JPH02245199A - アイソザイム混合物から１つの酵素を測定する方法及びテスト担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は妨害アイソザイム活性害し、阻害されていない
酵素を測定することにより液体試料中のアイソザイム混
合物から１つの酵素を測足するための方法に関する。

本発明のもう１つの課題は妨害アイソザイムを阻害し、
阻害されていない酵素を測足することにより液体試料中
のアイソザイム混合物から１つの酵素ン迅速に測定する
ための、試料供給域、評価域並びに多数のテスト層を有
するテスト担体である。

更に、本発明は液体試料中のアイソザイム混合物から１
つの酵素ン測足するためのテスト担体の使用を記載する
。

従来の技術 酵素活性の測定は医学的診断学の重要な分野である。こ
うして、例えば、血液、血清、血漿、尿、髄液、唾液又
は十二指腸液のよウナ体液中の一定の酵素の活性の調査
は疾患があるかどうかの判定のために用いられる。この
ための例はラクテート−デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、
クレアチン−キナーゼ（ＣＫ）又はアミラーゼである。

自体酵素ではない液体内容物の測定もしばしば、内容物
の濃度に関する尺度を形成する酵素活性ケ同様に最終的
に測定する反応により実施される。そのよつＴｘ物質は
化学反応及び酵素反応の組合わせにより、又は酵素反応
単独により測定される。免疫学的測定もしばしば酵素活
性測足で終結する。この例は、例えばいわゆる１酵素イ
ムノアツセイ”　（ＥＩＡ、）であり、ここでは酵素は
物質の標識のために使用され、この測定した活性は最終
的には測定すべき物質濃度に関する尺度である。標識酵
素としてはしばしばアルカリホスファ久−，ゼ、ガラク
トシダーゼ又はペルオキシダーゼが使用される。

酵素測定における問題は誤差を生ぜしめるアイソザイム
のために生じる誤差のある又は診断学的に証言能力のな
い測定である。アイソザイムとは同一基質を同一生成物
に変換するが、異なる一次構造（アミノ酸配列）及び／
又は異なるコンホーメーション欠示す酵素である。その
よ５　Ｔｘ酵累は同じ又は同−源に由来する。しかし、
これらは異なる起−一日米することもある。

器官の疾患を知るためには、しばしば異なる器官からは
その器官に特異的な酵素が体液中に達するという知識乞
利用する。器官の疾患においては、通常体液、例えば血
液、血清、血漿、尿、髄、唾液又は十二指腸液中に通常
分布する器官特異的酵素が正常な量に対して変化した濃
度で存在することがある。アイソザイムは明らかな診断
学的証言をしばしば誤まらせる。こうして、例えば乳酸
デヒトロゲナーぜ（ＬＤＨ）の筋肉（Ｍ）−及び心臓（
Ｈ）−型のアイソザイをが存在し、このうちのＨ４−型
だけが心筋硬塞の経過に関する証言を行なうことができ
る。

クレアチンキナーセ（ＣＫ　）には筋肉（ＭＭ）脳（Ｂ
Ｂ　）−及び心臓（ＭＢ’）−型のアイソザイムが公知
である。ＣＫ−ＭＢ一種のみ力Ｉ心臓診断学に重要であ
る。α−アミラーゼは膵臓（ｐ）−型として、および唾
ｉ　（Ｓ　）−型として存在する。膵臓の診断に重要な
のはｐ−α−アミラーゼである。

許されない。なぜならば内在酵素、すなわち試験すべき
試料液体中に存在する酵素がアイソザイム活性を示すた
めである。こうして、血液試料中に内在アルカリホスフ
ァターゼ活性及びペルオキシダーゼ活性がある場合、こ
れを相応するアイソザイム標識酵素に使用することはで
きない。しばしば標、識酵素として使用される、大腸菌
からのβ−ガラクトシグーゼにも、低いｐｋ−値で基質
を使用する際に特に妨害する、体液中のアイソザイムが
ある。

アイソザイム混合物から１つの酵素を検出するために、
−足の範囲で効果のある一足の配合物がある。ヨーロツ
ノξ特許出願第０１５０３０９号明細書中には唾液−ア
イソザイムを抗体により沈降させ、分離するか、又は固
定した抗体により唾液アイソザイムを試料から除去する
、唾液アミラーゼを伴なう膵臓アミラーゼの測定が提案
されている。どちらの場合にも分析を複雑にする分離工
程が必要である。この方法による唾液アミラーゼを伴な
う膵臓アミラーゼの測定のためにかかる時間は、特に試
料と阻害する抗体との時間のかかる恒温保持のために約
３０分間かかる。

クリニカル番ケミストリー（Ｃｌ　ｉｎｉｃａｌｃｈｅ
ｍｔｓｔｒｙ　）第２８巻、第１５２５〜１５２７頁（
１９８２年）は、唾液アミラーゼを伴なう膵臓アミラー
ゼの測定のために、妨害する唾液酵素を小麦の胚から単
離したインヒビターにより不活性化する方法を記載して
いる。この方法は均質な溶液中での測定を可能とするが
、高いアミラーゼ活性の溶液に関しては測定の前に希釈
することを推めている。更に、選択性は不十分である。

最適なインヒビター濃度においても唾液−酵素の活性の
約１３％が保持され、方膵臓の酵素の活性は約８１％に
減少する。挙げた文献中に記載された方法を実施するた
めの時間は約１０〜１５分間であり、この５ち５分間は
唾液酵素の阻害に使用される。

西独特許公開第３５００５２６号公報中にはモノクロー
ナル抗体が記載されており、このモノクローナル抗体は
均質浴液中で唾液アミラーゼを抑制し、膵臓アミラーゼ
には影響を与えない。唾液アミラーゼを伴なう膵臓アミ
ラーゼな測定するためのこの方法の実施のためには、試
料液体を唾液酵素を阻害する抗体と恒温保持し、その後
残ったアミラーゼ活性を測定する。妨害アイソザイムを
阻害するための恒温保持時間は１５分〜３０分間の間で
ある。

ドイツ特許公開第３５２５９２６号公報中には、唾液ア
ミラーゼの阻害のために２つの抗体を使用し、そのうち
の第１の抗体単独では９３％より少ない抑制が達せられ
、かつ第２の抗体は酵素に結合するが、５％より僅かな
抑制のみを達成する場合、モノクローナル抗体による唾
液−アイソザイムの阻害による唾液アミラーゼを伴なう
膵臓−アミラーゼの測定の際に、阻害のために必要な恒
温保持時間は著しく減少される、ということが記載され
ている。このようにして、唾液アミラーゼの阻害のため
の恒温保持時間は約５分間に短縮される。

