JPS58205495A - 胎盤性アスパラギン酸アミノペプチダ−ゼの加熱安定化法 - Google Patents
胎盤性アスパラギン酸アミノペプチダ−ゼの加熱安定化法Info
- Publication number
- JPS58205495A JPS58205495A JP8922282A JP8922282A JPS58205495A JP S58205495 A JPS58205495 A JP S58205495A JP 8922282 A JP8922282 A JP 8922282A JP 8922282 A JP8922282 A JP 8922282A JP S58205495 A JPS58205495 A JP S58205495A
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- JP
- Japan
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- aap
- placental
- virus
- aspartate
- heat
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- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は胎盤性アスパラギン酸アミノペプチダーゼを含
有する溶液を、この溶液に含まれる可能性のあるウィル
スを不活化するための加熱処理を韮すに際し、胎盤性ア
スパラギン酸アミノペプチダーゼの熱安定性を高める方
法に関するものであるう 胎寝性アスパラギン酸アミノペプチダーゼ（以下ＡＡＰ
と略記する）はヒトの胎盤組稽に穿在し、アンジオテン
シン分イ能を有する一樽のアンジオテンシナーゼであり
、生体内において血圧調節因子として働いているっ即ち
レニンーアンジ“オテンシン糸か異常に先進した場合に
は血圧は上昇して高血圧を発症するのであるが、ＡＡＰ
は昇圧性吻質であるアンジオテンシン−■および−「を
分解し、その生理活性を失わせることにより面圧の恒常
性を穫持している。又レニン−アンジオテンシン系が７
ｃ進しなくても、ＡＡＰが低下した場合にはアンジオテ
ンシンの分解代謝系のｔ能も低下し、体内にアンジオテ
ンシンが貯留し、その結果として高旧圧を来た丁ことが
考えられる。このような高血圧症の患者に対してＡＡＰ
を投与、すると面圧を正常化できると共にｍ１王を下げ
過ぎる危険、生は全く手い。従ってＡＡＰは高血圧症に
対し池の降圧剤に比べ安全に使用できる利点がある。
有する溶液を、この溶液に含まれる可能性のあるウィル
スを不活化するための加熱処理を韮すに際し、胎盤性ア
スパラギン酸アミノペプチダーゼの熱安定性を高める方
法に関するものであるう 胎寝性アスパラギン酸アミノペプチダーゼ（以下ＡＡＰ
と略記する）はヒトの胎盤組稽に穿在し、アンジオテン
シン分イ能を有する一樽のアンジオテンシナーゼであり
、生体内において血圧調節因子として働いているっ即ち
レニンーアンジ“オテンシン糸か異常に先進した場合に
は血圧は上昇して高血圧を発症するのであるが、ＡＡＰ
は昇圧性吻質であるアンジオテンシン−■および−「を
分解し、その生理活性を失わせることにより面圧の恒常
性を穫持している。又レニン−アンジオテンシン系が７
ｃ進しなくても、ＡＡＰが低下した場合にはアンジオテ
ンシンの分解代謝系のｔ能も低下し、体内にアンジオテ
ンシンが貯留し、その結果として高旧圧を来た丁ことが
考えられる。このような高血圧症の患者に対してＡＡＰ
を投与、すると面圧を正常化できると共にｍ１王を下げ
過ぎる危険、生は全く手い。従ってＡＡＰは高血圧症に
対し池の降圧剤に比べ安全に使用できる利点がある。
他方ヒトの胎盤組織中には肝炎、風土病等のウィルスが
存在している可能性があり、それより製したＡＡＰをウ
ィルスの除去又は不活化処理を怖さないまま医療…とじ
