JPS5862561A - 液体の構成成分を測定する試験装置および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は液体の構成成分を測定する試験方式および方法
に関し、−この試験方式は反応容器中に含有される少な
くとも１つの圧縮可能なマドワックスより基本的になる
ものである９３復Ａイ６な組成系の構成成分の測定、特
に生物学的液体、の構成成分の測定は測定しようとする
物７ｔ１を含有する試料を種々の反応プロセスを通僅１
しめるという重鐘に規定された試験子１１１１ｉを必゛
堤とする１）この方法では、混合さねるべき試薬の添加
址おまひ流加時間が便用される方法および試料の数によ
り変わる。反応が生起した後に評価され、また、その方
法および測定（２ようとする物質によって特徴的である
測定表示は最終的には被験物質の濃度の測定に帰着する
１、従来、このような方法の複穎さに付随【〜で、最適
の・１．１頼性、簡易性および経済性を提供しようとす
る多くの異なる方法が試みられてきた１、臨床化学、特
に、非常に多くの分析を必要とすることの多い臨床化学
においては、できるかぎり簡１（ｉなやり方で短時則に
、多くの１６１１１定を実施できるようにする方法が開
発されてきた。これは一方では、機械化された分析方法
を用いることにより、そして他方では、実質的に仕上げ
られた形で利用できる必要な試薬および反応混合物の使
用により達成される。これに関連して、特殊な用法では
試料を、人間の手でもしくは完全に機械化された方法で
貯蔵容器からの反応溶液と混合する分析方式がある。し
かしながら、この溶液の提供、必要な場合には試料の調
製および分布の追跡およびクリーニング並びに混合方式
などは非常に多くの操作段階を必要とし多くの誤差の原
因ともなる。特に、溶液中における分析用物質は物にお
り安定性が低いので非常に多くの場合に、使用し切れな
かった溶液を元に戻すことを必要とする。さらにまた、
試験条件としては常に、異なる溶液を異なる蛍で正確に
丙現しうる状態で添加することが要求され、このことは
、自動方式の場合に１分析方法の簡１１’Ｌな取替えを
不可能にする。

このような難点は種々の試験方式を開発させるに至った
。すなわち、たとえば被験試料を含浸された濾紙のよう
な支持材料または適当な反応容器中の親液性材料のよう
な固体形の試薬と接触させることは既知である。この形
式の装置ｒ１、溶剤および被験試料をビ被ットで加える
ことだけを要する。桓々の親液性化した試薬を宥なる時
点で付与することにより連続反応の実施がｉｆ能に々る
。この方式は試験の実施の簡易化に寄１．ｊ、するが、
適当な反応容器の製造に非常に大きな問題が生じる４、
特に、これらの方式は全ての水性系に共ｉｌｌである欠
点を保有している。す々わち、これらは体液の分析に必
要な如ｆｉ＋なる分甜および除去工程も実施できなくし
、〜また実施されるべき分析中にわたり全ての試薬の添
加が必要である。１ いわゆる乾式分析法では、他方ではこれらの問題のいく
つかは出発時点から存在しない３．この場合には、被験
試料を、通常吸着剤であって、最も単純な場合に全ての
必要な試薬を最適濃度で−・個のマトリックス層に含有
する支持体−１１に配置する。この結果、他の方法では
慣用のビ被ノドによる操作が省略される。さらにまた、
このような乾式装置の貯蔵はそれらの安定性に関するか
ぎり重大な問題をもたらさない。しかしながら、準備ま
たは仕上げが不可能であるという事実および干渉物質の
排除が充分にできないという事実が水性方法の場合とま
た同様に、これらの一工程方式の欠点であることを証明
する、っしかしながら、数層に配列された乾燥材料を含
有し、たとえば干渉物質排除用層、濃縮帯域および異な
る反応領域および障壁域を包含しうる試験装置の場合で
さえも、被験液体の吸収訃よびその先への移送およびま
た個別の反応段階の進行は拡散および毛細管作用にだけ
依存し、従って実際に追跡またはコントロールがどちら
もできない。従って、特定の時点における反応の停止お
よび反応帯域における滞在時間のｊＭ応が不可能である
。

