JPS5827263B2 - Ｎ−アシル−αおよびβ−アスパルチルグルタミン酸塩の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規化合物、ＬまたはＤＬ型のＮ−アシル−α
−およびβ−アスパルチルグルタミン酸およびそれらの
塩に関する。

これらの化合物は医薬の製剤に用いられる。

本発明は特にＮ−アシルα−およびβ−アスパルチルグ
ルタミン酸およびそれらの塩の製造法に関する。

本発明の新規化合物はＮ−アシル−α−およびβ−アス
パルチルグルタミン酸およびそれらの塩であるが、それ
らの化合物はそれぞれ一般式（Ｉ）および（２）で示さ
れる。

α型イソマーに対しては 式中 Ｍはｎ価のカチオンを示し、それは （イ）金属カチオン特にリチウム、ナトリウム、カリウ
ムのようなアルカリ金属のカチオン、マグネシウム、ス
トロンチウム、カルシウムのようなアルカリ土類金属の
カチオン、 （ロ）有機化合物のカチオン、その中で特にジメチルア
ミノエタノール、ジエチルアミノアルコールのようなア
ミノアルコール、 ←→ ベタインあるいはコリン型の第４級アンモニウム
、特にベタイン、コリン自体あるいはアセチルコリン、 に） リジン、オルニチンあるいはアルギニンのような
アミノ酸 でありうる。

Ｒはアシル基を示す。

ｍの値はカルボキシル基の塩型となった数に従いＯから
３まで変化するが、Ｒがアセチルである場合にはＯには
ならない。

本発明の酸および塩は、前述の第一の式（Ｉ）に相当す
るα型のもの、前述の第二の式（９）に相当するβ型の
もの、α型のものとβ型のものとが定まった割合で混合
されているものでありうる。

本発明の化合物は生理学的見地から有用な製品である。

それらは、すでに動物組織に存在が知られているある種
の天然物の構造に相当する構造を有するアスパルチルグ
ルタミン酸ペプタイドを動物あるいは人間の生体内に導
入することができる。

本発明の好ましい化合物はＲが特にフォルミル、プロピ
オニル、インプロピオニル、ブチリル、インブチリル、
オーブチリルであるものである。

本発明のその他の好ましい化合物は、ｍが０でな（、し
かもＲがアセチルである塩である。

事実、Ｎ−アシル−α−およびβ−アスパルチルグルタ
ミン酸の薬効はアルカリ金属、アルカリ土類金属、アミ
ノアルコール、アミノ酸、第４級アンモニウム塩のカチ
オンの存在、そして特に、すでに示した種々のカチオン
の存在によって持続し、高められることが明らかである
。

これらの化合物は中枢神経系に対応する酸よりすぐれた
薬理活性を示し、同一のカチオンの他の化合物の不都合
、たとえば毒性を示さない。

本発明の化合物は中枢神経系に選択的に効果があり、そ
れらの薬理作用は一般的な行動に関し、そして、特に精
神疲労、ショック状態、衰弱状態、抑圧状態、記憶困難
、くりかえしおよび偶発的な緊張につぎつぎに順応する
ことの困難、脳血管に起因する運動欠失の治療に用いら
れる。

中枢神経系に及ぼす効果の外の効果として心臓血管作用
があげられる。

これらの性質により、本発明の化合物は、ジエチルエス
テルのようなエステルとして文献記載のＮ−アセチル−
β−Ｌ−アスパルチルグルタミン酸とは区別されるもの
である。

本発明はまた一方では、Ｎ−アセチル−α−およびβ−
アスパルチルグルタミン酸およびそれらの塩を包含する
Ｎ−アシル−α−およびβ−アスパルチルグルタミン酸
の製造法に関する。

これらの化合物の製造法としてすでに知られている方法
は主として実験室的規模での実施に適合したものにすぎ
ない。

加うるに、公知方法では高価な溶媒または混合溶媒を必
要とする。

公知方法は工業的規模で実施するにはほとんど克服でき
なイ困難性を有している。

これに反し、本発明は工業的に有利に実施できる方法を
提供するものである。

なぜなら、本発明の方法では、水のような単純でありふ
れた溶媒中で連続した２段階の反応が行なわれるからで
ある。

加うるに、本発明の方法では製品が一般に都合よ（塩の
型で直接うろことができ、中間体の酸またはエステルの
型を通らなくてすむのである。

本発明の方法は、水のような極性溶媒中で、グルタミン
酸の塩をＮ−アシルアスパラギン酸無水物と反応させて
式（Ｉ）または（９）の塩の水溶液をえて、次いで必要
に応じ、カチオンを水素と交換させて対応する酸にする
ことから成立っている。