前記文献は、試料を必要な試薬の溶液又は懸濁液とキュ
ベツト、小管又は相応する液体容器中で接触させる湿式
法だけを記載している。検査すべき試料に試薬を正確に
配量添加する必要性及びその他の場合により゛必要な工
程は十分に訓練された実験者を必要とし、かつそれ由に
、及び測定工程の間に作業が必要とされるので、人も時
間も集中的に必要である。これに対して担体結合テスト
は方法の実施に必要なすべての試薬を固体担体上に、検
査人が検査すべき試料を担体上に供給した後もはや試料
液に手を出す必要が全くないように配置する。クリニカ
ル・ケミストリー（Ｃ１１ｎｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ　　）、第３・１巻、第１０００頁、１９８５年
は担体結合アイソザイムテストに関する例を挙げている
。

そこではクレアチン・キナーゼＭを伴なうクレアチン・
キナーゼＢを測定することのできる薄膜要素が提案され
ている。この方法は妨害するアイソザイムタレアチン・
キナーゼＭの相応する抗体による阻害及び残ったクレア
チン・キナーゼ活性（これはクレアチン・キナーゼＢに
よる）測定にもとづく。この測定法に必要な試薬はテス
ト担体上に存在し、テスト担体上へり供給の後液体試料
と接触する。

このクレアチン・キナーゼ・アイソザイムテストは妨害
アイソザイムの阻害のために７分間の恒温保持時間を必
要とし、かつこれは全血で実施不可能である。

この担体結合アイソザイムテストの最適な変法はクリニ
カル・ケミストリー（Ｃ１ｒｎｆｃａｌＣｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ　）、第３２巻、第１１３０頁、１９８６年に記載
されている。測定法に必要な試薬の濃度の最適化により
妨害アイソザイムの阻害のための恒温保持時間を３．５
分間に短縮することができた。全体で、興味深い酵素を
測定するために５分より長い時間を必要とする。

従来の技術が示すように、妨害アイソザイムの阻害及び
阻害されていない酵素の測定による液体試料中のアイソ
ザイム混合物から１つの酵素を測定するための方法は公
知である。しかしながら、これらの方法は、試料構成分
、例えば妨害するアイソザイムの分離を部分的に必要と
し、高いアミラーゼ活性を有する非希釈試料又は全血に
は使用することができないという欠点を有している。従
来技術の一般的欠点は、もともとの測定反応を実施する
前に、妨害アイソザイムの抑制のために著しく長い恒温
保持時間を必要とするということである。従来、５分間
より短かい時間で終了するアイソザイムテストは全く知
られていない。近代的医学診断法にとっては、緊急の場
合の治療のために緊急に必要な判定をすぐさま行なうこ
とができるためにも、又は診療時間内に患者を診断し、
かつ相応する。

治療を実施することができろためにも、測定をできるだ
け迅速に実施するための努力がなされている。

発明が解決しようとする課題 従って、本発明の課題はアイソザイム混合物から１つの
酵素をできるだけ迅速に、いずれにしても５分間より短
かい時間で測定できる可能性を見い出すことである。こ
の測定はアイソザイムのための独立した分離工程を必要
と丁べぎではすく、かつできるだけ普遍的に非希釈の液
体試料、特に体液、例えば尿、唾液、髄液、十二指腸液
及び有利に血漿、血清及び全血で実施することができる
べきである。全血及び血漿試料又は血清試料は比較可能
な結果を提供すべきである。更に、このアイソザイム測
定はできるだけわずかな試料の量で実施することができ
るべきである。

課題を解決するための手段 この課題は特許請求項に詳細に特徴を示した要件により
解決する。

特に、この課題は妨害するアイソザイムの阻害及び阻害
されていない酵素の測定により液体試料中のアイソザイ
ム混合物から１つの酵素を測定するための方法により解
決し、この方法はアイソザイム混合物を、妨害アイソザ
イムを阻害することのできる１種又は複数種の物質と接
触させ、 この阻害物質を含有する試料を細孔性反応媒体中に導入
し、妨害酵素をそこで阻害し、かつ生じた液体中の阻害
されていない酵素の測定を実施する、 ことを特徴とする。

更に、この課題は試料供給域、評価域並びに多（のテス
ト層を有するテスト担体により解決し、このテスト担体
は 試料供給域中で粗孔性材料が妨害アイソザイムを阻＠す
ることのできる物質を１種又は複数種含有しており、 ここｖｃｍ孔性媒体が、粗孔性材料からの液体搬送を可
能とするように直接接触してｋつ、かつ 評価域中には阻害されていない酵素を特徴的なシグナル
により測定するために必要な物質を含有する１つ又は複
数の層が配置されてにつ、かつこれらの層は細孔性反応
媒体と液体移行を可能にする接触状態になるか又は細孔
性反応媒体とそのような接触状態にもたらされることの
できることを特徴とする。

この課題は液体試料中のアイソザイム混合物から１つの
酵素を測定するために前記のテスト担体を使用すること
により特に解決する。

本発明は、妨害アイソザイムを阻害し、阻害されていな
い酵素を測定することにより液体中のアイソザイム混合
物から１つの酵素を著しく迅速に測定することが、液体
試料（試料から誘導された液体も包含する）を妨害アイ
ソザイムに作用する物質と混合し、次いでこの物質を含
有する液体を、妨害アイソザイムの阻害が主に行なわれ
る細孔性反応媒体中に導入する場合に可能となるという
意外な発見に主に基づ（。この阻害は著しく短時間に、
概略１分より短時間で、終了する。引き続き、阻害され
ていなめ酵素の測定を公知法で行なうことができる。

液体試料としては原則的にアイソザイム混合物中に測定
すべき酵素を含有するすべての液体を使用することかで
きる。体液、例えば血液、血漿、血清、尿、髄液、唾液
又は十二指腸液が有利である。血液、血漿及び血清が特
に有利である。全血の使用の際には、試料と妨害アイソ
ザイムに作用する物質との接触の前に細胞性血液成分、
特に赤血球を除去することが多くの場合勧められる。体
液を試験すべき時、本発明方法を実施するためにこれを
希釈する必要はない。

ここで、阻害とは酵素活性の完全な抑制を意味する。本
発明にどいては完全な抑制とは９０％を越える、有利に
は９５％を越え□る阻害を意味する。すなわち、阻害す
べきアイソザイムは阻害の後、残留活性１０％、有利に
は５％を越えて示してはならない。

本発明方法のためには、アイソザイムの阻害のために前
記条件を満たし、更に測定すべき酵素の活性に本質的に
影響を与えないすべての物質を使用可能である。妨害ア
イソザイムを阻害交 する物質と測定すべき酵素との）差反応は有利に５％よ
り小さい。更に、本発明による方法に使用可能な阻害物
質は、阻害されていない酵素ノ測定にマイナスの影響を
与えるべきではない。