米国特許第３，９１７．４５３号は試験溶液を吸収する
だめの吸着剤材料およびこれも１．た吸着剤材料よりな
り被験液体の供給および移送に用いられる圧縮可能な層
を含む試験装置を記載している。この層は必要な試薬を
含有し、被験物質と反応して測色により評価される染料
を生成でき、２つの移送層間に配置されている３、［７
か１．ながＣう、この装置は多くの欠点を４）？出する
。定ｔ；゛的ｉｆ！ＩＩ　Ｓｉｆ、４川尤１げ価および
自動化が不可能である。

この装置ではｉｊＥ、　、＄ｊｆ、的に生起する数段階
を°政する反応の実施が不可能であり、また２つの反Ｌ
１・；帯域間の望ましくない物質の除去が、必要である
１↓ａ　ｆ６にも、不［１丁能である。

本発明のｔ−１的は上記欠点を回避し得るところの体液
の構成成分の測定万人および方法６・Ｉｊ、’　Ｉｔす
ることにある１、 上記の目的は４ぐ発明により、少なくとも１つの圧縮口
丁能なマトリックスを含有する反応答８によりなる試験
方式を用いることにより達成さＪｌ、’Ｅ　’ｒｈ明の
方式によれば、液体のｊｌ′Ｌ純な移送によることが「
４能であり、拡散とは１ｊ！（関係に、ぞ［２て人間の
手でも自動的にン行うことかできる、７本発明は、好１
しくに円筒形の反応答ｄＫ中にａ有される少なくとも１
つの含浸されたマトリックスおよび被験液体を吸収した
後にマ）　ＩＪラックス圧縮し、反応生成物を放出させ
る装置１′１″を有することを特徴とする、試薬で含浸
された圧縮可能なマトリックスを用いる液体の構成成分
を測定するだめの試験方式に関する。

本発明は壕だ被験液体を反応容器（好ま１．　＜は円筒
形の）中に含有されたマ）　ＩＪラックス適用し、反応
生成物をマトリックスの圧縮によりマトリックスから分
離し、そして直接にまたは１回またはそれ以上含浸した
マトリックスをさらに通過させた後に移送して測定する
ことを特徴とする試薬で含浸された圧縮可能なマトリッ
クスを用いる液体の構成成分の測定方法に関する。

驚くべきことに、本発明による試験方式は分析的方法の
使用および分析学的効率を可能にし、また水性溶液中に
おける匹敵しうる装置と同様の−やり方で、しかもさら
に試薬それ自体が結合するかまたは遠心分離、濾過また
けクロマトグラフィ式分離操作のような試料の追加の調
製処理の代りをすることができることが兄い出された。

。 本発明の液体分析用試験方式は分析に必゛玖な分離、反
応および測定の金工り、Ｉを相ｔｆに別々Ｖこ生起させ
る個別の帯域に分割することができる。

たとえば体液分析並びに物質の実際の測定に反応１１７
域および場合により表示帯域が必要な場合に、この装置
は１だ予備処理帯域、たとえば脱タン・ξりｌＰＪまた
は干渉性物？Ｊの除去用の１’　（Ｉｉｉｉ処理帯域、
をまた包含する。個別の帯域の性１１、数Ｌ・よび配列
ｉｔこの点で自由に組合せることがてきる。従って、た
とえば特定の測定においては、分離した１’　ｌ１ｉｉ
ｉ処理帯域を省略でき、１だは故時の異なる反応帯域を
共；げ１のｆ・備処理帯域と連ポ、“ｊすることができ
る。

本発明による試験方式では、反応に必安な試薬の全てを
初めから、マトリックス全体に均一に一視液化させるか
、不動化するか、または別の柱入で包含させて、存在さ
せる１、被験液体を適用すると、全マトリックス帯域に
わたる１／＋’、　４ｎのそして十分な反応剤の混合が
生じる。個別の反応帯域は反応系内で明白に分離されて
いる、すなわち早すぎる拡散または混合は生起しない。