Ｎ−アシルアスパラギン酸無水物は、あらかじめ、調製
すべき化合物のアシル基Ｒの対応する酸無水物をアスパ
ラギン酸の塩と反応させて生成するＮ−アシルアスパラ
ギン酸を分離し、これを同一の酸無水物、すなわちアシ
ル基Ｒの対応する酸無水物の新たな量と反応させること
によって調製される。

上記の方法を実施するのに好ましい条件は以下の記載か
ら明らかとなる。

その記載は本発明の方法の基本的な反応機構や、温度、
ｐＨ１反応物の相対的な濃度、反応物添加の順序や速さ
のような種々のパラメーターの影響について綿密に述べ
ている。

本発明によれば、式（Ｉ）および間の化合物の調製は次
の２工程で有利に行なわれる。

第１工程 Ｎ−アシルアスパラギン酸無水物 Ｎ−アシルアスパラギン酸無水物は式叫 （式中Ｒは前記と同一の意義を有する） で示される。

まず、アシル基Ｒの対応する酸無水物（Ｎをアスパラギ
ン酸の塩、特にアスパラギン酸カルシウム＊＊と水溶液
中で反応させ、ついで反応液から分離したＮ−アシルア
スパラギン酸を新たな量の酸無水物（Ａ）の存在で式（
ホ）のＮ−アシルアスパラギン酸無水物にする。

第２工程 式（Ｉ）および四のＮ−アシル−α−およびβ−アスパ
ルチルグルタミン酸の調製 ペプチド縮合は水溶液中でＮ−アシルアスパラギン酸無
水−と弐■ （式中Ｍは前述の意義を有する） のグルタミン酸の塩との間で行なわれる。

上記の反応機構は次の通りである。

α型の生成は上記反応式において酸無水物の環がＨａｌ
ｌに従って開裂したときに起こり、β型の生成はｂ″に
従って開裂したときに起こる。

本発明を実施する好ましい態様として次のことがあげら
れる。

グルタミン酸塩水溶液は直接に塩を水に溶解して調製し
てもよいし、またグルタミン酸の水中懸濁液に、溶液の
ｐＨを５〜９、好ましくは６〜８に調整するように前述
のカチオンＭを供給することによって調製してもよい。

Ｎ−アシルアスパラギン酸無水物を反応液中に導入する
とｐＨの急激な低下が起きるから、グルタミン酸の中和
に用いた塩基を同時に加えて反応液のｐＨを前述の範囲
に保つ。

グルタミン酸塩とＮ−アシルアスパラギン酸無水物の化
学量論的比率の反応を０．５〜１．５モル／ｌ、好まし
くは０．７〜１．１モル／ｌの濃度で、化学量論の比か
らそれるが最高１０％にして行なうのが好ましい。

上述の濃度範囲の選択は、１．５モル／１以上の濃度で
はパラメーターである温度、ｐＨのコントロールが困難
であり、また０、５モル／ｌ以下の濃度では酸無水物叫
の加水分解が増大してペプチド縮合の損失をもたらすと
いうことからなされたものである。

この加水分解はまた反応液の温度が高くなると増大する
。

本発明の製品を調製する好ましい手法としては、反応液
の温度は一５℃と＋２５℃の間であり、塩基を加えると
起こる温度の上昇をできるたけ少なくするほど有利であ
る。

ペプチド縮合は発熱反応であり、温度を上記範囲内に保
つため、外部より適当な冷却を行なうか、あるいは反応
液中に氷を投入するかあるいはこれらを同時に行なう。

上に示した条件に従えば酸無水物叫の加水分解反応は実
際上抑制される、すなわち縮合しない遊離グルタミン酸
および生成するＮ−アシルアスパラギン酸の量を容易に
微量に保つことができる。

上記反応条件で操作を行なうと、選択した条件によって
きまる割合でα型およびβ型のものの混合物を前述の塩
の水溶液としてうる。

水溶液を減圧濃縮したのち、それらの塩の混合物を凍結
乾燥、噴霧乾燥、その他適当な乾燥法で、固体として分
離することができる。

こうしてえられた混合物はそれぞれの型のものに分別す
る必要なく種々の用途、特に医薬に用いることができる
。

本発明によれば、酸の製造方法は一般式（Ｉ）および（
８）の対応する塩を出発物質として用いる。

これらの塩の溶液、それは前述工程の最終溶液であって
もよいし、また固体で分離されたα型とβ型の化合物の
混合物を水に溶解したものであってもよいのであるが、
その溶液をアリールスルホン酸型のカチオン交換樹脂に
通塔処理する。

樹脂は金属カチオンおよび反応しなかったグルタミン酸
を吸着する。

ついでデキストランゲルで分子濾過を行なって水溶液中
に微量混在するＮ−アシルアスパラギン酸を除き、十分
満足できる純度のＮアシル−α−およびβ−アスパルチ
ルグルタミン酸をうる。

