JPS5857321A - 抗癌剤 - Google Patents
抗癌剤Info
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- JPS5857321A JPS5857321A JP15641481A JP15641481A JPS5857321A JP S5857321 A JPS5857321 A JP S5857321A JP 15641481 A JP15641481 A JP 15641481A JP 15641481 A JP15641481 A JP 15641481A JP S5857321 A JPS5857321 A JP S5857321A
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- cancer cells
- gra
- lectin
- cells
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な抗癌剤、更に詳細には癌細胞由来糖鎖関
連抗原（以下［ＧＲＡ Ｊと称する）を有効成分とする
抗癌剤に関する。
連抗原（以下［ＧＲＡ Ｊと称する）を有効成分とする
抗癌剤に関する。
免疫担当細胞、特に細胞性免疫の主役である’ｌ’ Ｉ
Ｊンパ球は移殖免疫の際異種細胞抗原にもとすく拒絶反
応を行うにもかかわらず、癌細胞に対してはこの免疫抑
制が認められないかあるいは弱い。従って、ａ細胞は破
壊されずに生体内で増殖し、ついには担癌宿主を死に至
らしめる。
Ｊンパ球は移殖免疫の際異種細胞抗原にもとすく拒絶反
応を行うにもかかわらず、癌細胞に対してはこの免疫抑
制が認められないかあるいは弱い。従って、ａ細胞は破
壊されずに生体内で増殖し、ついには担癌宿主を死に至
らしめる。
本発明者は、癌細胞に対する宿主の免疫応答並びに癌治
療への応用にりいて鋭意研究を行ってい九ところ、分化
した正常細胞には認められない癌細胞特異抗原中に、宿
主に免疫原として作用し、癌細胞と特異的な免疫応答を
成立させる免疫原性が極めて高いＧＲＡが存在すること
を見出した。そして、とのＧ）ＬＡを宿主に投与すると
、 ＧＩ’ＬＡに抗原特異的な細胞性免疫を誘導し、癌
細胞を破壊すること、すなわち、ＧＲＡは癌の治療及び
予防に優れた効果を奏することを見出し、本発明を完成
した。
療への応用にりいて鋭意研究を行ってい九ところ、分化
した正常細胞には認められない癌細胞特異抗原中に、宿
主に免疫原として作用し、癌細胞と特異的な免疫応答を
成立させる免疫原性が極めて高いＧＲＡが存在すること
を見出した。そして、とのＧ）ＬＡを宿主に投与すると
、 ＧＩ’ＬＡに抗原特異的な細胞性免疫を誘導し、癌
細胞を破壊すること、すなわち、ＧＲＡは癌の治療及び
予防に優れた効果を奏することを見出し、本発明を完成
した。
従って１本発明は、 ＧＲＡを有効成分とする抗癌剤を
提供するものである。
提供するものである。
本発明のＧＲＡは、ヒト又は動物の培養筋細胞、移殖癌
細胞、自然発生癌細胞、化学物質・ウィルス発生癌細胞
、手術組織由来癌細胞等のＧＲＡをもつ癌細胞より次の
如くして得ることができる。すなわち、まず該癌細胞か
ら細胞膜成分を分離し、次いで木端ガラクトースと特異
的に結合するレクチンＣＪ、Ｂ、０．２５０．８５１８
−８５２３（１９７５） ”、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ几ｅｓ、 Ｏｏｍｍ、 ６２ 。
細胞、自然発生癌細胞、化学物質・ウィルス発生癌細胞
、手術組織由来癌細胞等のＧＲＡをもつ癌細胞より次の
如くして得ることができる。すなわち、まず該癌細胞か
ら細胞膜成分を分離し、次いで木端ガラクトースと特異
的に結合するレクチンＣＪ、Ｂ、０．２５０．８５１８
−８５２３（１９７５） ”、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ几ｅｓ、 Ｏｏｍｍ、 ６２ 。
１４４（１９７５）； Ｚ、Ｉｍｍｕｎｉｔａｅｔｓ
ｆｏｒｃｈ、１３８，４２３−一 ４３３（１９６９）； Ｂｒ、Ｊ、Ｅｘｐ、 Ｐａｔｈ
ｏｌ、 ２７．２２８−２３６（１９４６）； Ｐｒ
ｏｃ、 Ｎａｔｈ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ
ＳＡ、 ７５゜Ｎａ５，２２１５−２２１９（１９７
８）； Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３゜１９６
−２０４（１９７４）； Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ
Ｒｅ５ｅａｃｈ、 ５１ 。
ｆｏｒｃｈ、１３８，４２３−一 ４３３（１９６９）； Ｂｒ、Ｊ、Ｅｘｐ、 Ｐａｔｈ
ｏｌ、 ２７．２２８−２３６（１９４６）； Ｐｒ
ｏｃ、 Ｎａｔｈ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ
ＳＡ、 ７５゜Ｎａ５，２２１５−２２１９（１９７
８）； Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３゜１９６
−２０４（１９７４）； Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ
Ｒｅ５ｅａｃｈ、 ５１ 。
１０７−１１８（１９７６））、例えはビーナツツレク
チン、ひまの実（Ｒｉｃｉｎｕｓ Ｃｏｍｍｕｎｉｓ）
レクチン等と処理して、該レクチンに結合させて分離す
ることにより容易に得ることができる。
チン、ひまの実（Ｒｉｃｉｎｕｓ Ｃｏｍｍｕｎｉｓ）
レクチン等と処理して、該レクチンに結合させて分離す
ることにより容易に得ることができる。
癌細胞膜成分の分離は、例えばホモジネート法、可溶化
剤を用いる可溶化法等の公知の方法によってなし得る。
剤を用いる可溶化法等の公知の方法によってなし得る。
