JPS5841357A - 遊離コレステロ−ル分析法 - Google Patents
遊離コレステロ−ル分析法Info
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- JPS5841357A JPS5841357A JP13847681A JP13847681A JPS5841357A JP S5841357 A JPS5841357 A JP S5841357A JP 13847681 A JP13847681 A JP 13847681A JP 13847681 A JP13847681 A JP 13847681A JP S5841357 A JPS5841357 A JP S5841357A
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- Japan
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- cholesterol
- reaction
- washed
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は遊離コレステロールを分析する方法に係り、特
に同じ反応容器を洗浄再生して複数種の被検項目を分析
する場合に通用するに好適な遊離コレステロール分析法
に関する。
に同じ反応容器を洗浄再生して複数種の被検項目を分析
する場合に通用するに好適な遊離コレステロール分析法
に関する。
臨床用生化学分析装置のうち、多種項目全分析する装置
の大部分は１反応ライン系に分析すべき項目数ど同数の
反応容器列を備えたものであシ、各反応容器列が各々の
分析項目に対応している。
の大部分は１反応ライン系に分析すべき項目数ど同数の
反応容器列を備えたものであシ、各反応容器列が各々の
分析項目に対応している。
だからこの場合、同じ反応容器に着目すれば、試料と試
薬との反応液を測定に供したらとの反応容器が洗浄され
て再び別の試料の反応のために使われるとしても、同一
種の分析項目に関してである。
薬との反応液を測定に供したらとの反応容器が洗浄され
て再び別の試料の反応のために使われるとしても、同一
種の分析項目に関してである。
ところが、このような方式の分析装置は、分析項目の叔
を増大するにつれて大形化せざるを得ない。この点を改
善したのが、１つの反応容器列上で複数種の項目を反応
させる方式の分析装置である。この種装置では、反応に
用いた容器を洗浄して再生使用するときに、前の分析項
目と後の分析項目の種類が異なる。
を増大するにつれて大形化せざるを得ない。この点を改
善したのが、１つの反応容器列上で複数種の項目を反応
させる方式の分析装置である。この種装置では、反応に
用いた容器を洗浄して再生使用するときに、前の分析項
目と後の分析項目の種類が異なる。
一方、反応容器の材質としてよく用いられるのは、ガラ
スおよび合成樹脂である。この内ガラス製容器は１耐熱
性があるので洗浄、乾燥して再生使用する場合に用いら
れ、合成樹脂製容器は一度の反応に使用しただけでｄい
捨てる場合に用いられていた。
スおよび合成樹脂である。この内ガラス製容器は１耐熱
性があるので洗浄、乾燥して再生使用する場合に用いら
れ、合成樹脂製容器は一度の反応に使用しただけでｄい
捨てる場合に用いられていた。
最近の技術の進歩によシ、合成樹脂製容器を洗浄して再
生５用できるＯＴＷ目性が出てきた。それ故発明者らは
同じ反応容器列上で複数種の分析項目を反応させる分析
装置に合成樹脂製容器を採用することを試みた。合成１
１ｍ脂表容器はガラス製のものに比べて軽量であるとい
う利点を有する。
生５用できるＯＴＷ目性が出てきた。それ故発明者らは
同じ反応容器列上で複数種の分析項目を反応させる分析
装置に合成樹脂製容器を採用することを試みた。合成１
１ｍ脂表容器はガラス製のものに比べて軽量であるとい
う利点を有する。
ところが、合成・封脂製容器を洗浄再生夏用して血清試
料中の遊離コレステロール全反応させ、吸光光度法でｔ
ｊｌｌｌ定すると、著しい誤差を生ずることのあること
が見い出された。
料中の遊離コレステロール全反応させ、吸光光度法でｔ
ｊｌｌｌ定すると、著しい誤差を生ずることのあること
が見い出された。
本発明の目的は、合成樹脂製容器を用いて他の分析項目
用試料を処理したあとに、遊離コレステロール分析反応
金主ぜしめても、測定誤差が生じないＪ１ｉＳコレステ
ロール分析法を提供することにある。
用試料を処理したあとに、遊離コレステロール分析反応
金主ぜしめても、測定誤差が生じないＪ１ｉＳコレステ
ロール分析法を提供することにある。
本発明は、リボプロティンリパーゼの活性を阻害する脂
肪酸アルカリ塩全遊離コレステロール分析用試薬に混合
して、この試薬と試料との反応液を光学的に測定するこ
と’ｉ−１？徴とする。
肪酸アルカリ塩全遊離コレステロール分析用試薬に混合