て投与すると、ウィルス感染症にかかるおそれがあろっ
こ９つような危二々？回避するため、通常は免疫学測定
法で予めウィルスを測定し、瘍濃度にウィルスを含有す
る原料を除外することによりある程度のウィルス感染症
の防止効果をあげている。しかしこの方法は医療用とし
てのＡＡＰＯ大規模な製法には適用できない。
存在している可能性があり、それより製したＡＡＰをウ
ィルスの除去又は不活化処理を怖さないまま医療…とじ
て投与すると、ウィルス感染症にかかるおそれがあろっ
こ９つような危二々？回避するため、通常は免疫学測定
法で予めウィルスを測定し、瘍濃度にウィルスを含有す
る原料を除外することによりある程度のウィルス感染症
の防止効果をあげている。しかしこの方法は医療用とし
てのＡＡＰＯ大規模な製法には適用できない。
血秦を分画して得られる個別の人血清蛋白製剤について
もウィルス感染症の間頌は包含されている。しかし特に
アルブミン製剤について６０℃、１０時間の加熱処理を
施すことにより、アルブミンを変質させることなくウィ
ルス感染症を阻止し得ることが見串され、その後アルブ
ミン製剤にはこの加熱処理が施され、安全に臨床使用さ
れている。このように６０℃、１０時間加熱処理を施し
た製剤か投与後ウィルス感染症の防止に有効であること
が判明して以来、この方法は他の人血清蛋白製剤に応用
されている。６０℃、１０時間の加熱処理の方法を応用
できる物質は、こめ処理に対して物質自体が安定でなけ
ればならない。そこでこの加熱処理を可能とするための
各種の安定化剤が研究され、安定化剤の存在下では６０
″０１１０てアミノ譲や糖傾などが生理的等張或はそｎ
以下の１度で用いられる。
もウィルス感染症の間頌は包含されている。しかし特に
アルブミン製剤について６０℃、１０時間の加熱処理を
施すことにより、アルブミンを変質させることなくウィ
ルス感染症を阻止し得ることが見串され、その後アルブ
ミン製剤にはこの加熱処理が施され、安全に臨床使用さ
れている。このように６０℃、１０時間加熱処理を施し
た製剤か投与後ウィルス感染症の防止に有効であること
が判明して以来、この方法は他の人血清蛋白製剤に応用
されている。６０℃、１０時間の加熱処理の方法を応用
できる物質は、こめ処理に対して物質自体が安定でなけ
ればならない。そこでこの加熱処理を可能とするための
各種の安定化剤が研究され、安定化剤の存在下では６０
″０１１０てアミノ譲や糖傾などが生理的等張或はそｎ
以下の１度で用いられる。
ＡＡＰをこの６０℃、１０時間の加熱処理を行なうと、
ウィルスを不活化すると同時にＡＡＰの活性も低下して
しまった。本発明者らはＡＡＰの加熱安定性を高めるた
めの安定化剤の研究を重ね、その結果蛋白質の安定化剤
として従来使用されてきたアミノ酸、糖類、食塩、アル
ブミン等のうち、ε−アミノカプロン酸のみがＡＡＰに
磨して宥著な加熱安定効果を有することを見い出し、こ
の新知見に基づいて本発明を完唆した。
ウィルスを不活化すると同時にＡＡＰの活性も低下して
しまった。本発明者らはＡＡＰの加熱安定性を高めるた
めの安定化剤の研究を重ね、その結果蛋白質の安定化剤
として従来使用されてきたアミノ酸、糖類、食塩、アル
ブミン等のうち、ε−アミノカプロン酸のみがＡＡＰに
磨して宥著な加熱安定効果を有することを見い出し、こ
の新知見に基づいて本発明を完唆した。
本発明はＡＡＰを含有する溶液を、ε−アミノカプロン
酸の存在下において、ウィルスを不活化するための加熱
処理を施すのである。
酸の存在下において、ウィルスを不活化するための加熱
処理を施すのである。
加熱処理を行なうＡＡＰは、例えば本発明者らが開発し
た胎盤性アンジオテンシン分解酵素の分離精製法（特願
昭５５−１５１２３４号）に従ってＡＡＰ画分を分離し
、この両分を一４縮してｐＨ７〜８に調整したものにプ
ロメラインを加え、インキュベートしたのちゲルＩ濾過
により哨裂したものを用いる。ＡＡＰはこの清製法によ
るもののほか、医療に供しつる唾度に精嚢されたもので
