CS248032B2

CS248032B2 - Determination method of substances in liquids and aid to perform this method

Info

Publication number: CS248032B2
Application number: CS826525A
Authority: CS
Inventors: Roland Helger; Bertold Limbach
Original assignee: Merck Patent Gmbh
Priority date: 1981-09-17
Filing date: 1982-09-09
Publication date: 1987-01-15
Also published as: DD204164A5; DE3137014A1; ZA826768B; DE3262156D1; EP0075184B1; JPS5862561A; JPH0321070B2; EP0075184A1; IL66808A0

Abstract

1. A test system for estimating the constituents of liquids using compressible matrices impregnated with reagents, characterised in that it contains at least one impregnated compressible matrix in a reaction vessel and a device by means of which, after absorbing the liquid to be investigated, the matrix is compressed so as to release the reaction product.

Description

.Vynález se týká způsobu určování látek' v kapalinách, zejména v tělních tekutinách, například glukózy v krevním séru, a pomůcky k provádění tohoto· způsobu na bázi stlačitelné impregnované matrice.The invention relates to a method for determining substances in liquids, in particular body fluids, for example blood glucose, and to a device for carrying out this method based on a compressible impregnated matrix.

Určování složek v komplexních systémech, obzvláště biologických kapalin, vyžaduje přesně stanovené provedení pokusu, přičemž vzorek se zkoušenou látkou postupuje různými reakčními postupy. Přitom je časový okamžik přidávání reagencií, které se mají smíchat, různý podle použité metody a množství vzorku. Měrný signál, který se má po uplynutí reakce vyhodnotit a který je charakteristický pro metodu a látku, která se má stanovit, vede konečně ke zjištění koncentrace, hledané látky. Podle složitosti takových postupů byla doposud vyzkoušena řada různých způsobů, které by vedly k optimální spolehlivosti, jednoduchosti a hospodárnosti. Především v klinické chemii byly vyvinuty jako následek velice vysokého, počtu analýz metody, které umožňují ' provedení více stanovení pokud · možno jednoduchým způsobem, a v krátkém čase. Toho se jednak dosáhne použitím mechanizovaných analytických systémů, jednak připravením nezbytných reakčních činidel a reakčních směsí v předem připravené formě. Přitom se používají především analytické systémy, při kterých' se vzorky manuálně nebo zcela mechanizovaně smíchají s reakčními roztoky ze zásobní nádrže. Připravení roztoků, s eventuálně potřebnou předpřípravou vzorku, jakož kontrolou a čištěním dávkovacího a mísícího systému, má však za následek četné pracovní úseky a možné zdroje chyb. Obzvláště poměrně malá stálost některých analytických látek v roztoku vyžaduje velice často výměnu nespotřebovaných roztoků. Zkušební podmínky vyžadují vždy přesně reprodukovatelný přídavek různých objemů různých roztoků, což u automatizovaných systémů znemožňuje jednoduchou výměnu analytického způsobu.The determination of the components in complex systems, in particular biological fluids, requires a well-defined experiment, the sample and the test substance following various reaction procedures. The time of addition of the reagents to be mixed varies depending on the method used and the amount of sample. The measurement signal to be evaluated after the reaction, which is characteristic of the method and the substance to be determined, finally leads to the concentration of the substance to be determined. Depending on the complexity of such processes, a number of different methods have been tried to date to optimize reliability, simplicity and economy. Especially in clinical chemistry, as a result of a very high number of method analyzes, multiple assays have been developed which allow multiple assays to be made in a simple manner and in a short time. This is achieved, on the one hand, by the use of mechanized analytical systems, and on the other hand, by preparing the necessary reagents and reaction mixtures in a preformed form. In particular, analytical systems are used in which the samples are manually or completely mechanically mixed with the reaction solutions from the storage tank. However, the preparation of solutions, possibly with the necessary sample pretreatment, as well as the control and cleaning of the dosing and mixing system, results in numerous work sections and possible sources of error. In particular, the relatively low stability of some analytes in solution requires very often the replacement of unused solutions. The test conditions always require a precisely reproducible addition of different volumes of different solutions, which makes automated systems difficult to exchange easily.

Popsané těžkosti · vedly k , vývoji různých zkušebních ,, systémů. Je , například známé, že se reakční činidla v pevné formě uvedou do· styku se zkoušeným · roztokem buď jako impregnované nosné materiály, jako· napuštěné filtrační papíry, nebo· , jako lyofilizáty v příslušné reakční nádobě; u těchto · systémů je jen ještě' zapotřebí připitetovat rozpouštědlo a zkoušený vzorek. Umístění různých lyofilizovaných reakčních činidel na různých místech dovoluje přitom · provedení po sobě jdoucích reakcí. Tyto systémy představují pro· zkušební provedení zjednodušení, avšak při přípravě příslušných reakčních nádob nástávají značné problémy. Především zůstává u těchto forem provedení nevýhoda společná pro všechny vodné systémy, že se nemůže provádět žádná separace nezbytná pro analýzu · tělesných tekutin a všechna reakční činidla přidávaná v průběhu analýzy se musí přidávat současně:The difficulties described have led to the development of various test systems. For example, it is known that the solid reagents are contacted with the test solution either as impregnated carrier materials, as impregnated filter papers, or as lyophilizates in the respective reaction vessel; in these systems, the solvent and test sample still need to be added. The location of the various lyophilized reagents at different locations allows successive reactions to be carried out. These systems represent a simplification for the test execution, but pose considerable problems in the preparation of the respective reaction vessels. First of all, in these embodiments, the disadvantage common to all aqueous systems is that no separation necessary for body fluid analysis can be performed and all reagents added during analysis must be added simultaneously:

Při tak zvaném suchém analytickém způsobu odpadá naproti tomu část tohoto· problému. · Přitom se zkoušený vzorek nanese na · savý nosič, který obsahuje v nejjednodušším případě v jediné vrstvě matrice všechna nezbytná reakční činidla v optimální koncentraci; tím odpadnou všechny jinak obvyklé pipetovací úseky. Kromě toho nepředstavuje vytvoření takového suchého systému žádný problém, pokud · se týká stálosti. Nevýhodou- tohoto jednostupňového · systému je jako u vodných způsobů, že chybí možnost přípravy a úpravy · vzorku, jakož i možnost vyřadit rušící látky.On the other hand, in the so-called dry analytical method, part of the problem is eliminated. In this case, the test sample is applied to an absorbent carrier which, in the simplest case, contains all the necessary reagents in an optimum concentration in a single layer of the matrix; this eliminates all otherwise usual pipetting sections. Furthermore, the formation of such a dry system poses no problem in terms of stability. The disadvantage of this one-stage system is that, as with aqueous processes, the possibility of sample preparation and treatment as well as the possibility of rejecting interfering substances is lacking.