よシ有利には例えばガン細胞を生理食塩水又は適当な緩
衝液中でホモジネートした後、沈殿部分を遠心分離等に
よシ採取し、これを生理食塩水又は緩衝液中に可溶化剤
を用いて溶解し、上清部分を遠心分離等により取り出す
ことにより実施できる。用いられる可溶化剤としては、
一般に細胞膜をｃ１１溶化できることの知られている各
種の界面活性剤例えば［トリトンＸ−１００Ｊ（第１光
純薬社Ｍ）、ｒＮＰ−４ｏＪ （シェル社製）、ジキト
ニン、尿素等の非イオン性界面活性剤、ドデシル硫酸ナ
トリウム（ＳＤＳ ）等の隘イオン界面活性剤等を例示
できる。
衝液中でホモジネートした後、沈殿部分を遠心分離等に
よシ採取し、これを生理食塩水又は緩衝液中に可溶化剤
を用いて溶解し、上清部分を遠心分離等により取り出す
ことにより実施できる。用いられる可溶化剤としては、
一般に細胞膜をｃ１１溶化できることの知られている各
種の界面活性剤例えば［トリトンＸ−１００Ｊ（第１光
純薬社Ｍ）、ｒＮＰ−４ｏＪ （シェル社製）、ジキト
ニン、尿素等の非イオン性界面活性剤、ドデシル硫酸ナ
トリウム（ＳＤＳ ）等の隘イオン界面活性剤等を例示
できる。
また上記により得られる細胞膜成分からのレクチンと結
合するＧＲ人の分離は、該ＧＲＡの性質を利用した通常
の物理化学的又は生化学的手段により行ない得る。該手
段としては例えばレクチンを含むカラム担体を利用する
アフィニティークロマトグラフィー、ＧＲＡ抗体等を用
いる免疫沈殿法、透析法、ゲルｐ過法、電気泳動法、ポ
リエチレングリコールやアセトン等の糖蛋白沈殿剤を用
いる物理的沈殿法等又は之等を適宜組み合せた方法を例
示できる。より有利にはレクチンを含むカラム担体を利
用したアフィニティークロマトグラフィーによるのがよ
く、該カラム担体は、例えはレクチンを不溶化支持体上
に固定化することにより容易に収得できる。ここでレク
チンの不溶化支持体上への固定は、従来公知の生体物質
の固定化方法に従い行なうことができる。これらのうち
でも臭化シアン活性化多糖体法、Ｎ−ヒドロキシサラン
ミドエステル法等を使用する固定化方法によるのが好適
である。このうち臭化シアン活性化多糖体法は、不溶性
支持体を臭化シアンで処理し、次いで得られる活性化物
をレクチンと緩和条件下にカップリングさせ、レクチン
を固定化する方法である。不溶性支持体を臭化／アンで
処理するに当っては、例えば水酸化す） ＩＪウム、炭
酸水素ナトリウム等の塩基性化合物を用いてｐＨ７，５
〜１２に保ち室温下、水、アセトニトリルや０．１Ｍ炭
酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨＮａ８７）、０．０１−
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨＨＩ３７）等のｐＨ７，５〜１２
の緩衝液等の溶媒中にて約１〜１２分間程度処理すれば
よい。不溶性支持体に対する臭化７７ンの使用量として
は通常およそ等ｌｉｔとするのかよい。ここで不溶性支
持体としては、生体物質一般に対する非特異的吸着が低
く、高い多孔性を有し、緩和条件下に生体物質を固定化
し得る官能基を有し、しかも化学的・物理的に十分安定
な従来公知の不溶性支持体をいずれも使用できる。例え
ばアミノエチルセルロース、カルホキ／メチルセルロー
ス、ブロモアセチルセルロースｓ ｐ ７ニリノセルロ
ース等のセルロース系支持体、セファデックス、ＣＭ−
セファデックス（ファルマシア社製）等の架橋デキスト
ラン系支持体、セファロース２Ｂ、セファロース４Ｂ１
セフアロース６Ｂ（ファル々シア社ｍ＞等のアガロース
系支持体等を挙げることができる。
合するＧＲ人の分離は、該ＧＲＡの性質を利用した通常
の物理化学的又は生化学的手段により行ない得る。該手
段としては例えばレクチンを含むカラム担体を利用する
アフィニティークロマトグラフィー、ＧＲＡ抗体等を用
いる免疫沈殿法、透析法、ゲルｐ過法、電気泳動法、ポ
リエチレングリコールやアセトン等の糖蛋白沈殿剤を用
いる物理的沈殿法等又は之等を適宜組み合せた方法を例
示できる。より有利にはレクチンを含むカラム担体を利
用したアフィニティークロマトグラフィーによるのがよ
く、該カラム担体は、例えはレクチンを不溶化支持体上
に固定化することにより容易に収得できる。ここでレク
チンの不溶化支持体上への固定は、従来公知の生体物質
の固定化方法に従い行なうことができる。これらのうち
でも臭化シアン活性化多糖体法、Ｎ−ヒドロキシサラン
ミドエステル法等を使用する固定化方法によるのが好適
である。このうち臭化シアン活性化多糖体法は、不溶性
支持体を臭化シアンで処理し、次いで得られる活性化物
をレクチンと緩和条件下にカップリングさせ、レクチン
を固定化する方法である。不溶性支持体を臭化／アンで
処理するに当っては、例えば水酸化す） ＩＪウム、炭
酸水素ナトリウム等の塩基性化合物を用いてｐＨ７，５
〜１２に保ち室温下、水、アセトニトリルや０．１Ｍ炭
酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨＮａ８７）、０．０１−
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨＨＩ３７）等のｐＨ７，５〜１２
の緩衝液等の溶媒中にて約１〜１２分間程度処理すれば
よい。不溶性支持体に対する臭化７７ンの使用量として
は通常およそ等ｌｉｔとするのかよい。ここで不溶性支
持体としては、生体物質一般に対する非特異的吸着が低
く、高い多孔性を有し、緩和条件下に生体物質を固定化
し得る官能基を有し、しかも化学的・物理的に十分安定
な従来公知の不溶性支持体をいずれも使用できる。例え
ばアミノエチルセルロース、カルホキ／メチルセルロー
ス、ブロモアセチルセルロースｓ ｐ ７ニリノセルロ
ース等のセルロース系支持体、セファデックス、ＣＭ−
セファデックス（ファルマシア社製）等の架橋デキスト
ラン系支持体、セファロース２Ｂ、セファロース４Ｂ１
