JPS5858072B2 - 新規脱水素酵素及びその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明（１、最適利用ｐＨをほぼ８．５附近に有し、且
つガラフタル酸（ｇａｌａｃｔａｒｉｃ ａｃ １ａ
）ｌこ対し基質特異性を有する新規脱水素酵素Ａ及びそ
の製造法ｌこ関するものである。

従来、ガラフタル酸を特異的ｌこ資化利用する微生物を
用いてガラフタル酸に対し基質特異性を有する脱水素酵
素を採取する方法及び該脱水素酵素（こついては全く知
られていない。

本発明者等は、先ｌこガラフタル酸を含む培地で、バチ
ルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属ｌこ属するガラフタル酸資
化利用性菌を培養し、その策養物より培養菌体を回収す
ることを特徴とする細菌菌体の製造法を完成したが（特
願昭５６−７３，８２１号明細書参照）、その産生物質
について鋭意研究した結果、ガラフタル酸ｌこ対し基質
特異性の極めて高い新規脱水素酵素を採取することに成
功し、本発明を完成するｌこ至った。

本発明ｌこおいて、「新規脱水素酵素Ａ、］とは、以下
に記載する理化学的性質を有する酵素で、特微的な性質
として最適作用ｐＨをほぼ８．５附近に有し、且つガラ
フタル酸ｉこ対し基質特異性の極めて高い新規脱水素酵
素を指称するものとする。

以下に、本発明について詳述する。

ガラフタル酸（ムチン酸）は、ガラクトースの糖酸であ
り、木材などに含まれるガラクタン、及びガラクトース
、ラクトース、ラフィノース、ガラクトース、植物粘液
質などガラクト−ス又はその誘導体を含む物質を硝酸酸
化することにより大量ｔこ得られる物質である。

本発明方法ｌこ用いる微生物は、以下に詳述されるよう
に、ガラフタル酸を資化利用するものであり、バチルス
属に属する菌種であって、この菌種として、前記バチル
ス・エスピー・Ｇ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ、Ｇ
−１）（以下、「Ｇ−１菌」と称する）及びバチルス・
エスピー・Ｇ−２（Ｂａｃ ｉ ｌ ｌ ｕｓ ｓ
ｐ、 Ｇ−２） （以下、「Ｇ−２菌、１と称する）が
挙げられる。

なお、前記Ｇ−１菌及びＧ−２菌の他ｆこその自然的又
は人為的変異種もガラフタル酸の資化利用性を有する限
り、本発明方法に用い得ることは当然である。

前記Ｇ−１菌及びＧ−２菌は、昭和５６年３月１９日、
工業技術院微生物工業技術研究所へ、それぞれ、微工研
菌寄第５９２５号及び微工研菌寄第５９２６号として寄
託された。

前記Ｇ−１菌及びＧ−２菌は、次の菌学的性質を有する
。

なお下記の菌学的諸性質の試験及び分類方法はすべて「
バージニーズ マニュアル オブ デタミネイティブ
バクテリオロジー」（第８版、１９７４年） （Ｂｅｒ
ｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ（８ｔｈ ｅｄｉ
ｔｉｏｎ、１９７４））に準拠して行なわれた。