原則的には前記条件をみたすすべての阻害物質が本発明
方法に好適である。妨害アイソザイムに対する抗体が特
に好適である。モノクローナル抗体は特に特異的に阻害
に作用する。この種の抗体はすでに記載されているか、
又はその製造は専門家によく知られている。本発明の測
定法のためには抗体をそれ自体として、又はこれに相応
する阻害特性を有するフラグメントとして使用する。従
って、ゝ抗体“という概念にはここではフラグメントも
包含される。

唾液−α−アミラーゼを特異的に抑制するモノクローナ
ル抗体は西ドイツ国特許公開第３５００５２６号公報か
ら公知である。この抗体はＮＣＡＣＣ（Ｎａｔｉｏｎａ
ｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡｎｉｍａｌＣｅｌ
ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ；Ｐｏｒｔｏｎ　Ｄｏｗｎ、　ＧＢ
在）に寄託番号（９９Ｄ１２）８４１２２００３及び（
８９Ｅ２）８４１２２００４として寄託されている。こ
のよ５な抗体は本発明方法により唾液−α−アミラーゼ
の存在にＲいて膵臓−α−アミラーゼを測定するために
好適である。西独特許公開１３５２５７２６号公報に記
載された、唾液−α−アミラーゼに対する２つの抗体の
組合わせにも同じことがいえる。これらの抗体はＮＣＡ
ＣＣ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　　
ｏｆＡｎｉｍａｌ　　Ｃｅ１ｌ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ、Ｐ
ｏｒｔｏｎ　　Ｄｏｗｎ。

ＧＢ在）に寄託番号（９９Ｄ１２）δ４１２２００３及
び（８９Ｅ２）８４１２２００４並びに８４１１１３０
１及び８４１１１３０２として寄託されてｂる。特に唾
液−α−アミラーゼに作用する、寄託番号８４１２２０
０３及び８４１１１３０１又は８４１−２２００４及び
８４１１１３０１のモノクローナル抗体の組合わせは膵
臓−α−アミラーゼを唾液−α−アミラーゼの存在にお
いて測定するための本発明方法にとって著しく好適であ
る。

本発明方法にとっては、アイソザイム混合物を妨害アイ
ソザイムに作用する阻害物質と接触させることが必要で
ある。このことは該物質をアイソザイム混合物にかえる
か、又ゆその逆を意味する。アイソザイム混合物を阻害
物質に加え、かつこれが均質媒体を形成するように取り
込むのが有利である。ゝ均質媒体“とは物質がアイソザ
イム混合物と＠な混合にあるということを意味する。こ
の物質が接触の後アイソザイム混合物により試料の液体
中に溶けているのが有利である。

妨害アイソザイムの阻害はすでに部分的にアイソザイム
混合物と阻害物質との接触の際に行なわれる。迅速で完
全な阻害を達成するために、阻害物質を含有する試料を
できるだけ早く細孔性反応媒体中に導入しなげればなら
ず、ここで阻害は迅速に、かつ完全に行なわれる。阻害
物質との接触の後、試料を１分より短時間内に、有利に
は数秒内に細孔性反応媒体中に導びくことか有利である
。そこで、妨害アイソザイムは短時間で、一般に１分間
、又はそれより短時間で阻害される。

測定すべき酵素の活性に相応する、残留酵素活性の測定
は必要な試薬の添加により細孔性反応媒体中で行Ｔｘ　
５か、又は該試料を細孔性反応媒体から除去し、この材
料の外で測定すべき酵素に関して試験することができる
。阻害されていない酵素の測定は公知基質を用いて公知
法により行なわれる。膵臓−α−アミラーゼの測定のた
めには、例えば西独特許公開第３５００５２６号、同第
３５２５９２’６号公報、ヨーロッ・ぐ特許公開第０１
５０３０９号公報及びフレゼニウス（Ｆｒｅｓｅｎｉｕ
ｓ　）、　Ｚ、Ａｎａｌ　、Ｃｈｅｍ、、　　第３２４
巻、１９８６年、第３０４〜３０５頁に記載された方法
に相応して実施する。

本発明による方法を担体結合して実施するのが特に迅速
で有利である。′担体結合“とは、方法の実施に必要な
すべての試薬及び材料を不活性担体、有利に不活性プラ
スチック材料に配置することを意味します。該方法の担
体結合した実施は非常に少量の試料量でも、所望の酵素
の著しく迅速な測定を可能にする。

本発明による方法のためには、特に担体結合形において
は、妨害アイソザイム阻害物質を粗孔性材料上に、この
阻害物質が液体試料との接触の際に解放されるように担
持する。このように負荷された粗孔性材料上にアイソザ
イム混合物を供給する。この阻害物質は解放される。物
理的力、例えば重力又は毛管現象による力、しかし有利
には毛管現象による力により、この阻害物質を含有する
液体は細孔性反応媒体中に導びかれる。このことは他の
材料を介して間接的に、有利には直接液体搬送を可能と
する粗孔性材料と細孔性材料との間の接触により直接性
なわれる。

本発明において粗孔性材料とは基本的に、本発明方法に
十分量の阻害物質を担持し、液体との接触の際にこれを
迅速に解放することができ、かつ迅速な液体透過を可能
とする程大きな表面を有するすべての材料である。粗孔
性材料からのインヒビターの解放及び細孔性反応媒体中
への液体搬送は該測定法の律速段階であってはならない
。膨潤性又は非膨潤性材料からなるモノフィル又はマル
チフィルウェブ様フリース又は織物を使用するのが有利
である。特に試料量の少ない実験において非常に重要で
ある、僅かな液体保持能のために、非膨潤性材料は特に
好適である。液体保持能とは細孔性反応媒体の吸弓力に
より粗孔性材料から取り出されることなく、そこに残る
液体量である。液体保持能は使用した試料容量の２０％
より少量であるのが有利であり、特に１０％より少量で
あるのが有利である。好適な粗孔性材料は有利にポリエ
ステルからなる。同様に、ナイロン織物又はナイロンと
ポリエステルとからなる混合繊物が好適である。

孔径と関係のある空気通過量が２０００７／ｍ・秒を上
回る粗孔性材料が特に好適である。この空気通過量限界
を下まわると、この粗孔性材料を介する試料通過はもは
や本発明に必要であるように迅速に行なわれず、この材
料を通り、か７０〜１４Ｑμ７７Ｌで、空気通過量２０
００〜１ｏ　ｏ　ｏ　ｏ　ｔ／ｍ・秒の織物が有利であ
り、特に厚さ８０〜１０５μｍで、空気通過量４０００
〜７０００Ａ／ｍ″秒の織物が特に有利である。比較可
能な厚さ及び孔径を有する単一ファイバー・エンドレス
フリースも好適である。

