JPS58170440A - 健康飲食品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はカルシウム吸収促進効果を有する健康飲食品に
関する。

詳しくはカゼインのトリプシン分解により生成したカゼ
インホスホペプチドを飲食品に添加したカルシウム吸収
促進効果の優れた健康飲食品である。

牛乳は古くからその栄養の完全性の高さで知られ、その
多くの効果のうちカルシウムの供給源としてあらゆる食
品の中で最も優れたものとされている。一方力ルシウム
は人間の生体中の金属としては最も量が多く、吸収され
たカルシウムは骨、歯の形成、代謝又は生体の数多くの
反応、機作に関与している。牛乳のこのような効果は単
に含まれているカルシウムの量の問題だけではなく、そ
の消化吸収性すなわち利用率の高さにある。この点につ
いては古（から研究がなされ、牛乳中に存在する乳糖、
微量に存在するカルシウム結合蛋白、或いはカゼイン自
体の寄与も挙げられている。一方、人体におけるカルシ
ウムの吸収は小腸上部でのビタミンＤや各種ホルモンの
問診により制御されている能動輸送の他に、小腸下部で
の受動的な輸送の重要性も近年になって再認識されてき
ている。（内層　博：化学と生物　１８　５５４−５５
８頁（１９８０）　］ また、牛乳中のカルシウムが何故に効率よく生体に一収
されるのかの説明として、カゼインの膵臓酵素特にトリ
プシンによる分解物のなかに存在するホスホペプチドが
カルシウム吸収の促進剤として働くことが示唆されてい
る。

［Ｈ，Ｎａ　ｌ　ｔ　ｏ、Ａ、Ｋａｗａｋａｍｌ、Ｔ。

Ｉｍａｍｕｒａ　　ＨＡｇｒ　　１ｃｕｌ　　ｔｕｒａ
　　１ａｎｄ　　　Ｂｌｏｌｏｇｉｃａｌ　　　Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ３６４０９〜４１５頁（１９７２）　］こ
のペプチドはカゼインホスホペプチド（Ｃａｓｅｉｎ　
　Ｐｈｏ’５ｐｈｏｐｅｐｔｌｄｅＨ以下ｃｐｐと略記
）と呼ばれている。このＣｐｐには代表的な２種が存在
していることが知られている。すなわち、β−カゼイン
由来のもの（β−ｃｐｐと略記）とα−カゼイン由来の
もの（α−ｃｐｐと略記）の２種で、その構造及び恒数
は次の表１に示した通りである。特にβ−Ｃｐｐは良く
研究され構造も決定されている。

［Ｗ、Ｍａｎｓｏｎ、Ｗ、Ｄ、Ａｎｎａｎ；Ａｒｃｈｉ
ｖｅｓ　　ｏｆ　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄ　
　Ｂｉｏｐｈｙｓｌｃｓ　１４５　１６−２６頁（１９
７１）］ しかし、α−Ｃｐｐについては推定構造で更に分解の進
んだものも考えられる。

表１ 木表におけるアミノ酸残基の略号の Ａｌａ：Ｌ−アラニン、Ａｒｇ：Ｌ−アルギニン。

Ａｓｐ：Ｌ−アスパラギン酸、Ａｓｎ：Ｌ−アスパラギ
ン、Ｇｌｕ：Ｌ−グルタミン酸、Ｇｉｎ：Ｌ−グルタミ
ン、Ｇｌｙニゲリシン、［ｌｅ：Ｌ−イソロイシン、Ｌ
ｅｕ：Ｌ−ロイシンＩＬ）”：Ｌ−リジン、Ｍｅｔ：Ｌ
−メチオニン、Ｐｒ。