０バチルス・エスピー・Ｇ−１菌の菌学的性質（ａ）
形態（肉汁寒天斜面培地） （１）細胞の大きさは、０．６〜０．８μ×２．０〜３
．０μの桿菌である。

（２）細胞の多形性はない。

（３）運動性があり鞭毛は周毛である。

（４）胞子の犬ぎさは０．７μ×０．７μで、胞子のう
は細胞の端に形成される。

（５）ダラム染色性は変動性である。

（６）抗酸性は陰性である。

（ｂ） 培地における生育状態 （１）肉汁液体培地 菌環を形成し、沈渣を生じる。

菌体は灰白色を呈する。

（２）肉汁寒天平板培地 発育は旺盛で、菌体は灰白色を呈するが、色素は培地中
に拡散しない。

表面は平滑で、光沢があり、コロニーの周縁は金縁一波
状を呈する。

（３）肉汁寒天斜面培地 （２）と同様の生育状態を示し、拡布状に生育する。

（４）グルコース肉汁寒天平板培地 （２）と同様である。

（５）肉汁ゼラチン穿刺培地 ｐＨ７ｌこおいては、ゼラチンを液化して、表面で発育
し、菌体は灰白色を呈する。

ｐＨ１０においては、ゼラチンを液化しない。

（６）ペプトン水 ｐＨ７およびｐＨ１０においては表面に菌環を形成して
、沈渣を生じる。

菌体は灰白色を呈するが、色素は培地中に拡散しない。

リドマスミルク ｊトマス色素を僅かに赤変し、凝固する。

（８）バレイショ培地 菌体は灰白色を呈する。

（ｃ） 生理的性質 （１）硝酸塩の環元 環元する。

（２）脱窒反応 陰性 （３）メチルレッド（ＭＲ）試験 陰性 （４）フォーゲス・プロスカラエル（ＶＰ）反応陰性 （５）インドールの生成 陰性 （６）硫化水素の生成 陽性 （７）でんぷんの加水分解 陽性 （８）クエン酸の利用性（Ｋｏｓｅｒ 培地及びＣｈ
ｒｉｓｔｅｎｓｅｎの培地） いずれも利用しない。

（７） （９）無機窒素源（アンモニウム塩、硝酸塩、尿素等）
の利用性 利用する。

（１０）色素の生成 色素は生成しない。

（１υ リドマス、メチレンブルー ２，６−ジクロル
フェノール、インドフェノールなどの色素の還元 リドマスを僅かに赤変する他、変化なし。

（■２）ウレアーゼ 陰性 ０３）オキシダーゼ 陽性 （１４）カタラーゼの生成 陽性 （１５１生育の範囲 生育し得る条件は、ｐＨ７，０〜１１．０．温度２５〜
４５℃で好気的であり、最適生育条件は、ｐＨ９，５近
辺・温度３７℃前後である。

（１６）酸素に対する態度 好気性 （１７） Ｏ−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ Ｌｅｉｆｓｏ
ｎ法による） 酸化的並びに環元的に生育する。

好気的並びｔｒｉ元的にガスの生成はない。

（１８）牛乳の凝固 凝固する。

０９）アンモニアの生成 陰性 （２０）ゼラチン、カゼインの液化 液化する。

（２１） 塩化ナトリウムの耐性 ５％塩化ナトリウム上で生育するが、１０％以上の塩化
ナトリウム上では生育しない。

（ｄ） 炭素源の利用性 Ｌ−アラビノース Ｄ−キシロース Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｄ−フルクトース ＋ Ｄ−ガラクトース ＋ ラクトース マルトース ＋ サッカロース ＋ （１０） ）レバロース ＋（１１）
Ｄ−ソルビット （１２） Ｄ−マンニット ＋（１３）イ
ノジット ０４）グリセリン ＋ ０■ デンプン ＋ ０６）ラフィノース 卸 イヌリン （１８）デキストリン ＋ （１９）繊維素 ＣＩ’ｌ サリシン ＋ 以上の炭素源より好気的並びに嫌気的（こガスの生成は
おこなわない。

（注）二十利用する（酸を生成する） 殆んど利用しない（酸を生成しない） ○バチルス・エスピー・Ｇ−２菌の菌学的性質（ａ）
形態（肉汁寒天斜面培地） （１）細胞の大きさは、０．６〜０．８μ×２．０〜３
．０μの桿菌である。

