JPS5967224A - 糖鎖関連抗原およびその製造法ならびにこれを有効成分とする抗癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な癌細胞由来糖鎖関連抗原（以下１’−
ＧＲＡ、ｊと称する）、更に詳細には、（、ＲＡをもつ
癌細胞に特異的に作用して、該癌細胞を破壊する癌細胞
障害性リンパ球（以下「キラーセル」と称する）を誘導
することが可能なＧＲＡに関する。

免疫担当細胞、特に細胞性免疫の主役であるＴリンパ球
は移植免疫の際異種細胞抗原にもとすく拒絶反応を行う
にもかかわらず、癌細胞に対してはこの免疫抑制が認め
られないかあるいは弱い。

従って、癌細胞は破壊されずに生体内で増殖し、ついに
は担癌宿主を死に至らしめる。

本発明者は、癌細胞に対する宿主の免疫応答並びに癌治
療への応用について鋭意研究を行っていたところ、分化
した正常細胞には認められない癌細胞特異抗原中に、宿
主に免疫原として作用し、癌細胞と特異的な免疫応答を
成立させる免疫原性が極めて高いＧＲＡが存在すること
を見出した。

そして、このＧ　ＲＡ　ｋリンパ球に感作させると、Ｇ
　ＲＡ′ｆｆ：もつ癌細胞に対し特異的に作用するキラ
ーセルが得られ、これを宿主に投与すると、ＧＲＡを認
識し、ＧＲＡをもつ癌細胞に作用してそれを破壊するた
め、癌の治療及び予防において極めて唆れた効果を奏す
ることを見出し、本発明を完成した。

従って、本発明は、ＧＲＡ及びその製造法並びにこれを
有効成分として含有する抗癌剤を提供するものである。

本発明のＧＲＡは、ヒト又は動物の培養癌細胞、移植癌
細胞、自然発生癌細胞、化学物質・ウィルス発生癌細胞
、手術組織由来癌細胞等のＧＲＡをもつ癌細胞より次の
如くして得ることができる。

すなわち、まず該癌細胞から細胞膜成分を分離し、次い
で末端ガラクトース及び／又は末端Ｎ−アセチルガラク
トサミン結合性レクチンに結合する癌細胞由来の成分（
レクチンレセプター）と結合性を有する抗体（以下ｒＧ
ＲＡ抗体」と称する）と処理して、該ＧＲＡ抗体に結合
させて分離することにより得ることができる。史にこの
ＧＲＡは、末端ガラクトース及び／又は末端Ｎ−アセチ
ルガラクトサミン結合性レクチンと処理して、該レクチ
ンに結合させて分離することもできる。

末端ガラクトースと特異的に結合するレクチンとしては
、例えばビーナツツレクチン、ひまの実（Ｒｉｃｉｎｕ
ｓ　Ｃｏｒｒｒｎｕｎｉｓ　）　　レクチン、ダイズレ
クチン（ＳＢＡ）等を挙げることができる。

［Ｊ、Ｂ、Ｃ，２浜０．８５１８−８５２３（１９７５
）；’３ｉｏｃｈｅｍ、　１３ｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ、
　Ｃｏｍｍ、　６２　、１４４　（１９７５）　；ｚ、
■ｍｍｕｎｉｔａｅｔｓｆｏｒｃｈ　１３８．４２３−
４３３（１９６９）　　：Ｂｒ、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｐａｔｈ
ｏｌ　、　２７　、２２８−２３６　（１９４６）　；
ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｈ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ
Ａ＋７５＋Ａ５＋　２２１５−２２１９　（１９７８）
　；　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１３Ｊ９６−２０４
（１９７４）　：Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅ
ａｃｈ　、　５１　。

１０７−１１８（１９７６）’） 又、末端Ｎ−アセチルガラクトサミンと特異的に結合す
るレクチンとしては、例えばトリコスマメレクチン（Ｄ
ＢＡ　）、オサゲオレンジレクチン、ヒリツクスボマテ
イアレクチン、リママメレクチン、ダイズレクチン、バ
ウヒニアマメレクチン等を挙げることができる。

ＧＲＡ抗体としては、レクチンレセプターに対して結合
性を有するものであれば何れも使用することができ、例
えば、癌患者の自己抗体、レクチンレセプターを抗原と
して常法に従い動物に免疫して得られる抗血清、あるい
はレクチンレセプター陽性癌、：細胞もしくはその膜成
分、あるいはレクチンレセプターを抗原として免疫して
得られる牌細胞より、自体公知の方法（例えばＮａｔｕ
ｒｅ　、　２５６　。

４９５−４９７（１９７５）に記載の方法）に桑じて得
られるモノクロナル抗体等が使用される。

癌患者の自己抗体は、ＧＲＡ抗体陽性の患者より、常法
に従って採取した抗血清として、あるいはそれを塩析等
によシ精製した免疫グロブリン分画として使用すればよ
い。

レクチンレセプターは、本発明のＧＲＡの製造方法に準
じて、癌細胞膜成分よシ、末端ガラクトース及び／又は
末端Ｎ−アセチルガラクトサミン結合性レクチンと結合
性を有する成分を採取して製造したものを使用すればよ
い。免疫する哺乳動物は特に限定されず、一般には、ラ
ビット、マウス、ラット等が使用され、免疫も一般的方
法によって行なわれる。例えば上記レクチンレセプター
を生理食塩水等で適当濃度に希釈し、フロイントの補助
液等との懸濁液とし、動物に皮肉注射等によって投与す
る。投与は１〜２週間毎に数回行い、総投与量が、例え
はラビットで１μ２〜２０ｍ９程度になるようにするの
がよ＜、ＧＲＡ抗体は血清として採収される。

モノクロナル抗体は上記の如く免疫した動物の牌細胞と
ＭＳ−１、Ｐ３、Ｐ３−Ｕｌ、ＭＰＣ−１１、ＳＦ３、
Ｘ６３．６．５．３等の公知の骨髄腫細胞との融合によ
り得られるハイプリドーマより目的の抗体の産生株を検
索し、該ハイブリドーマの培養上清として、あるいはノ
・イブリドーマを、これに適合性のある動物に投与し増
殖させてその腹水から分離したものを使用すればよい。