本発明の塩の精製は上述の操作でその塩を対応する酸に
変換せしめ、ついで、えられた酸を水溶液中ｐＨメータ
ーでコントロールしながら、出発物質の塩を再生するこ
とのできる塩基で中和することによって有利に行なうこ
とができる。

塩を対応する酸に変換して精製する手法は新しい塩をつ
くるのにも用いられる。

酸を直接中和する手法により、有機化合物たとえばアミ
ノアルコール、第４級アンモニウム、アミノ酸との塩を
つくることができる。

本発明の方法によってえられる先に述べた混合物中の塩
および酸のα型、β型の割合は、公知の物理的な分析方
法、特に濾紙電気泳動によって分析することができる。

混合物中のα型またはβ型の割合を必要に応じ増大させ
ることは、α型またはβ型を分別しうる分別晶出により
有利に行なうことができる。

本発明の目的物である新規化合物が有効な薬理活性を示
すことは実験動物による試験により証明される。

これら化合物は頭脳に刺戟反応を与える。さらにこれら
化合物は、動物がたとえば電撃ショックによって健忘症
をひき起こされたような病理状態におかれている場合に
−そう大きい効果を示す。

本発明の化合物は一般に毒性が低く、精神興奮、抗健忘
症の効果ならびに強心作用の効果を明らかに示す。

本発明の化合物の１種または２種以上を含有し、活性成
分の効果を示す種々の医薬組成物が提供される。

かかる医薬組成物は経口投与あるいは注射により投与さ
れる。

剤形としては単純な錠剤あるいは腸よりの吸収の緩慢の
見地から二重にしたりあるいはしなかったりした錠剤、
カプセル、ゲル、溶液、飲用あるいは注射用アンプルの
形で選ばれた剤形により補薬とともに公知の手法で調製
される。

本発明は実施例によってさらに詳細に説明されるが、そ
れら実施例は単に説明のためであって限定のためのもの
ではない。

実施例中、薬理試験の結果を一定とするために、投与し
た本発明の化合物としてはＮＡＡＧＡ（Ｎアシル−α−
およびβ−アスパルチルグルタミン酸）が等量のものを
選択した。

量は無水の製品の量で示す。

実施例 Ｉ Ｎ−アセチル−α−およびβ−Ｌ−アスパルチルーＬ−
グルタミン酸ナトリウム （ａ） Ｎ−アセチル−Ｌ−アスパラギン酸無水物攪
拌機、塩化カルシウム管を取付けた還流冷却器を有する
１０００ｒＩｌｌの反応器に１モル（１７５Ｓ’）のＮ
−アセチル−Ｌ−アスパラギン酸および２４０７ｒＬｌ
（約２．５モル）の無水酢酸を入れる。

混合物を攪拌しながら６０℃に３０分保ち、ついで２０
℃にして６時間攪拌を続ける。

Ｎ−アセチル−Ｌ−アスパラギン酸無水物が晶出するの
でこれを反応液から濾別し、■・２ジクロロエタンで洗
滌し真空乾燥する。

製品の物理的性質 融点（コアラ−）＝１８０°Ｃ （α）Ｐｏ−−４８°（Ｃ＝２．５無水酢酸中） （ｂ） ペプタイド縮合 攪拌機、ブロム管、固体用の濾斗、ｐＨメーター用の電
極を有する１０００７７１１の反応器に１４７１（１モ
ル）のグルタミン酸、９００ＴＬｌの脱塩水を入れてよ
く攪拌する。

ついで８２グ（１モル）の４９％苛性ソーダ溶液を加え
、液のｐＨを約７．７にする。

反応混合物を温水浴で０℃に冷却し、１５分間に１５１
’（１モル）Ｎ−アセチルアスパラギン酸無水物結晶お
よび同時にブロム管により、１６７グの４９％苛性ソー
ダ溶液を少しづつ加え、さらに２００テの氷を加えて温
度が０℃と５℃の範囲内にあるように保つ（反応物の添
加はｐＨが６〜８にあるように行なう）。

添加終了時反応混合物のｐＨは約７．３０である。

反応混合物を２時間攪拌する。

溶液を２０ｍｍＨｇの真空で５０℃以下で濃縮する。

製品濃度５３％の水溶液の物理的性質は次の通りである
。

ｐＨ２０℃−７，４０ （α）凡−−１１，６°（ＨＣＩによる酸性化後） 元素分析 Ｃ，、Ｈ，３Ｎ２０ＢＮａ３ Ｃ％ Ｋ％ Ｎ％ Ｎａ％ 理論値 ３５．６９ ３，５４ ７．５６ １８．６３
実測値 ３５．５６ ３．３３ ８．００ １８．６６
実施例 ２ Ｎ−グロピオニルーα−およびβ−アスパルチルグルタ
ミン酸カリウム 実施例１に記載の方法をグルタミン酸カリを用いて行な
う。