（２）細胞の多形性はない。

（３）運動性があり鞭毛は周毛である。

（４）胞子の大きさは０．７μ×０．７μで、胞子のう
は細胞の端ｔこ形成される。

（５）ダラム染色性は変動性である。

（６）抗酸性は陰性である。

（ｂ） 培地における生育状態 （１）肉汁液体培地 画壇を形威し、沈渣を生じる。

菌体は灰白色を呈する。

（２）肉汁寒天平板培地 発育は旺盛で、菌体は灰白色を呈するが、色素は培地中
に拡散しない。

表面は平滑で、光沢があり、コロニーの周縁は金縁〜液
状を呈する。

（３）肉汁寒天斜面培地 （２）と同様の生育状態を示し、拡布状に生育する。

（４）グルコース肉汁寒天平板培地 （２）と同様である。

（５）肉汁ゼラチン穿刺培地 ｐＨ７＃こおいては、ゼラチンを液化して表面で発育し
、菌体は灰白色を呈する。

ｐＨ１ｏｉこおいては、ゼラチンを液化しない。

（６）ペプトン水 ｐＨ７およびｐＨ１０においては表面に菌種を形成して
沈渣を生じる。

菌体は灰白色を呈するが、色素は培地中に拡散しない。

（７） リドマスミルク 変化せず。

（８）バレイショ培地 菌体は灰白色を呈する。

（Ｃ） 生理的性質 （１）硝酸塩の環元 環元する。

（２）脱窒反応 陰性 （３） メチルレッド（ＭＲ）試験 陰性 （４）フォーゲス・プロスカラエル（ｖｐ）反応陰性 （５）インドールの生成 陰性 （６）硫化水素の生成 陰性 （７）でんぷんの加水分解 陽性 （８）クエン酸の利用性（Ｋｏｓｅｒ培地及びＣｈｒｉ
ｓｔｅｎｓｅｎの培地） いずれも利用しない。

（９）無機窒素源（アンモニウム塩、硝酸塩、尿素等）
の利用性 利用する。

００）色素の生成 色素は生成しない。

リドマス、メチレンブルー、２，６−ジクロルフェノー
ル、インドフェノールなどの色素の還元 変化なし。

（１カ ウレアーゼ 陰性 （１３）オキシダーゼ 陽性 α山 カタラーゼの生成 陽性 （１５１生育の範囲 生育し得る条件は、ｐＨ７，０〜１１．０、温度２５〜
４５℃で好気的であり、最適生育条件は、ｐＨ９，５近
辺、温度３７℃前後である。

（１１） （１６）酸素をこ対する態度 好気性 （１７）０−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ Ｌｅｉｆｓｏｎ法に
よる） 酸化的並びに環元的に生育する。

好気的並び（こ環元的にガスの生成はない。

０８）牛乳の凝固 凝固しない。

０９）アンモニアの生成 陰性 （２０）ゼラチン、カゼインの液化 液化する。

（２） 塩化ナトリウムの耐性 ５％塩化ナトリウム上で生育するが、１０％以上の塩化
ナトＩＪウム上では生育しない。

（ｄ） 炭素源の利用性 （Ｉ Ｌ−アラビノース ２ Ｄ−キシロース ３ Ｄ−グリコース ４ Ｄ−マンノース ５ Ｄ−フルクトース ６ Ｄ−ガラクトース ７ ラクトース （８マルトース （９サッカロース （１０）トレハロース （Ｌｌ） Ｄ−ソルビット （１２） Ｄ−マンニット （１３）イノジット （１４）グリセリン ａつ デンプン ０６）ラフィノース （１７）イヌリン ０８）デキストリン （１９）繊維素 （２０）サリシン 以上の炭素源より好気的並びに嫌気的にガスの生成はお
こなわない。

（注）二十 利用する（酸を生成する） 殆んど利用しない（酸を生成しな い） 以上の微生物の菌学的諸性質から前記文献の分類方法ｌ
こ従って使用微生物を検索するに当り、前記のＧ−１菌
及びＧ−２菌をバチルス（Ｂａｃ ｉ ｌ １ ｕｓ）
属に属する公知の菌種と比較した。

前記Ｇ−１菌（１、バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・プミルス（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス。

リヘニフオーミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎ
ｉ−ｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃ １
１１ｕｓｃｅｒｅｕｓ）、バチルス・アンソラシス（Ｂ
ａｃｉ−１１ｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バチルス
・スリンジエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉ
ｎｇｉｅｎｓｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ｍｅｇ−ａ ｔ ｅ ｒ １ ｕｍ）、バ
チルス・ステアロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）及びバチルス
・フィルマス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｆｉｒｍｕｓ）と類似
している。