あれば使１〜２％すである。加熱処理溶液のｐＨは適当
な礎衝液によりｐＨ５〜７に調整されていることが好ま
しく、４肩度を０．０１〜０．３Ｍに調整することが好
ましい。ε−アミノカプロン酸は医療用に精製されたも
のを使用し、その添加量は２〜８％影■で好ましくは４
〜６％司合′である。添加量の上限は最終１品への混入
比率の関係から選択される。加熱処理の温度は５０〜７
０℃で好ましくは５５〜６５゛℃、加熱時間は８〜１２
時向であるうこのようにして加熱処理されたＡＡＰは除
菌濾過したのち凍結乾燥して製剤化する。余剰にアミノ
酸が添加された場合は公知の透析および希釈等の方法を
用いて１％以下に調整する。
た胎盤性アンジオテンシン分解酵素の分離精製法（特願
昭５５−１５１２３４号）に従ってＡＡＰ画分を分離し
、この両分を一４縮してｐＨ７〜８に調整したものにプ
ロメラインを加え、インキュベートしたのちゲルＩ濾過
により哨裂したものを用いる。ＡＡＰはこの清製法によ
るもののほか、医療に供しつる唾度に精嚢されたもので
あれば使１〜２％すである。加熱処理溶液のｐＨは適当
な礎衝液によりｐＨ５〜７に調整されていることが好ま
しく、４肩度を０．０１〜０．３Ｍに調整することが好
ましい。ε−アミノカプロン酸は医療用に精製されたも
のを使用し、その添加量は２〜８％影■で好ましくは４
〜６％司合′である。添加量の上限は最終１品への混入
比率の関係から選択される。加熱処理の温度は５０〜７
０℃で好ましくは５５〜６５゛℃、加熱時間は８〜１２
時向であるうこのようにして加熱処理されたＡＡＰは除
菌濾過したのち凍結乾燥して製剤化する。余剰にアミノ
酸が添加された場合は公知の透析および希釈等の方法を
用いて１％以下に調整する。
本発明の加熱効果を検討するため、ＡＡＰ製剤に含まれ
る可能性が魚眼される各遺ウィルスのμ染性について、
安定化剤の添、ＪＯによる加熱効果、安定化剤の罎添ｒ
ＪＯによる加熱効果を実需した。この実験はＡＡＰ試料
に痘音ウィルス、おたふくかぜウィルス、はしかウィル
ス、水泡性口内炎ウィルス、チクングニアウイルス、日
本脳炎ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、風疹ウィルス、ポ
リオウィルス、コクサラキーウィルス、エコーウィルス
を加え、６０゛Ｃで１０時間の加熱処理を行ない、経時
的に残存するウィルス感染性を測定したが、１０時間侵
には安定化剤の添加、不添加に係わらず、感染性を完全
に失っていたつこの侍果は用いたウィルス以外のウィル
スについても本発明の加熱処理が施されるならばノ惑染
性は失活させつることを示唆するものである。
る可能性が魚眼される各遺ウィルスのμ染性について、
安定化剤の添、ＪＯによる加熱効果、安定化剤の罎添ｒ
ＪＯによる加熱効果を実需した。この実験はＡＡＰ試料
に痘音ウィルス、おたふくかぜウィルス、はしかウィル
ス、水泡性口内炎ウィルス、チクングニアウイルス、日
本脳炎ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、風疹ウィルス、ポ
リオウィルス、コクサラキーウィルス、エコーウィルス
を加え、６０゛Ｃで１０時間の加熱処理を行ない、経時
的に残存するウィルス感染性を測定したが、１０時間侵
には安定化剤の添加、不添加に係わらず、感染性を完全
に失っていたつこの侍果は用いたウィルス以外のウィル
スについても本発明の加熱処理が施されるならばノ惑染
性は失活させつることを示唆するものである。
本発明はＡＡＰの加熱安定化剤としてε−アミ／カプロ
ンｊを用いるから、抗原性物論か製剤中に混入する危険
性が少なく、きわめて有効にＡ ＡＰに対する熱安定化
を可能にするほか、ε−アミノカプロン！酸の添加１を
選択することにより加ス処；・７％にこれを庄テする・
（／、 ｖｐがないからＡ Ａ Ｐ ｌ、）＠造工程へ
の組込みが容易であり、ウィルス不活化処理工程を含む