セフアロース６Ｂ（ファル々シア社ｍ＞等のアガロース
系支持体等を挙げることができる。
斯くして得られる臭化シアン活性化支持体をレクチンと
カンプリングさせるに際しては、レクチンに対して臭化
７７ン活性化支持体を３０〜８０倍重量用い、適当な溶
媒、例えば０．１モル炭酸水素ナトリウム（０，５モル
塩化ナトリウム含有、ｐＨ８，４）水溶液中、通常θ〜
４０℃程度、好ましくは２〜８℃にて約１０〜２０時間
反応略せればよい。このようにしてレクチンを含むアフ
ィニティークロマトグラフィー用担体が製造される。
カンプリングさせるに際しては、レクチンに対して臭化
７７ン活性化支持体を３０〜８０倍重量用い、適当な溶
媒、例えば０．１モル炭酸水素ナトリウム（０，５モル
塩化ナトリウム含有、ｐＨ８，４）水溶液中、通常θ〜
４０℃程度、好ましくは２〜８℃にて約１０〜２０時間
反応略せればよい。このようにしてレクチンを含むアフ
ィニティークロマトグラフィー用担体が製造される。
上記レクチンを含むアフイニテイークロマトグラフィー
用担体を利用したクロマトグラフィーによれば、目的と
するＧＲＡが上記担体中のレクチンと結合してカラムに
捕集される。次いで該カラムに、例えばガラクトース、
末端にガラクトース腎を有する二糖類、オリゴサツカラ
イド等のレクチンと結合する物質を通して交換反応を行
うか、または高濃度の塩、チオシアン酸カリウム水溶液
、硼酸緩衝液等の吸着分離剤（溶出液）を通してＧＲＡ
を解離して収得する。
用担体を利用したクロマトグラフィーによれば、目的と
するＧＲＡが上記担体中のレクチンと結合してカラムに
捕集される。次いで該カラムに、例えばガラクトース、
末端にガラクトース腎を有する二糖類、オリゴサツカラ
イド等のレクチンと結合する物質を通して交換反応を行
うか、または高濃度の塩、チオシアン酸カリウム水溶液
、硼酸緩衝液等の吸着分離剤（溶出液）を通してＧＲＡ
を解離して収得する。
斯くして得られるＧＲＡはガラクトース末端を有する糖
タンパク、′糖ペプチド、糖脂質及び（又は）糖類を含
むものである。これは、必要に応じて凍結乾燥して保存
することもできる。
タンパク、′糖ペプチド、糖脂質及び（又は）糖類を含
むものである。これは、必要に応じて凍結乾燥して保存
することもできる。
このＧＲＡはそれ単独を有効成分とすることも、また他
の抗菌剤、制癌剤と併用することもできる。本発明のＧ
ＲＡを有効成分とする抗癌剤は、生薬でおるＧＲＡを効
果的に含有した状態でおれば、いかなる形態でもよいが
通常は、液状溶液、懸濁液又は乳濁液等として静脈、皮
下又は筋肉内に投与される。これらはまた使用前に適当
な担体の添加によって液状になし得る乾燥品として提供
することもできる。このような液状製剤はメチルセルロ
ースのような懸濁剤、レシチンのような乳化剤、メチル
−ｐ−ヒドロキ７ペンゾエートのような防腐剤又はそれ
自体でヒトや動物の免疫機能に悪影響を与えないような
安定剤、緩衝剤等を含有しうる。水性担体としては生理
食塩水、非水性担体としてはゴマ油等の植乙 物油、パラフィン等の鉱物油、スフワレ等の動植物油又
はプロピレングリコール等が使用できる。更にまた、斯
る液剤は、免疫促進のために適当なアジュバントを含有
させることもできる。
の抗菌剤、制癌剤と併用することもできる。本発明のＧ
ＲＡを有効成分とする抗癌剤は、生薬でおるＧＲＡを効
果的に含有した状態でおれば、いかなる形態でもよいが
通常は、液状溶液、懸濁液又は乳濁液等として静脈、皮
下又は筋肉内に投与される。これらはまた使用前に適当
な担体の添加によって液状になし得る乾燥品として提供
することもできる。このような液状製剤はメチルセルロ
ースのような懸濁剤、レシチンのような乳化剤、メチル
−ｐ−ヒドロキ７ペンゾエートのような防腐剤又はそれ
自体でヒトや動物の免疫機能に悪影響を与えないような
安定剤、緩衝剤等を含有しうる。水性担体としては生理
食塩水、非水性担体としてはゴマ油等の植乙 物油、パラフィン等の鉱物油、スフワレ等の動植物油又
はプロピレングリコール等が使用できる。更にまた、斯
る液剤は、免疫促進のために適当なアジュバントを含有
させることもできる。
アジュバントとしては１例えば、７０インド（Ｆｒｅｕ
ｎｄ ）の完全アジュバント、さらには動物用のサポニ
ン、ヒト用の水酸化アルミニウム等を挙げることができ
る。
ｎｄ ）の完全アジュバント、さらには動物用のサポニ
ン、ヒト用の水酸化アルミニウム等を挙げることができ
る。
本発明の抗癌剤は、癌患者に１回又は長期に亘って複数
回投与してその治療を行うことも、また癌に罹患のおそ
れのあるものに投与して防御を行うこともできる。
回投与してその治療を行うことも、また癌に罹患のおそ
れのあるものに投与して防御を行うこともできる。
ＧＲＡのＬＤｓｏ（マウス腹腔内）は糖量として５００
■／ｋｆ以上と毒性が低いので、広範囲の量において投
与できる。従って、本発明抗癌剤中のＧＲＡ濃度は特に
制限されないが、一般には糖量として０．００１〜１０
０μｆ／−が好ましい。投与量は、疾患の程度、年令、
性別によって異なるが、通常糖量として０．００１〜１
０００μｔ／陣／日を１〜数回に分けて投与するのが好
ましい。
■／ｋｆ以上と毒性が低いので、広範囲の量において投
与できる。従って、本発明抗癌剤中のＧＲＡ濃度は特に
制限されないが、一般には糖量として０．００１〜１０
０μｆ／−が好ましい。投与量は、疾患の程度、年令、
性別によって異なるが、通常糖量として０．００１〜１
０００μｔ／陣／日を１〜数回に分けて投与するのが好
ましい。
参考例１． （ＧＲＡの局在）
■ Ｆ’ＩＴＯｉｌ識レクチン（ＰＮＡ −ＦＩＴＯ）
の製造：ピーナツツレクチン（ＰＮＡ、 ＢＹ社製）１
０ｙを０．８５％ＮａＣ１の０． ＯＩ Ｍ−リン酸塩
緩衝液（ｐｉ−ｉ ７．２ ） ２−に溶解する。ＦＩ
ＴＯ（シグマ社製＞２Ｗを０．５Ｍ−重炭酸塩緩衝液（
ｐＨ−９，０）１−に溶解し、その０．５−を上記ＰＮ
Ａの緩衝液に加える。室温にて２時間攪拌後セファデッ
