JPS5854132B2 - リンパ球分離装置 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、血液、体液、またはこれらを処理して得られ
る血球浮遊液から、リンパ球を選択的に採取するための
装置に関するものである。

さらに詳しく述べると、少量から比較的多量にわたる血
液、骨髄液やリンパ液などの血球を含む体液、およびこ
れらを処理して得られる血球浮遊液、たとえばデキスト
ランやヒドロキシエチルスターチなどの赤血球凝集剤を
加えて得た赤血球の大部分が除去された血球浮遊液、０
．２％食塩水などの低張溶液と接触させて赤血球を破壊
した血球浮遊液などから、人体に輸血しても問題となら
ずまた純度の高いリンパ球を簡単な操作で短時間に得る
ことのできる装置に関するものである。

近年、免疫学の進歩に伴ない、リンパ球を血液から純粋
に取り出し、このリンパ球浮遊液を用いて、組織適合抗
原や細胞性免疫等の免疫学の研究を行なったり、リンパ
球の幼若化能やＴ細胞、Ｂ細胞などのサブポピユレーシ
ョンの比率を測定することにより各種疾患の診断が行な
われるようになり、さらにヘルパーＴ細胞やサプレッサ
ーＴ細胞などのサブセットに分類し分離する試みなどが
広く各地の病院、研究機関で行なわれている。

また、リンパ球の成分輸血も、免疫療法の一種として、
各地の病院で検討されている。

このような目的に使用可能な従来のリンパ球分離技術と
しては、大きく別けて３つの方法がある。

すなわち、血球側々の比重差を利用したフィコール・コ
ンレイ法などの密度勾配遠心分離方法と、血球の粘着作
用を利用した方法および細胞電気泳動法である。

さらに詳しく述べると、密度勾配遠心分離法は、赤血球
、白血球、血漿、更には白血球のうち単球、顆粒球、リ
ンパ球等その成分毎に異なる比重を利用し、遠心分離に
よりリンパ球を得る方法であり、普通は比重１．０７７
の液体に血液を重層後遠心分離を行ない、リンパ球層を
回収する。

血球の粘着作用を利用した方法の一般的な操作法は、先
ず抗凝固剤を加えた血液を放置または遠心分離して赤血
球を落とし、白血球に富む上層を得る。

さらにこの上層をガラスウール、綿花、ナイロンウール
などを詰めたカラムに入れ、３７℃３０分位放置した後
、リンパ球を得るものである。

その他、特殊な方法としては、血球の荷電の違いを利用
する細胞電気泳動によっても、リンパ球成分を得ること
ができる。

しかし、これらの方法には次のような欠点があった。

まず、密度勾配遠心分離方法は遠心分離に要する時間が
長く、操作に熟練を要し、通常一連の操作を終了するま
でに長時間を必要とする。

一般的に採血後、リンパ球の検査、培養等を開始するま
での時間はできるだけ短かいことが望ましく、リンパ球
の採取に時間をとられるのは好ましくない。

また、遠心分離法の欠点は、設備、器具が数多く必要で
あることにもあり、さらに、長時間の遠心分離、数回に
わたる洗浄操作等によりリンパ球が受ける損傷も大きい
。

また、人体に輸血を行なう場合は、混入化合物を除去し
なげればならない場合も存在する。

次に、血球の粘着作用を利用する方法は、一般的な方法
では操作に要する時間が長く、また、リンパ球の回収率
も低いため、臨床検査培養や成分輸血には不向きである
。

細胞電気泳動は装置が高価であり、一般には普及してい
ないのが現状である。

本発明者らは、既に血球の粘着作用を利用した方法を改
良し、高い収率で純度の良いリンパ球を得る方法と装置
を確立し特許を出願しているが、さらに高い回収率、純
度が得られると工もに、少ない血液量でも短時間に高純
度、高いパイアビリティ−のリンパ球を簡便に得られる
リンパ球分離装置を提供することを目的に鋭意研究した
結果、２つの特定のフィルターを各種のアダプターを付
けて接続することにより、数ｍ１以上の血球浮遊液から
、短時間に高純度、高回収率で、高いパイアビリティ−
のリンパ球を検査、研究や成分輸血に必要な濃度で、遠
心分離器のような特殊な装置も必要とせず簡便に得られ
ることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、血球浮遊液の入口と出口の間に、平
均直径が５μｍ以上、２０μｍ以下の繊維をかさ密度０
．０４ ？／ｃｄ以上、０．４グ／−以下で詰めた第１
フイルターと、前記第１フイルターの前または後に、平
均直径が１０μｍより大きく６０μｍ以下であり、かつ
第１フイルター内の繊維の平均直径と等しいかそれ以上
である繊維を詰めた第２フイルターが設けられ、両フィ
ルターを連結する導管部に少なくとも１つの他の出入口
を有するか、または第１フイルターと第２フイルターの
間が取りはずせる構造を有することを特徴どするリンパ
球分離装置である。