本発明において細孔性反応媒体は、その表面が試験すべ
き液体試料で湿潤性であり、かっこの孔は２５μｍより
小さく、有利には０．５〜２５μｍ、特に有利には１〜
１０μｍの間の孔径な有する材料である。孔径の最少限
界は希釈せずに使用可能な試料、特に血液、血漿又は血
清の粘度により決められる。この下限を下まわる場合、
細孔性反応媒体中への試料の完全な取９込みは測定法の
律速段階となる。すでに見い出されたように、妨害酵素
の阻害は細孔性反応媒体の中で、反応媒体の外側表面上
でょワ、又はそのよ５な細孔性媒体がない場合より著し
く迅速に経過するので、試料液体はできるだけ迅速に細
孔中を通過することができなければならない。孔の最大
限は、この孔径なうわまわると、毛管現象の力が低下す
るために試料の吸収速度が低くなり、この限界をうわま
わる孔を有する材料は本発明による課題をもはや解決し
な（なることから生じた。

本発明方法にとっては細孔性反応媒体の吸弓能は５〜１
００μｔ／ｄ　を有するべきである。

材料の厚さは８０〜１０００μｍの間であってよい。

阻害されていない酵素の測定な細孔性でな（て、他の反
応媒体中で実施する有利な場合には、細孔性反応媒体と
して圧縮可能な材料が特に有利である。こうして、他の
材料を細孔性反応媒体上に押しつけると、この押圧によ
り液体搬送を可能にする接触がもたらされ、試験すべき
液体の残留活性は容易に細孔性反応媒体から他の材料中
に導入される。液体搬送は主に物理的力、例えば重力及
び／又は毛管現象により生じる。

本発明方法に使用される、粗孔性材料も細孔性材料も、
試料内容物と、鵠的にであれ、化学的にであれ、結合し
ないということは重要である。これとの関連において、
試料内容物とはもともと試験すべき試料中に含有される
物質だけでなく、測定法の間に試料中に達する物質や試
薬をも包含する。不所望な結合は誤まった測定結果に導
ひく。このような意味において試料内容物と結合する材
料を場合により、試料内容物との非特異的結合特性を失
なうように処理することができる。そのように処理した
物質は細孔性又は粗孔性材料として本発明方法のために
も使用可能である。試料内容物の固体材料への不所望な
非特異的な結合の阻止法は公知技術から専門家には公知
である。例えば、担体材料への試料蛋白質の不所望な非
特異的結合はアルブミンでこの材料を処理することによ
り予防することができる。

細孔性反応媒体として、前記特性を有する織物、フリー
ス、膜又はフィルムが有利に好適である。

細孔性反応媒体として使用可能な材料は、場合によりそ
の表面が前記の意味において試料内容物との不所望な結
合を生じないように改変されている膜である。市販され
ているそのような材料は、例えばロブロジン（Ｌｏｐｒ
ｏｄｙｎｅ）■（Ｐａｌ１社、Ｇｌｅｎｇｒｏｖｅ　、
　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ＬＩＳＡ在）　又ｎＲ水性ｆニ
ラホー　ｖ　（ｈｙｄｒｏｐｈｉ　１ｅＤｕｒａｐｏｒ
ｅ）■（Ｍｉ　Ｉ　ｌ　１ｐｏｒｅ社、Ｂｅｄｆｏｒｄ
、　ＵＳＡ在）である。不活性蛋白質、例えばアルブミ
ンによジ飽和されたセルロース膜又はセルロース誘導体
膜も使用可能である。セルロース誘導体としては、例え
ばセルロースエステル、セルロースエーテル又はニトロ
セルロースヲ挙ケることができる。非特異的結合に関し
て処理されたナイロン膜も細孔性反応媒体として本発明
方法に使用可能である。

場合により相応する内容物、例えば珪藻土のために多孔
性であるフィルムも有利に好適である。そのようないわ
ゆる開放フィルムも例えばヨーロッパ特許公開第００１
６３８７号公報に記載されている。

フチ−プルファイバー　グラスファイバー又はプラスチ
ック、例えばナイロン、ポリエステル、ポリエチレンを
ペースとしたフリースは同様に有利に使用可能である。

細孔性反応媒体として特に好適であるのは３〜７μｍ、
特に約５μｍの孔を有する膜及び１〜１０μｍ、特に１
〜５μｍの孔を有するグラスファイバーフリースである
。

担体結合型で本発明方法を実施するためには、細孔性反
応媒体に対する粗孔性材料に関する孔径比が２〜２００
ｏ、有利に５〜５００、特に有利には１０〜１００であ
る場合特に有オリであることが判明した。

担体結合型で本発明方法を実施するためには、試料供給
域及び評価域並びに多くのテスト層を有するテスト担体
が好適である。テスト担体はしばしば縦長のテストテー
プとして構成されている。しかしながら、正方形又は矩
形の小片として構成されるテスト担体も公知である。主
にテスト担体はテスト層、すなわち実施すべきテストに
必要な試薬を含有する材料からなる。前記の場合におけ
るように全く試薬を有さす、例えばその材料構造のため
に試験すべき液体をあるテスト層から他のテスト層に搬
送するか、反応媒体として、いわば反応容器のようなも
のとして相互に反応する物質を取り込むか、又は−定の
試料内容物のためのフィルターとして作用するテスト層
がテスト担体の構成に関与していてもよい。

テスト担体は一般に、かつ特に本発明において、試料供
給域と評価域に区分されていてよい。

試料供給域はテスト担体の試料を供給する領域である。

評価域は測定すべきパラメーターに関する尺度であるシ
グナルを試験の結果として測定する領域である。試料供
給域と評価域とは多くの場合同一でなく、本発明におい
ては液体搬送を可能とする媒体によシ相互に結合してい
る。

本発明によるテスト担体は試料供給域中に、アイソザイ
ム混合物から１つの酵素を測定するために妨害アイソザ
イムを阻害する、前記のような１種又は複数種の物質を
含有する、前記のような粗孔性材料を有する。これに続
いて反応媒体として働ら〈前記種類の細孔性材料が、粗
孔性材料からの液体搬送を可能とするように細孔性材料
と粗孔性材料とが接触しているように設けられている。

細孔性材料は本発明によるテスト担体の試料供給域と評
価域とを結合し、このことにより妨害アイソザイムを阻
害するための反応媒体としての機能の他に、試験すべき
液体試料を試料供給域から評価域に搬送するためにも働
らく。