癌細胞膜成分の分離は、例えばホモジネート法、可溶化
剤を用いる可溶化法等の公知の方法によってなし得る。

より有利には例えば癌細胞を生理食塩水又は適当な緩衝
液中でホモジネートした後、沈殿部分を遠心分離等によ
り採取し、これを生理食塩水又は緩衝液中に可溶化剤を
用いて溶解し、上清部分を遠心分離等により収り出すこ
とにより実施できる。用いられる可溶化剤としては、一
般に細胞膜を可溶化できることの知られている各種の界
面活性剤例えば［トリトンＸ−１００Ｊ（和光紬薬社製
）、ｒＮＰ−４０Ｊ（シェル社製）、ジキトニン、尿素
等の非イオン性界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム（
ＳＤＳ　’）等の陰イオン界面活性剤等を例示できる。

細胞膜成分からＧＲＡ抗体と結合するＧＲＡの分離は、
該ＧＲＡの性質を利用した通常の物理化学的又は生化学
的手段により行ない得る。該手段としては例えば上記抗
体を含むカラム担体を利用するアフィニティークロマト
グラフィ、免疫沈殿法、透析法、ゲル沖過法、′醒気泳
動法、ポリエチレングリコールやアセトン等の糖蛋白沈
殿剤を用いる物理的沈殿法等又は之等を適宜組み合せた
方法を例示できる。より有利には抗体を含むカラム担体
を利用したアフィニティークロマトグラフィーによるの
がよく、該カラム担体は、例えは上記抗体を不溶化支持
体上に固定化することにより容易に収得できる。ここで
抗体の不溶化支持体上への固定は、従来公知の生体物質
の固定化方法に従い行なうことができる。これらのうち
でも臭化シアン活性化多糖体性、Ｎ−ヒドロキシサクン
ミドエスデル法等を使用する固定方法によるのが好適で
ある。このうち臭化シアン活性化多糖体性は、不溶性支
持体を臭化シアンで処理し、次いで得られる活性化物を
ＧＲＡ抗体と緩和条件下にカップリングさせ、ＧＲＡ抗
体を固定化する方法である。

不溶性支持体を臭化シアンで処理するに当っては、例え
ば水酸化す）　ＩＪウム、炭酸水素ナトリウム等の塩基
性化合物を用いてｐＩ４７．５〜１２に保ち室温下水、
アセトニトリルや０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩向液（
ＰＨキ８．７）、０．０１Ｍリン酸緩衝液（Ｐ１１中７
．７）等のｐＨ７，５〜１２の緩衝液等の溶媒中にて約
１〜１２分間程度処理すればよい。不溶性支持体に対す
る臭化シアンの使用量としては通常およそ等本社とする
のがよい。ここで不溶性支持体としては、生体物質一般
に対する非特異的吸着が低く、高い多孔性を有し、緩和
条件下に生体物質を固定化し得る官能基を有し、しかも
化学的・物理的に十分安定な従来公知の不溶性支持体を
いずれも使用できる。例えばアミノエチルセルロース、
カルボキシメチルセルロース、ブロモアセチルセルロー
ス、ｌ”　　７ニリノセルロース等のセルロース系支持
体、セファデックス、ＣＭ−セファデックス（ファルマ
シア社製）等の架橋デキストラン系支持体、セファロー
ス２Ｂ、セファロース４　Ｂ。

セファロース６Ｂ（ファルマシア社製）等のアガロース
系支持体等を挙げることができる。斯くして得られる臭
化シアン活性化支持体−ｅＧＲＡ抗体とカップリングさ
せるに際しては、ＧＲＡ抗体に対して臭化シアン活性化
支持体を３０〜８０倍重量用い、適当な溶媒、例えば０
．１モル炭酸水素ナトリウム（０，５モル塩化ナトリウ
ム含有、ｐ）１８．４）水溶液中、通常０〜４０℃程度
、好ましくは２〜８℃にて約ｌＯ〜２０時間反応させれ
ばよい。このようにしてＧＲＡ抗体を含むアフィニティ
ークロマトグラフィー用担体が製造される。

上記ＧＲＡ抗体を含むアフィニティークロマトグラフィ
ー用担体を利用したクロマトグラフィーによれば、目的
とするＧＲＡが上記担体中のＧＲＡ抗体と結合してカラ
ムに捕集される。次いで該カラムに例えばＧＲＡ抗体と
結合する物質を通して交換反応を行うか、又は高濃度の
塩、チオシアン酸カリウム水溶液、硼酸緩衝液、塩酸−
グリシン緩衝液（ｐＨ＝　２．７　）等の吸着分離剤（
溶出液）を通してＧＲＡを解離して収得する。

上記交換反応においてＧＲＡ抗体と結合する物質として
は、例えばガラクトース、末端にガラクトースを有する
三糖類又はオリゴサツカライド等のガラクトース結合性
レクチンと結合する物質、Ｎ−アセチルガラクトサミン
、末端にＮ−アセチルガラクトサミンを有する三糖類又
はオリゴサツカライド等のＮ−アセチルガラクトサミン
結合性レクチンと結合する物質全例示できる。

かくして得られる本発明のＧＲＡは、これを末端ガラク
トース及び／又は末端Ｎ−アセチルガラクトサミン結合
性レクチンと処理して、該レクチンに結合させて分離す
ることもできる。該レクチン処理は、前記抗体処理に準
じて行なうことができ、より有利にはレクチンを含むカ
ラム担体金利用したアフィニティークロマトグラフィー
によるのがよい。該カラム担体は、市販のもの、あるい
は前記ＧＲＡ抗体の不溶化支持体上への固定化方法と同
様にして得たものを使用すればよい。まだ該レクチンを
含むアフィニティークロマトグラフィー用担体を利用し
たクロマトグラフィーも、前記ＧＲＡ抗体のアフィニテ
ィークロマトグラフィーと同様に行ないうる。

担体に吸着させたＧＲＡは交換反応又は吸着分離剤によ
って解離する。この交換反応には、ガラクトース結合性
レクチンを担体として用いた場合には、前記したガラク
トース結合性レクチンと結合する物質を、まだＮ−アセ
チルガラクトサミン結合性レクチンを担体として用いた
場合には、前記したＮ−アセチルガラクトサミン結合性
レクチンと結合する物質を使用すればよい。該ＧＲＡの
製造においては、癌細胞膜成分より上記レクチン処理に
より、レクチンと結合する成分を取得した後、これを、
前記ＧＲＡ抗体処理に付して、目的とするＧＲＡ’（ｒ
得ることもできる。