して、この試薬と試料との反応液を光学的に測定するこ
と’ｉ−１？徴とする。
本発明は、合成樹脂製容器を用いて遊離コレステロール
分析反応を生せしめたときの測定誤差の原因が、合成１
封脂製容器、例えばメタクリル樹脂製容器やボリスチレ
／樹脂製容器内に残存されているリボプロティンリパー
ゼの作用によるものであることｆｅ＃、見したことに基
づいてなされた。リボプロティン−リパーゼは、総コレ
ステロール分針用試薬や中性脂肪分析用試薬に含まれて
おり、生体試料例えば血清試料中のエステル形コレステ
ロール全遊離コレステロールに転換する働きを有する。
分析反応を生せしめたときの測定誤差の原因が、合成１
封脂製容器、例えばメタクリル樹脂製容器やボリスチレ
／樹脂製容器内に残存されているリボプロティンリパー
ゼの作用によるものであることｆｅ＃、見したことに基
づいてなされた。リボプロティン−リパーゼは、総コレ
ステロール分針用試薬や中性脂肪分析用試薬に含まれて
おり、生体試料例えば血清試料中のエステル形コレステ
ロール全遊離コレステロールに転換する働きを有する。
だから、リボプロティンリパーゼが容器内に残存すれば
、試料の遊離コレステロール薦度が真値よシ高濃度とな
シ、測定直に正誤差をもたらすものと推定される。この
リポプロティンリパーゼは容器が合成１封脂製である場
合にその容器に物理的に吸着し、一旦吸層したものは水
洗によって容易に除去できない。
、試料の遊離コレステロール薦度が真値よシ高濃度とな
シ、測定直に正誤差をもたらすものと推定される。この
リポプロティンリパーゼは容器が合成１封脂製である場
合にその容器に物理的に吸着し、一旦吸層したものは水
洗によって容易に除去できない。
発明者らは実験を重ねた結果、脂肪酸のアルカリ金属塩
がリポプロティンリパーゼの活性を妨げることを見い出
した。だから、遊離コレステロール分析反応時に脂肪酸
アルカリ金属４を共存させれば１反応容器にリボプロテ
ィンリパーゼが吸着されていてもエステル形コレステロ
−ｋ が４ｇ−ｙレスチロールに変換されない。
がリポプロティンリパーゼの活性を妨げることを見い出
した。だから、遊離コレステロール分析反応時に脂肪酸
アルカリ金属４を共存させれば１反応容器にリボプロテ
ィンリパーゼが吸着されていてもエステル形コレステロ
−ｋ が４ｇ−ｙレスチロールに変換されない。
遊離コレステロール分析用試薬に他の物質全共存させる
場合は、測定反応を妨害するものであってはならないが
、脂肪酸アルカリ金属塩は測定反応を妨害しない。好ま
しい脂肪酸アルカリ金属塩は、オレイン藏ナトリウム、
ステアリン戚ナトリウム、ラウリル藏ナトリウム、バル
ミチン駿ナトリウム等の高級脂肪酸ナト１．゛ラム塩、
同様カリウム塩および同鑵リチウム塩である。反応容器
内における脂肪酸アルカリ金属塩の共存適正量は２〜２
００μＭである。
場合は、測定反応を妨害するものであってはならないが
、脂肪酸アルカリ金属塩は測定反応を妨害しない。好ま
しい脂肪酸アルカリ金属塩は、オレイン藏ナトリウム、
ステアリン戚ナトリウム、ラウリル藏ナトリウム、バル
ミチン駿ナトリウム等の高級脂肪酸ナト１．゛ラム塩、
同様カリウム塩および同鑵リチウム塩である。反応容器
内における脂肪酸アルカリ金属塩の共存適正量は２〜２
００μＭである。
第１表に不発ｄＡを実行するために用いた遊離コレステ
ロール分析用試薬液の組成例を示す。
ロール分析用試薬液の組成例を示す。
第１表
分析用試薬は、コレステロールオキシダーゼとキノン系
発色剤（ここではフェノールおよび４−アミノアンチピ
リン）と緩衝剤金倉む従来から用いられていたものに、
適量の高級脂肪酸塩が混合されている。
発色剤（ここではフェノールおよび４−アミノアンチピ
リン）と緩衝剤金倉む従来から用いられていたものに、
適量の高級脂肪酸塩が混合されている。
実施例１
透Ｃ！Ａなメタクリル樹脂からなる一列の反応容器列を
間欠移送する間に、第１の場所でサンプラーからの血清
試料をピペッタによって所定量分配し、第２の場所で試
薬ディスペンサによって１５ＪＴ足量の試４１ｆ、ｆ：
添加し、第３の場所で透明な反応容器に元金照射し容器
内の反応液の吸光度を測定するｄ床用生化学分析装置を
用いる。この装置の反応ライン上でａ、１つの茨木に関
連する複数の分析項目用試料が連続的に配列されたあと
、他の検体に関連するｄ数の分析項目用の一連の試料が
配列される。各分析項目の反応液を測定したあと、反応
容器は水洗され、上述の８１の場所まで移送されその後
の試料の反応に供される。
間欠移送する間に、第１の場所でサンプラーからの血清
試料をピペッタによって所定量分配し、第２の場所で試
薬ディスペンサによって１５ＪＴ足量の試４１ｆ、ｆ：
添加し、第３の場所で透明な反応容器に元金照射し容器
内の反応液の吸光度を測定するｄ床用生化学分析装置を
用いる。この装置の反応ライン上でａ、１つの茨木に関
連する複数の分析項目用試料が連続的に配列されたあと