本発明によるテスト担体の評価域は１つ又は複数のシグ
ナル形成層を含有する。このシグナル形成層は阻害され
ていない酵素の測定のために必要な試薬を含有し、かつ
このシグナル形成層は細孔性反応媒体と液体移行を可能
とする接触状態にあるか、又はこれとこのような接触状
態にすることができるように配置されている。

シグナル形成層と細孔性反応媒体との接触も、細孔性反
応媒体と粗孔性インヒビター担体との接触もどちらも平
面の接触を意味し、こうしてできるだけ大きな接触面を
形成するのが有利である。

試験すべき液体とシグナル形成層の検出試薬との接触に
おいて、検出可能なシグナルが生じ、これは阻害されな
かった酵素の量に関する尺度である。本発明は特に検出
可能なシグナルとして特徴的な変色を生じる場合に関す
るが、この際呈色も同様に変色（無色から有色への）と
みなされる。明害されていない酵素の測定のための試薬
としては測定法に関してすでに前記のも性であり、例え
ばその安定性に関してマイナスに影響を与えない場合、
これらの試薬は１つの層中に一緒に存在してよい。場合
により、測定試薬が空間的に分離され、複数の層に分配
されているということも必要である。この場合、全体で
、測定反応に関して必要な試薬をすべて含有する複数の
シグナル形成層がある。

有利な本発明によるテスト担体の実施形は、これらのシ
グナル形成層が全面的に相互に接触しているように、又
は相互に接触がもたらされるように配置されたシグナル
形成層を有する。

このような接触は、液体が域る層から他の層に移行する
ことができるように働かなくてはならない。

測定反応に必要な試薬が複数のシグナル形成層に含有さ
れている場合、すべてが細孔性反応媒体と液体移行を可
能とする接触にあるか、又は細孔性反応媒体とそのよう
な接触にもたらされることができなければならない。本
発明によるテスト担体の有利な実施形においては、測定
試薬のそれぞれの多くの部分の１つを含有する層だけが
細孔性材料と直接に接触しているか、又はこれと直接的
に接触されることができる。

測定反応に必要な試薬の残りを含有する他の層は前記の
層を介して細孔性反応媒体と間接的に接触しているか、
又は細孔性反応媒体と間接的な接触をもたらされること
ができる。゛間接的な接触゛°とはここではこれらの層
が液体移行を可能とする接触を直接的に有さす、液体は
その間にある層を介してのみ移行することができること
をいう。

本発明によるテスト担体のシグナル形成層は、閉止され
ていない酵素の測定にとって必要な試薬すべて、又はそ
の一部を含有する材料からなる。この試薬担体材料は原
則的にこのために常用の材料すべてから選択することが
できる。例えば吸収性又は膨潤性、多孔性又は非多孔性
材料を使用するか、又は試験すべき液体と接触する際に
その中に溶けるようなものも使用するこぺ とができる。セルロース、フィルター／−パープラスチ
ックファイバーフリース、グラスファイバーフリース　
ポリヒニルエステルフイルムポリアミドフイルム、又は
例えばキサンタン・ゴムからなるフィルムを挙げること
ができる。

細孔性反応媒体からシグナル形成層中への良好な液体移
行が達せられる。吸収性、膨潤性及び／又は多孔性材料
が有利である。

シグナル形成層において生じたシグナルは、変色の場合
視覚的にも、測光法によっても測定することができる。

生じたシグナルの反射測光法による測定が特に有利であ
る。

血液中のアイソザイム混合物から１つの酵素を測定する
ために本発明によるテスト担体を使用すべき場合、この
テスト担体が試料供給域に細胞成分を血液から分離する
ための層を有しているのが有オリである。例えばヨーロ
ッパ特許公開第００４５４７６号公報から公知であるよ
うな多孔性層を使用可能である。分離層は、本発明によ
るテスト担体中で、試験すべき試料がこの層を通過した
後に粗孔性層と接触するように設けられている。

本発明のオリ点は特にアイソザイム混合物から１つの酵
素を５分間より短時間に、有利には３分間より短時間に
測定することがはじめて可能になる、ということにある
。このことは特に、妨害アイソザイムが非常に迅速に、
有利には１分より短時間で、本発明による細孔性反応媒
体中で阻害されることにより達せられる。更に、本発明
による酵素測定のためには、妨害アイソザイムに関する
特別な分離工程が必要でない。

−船釣に非希釈液体試料、特に体液を試験することがで
き、この際特に有節１ｊにきわだつのは、血液と血漿試
料又は血清試料とが比較可能な結果をもたらすというこ
とである。更に、特に本発明によるテスト担体を使用す
る際に、所望の酵素の測定のために３０μを又はそれよ
シ少ない量の試料量で十分である。

実施例 次に図面に概略的に図示した実施例につき本発明をよシ
詳細に説明する。

第１．２及び３図は本発明によるテスト担体の種々の実
施形の断面図である。

第４図は本発明によるテスト担体の有利な実施例の側面
図である。

第１図はすべてのテスト層が液体移行を司能にする接触
にあるテスト担体の凹面を示す。テスト層はフレーム８
により一緒に保持される。

フレーム８は種々の材料からなっていてよい。

このフレームはテスト層相互を一緒に保持するという目
的のみをみたせばよい。例えば溶融接着テープ又は、例
えば写真スライドから公知であるような厚紙フレームが
好適である。

試料供給域は層１及び２からなる。１は血液から細胞成
分、特に赤血球を分離するための層である。この血液細
胞分離層は全血中のアイソザイム混合物から１つの酵素
を測定する本発明方法を、あらかじめ血液細胞を分離除
去することな〈実施することを可能とする。血液細胞分
離層の材料としては原則的にすべてのこのために公知の
材料を使用することができる。しかしながら、例えばヨ
ーロッパ特許公開Ａ第００４５４７６号公報に記載され
ているようなグラスファイバーフリースが特に有利であ
る。本発明によるテスト担体で全血を使用せず、細胞成
分の除去の必要のないような試料を調べる場合、分離層
１は必要がない。しかしながら、テスト担体の全面にわ
たっての均質な湿潤を構成するためにも、細胞試料成分
を分離しなくとも、供給した試料液を広げることを可能
とする層１をその他のテスト層の上に設けるのが有利で
ある。

そのような展開層の材料はすでに公知である。

ヨーロツ・や特許公開Ａ第００４５４７６号公報による
グラスファイバーフリースは細胞血液成分の分離に作用
するだけでなく、その下に存在するテスト層をその全面
にわたって均質にぬらす。２は妨害アイソザイムを阻害
する物質を含有する粗孔性材料からなる。３はその中で
妨害アイソザイムを阻害する細孔性反応媒体である。