グルタミン酸カリは４８６１のグルタミン酸を２７５０
ｍ１の脱塩水に溶解し、冷却しながら３８３．７Ｐの８
５％苛性カリで中和してえられる。

反応混合液の温度を０℃とし、よく攪拌しながう少しず
つ５１０１ＯＮ−プロピオニルアスパラギン酸無水物を
加える。

反応液の温度を１５分間０〜２°Ｃに氷を加えて保つ。

ｐＨは６８０１の５０％苛性カリ水溶液を連続して加え
ることにより６〜８に保たれる。

反応物の添加は約３０分間かげて行なう。

液のｐＨは７．５０である。

凍結乾燥した製品について計算したＮ−アシルペプタイ
ド製品の収率は出発物質グルタミン酸カリに対し９７％
である。

凍結乾燥したＮ−グロピオニルーα−およびβアスパル
チルグルタミン酸カリは白色粉末で１１％の水を含んで
いる。

元素分析 Ｃ１□ＨＩ３Ｎ２Ｏ３に３ Ｃ％ Ｋ％ Ｎ％ Ｋ％ 理論値 ３３．３２ ３，４９ ６．４７ ２７．１２
実測値 ３３．２７ ３．５０ ６．４７ ２６．８５
実施例 ３ Ｎ−７”チリル−α−およびβ−アスパルチルグルタミ
ン酸リチウム ブロム管、攪拌装置、固体用濾斗、ｐＨメーター用電極
を有する５０００ＴＬｌの反応器に順次、７０７、７
Ｐのグルタミン酸、６２５７７１１の脱塩水、４０７Ｐ
のｌＪチン（ＬｉＯＨ−Ｈ２Ｏ）（ｐＨ７，６）を導入
する。

０℃に冷却し、攪拌しながら１９６．５１ＯＮ−ブチリ
ルアスパラギン酸無水物を少しずつ３０分かげて２５０
Ｐの氷とともに加える。

反応液のｐＨを１５％リチン水溶液８５０１を連続して
加えることにより７．２５に保つ。

凍結乾燥によりＮ−ブチリル−α−およびβアスパルチ
ルグルタミン酸リチウムは１３．４０％の水を含む白色
粉末でえられる。

元素分析 Ｃ］３Ｈ１□Ｎ２０６Ｌｉ３ ０％ Ｎ％ Ｎ％ Ｌｉ％ 理論値 ４４，６０ ４．８９ ８．００ ５．９５実
測値 ４４．９８ ４．７３ ８．２２ ５．９８実施
例 ４ Ｎ−アセチル−α−およびβ−アスパルチルグルタミン
酸リチウム（化合物ＪＦｙ、 １ ）実施例３で用いた
手法によりＮ−アセチル−αおよびβ−アスパルチルグ
ルタミン酸リチウムが、使用したＮ−アセチルアスパラ
ギン酸無水物に対し８４％の収率でえられる。

この塩の水溶液を凍結乾燥することにより１１％の水を
含む白色粉末かえられる。

元素分析 Ｃ，ＩＨ，３Ｎ２０ＢＬｉ３ Ｃ％ Ｎ％ Ｎ％ Ｌｉ％ 理論値 ４１．０２ ４．０７ ８．７０ ６．４６実
測値 ４１．０７ ４．２８ ８，７５ ６．６５実施
例 ５ Ｎ−アセチル−α−およびβ−アスパルチルグルタミン
酸カルシウム（化合物Ａ２） １４．７Ｐ（０，１モル）のグルタミン酸を１００ｍ１
の水に溶解したものおよび９．５１の生石灰からグルタ
ミン酸カルシウムを調製する。

１５．７ｆのＮ−アセチルアスパラギン酸無水物を少し
ずつ１５分かげて加える。

反応液の温度Ｏ℃における生石灰の溶解度が少ないため
に反応液のｐＨ８，２は実質的に一定である。

添加終了後、攪拌を０℃で１５分間続ける。

凍結乾燥によりＮ−アセチル−α−およびβ−アスパル
チルグルタミン酸カルシウムを１１．１％の水を含む白
色粉末の形で８０％の収率でうる。

元素分析 Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４０，６ Ｃａ３Ｃ％ Ｎ
％ Ｎ％ Ｃａ％ 理論値 ３６．４５ ３．６２ ７．７３ １６．５９
実測値 ３６．６６ ３．５０ ７．８０ １６．４２
実施例 ６ Ｎ−アセチル−α−およびβ−アスパルチルグルタミン
酸マグネシウム（化合物厘３） グルタミン酸マグネシウムの調製は４７３ｙのグルタミ
ン酸を２３０１のマグネシアと２５００ｍ１の水中で攪
拌しながら反応させて行なう。