しかしながら、Ｇ−１菌は、アラビノース及びキシロー
スから酸の生成をせず、且つグリコースからのアセトイ
ンの生成がないのに対し、バチルス・ズブチリス及びバ
チルス・リヘニフオーミスは共（こ、アラビノース及び
キシロースからの酸の生成があり、且つグリコースから
のアセトインの生成がある点、バチルス・フィルマスは
、アラビノース及びキシロースから酸の生成がある点、
Ｇ−１菌は、でんぷんの加水分解を行い、且つ硝酸塩の
還元を行うのに対し、バチルス・プミルスは、いずれも
行わない点１こそれぞれ特徴的な差異を見出すことがで
きる。

又、Ｇ−１菌はバチルス・セレウス、バチルス・アンソ
ラシス、バチルス・スリンジエンシス、バチルス・ステ
アロサーモフィラス及びバチルス・メガテリウムと比較
して、菌体の大きさ、内生胞子の形態及びその位置が異
なり、更ｌこ、Ｇ−１菌は、マンニットからの酸の生成
があるのに対し、上記いずれの菌種も、共（こ酸の生成
がない点において特徴的な差異を見出すことができる。

一方、前記Ｇ−２菌は、バチルス・マロカナス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ｍａｒｏｃｃａｎｕｓ）、バチルス。

アルカロフイラス（Ｂａｃｉ ｆｌｕｓ ａｌｃａｌｏ
ｐｈ −ｉ １ｕｓ）及びバチルス−７クロイデス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓｍａｃｒｏｉｄｅｓ）と類似している。

しかしながら、Ｇ−２菌は、硝酸塩を還元し、且つでん
ぷんの加水分解をするのに対し、バチルス・アルカロフ
イラスは、硝酸塩を環元しない点。

又バチルス・マクロイデスは、硝酸塩の還元及びでんぷ
んの加水分解のいずれも行わない点、Ｇ−２菌ｉ；ｊ、
バチルス・マロカナスと比較して、その菌体の大きさが
著しく異なる点、又Ｇ−２菌［ま、上記いずれの菌種と
も、その内生胞子の形態及び位置が異なる点１こ特徴的
な差異を見出すことができる。

以上の検索結果を総括すると、Ｇ−１菌、Ｇ２菌は、形
態その他の諸性質から、バチルス属に属する微生物とす
ることが妥当であるが、前記のとおり種々の特徴的な菌
学的性質及びｐＨ７，０〜１１．０の如き広範囲のアル
カリ性において生育する性質から判断して、明らか（こ
バチルス属１こ属する公知の菌種と区別されるため、こ
れらを新菌種として設定することが適当であると結論さ
れた。

次に培養条件として重要な点（バ培養液のｐＨである。

実験結果から前記Ｇ−１菌及びＧ−２菌を培養するに当
ってその生育繁殖はｐＨ条件Ｉこよって非常ｔこ影響を
受けるので、培地のｐＨは、はぼ７．０〜１１，０の範
囲から選ばれた値１こ調整することが必要であることが
確かめられた。

かくて上記の培養条件の下に前記微生物を接種し、適当
な条件、例えば、１８時間、３７℃で振盪培養を行ない
、次いで、１０，０００ｒ０ｍ、ｐ、で１０分間遠心分
離後、水洗し、再度遠心分離して菌体を集め、蒸留水で
洗浄後、１／ＩＯＭ、ｐＨ８，５のトリス緩衝液（Ｔｒ
ｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）で懸濁し、該懸濁液を超音波処
理して菌体内酵素系の抽出を行う。

この抽出液を再度、遠心分離法１こよって上澄液を分離
して該上澄液を菌体内酵素液とし、次いで硫酸アンモニ
ウム１こよる飽和分画を行い、次いでＤＥＡＥ−セルロ
ース、ウルトロゲンＡｃＡを用いてカラムクロマトグラ
フィー及びゲル済過を行うことｌこよって脱水素酵素の
精製標品を得ることができる。

なお、菌体の破砕（こ当っては超音波処理方法のみなら
ず、通常知られている物理的方法が適用し得ることは当
然である。

このよう（こして得られた脱水素酵素Ａ（以下、「本酵
素」という。

）は、以下Ｉこ記載する如く、最適作用ｐＨがはソ８．
５附近で、ガラフタル酸に対する基質特異性が極めて高
い性質を有する既知文献未載の新規脱水素酵素（ｄｅｈ
ｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）であることを証明された。