さらにまた、本発明による方式は従来技術に比較してさ
らに多くの利点を提供する。すなわち、たとえば反応中
におけるマ）　ＩＪックス層の圧縮のような追加の機械
的操作により、混合の改善および反応速度の増加が達成
できる；この試験方式は個別の試験帯域について異なる
マトリックスまたは異なって作られたマトリックスの使
用が可能である；評価を目によるばかりでなく、また測
光により実施できる；操作は手でおよび機械的手段によ
り実施できる；およびマトリックスの使用は物質および
液体の試験装置にｌＦ確に供給することを可能にし、そ
して取り扱いが容易である。

従って、本発明による装置は従来開示された多層乾式法
の場合に得られる利０点（試薬の不安）・・　７ 定な溶液を要しない、ビ波ット操作工程が不必要である
、そして数個の試験帯域を要しない）を有し、しかもさ
らに、反応の全体的進行が拡故に依存せｔ’、にって相
当する水性法の場合におけるように、いずれか望みの−
やり方で左右でき、中断させることもできる３、可能な
モンユラー組立原則が試験帯域および全試験装置のＷ　
ｋＡな取替えを可能にする。

本発明の試験方式′の基本は試薬および試料の支持体と
しておよびまた反応空間とし７て用いらＪ（、分離媒体
として作用し、そしてできるかぎり完全にしかもいずれ
の場合も再現しうる様相で浴液を可逆的に放出できる、
口■撓性で弾性の吸、′を剤材料よりなるマトリックス
にある。この７トリツクスは特定門の試験液体を元金に
吸収し、それ自体の中に均一に分散でき、しかもこの：
ｌ；゛を貯蔵でき、たとえば僅かに必剰の減１ｆ−を」
Ｉね月１した場合および（または）適当な機械重加ハユ
トに、できるかきり完全にこの一；−を放出することが
できる；　ｑ：、の方法は所望により反包できる。さら
にまた、このマトリックスは適当な機械的および化学的
安定性を有しなければならない。本明細書において、可
撓性および弾性とは、マトリックスが外部条件が同じま
まである場合に、支持容器をその支持のために必要とせ
ずに一定の空間および形を占有することを意味するもの
と理解されるべきであるすなわち、圧力の適用によりこ
の占有している空間および形状を可逆的に変更できるも
のであるべきである。マトリックスは１片、数片または
相互に自由であるかまたは結合しており、たとえば結合
または架橋結合により結合しており、その全部または大
部分が適当な要件を満たしている大多数のセグメントよ
りなることができる。

適当なマトリックス材料は天然または合成海綿状および
発泡体状の多孔質物質、たとえば線種の原料の開放細胞
形発泡体および複合発泡体、およびまたマイクロカプセ
ル、顆粒または適当に弾性にされている吸着剤物質より
なるその他の形状の物品である。これらの中で、開放細
胞形ウレタンフオーム、特にポリエステルフオームおよ
び常温フオームが好ましい。しかしながら、さらにまた
ＳＨ基含有フオームのような特殊フオームも、ＳＨ基を
必要とする酵素を用いる場合にマトリックスとして使用
でき、また＆：Ｌ　１１で見る評価の場合には透明重合
体も使＃１１できる。

これらの物質の圧縮に対する硬度は約２〜口ＩＫＰａの
範囲内にあるべきであり、’ｌ　ＫＰａ以１・“のＩＩ
−縮に対する硬度を有するものは貧弱な機械的＜’＋−
’ｔ’↓しか示さず、他方、ｌＱ　ＫＰａ以」−のもの
は液体の放出に過度の高圧を必要とする。単位型ｈ１″
は（受用できる物′Ｌ（１に対し明白な作用をりえない
、。