クスＧ２５（１０■×３００■、ファルマシア社＃りに
て分離し最初のピークを採取する。ＥＺＰ比−１，０ ■ 各ａｔ＠Ｊ細胞のＧＲＡ局在； 各種ヒト培養癌細胞１×ｌＯ個を０，８５％ＮａＣｌの
０．０５Ｍ−トリス塩酸緩衝液（ｐＨ−７，２）にて３
回遠心法にて洗浄後、上記■で得たＰＮＡ−ＦＩＴＯ（
２００μ２／−）を１００μを添加し、室温にて３０分
間靜装反応芒せる。反応終了後０．８５ ％ ＮａＣｌ
の０． ＯＩ Ｍ−リン酸塩緩衝液（ｐＨ−７，２）に
て３回洗浄後、細胞をガラススライド上にのせ、螢光顕
微装丁に検鏡を行なう。
の製造：ピーナツツレクチン（ＰＮＡ、 ＢＹ社製）１
０ｙを０．８５％ＮａＣ１の０． ＯＩ Ｍ−リン酸塩
緩衝液（ｐｉ−ｉ ７．２ ） ２−に溶解する。ＦＩ
ＴＯ（シグマ社製＞２Ｗを０．５Ｍ−重炭酸塩緩衝液（
ｐＨ−９，０）１−に溶解し、その０．５−を上記ＰＮ
Ａの緩衝液に加える。室温にて２時間攪拌後セファデッ
クスＧ２５（１０■×３００■、ファルマシア社＃りに
て分離し最初のピークを採取する。ＥＺＰ比−１，０ ■ 各ａｔ＠Ｊ細胞のＧＲＡ局在； 各種ヒト培養癌細胞１×ｌＯ個を０，８５％ＮａＣｌの
０．０５Ｍ−トリス塩酸緩衝液（ｐＨ−７，２）にて３
回遠心法にて洗浄後、上記■で得たＰＮＡ−ＦＩＴＯ（
２００μ２／−）を１００μを添加し、室温にて３０分
間靜装反応芒せる。反応終了後０．８５ ％ ＮａＣｌ
の０． ＯＩ Ｍ−リン酸塩緩衝液（ｐＨ−７，２）に
て３回洗浄後、細胞をガラススライド上にのせ、螢光顕
微装丁に検鏡を行なう。
結果は第１表のとおりである。尚供試癌細胞は倒れも公
知のものであり、新潟大学医学部第一病理より入手した
。
知のものであり、新潟大学医学部第一病理より入手した
。
第１表
参考例２ （ＧＩＬＡの調製）
■ 不溶化レクチン（ＰＮＡ−セファロース）の製造；
０ＮＢｒ −活性化セファロース４Ｂ（ファルマシア社
製）３ｆを１ ｓ Ｍ −ＨＣＩで充分に洗浄後、０．
１Ｍ−炭酸水素ナトリウＡ（ｐＨ−８，５）２００ｍに
懸濁し、ＰＮ人２０１１Ｉを含む０．０１ Ｍ−リン酸
塩緩衝液（ｐＨ＝７．７） ５−を加え、２５℃で待時
攪拌しながら２時間反応させてＰＮＡ−セファロースを
得る。
０ＮＢｒ −活性化セファロース４Ｂ（ファルマシア社
製）３ｆを１ ｓ Ｍ −ＨＣＩで充分に洗浄後、０．
１Ｍ−炭酸水素ナトリウＡ（ｐＨ−８，５）２００ｍに
懸濁し、ＰＮ人２０１１Ｉを含む０．０１ Ｍ−リン酸
塩緩衝液（ｐＨ＝７．７） ５−を加え、２５℃で待時
攪拌しながら２時間反応させてＰＮＡ−セファロースを
得る。
■ ＧＲＡの調製；
Ｈ） ＢＴ−１（バーキｙト’）ンバ膝）細胞１．３
Ｘ１０’個を生理食塩水で３回洗浄し％２％Ｎ−！Ｊ）
７Ｘ−１００Ｊ（和光紬薬社製）、０．８５ ％ＮａＣ
ｌ、 ２ ｔｎ Ｍ −０ａｃ１１．２ｍ Ｍ −Ｍｇ
Ｃ１＊の０．０１Ｍ−）ＩＪＸ塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．
４）３０−を加え、４℃で１５分間攪拌する。その後１
００．０００Ｘｆで２時間超遠心した。超遠心上清２８
−のうち、１４−をＯ，ｌチトリト ン Ｘ−１００、
０，８５％ Ｎａ１ｌ、 ２ｍＭ−ＣａＣｆ 、
２ｍＭ−ＭｇＣ１１のトリス−塩酸緩衝ｆｆｉ （ｐＨ
＝７．４ ）で平衝化したＰＮＡ−アカロースビーズ（
丸善社製）のアフィニティクロマト（φｏ５×１ ｃｍ
）に付す。同緩衝液で洗浄後、０．１Ｍ−ラクトース
、０．８５ ％ ＮａＣ１，２ｍＭ −Ｏａ（：ｌ、、
２ ｔｎＭ −ＭｇＣＩｇ ｓ ０． １
％ ） リ ト ン Ｘ−１００の０
．０１Ｍ−１リス−塩酸緩衝液（ｐＨ−７，４）で溶出
し、溶出部をｏ、 ８５ ％ Ｎ ａ ＣＩｓ ２ Ｉ
ＩＭ −ＭｇＣＩｇ、 ２ｓｘＭ−ＯａＣｌ、の０．０
１Ｍ−）リス−塩酸緩衝液で４８時間透析してＧＲＡ溶
液１７−得る。このもののタンパク量及び糖量をＦｏｌ
ｉｎ−Ｌｏｗｒｙ法及びフェノール硫酸法で測定した結
果、タンパク蓋は６４４μｍ、糖量は１２０μ２であっ
た。以下これをｌ’−ＧＲＡ−ＩＪと称する。
Ｘ１０’個を生理食塩水で３回洗浄し％２％Ｎ−！Ｊ）
７Ｘ−１００Ｊ（和光紬薬社製）、０．８５ ％ＮａＣ
ｌ、 ２ ｔｎ Ｍ −０ａｃ１１．２ｍ Ｍ −Ｍｇ
Ｃ１＊の０．０１Ｍ−）ＩＪＸ塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．
４）３０−を加え、４℃で１５分間攪拌する。その後１
００．０００Ｘｆで２時間超遠心した。超遠心上清２８
−のうち、１４−をＯ，ｌチトリト ン Ｘ−１００、
０，８５％ Ｎａ１ｌ、 ２ｍＭ−ＣａＣｆ 、
２ｍＭ−ＭｇＣ１１のトリス−塩酸緩衝ｆｆｉ （ｐＨ
＝７．４ ）で平衝化したＰＮＡ−アカロースビーズ（
丸善社製）のアフィニティクロマト（φｏ５×１ ｃｍ
）に付す。同緩衝液で洗浄後、０．１Ｍ−ラクトース
、０．８５ ％ ＮａＣ１，２ｍＭ −Ｏａ（：ｌ、、
２ ｔｎＭ −ＭｇＣＩｇ ｓ ０． １
％ ） リ ト ン Ｘ−１００の０
．０１Ｍ−１リス−塩酸緩衝液（ｐＨ−７，４）で溶出
し、溶出部をｏ、 ８５ ％ Ｎ ａ ＣＩｓ ２ Ｉ
ＩＭ −ＭｇＣＩｇ、 ２ｓｘＭ−ＯａＣｌ、の０．０
１Ｍ−）リス−塩酸緩衝液で４８時間透析してＧＲＡ溶
液１７−得る。このもののタンパク量及び糖量をＦｏｌ
ｉｎ−Ｌｏｗｒｙ法及びフェノール硫酸法で測定した結
果、タンパク蓋は６４４μｍ、糖量は１２０μ２であっ
た。以下これをｌ’−ＧＲＡ−ＩＪと称する。
（ロ） Ｏ，Ｈマウス乳癌細胞１×１０ 個を生理食
塩水で３回洗浄後、２１ト！Ｊ）ンｘ−ｉｏｏ。
塩水で３回洗浄後、２１ト！Ｊ）ンｘ−ｉｏｏ。
０．８５％ＮａＣ１，２ｍＭ−０ａＣＩ、、２ ｍＭ
−Ｍｇｃ＋。
−Ｍｇｃ＋。
の０．ＯＩＭ−）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．４）３
０−を加え、４℃で３０分間攪拌する。
０−を加え、４℃で３０分間攪拌する。