反応混合物の温度を２５℃に保ちながら４６０グのＮ−
アセチルアスパラギン酸無水物を３０分間かげて少しず
つ加える（液のｐＨ値は８以下になってはならない）。

攪拌を２時間続ける。反応液から分離されたＮ−アセチ
ル−α−およびβ−アスパルチルグルタミン酸は６０℃
で真空乾燥する。

収率９５％。白色結晶状粉末で２６％の水分を含む。

元素分析 Ｃ２□Ｈ２６Ｎ４０ ＋ａ Ｍｇ ３Ｃ％
Ｎ％ Ｎ％ Ｍｇ％ 理論値 ３９．１１ ３．８８ ８．２９ １０．７９
実測値 ３８．８３ ３，９８ ８．４９ １０．７１
実施例 ７ Ｎ−アセチル−α−およびβ−Ｌ−アスパルチルーＬ−
グルタミン酸Ｌ−リジン塩 実施例１に記載の方法で調製されたＮ−アセチル−α−
オヨヒβ−Ｌ−アスパルチルーＬ−グルタミン酸ナトリ
ウムの３５００７７１１脱塩水溶液をカチオン交換樹脂
ＩＲＣ１２０で１時間当り樹脂容量の２倍容量の速度で
通塔処理する。

通塔後、樹脂を系統的に洗滌する。

洗滌水と通塔液を合併し、ペプチド縮合反応中に酸無水
物が加水分解して生じた微量のＮ−アセチルアスパラギ
ン酸を除去するためセファデックスＧ−１０ゲルで濾過
する。

えられた液を凍結乾燥してＮ−アセチル−α−およびβ
−Ｌ−アスパルチルーＬ−グルタミン酸を白色粉末状で
うろことができる。

旋光度 （α）詫−−３００（Ｃ＝１％ 水中）元素分
析 Ｃ１１Ｈ１６Ｎ２０８ ０％ Ｎ％ Ｎ％ 理論値 ４３．４２ ５．２６ ９．２１実測値 ４２
．６１ ５．２６ ９．０２製品中のα型およびβ型の
比率は凍結乾燥した製品を電気泳動に付し、電気泳動ス
ポットをそれぞれの成分の文献記載の値と比べることに
よって測定される。

ペプチドイソマーは１％水溶液でワットマン履１濾紙に
スポットされ２０ボルト／ｃＩＩＬで１時間、ｐＨ３，
４で組成がピリジン：酢酸：水（１：１０：１８９容量
比）の液を用い電気泳動に付される。

α型およびβ型ペプチドはシュワツペ反応により噴霧、
１００℃、１０分加熱して生じるかつ色のスポットで確
認される。

カチオン交換樹脂通塔および分子濾過によって精製して
えられたＮ−アセチル−α−およびβＬ−アスパルチル
ーＬ−グルタミン酸水溶液は２０ｍｉＨｇの真空で５０
℃以下の温度で濃縮し、密度ｄｉＯ′Ｃが１．２６９で
５０ブリツクスのシロップをうる。

ｐＨメーターで確めなからＬ−リジンを加えることによ
り（化学当量）そのアミノ酸の塩が調製される。

最終溶液はｐＨ６゜８であり、窒素７．６％を有する。

この量は４９．５％の無水塩の純度に相当する。溶液を
凍結乾燥してＮ−アセチル−α−およびβＬ ７スバ
ルチルーＬ−Ｊ’ルタミン酸Ｌ−リジン塩をうろことが
できる。

製品は粉末状である。

元素分析 Ｃ２９Ｈ５８Ｎ８０Ｊ４ Ｃ％ Ｎ％ Ｎ％ 理論値 ４６．８９ ７．８７ １５．０８実測値 ４
６．５２ ７．９３ １５．３５実施例 ８ Ｎ〜Ｎアセチルα−およびβ〜Ｌ−アスパルチル〜Ｌ−
グルタミン酸Ｌ−アルギニン塩 これらの化合物は実施例７に記載の方法においてＬ−ア
ルギニンを中和する塩基として用いることによってえら
れる。

ペプチドの中和は溶液をｐＨ６，９０にして完了する。

最終水溶液は無水塩５１．３％を含有する。

凍結乾燥してえもれる製品は粉末状である。

元素分析 Ｃ２９Ｈ５８Ｎ１４０１４ Ｃ％ Ｎ％ Ｎ％ 理論値 ４２，１２ ７．０７ ２３．７１実測値 ４
２．５１ ７．２４ ２３．６８実施例 ９ Ｎ−アセチル−α−およびβ−Ｌ−アスパルチルーＬ−
４ルタミン酸Ｌ−オルニチン塩 これらの塩は実施例７に記載の方法により、Ｎアセチル
−α−およびβ−Ｌ−アスパルチルーＬ−グルタミン酸
の水溶液にＬ−オルニチンを作用させてうろことができ
る。