Avšak také u zkušebních systémů s vícevrstevně uspořádanými suchými materiály, které mohou obsahovat například vrstvy pro · oddělení rušících látek, koncentrační zóny a různé reakční a uzavřené úseky, · je pohlcení a další průtok · zkoumané kapaliny a odtok z jednotlivých reakčních · úseků závislý na difúzi a kapilárním působení a tím prakticky není ani regulovatelný ani ovladatelný. Není možné reakci na určitém místě zastavit nebo ovlivnit dobu prodlení v reakční zóně.However, also in test systems with multi-layered dry materials, which may contain, for example, layers for separation of interfering substances, concentration zones and various reaction and closed sections, absorption and further flow rate of the test liquid and effluent from individual reaction sections are dependent on diffusion and capillary action, and thus practically neither controllable nor controllable. It is not possible to stop the reaction at a particular location or to affect the residence time in the reaction zone.

Z USA patentu č.· 3 917 453 je · známé zkušební zařízení, které obsahuje absorpční materiál k pohlcení zkoušeného roztoku a rovněž stlačitelnou vrstvu složenou z absorbentu, která slouží k dávkování a protékání zkoumané tekutiyn. Tato· vrstva je uspořádaná mezi dvěma krycími vrstvami, které obsahují nezbytná reakční činidla, a může reagovat se stanovenou látkou za tvorby barviva, které se kolorimetricky vyhodnotí. Toto· zařízení je však zatíženo, řadou nevýhod: není · možné kvantitativní stanovení, fotometrické vyhodnocení a automatizace; rovněž není možné pomocí tohoto· zařízení provádět reakce, které vyžadují více po sobě probíhajících reakčních stupňů, a eventuálně potřebné oddělení nežádoucích látek mezi dvěma reakčními zónami.U.S. Pat. No. 3,917,453 discloses a test device which comprises an absorbent material for absorbing the test solution as well as a compressible layer composed of an absorbent for dispensing and flowing the test fluid. This layer is arranged between two cover layers containing the necessary reagents and can react with the substance to form a colorant which is colorimetrically evaluated. However, this device is burdened with a number of disadvantages: quantitative determination, photometric evaluation and automation are not possible; it is also not possible by means of this apparatus to carry out reactions which require a plurality of successive reaction steps and possibly the separation of undesirable substances between the two reaction zones.

Úkolem vynálezu je vyvinout způsob určování látek v· kapalinách, zejména v tělních tekutinách a zařízení k provádění tohoto způsobu za odstranění výše uvedených nevýhod.SUMMARY OF THE INVENTION It is an object of the present invention to provide a method for the determination of substances in liquids, in particular body fluids, and an apparatus for carrying out the method, while avoiding the above disadvantages.

Tento úkol byl vyřešen tak, že se způsob určování látek v kapalinách provádí za · použití pomůcky, která sestává z válcové reakční nádoby obsahující alespoň jednu stlačitelnou matrici.This object has been achieved by a method for determining substances in liquids using a device consisting of a cylindrical reaction vessel containing at least one compressible matrix.

Tímto zařízením se může provádět jednoduché protlačování vzorku matricí bez ovlivňování difúzí a je ovladatelné jak manuálně, tak také automaticky.With this device, simple extrusion of the sample through the matrix can be performed without affecting the diffusion and is operable both manually and automatically.

Předmětem · vynálezu je způsob určování látek v kapalinách, zejména v tělních tekutinách, · např. glukózy v krevním séru, za použití stlačitelných matric impregnovaných reakčními činidly, jehož podstata spočívá v tom, že vyšetřovaný vzorek se nanese na matrici, uloženou v uzavřené reakční nádobě a impregnovanou reakčním činidlem, příslušným pro zjišťované látky, po uplynutí reakční doby se vzorek z matrice vytlačí a po případném následném průchodu nejméně jednou následující matricí, impregnovanou reakčním činidlem příslušným pro určení další zjišťované látky, např. proteinu, se vzorek opticky vyhodnotí.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention provides a method for determining substances in liquids, in particular body fluids, such as blood glucose, using compressible matrices impregnated with reagents, which comprises depositing the test sample on a matrix embedded in a sealed reaction vessel and the impregnated reagent for the test substances after the reaction time has elapsed, the sample is extruded from the matrix and after possible subsequent passage through at least one subsequent matrix impregnated with the reagent for determining the other test substance, e.g. protein, the sample is optically evaluated.

Dalším předmětem vynálezu je pomůcka к provádění způsobu na bázi stlačitelné impregnované matrice, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje nejméně jednu matrici impregnovanou reakčním činidlem pro určení příslušné látky ve vyšetřovaném vzorku, uloženou ve válcové reakční nádobě opatřené pístem.A further object of the invention is to provide a method for carrying out a method based on a compressible impregnated matrix comprising at least one matrix impregnated with a reagent for determining the respective substance in the sample under test, contained in a cylindrical reaction vessel equipped with a piston.

Pomůcka obsahuje matrice ve tvaru kotouče, které jsou od sebe odděleny vloženými děrovanými kotouči nebo zúžením reakční nádoby. Matrice sestává s výhodou ze dvou až deseti segmentů uložených na sobě. Alespoň nad jednou matricí je uložena rozváděči vrstva.The device comprises disk-shaped matrices which are separated from each other by interposed perforated disks or by narrowing the reaction vessel. The matrix preferably consists of two to ten segments stacked on top of each other. At least one matrix is provided with a distribution layer.

Neočekávaně se ukázalo, že pomůcka podle vynálezu umožňuje použití a účinnost analytických metod a také reakčních činidel stejným způsobem jako srovnatelný systém ve vodném roztoku, kromě toho však spojuje nebo nahrazuje další způsoby předúpravy vzorku, jako odstředění, filtraci nebo chromatografické dělení.Unexpectedly, the device of the invention has been shown to allow the use and efficacy of analytical methods as well as reagents in the same manner as a comparable aqueous solution system, but additionally joins or replaces other sample pretreatment methods such as centrifugation, filtration or chromatographic separation.

Pomůcka pro analýzu kapalin se může rozčlenit do jednotlivých úseků, ve kterých od sebe odděleně probíhají všechny reakce, dělení a stanovení nezbytná pro analýzu. Při analýze tělních tekutin jsou například zahrnuty kromě reakčního úseku nezbytného pro vlastní stanovení látky a případně kontrolního úseku také připravené úseky, např. к odstranění bílkovin nebo к oddělení rušících látek. Přitom je druh, počet a uspořádání jednotlivých úseků volně kombinovatelný. Například při speciálních stanoveních odpadají oddělené přípravné úseky nebo se může spojit v jednom společném přípravném úseku více různých reakčních úseků.The liquid analysis aid may be subdivided into compartments in which all reactions, divisions and determinations necessary for analysis are separated. For example, in the analysis of body fluids, in addition to the reaction section necessary for the actual determination of the substance and possibly the control section, prepared sections are also included, for example to remove proteins or to remove interfering substances. The type, number and arrangement of the individual sections can be freely combined. For example, in special assays separate preparation sections are omitted or several different reaction sections can be combined in one common preparation section.