その後１００，０００Ｘｆで２時間超遠心し、その上清
を０．８５ ％ ＮａＣ１，２ｍＭ −Ｏａ ｃｌ＊、
２ｍＭ−ＭｇＣＩｇの０．０１Ｍ−）リス−塩酸緩衝液
（ｐＨ−７，４）で１Ｆｌｊ！、外透析する。この透析
内液をＩｍｍｅｒｓｉｂｌｅ −ＯＸ Ｕｌ ｒａ−ｆ
ｉ Ｉ ｔｅｒｓ（ミリボア社製）で３ｗ１ｔに濃縮
し、このうちの１−を０．００５チドリトンＸｌ００゜
０．８５％ＮａＣｌ、２ｍＭ −０ａＣＩ、、 ２ｍ
Ｍ−Ｍｇ（：：１２のトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．
４）で平衡化した前記参考例２−■のＰＮＡ−セファロ
ースのアフィニティクロマト（φ０．５Ｘ２の）に付す
。同緩衝液で充分に洗浄後、０．１Ｍ−ラクトース、０
．８５％ＮａＣ１１２ｍＭ−Ｃａ（：Ｉ、、２ ｍＭ
−Ｍｇ０１ｇ 、 ０．００５％ ト リ ト ン
Ｘ−１００のＱ、ＯＩＭ−）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ
−７，４）で溶出し、溶出部を０．８５％Ｎａ ｌ、２
ａＭ−ＣａＣ１１、２ｍＭ−ＭｇＣＩｇのＯｌＯＩＭ−
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝７゜４）にて４８時間透析
してＴ８ＧＡ溶液２ｓ１！を得る。このもののタンパク
量は１５６μり、糖量は９４μｔでめった。
を０．８５ ％ ＮａＣ１，２ｍＭ −Ｏａ ｃｌ＊、
２ｍＭ−ＭｇＣＩｇの０．０１Ｍ−）リス−塩酸緩衝液
（ｐＨ−７，４）で１Ｆｌｊ！、外透析する。この透析
内液をＩｍｍｅｒｓｉｂｌｅ −ＯＸ Ｕｌ ｒａ−ｆ
ｉ Ｉ ｔｅｒｓ（ミリボア社製）で３ｗ１ｔに濃縮
し、このうちの１−を０．００５チドリトンＸｌ００゜
０．８５％ＮａＣｌ、２ｍＭ −０ａＣＩ、、 ２ｍ
Ｍ−Ｍｇ（：：１２のトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．
４）で平衡化した前記参考例２−■のＰＮＡ−セファロ
ースのアフィニティクロマト（φ０．５Ｘ２の）に付す
。同緩衝液で充分に洗浄後、０．１Ｍ−ラクトース、０
．８５％ＮａＣ１１２ｍＭ−Ｃａ（：Ｉ、、２ ｍＭ
−Ｍｇ０１ｇ 、 ０．００５％ ト リ ト ン
Ｘ−１００のＱ、ＯＩＭ−）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ
−７，４）で溶出し、溶出部を０．８５％Ｎａ ｌ、２
ａＭ−ＣａＣ１１、２ｍＭ−ＭｇＣＩｇのＯｌＯＩＭ−
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝７゜４）にて４８時間透析
してＴ８ＧＡ溶液２ｓ１！を得る。このもののタンパク
量は１５６μり、糖量は９４μｔでめった。
これを以下ｒＧＲＡ−Ｍ−ＩＪと称する。
実施例１
（１）癖吉例２−■−仲）で得たＧＲＡ−Ｍ−１を生理
食塩水で希釈して、糖量１６０μｙ／ｗｔ、タンパク蓋
１．６μｔ／−になるように調製して、抗癌剤醜ｌとし
た。
食塩水で希釈して、糖量１６０μｙ／ｗｔ、タンパク蓋
１．６μｔ／−になるように調製して、抗癌剤醜ｌとし
た。
（！ｌ） Ｏ，Ｈ／ Ｈｅ自然発生乳癌の腫瘍塊を無
菌的に５ｍ角の大きさとなし、同系のＣ，Ｈ／Ｈｅマウ
ス（７週令、♂）１０匹の背面皮下にそれぞれ移植し、
７日目に腫瘍の定着及び増殖を確認した。
菌的に５ｍ角の大きさとなし、同系のＣ，Ｈ／Ｈｅマウ
ス（７週令、♂）１０匹の背面皮下にそれぞれ移植し、
７日目に腫瘍の定着及び増殖を確認した。
この５匹に、（ｉ）で調製した抗癌剤？１１１１を１日
３００μｔずつ２日間隔で皮下投与した。残りの５匹は
無処理コントロールとした。最初の投与から１０日後に
、手術によって腫瘍を摘出し、平均体積を求めると共に
病理組織学的観察を行った。
３００μｔずつ２日間隔で皮下投与した。残りの５匹は
無処理コントロールとした。最初の投与から１０日後に
、手術によって腫瘍を摘出し、平均体積を求めると共に
病理組織学的観察を行った。
腫瘍体積： 投与＄ ２２．３−（第１図）コ
ントロール １６２．７＋ａｊ（第２図）これは８６．
３チの腫瘍細少があっ たことを意味する。
ントロール １６２．７＋ａｊ（第２図）これは８６．
３チの腫瘍細少があっ たことを意味する。
コントロール群（第３図）は癌胞巣を形成し、組織型は
髄様腺管癌の像を呈し、腫瘍細胞の増殖が組織全体に見
られる。これに対して架剤投与群（第４図）は、かって
癌細胞の構築していた部位において、癌細胞が融解・壊
死におちいり、石灰化及び繊維化が起っており、一部わ
ずかに癌細胞を残すのみであり、本発明の抗癌剤の抗腫
瘍性が認められた。
髄様腺管癌の像を呈し、腫瘍細胞の増殖が組織全体に見
られる。これに対して架剤投与群（第４図）は、かって
癌細胞の構築していた部位において、癌細胞が融解・壊
死におちいり、石灰化及び繊維化が起っており、一部わ
ずかに癌細胞を残すのみであり、本発明の抗癌剤の抗腫
瘍性が認められた。
第１図は担癌マウスのＧＦＬＡ−Ｍ−１投与群の癌の状
態を示す写真、第２図は担癌マウスの無投与群の癌の状
態を示す写真、第３図は同無投与群の癌細胞組織の写真
、第４図は同投与群の癌細胞組織の写真である。 以上 第１１ノＩ Ｊ’ｆ１２１ノ」 １１３図 Ｉれ４図
態を示す写真、第２図は担癌マウスの無投与群の癌の状
態を示す写真、第３図は同無投与群の癌細胞組織の写真
、第４図は同投与群の癌細胞組織の写真である。 以上 第１１ノＩ Ｊ’ｆ１２１ノ」 １１３図 Ｉれ４図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 癌細胞由来糖鎖関連抗原を有効成分とする抗癌剤
。 ２、糖鎖関連抗原が、末端ガラクトースと特異的に勘合
するレクチンと結合する癌細胞膜成分である特許請求の
範囲第１項記載の抗癌剤。