中和が終了すると液のｐＨは６．９である。

全窒素８．２７％は凍結乾燥して分離される塩が５２％
含有されている液に相当する。

元素分析 Ｃ２６Ｈ４２Ｎ８０１４ Ｃ％ Ｎ％ Ｎ％ 理論値 ４５．２１ ６．１３ １６．２２実測値 ４
５．１８ ６．２８ １５．９０実施例 １°Ｏ Ｎ−ブチリル−α−およびβ−アスパルチルグルタミン
酸 調製は実施例３で調製されるリチウム塩を実施例７に記
載のカチオン交換樹脂処理を適用して行なわれる。

当該の酸は水溶液から凍結乾燥または噴霧乾燥して粉末
状で分離される。

元素分析 Ｃ１３Ｈ２ＯＮ２０８ ０％ Ｎ％ Ｎ％ 理論値 ４６．９９ ６．０７ ８．４３実測値 ４６
．１２ ６．１０ ８．０７実施例 １１ Ｎ−アセチル−α−およびβ−アスパルチルグルタミン
酸ジメチルアミノエタノール塩（化合物Ａ４） これらの塩は実施例７に記載の方法でえられる。

密度ｄ：°が１．２６９のシロップを０℃でジメチルア
ミノエタノールで中和することによりえられる。

２４Ｐのジメチルエタノールを６ｏｍｌの脱塩水に溶解
したものを４３．９ｒの上記シロップに加える。

中和された溶液のｐＨは５．９０であり、窒素含有量は
５．９０％で４８％の塩濃度である。

施光度（濃度５％の酸性溶液）（α）晃＝７、２００ 元素分析 Ｃ２３Ｈ４９０１１Ｎ！’ｉ Ｃ％ Ｎ％ Ｎ％ 理論値 ４８．５８ ８．６８ １２．３２実測値 ４
８．１０ ８．４０ １２．２９実施例 １２ Ｎ−アセチル−α−およびβ−アスパルチルグルタミン
酸ジエチルアミノエタノール塩 実施例１１に記載の方法においてジエチルアミノエタノ
ールを用いて行なう。

えもれる溶液は次の性質を有する。

ｐＨ＝６．５ 全窒素％＝５．５０ 濃度−凍結乾燥によりえられる塩５１％ 元素分析 Ｃ２９Ｈ６１０１１Ｎ５ Ｃ％ Ｎ％ Ｎ％ 理論値 ５３．１１ ９．３７ １０．６８実測値 ５
３．００ ９．１０ １０．７８実施例 １３ ラットにおける反復作業を容易にする効果の試験 水中迷路試験 文献： Ｃ、Ｇ ｉｕｒｇｅａおよびＦ０Ｍｏｕｒａｖ
ｉｅｆｆＬｅｓｕｉｓｓｅ Ｊ、 Ｐｈａｒｍａｃ （Ｐａｒｉｓ ） １９７２．
３ （Ｉ）、７−３０ 本発明の化合物の作業を容易にする効果は正常なラット
および電撃ショックで健忘症にしたラットについて水中
迷路試験を行なって測定される。