ＡＡＰの工貨的梨法として好適である。
ンｊを用いるから、抗原性物論か製剤中に混入する危険
性が少なく、きわめて有効にＡ ＡＰに対する熱安定化
を可能にするほか、ε−アミノカプロン！酸の添加１を
選択することにより加ス処；・７％にこれを庄テする・
（／、 ｖｐがないからＡ Ａ Ｐ ｌ、）＠造工程へ
の組込みが容易であり、ウィルス不活化処理工程を含む
ＡＡＰの工貨的梨法として好適である。
以下に本発明の詳細な説明する。っなお各実整例におけ
るアンジオテンシン分解活性の上位およびＡＡＰ（７）
活性が定法は、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ 、Ａ
ｃｔａ、し３１．６６８〜６７６、（１９６９）による
。
るアンジオテンシン分解活性の上位およびＡＡＰ（７）
活性が定法は、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ 、Ａ
ｃｔａ、し３１．６６８〜６７６、（１９６９）による
。
実施例１
ｐ Ｈ６，３の０．１Ｍ）リス−マレイン酸緩衝液に溶
解したアンジオテンシン分解活性２４３μ！ｆ／ｈｒ／
ｆｒＱ Ｑ Ａ Ａ Ｐ水溶液１０１ （４６／ｄ’／
ｈｒｍｊ ）に、同じ欅壷液に溶解したε−アミノカ
プロン酸５００ノを添加する。これをよく撹拌した後、
６０℃で１０時間加熱する。その後氷水で急冷し、次い
でアルブミンを１％濃度に添加し、除菌濾過後２ｍＡ’
ずつ分注し、凍侍乾嘴することにより、ウィルスを不活
化したＡＡＰ製剤を得た１゜ 実施例２ ｐ Ｈ６，０の０．５ Ｍ ＩＪン嗅援衝久に溶解した
アンジオテンシン分解活性５２５μ９／ｂｒ／ｍ・！の
ＡＡＰ水溶ｎ ５１！ （２６３ｔｔ’ｌ／ｈｒ／ｍｅ
）に、同じ髪衝液に溶解したε−アミノカプロンｍ３
００ ’ｉを添１ツバし、こｎをよく撹拌した鎌、６０
゛Ｃで１０時間加熱する。その後氷水で急令し、次いで
アルブミンを１％：罎度に添、’Ｊ［ｌし、陰菌戸量後
Ｚ ｍｅずつ分圧し、凍結乾燥することにより、ウィル
スを不活化したＡＡＰ媚剤を得た。
解したアンジオテンシン分解活性２４３μ！ｆ／ｈｒ／
ｆｒＱ Ｑ Ａ Ａ Ｐ水溶液１０１ （４６／ｄ’／
ｈｒｍｊ ）に、同じ欅壷液に溶解したε−アミノカ
プロン酸５００ノを添加する。これをよく撹拌した後、
６０℃で１０時間加熱する。その後氷水で急冷し、次い
でアルブミンを１％濃度に添加し、除菌濾過後２ｍＡ’
ずつ分注し、凍侍乾嘴することにより、ウィルスを不活
化したＡＡＰ製剤を得た１゜ 実施例２ ｐ Ｈ６，０の０．５ Ｍ ＩＪン嗅援衝久に溶解した
アンジオテンシン分解活性５２５μ９／ｂｒ／ｍ・！の
ＡＡＰ水溶ｎ ５１！ （２６３ｔｔ’ｌ／ｈｒ／ｍｅ
）に、同じ髪衝液に溶解したε−アミノカプロンｍ３
００ ’ｉを添１ツバし、こｎをよく撹拌した鎌、６０
゛Ｃで１０時間加熱する。その後氷水で急令し、次いで
アルブミンを１％：罎度に添、’Ｊ［ｌし、陰菌戸量後
Ｚ ｍｅずつ分圧し、凍結乾燥することにより、ウィル
スを不活化したＡＡＰ媚剤を得た。
実施例３
ｐ Ｉ（５，５の０．２ Ｍ ） ＩＪスーマレイン酸
暖衝液に溶解したアンジオテンシン分解活性１０５μＳ
’ ／ ｈ ｒ／ｍｑのＡＡＰ水溶液１０１ （７３μ
Ｐ／ｈｒ／ｍ ）に、同じ緩衝液に溶解したε−アミノ
カプロン酸６００グを溢血し、これをよく撹拌した後、
６０℃で１０時間加熱する。その後氷水で急冷し、次い
でアルブミンを１％濃度に添万口し、除菌濾過後２ ｍ
ｅずつ分注し、凍結乾燥することにより、ウィルスを不
活化したＡＡＰ＠剤を得た。
暖衝液に溶解したアンジオテンシン分解活性１０５μＳ
’ ／ ｈ ｒ／ｍｑのＡＡＰ水溶液１０１ （７３μ
Ｐ／ｈｒ／ｍ ）に、同じ緩衝液に溶解したε−アミノ
カプロン酸６００グを溢血し、これをよく撹拌した後、
６０℃で１０時間加熱する。その後氷水で急冷し、次い
でアルブミンを１％濃度に添万口し、除菌濾過後２ ｍ
