JPS5815118B2 - 細菌菌体の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ガラフタル酸（ｇａ １ａｃｔａｒ ｉｃ
ａｃｉｄ）を含む培地で、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
）属に属するガラフタル酸質化性菌を培養して、その培
養物より培養菌体を回収することを特徴とする細菌菌体
の製造法に関するものである。

従来、細菌菌体の製造法において種々の微生物を用いた
例が報告されているが、ガラフタル酸を特異的に資化す
る菌種を用いて細菌菌体を回収する方法は知られていな
い。

本発明者らは、ガラフタル酸を特異的に資化する微生物
につき、多くの土壌より分離検索を行った結果、バチル
ス属に属するＧ−１菌及びＧ−２菌を分離することに成
功し、本発明の細菌菌体の製造法を完成するに至った。

ガラフタル酸（ムチン酸）は、ガラクトースの糖酸であ
り、木材などに含まれるガラクタン、及びガラクトース
、ラクトース、ラフィノース、ガラクトース、植物粘液
質などガラクトース又はその誘導体を含む物質を硝酸酸
化することにより大量に得られる物質である。

本発明方法に用いる微生物は、以下に詳述されるように
、ガラフタル酸を資化するものであり、バチルス属に属
する菌種であって、この菌種として、前記バチルス・エ
スピー・Ｇ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ −Ｇ−１）
（以下、「Ｇ−１菌」と称する）及びバチルス・エス
ピー・Ｇ−２（ＢａｃｉｉＩｕｓ ｓｐ−Ｇ−２） （
以下、「Ｇ−２菌」と称する）が挙げられる。

なお、前記Ｇ−１菌及びＧ−２菌の他にその自然的又は
人為的変異種もガラフタル酸の資化性を有する限り、本
発明方法に用い得ることは当然である。

前記Ｇ−１菌及びＧ−２菌は、昭和５６年３月１９日、
工業技術院微生物工業技術研究所へ、それぞれ、微工研
菌寄第５９２５号及び微工研菌寄第５９２６号として寄
託された。

前記Ｇ−１菌及びＧ−２菌は、次の菌学的性質を有する
。

なお下記の菌学的諸性質の試験及び分類方法はすべて「
バージニーズ マニュアル オブ デタミネイティブ
バクテリオロジー」（第８版、１９７４年） （Ｂｅｒ
ｇｅｙ’ ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔ−ｅｒｍｉ
ｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｅｔｅｒｉｏｌｇｙ （８ｔｈ
ｅｄｉ−ｔｉｏｎ、 １９７４ ） ）に準拠して行な
われた。

バチルス・エスピー・Ｇ−１菌の菌学的性質（ａ）形態
（肉汁寒天斜面培地） （１）細胞の大きさは、０，６〜０．８μ×２．０〜３
．０μの桿菌である。

（２）細胞の多形性はない。

（３）運動性があり鞭毛は周毛である。

（４）胞子の大きさは０．７μ×０．７μで、胞子のう
は細胞の端に形成される。

（５）ダラム染色性は変動性である。

（６）抗酸性は陰性である。

（ｂ） 培地における生育状態 （１）肉汁液体培地 菌環を形成し、沈渣を生じる。

菌体は灰白色を呈する。

（２）肉汁寒天平板培地 発育は旺盛で、菌体は灰白色を呈するが、色素は培地中
に拡散しない。

表面は平滑で、光沢があり、コロニーの周縁は金縁−波
状を呈する。

（３）肉汁寒天斜面培地 （２）と同様の生育状態を示し、拡布状に生育する。

（４）グルコース肉汁寒天平板培地 （２）と同様である。

（５）肉汁ゼラチン穿刺培地 ｐＨ７においては、ゼラチンを液化して、表面で発育し
、菌体は灰白色を呈する。

ｐＨ１０においては、ゼラチンを液化しない。

（６）ペプトン水 ｐＨ７およびｐＨ１０においては表面に菌環を形成して
、沈渣を生じる。

菌体は灰白色を呈するが、色素は培地中に拡散しない。

（７） リドマスミルク リドマス色素を僅かに赤変し、接置する。

（８）バレイショ培地 菌体は灰白色を呈する。

（ｃ）生理的性質 （１）硝酸塩の還元 還元する （２）脱窒反応 陰性 （３）メチルレッド（ＭＲ）試験 陰性 （４）フォーゲス・プロスカラエル（ｖｐ）反応陰性 （５）インドールの生成 陰性 （６）硫化水素の生成 陽性 （７）でんぷんの加水分解 陽性 （８）クエン酸の利用性（Ｋｏｓｅｒ培地及び（ｃｈ−
） ｒｉｓｔｅｎｓｅｎの培地） いずれも利用しない。