市場で人手できるフォー〕、のいくつかは酵素に対する
強力な阻害作用を示ず；この場合には本・尾明の実施に
従い操作する間に顕著な濁りを生じさせることができる
。（７かし２ながら、−・般に、この阻害作用は複合試
薬の使用により完全に排除できる。さらにまた、適当な
予備処理によりさらに改善することもできる。他方、酵
素を阻害するマトリックスは液体中の酵素の動的測定に
特に有利であることが証明できる１、すなわち、必要な
試薬を含有するマトリックスに被験液体を含浸１２、実
際の測定反応を生起させなたとえば吸着性手段により、
カプセル封入により、または化学的方法により実施でき
る。この形式で、異なる反応条件、たとえば異なるｐＨ
値または相互干渉を生じる試薬を有する一直列に連結さ
れる数帯域を連結することができる。含侵および親液化
による適用が不可能である場合に、物質はまた液体形で
、たとえばマ）　ＩＪソックス中包含させることにより
、準備しておくこともできる。

物質を重合体系支持材料上に化学的方法により不動化さ
せるだめの各種の可能な手段は文献から既知である。列
挙できる例として、官能性基を有する支持体に結合させ
る方法またはグルタルアルデヒド、アクリルアミド等に
より交差結合させる方法がある。低分子量物質はポリウ
レタン１オーム、特にいわゆる常温フオーム十に、）リ
アジン法（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、　ｌＱ９．１３７（１
９６８）］と呼ばれる適当に適合する変法により、不動
化することもでべろ。この方法は０Ｈ１ＳＨまたはＮＦ
２基を有する大景の化合物をフオームに、フオームの約
１μｍｏｌ／ｍｇの結合収率で結合させることができる
。試薬それら自体と同様に、短鎖および長鎖誘導体、た
とえばデンプンまたはデキストランのような重合体に結
合した誘導体を結合させることも、またはこれらの誘７
．１７体をフオーム中に物理的手段によりまたは包摂に
より保有させることができることは勿論のことである。

反応容器は円錐形出口を有するンリンダーの形６：有す
ると好まｌ〜い；ビ被ット、試料装入用７リンジまたは
５〜：ダ１ｍｍの直径および１０〜１５０１１■１の長
さを有するいわゆる使い捨て７リンジの便用も好ましい
、１しかしながら、゛またキュベツト（浅い水ガメ）に
似た反応容器も使用できる、。

これらの反応容２：÷は透明または部分的に透明なノラ
スチックまたはガラスもしくは金属のような１−１１体
月料からなることができる。可撓性の透明プラスチック
が好ましい。

もう１つの特別の態様によれは、本発明の試験方式Ｆｉ
１個のマトリックスばかりでｋ（−・ヰた数個のマ）　
ＩＪラックス相互に上方に向って配置して有し、これら
のマトリックスはスベーザー材料、有孔中間ディスクま
たは反応容器のくびれのような液体に対し透過性の手段
により相互に分離されている。これらの手段および中間
ディスクの孔の寸法は分析を受ける液体が個別のマドＩ
Ｊツクス帯域間に運ばれると、流動および拡散機作に影
響を及ぼすことができる。中間ディスクは、特別の圧力
を加えると、取りはすしのできるような様式で反応容器
内に装備できる。

反応容器が個別のマ）　ＩＪラック間でくびれている場
合には、これらのくびれ部分を外部からの加圧により横
側から封鎖できる；この間にマトリックスが同様に圧縮
されると、液体が排出され、圧力を放出するとフオーム
により完全に再吸収される。この圧縮操・作は有孔プラ
ンジャーを押すことにより実施することもできる。

図面は本発明による装置の例を図解式に示すものである
。この図示された具体例は狭域部２が狭くなっている、
キューにツト形の反応容ン：号１．１、りなる、、　３
　＆：ｉ本試験方式の人示帯域寸たは反応容器の外部で
評価される液体用の受容域のとちらかである。試薬で含
浸されたマトリック×ＩＩよ中間ディスク５により相Ｈ
に分離さオ（ている；上方の層６Ｑ：［分配層であり、
ぞ［７てクラ／ツヤ−は７で示されている。。

