、プロピオン酸k<500f
/l(D溶液の杉で)、L)、F3f/l/時の速度で
54時間添加した。
胞濃度は約2.5f/l)、プロピオン酸k<500f
/l(D溶液の杉で)、L)、F3f/l/時の速度で
54時間添加した。
次いで細胞を回収し、重合体をクロロホルムで抽出し、
GCMS法で分析した。結果は下記の通りであった。
GCMS法で分析した。結果は下記の通りであった。
最終細胞濃度 20f71重合体含緻
60チ 5−HVのモルチ 40モルチ実施例55
.−57゜ これらの実施例ではNocardia Salmoni
−color種の二りの閑株をグルコース基質で培養し
1次いで檀々の酸を用いて重合体蓄積を誘導した。
60チ 5−HVのモルチ 40モルチ実施例55
.−57゜ これらの実施例ではNocardia Salmoni
−color種の二りの閑株をグルコース基質で培養し
1次いで檀々の酸を用いて重合体蓄積を誘導した。
各実施例において、250m/の振とうフラスコに、脱
イオン水11当り下記の成分を含む水性培地を50m1
仕込んだ。
イオン水11当り下記の成分を含む水性培地を50m1
仕込んだ。
グ、:I−ス 10f
4t(Po、 1.9FNaH
P0. 1.56f(NH4)l
804 1.8 tMg5O,・7)
(201J、2f FeC1,−6H,、OO,001? 微量元素溶液(犬殉例1のもの) 1mlこの
水性培地のpHはIUであった。フラスコに微生物(表
9)全接種し、回旋振とう法で60℃において24時間
培養した。得られた懸酸アンモニウム全省略したもの)
の50m1中に再懸濁させた。再曇濁した細@を6O°
Cでさらに24時間振とうし1次いでその細胞懸濁液を
遠心分離した。得られた遠心分離ペレ・ノド伏の細胞ケ
メタノールで2回洗浄し、その重合体よtを分析した。
P0. 1.56f(NH4)l
804 1.8 tMg5O,・7)
(201J、2f FeC1,−6H,、OO,001? 微量元素溶液(犬殉例1のもの) 1mlこの
水性培地のpHはIUであった。フラスコに微生物(表
9)全接種し、回旋振とう法で60℃において24時間
培養した。得られた懸酸アンモニウム全省略したもの)
の50m1中に再懸濁させた。再曇濁した細@を6O°
Cでさらに24時間振とうし1次いでその細胞懸濁液を
遠心分離した。得られた遠心分離ペレ・ノド伏の細胞ケ
メタノールで2回洗浄し、その重合体よtを分析した。
重合体は00MS法で分析した。
結果lr表9に示す。
第1頁の続き
優先権主張 @1981年10月30日■イギリス(G
B)■81305186.9 ■1982年5月12日■イギリス (GB)■8213697 0発 明 者 レオナード・フレデリック・ライト イギリス国クリーブランド・ス トツクトンーオンーテイーズ・ ツートン・ザ・グリーン・ツー トン・ホール(番地なし)
B)■81305186.9 ■1982年5月12日■イギリス (GB)■8213697 0発 明 者 レオナード・フレデリック・ライト イギリス国クリーブランド・ス トツクトンーオンーテイーズ・ ツートン・ザ・グリーン・ツー トン・ホール(番地なし)
Claims (3)
- (1)ポリエステルを蓄積できる微生物を、水性培地中
において水溶性の資化性炭素含有基質で培養し、その際
に培養の少なくとも一部期間はその微生物によってポリ
エステルが蓄積される条件下で培養を行うことにより熱
可塑性ポリエステルを産生させる方法において、少なく
ともポリエステルが蓄積している培養期間部分中は、該
資化性炭素含有基質は、該ポリエステル蓄積条件下で微
生物によって代謝されて、−〇・CH(Cル)・Cf−
(2・CO−繰返し単位からもっばら構成されるもの以
外のポリエステルとなる有機酸もしくは有礪酸誘導体金
含むこと、そして核酸もしくは酸誘導体中の化学結合炭
素の量は該ポリエステル蓄積期間中に存在する基質中の
全化学結合炭素の少な(とも2重破係をなすこと、を特
徴とする上記熱可塑性ポリエステル産生方法。 - (2)#生物の増殖にとって必須ではあるがポリエステ
ルの蓄積にとっては必須ではない要素の−またはそれ以
上を制限した条件下で、微生物によりポリエステルを蓄
積させる特許請求の範囲第1項に記載の方法。 - (3)重量平均分子量が10.ULILI LJ上で
あり、繰返し単位 1 −0−CH(CH,、)−CL(2−CO−およ
び繰返し単位 II −0・CRR・(CRR)nψco−(nはゼ
ロまたは整数であり、R,R,RおよびR4はそれぞれ
炭化水素基;ハローおよびヒドロキシ−置換炭化水素基
;ヒドロキシ基;ハロゲン原子;および水素原f;から
選択され、但し、nが1そしてR2、R3およびRがそ
れぞれ水源原子であるときにはR1はメチル基でなくま
たすべての基R1がエチル基であるとは限らないことを
条件とする。)を含み、かつ上記繰返し学位■が全、媒
収し単位の′0.1〜50モル係を構成していることを
特徴とする共重合体。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB8120991 | 1981-07-07 | ||
GB8120991 | 1981-07-07 | ||
EP81305186.9 | 1981-10-30 | ||
GB8213697 | 1982-05-12 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5218771A Division JPH0747623B2 (ja) | 1981-07-07 | 1993-09-02 | ポリβ−ヒドロキシ酪酸エステル共重合体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5869224A true JPS5869224A (ja) | 1983-04-25 |
JPH0438763B2 JPH0438763B2 (ja) | 1992-06-25 |
Family
ID=10523085
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP57118316A Granted JPS5869224A (ja) | 1981-07-07 | 1982-07-07 | ポリβ―ヒドロキシ酪酸エステル共重合体及びその産生方法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5869224A (ja) |