（９）無機窒素源（アンモニウム塩、硝酸塩、尿素等）
の利用性 利用する。

（１０） 色素の生成 色素は生成しない。

（１１） リドマス、メチレンブルー、２，６−ジク
ロルフェノール、インドフェノールなどの色素の還元 リドマスを僅かに赤変する他、変化なし。

（１２）ウレアーゼ 陰性 （１３）オキシダーゼ 陽性 α→ カタラーゼの生成 陽性 （１５）生育の範囲 生育し得る条件は、ｐＨ７、０〜１１．０、温度２５〜
４５℃で好気的であり、最適生育条件はｐＨ９，５近辺
、温度３７℃前後である。

（Ｌ６）酸素に対する態度 好気性 （１７）０−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ Ｌｅｉｔｓｏｎ法に
よる）酸化的並びに還元的に生育する。

好気的並びに還元的にガスは生成はない。

０８）牛乳の接置 接置する。

（１９）アンモ壬アの生成 陰性 （２０）ゼラチン、カゼインの液化 液化する。

（２１）塩化ナトリウムの耐性 ５％塩化ナトリウム上で生育するが、１０％以上の塩化
ナトリウム上では生育しない。

（ｄ） 炭素源の利用性 （１）Ｌ−アラビノース − （２）Ｄ−キシロース − （３）Ｄ−グルコース ＋ （４）Ｄ−マンノース ＋ （５）Ｄ−フルクトース ＋ （６）Ｄ−ガラクトース ＋ （７）ラクトース − （８）マルトース ＋ （９）サッカロース ＋ （１０）トレハロース ＋ （１υ Ｄ−ソルビット − ０２）Ｄ−マンニット ＋ （１３）イノジット − （１４）グリセリン ＋ （Ｉ５）デンプン ＋ （１６）ラフィノース − （１７）イヌリン − ０８）デキストリン ＋ ０９）繊維素 − （２０）サリシン ＋ 以上の炭素源より好気的並びに嫌気的にガスの生成はお
こなわない。

（注）：十 利用する（酸を生成する） −殆んど利用しない（酸を生成しない） バチルス・エスピー・Ｇ−２菌の菌学的性質（ａ）形態
（肉汁寒天斜面培地） （１）細胞の大きさは、０．６〜０．８μ×２．０〜３
．０μの桿菌である。

（２）細胞の多形性はない。

（３）運動性があり鞭毛は周毛である。

（４）胞子の大きさは０．７μ×０．７μで、胞子のう
は細胞の端に形成される。

（５）ダラム染色性は変動性である。

（６）抗酸性は陰性である。

（ｂ） 培地における生育状態 （１）肉汁液体培地 菌環を形成し、沈渣を生じる。

菌体は灰白色を呈する。

（２）肉汁寒天平板培地 発育は旺盛で、菌体は灰白色を呈するが、色素は培地中
に拡散しない。

表面は平滑で光沢ががあり、コロニーの周縁は金縁−波
状を呈する。

（３）肉汁寒天斜面培地 （２）と同様の生育状態を示し、拡布状に生育する。

（４）グルコース肉汁寒天平板培地 （２）と同様である。

（５）肉汁ゼラチン穿刺培地 ｐＨ７においては、ゼラチンを液化して表面で発育し、
菌体は灰白色を呈する。

ｐＨ１０においては、ゼラチンを液化しない。

（６）ペプトン水 ｐＨ７およびｐＨＩｏにおいては表面に菌環を形成して
沈渣を生じる。

菌体は灰白色を呈するが、色素は培地中に拡散しない。

（７） リドマスミルク 変化せず。

（８）バレイショ培地 菌体は灰白色を呈する。

（Ｃ） 生理的性質 （１） 硝酸塩の還元 還元する。

（２）脱窒反応 陰性 （３）メチルレッド（ＭＲ）試験 陰性 （４）フォーゲス・プロスカラエル（ＶＰ）反応陰性 （５）インドールの生成 陰性 （６）硫化水素の生成 陰性 （力 でんぷんの加水分解 陽性 （８）クエン酸の利用性（Ｋｏｓｅｒ培地及びＣｈｒｉ
−ｓｔｅｎｓｅｎの培地） いずれも利用しない。