U pomůcky podle vynálezu jsou všechna reakční činidla potřebná к reakci od počátku stejnoměrně lyofilizována, imobilizována nebo jiným způsobem obsažena v celé matrici. Nanesení zkoušené kapaliny vede к přímému promísení reakčních složek v celé oblasti matrice. Jednotlivé reakční úseky jsou uvnitř reakčního systému jasně odděleny, to znamená, že nenastává žádná předčasná difúze nebo promíchání. Kromě toho má pomůcka podle vynálezu oproti stavu techniky řadu dalších výhod. Další mechanickou manipulací, jako stlačením vrstvy matrice během reakce, se může například dosáhnout zlepšení promíchání a zvýšení reakční rychlosti; pomůcka umožňuje použití různých a rozdílně připravených matric pro jednotlivé zkušební úseky; vyhodnocení není jen vizuální, nýbrž je také možné fotometrické vyhodnocení; provedení se může uskutečnit manuálně a mechanizovaně; použití matrice umožňuje přesné dávkování a snadnou manipulaci látek a kapalin ve zkušebním systému.In the device of the invention, all the reagents required for the reaction are uniformly lyophilized, immobilized or otherwise contained throughout the matrix from the outset. The application of the test liquid leads to a direct mixing of the reactants throughout the entire region of the matrix. The individual reaction sections are clearly separated within the reaction system, i.e. there is no premature diffusion or mixing. In addition, the device according to the invention has a number of other advantages over the prior art. By further mechanical manipulation, such as pressing the matrix layer during the reaction, for example, an improvement in mixing and an increase in the reaction rate can be achieved; the device allows the use of different and differently prepared matrices for individual test sections; evaluation is not only visual, but photometric evaluation is also possible; the embodiment may be performed manually and mechanically; the use of a matrix allows accurate dosing and easy handling of substances and liquids in the test system.

Pomůcka podle vynálezu má tak výhody uvedené při popsaném vícevrstvém suchém způsobu, jako žádné nestabilní reagenční roztoky, žádné pipetování, více zkušebních úseků, avšak kromě toho není celkový protlačený reakční roztok závislý na difúzi, a proto je možné jako u příslušných vodných systémů postup ovlivnit a libovolně přerušit. Možný stavebnicový princip umožňuje snadnou výměnu dílčích úseků a celkových zkušebních systémů. Základem pomůcky je matrice z ohebného, elastického savého materiálu, která slouží jako nosič pro reakční činidla a vzorek a jako reakční prostor, funguje jako dělicí prostředí a umožňuje pokud možno dokonalé, v každém případě však reprodukovatelné a reverzibilní uvolnění roztoků. Tato matrice je schopna do sebe dokonale a stejnoměrně pojmout a nahromadit určitý objem zkoušené kapaliny, aby se tato mohla například při nastaveném nepatrném přetlaku nebo podtlaku nebo příslušném mechanickém tlaku pokud možno úplně odstranit; tento postup je libovolně opakovatelný. Matrice musí kromě toho mít dostatečnou mechanickou a chemickou stabilitu. Pod pojmem ohebná a elastická matrice se v této souvislosti rozumí prostorová a tvarová výplň konstantní při stálých vnějších podmínkách, aniž by byla potřebná nádoba; může se reversibilně měnit pomocí tlaku. Matrice může sestávat z jednoho kusu, z více segmentů nebo z více volných nebo dodatečně dohromady spojených částí, například slepením nebo zesítěním, které vyhovují zcela nebo z převážné části příslušným požadavkům.The device according to the invention thus has the advantages mentioned in the multilayer dry process described, such as no unstable reagent solutions, no pipetting, more test sections, but in addition, the total extruded reaction solution is not diffusion dependent and therefore, as with the respective aqueous systems, arbitrarily interrupt. The possible modular principle allows for easy replacement of partial sections and overall test systems. The device is based on a matrix of flexible, elastic absorbent material, which serves as a carrier for the reagents and the sample and as the reaction space, acts as a separating medium and allows perfect, but in any case reproducible and reversible release of solutions. This matrix is capable of perfectly and uniformly collecting and accumulating a certain volume of the test liquid, so that, for example, it can be completely removed at a slight overpressure or underpressure or at the appropriate mechanical pressure; this procedure is arbitrarily repeatable. In addition, the matrix must have sufficient mechanical and chemical stability. The term flexible and elastic matrix in this context means a space and shape filler constant under constant external conditions without the need for a container; it can be reversibly changed by pressure. The matrix may consist of a single piece, multiple segments or multiple loose or additionally connected parts, for example by gluing or crosslinking, which satisfy all or most of the relevant requirements.

Vhodné materiály pro matrici jsou přírodní a syntetické houbovité a pěnové, porézní látky, například pěnové hmoty s otevřenými dutinkami a sendvičové pěnové hmoty různého původu a elastické mikrokapsle, granuláty nebo jiná tvarová tělíska ze savých materiálů. К těmto se s výhodou počítají polyuretanové pěny s otevřenými dutinkami, obzvláště polyesterové a studené pěny. Kromě toho jsou použitelné jako matrice také speciální pěnové hmoty, jako pěnové hmoty obsahující SH-skupiny při použití enzymů, které SH-skupiny potřebují, ale také transparentní polymery pro vizuální vyhodnocení.Suitable matrix materials are natural and synthetic sponge and foam, porous materials, for example open-cell foam and sandwich foam of various origins, and elastic microcapsules, granules or other shaped bodies of absorbent materials. These preferably include open-cell polyurethane foams, especially polyester and cold foams. In addition, special foams, such as foams containing SH-groups, can be used as matrices, using enzymes that need SH-groups, but also transparent polymers for visual evaluation.

Stlačitelnost těchto materiálů se může pohybovat v rozmezí 2 až 10 kPa, přičemž materiály se stlačitelíností pod 2 kPa mají špatné mechanické vlastnosti, materiály nad 10 kPa vyžadují při protlačení kapaliny příliš velký tlak. Objemová hmotnost nemá na použitelný materiál žádný podstatný vliv.The compressibility of these materials can range from 2 to 10 kPa, with materials with a compressibility below 2 kPa having poor mechanical properties, materials above 10 kPa require too high a pressure to push the liquid through. The bulk density has no significant effect on the usable material.

Pěnové hmoty dostupné v obchodě vykazují z části silnou enzymatickou inhibici, u některých může dojít během provádění způsobu podle vynálezu к silnému zákalu.Commercially available foams show a strong enzymatic inhibition, some of which may cause severe turbidity during the process of the invention.

4 803 ’ 24,803 ’2

8ř8ř

Inhibice se - však neohá zpravidla - úplně eliminovat přídavkem - komplexotvorných látek. Kromě toho - se mohou získat další zlepšení příslušnou - předúpravou. Pro kinetické stanovení enzymů v- kapalinách se mohou naproti tomu pokládat matrice s enzymatickou inhibicí za - obzvláště - výhodné. Je - možné napustit matrice, které obsahují - potřebná reakční činidla, zkoušenou tekutinou, přičemž - - vlastní reakce bud - vůbec neprobíhá, nebo pouze pomalu. Při protlačení - celkového roztoku z - matrice do zkušebního úseku zůstanou nežádoucí inhibiční látky v - matrici a - kinetické- stanovení je možné při poměrně nepatrné - počáteční - extínkci.Inhibition, however, is not usually complete by the addition of complexing agents. In addition, further improvements may be obtained by appropriate pre-treatment. On the other hand, enzymatic inhibition matrices can be considered to be particularly advantageous for the kinetic determination of enzymes in liquids. It is possible to impregnate matrices which contain - the required reagents - with the test liquid, whereby the reaction itself either does not proceed at all or only slowly. By pushing the - total solution from - the matrix into the test section, undesirable inhibitory substances remain in the - matrix and - the kinetic determination is possible with a relatively small - initial - extinction.