本発明による装置は、２つのフィルターを用いるが、こ
れら２つのフィルターのうち、第１フイルターは血球浮
遊液中の白血球成分を捕捉するものであり、第２フイル
ターは白血球のうち、顆粒球と単球のみを捕捉するため
のものである。

第１図は、本発明のリンパ球分離装置の一例を示す模式
図である。

第２フイルターである単球および顆粒球の捕捉フィルタ
ー１は、容器２と繊維状物質３とより成り、さらに血球
浮遊液の導入口４および第１フイルターである白血球の
捕捉フィルター５との連結部である導管６が取り付けら
れている。

また、第１フイルターである白血球の捕捉フィルター５
は、容器７と繊維状物質８とより成り、さらに血球浮遊
液の排出口９および単球、顆粒球の捕捉フィルターとの
連結部である導管１０が取り付けられており、導管６と
導管１０とは連結されている。

さらに、この連結部と三方源せん１２との間を導管１３
が連結している。

また、この装置では、血球浮遊液を送る手段としてポン
プ１１が導入口４と三方源せん１２との間に入っており
、三方源せん１２によって液体は第２フイルターかまた
は第１フイルターに送られるようになっている。

第１フイルター５内の繊維状物質８は平均直径５μｍ以
上、２０μｍ以下であり、長さは平均直径に比して充分
長いものである。

こ瓦で言う平均直径０とは、繊維状物質８そのもの〜重
さをＸ（ｙ′）、長さをｙ−１密度をρ（ｒ／ｉ）とす
ると、Ｄ−２ｍ−で定義されるものである。

また、繊維状物質８は充分はぐされていることが望まし
い。

平均直径が５μｍより細くなると、リンパ球の捕捉はう
まくできるが回収率が低くなってしまい、成分輸血、検
査、研究に必要な濃度でリンパ球を得ることが難しい。

また平均直径が２０μｍを越えるとリンパ球が捕捉され
難くなり、その結果リンパ球の回収率が低下し、やはり
、成分輸血、検査、研究に必要な濃度でリンパ球を得る
ことが難しくなる。

白血球の捕捉フィルター５内の繊維状物質８ （７）カ
サ密度性０．０４１？ ｌｃ！以上、０．４ｔ／−以下
である。

かさ密度が低すぎるとリンパ球を充分捕捉することがで
きなくなり、その結果回収リンパ球の濃度が低くなって
しまう。

またかさ密度が高すぎるとリンパ球の捕捉は充分される
が、残存する赤血球が多（なるし、またリンパ球の回収
率も下がってしまう。

さらに、リンパ球を非常に高い回収率で分離することが
必要な場合には、この第１フイルターには、平均直径が
７μｍ以上、１０μｍ以下の繊維状物質をかさ密度０．
０４Ｐ／ＣＩ＃Ｊ、上、０．２５ Ｐ／ｄ以下で詰めた
ものを用いることがより望ましい。

なお、この第１フイルターの大きさは、処理する血液の
量にもよるが、大体０．５ｒＩｌ１以上、３００ｍ１以
下である。

この範囲の容積であれば、血液を少量処理する臨床検査
用から多量処理する成分輸血用まで、このフィルターで
実施できる。

また、第１フイルター内に捕捉されたリンパ球を回収す
る方法としては、生理的溶液をノイルターに流し込みな
がらフィルターをた工いて物理的衝撃を与えるか、高流
速の生理的溶液をフィルターに送り込むか、または生理
的溶液を流しながら液圧を変化させる方法などが好まし
い。

回収の際使用する液は、生理的溶液ならば特に問題はな
く、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、血清、血漿お
よびこれらの混合物などが用いられるが、これ以外のも
のでもよい場合もある。