以上の如くして得られる本発明のＧＲＡは、ガラクトー
ス及び／又はＮ−アセチルガラクトサミン末端を有する
糖蛋白、糖脂質及び／又は糖類を含むものである。この
ＧＲＡは、必要ならば通常の方法によって更に精製する
とか、凍結乾燥することができる。

尚本発明のＧＲＡ抗体において、該抗体が癌患者の体液
中に自己抗体として存在することは、本発明者がはじめ
て見い出したものであり、該抗体は以下に示す方法によ
り確認（測定）され、該抗体陽性の患者より前記の如く
採取される。

更に本発明は、−上記のＧＲＡ抗体の測定法をも提供す
るものであり、該測定法は癌の診断、治療抵抗性、予後
の判定等に有用なものである。

該測定法は、レクチ／レセプター陽性癌細胞、好ましく
は主要組織適合性抗原（Ｍ、Ｈ，Ｃ）の表現されていな
い、同癌細胞を使用して、該癌細胞に結合する抗体を間
接ロゼツト法により観測することにより行なわれる。す
なわち、上記癌細胞全ＲＰＭＩ−１６４０培地等の通常
の細胞培養に使用される培地中に適当濃度、一般には３
　Ｘ　１０’個／ｄ培地程度に調製し、該細胞浮遊液に
癌患者血清を加え、４〜３７℃、３０分〜４時間程度反
応させる。癌細胞を上記培地で十分に洗浄後、牛赤血球
（ＯＲＢＣ）等の赤血球細胞、ポリスチレンビーズ、ラ
テックス等を結合したプロティンＡ又は同抗ヒト免疫グ
ロブリン抗体を加え、４〜３７℃で数分〜３０分程変速
心（約１０００回転）して反応させる。該細胞を常法に
従い固定染色してそのロゼツト形成細胞を観察すること
により患者血清中のＧＲＡ抗体の存在が確認される。す
なわちＧＲＡ抗体陽性患者血清を使用する場合には、癌
細胞に対してロゼツト形成が認められ、その形成率は、
ＧＲＡ抗体価として評価される。

前記ＧＲＡの製法において使用するＧＲＡ抗体は、該抗
体価の高い患者血清より採取したものが好ましい。

本発明のＧＲＡをリンパ球に感作させればキラーセルが
製造される。

ここで使用されるリンパ球は特に制限はガく、正常ある
いは担癌のヒト又は動物のリンパ球の何れをも使用でき
、具体例としては、例えば末梢血、骨髄、リンパ節、牌
臓、扁桃腺、胸腺等由来のものが挙げられる。これらの
リンパ球は常法に従い例えば物理的、化学的方法あるい
は表面膜法等によって単離され、キラーセルの誘導方法
に供し得る。

ＧＲＡによるリンパ球の感作は、ＧＲＡを含む培地中で
、リンパ球を１〜３日間、好ましくは２日間程度培養す
ることによって行われる。

培地としては、この種の細胞培養に用いられている一般
的な各種栄養培地を使用できるが、例えばＲＰＭ１１６
４０培地、イーグルＭＥＭ培地等にヒト血清、ウシ胎児
血清（Ｆｅ２）、仔ウシ血清、ウマ血清等を加えたもの
が好ましい。培地に加えられるＧＲＡは、通常リンパ球
Ｉ　Ｘ　Ｉ　Ｏ’個／ｍｌに対し、蛋白量として０．１
〜１０００　ｎｆＰ／ｒｎｌ。

特に１〜５００Ｊ　／ｍｌｌが好ましい。

培養は常法に従って、例えばｐＨ７，２付近で、３７℃
付近の温度で行われる。

斯くして得られるキラーセルは、Ｔ細胞増殖因子（ＴＣ
ＧＦ、ＩＬ−２）を含む上記培地で、無制限に増殖させ
ることができる。この場合、通常の限界希釈法により更
にキラーセルのクローニンの選別培養を行ってもよい。

キラーセルは、例えば液体窒素中に保存すれば、長期間
安定に保存することができる。

斯くして製造されるキラーセルは、実質的に正常リンパ
球でありＧＲＡに特異的な細胞障害活性を有することに
おいて特定される。これらのキラーセルは自ら分譲可能
な状態に保持しである。

上記の如くして得られる本発明のＧＲＡは抗癌剤として
有用であり、このＧＲＡはそれ単独を有効成分とするこ
とも、また他の抗菌剤、制癌剤と併用することもできる
。本発明のＧＲＡを有効成分とする抗癌剤は、生薬であ
るＧＲＡを効果的に含有した状態であれば、いかなる形
態でもよいが通常は、液状溶液、懸濁液又は乳濁液等と
して静脈、皮下又は筋肉内に投与される。これらはまた
使用前に適当な担体の添加によって液状になし碍る乾燥
品として提供することもできる。このよう寿液状製剤は
メチルセルロースのような懸濁剤、レシチンのような乳
化剤、メチル−ｐ−ヒドロキシベノゾニートのような防
腐剤又はそれ自体でヒトや動物の免疫機能に悪影響を与
えないような安定剤、緩衝剤等を含有しうる。水性担体
としては生理食塩水、非水性担体としてはゴマ油等の植
物油、パラフィン等の鉱物油、スクワレン等の動植物油
又はプロピレングリコール等が使用できる。

更にまた、斯る液剤は、免疫促進のために適当なアジュ
バントを含有させることもできる。アジュバントとして
は、例えば、７０インド（Ｆｒｅｕｎｄ　）の完全アジ
ュバント、さらには動物用のサポニン、ヒト用の水酸化
アルミニウム等を挙げることができる。

該抗癌剤は、癌患者に１回又は長期に亘って複数回投与
してその治療を行うことも、また癌に罹患のおそれのあ
るものに投与して防御を行うこともできる。

ＧＲＡのＬＤｓｏ　（マウス腹腔内）は糖量として５０
０■／に９以上と毒性が低いので、広範囲の量において
投与できる。従って、抗癌剤中のＧ　ＲＡ濃度は特に制
限されないが、一般には糖量として０．００１〜１００
ｔｔｔ／ｍｌが好ましい。投与（ｔｉ、Ｊ：、疾患の程
度、年令、性別によって異なるが、通常糖量として０．
００１〜１０００μｆ／却／日を１〜数回に分けて投与
するのが好ましい。