Nanesení reakčních činidel - na - matrici - se zpravidla provádí lyofílizací - segmentů z - pěnové - látky napuštěným - roztokem - - reakčních činidel. Toto· má - kromě - velké stability nanesených látek také výhodu - v tom, že je potřebné - pouze nepatrné - množství - reakčních činidel. Bylo neočekávaně zjištěno, že - při oddělování proteinu ze - zkoumaného'- - vzorku pomocí koagulačního - činidla, jako - kyseliny - trichloroctové, - je zapotřebí - desetinásobně menší množství koagulačního- činidla než - u běžných srážecích - metod. Tím^s se odstraní značné tvoření soli - podmíněné - potřebnou neutralizací - a mohou se zapojit za sebou různé zkušební - úseky- podle vynálezu.The deposition of the reagents - on - the matrix - is generally carried out by lyophilizing - the segments of - the - foam - with the impregnated - solution - of the reagents. In addition to the great stability of the deposited substances, this also has the advantage that only a small amount of reagents is required. It has unexpectedly been found that, when separating the protein from the sample of interest by means of a coagulation agent such as trichloroacetic acid, 10 times less coagulation agent is required than in conventional precipitation methods. This is removed ^to a substantial salt formation - conditional - requires neutralization - and can engage behind different test - úseky- invention.

Obecně se - nanesou - na - matrici všechna reakční činidla potřebná pro funkci příslušného- úseku, odděleně pro každý úsek. Ve speciálních případech, například - přl· nesnášenlivosti reakčních - činidel - nebo současném průběhu více reakcí s různými - reakčními činidly, může - být- také - účelné - nanášet potřebná reakční činidla odděleně od sebe. To se provádí s - výhodou - tok, - že - se - celá matrice v tomto úseku složí z jednotlivých segmentů, které obsahují různé-' látky. Matricové segmenty mohou - mít libovolnou - formu a- velikost, mohou například sestávat zkruhových segmentů, kotoučů - nebo - kuliček, které jsou na - sobě nezávislé, nebo mohou také být opojeny před; nebo - po vnesení - do reakční nádoby vhodným prostředkem- jako slepením nebo mechanickým- připevněním.In general, all the reagents required for the function of the respective compartment are applied to the matrix separately for each compartment. In special cases, such as, for example, the incompatibility of reagents, or the simultaneous running of multiple reactions with different reagents, it may also be expedient to apply the necessary reagents separately. This is done with the advantage that the entire matrix in this section is composed of individual segments containing different substances. The matrix segments may - be of any form and - size, for example they may consist of circular segments, disks - or - spheres that are independent of one another, or may also be intoxicated before; or - after introduction - into the reaction vessel by a suitable means such as gluing or mechanical fastening.

V určitých případech je nutné, aby - bylo zaručeno, aby byl zkoušený roztok dokonale protlačen z jednoho úseku do dalšího, avšak- bez reakčních - činidel rušících v - dalším - úseku. Toto - vyžaduje- mezizapojení příslušně preparované matrice nebo - mobilizaci reakčních činidel, která se- může provádět například adsorpcí, zapouzdřením nebo- chemickou metodou. Tímto způsobem je možné kopulovat více ze sebou- zapojených úseků s velice rozdílnými reakčními podmínkami, například rozdílnými hodnotami pH- nebo s navzájem se rušícími reakčními činidly. Také v případech; ve kterých není možné nanášení napouštěním nebo - lyofilizací, se mohou - látky připravit v kapalné formě, - například nasátím - do - matrice.In certain cases, it is necessary to - ensure that the test solution is completely extruded from one section to the next, but without reagents interfering with the - other section. This - requires the interconnection of the appropriately prepared matrix or - the mobilization of the reagents, which can be carried out, for example, by adsorption, encapsulation or a chemical method. In this way, it is possible to couple several of the interconnected sections with very different reaction conditions, for example different pH-values or with interfering reagents. Also in cases; in which it is not possible to impregnate or lyophilize, the substances can be prepared in liquid form, for example by suction, into a matrix.

Nejrůznější - možnosti imobilizace - - látek na polymerních nosičích chemickou metodou jsou známé - z literatury. Například může - být uvedena vazba na nosič funkčními skupinami nebo- zesítění glutardialdehydem, - akrylamidem atd. Také jsou - možné imobilizace nízkomolekulárních látek - na polyurethanových - pěnách, obzvláště na tak zvaných studených pěnách, příslušně adaptovanou variací tak- - zvaného - triazinového- způsobu, viz Biochem. - J. 109, 137- (1968). - Tento způsob - umožňuje - vázat velký počet sloučenin s OH-, . SH- nebo- NH₂-skupinami na - pěnové hmoty s hustotou - vazeb cca 1 ^mol/ml pěnové hmoty. Kromě reakčních činidel je také samozřejmě - možné- vázat - ' deriváty s krátkým a dlouhým řetězcem, připojené například - na polymery - jako - škrob nebo dextran nebo je zadržovat v pěnové hmotě fyzikálně nebo pohlcením.A variety of - the possibilities of immobilization - of substances on polymer carriers by chemical methods are known from the literature. For example, binding to the support by functional groups or cross-linking with glutardialdehyde, acrylamide, etc. can also be mentioned. see Biochem. J. 109: 137- (1968). This method allows the coupling of a large number of compounds with OH-. SH- or NH ₂ -groups of foam having a bond density of about 1 µmol / ml of foam. In addition to the reagents, it is of course also possible to bind short and long chain derivatives attached, for example, to polymers, such as starch or dextran, or to retain them in the foam physically or by absorption.

Reakční nádoba - má - s výhodou formu válce s kónickým výtokem: s výhodou se použijí pipety, injekční stříkačky - nebo- tak zvané jednocestné - stříkačky o průměru 5 - až 30 - mm, a - to· - o délce 10 - až 150 - mm. Mohou se však také použít kyvetové reakční nádoby. Tyto- reakční nádoby mohou sestávat z průhledné nebo - částečně průhledné plastické hmoty - nebo pevných - materiálů, jako skla - nebo- kovu. Výhodné jsou ohebné průhledné- plastické - hmoty.The reaction vessel - preferably - is in the form of a conical outlet cylinder: preferably pipettes, syringes - or so-called one-way - syringes with a diameter of 5-30 mm, and a length of 10-150, are used. mm. However, cuvette reaction vessels may also be used. These reaction vessels may consist of transparent or - partially transparent plastic - or solid - materials such as glass - or - metal. Flexible transparent plastics are preferred.