この第１フイルターは、リンパ球の捕捉が優れているば
かりでなく、回収率も高く、その上、混入する赤血球も
著しく少なくすることができるので、少量の血液で成分
輸血や検査、研究のためのリンパ球を集めることが可能
である。

第２フイルター１内の繊維状物質３は、平均直径が１０
μｍより太きく６０μｍ以下であり、かつ第１フイルタ
ーに用いた繊維状物質の平均直径と等しいか、またはそ
れ以上であり、長さは平均直径より充分長いものである
。

またこの繊維状物質３も充分はぐされていることが望ま
しい。

平均直径が１０μｍ以下になると、リンパ球を純度よ（
得ようとしたときにリンパ球の収率が低（なってしまい
、成分輸血や検査、研究に必要な濃度でリンパ球を得る
ことが難しく、リンパ球を純度よく、成分輸血や検査、
研究に必要な量だけ得ようとすれば血球浮遊量を増やさ
なければならなくなる。

リンパ球の純度と回収率を考え合わせると、平均直径が
１０μｍより大きいことが必要である。

また平均直径が６０μｍを越えると、繊維状物質３を容
器２にいくら沢山詰め込んでも単球、顆粒球を充分に捕
捉することができなくなり、リンパ球の純度が低下し、
フィルターの形状も大きくなってしまう。

また、本発明者らは、リンパ球の捕捉とフィルター内の
繊維状物質の平均直径との関係を詳細に研究したところ
、平均直径が小さい方が、リンパ球がよく捕捉されるこ
とを発見した。

特に平均直径が１０μｍ以下では、リンパ球の捕捉は非
常に優れている。

また、１０μｍより大きいところでも、平均直径がより
小さい方がリンパ球の捕捉は優れている。

このことから、第２フイルターに用いる繊維の平均直径
は、第１フイルターのものと同じか、またはそれより大
きいものを用いることが、リンパ球を多量第１フイルタ
ーに送り捕捉させるためには必要である。

第２フイルター１内の繊維状物質３のかさ密度は、血球
浮遊液が第２フイルターを通過する際の速度や温度に若
しく影響を受けるが、０．０５ｒ／−以上、０．５？／
ｄ以下が好ましく、Ｏ，Ｉｆ？／−以上、０．４１／ｍ
ｌ以下であればさらに好ましい。

血球浮遊液の排出口９は、ただ出口の穴が開いているだ
けでも充分用は足りるカ＼注射筒の筒先に接続できる構
造をもつことも可能であり、たとえば第３図および第４
図に示すように注射筒のロック型の筒先に接続できる構
造を持つものも用いることができる。

第３図は排出口の正面断面図、第４図は側面図である。

このような製造にすることにより、注射筒を血球浮遊液
の排出口９に接続することができ、その結果、と工に取
り付けた注射筒を操するだけでポンプなどを使用せずに
血球浮遊液の吸引、洗浄液の吸引、回収液の押し出しな
どが容易にできるようになる。

また、回収液を押し出してリンパ球を回収する際に、注
射筒が外れて回収液がこぼれたりする恐れが全（なくな
る。

血球浮遊液の導入口４は、た導入口の穴が開いていれば
用は足りるのであるが、導入口４が注射針であるか、第
５図のように注射針が接続できるような構造、すなわち
注射筒の筒先の構造を持つものであるか、または第６図
のように注射筒が固定できるような構造であることも可
能である。

第５図、第６図は血球浮遊液導入口４０例を示す断面図
である。

導入口４を注射針にすれば、血液を人体から直接リンパ
球採取装置に採取することが可能になるし、導入口４を
注射針が接続できるような構造にすれば、注射針を取り
付けて直接採血することも可能であり、採取してあった
血球浮遊液をチューブ等を導入口４に取り付けて導入す
ることも可能である。

また、導入口４を注射筒が固定できるような構造にして
おけば、注射器を用いて採取した血球浮遊液を注射針を
外して注射筒を接続し、そのま工注入することが可能で
ある。

あるいは導入口４にゴムキャンプをしておき、注射針を
外さなくても直接血球浮遊液を注入できるようにするこ
ともできる。

以上のような構造を有するリンパ球分離装置は、種々の
量の血液から、リンパ球を純度、収率よく回収すること
ができ、また液を送る手段もポンプや注射器などいろい
ろのものが使用可能であり、特別な装置を全く必要とし
ないものである。