対照物質として２−オキソ−１−ピロリジン−アセタミ
ドすなわちＰＩＲＡＣＥＴＡＭを用いる。

並行してＮ−アセチル−αおよびβ−Ｌ−７スパルチル
ーＬ−グルタミン酸すなわちＮＡＡＧＡの効果もまた試
験する。

方法 実験は１５℃の水を満たした迷路中で行なわれる。

出口ま傾斜した格子からなっていてラットが水から出る
にはそこを這いあがらねばならない。

実験は平均体重１２０？のオスのＳ ｐａｒｇｕｅＤａ
ｗｌｅｙラットについて行なう。

あらかじめ選択を行ない、５分たっても出口の格子を見
つげることのできないラットは除外する。

実験は３日間行なわれる。

最初の２日間、試験する製品を午前と午後くりかえし２
度腹腔内投与する。

いづれの場合も動物は試験すべき製品の投与後３０分に
迷路試験に付された。

３日日、製品の投与後３０分に電撃ショックを動物に与
える。

ついで迷路試験を電撃ショック後１５分、６０分の２度
くりかえして行なう。

すべての実験において、ラットが迷路の出口を発見する
までの行動時間を測り、生理的食塩水で処理した動物の
行動時間に対する減少のパーセンテージを計算する。

この行動時間減少のパーセンテージを作業を容易にする
効力とする。

結果を第■表に示す。結論として、本発明の製品は比較
動物に比し動物の作業を容易にする（第１、第２日日の
実験）。

そして特に実験第３日日の電撃ショック後のよりすぐれ
た回復を示すという非常に顕著で好ましい作用を示す。

ある化合物についての抗健忘症効果は対照物のＰＩＲＡ
ＣＥＴＡＭの効果よりすぐれている。

本発明の化合物は天然ペプチドと同じ構造をもつという
有利性がある。

実施例 １４ 神経毒作用試験 本発明の製品の中枢神経系刺戟または抑圧作用を調べる
ためはつかねずみを用いて次の試験を行なう。

Ｌ ＤＥｗＳの方法によるアクチメーター試験。

自発運動に対する作用を評価する。

２、ヘキソバルビクールによる麻酔の増強効果。

３、ＢＯＩＳＳＩＥＲ板、すなわち穴のあいた板の試験
。

好奇心、探索反射への効果を評価する。結果を第■表に
示す。

本発明の化合物は上記実験では何ら神経毒作用を示さな
い。

化合物ＡＩおよびＡ４は鎮静作用において等モルのリチ
ウムおよびジメチルアミノエタノールの投与より低い。

このことは精神興奮および抗抑制作用の意味で活性があ
るということである。

実施例 １５ 心臓血管作用試験 本発明の誘導体の心臓血管作用を調べるためクロラール
麻酔した犬で試験を行なう。

次のパラメーターを記録する。

１、血圧（Ｓ ｔａｔｈａｍ社 血圧記録システム）２
、心収縮力（圧迫の容量） ３、ＤＨの心電図 ４、大たい血流量（フイジオメーター測定）５、呼吸（
呼吸運動記録） 化合物は静注投与する。

結果 ＮＡＡＧＡは投与量５ｍ９／ｋｇ、１０１ｎ９／ｋｇに
おいて試験されたパラメーターについて伺も有意な作用
を示さない。

化学的調停への干渉は何ら示されない。

一方、化合物Ａ３０１３．６■／ｋｙ投与、これはＮＡ
ＡＧＡｌ ０η／ｋｙに相当するが、心臓収縮力への作
用により反対の変力作用を示す。

さらにＡ３はわずかの投与でノルアドレナリンの作用に
増強作用を示し、また大たい血管拡張作用を示す。

実施例 １６ 一般毒性試験 急性毒性をはつかねずみを用い腹腔内投与、経※ ※口投与で決定する。

致死は、本発明の製品投与後８日で定めた。

結果を第■表に示す。各投与量は無水の製品について示
す。

化合物Ａ１はリチウムについて等モル投与で炭酸リチウ
ムより毒性が低い。

事実、化合物層１中のリチウム含量は無水の製品につい
て６．５％であり、リチウムの致死量は１００＜ＬＤ５
ｏ〈１３５ＴＩＩ９／に！９ 腹腔内投与２００ ＜Ｌ
Ｄ５０ ＜ ２６０１１１９／ｋｇ 経口投与である
。

参考までに述べると、炭酸リチウムはそつを病の治療お
よび予防に用いられ（ＳＣＨＯＵ、” Ｅｎｃｅｐｈａ
ｌｅ″、２８１−２９５頁、１９７１゜６０（４））、
はつかねずみに対しＬＤ５ｏは腹腔内投与で約２６０
ｙｎ９／ｋｇであり、これはリチウム５０■／ｋｙに相
当する。