本発明の方θモｒ［本発明による装置を用いて、＋Ｉｙ
　！、！ｉＪ試料を反応容器の上方のマトリックスに慣
用１））適用手段を通（７て適用することにより行なう
、稀釈に安する溶剤もまた同時に加える１、液’、に　
ＩＩ／）試料がこのマトリックス層の偶・（・ｋ中に試
料とのｑ′１なる接触による毛細管作用により吸収さ、
！１うることに勿、１ｉｌｉｉのことである３、このＪ
Ｊ法Ｑ−ｊ、縦比、谷イｇの」−刃部を、適当に設計−
４″ることに、Ｌす、Ａ−とえは特定客ｈ；゛を保有す
る室を形１）にすることにより、促進さ騒ることかでき
る。第１のマｉ・リノクス層の（−に追加の分配Ｉ１．
′・′；を設置することもでき、これは、たとえばＰ紙
の層よりなることができる。、被験溶液はかく１−て適
用前または適用後に稀釈できる。次いで、操作をさらに
的ちに実施できるし、また反応容器を貯蔵しておくこと
もできる。

一定の反応時間の後に、第１のマトリックス層をそのだ
めの適当な装置、たとえばシランジャーにより圧縮する
。この間に、圧力はマトリックスは圧縮されるが、中間
ディスクがそのｆ＼ｒ置にとどまるように調整する。こ
れはマトリックス中に含まれる液体を第２のマトリック
スに移送することを確実にする。前記のマトリックスの
性質はこの場合に、個別のマ）　ＩＪソックス間流速を
封じる。脱タンパク質、全血の成分の分離、同族酵素の
分離、免疫反応、特異的沈殿または複合体の形成、もし
くは酵素的まだは化学的決定反応のような異なる部分反
応がこのやり方で相互に別々に実施できる。さらにまた
、適当な中間層により、２つの帯域間に物質を保有する
こともできる。これらの中間層はまたフオーム、前処理
したフオームまだは紙もしくはその他の吸収性材料から
作られたフィルタ一層よりなることができる。

被験液体を１つの帯域から別の帯域に移送することは必
須である、３定量的移送が好ましいが、便用するマドＩ
Ｊックス材料から達成はできない、）通常、液体の約２
〜１５％がマトリックスにより引き１トめられる。しか
しながら、この・之゛−センデージは使用されるマトリ
ックスについて１ｆ現−Ｃき、従って一定因数として評
価に組人ねる。

評価はそれ自体慣用のやり方で全ての慣用１のツノ法に
より行なう４、光学的またｉｔ反射測定式評１曲が好ま
しい。

（最後の）マトリックスを顛過しだ後の反応溶液は反応
容器内の測定（！ルに達し、反応容器内で評価される１
、１７かしながら、反応溶液を反応容器の外部に位置す
る測定セルに移し、そこ−（１１イ価を行なうこともで
きる。、シかしながら、慣別の表示反応もまた、たとえ
ば気体拡散を経る表示または電気化学的手段による測定
のように実施できる。

本発明による方法および試験方式は血液、血清または尿
の構成成分の測定に特に適しているので、被験液体とし
ては体液を原則として使用している。

本発明を次側によりさらに詳細に説明する。

例　　１ 血清試料の脱タンパク質 ディスク形セグメント（直径１５ｍｍ、高さ４　ｍｍ　
）をポリウレタン常温フオーム（Ｍｅｔｚｅｌｅｒ、　
Ｍｅ−ｍｍｉｎｇｅｎ　、製のＲ６５９０フオーム）か
ら切り取る。

これらのセグメントの中央にトリクロル酢酸の溶液（２
モル／１）５０μｔを適用することにより、セグメント
を含浸し、これらが５ＸＩＯモ／ｌ、σ）トリクロル酢
酸含有量を有するまで乾燥させる。