なお、本発明に用いるフィルター内の繊維の素材は、血
液を変性させないようなものであればよい。

本発明によるリンパ球分離装置は、成分輸血のための比
較的大型の装置にも、また臨床検査や研究のための小型
のものにも用いることができる。

第２図は、本発明のリンパ球分離装置のうち、特に検査
、研究用に適した比較的小型の装置の一例を示す正面断
面模式図である。

この装置は、第２フイルターである単球、顆粒球捕捉フ
ィルター１′と第１フイルターである白血球捕捉フィル
ター５′とからなる。

単球、顆粒球捕捉フィルター１′は容器２と繊維状物質
３′とからなり、血球浮遊液の導入口４′および白血球
捕捉フィルター５′との連結部である導管６′が取り付
けられている。

また、白血球の捕捉フィルター５′は、容器７′と繊維
状物質ぎとからなり、血球浮遊液の排出ログおよび単球
、顆粒球捕捉フィルター１′との連結部である導管１０
′が取り付けられている。

導管６′と導管１σとは連結されている。

また、繊維状物質３′および８′が容器２および７′か
ら漏れ出ないように網１４が両フィルター１′および５
′の入口、出口部分に取り付けられている。

単球、顆粒球の捕捉フィルター１′の内容積は０．５〜
５ｒＩｌｌが適当であり、より好ましくは１〜３ｒＩｌ
ｌである。

こ工で言うフィルター１′の内容積とは容器２の内容積
から繊維状物質３′の体積を引いたものである。

単球・顆粒球捕捉フィルター１′の内容積が小さすぎる
とフィルター１′の断面積と長さを充分にとれないため
、血球浮遊液をゆっくり流さないと単球、顆粒球を充分
に捕捉し切れなくなり、それによって処理時間が長くな
ってしまう。

さらに、容積があまり小さいと血球浮遊液の処理量が少
なくなり、検査や研究に必要なだけのリンパ球数が得ら
れなくなる。

なぜなら小さな容積の単球および顆粒球の捕捉フィルタ
ー１′で能力以上の血球浮遊液を処理すると、単球、顆
粒球が充分に捕捉されなくなってしまうからであり、検
査や研究に必要な量のリンパ球を純度よく得るためには
、単球、顆粒球捕捉フィルター１′の容積は０．５ｍ１
以上であることが好ましい。

また、単球、顆粒球捕捉フィルター１′の容積があまり
大きいと、少量の血球浮遊液を入れても単球、顆粒球捕
捉フィルター１′の中に留まってしまい、単球、顆粒球
捕捉フィルター１′の外へ送り出すことができない。

そのため、生理食塩水などで押し出してやる必要がある
が、こういうことをするとフィルター内での流れの不均
一により、単球、顆粒球の捕捉が充分されなくなり、リ
ンパ球の純度が低下するだげでなく、処理時間もそれだ
け余計にか二ってしまう。

血球浮遊液の量を増やしてやれば純度の問題は無くなる
が、無駄になる血球浮遊液が多くなるし、処理時間も余
計にかよる。

少量の血球浮遊液から短時間にリンパ球を得ようとする
なら、単球、顆粒球フィルター１′の内容積は５ｒＩＬ
ｌ以下が好ましい。

次に、第１フイルターである白血球の捕捉フィルター５
′の内容積は０．２〜５ＴＩＬｌが適当であり、好まし
くは０，５〜３１ｒＬｌである。

こ工で言うフィルター５′の内容積とは、容器７′の内
容積から繊維状物質８′の体積を引いたものである。

白血球の捕捉フィルター５′の内容積が小さすぎると得
られるリンパ球の絶対量が少なくなりすぎてしまい、検
査や研究に必要とされるリンパ球数が得られなくなって
しまう。

なぜなら白血球捕捉フィルター５′のリンパ球捕捉能力
にもフィルター５′の大きさにより限度があり、小さい
白血球捕捉フィルター５′では検査や研究のために必要
な絶対量が捕捉されなくなってしまう。

検査や研究に必要な量のリンパ球を得るためには、白血
球捕捉フィルター５′の内容積は０．２ｒＩＬｌ以上が
好ましい。

また白血球捕捉フィルター５′の容積があまり大きいと
、リンパ球を回収するときの回収効率が低下するし、大
きくしても実際にリンパ球が捕捉されているのは、血球
浮遊液量が少ない場合は白血球捕捉フィルターのほんの
一部でしかない。