化合物＆４はジメチルアミノエタノールについて等モル
投与でジメチルアミノエタノールより毒性が低い。

化合物Ａ４のジメチルアミノエタノール含量は４７％で
ある。

化合物Ａ４０２６００ｍ９にはジメチルアミノエタノー
ル１２２０１ｎ９が含まれる。

腹腔内投与でジメチルアミノエタノールのＬＤ５ｏは１
５０と３００１１１９／ｋｇの間にある。

実施例 １７ 錠剤 臨床用錠剤として次の組成のものが有利に使用される。

ｆヒ合物Ａ３ ０．１００グ 補薬を加えて１錠０．５００Ｐとする。

投与、１日２〜６錠。

実施例 １８ ゲル剤 次の組成のゲル剤が用いられる。

化合物層１ １００ｍ９ 補薬を加えて１ゲル２４０１ｒ１９とする。

投与、１日２〜６ゲル。

実施例 １９ 飲用アンプル 化合物Ａ４ Ｉｆ 補薬を加えて１飲用アンプル１０ＴＬｌとする。

投与、１日２〜３アンプル。

実施例 ２０ 注射用アンプル 化合物Ａ３５０■ 補薬を加えて１注射用アンプル５Ｔｌｌとする。

投与、１日１〜２アンプル。

１日１〜３回静注して効果が遅い場合は１日１〜２回筋
肉注を行なう。

試験例 実施例６記載の方法で得られたマグネシウム塩（以下Ｆ
８６．１０と称する）を用いて、下記の試験を行なった
。

（１）急性無酸素症に対する防禦試験 アーチャー等の方法（Ａｒｃｈ、Ｉｎｔ。

Ｐ ｈａｒｍａｃｏｄｙｎ ０．１９６２．１３９．６
７）に準じて、低酸素ふんい気中で、ラットのげいれん
作用を調べた。

ドライヤー付のガラス製酸素室の上部から窒素ガスを送
入した。

室は密封されなかったので、室内の圧力は大気圧と同じ
であった。

試験中の窒素ガス流量を約１４００ｃ１１１／分に保っ
たので、室内の酸素量は４分ごとに半減したと考えられ
る。

窒素ガス送入開始後、ラット（メス、平均２００ｆ、１
群８匹）を各１５分間室内に置き、毎日の試験の３０分
前に、化合物サンプルを腹腔内注射し、次の試験を各４
日間行なった。

群 投与化合物 １ 蒸留水のみ（対照） ２ Ｐ ｉ ｒａｃｅｔａｍ １００ Ｔｎ
９７ｋｇ３ Ｆ８６．１０ １００即／ゆ対照
動物は次の挙動を示した。

（イ）室内で４分後、静止する。

（ロ）５分後、側方に倒れる。

←→ ７分後、短く興奮した後、けいれんを起こす。

すぐに取り出さなければ死亡する。薬物の効果を、ラッ
トを室内に入れてから、けいれん発作までの時間で測定
した。

Ｆ８６．１０およびＰ ｉｒａｃｅｔａｍ （商品名Ｎ
ｏｏｔｒｏｐｈｙ１社製）で得られた結果は次の通りで
ある。

けいれん発作までの時間（秒） 群 第１日 第２日 第３日 第４日 １ ３９６ ４２８ ４２１ ４０６ ２ ３９２ ４０１ ４１６ ４２０３ ４
１９ ４２７ ４６５ ４８５第４回目のＦ８６
．１０投与後のラットの抵抗性は、第２群よりも著明に
改善された。

（２）無酸素血症に対する活性 マウスの頭部から脳を取り出し、急性無酸素血症に対す
る、化合物サンプルの活性を次の方法で測定した。

試験動物としてマウス（オス、ＯＦ系、平均２５±３１
）を用い、切除した頭部を次の時間後に液体窒素に浸し
た。

（イ）切除直後（Ｔｏ） （ロ）その３０秒後（Ｔｏ＋３０秒） ←→ その１分後（Ｔｏ＋１分） 液体窒素中で脳は一１８℃以下で凍結される。

これを粉砕し、３Ｍ過塩素酸と混合し、−２０℃で冷却
し、混和した後、ＥＤＴＡ（１ｍＭ）を加えて、過塩素
酸を０．６ Ｍに調整する。

次に１０分間遠心処理（１２０００ｒ、ｐｌｍ、）する
。

酵素的方法によって、ニコチンアミド・アデニン・ジヌ
クレオチドの減少を基準として、上澄液中のＡＴＰ値を
測定する。

ＡＴＰ値は、ヘキソキナーゼおよびグルコース−６−フ
ォスフェート・デヒドロゲナーゼの存在下に測定される
。

試験動物を３群（１群１０匹）に分ける。

第１群は未処理、第２群はＰ ｉｒａｃｅｔａｍ （１
６２ｍｙ／＃ ）、第３群はＦ ８６．１０ （５１２
ｍ９／ｋｙ）を、それぞれ切除前１５分に腹腔内に投与
した。

測定されたＡＴＰ値は次の通りである（単位は脳１１当
りμＭ）。

群 Ｔｏ ３０秒後 １分後 １ ２．４ １．４ ０．７５２
２．４ ０．７５３２・４
１．４３第１群と第２群では
、切除後のＡＴＰ値は急減するが、第３群ではＡＴＰ消
費の著明な減少が認められた。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ＩＮ−アセチル−α−およびβ−アスパルチルグルタミ
   ン酸とリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム
   またはカルシウムから選ばれた金属カチオンとの塩、あ
   るいはジメチルアミノエタノール、リジン、オルニチン
   またはアルギニンから選ばれた有機塩基との塩の製造法
   において、グルタミン酸のアルカリまたはアルカリ土類
   金属塩をＮ−アシルアスパラギン酸の無水物と水中でｐ
   Ｈ５ないし９、温度−５℃ないし２５℃で反応させるこ
   とにより、Ｎ−アセチル−α−およびβアスパルチルグ
   ルタミン酸に対応する塩の溶液を生成させ、これをカチ
   オン交換によって対応する酸とし、さらに公知方法によ
   って所望の金属塩または有機塩の混合物を得る工程から
   なる製造法。