Podle výhodného způsobu provedení obsahuje pomůcka nejen jednu matrici, nýbrž více nad sebou uspořádaných matric, které jsou - od sebe odděleny zařízením propustným pro - kapalinu jako- můstkem, mezikotoučem opatřeným otvory nebo - zúžením reakční nádoby. Formou tohoto uspořádání - -a velikostí -otvorů- v mezikotouči se nechají ovlivnit - průtokové - a difúzní procesy při převádění - analyzované kapaliny mezi - jednotlivými - úseky matrice. Mezikotouče se mohou do reakční nádoby vestavět tak, aby při- nastavení určitého tlaku byly posuvné.According to a preferred embodiment, the device comprises not only one matrix, but a plurality of superimposed matrices which are separated from one another by a liquid-permeable device as a bridge, an intermediate disk provided with openings, or by a narrowing of the reaction vessel. By means of this arrangement - and the size of the orifices - in the intermediate disk, it is possible to influence the - flow - and diffusion processes in the transfer - of the analyzed liquid between - the individual - sections of the matrix. The intermediate disks can be built into the reaction vessel so that they are displaceable when a certain pressure is set.

Jestliže je reakční nádoba mezi - jednotlivými matricemi zúžena, mohou se tyto zvenčí nařízeným tlakem - uzavřít; přitom se matrice rovněž stlačí, takže kapalina vystoupí z pěnové hmoty a při uvolnění se opět zcela nasaje do pěnové - hmoty. Tento postup je také proveditelný stlačením pístu s otvory.If the reaction vessel is narrowed between - the individual matrices, these can be closed from the outside by the prescribed pressure -; in this case, the matrix is also compressed so that the liquid exits the foam and when released it is completely sucked into the foam again. This procedure is also feasible by compressing the piston with the bores.

Pomůcka podle vynálezu je schematicky znázorněna na přiloženém výkrese.The device according to the invention is shown schematically in the attached drawing.

Znázorněná forma provedení sestává z reakční nádoby 1, která vyúsťuje v zúžení 2, které je vytvořeno jako kyveta, a indikačního úseku zkušebního systému nebo sběrné nádrže 3 pro tekutinu vyhodnocovanou vně reakční nádoby. Matrice 4- impregnované reakčními - činidly jsou - od - sebe odděleny mezikotouči 5; nad matricemi se nachází rozdělovači vrstva 6 a - píst 7.The illustrated embodiment consists of a reaction vessel 1 which results in a constriction 2, which is designed as a cuvette, and an indication section of a test system or a liquid collection tank 3 to be evaluated outside the reaction vessel. The matrices 4 impregnated with the reagents are separated from each other by the intermediate discs 5; above the matrices there is a distribution layer 6 and a piston 7.

Způsob určování- látek v kapalinách za použití - pomůcky podle vynálezu se provádí tak, že se na- horní matrici- reakční nádoby nanese obvyklým nanášecím - systémem zkoušený - vzorek; přitom se také- _ přidá ke - zře248032 dění nezbytné rozpouštědlo. Přirozeně je také možné jednoduchým kontaktem se zkoušenou kapalinou tuto odsát kapilárním působením do úseku této matricové vrstvy. Tento postup se může usnadnit vhodnou konstrukcí horní části reakční nádoby, například vytvořením komory mající určitý objem. Tím je možné vestavění další rozdělovači vrstvy nad první vrstvou matrice, která může například sestávat z vrstvy filtračního papíru. Přitom se může zkoumaný roztok před nebo po nanesení zředit. Postup se může potom provádět buď hned, nebo se může reakční nádoba uskladnit.The method for determining substances in liquids using the device according to the invention is carried out by applying a sample to the upper matrix of the reaction vessel by a conventional application system; the necessary solvent is also added to the reaction. Naturally, it is also possible by simple contact with the test liquid to aspirate this into the section of the matrix layer by capillary action. This process can be facilitated by suitable construction of the upper portion of the reaction vessel, for example by providing a chamber having a certain volume. This makes it possible to incorporate a further distribution layer above the first matrix layer, which may for example consist of a filter paper layer. The test solution can be diluted before or after application. The process may then be carried out immediately or the reaction vessel may be stored.

Po stanovené reakční době se první vrstva matrice vhodným zařízením, například pístem stlačí. Tlak se nastaví přitom tak, aby se matrice stlačila a mezikotouče si zachovaly svou polohu. Tím se zajistí, aby se tekutina obsažená v matrici přenesla na druhou matrici. Vlastnosti popsané matrice mají za následek, že těsnění mezi jednotlivými matricemi je zbytečné.After a determined reaction time, the first matrix layer is compressed by a suitable device, for example a piston. The pressure is adjusted so that the die is compressed and the intermediate discs maintain their position. This ensures that the liquid contained in the matrix is transferred to the second matrix. The properties of the matrix described make sealing between the matrices unnecessary.

Různé dílčí reakce se mohou tímto způsobem provádět od sebe odděleně, jako odstranění bílkoviny, oddělení složek krve, oddělení izoenzymů, imunní reakce, specifická srážení nebo komplexotvorná srážení, enzymatické nebo chemické identifikační reakce. Kromě toho je také možné zadržet látky pomocí příslušných mezivrstev mezi dvěma úseky. Tyto mezi vrstvy mohou rovněž sestávat z pěnové látky, předem upravené pěnové látky nebo také z filtračních vrstev z papíru nebo jiného savého materiálu.The various partial reactions can be carried out separately in this way, such as protein removal, separation of blood components, isoenzyme separation, immune reaction, specific precipitation or complexing precipitation, enzymatic or chemical identification reactions. In addition, it is also possible to retain the substances by means of appropriate interlayers between two sections. These intermediate layers may also consist of a foam, a pre-treated foam or also of filter layers of paper or other absorbent material.

Je podstatné, aby se zkoušená tekutina přemísťovala reprodukovatelně z jednoho úseku do druhého. Výhodné by bylo kvantitativní převádění, čehož se však na základě použitých materiálů matrice nemůže dosáhnout. Normálně se zadrží 2 až 15 °/o tekutiny z matrice. Toto procento je však pro použitý materiál matrice reprodukovatelně a použije se jako konstantní faktor při vyhodnocování.It is essential that the test fluid is moved reproducibly from one section to another. Quantitative conversion would be preferred, but this cannot be achieved based on the matrix materials used. Normally, 2 to 15% of fluid from the matrix is retained. However, this percentage is reproducible for the matrix material used and is used as a constant factor in the evaluation.

Vyhodnocení se provádí obvyklým způsobem podle všech dostupných metod. Výhodné jsou optické a reflektometrické metody vyhodnocení.The evaluation is carried out in the usual way according to all available methods. Optical and reflectometric evaluation methods are preferred.

Po průchodu poslední vrstvy matrice se reakční roztok dostane do měrného článku uvnitř reakční nádoby a vyhodnocuje se uvnitř reakční nádoby. Je však také možné přemístit reakční roztok do měrného článku nacházející se vně reakční nádoby a vyhodnocení provádět zde. Mohou se však také provádět speciálně kontrolní reakce, jako například kontrola difúze plynu, nebo elektro chemická stanovení.After passing through the last matrix layer, the reaction solution enters the measuring cell inside the reaction vessel and is evaluated inside the reaction vessel. However, it is also possible to transfer the reaction solution to a measuring cell outside the reaction vessel and to evaluate here. However, special control reactions such as gas diffusion control or electro-chemical assays may also be performed.