（９）無機窒素源（アンモニウム塩、硝酸塩、尿素等）
の利用性 利用する。

００）色素の生成 色素は生成しない。

（１υ リドマス、メチレンブルー、２，６−ジクロル
フェノール、インドフェノールなどの色素の還元 変化なし。

（１２） ウレアーゼ 陰性 （１３）オキシダーゼ 陽性 ０４）カタラーゼの生成 陽性 （１５）生育の範囲 生育し得る条件は、Ｉ）Ｈ７、０〜１１．０、温度２５
〜４５℃で好気的であり、最適生育条件はｐＨ９，５近
辺、温度３７℃前後である。

σ６）酸素に対する態度 好気性 （１７）０−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ Ｌｅｉｆｓｏｎ法に
よる）酸化的並びに還元的に生育する。

好気的並びに還元的にガスの生成はない。

０８）牛乳の接円 接円しない。

（１９）アンモニアの生成 陰性 （２０）ゼラチン、カゼインの液化 液化する。

（２１）塩化ナトリウムの耐性 ５％塩化ナトリウム上で生育するが、１０％以上の塩化
ナトリウム上では生育しない。

（ｄ） 炭素源の利用性 （１）Ｌ−アラビノース − （２）Ｄ−キシロース − （３）Ｄ−グルコース − （４）Ｄ−マンノース − （５）Ｄ−フルクトース − （６）Ｄ−ガラクトース − （７）ラクトース − （８）マルトース − （９）ザツカロース − ００）トレハロース − （１１） Ｄ−ソルビット− （１２） Ｄ−マンニット − （１３）イノジット − （１４）グリセリン − （１５）デンプン − （１６）ラフィノース − （１７）イヌリン − ０８）デキストリン − 住９）繊維素 − （２０）サリシン 以上の炭素源より好気的並びに嫌気的にガスの生成はお
こなわない。

（注）：十 利用する（酸を生成する） −殆んど利用しない（酸を生成しない） 以上の微生物の菌学的諸性質から前記文献の分類方法に
従って使用微生物を検索するに当り、前記のＧ−１菌及
びＧ−２菌をバチルス（ＢａｃｉｉＩｕｓ）属に属する
公知の菌種と比較した。

前記Ｇ−１菌は、バチルス・ズブチリス （Ｂａｃｉｌｉｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・リ
ヘニフオーミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｉｉｃｈｅｎｉｆ
ｏｒｍｉｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス・アンソラシス（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バチルス・スリンジ
エンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｌｅｎ
−ｓｉｓ） ４ルス６メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｍｅｇａｔｅｒ−ｉｕｍ）、バチルス・ステアロサー
モフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒ
ｍｏｐｈｉｌｕｓ ）及びバチルス・フィルマス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）と類似している。

しかしながら、Ｇ−１菌は、アラビノース及びキシロー
スから酸の生成をせず、且つグルコースからのアセトイ
ンの生成がないのに対し、バチルス・ズブチリス及びバ
チルス・リヘニフオーミスは共に、アラビノース及びキ
シロースからの酸の生成が有り、且つグルコースからの
アセトインの生成がある点、バチルス・フィルマスは、
アラビノース及びキシロースから酸の生成がある点、Ｇ
−１菌は、でんぷんの加水分解を行い、且つ硝酸塩の還
元を行うのに対し、バチルス・プミルスは、いずれも行
わない点にそれぞれ特徴的な差異を見出すことができる
。

又、Ｇ−１菌はバチルス・セレウス、バチルス・アンソ
ラシス、バチルス・スリンジエンシス、バチルス・ステ
アロサーモフィラス及びバチルス・メガテリウムと比較
して、菌体の大きさ、内生胞子の形態及びその位置が異
なり、更に、Ｇ−１菌は、マンニットからの酸の生成が
あるのに封し、上記いずれの菌種も、共に酸の生成がな
い点において特徴的な差異を見出すことができる。

一方、前記Ｇ−２菌は、バチルス・マロカナス（Ｂａｃ
ｉ ｌ ｌｕｓ ｍａｒｏｃｃａｎｕｓ ）、バチルス
・アルカロフイイス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｃａｌｏ
ｐｈｉｌｕｓ）及びバチルス・マクロイデス（Ｂａｃｉ
Ｉ Ｉｕｓ ｍａｃｒ −ｏｉｄｅｓ）と類似してい
る。

しかしながら、Ｇ−２菌は、硝酸塩を還元し、且つでん
ぷんの加水分解をするのに対し、バチルス・アルカロフ
イラスは、硝酸塩を還元しない点、又バチルス・マクロ
イデスは、硝酸塩の還元及びでんぷんの加水分解のいず
れも行わない点、Ｇ−２菌は、バチルス・マロカナスと
比較して、その菌体の大きさが著しく異なる点、又Ｇ−
２菌は、上記いずれの菌種とも、その内生胞子の形態及
び位置が異なる点に特徴的な差異を見出すことができる
。