０本酵素の理化学的性質 １ 作用及び基質特異性 本酵素は、前記Ｇ−１又はＧ−２菌が、基質のガラフタ
ル酸を炭素源として発育した菌体より得られる脱水素酵
素であり、後述の酵素活性測定法（５）（こより、多数
の糖類及びその誘導体をこ対する本酵素の基質特異性を
調べたところ、第＊＊１表のとおりの結果が得られた。

この結果、特ｔこガラフタル酸１こ対して基質特異性が
極めて高いことが明らかにされた。

表中の数値は、酵素活性単位を示す。

２、最適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 １０−’Ｍ ） ＩＪス緩衝液を用い、３０°Ｃにて各
ｐＨＩこおける相対活性を調べたところ第１図のとおり
の結果が得られた。

この結果、本酵素の最適ｐＨは、はぼ８．５附近である
ことが明らかにされた。

又、本酵素液の種々のｐＨ溶液を３０℃、６０分間処理
した後、１０−１トリス緩衝液でｐＨ８，５とし、本酵
素の残存活性を調べたところ第２図のとおりの結果が得
られ、ｐＨ８〜９の範囲１こ安定ｐＨが存在することが
明らかｌこされた。

３、作用適温の範囲 本酵素液を１０１Ｍトリス緩衝液によりｐＨ８，５とし
、各温度ｔこおける残存活性を調べたところ、第３図の
とおりの結果が得られ、本酵素の最適作用温度は、４０
℃附近であることが明らか１こされた。

４、失活条件（温度安定性） 本酵素液を１０−１ＭトＩＪス緩衝液によりｐＨ８，５
をこ調整し、２０〜６０℃の各温度にて１０分間処理後
、残存活性を測定したところ第４図のとおりの結果が得
られ、本酵素の温度安定性は４５℃以下であることが明
らか１こされた。

５、力価の測定法 本酵素の酵素活性は、３Ｘ１０’ＭＮＡＤ又はＮＡＤＰ
Ｏ，３ｒｎｌ； ｐＨ８，５，１０−１Ｍトリス緩衝
液１ｍｌ；水１．Ｏｍｌ；酵素液０．１Ｔｌｌ； １０
−”Ｍガラフタル酸溶液０．５ｍｌ； ３Ｘ １０ ’
ＭＭｇＳＯ４・７Ｈ２０溶液０．１ ｍｌよりなる反応
系を用いて、３４０ｎｍの吸光度の増加を測定し、■ｎ
モルＮＡＤＨ２，ＮＡＤＰＨ２生生成／外分１単位（ｌ
ｕｎｉｔ）とした。

６、阻害、活性化および安定化 本酵素は、ピラゾール、Ｏ−フェナンスロリン、Ｐ−メ
ルクリ安息香酸によって阻害され、ＮＡＤ又はＮＡＤＰ
を補酵素とし、Ｍｇイオン１こより活性化される。

安定化は硫酸アンモニウム（こより行われる。

７、酵素の精製法 前記Ｇ−１又はＧ−２菌の培養菌体を、遠心分離法（こ
より集め、これをトリス緩衝液（ｐＨ８，５）に懸濁し
、超音波処理により菌体内酵素抽出を行う。

再度遠心分離後上澄液を硫酸アンモニウム１こよる飽和
画分の分画を行い、ＤＥＡＥ−セルロースでカラムクロ
マトグラフィーを行い、得られた溶出液をゲル濾過する
こと１こよって最終酵素標品とする。

８、分子量 ゲル濾過法１こよる本酵素の分子量は、約ｉｓｏ、ｏｏ
ｏと測定された。

９、本酵素は結晶化されていないので、結晶構造は明ら
かでない。

１０元素分析 本酵素の元素分析値は次のとおりである。

Ｃ：５２．０％、Ｈニア、１％、Ｎ：１４．５％以上の
とおり、本発明は、前記Ｇ−１又はＯ１菌の如きバチル
ス属ｔこ属するガラフタル酸資化利用性菌を培養し、そ
の培養液よりｐＨ８，５附近に最適ｐＨを有し、且つガ
ラフタル酸１こ対し極めて基質特異性の高い新規な脱水
素酵素及びその製造法を提供することを可能とするもの
である。