又、上記の如くして得られるキラーセルも抗癌剤として
有用であシ該抗癌剤は、この種の血液製剤に使用される
担体と共に注射剤とするのが好ましい。担体は特に限定
されないが、血液と等張であるもの、特に生理食塩水が
好適である。製剤化に当っては、キラーセルは生理食塩
水等で充分に洗浄して上記培地を除去した後、担体中に
浮遊させるのが好ましい。

当該製剤中のキラーセル濃度は特に制限されないが、一
般には１０５〜１０９１１１／ｄが好ましい。またキラ
ーセルは１０８個／マウス（腹腔内）投与で毒性は認め
られない。投与量は、疾患の程度、年令、性別によって
異なるが、通常１０５〜１０１２個／醇／日’に１〜数
回に分けて投与するのが好ましい。

次に、実施例、参考例、試験例及び比較例を挙げて示す
が、本発明はこれらに限定されるものではない。

参考例１　（０ＲＢＣ−プロティンＡ）ＯＲＢＣを０．
８５　％　ＮａＣ１の０．０１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ
＝　７．２　）　Ｃ以下ＰＢＳ）にて３回遠心洗浄（２
０００回転１０分）し、沈渣で５　Ｘ　１０９個に調製
する。ｌ　Ｔｎ９／　ｍｌ生食液のプロティンＡ（ファ
Ａ／　？　シア社）０．４５ＷＬｌ及びｉ　ｍｙ　／　
ｍｌ生食液ＯＣｒＣｌ３　・６　Ｈ２Ｏ０，５ｍｌを加
え、室温にて１ｏ分間攪拌する。細胞をＲＰＭＩ　−１
６４０培地に２．３回洗浄後、同培地２５ｍ１に浮遊さ
せ（２Ｘ　１０”個／　ｍｌ　）　４℃下に保存した。

参考例２（ＧＲＡ抗体の測定） 培養癌細胞Ｄａｕｄｉ　ｔＲＰＭＩ　−１６４０培地で
２回遠心洗浄（１０００回転、１ｏ分）後、同培地で３
　Ｘ　１０’個／―に調製する。その１００μノを試験
管に取ジ、癌患者血清１００μｌを加えて、４℃で１時
間反応する。細胞を同培地で同様に２回洗浄後、沈渣に
参考例１で得た０ＲＢＣ−プロティンＡの１００μｌを
加え、攪拌後、１ｏｏｏ回転で５分間遠心する。遠心後
かるく攪拌し、グルタルアルデヒド及びクマーシー・ブ
リリアント・ブルー（ＣＢ１３）にて固定染色し、培養
細胞に対する０ＲＢＣ−プロティンＡのロゼツト形成率
を測定する。結果を第１表に示す。

以下余白 第１表 参考例３ 参考例２におけるＤａｕｄｉの代りにレクチンとの結合
性の異なる各種癌細胞を使用し、同様にしてロゼツト形
成率を測定した。尚患者血清は第１表の１ａｌｌの患者
血清を使用した。その結果は第１図のとおりである。こ
れより該抗体はＰＮＡレセプターと強く反応することが
判る。

参考例４ （イ）　レクチンレセプター陽性癌細胞の測定■　ＦＩ
ＴＣ標識レクチン（ＰＮＡ−ＩＩＴｃ）の製造 ビーナ７７ｔｚ”チア　（ＰＮＡ　、ＢＹ社製）１０■
をＰＢ５２ｍに溶解する。ＦＩＴＣ（シグマ社製）２岬
を０．５Ｍ−重炭酸塩緩衝液（ｐＨ＝９．０　’）１−
に溶解し、その０５ゴを上記Ｉ）　Ｎ　Ａの緩衝液に加
える。室温にて２時間攪拌後セファデックスＧ２５　（
１０ｍｍＸ　３００ｗｎ、ファルマシア社製）にて分離
し最初のピークを採取する。ｌ”　／　Ｐ比＝１．０ ■　ＦＩＴＣ標識レクチン（Ｊ）ＢＡ　−１”　Ｉ　Ｔ
Ｃ）の製造： Ｉ）ＨＡ（ＥＹ社製）を使用して、上記■と同様［［、
−（］）ＢＡ−Ｆ’　Ｉ　ＴＣヲ得る。Ｆ／Ｐ比＝ｏ、
９■　各種癌細胞のレクチンレセプター：各種癌＃］　
Ｊｉｉ４　］　Ｘ　１０６個を０．８５％Ｎａ　ＣＬ　
Ｏ）　０．０５Ｍ−トリス塩酸緩衝液（ｐＬＩ−７，２
）　Ｋて３回遠心法にて洗浄後、上記■で得たＰＮＡ−
１；’ＩＴＣ又は上記■で得たＤＥＡ−ＦＩ”ｆ’Ｃ又
は５１３Ａ−１ｉ’ＩＴＣ（ＥＹ社’Ｊ）　（２００ｔ
ｔｆ／ｍｌ）を１００μを添加し室温にて３０分間靜装
反応させる。反応終了後ＰＢＳにて３回洗浄後、細胞を
ガラススライド上にのせ、螢光顕微鏡下に検鏡２行な５
゜結果は第２表のとおりである。尚供試癌細胞は何れも
公知のものであり、新潟大学医学部第一病理から入手し
た。

以下（−白 ■　各種癌細胞（手術片）のレクチンレセプター二癌患
者の手術片より得た癌組織をステンレスメツシュ（≠１
５０）に通し、細胞浮遊液を得、これを２ｍ八へ−Ｃａ
Ｃｚ、　、　２ｒｎｌｖ１−ＭｇＣ１，及び０．８５％
ＮａＣ１の０．０１　Ｍ　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝
７．４　）にて２回洗浄する。この５Ｘ１０’個を上記
緩衝液１００μｔに浮遊し、ＰＮＡ−ＦＩＴＣ又はＤＢ
Ａ−ＩＩＴｃ（２００μり／ゴ）を１００／ｌｔ添加し
、室温にて２０分間インキュベートする。反応終了後Ｐ
］＝ｌＳにて３回洗浄後、細胞をガラススライド上にの
せ、螢光顕微鏡下に検鏡を行った。結果を下記第３表に
示す。尚、癌患者の手術片は、いずれも関西医科大学よ
り得た。第３辰中、レクチンレセプターの局在は以下に
示す。