このやり方で作成したマトリックスセグメントの各々を
一連の１０１使い捨てシリンジの１個に装入する。異な
って一定の量のグルコースヲ含有する血清（５，５ｍｆ
／ｄｌタン・ξり質１含量）の試料Ｉｎ　ｔｔＬを各セ
グメントの中央に加える。水１．１ｔｔｔｌで含浸され
、シリンジのプランジャーに固定サレ＊＄リウレタンボ
リエステルフォーム（Ｍｅ−ｔｚｏｌｅｒ製のＭｌ６（
１６０フオーノ、）よりなる−′ト１ノンクスセグメン
ｌ−（直径１５　ｒｒｖｎ　、高さｌｔｉ　ａｍ　）　
％）次ンこ各々についてプランジャーと一系行Ｖこ−１
−力４ら装入しそれが停市するまで加圧−する。タン・
ζり’ｐｉ　；′ｔ　［Ｍｌ　（ビューレット法）およ
Ｃ）′り゛ルコースＪイ１″２４．　（グツじ！−スー
プヒトロタ゛ナーーピ法）を、圧力により流出した総溶
液につし）て、次Ａ：　Ｉ／こ４ｔ’Ｔ＝い決定する： Ｃ＝　　Ｆ　　ｘ　　ｌ’； （人中Ｅは３６５　ｎｍで４１１１定した吸尤１隻であ
る）。

囚３＆　Ｆは稀釈、ブラ／り値ち・よびり゛ルコースＪ
）−、／ｌ−リツクスにおける損失を考慮［、たもσ）
で、標〜二溶液を用い計一連の試験で７１０であること
かし古い出さえ［だ１゜ グルコース（ｍｑ／　１００　ｒｔｔｅ　）　　　タン
パク質Ｃｆ／１００ｍ１２０　　　　　　　１９　　　
　　　　　５．５　　　　　　　０．１３４　　　　　
　　３２　　　　　　　　５．５　　　　　　０５０　
　　　　　　５２　　　　　　　　５．５　　　　　　
０．２７０　　　　　　　７４　　　　　　　　５．５
　　　　　　０．１１００　　　　　　　９７　　　　
　　　　５．５　　　　　　０．１１４１　　　　　　
１３５　　　　　　　　５．５　　　　　　０１６７　
　　　　　１７４　　　　　　　　５．５　　　　　　
０．１２５０　　　　　　２４５　　　　　　　　５．
５．　　　　　０．１５００　　　　　　４７８　　　
　　　　　５．５　　　　　　　０．２これらの数値は
脱タンパク質が成功していることおよびグルコース値が
満足な正確度で導入された濃度を再生していることを示
している。

例　　２ グルコースの測定 シリンダー状マトリックスセグメント（偵径１５Ｉｌ！
ＩＩ！、高さ１６　ｍｓ、　）をポリウレタン−ポリエ
ステルフオーム（Ｍｅｔｚｅｌｅｒ、　Ｍｅｍｍｉｎｇ
ｅｎ　、製のＭＥ６０６０フオーム）から切り取り、洗
浄抽出する。