：Ｌ−プロリン ５ｅｔｓＬ−セリン Ｓｅ、＠８Ｌ−ホスホセリン Ｔｈｒ：Ｌ−スレオニｙ、Ｖａｌ：Ｌ−バリン。

Ｈ２Ｎ−Ａｓｐ：Ｎ末端Ｌ−アスパラギン酸。

Ｈ２Ｎ−Ａｒｇ＝Ｎ末端Ｌ−アルギニン。

ＬｙＳ−ＣＯＯＨ：Ｃ末端Ｌ−リジン、Ａｒｇ・Ｃ０Ｏ
Ｈ：　ｃ末端Ｌ−アルギニンをそれぞれ示すものである
。

本発明者等は、上述の如き生体内で生成するＣｐｐのカ
ルシウム可溶化作用が、生体外で製造したｃｐｐも有る
か否かについて研究を行ったところ、生体外で製造した
Ｃｐｐも極めて顕著にカルシウム可溶化作用を示すこと
を見い出した。

この新知見に基づいて、更に従来牛乳等の限られた飲食
物でしか十分に摂取吸収されなかったカルシウムを、生
体外で製造したｃｐｐを食品に添加することによって、
これを食することにより可溶性カルシウムとして生体内
に吸収できるようにしたカルシウム吸収促進効果の優れ
た健康飲食品を発明した。

本発明はｃｐｐを含む健康飲食品である。

本発明に使用するｃｐｐは上記の性質を有する物質であ
り、その製法としては、例えば結晶トリプシンでカゼイ
ンを加水分解し、Ｃｐｐを生成させた後、ＰＨ４，５〜
５．ｏｉｔ、て未反応カゼインと一部の不純物を沈澱除
去し、上滑部に塩化バリウムとエタノール（終濃度間％
（Ｖ／ｖ））を加えてｃｐｐを沈澱として回収する方法
［Ｒ，Ｆ。

Ｐｅｔｅｒｓｏｎ、Ｌ、Ｗ、Ｎｏｕｍａｎａｎｄ　　Ｔ
、Ｌ、ＭｃＭｅｅｋｌｎ。

Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　ｔｈｅ Ａｍｅｒｌｃａｒｉ　　ＣｈａｍｌｃａｌＳｏｃｉｅｔ
ｙ　　８０　９５〜９９頁（１９５Ｂ）　］また、結晶
トリプシンでカゼインを加水分解し、ｃｐｐを生成させ
た後、ゲル濾過、イオン交換などのクロマトグラフィー
手法により分画分離する方法がある。

また本発明者等はｃｐｐの新しい回収方法を検討した結
果、塩化バリウム以外にもカルシウム、鉄、マグネシウ
ム等の金属イオンと親水性溶媒を用いることによって高
純度のｃｐｐを回収することができることを見い出した
。そのうち、工業的に有利なのはカルシウムイオンを用
いる方法である。この方法を使用する場合は、得られる
ｃｐｐはその後のカルシウム除去の操作を施すことなく
、そのまま飲食品に添加し得るから本発明の添加用ｃｐ
ｐとして最も好ましい。

本発明に使用するｃｐｐはカルシウムの沈澱生成を阻害
し、カルシウムを可溶化状態に保持する性質を有し、特
にｐ）−１７，ｐＨ８においてはほぼ１００％カルシウ
ムを可溶化状態に保つ。

また、経口的に摂取した場合でも消化酵素による分解は
ある程度受けるが、かなりの量残存し、カルシウムはほ
ぼ１００％可溶化状態に保たれている。

次にｃｐｐのカルシウム可溶化の試験を示す。

試験例１ 製造例２により得られたｃｐｐを用い以下のカルシウム
可溶化部試験を行った。

ｃｐｐ溶液５　■／　ｍ　ｌの０．５ｍＡと１０ｍＭ塩
化カルシウム溶液０．５ｍｊｔとを予め混合し、その後
。

ＰＨ７，ＰＨ８の２０　ｍ　Ｍリン酸緩衝液１．０ｍｇ
を加え、２５℃で６時間保持した後遠心分離し、生じた
リン酸カルシウムの沈澱を除去し、上滑に０．１規定の
塩酸を加え、更に沈澱が生ずるのを防ぐ、上清中のカル
シウム濃度を原子吸光針により測定し、残存しているカ
ルシウムを可溶化カルシウムとして残存率を求めた。比
較対照としてｃｐｐ溶液の代りに蒸留水を用い、同一試
験を行った。その結果を次の表２に示す。