以上の検索結果を総括すると、Ｇ−１菌、Ｇ −２菌は
、形態その他の諸性質から、バチルス属に属する微生物
とすることが妥当であるが、前記のとおり種々の特徴的
な菌学的性質及びｐＨ７、０〜１１．０の如き広範囲の
アルカリ性において生育する性質から判断して、明らか
にバチルス属に属する公知の菌種と区別されるため、こ
れらの新菌種として設定することが適当であると結論さ
れた。

次に培養条件として重要な点は、培養液のｐＨである。

実験結果から前記Ｇ−１菌及びＧ−２菌を培養するに当
ってその生育繁殖はｐＨ条件によって非常に影響を受け
るので、培地のｐＨは、はぼ７．０〜１１．０の範囲か
ら選ばれた値に調整することが必要であることが確かめ
られた。

かくて上記の培養条件の下に前記微生物を接種し、適当
な条件、例えば、３０時間、３７℃で振盪培養を行ない
、次いで、１０．００ Ｏｒ、ｐ、ｍ。

で１０分間遠心分離後、水洗し、再度遠心分離して水分
を除去し、約８０℃で充分乾燥させることにより乾燥菌
体を得ることができる。

このようにして得られた前記の微生物Ｇ−１菌又はＧ−
２菌の菌体は、有機微量分析を行なった結果、分析値と
して十分な窒素含有度が得られ十分に蛋白源として活用
され得ることが確認された。

以下に、本発明方法の実施例を示す。

実施例 １ ガラフタル酸を炭素源とした場合の使用培地は、次の通
りである。

ガラフタル酸 １０ｇ ポリペプトン １ｇ 酵母エキス １ｇ Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ Ｍｇ５０４７Ｈ２００，３ｇ ＮＨ４ＮＯ３１ｇ Ｎａ２ＣＯ３１０ｇ 全容量 １ｇ （培地のｐＨ１０，０である。

）３００ｍｌ容フラスコに上記の培地５０ｍ１をとり、
これを殺菌し、前記Ｇ−１菌（微工研菌寄第５９２５号
）を無菌的に接種して、３７℃で３０時間振盪培養を行
った。

得られた培養物を、１０．００Ｏｒ、ｐｏｍ、で１０分
間遠心分離後、水洗し、再度遠心分離して水分を除去し
、約８０℃で充分乾燥して乾燥菌体を得た。

この乾燥菌体の収量は、培地１ｍＰｊ３り約１．５ｍｇ
であった。

なお、菌体量測定は、６１．０ｎｍの吸収を測定して、
０．Ｄ、（オプティカル・デンシティ−）の比較により
行った。

実施例 ２ 実施例１において、Ｇ−１菌に代えて、Ｇ−２菌（微工
研菌寄第５９２６号）を用いて同様に培養及び後処理を
行った結果、得られた乾燥菌体の収量は培地１ｍｌ当り
約１ｍｇであった。

各実施例によって得られたＧ−１菌及びＧ−２菌の菌体
について有機微量分析を行った結果、分析値として充分
な窒素含有度が得られ、充分にたん白源として活用され
得ることが確認された。

〔乾燥菌体の元素分析〕

炭素：４７．２５％ 水素ニア、２１％ 窒素： ８．７２％

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ガラフタル酸（ｇａｌａｃｔａｒｉｃ ａｃｉｄ）
   を含む培地で、バチルス（Ｂａｃｉ ｌ Ｉｕｓ ）属
   に属する前記ガラフタル酸の資化性菌を培養し、その培
   養物より培養菌体を回収することを特徴とする細菌菌体
   の製造法。 ２ バチルス属に属するガラフタル酸の資化性菌がバチ
   ルス・エスピー・Ｇ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ・Ｇ
   −１）（微工研菌寄第５９２５号）である特許請求の範
   囲第１項記載の製造法。 ３ バチルス属に属するガラフタル酸の資化性菌がバチ
   ルス・エスピー・Ｇ−２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ・Ｇ
   −２）（微工研菌寄第５９２６号）である特許請求の範
   囲第１項記載の製造法。 ４ ガラフタル酸を含む培地のｐＨを、はぼ７．０〜１
   １．０の範囲から選ばれた値に調整して培養を行う特許
   請求の範囲第１項又は第２項又は第３項記載の製造法。