＋；細胞表面にレクチンレセプターが表現されている。

一；細胞表面にレクチンレセプターが表現されていない
。

第　　３　　表 ０う　レクチンレセプターの製造 ■　不溶化レクチン（ＰＮＡ−セファロース）の製造： ＣＮＢｒ−活性化セファロース４Ｂ（ファルマシア社製
）３２をｌ　ｍＭ　−ＨＣＬで充分に洗浄後、０．１Ｍ
＝炭酸水素ナトリウム（ＰＨ＝８．５）２００ｍｌに懸
濁ｌ−１ＰＮＡ２０ダを含む０．０１　Ｍ−リン酸塩緩
衝液（１）Ｈ＝−７，７）　５　ｍｔを加え、２５℃で
時々攪拌しながら２時間反応させてＰＮＡ−セファロー
スを得る。

■　上記■において、ｌ）　Ｎ　Ａの替わりにＤＢＡを
使用して同様の操作によりＤＢＡ−セファロースを得る
。

■　ＢＴ−１（バーキットリンパ腫）細胞１．３×１０
”個を生理食塩水で３回洗浄し、２％「トリトンＸ−１
００Ｊ（和光紬薬社製）、０．８５％Ｎａ　Ｃ１，２ｍ
Ｍ−ＣａＣ４，２ｍＭ　−ＭｇＣＬ−、の０．ＯＩＭ−
）リス塩酸緩衝液（ｐｆ（＝７．４　）　３０−を加え
、４℃で１５分間攪拌する。その後１００，０００Ｘｆ
で２時間超遠心した。超遠心上清２８−のうち、１４−
を０、１　％　ト　リ　ト　ン　Ｘ　−ｌ　ＯＯ、０８
５％ＮａＣ１。

２ｍＭ−ＣａＣ４，２ｍＭ−ＭｇＣ４，のトリス−塩酸
Ｍ衝液（ｐｉ−１−７，４）で平衡化したＰＮＡ−アガ
ロースビーズ（丸善社製）のアフイニテイクロマト（φ
０．５　Ｘ　１　ｃｍ　）に付す。同緩衝液で洗浄後、
（１１Ｍ−ラクトース、０．８５％Ｎａ　ＣＬ、２ｍＭ
、−Ｃａ　Ｃｔ、、２ｍＭ−ＭｇＣ６２、０，１％　ト
　　リ　　ト　　７Ｘ−１００の　０．０　１Ｍ−）リ
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．４．　）で溶出し、溶出部
を０．８５％ＮａＣＺ１２ｒｎＭ　ＭｇＣＬ−２，２ｒ
ｎＭ　ＣａＣ４２の０．０１Ｍ−）リス−塩酸緩衝液で
４８時間透析してレクチンレセプター溶液１７ｄ？！３
る。このもののタンパク量及び糖量をＩｉ’ｏ　Ｉ　ｉ
　ｎ−Ｌｏｗｒｙ法及びフェノール硫酸法で測定した結
果タンパク量は６４４μＶ、糖量は１２０μ２であった
。以下これを「レセプター−１」と称する。

■　Ｃ，Ｈマウス乳癌細胞（八４Ｍ’ｌ’）ＩＸＩＯＩ
０個を生理食塩水で３回洗浄後、２％トリトンＸ−１０
０，０８５％ＮａＣｔ、２ｍＭ−ＣａＣｔ、、２ｍＭ−
ＭｇＣ４の０．０１Ｍ−）リス−塩酸緩衝液（Ｉ）Ｈ＝
７．４　）　３０−を加え、４℃で３０分間攪拌する。

その後１００，０００×１で２時間超遠心し、その上清
を０．８５％ＮａＣＬ、２ｍＭ−ＣａＣＬ、、２　ｍＭ
　Ｍｇ　ＣＬｔの０．ＯＩＭ−）リス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝７４　）で１晩透析する。この透析内液をＩｍｍｅ
ｒｓｉｂｌｅ−ＣＸｕｌｔｒａ−ｆｉｌｔｅｒｓ　（ミ
リボア社製）で３−に濃縮し、このうち１−を０．００
５％トリドアＸ−１００，０，８５％ＮａＣＺ　、　２
ｍＭ−ＣａＣ１，，２ｍＭ−Ｍｇ　ＣＬｔのトリス−塩
酸緩衝液（ｐＨ＝７．４）で平衡化したＰＮＡ−セファ
ロースのアフイニテイクロマト（φ０．５　Ｘ　２　ｏ
ｎ　）に付す。同緩衝液で充分に洗浄後、Ｏ，ｌ　Ｍ−
ラクトース、０．８５％ＮａＣＬ、２ｍＭ−ＣａＣｔ、
、２ｒｎＭ　−Ｍ　ｇ　Ｃｔｓ、Ｏ，ＯＯ５％トリトン
Ｘ−１００の０．ＯＩＭ−）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝
　７．４　）で溶出し、溶出部を０８５％ＮａＣ４゜２
ｍＭ−ＣａＣ１，，２ｍＭ−ＭｇＣ４の０．０１　Ｍ　
−）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．４　）にて４８時間
透析してレクチンレセプター溶液２−を得る。このもの
のタンパク量は１５６μｍ、糖量は９４μｔであった。

これを以下「レセプター−Ｍ−ＩＪと称する。

■　Ｋ　Ａ　Ｔ　Ｏ−ｎ［細胞、約１２０　ｆ　（湿重
量）をＰＢＳｌｏｏ−中、粉砕機（Ｗａｒｉｎｇ　ｂｌ
ｅｎｂｅｒ　；日本精機社製）を使用してホモジナイズ
する。遠心分離（１００，０００ｆＸ１時間）した沈渣
な、２％　ト　リ　ト　ン　ｘ−ｉｏｏ　　、　　０．
　１　５　　Ｍ　ＮａＣ＃）　　０．　０　１　　Ｍト
リス、塩酸緩衝液（ｐＨ−＝７５　）　１００−に加え
、攪拌する。遠心分離（１００，０００ｆＸ１時間）シ
だ上清を、０．０１５％トリドアＸ−１００，０、１５
Ｍ　ＮａＣ１の０．０１Ｍ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ−７
６）で平衡化したＰＮＡ−セファロースのアフイニテイ
クロマト（φ０．８　Ｘ　１５　ｔｙｎ　）に付す。同
緩衝液５０−で洗浄後、０．１Ｍラクトースを含む同緩
衝液で溶出し、これを０．８５％ＮａＣＬ水溶液にて透
析してレクチンレセプター溶液を得る。これはセファデ
ックス（ファルマシア社製）にて濃縮後−２０℃に保存
した。蛋白量２．０１１ｆ、糖量０．８■これを「レセ
プター−２」とする。