ｅずつ分注し、凍結乾燥することにより、ウィルスを不
活化したＡＡＰ＠剤を得た。
実験例
実施例１において６０℃、１０時間のＵＵ熱処理のため
のε−７ミノカプロン資の１変を俺々変えてその鴇安定
効果を調べ、一般の媛白質の女定化剤と比較した。各試
料は加熱前の比活性を１１’） ０％とし、ＭＪ熱処４
後の活性残存率を調べたつその結果を第１表に示す。表
中のウィルスは第６頁に記威したものと；司じである。
のε−７ミノカプロン資の１変を俺々変えてその鴇安定
効果を調べ、一般の媛白質の女定化剤と比較した。各試
料は加熱前の比活性を１１’） ０％とし、ＭＪ熱処４
後の活性残存率を調べたつその結果を第１表に示す。表
中のウィルスは第６頁に記威したものと；司じである。
第１表
１、事件の表示 ！＊Ｍ５７−８９２２２号３、補正す
る者 事件との関係 出 願 人 株式会社ミドリ十字 ４代理人 ７ 補正の一内容 （１） 願書及び明ｔＩｊｌ薔第１頁３〜４行の発明
の名称全欧の」り訂正する。
る者 事件との関係 出 願 人 株式会社ミドリ十字 ４代理人 ７ 補正の一内容 （１） 願書及び明ｔＩｊｌ薔第１頁３〜４行の発明
の名称全欧の」り訂正する。
１！ｔ１．アスパルテート、アミノペプチダーゼのＤＯ
熱安定化法」 （２） 明細書第１頁の′＃Ｗｆ請求の範囲全文全別
紙の辿り訂正する。
熱安定化法」 （２） 明細書第１頁の′＃Ｗｆ請求の範囲全文全別
紙の辿り訂正する。
（３） 同１頁１２．１５．１８行の［アスノぜラギ
ン酸ｊｆｔｒアスパルテートーコに訂正する。
ン酸ｊｆｔｒアスパルテートーコに訂正する。
胎盤性アスパルテート・アミ／ペプチダーゼを含有する
溶液全、ξ−アミノカプロン酸の存在下において、ウィ
ルスを不活化するための加熱処理を施すこと？特徴とす
る胎盤性アスパルテート拳アミノペプチダーゼの回熱安
定化法。
溶液全、ξ−アミノカプロン酸の存在下において、ウィ
ルスを不活化するための加熱処理を施すこと？特徴とす
る胎盤性アスパルテート拳アミノペプチダーゼの回熱安
定化法。
Claims (1)
- 賭盤性アスパラギン酸アミノペプチダーゼを含有する溶
液を、ε−アミノカプロン酸の存在下において、ウィル
スを不活化するための加熱処理を施すことを特徴とする
胎盤性アスパラギン酸アミノペプチダーゼの加熱安定化
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8922282A JPS58205495A (ja) | 1982-05-26 | 1982-05-26 | 胎盤性アスパラギン酸アミノペプチダ−ゼの加熱安定化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8922282A JPS58205495A (ja) | 1982-05-26 | 1982-05-26 | 胎盤性アスパラギン酸アミノペプチダ−ゼの加熱安定化法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58205495A true JPS58205495A (ja) | 1983-11-30 |
Family
ID=13964696
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8922282A Pending JPS58205495A (ja) | 1982-05-26 | 1982-05-26 | 胎盤性アスパラギン酸アミノペプチダ−ゼの加熱安定化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58205495A (ja) |
-
1982
- 1982-05-26 JP JP8922282A patent/JPS58205495A/ja active Pending
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