Jako zkoušené kapaliny hlavně byly použity tělní tekutiny, protože způsob a pomůcka podle vynálezu jsou zejména vhodné ke stanovení složek krve, séra nebo moči.Body fluids were mainly used as test fluids since the method and device of the invention are particularly suitable for determining blood, serum or urine components.

Vynález bude blíže objasněn v následujících příkladech.The following examples illustrate the invention.

PřikladlHe did

Odstranění bílkovin ze vzorku séraRemoval of proteins from serum samples

Z polyurethanové studené pěny se vyvrtají kotoučovité segmenty o 0 15 mm a výšce 4 mm. Tyto se napustí 50 μΐ roztoku trichloroctové kyseliny 2 moly/1 nanesením do středu segmentu a tak dlouho se suší, až mají obsah trichloroctové kyseliny 5 x 10⁵molu. Každý takto připravený matricový segment se zavede do jednocestné stříkačky o obsahu 10 ml. Do středu segmentu se přidá 10 μΐ vzorku séra s 5,5 mg/dl proteinového obsahu, který obsahuje stanovené množství glukózy. Potom se zavede shora společně s pístem matricový segment z polyurethanové studené pěny o 0 15 mm a výšce 16 mm připevněný na pístu stříkačky, který byl napuštěn 1,1 ml vody a protlačí se až к dorazu. Ve vytlačeném celkovém roztoku se stanoví obsah proteinu pomocí biuretového způsobu a obsah glukózy pomocí způsobu glukóza — dehydrogenóza následujícím způsobem:Disk segments of 0 15 mm and a height of 4 mm are drilled from cold polyurethane foam. They are impregnated with 50 μΐ of 2 mol / l trichloroacetic acid solution by application to the center of the segment and dried until they have a trichloroacetic acid content of 5 x 10 ⁵ moles. Each matrix segment thus prepared is introduced into a 10 ml one-way syringe. A 10 μΐ serum sample containing 5.5 mg / dl protein content containing the specified amount of glucose is added to the center of the segment. Next, a matrix segment of 15 mm thick and 16 mm high polyurethane cold foam, mounted on a syringe plunger, which was soaked with 1.1 ml of water, was introduced from above together with the plunger and pushed to the stop. In the extruded total solution, the protein content is determined by the biuret method and the glucose content by the glucose-dehydrogenose method as follows:

C = F . E přičemž E je extinkce měřená při 365 mm. Faktor F se vztahuje ke zředění, slepé hodotě a ztrátě glukózy v matrici a byl stanoven řadou pokusů se standardními roztoky jako 710.C = F. E where E is the extinction measured at 365 mm. Factor F refers to the dilution, blank, and glucose loss in the matrix and was determined by a series of standard solution experiments such as 710.

Glukóza (mg/100 ml) Protein (g/100 ml)Glucose (mg / 100 ml) Protein (g / 100 ml)

nasazeno deployed nalezeno found nasazeno deployed nalezeno found 20 20 May 19 19 Dec 5,5 5.5 0,1 0.1 34 34 32 32 5,5 5.5 0 0 50 50 52 52 5,5 5.5 0,2 0.2 70 70 74 74 5,5 5.5 0,1 0.1 100 100 ALIGN! 97 97 5,5 5.5 0,1 0.1 141 141 135 135 5,5 5.5 0 0 167 167 174 174 5,5 5.5 0,1 0.1 250 250 245 245 5,5 5.5 0,1 0.1 500 500 478 478 5,5 5.5 0,2 0.2

4 8 0' 3 24 8 0 '3 1

Hodnoty ukazují, . že bylo dosaženo odstranění bílkovin a hodnoty glukózy reprodukují použité koncentrace s uspokojivou přesností.The values show:. that the protein removal has been achieved and the glucose values reproduce the concentrations used with satisfactory accuracy.

Příklad 2Example 2

Stanovení glukózyDetermination of glucose

Z polyurethanpolýesteroVé pěny se vyvrtají cylindrické matricové segmenty . o 0 15 milimetrů a výšce 16 mm a promyjí se. Usušené segmenty se napustí 1,1 ml roztoku, který obsahovalCylindrical matrix segments are drilled from polyurethane / polyester foam. 15 mm and 16 mm high and washed. The dried segments were impregnated with 1.1 ml of the solution they contained

0,2 molu/1 fosforečnanového pufru, pH 7,6,0.2 mol / l phosphate buffer, pH 7.6,

0,15 molu/1 chloridu sodného, . kU/1 glukózy-dehydrogenázy, manální test 50 80 matricový systém 50 790.15 mol / l sodium chloride,. kU / 1 glucose dehydrogenase, manual test 50 80 matrix system 50 79

Příklad 3Example 3

Stanovení proteinuProtein determination

Z polyurethanové studené pěny se vyvrtají válcové matricové segmenty o 0 12 mm a výšce · 8 mm, promyjí se, suší a potom se napustí 0',5 ml roztoku, který obsahovalCylindrical matrix segments of 0.12 mm and a height of 8 mm are drilled from the polyurethane cold foam, washed, dried and then soaked with 0.5 ml of a solution containing

m.molů/1 vínanu sodnodraseíného, mmolů/1 jodidu draselného, mmolů/1 síranu mědi · am.moles / 1 sodium sodium tartrate, mmol / 1 potassium iodide, mmol / 1 copper sulphate · and

200 mmolů/1 hydroxidů sodného· a potom se lyofilizuje. K takto připraveným reakčním matricím v Smilílítrové jednocestné stříkačce se přidá zředěný . zkoušený roztok obsahující různá množství . albuminu, 10 μΐ vzorku + 0,5 ml vody. Zavedením a opakovaným stlačením pístu opatřeného se během .10 minut několikrát vytlačí roztok . v matricovém segmentu do prostoru pod · matrici .a opět se nasaje do pěnové hmoty. Během této doby byl . výtok stříkačky utěsněn. Potom se · vymění píst za píst bez otvorů, celkový roztok se vytlačí do kyvety a měří se extinkce roztoku při 546 nm proti slepámu pokusu reakčmho roztoku. Přepočítáním se nechá . zjistit proteinová koncentrace · výchozího, vzorku při F = 15.200 mmol / l sodium hydroxide and then lyophilized. To the reaction matrices thus prepared are added dilute in a 1 ml syringe. test solution containing different amounts. albumin, 10 μΐ sample + 0.5 ml water. The solution is dispensed several times within 10 minutes by inserting and repeatedly pressing the piston provided. in the matrix segment into the space below the matrix and again sucked into the foam. During this time he was. syringe outlet sealed. The piston is then replaced with a piston without holes, the total solution is expelled into the cuvette and the extinction of the solution at 546 nm is measured against the blank of the reaction solution. Allow recalculation. determine the protein concentration of the initial sample at F = 15.