乾燥したセグメントに次の成分を含有する溶液１．１ｍ
ｌ！で含浸させ、次いで親液化ノーる゛リン酸塩緩衝液
、ｐＨ７，６（’１．２モル／を塩化ナトリウム　　　
　　　　　　　（１，１５モル／ｌグルコースーデヒド
ロゲナーゼ　　　　　５ｋＵ／ｌムタロターゼ　　　　
　　　　０．１１　ｋＵ／１ＮＡＤ’　　　　　　　　
　　　　　　　　　　ｌミリモル／ｌエチレンジアミン
テトラアセテート　　　　　　２５ミリモル／ｌかくし
て調製［−だ反応マトリックスに各々が限定ｈ′：のグ
ルコース１０μｔを含有する一連の脱タノ・ンク質した
血清試料１’、１ｍｌを１０ｍｅ　Ｉ’ｕ’、い捨て／
リッジに吸着により加える。１０分後に、／リッジのシ
ラノジャーにＩＦ、力を加えることにより、溶液全部を
ギ；Ｌベット中にしぼり出す１、試亨１中のグルコース
濃度は：３６５ｎｍの吸光度（ｐ　＝　６．１７　）で
決定する。次の濃度のグルコース［ｍｇ／　、＋　（１
０Ｈｅ　）が検出された。これは慣用の測定法（同様の
試験条件を用いる手による試験）で得らハる結果に比較
して、良好な一致を示す： 手による試験　５０８０　１００　１６５２０（）　３
７０４３５５０（１マトリツク４　５０　７９　１０２
　１６１　２０４　３６５　４２７　４８５例　　３ タンパク質の測定 シリンダー状マトリックスセグメント（直径１２朋、高
さ８　ｗｖｓ　）をポリウレタン常温フオーム（Ｍｅｔ
Ｚｅｌｅｒ、ＩＭｅｍｍｉｎｇｅｎ　、製のＲ７２９５
フオーム）から切り取り、洗浄抽出し、乾燥させ、次い
で次の成分を含有する溶液０．５ｍＡ！を含浸させ、次
に親液化する。かくして調製された反応マトリックスに
、５　ａｔ使い捨てシリンジ中で各＄Ｉｆ　ｔｉｆ’、
のアルブミン含有試料の稀釈溶液（試料１（ｌ　ｐＬ−
）−水０．５ｍ／）を加える。マトリックスセグメント
中の溶液を１０分間の間に、マトリックス上の空間に数
回圧出し、次に有孔プランジャーを装入し、ついでプラ
ンジャーを数回押すことによりフオーム中に再吸収させ
る。シリンジの出口はこの間中尉じておく。シランジャ
ーを次に無孔プランジャーと取替え、溶液の全部をキュ
ベツト中に圧出し、この溶液の５４６　ｎｍにおける吸
光度を測定し、試薬溶液のブランク値と比較する。３出
発時試料中のタンパク質濃度が次式により測定できる（
Ｆ＝１５）： ２．０　　　　　２．１ ３．０　　　　　３．０ ５、（１４，９ （ｉ、０　　　　　　６．２ ８．０　　　　　７．９ １　（，１、０１（１、１ １２，０１１，８ １ｆリ　　４ クルタメートーオキザルアセテートートランスフ′ミナ
ーゼ（ＧＯＴ　）の測定 ノリンダー形マトリックスセクメント（ｌＩ′ｌ径２ｆ
ｌ　ｒｒｖｎ、高さ：Ｉｌ＋ｌＩ＃ｌ）をポリウレタン
−ポリエステル−１オーム（ＭｏｔｚｅｌｅｒＩＩＭｅ
ｍｍｉ、ｎｇｅｎ　ｌｌ製のＭＥ（ｉ（１（ｉ０フオー
ム）から切り取り、洗浄抽出する。

この乾燥させたセグメントの半分（セグメントｌ）に次
の成分を含有する溶液３　ｍｌを含浸し、次に親液化す
るニ リン酸塩緩衝液、ｐＨ７，４８０ミリモル／ｌＬ−アス
ノξラテート　　　　　　２ｏｏミリモル／１ＮＡＤＨ
Ｏ，１８ミリモル／ｌ アルブミン　　　　　　　　１２／１ ＬＤＨ≧１．２ｋＵ／ｚ ＭＤＨこ０．６ｋＵ／ｌ セグメントの残りの半分（セグメント■）に同様のやり
方で次の成分を含有する溶液３　ｙｚｌを加え、これら
を次に親液化する。一連の２０　ｍ１便い捨てシリンジ
の各々中で、セグメントＩを有孔ポリエチレン中間ディ
スク（直径２０１ＩＷ、厚さ２朋）、次にセグメント「
でおおう。標準血清の稀釈試料（異なる水準で調製され
たＧＯＴ活性を有する血清５００μを十生理食塩溶液２
１１１り２．５ａｇをセグメントＵＫ加え、５分後に、
シリンジのプランジャーを押し下げることＫよりセグメ
ン）ＩＩＫ移す。この操作で、適用される圧力はできる
だけ完全に移行させるが、中間ディスクの移動を生じさ
せないに十分ガだけにする３、さらに２分後に、溶液全
部をプランジャーの完全即し下げによりキュベツト中に
圧出し、３３．ｉ　ｎｆｆ１での吸光曲線を記録する。

被験試料の酵素濃度はイ；ｔられた曲線の勾配から算出
できる（　Ｆ’　＝　１．１７１　）　：２．９　　　
３．２ ５、；う　　　　　　　５．（） １４　　　　　　　　Ｉ４ ２：（２１ ・ｌ（１３８ ５７５８ ７−１７６ １０９１１’１ １４３　　　　　　　１４０ 例　　５ 脱タンパクとグルコースの測定 グルコースの？１ｌｌＩ定用のセグメント（例２）お、
Ｌひ脱タンパク用セグメント（例１）をＩ（ｌ　ｔｘｅ
使の吸光度（４００〜６０００ｍ　）を測定することに
よ　　、１す、評価を行なう。例２の結果と同様の結果
が得られる。