４は阻害されなかった酵素を測定するために必要な試薬
を含有し、かつテスト担体の評価域を形成するシグナル
形成層である。

アイソザイム混合物中の１つの酵素を測定するために第
１図のテスト担体を使用する際には、試験すべき液体を
層１上に供給し、ここでテスト層の全面に均質な分布が
行なわれる。試験すべき試料が全血である場合、層１は
更に細胞性血液成分を分離することのできる材料である
。

液体はその重力に従い、かつ毛管現象の力により粗孔性
層２中に達し、ここでこの液体は妨害アイソザイムを阻
害する物質を受は取る。この物質と混合した液体は非常
に迅速に細孔性反応媒体δ中に吸引される。試料の定量
測定のためには層２の液体保持能はできるだけ小さい方
がよい。層δ中では所望の酵素の測定を妨害するアイソ
ザイムの阻害が行なわれ、その後この液体はシグナル形
成層に達し、そこで試料中の測定すべき酵素の量に関す
る尺度であるシグナルが形成される。測定すべき酵素に
よりシグナル形成層の変色が惹起されるのが有利である
。この変色を層４の試料供給側の反対側から視覚的に又
は測光法、特に有利には反射測光法により測定すること
ができる。

第２図は、ここに図示し・た本発明によるテスト担体の
実施形が測定すべき酵素の測定に必要なすべての試薬を
唯１のシグナル形成層中に含有していないということに
より第１図とは異なっている。ここでは試薬は層５及び
６に分配さ九ておシ、この両方の層が一緒になって評価
域を形成する。こうして、相互に認容性でない試薬を有
利に相互に空間的に分離することができる。試験すべき
液体は層５を通過する際に層６の試薬との反応のために
必要な試薬を取り込むか、又は層５中でそこに存在する
試薬と反応系の第１工程を経過し、次いで層６中に存在
する試薬で反応が完結する。

第３図中では評価域がフラップのように構成されている
。層５及び６は測定反応にとって必要な試薬を空間的に
分離した形で含有する。より良好な取り扱かいのために
層６を測定反応に不活性な、透明なシート７上に担持さ
せ、かつ可動性のちょうつがい様の要素９でフレーム８
と結合する。フラップ様に配置された層５及び６を用い
て、時間を正確に定義した測定反応を開始することも可
能である。試料供給の後、液体は層５まで透過し、そこ
に存在する試薬を溶かすか、又はそこに存在する試薬と
多ぐの反応工程からなる反応列の第１の反応工程を行な
い、次いで一定の時点に閉じることにより層６を層５と
接触させると、液体はこの層中に移行する。

測定反応は終結し、可視で、又は測光法により正確に知
られた時間にわたって透明なシート７を介して観察する
ことができる。

第４図はテープ状のテスト担体の有利な実施形を示す。

硬いベースシート１０上に溶融接着テープ１１及び２０
で測定に必要なテスト層を固定する。試料供給域１８中
にはシラスチック、有利にポリエステルからなる被覆ネ
ット１２の下に血液から細胞成分を分離するためのフリ
ース１３、有利にグラスファイバーフリース及ヒ粗孔性
インヒビター担体１４が設けられている。

細孔性反応媒体１５はインヒビター担体１４と液体移行
を可能とするように接触しており、かつベースシート１
０上に位置して試料供給域１８から評価域１９に達する
。シグナル形成層１６及び１７ｉｄ溶融接着テーゾ２０
でテープ状ベースシー）１０上に、それらが評価域中に
存在するが、細孔性媒体１５と接触しないように固定さ
れている。

本発明による方法を第４図のテスト担体を用いて実施す
るためには液状試料、例えば全血を被覆ネット１２上に
付与する。液体試料は被覆ネットを介して層１３中に達
し、試料が全血の場合にはここで細胞性血液成分は保持
される。

重力と毛管現象の力により試料はインヒビター担体１４
中に達し、ここで妨害アイソザイムを阻害する物質が解
放される。インヒビターを有する試料は非常に迅速に細
孔性反応媒体１５中に吸引され、ここで阻害が非常に迅
速に行なわれる。毛管現象により、試料は細孔性反応媒
体中を試料供給域１８から評価域１９中に搬送される。

妨害アイソザイムの阻害の終了後、阻害されていない酵
素の測定のために備えられている層１６及び１７を細孔
性反応媒体１５上に押しつけ、この層中に存在する試薬
を試験すべき液体と接触させる。試料中の測定すべき酵
素の量に関する尺度として層１７中に生じた変色を可視
で、又は測光法、有利に反射測光法によりベースシート
１０の反対側からこの層で測定する。

テスト担体の寸法及び特に個々のテスト層の寸法は試験
すべき試料容量に適合していなければならないことは当
然である。

次に、本発明と実施例につきより詳細に説明するが本発
明はこれにのみ限定されるものではない。

例１ インヒビター担体及び細孔性反応媒体に関して種々の材
料組合わせを有する種々のテスト担体の比較 Ａ）テスト担体の製造 第４図によるテス”ト担体を４つ製造し、この際モデル
１におけるインヒビター担体１４は孔径１００μｍのポ
リエステル織物マルチ１４ノーフル（Ｐｏｌｙｅｓｔｅ
ｒ−Ｇｅｗｅｂｅ　ｍｕｌｔｉ　　ｌ　４ｎｏｒｍａｌ
；Ｓｃｈｗｅｉｚｅｒ　５ｅｉｄｅ、ｎｇａｚｅｆａｂ
ｒｉｋ社、Ｔｈａｌ　　スイス在）からなり、モデル２
においても同様に孔径１００μｍのポリエステル織物マ
ルチ１４ノーマル（ＳｃｈｗｅｉｇｅｒＳｅ　ｉｄｅ、
４ｇａｚｅｆａｂｒ　ｉｋ社）からなり、モデル３にお
いては面積重量約”Ｊ、７ｆｉｌ−７ｍ２で、孔径約５
０〜３００μｍのロングファイバー紙（かつモデル４に
おいては孔径１．２μｍのナイロン膜（Ｐａｉ１社製、
Ｇｌｅｎｇｒｏｖｅ、＝　、：ｌＬ　−ヨーク、ＵＳＡ
在）からなシ、かつこれらの材料はそれぞれ次の成分を
含有する水溶液で含浸される： 燐酸塩緩衝液、ｐＨ７，０Ｉ　００ｍＭ、塩化ナトリウ
ム　　　　　　　　　　５ｍＭ、クロティンＣ（Ｃｒｏ
ｔｅｉｎ　Ｃ： Ｃｒｏｄａ、Ｃｈｅｓｃｈｉｒｅ、英国）　　　　　１
重量％、及び 織物ｌｃ／Ｌあたり抗体の量が約１ｏ〜１２μノになる
ような量の寄託番号８　’４１２２００４及び８４１１
１３０１１’５：１）の抗唾蔽アミラーゼ抗体。