、他の検体に関連するｄ数の分析項目用の一連の試料が
配列される。各分析項目の反応液を測定したあと、反応
容器は水洗され、上述の８１の場所まで移送されその後
の試料の反応に供される。
試料を分取した特定の反応容器に、リポプロテインリパ
ーゼ、リン酸緩画液、フェノール、４−アミノアンチピ
リン、グリセロールオキンダーゼおよびパーオキシダー
ゼを含む中１生脂肪分析用試薬を加えて試料と混会し、
所定時間後に反応液の吸光度測定がなされる。その後こ
の反応８６を水洗する。水洗された特定の反応容器に、
コント。
ーゼ、リン酸緩画液、フェノール、４−アミノアンチピ
リン、グリセロールオキンダーゼおよびパーオキシダー
ゼを含む中１生脂肪分析用試薬を加えて試料と混会し、
所定時間後に反応液の吸光度測定がなされる。その後こ
の反応８６を水洗する。水洗された特定の反応容器に、
コント。
−ル血清（モニトロールＩＩＸ）２０μｔを採取し、そ
の訛第１表の遊離コレステロール分析用試薬液を２００
μを添加し、最終液量全１−にする。
の訛第１表の遊離コレステロール分析用試薬液を２００
μを添加し、最終液量全１−にする。
ｐＨ７，８の緩ｄｉｉｔｔＬ中で試料の遊離コレステロ
ールがコレステロールオキシダーゼにより酸比され、過
酸化水素とΔ４−コレステノン金生ずる。生成された過
敏化水粱にパーオキシダーゼのイず在下でフェノールあ
・よび４−アミノアンチピリン金縮合させて赤色キノン
を生成する。光度計によって反応液中の赤色キノンに基
づく吸光度を測定して遊離コレステロールｄｌｆｔ［メ
ル。コントロール血清の１．！ｉ離コレステロールの標
準濃度は４５ｍｇ／ｌｉ ｊであるが、実測値ｒＪ、４
３〜４６ｍｇ／ｄｔ であった。
ールがコレステロールオキシダーゼにより酸比され、過
酸化水素とΔ４−コレステノン金生ずる。生成された過
敏化水粱にパーオキシダーゼのイず在下でフェノールあ
・よび４−アミノアンチピリン金縮合させて赤色キノン
を生成する。光度計によって反応液中の赤色キノンに基
づく吸光度を測定して遊離コレステロールｄｌｆｔ［メ
ル。コントロール血清の１．！ｉ離コレステロールの標
準濃度は４５ｍｇ／ｌｉ ｊであるが、実測値ｒＪ、４
３〜４６ｍｇ／ｄｔ であった。
第１表における試４ｔＬの成分のうち、オレイン酸ナト
リウムの＃度を変えたときのコントロール血清（モニト
ロールｆｆＸ）中の遊離コレステロールの測定誤差（正
誤差）を第２表に示す。
リウムの＃度を変えたときのコントロール血清（モニト
ロールｆｆＸ）中の遊離コレステロールの測定誤差（正
誤差）を第２表に示す。
第２表
第２表から理解されるように、オレイン酸すトリウムを
含まない従来の試薬金柑いた場合、中１生脂肪反応麦の
反応容器全洗浄して遊離コレステロールを反応させて測
定すると、標準＃度が４５ｍｇ／ｄｉ であるのに対
して１４０ ｍｇ／ｄｔ以上もの測定層となる。
含まない従来の試薬金柑いた場合、中１生脂肪反応麦の
反応容器全洗浄して遊離コレステロールを反応させて測
定すると、標準＃度が４５ｍｇ／ｄｉ であるのに対
して１４０ ｍｇ／ｄｔ以上もの測定層となる。
実施例２
ポリスチレン樹脂製の透明な反応容器の列を有する分析
装置を用いた。１つの反応容器列上で複数種の分析項目
金−反応させ、直漱測元法によって反応液の吸光度を測
定するのは実施例１の分析装置と同様でろる。
装置を用いた。１つの反応容器列上で複数種の分析項目
金−反応させ、直漱測元法によって反応液の吸光度を測
定するのは実施例１の分析装置と同様でろる。
分析装置の特定の容器に、総コレステロール用試料液全
サンプラーから採取し、リポプロティンリパーゼ、リン
酸緩衝液、フェノール、４−アミノアンチピリン、コレ
ステロールオキシダーゼおよびパーオキシダーゼを含む
諾コレステロール試薬ｇを加えて、反応せしめ、所定時
間後に反応液の吸光度を」り定する。その区この反応容
器を水洗し、遊離コレステロールの分析反応に供する。
サンプラーから採取し、リポプロティンリパーゼ、リン
酸緩衝液、フェノール、４−アミノアンチピリン、コレ
ステロールオキシダーゼおよびパーオキシダーゼを含む
諾コレステロール試薬ｇを加えて、反応せしめ、所定時
間後に反応液の吸光度を」り定する。その区この反応容
器を水洗し、遊離コレステロールの分析反応に供する。
水洗された４足の反応容器にコントロール血清金２０μ
を採取し、その後第１表のオレイン酸ナトリウムの代わ
りに２０μＭのステアリン酸ナトリウムをきむ遊−コレ
スチロール分析用試薬ｍを２００μを卯え１通路液量全
１−にする。反応によって生じた赤色キノンに基づく吸
光度を測定して遊離コレステロール＃夏を求める。ステ
アリン酸ナトリウムを含まない従来の試薬を用いたとき
には、前段の分析項目が中性脂肪の場合と面識に、正誤
差が非常に犬でるる。それに対しこの実＃１例によれば
合成樹脂製反応容器を使用したことにともなう測定誤差
はもたらされない。
を採取し、その後第１表のオレイン酸ナトリウムの代わ