以下、本発明を実施例ｔこより詳述する 実施例 １ ガラフタル酸を炭素源とした場合の使用培地は、次の通
りである。

ガラフタル酸 １０ｇ ポリペプトン １ｇ 酵母エキス １ｇ ＫＨ２ＰＯ４１ｇ Ｍ ｇ Ｓ Ｏ４・７Ｈ２００，３，９ ＮＩ−（４ＮＯ３１ｇ Ｎａ２ＣＯ３１０ｇ 全容量 １１ （培地のｐＨは１０．０である） ３００のｍｌ容フラスコに上記の培地５０ｍＡをとり、
これを殺菌し、前記Ｇ−１菌（微工研菌寄第５９２５号
）を無菌的に接種して、３７℃で１８時間振盪培養を行
った。

得られた培養物を、］、 ０．００ Ｏｒ、ｐｏｍで１
０分間遠心分離後、水洗し、１０−ＩＭ） ＩＪス緩衝
液に懸濁した。

この懸濁液を、１０ｋｃ、１０分間超音波処理して菌体
内酵素の抽出を行い、１０．００ Ｏｒ、ｐ 、ｍで１
０分間再度遠心分離して上澄液を分離した。

この上澄液を硫酸アンモニウムを用いて０〜０．５飽和
画分。

次いで０．５〜０．７の飽和画分の分画を行い、後者の
両分を１０−１Ｍ１−リス緩衝液（１）Ｈ８，５）で平
衡化シたＤＥＡＥ−セルロースカラムを用い、カラムク
ロマトグラフィーを行った。

次いで、得られた溶出液を濃縮して、ウルトロゲンＡｃ
Ａ３４を用いてゲル濾過を行って本酵素の精製標品を得
た（収率３０％） 実施例 ２ 実施例１１こおいて、Ｇ−１菌に代えて、Ｇ−２菌（微
工研菌寄第５９２６号）を用いて同様（こ培養、精製を
行ったところ、収率２８％で本酵素標品を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明による酵素の最適ｐＨを示すグラフ、
第２図は、本発明１こよる酵素の安定ｐＨを示すグラフ
、第３図は、本発明による酵素の最適作用温度を示すグ
ラフ及び第４図は、本発明による酵素の温度安定性を示
すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の理化学的性質を有する新規脱水素酵素Ａ。 １）作用及び基質特異性 ガラフタ酸ｌこ対する基質特異性が特に高い。 ２）最適ｐＨ 最適ｐＨは、はぼｐＨ８，５附近である。 ３）安定ｐＨ 安定ｐＨは、ｐＨ８〜９の範囲である。 ４）作用適温の範囲 最適作用温度は、４０℃附近である。 ５）失活条件（温度安定性） ４５℃以下で安定であり、６０℃、１０分で完全ｌこ失
   活する。 ６）阻害、活性化および安定化 ピラゾール、０−フェナンスロリン、Ｐ−メルクリ安息
   香酸ｔこよって阻害される。 ＮＡＤ又はＮＡＤＰを補酵素としＭ、？イオンによって
   活性化される。 硫酸アンモニウムｌこより安定化される。 ７）分子量 分子量は、約１８０，０００（ゲル済過法）である。 ８）元素分析 Ｃ：５２．０％、Ｈニア、１％、Ｎ：１４．５％２ バ
   チルス属に属する新規脱水素酵素Ａ生産菌を培養し、そ
   の培養物より新規脱水素酵素Ａを分離する、採取するこ
   とを特徴とする新規脱水素酵素Ａの製造法。 ３ バチルス属ｌこ属する新規脱水素酵素Ａ生産菌がバ
   チルス・エスピー・Ｇ−１（Ｂａｃ ｉ ｌ １ｕｓｓ
   ｐ、Ｇ−１）（微工研菌寄第５９２５号）である特許請
   求の範囲第２項記載の製造法。 ４ バチルス属ｌこ属する新規脱水素酵素Ａ生産菌がバ
   チルス・エスピー・Ｇ−２（Ｂａｃ ｉ ｌ １ｕｓｓ
   ｐ 、 Ｇ−２） （’ｆ工研菌寄第５９２６号）で
   ある特許請求の範囲第２項記載の製造法。