Priority Applications (34)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15641481A JPS5857321A (ja) | 1981-10-01 | 1981-10-01 | 抗癌剤 |
| NZ201112A NZ201112A (en) | 1981-10-01 | 1982-06-29 | Preparation of a cancer-specific antigen and composition |
| PT75148A PT75148B (en) | 1981-10-01 | 1982-06-29 | Production process of the lymphocytes fighting against cancero us cells and anti-cancer agents containing them |
| NO822215A NO161601C (no) | 1981-10-01 | 1982-06-29 | Fremgangsmaate for fremstilling av et glykorelatert antigen |
| DK292182A DK292182A (da) | 1981-10-01 | 1982-06-29 | Fremgangsmaade til fremstilling af lymfocytter, der er cytotoksiske overfor cancerceller, samt glyco-associeret antigen til anvendelse derved |
| FI822325A FI77157C (fi) | 1981-10-01 | 1982-06-29 | Foerfarande foer framstaellning av glykobunden antigen och foerfarande foer framstaellning av foer kancerceller toxiska lymfocyter, som aer specifika mot denna antigen. |
| HU210282A HU190803B (en) | 1981-10-01 | 1982-06-29 | Lymphocytes against carcinoma cells, process for producing them, and citostatic active agents containing the said lymphocytes |
| NL8202638A NL8202638A (nl) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Kankercellenbestrijdende lymfocyten, werkwijze voor de produktie daarvan en antikankermiddelen, die deze lymfocyten bevatten. |
| DD82261475A DD221917A5 (de) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Verfahren zur herstellung von krebszellen-cytotoxischen lymphocyten |
| CH551284A CH655661B (ja) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | |
| ES514450A ES8402615A1 (es) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Procedimiento para producir linfocitos citotoxicos de celulas de cancer utilizables en el tratamiento de este. |
| FR8211489A FR2513882B1 (fr) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Lymphocytes luttant contre les cellules cancereuses, procede pour leur production et agents anticancereux contenant ces lymphocytes ou un antigene glyco-apparente |
| DD82241290A DD209577A5 (de) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Verfahren zur herstellung eines glykoverwandten antigens |
| MX8210163U MX7437E (es) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Procedimiento para producir un antigeno glico-relacionado |
| AU85458/82A AU554858B2 (en) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Glyco-related antigen from cancer cells |
| BE0/208493A BE893704A (fr) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Lymphocytes luttant contre les cellules cancereuses, procede pour leur production et agents anticancereux contenant ces lymphocytes ou un antigene glyco-apparente |