例　　７ 脱タンパク質およびグルコースの目による測定１０　ｍ
ｌ使い捨てシリンジ中で膜タンパク質用セグメント（例
１）をグルコース測定用セグメント（例６）の上におき
、これらは各場合に、数個の孔を有するポリエチレンデ
ィスク（直径１５期、厚さ２Ｍ）により分離する。一定
量のグルコースを含有する一連の血清試料（タンパク質
含有量５．５■／ｄ／り１０μｔをトリクロル酢酸を充
填したマトリックスの各々の中央に適用する。

この膜タンパク質化された試料を次に例５と同様に、す
すぎ用溶液と一緒にグルコース測定域に移し、さらに２
〜３分後に、ジアホラーゼ／テトラゾリウム塩セグメン
トに移す。さらに１０分後に、色比較表を用いて目によ
り、まだは圧出された溶液の吸光度（５７８ｎｍ）によ
り、評価を行なう。例５の結果と同様の結果が得られる
。

【図面の簡単な説明】

図面は本発明による装置の代表例を図解式に小すもので
ある。 １・・・反応容器 ２・パ狭域部 ：３・・・キュベツト 、１・・・マトリックス ５・・・中間ディスク ６・・」一方図 ７・・・プランジャー

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）試薬を含浸した圧縮可能なマトリックスを用いる
   液体の構成成分を測定する試験方式であって、少なくと
   も１種の含浸マトリックスを含有する反応容器、好まし
   くは円筒状の反応容器と被験液体を吸収させた後に、こ
   のマトリックスを圧縮させて、反応生成物を放出させる
   機構ト侑することを特徴とする試験方式。 （２）数個のマトリックスが液体透過性の機構により相
   、互に分離されて、上下に配置されている特許請求の範
   囲第１項の試験方式。 （３）反応容器がピペットまだは注射用シリンジの形を
   有することを特徴とする特許請求の範囲第１項の試験方
   式。 （４）液体に対し透過性の機構が反応容器の絞り中間デ
   ィスク又はスイース材料である特許請求の範囲第１〜第
   ３各項のいずれかに記載の試験方式。 （５）　　マトリックスがディスクの形を有する特許請
   求の範囲第１〜第４各項のいずれかに記載の試験方式。 （６）　マトリックスが種々の試薬で含浸された数個の
   セグメントよりなる特許請求の範囲第１〜第５各項のい
   ずれかに記載の試験方式。 （力　好ましくはＰ紙よりなる分配層が少なくとも１つ
   のマトリックス上に配置されている特許請求の範囲第１
   〜第６各項のいずれかに記・１反の試験方式。 （８）　　最後のマトリックスから流出する液体を受容
   するために使用される反応容器の箇所がインジケーター
   域を形成している特許請求の範囲第１〜第７各項のいず
   れかに記載の試験方式。 （９）被験液体を好ましくは円筒形の反応界５に含有さ
   れたマトリックスに適用し、次いで反応生成物をマトリ
   ックスの圧縮によりマトリツクスから分離し、次にこれ
   を、直接にまたは含浸されたマトリックスを１回もしく
   はそれ以上さらに通過させた後に測定することを特徴と
   する試薬で含浸された圧縮可能なマトリックスを使用す
   る液体の構成成分を測定する方法。 （１０）　　マトリックスの圧縮を円筒形反応容器のシ
   ランジャーまだはシリンダーの圧力により行なう特許請
   求の範囲第９項の方法。 （１１）流通を異なる様相で含浸された数個のマトリッ
   クスに連続的に通して行なう特許請求の範囲第９項また
   は第１θ項の方法。 （１２１測定を反応容器中に存在し、最後のマトリック
   スの通過後に生成する液体について行なう特許請求の範
   囲第８項〜第１１項のいずれか１項の方法。