■　上記■と同様にして下記第４表のレクチンレセプタ
ーを夫々得た。

１）１下介白 第　　４　　表 ■　上記■において、Ｎ　Ａ　Ｔ　Ｏ−１に変えてＭＩ
（Ｎ−４５を約２９２、ＰＮＡ−セファロースカラムに
変えてＤＢＡ−セファロースカラムを使用して、ラクト
ースの変わりにＮ−アセチルガラクトサミンで溶出した
以外は同様の操作によりレクチンレセプターを得る。蛋
白量０．０３■糖量００１■。

これをルセブター−８」とする。

■　上記■で得たレセプター−３の５−をＤＢＡ−セフ
ァロースカラムに付し、０．Ｏ］、５％トリトンＸ−１
００，２ｍＭ−ＭｇＣ４，２ｍＭ−ＣａＣｔ、　、　０
．８５％ＮａＣ１の０．　ＯＩ　Ｍ　）　’Ｊスス。酸
緩衝液で溶出して４　ｍｌ’ずつのフラクションを得る
。次いでＱ、　ｌ　Ｍ　Ｎ−アセチルガラクトサミンを
含む上記緩衝液で溶出してレクチンレセプター溶液を得
ろ。これ乞レセプター−３−ｃ’とする。又上記フラク
ション随１〜３をレセプター−３−Ａ、フラクション隊
４〜１２をレセプター−３−Ｂとする。

（−”４ｉ前記で得た各レクチンレセプターのＳＤＳゲ
ル電気泳動をＦａｉｒｂａｎｋｓ等の方法［Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ。

Ｖｏｌ、１０、ｐ２６０６、（１９７１））に準じて行
った。結果を第２〜６図に示す。

尚、図中、各番号は夫々以下に示すとおりである。

第２及び第３図中 １・・−スタンダード ２・・・レセプター−Ｍ−３ ３・・・　　　　〃−７ ４・・・　　　　Ｉ／　　　　　−Ｊ ５　・・・　　　　〃−２ 第４図中 １・・・スタンダード ２・・・レセプター−Ｍ−２ ３・・・　　／ｆ−６ ４・・・　　〃−５ Ｍ５図中 １・・・レセプター−Ｍ−４ ２・・・　　／／−Ｍ−５ ３・・スタンダード 第６図中 １・・・レセプター−３ ２・・・　　ｐ　　　−３−Ａ ３・・・　　ｔｔ　　　−３−１３ ４・・・　　ｔｔ　　　−３−Ｃ 尚、第２図はＣ，Ｂ、Ｂ、法〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、Ｖｏｌ、１０ｓｐ２６０６、（１９７１）〕により
蛋白の染色反応により、又第３〜５図はＰａｓ法［Ａｎ
ａｌ　、Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｖｏｌ、３０．１４Ｂ（１９６２））による糖の染色反
応により検出した図面を示す。

第６図は上記Ｃ，Ｂ、Ｂ、法による染色結果を図式化し
たものである。又、各図においてスタンダードはいずれ
もＢｉｏｒａｄ　Ｌａｂ、社（Ｕ、Ｓ、Ａ、）の下記標
準物質を使用した。

２００（Ｋダルトン）；ミオシン １１６　　　　ｔｔ　　　　；β−グルコシダーゼ９２
．５　　　　ｐ　　　　：フオスフオリラーゼ６６．２
　　　　ｔｒ　　　　；Ｂ５Ａ４５　　　〃　　　ニオ
ブアルブミン ２１、５　　　　　ｔｔ　　　　　；ソイビーントリプ
シンインヒビター 参考例５ 前記参考例４で得たレセプター１の５μ７蛋白量をウサ
ギ（２〜３Ｋｊりにフロインドコンプリートアジュバン
トと混合して、２週間に１回の間隔で皮下免疫した。３
回免疫後に採血し、遠心分離して抗血清を採取してＧＲ
Ａ抗体（抗体−１）を得る。

参考例６ ■　参考例２においてロゼツト形成率の高かった随１０
の患者より採血し、遠心分離して抗血清を採取してＧ　
ＲＡ抗体（抗体−■）を得る。

■　−上記■で得た抗体−■の９−に飽和硫安６ｒｎｅ
を滴下し、室温にて１時間攪拌後、遠心分離（３０００
回転、３０分）して沈渣を得る。これを６−のＰＢＳに
て溶解後、５ｔのＰＢＳにて、４℃、２４時間透析し、
１２■蛋白量／−のＧＲＡ抗体（抗体−１■）を得る。

参考例７（ＧｌｔＡ抗体の反応性） （ａ）　　参考例４で得たレセプター２を抗原として、
免疫電気泳動法により、参考例６で得たＧＲＡ抗体（抗
体−Ｈ）との反応性を調べた。すなわち、１％アガロー
ス板のホールに抗原（１６０μｍ　蛋白量／　ｍｌ　）
　１５　μＬを加え、７０Ｖ、６０分にて泳動させ、溝
に抗体−■２００μｔを加え、室湛室湿にて２４時間反
応させた。その結果は第７図に示すとおりであり、沈降
線が認められた。尚第７図中（１）はホール、（２）は
溝である。

（ｂ）　　毛細管を用いる沈澱法により、（ａ）と同じ
抗原と抗体の反応性を調べた〔標準臨床検査法、医学書
院、第２版、３４２〜３４５頁、１９６７参照〕。

すなわち、毛細管にレセプター２を入れ、次いでこれに
抗体−■を重層し、室温にて２４時開放置した。その結
果抗原と抗体の境界面に沈降物が認められた。尚、抗体
の代りに正常人血清を使用した場合には沈降物は認めら
れなかった。

（Ｃ）　　ブロックテスト（ＰＮＡ） ＢＴ−１（３Ｘ　１０５／ゴ）（、ＰＭＩ−１６４０＞
の試験管に各濃度のＰＮＡのＰＢＳ溶液１００μｔを加
え、４℃にて２０分インキュベーションする。