| CH398882A CH655660B (ja) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | |
| PH27516A PH22474A (en) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Cancer cell-combatting lymphocytes, process for the production thereof and anticancer agents containing said lymphocytes |
| CA000406449A CA1201988A (en) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Cancer cell-combatting lymphocytes, process for the production thereof and anticancer agents containing said lymphocytes |
| AR289864A AR230731A1 (es) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Procedimiento para preparar un antigeno glicorrelacionado y un procedimiento para producir linfocitos citotoxicos para celulas cancerosas a partir de dicho antigeno glicorrelacionado |
| IT48724/82A IT1189305B (it) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Linfociti che combattono cellule di cancro,procedimento per produrli ed agenti anticancerosi che li contengono |
| SE8204058A SE8204058L (sv) | 1981-10-01 | 1982-06-30 | Cancercellangripande lymfocyter, forfarande for framstellning derav och anticancermedel innehallande nemnda lymfocyter |
| IL66270A IL66270A (en) | 1981-10-01 | 1982-07-08 | Cancer cell-derived glyco-related antigen,its production and anticancer agent containing it |
| DE19823249568 DE3249568A1 (de) | 1981-10-01 | 1982-09-30 | Glykoverwandtes antigen, verfahren zu dessen herstellung und dessen verwendung zur bekaempfung von krebs |
| DE19823236298 DE3236298A1 (de) | 1981-10-01 | 1982-09-30 | Krebszellen bekaempfende lymphocyten, verfahren zu deren herstellung und anti-krebsmittel, welche die lymphocyten enthalten |
| GB08228160A GB2106935B (en) | 1981-10-01 | 1982-10-01 | Cancer cell-combatting lymphocytes process for the production thereof and anticancer agents containing said lymphocytes |
| CA000412670A CA1195269A (en) | 1981-10-01 | 1982-10-01 | Cancer cell-combatting lymphocytes, process for the production thereof and anticancer agents containing said lymphocytes |
| AT0363782A AT382080B (de) | 1981-10-01 | 1982-10-01 | Verfahren zur herstellung von glykoverwandtem antigen |
| KR8204464A KR880001758B1 (ko) | 1981-10-01 | 1982-10-04 | 암세포에 대항하는 임파구의 제조방법 |
| ES523253A ES8407392A1 (es) | 1981-10-01 | 1983-06-14 | "metodo de preparar antigenos glicorrelacionados". |
| IL75524A IL75524A0 (en) | 1981-10-01 | 1985-06-14 | Cancer cell-combating lymphocytes,their production and anticancer agents containing them |
| NO85853541A NO161128C (no) | 1981-10-01 | 1985-09-11 | Fremgangsmaate for fremstilling av kreftcelle-cytotokiske lymfocytter. |