細孔性反応媒体１５はモデル１においては孔径約１〜５
μｍのグラスファイバーフリース（Ｂｉｎｚｅｒ社製、
Ｈａｔｚｆｅｌｄ、西独在）カらなり、モデル２におい
ては孔径０．４５μｍのナイロン膜（Ｐａｌ１社製、Ｇ
ｌｅｎｇｒｏｖｅ、　＝ニー　ヨー　り、ＵＳＡ在）か
らなり、モデル３においては孔径約１〜５μｍのグラス
ファイバーフリース（Ｂ　ｉ　ｎｚｅｒ社製、Ｈａｔｚ
ｆｅｌｄ、西独在）カらなり、モデル４においては同様
に孔径約１〜５μｍのグラスファイバーフリース（Ｂｉ
ｎｚｅｒ社製、Ｈａｔｚｆｅｌｄ、西独在）からなる。

すべてのモデルにおいてシグナル形成層１６はポリアミ
ド織物（ＮＹ２０ＨＣ，ＺｕｒｃｈｅｒＢｅｕｔｅ　Ｉ
　ｔｕｃｈｆａｂｒ　ｉｋ社製、チューリッヒ、スイス
在）からなシ、これは次の水溶液で含浸された： ２−メトキシ−４−モルホリノ−ペンゾールジアゾニウ
ムクロリド×塩化炬鉛　　　　　５．８１／ｌ、メタノ
ール　　　　　　　　　　２０重量％、こうしてジアゾ
ニウム塩約１５．５μ？／ａｌの量が生じた。

層１７はプラスチックシートからなる試薬フィルムであ
る。このフィルムは水ｌｔ中の：ケルトｏ−ルＦ（Ｋｅ
ｌｔｒｏｌＦ；にｅｌｃｏ社、Ｄｒｅｉｅｉｃｈ、　西
独在）　　　　　　　３ノ燐酸塩緩衝液ｐＨ７用 燐酸ナトリウム　　　　　　　　　１５．５ｙ−塩化ナ
トリウム　　　　　　　　　　０．６．ｌｉｉ’α−グ
ルコシダーゼ　　　　　　　１ｌＶＩＵインドキシルマ
ルトへブタオシド（ベーリンガーマンハイム社製、Ｍａ
ｎｎｈｅｉｍ、西独在）　　２５．Ｐからなる溶液をＯ
−牛°Ｃの温度でポリカーポネ−）　シー　）　（Ｌｏ
ｎｚａ社、Ｗｅｙｌ、西独在）上に、酵素ａＵ／＝もし
くはインジケーター１４０μノ／　ｃｉの量が生じるよ
うに被覆することによシ製造される。

赤血球分離フリース１３としては孔径５〜２５μｍのグ
ラスファイバーフリース（Ｂｉｎｚｅｒ社製、ｆ−＋ａ
ｔｚｆｅｌｄ、西独仕）をすべてのモデルに使用する。

同様に４つのすべてのモデルにポリエステルネット（Ｚ
ｕｒｃｈｅｒ　Ｂｅｕｔｅｌｔｕｃｈｆａｂｒｉｋ社製
、チューリッヒ、スイス在）１２を使用する。このポリ
ニスネット１２及び赤血球分離フリース１３を大きさ５
　Ｘ　５　＋＋＋ｙｎの切片に、インヒビター担体１４
を５　ｘ　７　ｍｙｎに、細孔性反応媒体１５を１６　
Ｘ　５　ｍｍに、かつシグナル形成層１６及び１７をｌ
　３　Ｘ　６ｍｍに切断し、第４図に示したように、配
置し、かつ溶融接着テープでベースシート１０としての
る【・いポリスチロールシー固 ）１００Ｘ６朋上に一定する。

Ｂ）測定法の実施 供血者の血液及び血清試料は膵臓−α−アミラーゼ４２
１Ｊ／ｌを含有する。この試料を唾液アミラーゼと共に
全体で唾液−α−アミラーゼ８５００Ｕ／ｚに増す。試
料名々３０μｔをモデル１から４までの個々のテスト担
体の被覆ネット１２上に供給する。このテスト担体をレ
フロトロン（Ｒｅｆｌｏｔｒｏｎ）［Ｆ］のタイプの反
射測光ｉ（べ−ＩＪンガーマンハイム社、マンハイム西
独在）中で調べる。テスト時間は全体で１７０秒である
。試料供給１分後に層１７及び１６を反応媒体上に押し
つけ、こうして阻害されていないアミラーゼ分の測定反
応は開始する。色形成を５６７　ｍＴＬにおいて反射測
光法により追跡する。次の結果が得られる： 第　　１　　表 結果は、モデル１に関してのみ短時間内に唾液−α−ア
ミラーゼの非常に良好な抑制（９７係をうわまわる）が
達せられ、血清及び血液に関して良好に一致する測定結
果が得られるということを示している。モデル２におい
ては細孔性反応媒体の孔が明らかに小さすぎるので、試
料が非常にゆっくりと浸透し、唾液−α−アミラーゼの
阻害がテスト時間内に完全に行なわれない。モデル３で
は唾液−α−アミラーゼの阻害は良好である。しかしな
がら血清と血液試料に関する結果は相互に１６％を越え
て離れる。

このことば粗孔性材料として用いたロングファイバー紙
の約３０％の液体保持能に明らかに起因する。血液及び
血清に関して同容量の実験においては、血液においてそ
れぞれのへマドクリット仙によるが、使用した試料容量
の半分までが＃ｎ体に関して実験に提供されるというこ
とを考慮しなければならない。ここで実験されたような
非常に少容量の場合には個々の層材料の液体保持能は非
常に問題である。−モデル生においては、インヒビター
担体１５の小さい孔径が、試料が非常にゆっくりと細孔
性反応媒体中に達し、かつテスト時間の間に阻害が完全
に終了しないということに導ひく。特に血液においては
、非猟にわずかな液体のみが細孔性反応媒体中に達し、
こうしてこの液体は測定時間中に乾燥し、測定すること
ができなかった。