SU (1) | SU1375143A3 (ja) |
UA (1) | UA6302A1 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63269989A (ja) * | 1987-04-28 | 1988-11-08 | Yoshiharu Doi | 共重合体の製造法 |
JPS6448820A (en) * | 1987-08-18 | 1989-02-23 | Mitsubishi Chem Ind | Polyester copolymer and its production |
JPS6469622A (en) * | 1987-09-09 | 1989-03-15 | Mitsubishi Gas Chemical Co | Preparation of copolymer |
US4876331A (en) * | 1987-08-18 | 1989-10-24 | Mitsubishi Kasei Corporation | Copolyester and process for producing the same |
US5138029A (en) * | 1990-07-06 | 1992-08-11 | Showa Denko K.K. | Biodegradable or biocompatible copolymer and process for producing same |
JPH09500157A (ja) * | 1993-07-14 | 1997-01-07 | ゼネカ・リミテッド | 接着法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2948023A1 (de) * | 1979-11-29 | 1981-06-04 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | (beta)-hydroxibuttersaeure-polyester, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als lackrohstoffe |
JPS57150393A (en) * | 1980-11-18 | 1982-09-17 | Ici Ltd | Beta-hydroxy butyrate polymer and production thereof |
-
1981
- 1981-11-17 SU SU813359451A patent/SU1375143A3/ru active
- 1981-11-17 UA UA3359451A patent/UA6302A1/uk unknown
-
1982
- 1982-07-07 JP JP57118316A patent/JPS5869224A/ja active Granted
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2948023A1 (de) * | 1979-11-29 | 1981-06-04 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | (beta)-hydroxibuttersaeure-polyester, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als lackrohstoffe |
JPS57150393A (en) * | 1980-11-18 | 1982-09-17 | Ici Ltd | Beta-hydroxy butyrate polymer and production thereof |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JPS63269989A (ja) * | 1987-04-28 | 1988-11-08 | Yoshiharu Doi | 共重合体の製造法 |
JPH0412712B2 (ja) * | 1987-04-28 | 1992-03-05 | Yoshiharu Doi | |
JPS6448820A (en) * | 1987-08-18 | 1989-02-23 | Mitsubishi Chem Ind | Polyester copolymer and its production |
US4876331A (en) * | 1987-08-18 | 1989-10-24 | Mitsubishi Kasei Corporation | Copolyester and process for producing the same |
JPS6469622A (en) * | 1987-09-09 | 1989-03-15 | Mitsubishi Gas Chemical Co | Preparation of copolymer |
JPH0412713B2 (ja) * | 1987-09-09 | 1992-03-05 | Mitsubishi Gas Chemical Co | |
US5138029A (en) * | 1990-07-06 | 1992-08-11 | Showa Denko K.K. | Biodegradable or biocompatible copolymer and process for producing same |
JPH09500157A (ja) * | 1993-07-14 | 1997-01-07 | ゼネカ・リミテッド | 接着法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
UA6302A1 (uk) | 1994-12-29 |
SU1375143A3 (ru) | 1988-02-15 |
JPH0438763B2 (ja) | 1992-06-25 |
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