Ｉｔ、ＰＭＩ−１６４０培地にて２回遠心洗浄（１００
０回転、１０分）し、再度上記培地１００　ｔｔＬに再
浮遊する。これに、参考例６で得た抗体−■のＰＢＳ　
１０倍希釈液１００μｔを加え、４℃にて１時間インキ
ュベート後、上記培地にて３回細胞を洗浄する。該細胞
を上記培地１００μｔに再度浮遊し、これに０１１１．
ＢＣ−プロティンＡ１００μｔを加え、以下参考例２と
同様にしてロゼツト形成率を測定した。その結果は第５
表のとおりであり、ＰＮＡによる結合の阻止効果が認め
られた。

第　　５　　表 （ｄ）　　ブロックテスト（ＧＲＡ　）参考例４で得た
レセプター１の各種濃度のＰＢＳ溶液０．１−に、参考
例６で得た抗体−■の１０μｍ／ゴＰＢＳ希釈液の０．
１ｍｌを加え、３７℃で１時間反応後、］）ａｕｄｉ　
３　Ｘ　１０’　／　０．１　ｍｌ　ＲＰ　Ｍ　ｌ−１
６４０を加え、４℃で１時間インキュベートし、ＰＲＭ
Ｉ−１６４０培地にて３回細胞を遠心洗浄（１０００回
転１０分）する。該細胞を上記培地１００μノ、に再浮
遊し、これにＯＩ（、Ｂ　Ｃ−プロティンＡ　１００　
ｔｉＬを加えて、以下参考例２と同様にしてロゼツト形
成率を測定した。その結果は第６表のとおりであり、レ
クチンレセプターによる結合の阻止効果が認められた。

第　　６　　表 （ｅ）　　参考例４で得たレセプタ＝１を抗原として、
前記（ａ）と同様にして抗体−■の反応性を調べた。

結果を第８図に示す。尚、図中、（１）はホール、（２
）は抗体−１の溝、（３）は正常ウサギ血清の溝である
。

同図に示すとおり、抗体−■のみに沈降線が認められた
。

（ｆ）　　参考例２において、患者血清のかわりにＰＢ
Ｓで倍々希釈した抗体−■の１００μｔを用いて同様に
してロゼツト形成率を測定した。結果を第９図に示す。

（ｇ）参考例４で得たレセプター１の各種濃度のＰＢＳ
溶液１００μｔに抗体−ＩのＰＢＳ７００倍希釈液１０
０　ｐｉを加え、３７℃にて９０分反応後、Ｄａｕｄｉ
　３　Ｘ　１０５個１０．１ｄＲＰＭＩ−１６４０培地
を加え、室温にて６０分インキュベートし、ＲＰ　Ｍ、
　Ｉ−１，６４０培地にて３回細胞を遠心洗浄（１００
０回転１０分）する。該細胞を上記培地１００μｔに再
浮遊し、これにＯＲＢ　Ｃ−プロティンＡ１００μｔを
加えて、以下参考例２と同様にしてロゼツト形成率を測
定した。その結果は第１０図のとおりであり、レクチン
レセプターによる結合の阻止効果が認められた。

参考例８ （ａ）　　参考例６で得た抗体−■２ｍｌにブロムシア
ンセファロース（ファルマシア社）　５　ｆ　／　１５
　ｔｎｌ。

０、５　Ｍ　−ＮａＣ１の０．１Ｍ炭酸水素す）　ＩＪ
ウム水溶液（ｐＨ８，３）を加え、２時間攪拌して、Ｇ
几Ａ抗体の不溶性担体を得た。

（ｂ）　　参考例５で得た抗体−■を使用して、上記（
ａ）と同随にして、Ｇ　ｌ’ｌ、　Ａ抗体の不溶性担体
を得た。

実施例１ ■　Ｋ　Ａ　’Ｉ’　０−ＩＩＩ細胞、約４０１（湿重
量）をＰＢＳ５０Ｔｎｌ中、粉砕機（Ｗａｖｉｎｇ　Ｉ
Ｊ１ｅｎｄｅｒ）を使用してホモジナイズする。遠心分
離（ｉｏＯ，ｏＯ（１Ｘ１時間）して得た沈渣な、２％
トリトンＸ−１００，０，５ＭＮａＣｔの０．０１Ｍト
リス・塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．６　）　５　ｏｍｉに加
え攪拌する。遠心分離（１００，０ＯＯｒＸ１時間）し
だ上清を０．０１５％　ト　　リ　　ト　　ン　Ｘ−１
００、０，１５Ｍ　　ＮａＣ１の　０．０　１　　Ｍト
リス・塩酸緩衝液（ｐｉ（−７，６）で平衡化したＧＲ
，Ａ抗体−セファロース（前記参考例８−　（ａ）で得
た担体）のカラム（φ０．８　Ｘ　１５　ｃｍ　）に付
し、同緩衝液で洗浄後０．１Ｍラクトースを含む同緩衝
液で溶出し、これを０．８５％ＮａＣ１水溶液にて透析
してＧＲ，Ａ溶液を得る。蛋白量０４５■、糖量０．１
２ツこれを［ＧＲＡ−ＩＪ　とする。

■　上記■において、Ｋ　Ａ　’Ｌ”　０−ＩＩＩ細胞
にかえてＢ　’Ｉ”　−１細胞２０７を使用し、Ｇ　Ｒ
Ａ抗体−セファロースカラムを前記参考例８−（ｂ）で
得た担体な使用して、同様の操作によりＧＲＡ溶液を得
る。

蛋白量２３０μ７、糖量４０μｍこれをｌ’−Ｇ　ＲＡ
　−２Ｊと１−る。

■　参考例Ｆ３−（ａ）で得た担体５−のカラムを０．
０１５％トリトンＸ−１００の０．　ＯＩ　Ｍ　）リス
−塩酸緩衝液（ｐＨ’　７．６洗浄液）にて洗浄した後
、これに参考例で得たレセプター２を３５０μＶ蛋白量
を流しアフィニティークロマトを行った。洗浄液で洗浄
し、次いで、ラクトース３０−を流し、溶出した両分を
ＧＲ，Ａ−３（蛋白量１６４μ２）とする。更に洗浄後
、０．２　Ｍ塩酸−グリシン緩衝液（ｐＨ２，７）にて
溶出した両分をＧｌ（、Ａ−４（蛋白量９７μｍ）とす
る。