内容積は５ｒＩＬｌで充分であり、これ以上大きくする
と却ってリンパ球の回収率が悪くなったり、取り扱いが
不便になる。

両フィルター１’、５’を連結する導管６’、１０’は
たｇのビニールチューブでもかまわないが、操作を簡便
にするには、第２図のように導管６’、１０’が容易に
取り外せるカプラーを有するか、第７図のように両フィ
ルターの方向以外の方向に１つ以上の流体出入口を持つ
コックを有することが望ましい。

第７図は導管部分の模式図である。第２図のように導管
がカプラーを有する場合は、血球浮遊液をリンパ球採取
装置に導入し、リンパ球を白血球捕捉フィルター５′に
捕捉させた後、不要になった単球、顆粒球の捕捉フィル
ター１′を取り外すことができ、白血球捕捉フィルター
５′だけを洗浄し、リンパ球を回収することが容易にな
る。

もし導管がビニールチューブであれば、滅菌したハサミ
を用いて導管を切断しなげればならなくなる。

次に、第７図のように導管に三方コック１２′が取り付
けられている場合は、三方コック１２′の操作により、
単球、顆粒球の捕捉フィルター１′と白血球の捕捉フィ
ルター５′を回路的に切断することができ、三方コック
１２′の両フィルター１’、５’以外の方向にある流体
出入口１５を用いて、白血球捕捉フィルター５′の洗浄
およびリンパ球の回収が可能である。

このように、第１フイルター、第２フイルターが特定の
大きさを有するリンパ球分離装置は、比較的少量の血液
で、容易にリンパ球浮遊液を調製できるものである。

次に、本発明のリンパ球分離装置の使用方法を説明する
。

第１図の装置では、まず用意された血球浮遊液をポンプ
１１によって導入口４から三方活せん１２を調節して第
２フイルター１に導入する。

この第２フイルターで、血球浮遊液中の単球、顆粒球が
捕捉されるので、ポンプでさらに血球浮遊液を送ると、
血球浮遊液中の単球、顆粒球を除去された赤血球、リン
パ球、血漿等が第１フイルター５に導入される。

この第１フイルターでは、白血球が捕捉され、赤血球、
血漿等はほとんど捕捉されない。

またこの白血球は、第２フイルターで単球、顆粒球が除
去されているので、大部分リンパ球からなっている。

次に、第１フイルター５内に残存する赤血球、血漿等を
洗浄するために、三方活せん１２を調節して、導管１３
から生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの生理的溶
液からなる洗浄液をポンプ１１によって第１フイルター
５に導く。

すると、第１フイルター内にはリンパ球が捕捉されてい
て、排出口９からは赤血球、血漿等が出てくる。

次に第１フイルター５内に捕捉されているリンパ球を回
収するために、生理的溶液からなる回収液をポンプ１１
で第１フイルターに送りながら、第１フイルターの容器
を木の棒などでた工いてやる。

こうすると、排出口９より純度の高いリンパ球浮遊液が
得られる。

また第２図の装置を使用する場合は、まず血球浮遊液の
排出口９′に２５ｄ程度の注射筒を取り付け、用意され
た血球浮遊液を導入口４′から注射筒の成子を引くこと
により、第２フイルターである単球、顆粒球の捕捉フィ
ルター１′に導入する。

この単球、顆粒球捕捉フィルター１′で血球浮遊液中の
単球、顆粒球が捕捉されるので、注射筒の吸子をさらに
引くと、血球浮遊液中の単球、顆粒球を除去された赤血
球、リンパ球、血漿等が第１フイルターである白血球捕
捉フィルター５′に導入される。

この白血球捕捉フィルター５′ではリンパ球が捕捉され
、赤血球、血漿等はほとんど捕捉されない。

次に、白血球の捕捉フィルター５′内に残留する赤血球
、血漿等を洗浄するために、導管６′。

１０′を外して導管１０′から生理食塩水、リン酸緩衝
生理食塩水などの洗浄液を注射筒の教子を引（ことによ
り、白血球捕捉フィルター５′に導く。

すると白血球採取フィルター５′内にはリンパ球が捕捉
されていて、注射筒には赤血球、血漿等の大部分が導入
される。

次に白血球採取フィルター５′に捕捉されたリンパ球を
回収するために、現在排出ログに取り付けられている注
射筒を外し、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水等の回
収液を入れた注射器を新たに排出ログに取り付け、教子
を強く押すことにより、導管１０′より純度の高いリン
パ球浮遊液が得られる。