| AT0354585A AT390002B (de) | 1981-10-01 | 1985-12-09 | Verfahren zur herstellung von krebszellen bekaempfenden lymphocyten |
| PH33696A PH23401A (en) | 1981-10-01 | 1986-04-23 | Cancer cell combatting lymphocytes,process for the production thereof and anti-cancer agents,containing said lymphocytes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15641481A JPS5857321A (ja) | 1981-10-01 | 1981-10-01 | 抗癌剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5857321A true JPS5857321A (ja) | 1983-04-05 |
| JPH0325408B2 JPH0325408B2 (ja) | 1991-04-05 |
Family
ID=15627222
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15641481A Granted JPS5857321A (ja) | 1981-10-01 | 1981-10-01 | 抗癌剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5857321A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5967224A (ja) * | 1982-10-08 | 1984-04-16 | Nippon Koutai Kenkyusho:Kk | 糖鎖関連抗原およびその製造法ならびにこれを有効成分とする抗癌剤 |
| JPS62128903U (ja) * | 1986-02-08 | 1987-08-15 | ||
| JPH05201212A (ja) * | 1991-08-09 | 1993-08-10 | Sumitomo Rubber Ind Ltd | 空気入りタイヤ |
| US5660655A (en) * | 1991-08-09 | 1997-08-26 | Sumitomo Rubber Industries, Ltd. | Tire and rim combination with exhaust ribs in tire bead |
| JP2023503713A (ja) * | 2020-01-19 | 2023-01-31 | ベイジン グリエクソ ジーン テクノロジー カンパニー リミテッド | 臨床サンプルからグリコシル化エクソソームを分離することに用いられるレクチン－磁性担体カップリング複合体 |
| JP2023503711A (ja) * | 2020-01-19 | 2023-01-31 | ベイジン グリエクソ ジーン テクノロジー カンパニー リミテッド | 臨床サンプルからグリコシル化エクソソームを分離することに用いられるレクチン－高分子担体カップリング複合体 |
-
1981
- 1981-10-01 JP JP15641481A patent/JPS5857321A/ja active Granted
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5967224A (ja) * | 1982-10-08 | 1984-04-16 | Nippon Koutai Kenkyusho:Kk | 糖鎖関連抗原およびその製造法ならびにこれを有効成分とする抗癌剤 |
| JPS62128903U (ja) * | 1986-02-08 | 1987-08-15 | ||
| JPH05201212A (ja) * | 1991-08-09 | 1993-08-10 | Sumitomo Rubber Ind Ltd | 空気入りタイヤ |
| US5318089A (en) * | 1991-08-09 | 1994-06-07 | Sumitomo Rubber Industries, Ltd. | Pneumatic tire |
| US5573612A (en) * | 1991-08-09 | 1996-11-12 | Sumitomo Rubber Industries, Ltd. | Tire and rim combination with exhaust means in tire bead |
| US5660655A (en) * | 1991-08-09 | 1997-08-26 | Sumitomo Rubber Industries, Ltd. | Tire and rim combination with exhaust ribs in tire bead |
| JP2023503713A (ja) * | 2020-01-19 | 2023-01-31 | ベイジン グリエクソ ジーン テクノロジー カンパニー リミテッド | 臨床サンプルからグリコシル化エクソソームを分離することに用いられるレクチン－磁性担体カップリング複合体 |
| JP2023503711A (ja) * | 2020-01-19 | 2023-01-31 | ベイジン グリエクソ ジーン テクノロジー カンパニー リミテッド | 臨床サンプルからグリコシル化エクソソームを分離することに用いられるレクチン－高分子担体カップリング複合体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0325408B2 (ja) | 1991-04-05 |
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