斯くＩ−て得られた各両分について、前記参考例４−■
と同様にして得たＳＰＳ電気泳動パターンを第１１図に
示す。

尚、同図はＣ，Ｂ、Ｂ法による染色パターンを示し、各
番号は以下に示す通りである。

１・・・レセプター２ ２・・・Ｇ　ＲＡ　−３ ３・・・Ｇ１もＡ−４ 参考例９　（キラーセルの誘導） （１）健康成人より「フィコールパック」（ファルマシ
ア社）で遠心分離して得た末梢血リンパ球を１０％ＦＣ
８１７）ＲＰＭＩ−１６４０培地にて１．５Ｘ　１０’
　／　ｍｌに調製し、その１０ｍ１に５，２５又は５０
ｎＶ蛋白量／ゴとなる様にＧ　Ｉ（、Ａ−３を加え、３
７℃にて、炭酸ガスインキュベーター内で４８時間培養
してキラーセルを得た。

上記ＧＲＡ−３のかわりにＧＲＡ−４、レセプター２及
び無添加（コントロール）を使用して同様にキラーセル
を得た。

（２）上記（１）で得たキラーセルをＩ（、ＰＭＩ−１
６４０培地で２回洗浄後（１０００回転、１０分）、１
０％ｌｉ”　Ｃ８の同培地で１．５Ｘ１０’／−に調製
しエフェクターセル（Ｅ）とする。標的細胞（Ｔ）とし
て、上記培地で２回洗浄したＤａｕｄｉを、１０％ｂ’
　ｃ　ｓの同培地で１．５Ｘ１０’／−に調製したもの
を使用する。

上記Ｅ１００μを及びＴ１００μｔを混合し、３７℃に
て１時間培養後、該試験管を氷冷水中に入れて反応を止
め０．２％トリパンブルー染色により生存細胞数を計測
した。Ｅのキラー活性を下記式にて算出し７た。

キラー活性（％）−（（コントロールのＥを使用した時
の細胞数）−（実験群の細胞数））／（Ｅ′＋Ｔ′）尚
、Ｅ′は、Ｅ１００μｔを３７℃１時間培養した後の生
存細胞数。

Ｔ′は、Ｔ１００μｔを３７℃１時間培養した後の生存
細胞数。

結果を下記第７表に示す。

第７表　キラー活性（％） （３）上記（１）及び（２）と同様にしてＧｉ（、Ａ−
１及びＧＲＡ−２で誘導したキラーセルのキラー活性を
求めた結果、上記と略々同様の活性が認められた。

参考例１０ ■　実施例１−■で得たＧＲＡ−１を生理食塩水で希釈
して、蛋白な１．５μ２／〃ｆとなるように調製して、
抗癌剤噴１とｌまた。

■　ｂ＋　ＭＴの腫瘍塊を無菌的に５叫角の犬δさとｊ
ｒ　Ｌ、Ｃ３Ｈ／　Ｈｅ　７つ７．（７Ｗ６）１．０匹
の背面皮下にそれぞれ移植し、７日目に腫瘍の増殖及び
定着を確認した。この５匹に、上記■の抗癌剤に１を１
日３００μｔずつ２日間隔で皮下投与した。

残りの５匹は無処理コントロールとした。

最初の膜力から１０日後に手術によって腫瘍を摘出し、
平均体積を求めた。結果、コントロール群が平均１４２
．５−であるのに対して薬剤投与群は、平均１８７丁−
であり、腫瘍縮少効果が認２・５られた。

【図面の簡単な説明】

第１図はＧ　ＲＡ抗体による各種癌細胞とのロゼツト形
成率を示す図面、第２図及び第３図はレセプター−Ｍ−
３、−７、−１及び−２のＳＤＳゲル電気泳動を示す写
真、第４図はレセプター−Ｍ−２、−６及び−５の８Ｄ
Ｓゲル電気泳動を示す写真１．’Ｊ（５図はレセプター
−Ｍ−４及び−Ｍ−５のＳＤＳゲル電気泳動を示す写真
、第６図はレセプター−３、−３−Ａ、−３−Ｌｉ及び
−３−ＣのＳＤＳゲル電気泳動を示す図面、第７図及び
第８図はＧｊＬ　Ａ抗体とレセプターとの免反沈降反応
を示す図１′ｒＪ１、第９図はＧ几Ａ抗体の濃度とレセ
プターどのロゼツト形成率との関係を示す図面、第１０
図はａｎ、、へ抗体によるロゼツト形ｔＪＸ、率のレク
チンレ〜１ニブターによる阻害な示す図面、第１１図は
ＯＲ，Ａθ）Ｓ　］）　Ｓ　’ｔ、Ｑ気泳動全泳動図面
である。 以上 第１図 標的細胞　　　　　”セント形Ｆｌ−率％２０　　　　
４０　　　　５０　　　　８０手続補正帯（方式） 昭和５８年３　月２３［１ 特許庁長官　着杉和夫　殿 ２　発明の名称 糖鎖関連抗原およびその製造法ならびにこれを有効成分
とする抗癌剤 ３　補正をする者 事件との関係　　　出願人 住　所　群馬県高崎市栄町１７番５号 名　称　株式会社　日本抗体研究所 代表者足立正− ４代理人 昭和５８年２月２２日（発送） ６、補正の対象 明細書の「図面の簡単な説明」の欄及び図面並びに参考
写真 ７、　補正の内容 （１）　　明細書甲第４３頁下から第２行「写真Ｊとあ
るを＼ 「図面」と訂正する。 （４同　第４４頁第１行 「写真」とめる會＼ 「図面」と訂正する。 （３）同　第４４頁第２行 「写真」とある金、 「図面」と訂正する。 （４）図面甲第２〜５図を別紙の通り訂正する。 （５）別紙の通り参考写真（イ）〜０つ會提出する。 第２図　　　　　　第３図 １２３　４　５　　１２３４ 第４図 第５図 １　　　　２　　　　３ １８３−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、癌細胞膜成分より単離され、かつレクチンレセプタ
   ー結合性抗体に対して結合性を有する糖鎖関連抗原。 ２、癌細胞膜成分より、レクチンレセプター結合性抗体
   に対して結合性を有する糖鎖関連抗原を単離することを
   特徴とする糖鎖関連抗原の製造法。 ３、癌細胞膜成分より単離され、かつレクチンレセプタ
   ー結合性抗体に対して結合性を有する糖鎖関連抗原を有
   効成分として含有する抗癌剤。