なお、液を送る手段としては注射器の例で説明したが、
ポンプを用いることも可能であり、また、両者を併用す
ることも可能である。

本発明に用いるフィルターに詰める繊維は、平均直径が
本発明者らの指定したものであれば、特別血液や血球を
変性させないものでない限り、素材は何でもよい。

確かに素材によって少しは白血球や顆粒球の捕捉力に違
いは存在するが、この違いは平均直径の効果に比べると
、非常に小さいものである。

特にポリアミド、ポリエステル、ポリアクリロニトリル
などの合成繊維やアセテートなどの半合成繊維、レーヨ
ンや銅アンモニアレーヨンなどの再生人造繊維、無機繊
維などは、好ましい平均直径の繊維を得ることが容易で
あり、また血液を変性させないので用いることが望まし
〜・。

なお、第１図および第２図は本発明によるリンパ球分離
装置の一部の形態を示したにすぎず、これらを修飾して
使用することも可能である。

また、液を送る手段としては、ポンプや注射器の他ニ、
重力を用いることができる場合も存在する。

また、本装置を使用する際は、血球浮遊液をまず第１フ
イルターに導入し、洗浄を行ない、捕捉された白血球を
回収し、次に第２フイルターにこの白血球浮遊液を導入
して顆粒球、単球を除去してリンパ球浮遊液を得るよう
な使用法も可能な場合が存在する。

このようにして得たリンパ球浮遊液は、赤血球や単球、
顆粒球の混入が少なく、また装置の操作も非常に簡単で
ある。

また、得られたリンパ球は種々の機能がよく保たれてお
り、パイアビリティ−も高い。

またＴ細胞、Ｂ細胞の比率もフィルターの使用条件によ
り、もとの血液とほぼ同じものや変化したものを得るこ
とができる。

以上のように、本発明によれば、血液等の血球浮遊液か
ら簡単な操作で、純度、収率よくリンパ球を分離するこ
とができ、また無菌操作も容易なため、各種医療施設、
研究機関において、リンパ球浮遊液を用いた研究や成分
輸血が容易に行なえるものである。

実施例 １ 第１図のようにリンパ球分離装置を構成した。

第２フイルターとして内径２０ｍｍ、長さ７５（ホ）の
円筒容器２に、平均直径２１μ、平均長５０間のポリア
ミド繊維をかさ密度ｏ、１５Ｐ／ｉ（重量にして３．５
３４ｆ？）で詰めたものを使用した。

第１フイルターとしては内径１８間、長さ１００ｍｍの
円筒容器に平均直径８．２μ、平均長３０ｍｍのポリア
クリロニトリル繊維なかさ密度０．１２８Ｐ／ｃＩ！（
重量にして３．２５７ｆ）で詰めたものを使用した。

３７℃に加温した健康人のヘパリン加血液１００１１１
１を１分間当り５縦柱度の速度で導入口４からポンプ１
１で吸い込み、三方活せんを調節して第２フイルター１
から第１フイルター５を通して、排出口９から出した。

血液１０ｏｒｆＬｌが導入口を通ったときポンプを停止
し、三方活せんを調節して導管１３からポンプ１１によ
り生理食塩水を１分間当りＩ Ｑｍ程度の速さで１５０
ｍＡ’第１フィルターに通し、排出口９から出した。

次に１分間当り１０ｍ７程度の速さで１００ｄの生理食
塩水をポンプ１１で第１フイルター５に送りながら、容
器７の外側を木の棒で１分間当り５０回位たたいてリン
パ球を回収した。

回収したリンパ球浮遊液を検査したところ、リンパ球濃
度はもとの血液の４０％で、生細胞は９９％以上ありｔ
う単球、顆粒球は回収液中の全白血球の７％、すなわち
リンパ球の純度は白血球の９３％、赤血球はもとの血液
の０．３％であった。

実施例 ２ 第２図のようにリンパ球採取装置を構成した。

第２フイルター１′として、内径１２．５ｍｍ、長さ２
０ｍｍの円筒容器２′に平均直径２１μ扉、平均長５０
ｍπのポリアミド繊維をかさ密度０．２＠／ｉ（重量に
して０．４９１？）で詰めたものを使用した。