Protein (g/100 ml)Protein (g / 100 ml)

Nasazeno. ZjištěnoDeployed. Detected

2,0 2,0 2,1 2.1 3,0 3.0 3,0 3.0 5,0 5.0 4,9 4.9 6,0 6.0 6,2 6.2 8,0 8.0 7,9 7.9 10,0 10.0 10,1 10.1 12,0 ' 12,0 ' 11,8 11.8

0,11 kU/1 mutarotázy, mmolu/1 nikotmamidadenindinukleo- tidu, mmolů/1 éthylendiamintetraacetátu a potom se lyofilizuje. K takto· připraveným reakčním matricím v lOmililitrové jednocestné skříkačce se přidá nasátím 1,1 ml vzorku séra s odstraněnou bílkovinou, který obsahoval 10 μΐ určitého množství glukózy. Po 10 minutách se vytlačí celkový roztok stlačením · stříkačkového pístu do kyvety. . Při extinkci 365 nm (F · = 647] se stanoví koncentrace glukózy ve vzorku. Srovnáním s výsledky, které se získaly obvyklým způsobem stanovení jako mannálním testem při analogických zkušebních podmínkách, byly zjištěny následující koncentrace glukózy v mg/100 ml, které ukazují dobrou shodu:0.11 kU / l mutarotase, mmol / l nicotinamide adenine dinucleotide, mmol / l ethylenediaminetetraacetate and then lyophilized. To the reaction matrices thus prepared in a 10 ml one-way box are added by aspirating 1.1 ml of a protein-removed serum sample containing 10 μΐ of some glucose. After 10 minutes, the total solution is expelled by pressing the syringe plunger into the cuvette. . The glucose concentration in the sample is determined at an extinction of 365 nm (F · = 647), and the following glucose concentrations in mg / 100 ml are shown by comparison with results obtained by a conventional method as a manual test under analogous test conditions. :

100 165 · 200 370 435 500100,165 · 200,370,435,500

102 161 204 365 427 485102 161 204 365 427 485

Příklad 4Example 4

Stanovení glutamátoxalacetáttransaminázyDetermination of glutamatoxalacetate transaminase

Z polyu^ethanpolýesterové pěny se vyvrtají válcové matricové . segmenty o'. 0 20 mm a výšce 30 mm a promyjí se. Usušené segmenty se z poloviny jako segmenty . I napustí roztokem, který obsahoval .Cylindrical matrix matrices are drilled from the polyethane / polyester foam. o 'segments. 20 mm and a height of 30 mm and washed. Dried segments are half as segments. I impregnated with the solution it contained.

mmolů/1 fosforečnanového pufru, pH 7,4,mmol / l phosphate buffer, pH 7.4,

200 . mmolů/1 L-asparátu,200 mmol / L of L-aspartate,

0,18 mmolu/1 NADH redukovaného nikotinamidadenindinukleotidu, g/1 albuminu, gl,2 kU/1 nikotinamidadenindinukleotidu a §0,6 kU/1 malátdehydrogenázy a . lyofilizuje . se. Příslušným způsobem se přidá k .druhé polovině segmentů označených segment II 3 ml roztoku mmolů/1 fosfátového pufru, pH 7,4, mmolů/1 oxoglutarátu a mmolů/1 ethylendiamintetraacetátu a lyofilizuje se. Ve 20mililitrové jednocestné stříkačce se převrství segment I polyethylenovým mezikotoučem o 0 20 mm a tloušťce 2 mm s provrtanými děrami a ségmentem II. Na tento . se dá 2,5 ml zředěného· vzorku standardního séra obsahujícího. . ' 500 μΐ séra s různými nastavenými aktivitami. glutamátoxalacetáttransaminázy + 2 ml . fyziologického roztoku a . po 5 minutách .se . stlačením stnkačkbvého pístu převede ná segment I. Přitom se vyvine jen takový tlak, aby se dosáhlo pokud možno úplného převedení, ale0.18 mmol / l NADH reduced nicotinamide adenine dinucleotide, g / l albumin, gl, 2 kU / l nicotinamide adenine dinucleotide and §0.6 kU / l malate dehydrogenase a. lyophilizes. se. Accordingly, 3 ml of a solution of mmol / l phosphate buffer, pH 7.4, mmol / l oxoglutarate and mmol / l ethylenediaminetetraacetate are added to the other half of the segments labeled segment II and lyophilized. In a 20 ml one-way syringe, segment I is overlaid with a 0 20 mm polyethylene intermediate disk of 2 mm thickness, with holes and segment II drilled. On this . Dilute 2.5 ml of a diluted standard serum sample. . '500 μΐ of serum with different set activities. glutamate oxalate acetate transaminase + 2 ml. saline; and. after 5 minutes .se. by pressing the plunger, it converts the segment I. In doing so, only the pressure is exerted so as to achieve as complete a transfer as possible, but

4 8 O 3 2 nikoliv posun mezikotouče. Po dalších 2 minutách se úplným stlačením pístu vytlačí celkový roztok do kyvety a zaznamená se průběh extinkce při 334 nm. Ze stoupání získaných křivek se nechá vypočítat enzymatická koncentrace zkoušeného vzorku při F — 1 471.4 8 O 3 2 not the intermediate disc shift. After a further 2 minutes, the total solution is expelled into the cuvette by fully depressing the plunger and the extinction at 334 nm is recorded. From the slope of the curves obtained, the enzymatic concentration of the test sample at F-1 471 is calculated.

Glutamátoxalacetáttransamináza (U/l)Glutamatoxalacetate transaminase (U / l)

Nasazeno^ NahrazenoDeployed ^ Replaced

3,23.2

5,05.0

111111

140140

2,92.9

5,35.3

74 109 14374

Příklad 5Example 5

Odstranění bílkoviny a stanovení glukózyProtein removal and glucose determination

V lOmililitrové jednocestné stříkačce se oddělí několikanásobně provrtaným polyethylenovým kotoučem o 0 15 mm a tloušťce 2 mm segment ke stanovení glukózy jako v příkladu 2 a nad ním se uspořádá segment k odstranění bílkoviny podle příkladuIn a 10 ml one-way syringe, a 15 mm thick, 2 mm thick polyethylene disk, and a 2 mm thick glucose segment, as described in Example 2, are separated and a protein removal segment according to Example 2 is arranged above.

1. Ke stanovení obsahu glukózy sér se dá na horní segment impregnovaný kyselinou trichlóroctovou 10 ,μ! vzorku séra s různým určitým množstvím glukózy při obsahu proteinu 5,5 mgldl, jak popsáno v příkladu 1, a stlačí se 1,1 ml vody na segment ke stanovení glukózy. Přitom se vyvine pouze takový tlak, aby se dosáhlo pokud možno· úplného převedení celkového roztoku, avšak aby se neposunul mezikotouč. Po 10 minu-, tách se stlačením pístu až k dorazu vytlačí celkový roztok do kyvety. Stanovení koncentrace glukózy se provádí měřením extinkce při 365 nm. Získá se analogicky podle příkladu 2 lineární měřicí rozsah 20 až >500- mg/dl glukózy.1. To determine the serum glucose content, add 10 .mu.l to the upper segment impregnated with trichloroacetic acid. a serum sample with varying specific amounts of glucose at a protein content of 5.5 mg / dl as described in Example 1 and compressed with 1.1 ml of water per segment for glucose determination. In this case, only a pressure is exerted so as to achieve a complete transfer of the total solution as far as possible, but not to shift the intermediate disk. After 10 minutes, pressing the plunger all the way into the cuvette is pushed to the stop. The glucose concentration is determined by measuring extinction at 365 nm. Analogously to Example 2, a linear measuring range of 20 to 500 mg / dl of glucose is obtained.