りに２０μＭのステアリン酸ナトリウムをきむ遊−コレ
スチロール分析用試薬ｍを２００μを卯え１通路液量全
１−にする。反応によって生じた赤色キノンに基づく吸
光度を測定して遊離コレステロール＃夏を求める。ステ
アリン酸ナトリウムを含まない従来の試薬を用いたとき
には、前段の分析項目が中性脂肪の場合と面識に、正誤
差が非常に犬でるる。それに対しこの実＃１例によれば
合成樹脂製反応容器を使用したことにともなう測定誤差
はもたらされない。
Claims (1)
- １６他の被検項目に関する試料と試薬の反応に使用した
合成樹脂製容器容ａを洗浄して使用に供する行程、リボ
プロティンリパーゼの活性全阻害する脂肪酸アルカリ塩
ｋｔむ遊離コレステロール用分析試薬を試料に添加する
行程、および反応液を光学的に測定して遊離コレステロ
ール濃度を求める行程全台むこと金＃徴とする遊離コレ
ステロール分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13847681A JPS5841357A (ja) | 1981-09-04 | 1981-09-04 | 遊離コレステロ−ル分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13847681A JPS5841357A (ja) | 1981-09-04 | 1981-09-04 | 遊離コレステロ−ル分析法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5841357A true JPS5841357A (ja) | 1983-03-10 |
| JPS6350665B2 JPS6350665B2 (ja) | 1988-10-11 |
Family
ID=15222953
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13847681A Granted JPS5841357A (ja) | 1981-09-04 | 1981-09-04 | 遊離コレステロ−ル分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5841357A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0372093A (ja) * | 1989-08-09 | 1991-03-27 | Mitsubishi Motors Corp | 亜鉛含有メッキ酸性溶液 |
| CN104245953A (zh) * | 2012-04-27 | 2014-12-24 | 协和梅迪克斯株式会社 | 样品中的测定对象成分的测定方法 |
-
1981
- 1981-09-04 JP JP13847681A patent/JPS5841357A/ja active Granted
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0372093A (ja) * | 1989-08-09 | 1991-03-27 | Mitsubishi Motors Corp | 亜鉛含有メッキ酸性溶液 |
| CN104245953A (zh) * | 2012-04-27 | 2014-12-24 | 协和梅迪克斯株式会社 | 样品中的测定对象成分的测定方法 |
| KR20150003739A (ko) * | 2012-04-27 | 2015-01-09 | 교와 메덱스 가부시키가이샤 | 검체 중의 측정 대상 성분의 측정 방법 |
| JPWO2013161677A1 (ja) * | 2012-04-27 | 2015-12-24 | 協和メデックス株式会社 | 検体中の測定対象成分の測定方法 |
| US9663816B2 (en) | 2012-04-27 | 2017-05-30 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for measuring a component of a biological fluid and reducing the effect of interfering substances |
| EP2843054B1 (en) * | 2012-04-27 | 2021-04-07 | Hitachi Chemical Diagnostics Systems Co., Ltd. | Method for measuring component to be measured in specimen |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6350665B2 (ja) | 1988-10-11 |
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