フィルター内容積としては２ｒｆＬｌであった。第１フ
イルターとしては、内径１０ｍｍ、長さ２５．５關の円
筒容器に平均直径８．１６μｍ、平均長３０間のポリア
クリロニトリル繊維をかさ密度０．２１４？ ／ｃｒｌ
（重量にして０．４２９Ｐ）で詰めたものを使用した。

フィルター内容積としては１．６４ｍ１であった。

血球浮遊液の排出ログに２５ｍ１の注射筒を接続し、３
７℃に加温した健康人のヘパリン加血液３ｍｌを１分間
当り５ｍｌ程度の速度で導入口４′から吸い込み、第２
フイルター１′から第１フイルター５′に血液が移行し
なくなったところで注射筒の教子を引くのを止め、導管
６′と導管１０′を切り放した。

次に、導管１０′から生理食塩水を１分間当り５ｒｆＬ
ｌ程度の速さで２０ｍ１吸い込んだ。

次に、排出口９′に取り付けられている注射器を外し、
新たに生理食塩水２ｍｌを入れた注射器を排出口９′に
取り付け、注射器の教子を強く押し、導管１０′から２
ｍｌのリンパ球浮遊液を回収した。

回収したリンパ球浮遊液を検査したところ、リンパ球濃
度はもとの血液の７０％で、パイアビリティ−も９９％
以上あった。

単球、顆粒球は回収液中、全白血球数の７％、すなわち
リンパ球の純度は９３％、赤血球はもとの血液の０．５
％であった。

比較例 Ｉ ５社から市販されているリンパ球分離試薬（比重１．０
７７±０．００１ ） ４．５ｍｌを試験管にとり、実
施例１と同じ血液３１ｒＬｌに対しリン酸緩衝生理食塩
水３ｄを加えたもの６ｄを、界面を乱さないように静か
に重層し、界面で４００Ｘｇになるように回転数をセッ
トし、室温で３０分間スイングローターで遠心分離した
。

次にリンパ球層を別の試験管に集め、３倍量のリン酸緩
衝生理食塩水を加え、混和した後、２４０Ｘｇ、１０分
、室温で遠心し、リンパ球を集めた。

その後、上澄をピペットで除き、ミキサーでリンパ球の
ペレットをよくほぐし、充分量のリン酸緩衝生理食塩水
を加えてリンパ球を浮遊させた。

１６０Ｘｇ１１０分、室温で遠心し、リンパ球を沈殿さ
せ、上澄を除いた。

再びミキサーでリンパ球のペレットをよくほぐし、充分
量のリン酸緩衝生理食塩水を加えてリンパ球を浮遊させ
た後、１６０Ｘｇ１１０分、室温で遠心し、リンパ球を
沈殿させ上澄を除いた。

次にミキサーでリンパ球のペレットをよくほぐし、２ｒ
ｕｌのリン酸緩衝生理食塩水を加えてリンパ球浮遊液を
得た。

このリンパ球浮遊液を検査したところ、リンパ球濃度は
もとの血液の６０％、リンパ球の純度は８６％、赤血球
はもとの血液の０．１％であったが、一連の操作は非常
に手間がかかった。

実施例 ３ 第２図のようにリンパ球採取装置を構成した。

第２フイルター１′として内径１４．５７７１７＋１、
長さ１０關の円筒容器２′に平均直径１２．４μｍ、平
均長３８間のポリエステル繊維をかさ密度０．１２？／
ａｙｌ（重量にして０．１９８Ｓ’）で詰めたものを使
用した。

フィルター内容積としては、Ｌ５ｍｌであった。

第１フイルター５′としては内径１２．５ｍｍ、長さ１
５關の円筒容器に平均直径９μｍ、平均長４０ｍ尻のポ
リエステル繊維をかさ密度０．１６１？ ／ｃｔｒｌ
（重量にして０．２９１’）で詰めたものを使用した。

フィルター内容積としては、１．６３ｍ１であった。

血球浮遊液の排出ログに２５ｍ１の注射筒を接続し、導
入口に注射針を接続して、健康人の腕の静脈に注射針を
刺し、両フィルターの内容積分すなわち３．２ｍ１位の
血液を１分間当り５７７１１位の速さで採血し、その後
すぐに導管Ｃと導管１０′を切り放し、導管１０′から
生理食塩水を１分間当り５ｍ１位の速さで２０ｍ１吸い
込んだ。