Příklad 6Example 6

Stanovení glukózyDetermination of glucose

Z polyurethanové polyesterové pěny se vyvrtají válcové matricové segmenty o průměru 15 mm a výšce 16 mm a promyjí se.Cylindrical matrix segments of 15 mm diameter and 16 mm height are drilled from the polyurethane polyester foam and washed.

Vysušené segmenty se napustí 1 ml roztoku, který obsahoval ' mmolů/1 fosforečnanového pufru,The dried segments are impregnated with 1 ml of a solution containing mmol / l of phosphate buffer,

PH 7,5,PH 7,5,

0,2 kU/1 diaforázy a0.2 kU / l diaphorase a

0,6 m‘molu/1 3-(4-jódfenyl )-2-( 4-nitrof enylj -5-f enyl-2H-tetrazoliumchloridu a potom se lyofilizuje. Takto připravené reakční matrice se v lOmililitrové . jednocestné stříkačce, rozdělené několikrát provrtaným polyethylenovým kotoučem, převrství příslušnými . segmenty reakční matrice ke stanovení glukózy (srov. příklad 2). Na poslední segment se dá analogicky podle příkladu 2 1,1 ml vzorku séra s odstraněnou bílkovinou a celkový roztok se převede po až 3 minutách do- segmentu diafórázaltetrazoliová sůl. Po·- 10 minutách se provádí hodnocení pomocí vizuálního- barevného srovnání matrice napuštěné vzorkem s barevnou srovnávací tabulkou nebo měřením extinkce vytlačeného roztoku při 400 až 600 nm. Získaly se analogické výsledky jako v příkladu ' 2.0.6 mmol / l 3- (4-iodophenyl) -2- (4-nitrophenyl) -5-phenyl-2H-tetrazolium chloride and then lyophilized The reaction matrices thus prepared were distributed in a 10 ml one-way syringe, distributed several times. with a polyethylene disk drilled, overlaid with the respective segments of the glucose reaction reaction matrix (cf. Example 2) 1.1 ml of the protein sample was removed to the last segment analogously to Example 2 and transferred to the segment after up to 3 minutes. After 10 minutes, evaluation is performed by visual-color comparison of the sample-impregnated matrix with a color comparison table or by measuring the extinction of the extruded solution at 400-600 nm, to obtain analogous results to Example 2.

Příklad 7Example 7

V lOmililitrové jednocestné stříkačce, rozdělené několikrát provrtaným polyethylenovým kotoučem o 0 15 mm . a tloušťce 2 milimetry, se navrství nad sebou od shora dolů segmenty ' k odstraněni bílkoviny podle příkladu 1 a stanovení glukózy podle příkladu 6. Na . matrici napuštěnou kyselinou trichloroctovoú se nanese do- středu 10 μ1 vzorku séra s 5,5 mg/dl obsahu proteinu, který obsahuje určité množství glukózy. Analogicky podle příkladu 5 se vzorek š odstraněnou bílkovinou potom převede společně s proplachovacím roztokem doúseku stanovení glukózy a po dalších 2 až minutách do segmentu diaforázaltetrazoliová sůl. Po dalších 10 minutách se provede vyhodnocení vizuálně pomocí barevné srovnávací tabulky nebo měřením extinkce vytlačeného roztoku při 578 nm. Získaly se analogické výsledky jako . v příkladu 5.In a 10 ml one-way syringe, divided several times through a 15 mm diameter polyethylene disc. and a thickness of 2 millimeters, is stacked from top to bottom with segments to remove the protein of Example 1 and to determine the glucose of Example 6. Na. Apply a trichloroacetic acid-impregnated matrix to the center of a 10 μ1 serum sample containing 5,5 mg / dl of protein content containing a certain amount of glucose. Analogously to Example 5, the protein removed sample is then transferred together with the flushing solution into the glucose determination region and after a further 2 to minutes into the diaphorazaltetrazolium salt segment. After a further 10 minutes, evaluation is performed visually using a color comparison table or by measuring the extinction of the extruded solution at 578 nm. Analogous results were obtained as. in Example 5.

Claims

A method for determining substances in liquids, in particular body fluids, for example blood glucose, by. the use of compressible matrices impregnated with reagents, characterized in that the sample to be examined is deposited on a matrix stored in a closed reaction vessel and impregnated with the reagent appropriate for the substances to be examined, after expiry of the reaction time the sample is extruded from the matrix; The sample is optically evaluated by a matrix impregnated with a reagent to determine the other substance to be detected, for example a protein.

2. Method according to claim 1, characterized in that the extrusion of the sample from the matrix is carried out by pressure of the piston in the vessel.

3. A method as claimed in claim 1, wherein during the reaction time the sample is repeatedly sucked into the matrix and extruded from the matrix.

4. The method of claim 1, wherein the protein is removed from the sample to be examined.

5. The method of claim 4, wherein the protein is squeezed through a matrix impregnated with a coagulating reagent.

6. A device according to claim 1, based on a compressible impregnated matrix, characterized in that at least one matrix (4) impregnated with the reagent for. the determination of the substance in the sample to be examined is stored in a cylindrical reaction vessel (1) provided with a piston (7).

Device according to claim 6, characterized in that the dies (4) are separated from each other by interposed perforated disks (5).

8. A device according to claim 6, characterized in that:

OF THE INVENTION that the matrices (4) are separated from each other by narrowing the reaction vessel (1).

Device according to Claims 6 to 8, characterized in that the dies (4) are disc-shaped.

Device according to Claims 6 to 9, characterized in that the matrix (4) consists of two to ten segments stacked on top of each other.

Device according to Claims 6 to 10, characterized in that a distribution layer is arranged above at least one matrix (4).

12. A device according to claim 1 for the determination of serum glucose based on a compressible impregnated matrix. characterized in that the matrix is impregnated with a reagent of phosphate buffer, sodium chloride, glucose dehydrogenase, mutarotase, nicotinamide adenine dinucleotide and ethylenediaminetetraacetate.

Device according to claim 12, characterized in that a perforated disc (5) is placed under the matrix (4) and below it a matrix (4) impregnated with a solution of phosphate buffer, diaphorase and 3- [4-iodophenyl) -2- (4). 5-phenyl-2H-tetrazolium chloride.

14. A protein determination device according to claim 6, wherein the matrix is impregnated with a solution of potassium sodium tartrate, potassium iodide, copper sulfate and sodium hydroxide.

15. A device according to claim 6 for the determination of glutamate oxalate acetate transaminase, characterized in that a matrix impregnated with a phosphate solution is stored in the reaction vessel. buffer, oxoglutarate and ethylenediaminetetraacetate, and underneath is a matrix impregnated with phosphate buffer, L-aspartate, reduced nicotinamide adenine dinucleotide, albumin, lactate dehydrogenase and malate dehydrogenase.