例２ 膵臓−α−アミラーゼの特異的検出用テスト担体 第４図によるテスト担体を製造する。インヒビター担体
１４は次の水溶液で含浸したポリエステル織物マルチ１
４ノー−ｑ　ル（Ｓｃｈｗｅ　ｉ　ｚｅｒＳｅ　ｉｄｅ
ｎｇａｚｅｆａｂｒ　ｉｋ社、Ｔｈａｌ、Ｓｃｈｗｅｉ
ｚ　在）である： 燐酸塩緩衝液、ｐＨ７，０１００ｍＭ、塩化ナトリウム
　　　　　　　　　５０ｍＭ、りｏティンＣ（Ｃｒｏｔ
ｅｉｎＣ；Ｃｒｏｄａ。

Ｃｈｅｓｈｉｒｅ、英国）　　　　　　　　　　１重量
％寄託番号８４１２２００４及び８４１１１３０１を５
＝１の比で有する抗唾液アミラーゼ抗体２ｍ９／　ｍｅ
、こうして１０〜１２μノ抗体／ｄの量が生じる。

細孔性反応媒体１５として約１〜５μｍの孔径を有スル
クラスファイバー（Ｂｉｎｚｅｒ社製、Ｈａｔｚｆｅｄ
　西独在）を使用する。

シグナル形成層１６及び１７、被覆ネット１２及び赤血
球分離フリース１３は例１に記載したと同じものである
。

個々の層を例１に記載したように切断して形を整え、溶
融接着テープで大きさ１００　Ｘ　５　ｍｒｎのポリス
チロールシート上に接着し、第４図によるテスト担体と
する。

被覆ネット１２上に血清３０μｔを供給し、テスト時間
内はＬ／　７　ＣＩ　）　Ｄ　７　（Ｒｅｆ　１ｏｔｒ
ｏｎ）Ｉ８１装置（Ｆｉｒｍａ　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　ＧｍｂＨ社製、ＩＶｌａｎｎｈｅ
ｉｍ、西独在）中で測定波５５７　ｎｍで反射測光法に
より評価する。試料供給１分後に、シグナル形成層１６
及び１７を細孔性反応媒体１５上に押圧する。測定は試
料供給から全体で１７０秒後に終了する。次の結果が得
られる。

第　　２　　表 膵臓−α−アミラーゼに関する実測測定値は使用したア
ミラーゼ活性と著しく良好な一致を示す。第１の実施例
においては唾液−アイソザイムの大過剰を９９％まで阻
止することができ、こうして検出された膵臓値はこのよ
うな条件下には優れた結果を示す。

例３ 唾液アミラーゼの阻害：湿式テストに対する比較 唾液アミラーゼ４２５０Ｕ／ｚを含有する血清を調べ、
かつ本発明による方法を類似の阻害抗体を使用する市販
の湿式テストＰＮＰ−膵臓−アミラーゼ（ペーリンガニ
マンハイム社、西独）と比較した。このテスト担体を例
２に記載したように製造した。抗体との種々の恒温保持
時間の後、この測定をテストテープ上で常法で行なった
。恒温保持時間を５〜１２０秒に選択した。

Ｐ　Ｎ　Ｐ−膵臓−アミラーゼ法を製造者の記載に従っ
て実施したが、前恒温保持時間を３０〜１８０秒の間で
変化させた。

生じた結果を第３表に示す。

’Ｎ磯り：る４りンに→ぜ：丁 本発明による方法は５秒間の恰温保持の後９５％の阻害
を、そして１分後には９７％を越える阻害を保障する。

湿式テストハ同じ阻害に作用するために５〜１０倍の長
さ（６０秒及び１８０秒以上）を必要とする。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図及び第３図はそれぞれ本発明によるテス
ト担体の種々の実施形の断面図であシ、第１図はすべて
の層が液体移行を可能にする接触にあるテスト担体の断
面図であり、第２図は評価域が２層からなるテスト担体
の断面図フ であり、第３図は評価域が７ラツプ状に形成されている
テスト担体の断面図である。第４図は本発明によるテス
ト担体の有利な実施形の側面図である。 １　　、　２　、　３　、　４　、　５　　、　６−１
．７・・シート、８　フレーム、９・・ちょうつがい様
の要素、１０・・ベースシート、１１．２０・・溶融接
着テープ、１２　被葎ネット、１３　フリース、１４・
・インヒビター担体、１５・・・細孔性反応媒体、１６
．１７　・シグナル形成層、１８・試料供給域、１９・
・評価域。 Ｐ−１ｏ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、妨害アイソザイムを阻害し、かつ阻害されていない
   酵素を測定することにより液体試料中のアイソザイム混
   合物から１つの酵素を測定するために、アイソザイム混
   合物を妨害アイソザイムを阻害することのできる１種又
   は複数種の物質と接触させ、この阻害物質を含有する試
   料を細孔性反応媒体中に導入し、そこで妨害酵素を阻害
   し、かつ生じた液体中の阻害されていない酵素の測定を
   実施することを特徴とするアイソザイム混合物から１つ
   の酵素を測定する方法。 ２、粗孔性材料の存在においてアイソザイム混合物を妨
   害アイソザイムを阻害することのできる１種又は複数種
   の物質と接触させる請求項１記載の方法。 ３、粗孔性材料が細孔性反応媒体と直接接触しており、
   かつ阻害物質を含有する試料を粗孔性材料から細孔性反
   応媒体中に吸引する請求項２記載の方法。 ４、妨害アイソザイムを阻害することのできる物質とし
   て抗体を使用する請求項１から３までのいずれか１項記
   載の方法。 ｂ、膵臓−α−アミラーゼ及び唾液−α−アミラーゼの
   混合物から膵臓−α−アミラーゼを測定するために、唾
   液−α−アミラーゼを阻害する抗体又は抗体の組合わせ
   を使用する請求項１から４までのいずれか１項記載の方
   法。 ６、妨害アイソザイムを阻害し、阻害されていない酵素
   を測定することにより液体試料中のアイソザイム混合物
   から１つの酵素を迅速に測定するための、試料供給域、
   評価域並びに多数のテスト層を有するテスト担体におい
   て、試料供給域中で粗孔性材料が妨害アイソザイムを阻
   害することのできる１種又は複数種の物質を含有してお
   り、ここに細孔性反応媒体が、粗孔性材料からの液体搬
   送を可能とするように直接に接触しており、かつ評価域
   には阻害されていない酵素を特徴的なシグナルにより測
   定するために必要な物質を含有する１つ又は複数の層が
   配置されており、かつこれらの層は細孔性反応媒体と液
   体移行を可能とする接触にあるか、又は細孔性反応媒体
   とそのような接触にもたらされることができることを特
   徴とするアイソザイム混合物から１つの酵素を測定する
   テスト担体。 ７、粗孔性材料と細孔性反応媒体との孔径の比が２より
   大である請求項６記載のテスト担体。