次に排水口９′に取り付けられている注射器を外し、新
たに生理食塩水２ｍｌを入れた注射器を排水口９′に取
り付け、注射器の教子を強く押し、導管から２ｍｌのリ
ンパ球浮遊液を回収した。

同じドナーからさらに１ ｍｌのヘパリン加血液を採血
し、回収リンパ球浮遊液と一緒に検査した。

その結果、回収液のリンパ球濃度は血液の６０％、リン
パ球純度は９５％、赤血球は血液の０．６％であった。

また、この実施例では抗凝固剤を使用しなかったのであ
るが、回収リンパ球浮遊液は凝固しなかった。

すなわち、抗凝固剤が血球に与える悪影響を受けないリ
ンパ球が得られた。

以上述べたように、本発明によるリンパ球分離装置を用
いることによって、少量から多量に亘る血液を極めて簡
単な操作で処理でき、また得られるリンパ球の純度、収
率、パイアビリティ−も高い、また、高価な装置も使用
する必要がなくなった。

特に各種疾患の検査、免疫の研究、リンパ球ノサブポピ
ュレーション、サブセットの研究等においては、採血後
、非常に短時間のうちにリンパ球を純度よく採取するこ
とが重要であるが、従来の方法では少量の血液でも最低
１時間程度の時間を要した。

ところが本発明は数縦の血液から数分のうちにリンパ球
の分離採取を可能とし、さらに抗凝固剤による悪影響を
も受けずにリンパ球を採取することを可能にした。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のリンパ球分離装置の一例を示す模式図
、第２図は他の一例を示す正面断面の模式図、第３図は
血球浮遊液の排出口の一例を示す正面断面図、第４図は
同側面図、第５図および第６図は血球浮遊液の導入口の
例を示す正面断面図、第７図は両フィルターをつなぐ導
管の一例を示す模式図である。 １．１′・・・・・・第２フイルター、２，２′・・・
・・・容器、３．３′・・・・・・繊維状物質、４，４
′・・・・・・導入口、５゜５′・・・・・・第１フイ
ルター、６，６′・・・・・・導管、７，７′・・・・
・・容器、８，８′・・・・・・繊維状物質、９，９′
・・・・・・排出口、１０ 、１０′・・・・・・導管
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 血球浮遊液の入口と出口の間に、平均直径が５μｍ
   以上、２０μ扉以下の繊維をかさ密度０、０４ ？ ／
   ａ以上、０．４１？ ／ｃｒ＃Ｌ下テ詰メｆＪｌ、 １
   フイルターと、前記第１フイルターの前または後に、平
   均直径が１０μｍより大きく６０μ扉以下であり、かつ
   第１フイルター内の繊維の平均直径と等しいかそれ以上
   である繊維を詰めた第２フイルターが設けられ、両フィ
   ルターを連結する導管部に少なくとも１つの他の出入口
   を有するか、または第１フイルターと第２フイルターの
   間が取りはずせる構造を有することを特徴とするリンパ
   球分離装乱 ２ 第１フイルターが、平均直径７μｍ以上、１０μ扉
   以下の繊維を、かさ密度０．０４１？／−以上、０．２
   ５ｒ／−以下で詰めたものである特許請求の範囲第１項
   記載のリンパ球分離装置。 ３ 繊維が合成繊維、半合成繊維、再生人造繊維、無機
   繊維から選ばれた少なくとも１種である特許請求の範囲
   第１項または第２項記載のリンパ球分離装置。 ４ 第１フイルターの内容積が０．２ ｍＪ以上、５Ｔ
   Ｌｌ以下であり、第２フイルターの内容積が０．５ ｙ
   ｄ以上、５−以下である特許請求の範囲第１項ないし第
   ３項記載のリンパ球分離装置。 ５ 血球浮遊液の出口が、注射筒の筒先に接続できる構
   造をもつ特許請求の範囲第１項ないし第４項記載のリン
   パ球分離装置。 ６ 血球浮遊液の入口が注射針であるか、または注射針
   に接続できる構造をもつ特許請求の範囲第１項ないし第
   ５項記載のリンパ球分離装置。 ７ 血球浮遊液の入口が注射筒の筒先に接続できる構造
   をもつ特許請求の範囲第１項ないし第５項記載のリンパ
   球分離装置。 ８ 血球浮遊液の入口にゴムキャップをしである特許請
   求の範囲第１項ないし第５項記載のリンパ球分離装置。