表　　２ 以上の試験結果から明らかなように、生体外で製造した
Ｃｐｐは優れたカルシウム可溶化能を有するものである
。

試験例２ 製造例２により得られたｃｐｐ溶液５０■／ｍｌのｌ　
ｍ　ｌを人工胃液、人工１嫂（何れも日本薬局方第７改
正による）９ｍｊと混合し、それぞれ２時間と６時間４
０℃で作用させた０本処理後、煮沸水中で人工胃液、人
工腸液中のペプシンとバンクレアチンを失活させ、遠心
分離後、上清中の残存ｃｐｐを高速液体クロマトで分析
し、残存率を求めた。また上清中の残存ｃｐｐｏ、ｓｍ
Ｉｔを用い、試験例１と同様にＰ）１Ｂでカルシウムの
可溶化能を測定した。その結果を表３に示す。

表　　３ 以上の試験結果から明らかなように、生体外で製造した
ｃｐｐは生体中の胃液、腸液によってもカルシウム溶解
化能を減することがない。

試験例３ マンソン（Ｍａｎｓｏｎ）等の方法 （Ａｒｃｈｉｖｅｓ　　ｏｆ Ｂｌｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｌｓｉｃａ　　１４５．１６〜２６頁）によ
り、β−カゼインからｃｐｐのバリウム塩を得た。

これをセファデックスＧ−５，ＤＥＡＥセファデックス
Ａ−５，バイオゲルＰ−６にかけて精製した。得られた
ｃｐｐを用い試験例１と同様にカルシウム可溶化能を測
定し、その結果は次表４に示す。

□・： 以上の試験により明らかな如く、生体外で製造したＣｐ
ｐは優れたカルシウム可溶化作用があり、単にカゼイン
を経口的に摂取した場合には体内の消化酵素により更に
分解が進み、ｃｐｐが生成せずカルシウム可溶化能が消
失する場合がある。

［Ｙ、Ｓ、Ｌｅｅ、Ｔ、Ｎｏｇｕｃｈｌ、Ｈ。

Ｎａ１ｔｏ、Ｂｒ１ｔｌｓｈ　　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　
　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　　４３　４５７〜４６７頁（１
９８０）］　　このことに比べ極めて有利な性質を有す
る、更に牛乳カゼインにより生体内でＣｐｐを生成させ
る場合には大量に摂取する必要があるが、本ｃｐｐを使
用する場合は小量で十分であるので多くの飲食品に添加
できることも大きな利点である。

本発明の飲食品としては菓子類例えば錠菓、ビスケット
等、飲料例えば乳酸飲料等であり、これらに上記ｃｐｐ
を添加する場合は、原料に添加混合するか、又は製品に
直接添加してもよい、Ｃｐｐを食品に添加するには、こ
の物質はカゼイン特有の苦味、臭味もなく、人体に対し
て無毒性であるから、その添加割合には制限がない、し
かし経済性等から勘案して一般に錠菓、ビスケット等の
菓子類の場合はｌ−（資）％程度それらの原料に加えれ
ばよい、飲料の場合は０．５〜６％程度製品に添加すれ
ばよい。

次に本発明のｃｐｐを添加した飲食品について実施例を
示す。

実施例１ 粉糖９１０ｇ、炭酸カルシウム４０ｇ、下記製造例１で
製造したｃ　ｐ　ｐ３０ｇ、シェガーエステル１０ｇ、
大豆硬化油５ｇを２軸ミキサーで混和しながら、ゼラチ
ン５ｇの水溶液を徐々に溶かし、５０〜７０℃でよく混
和した。混和後、篩を通し乾燥し、後に香料を加え再度
混和した。その後打錠し錠菓とした。

実施例２ 小麦粉１２００ｇ、砂糖３４０ｇ、マーガリン１５０ｇ
、全卵粉２０　ｇ　、食塩９ｇ、炭酸カルシウム３０ｇ
１下記製造例２で製造したｃ　ｐ　ｐ２Ｑｇ、重炭酸曹
達６ｇ１炭酸アンモン５ｇ１大豆レシチン６．３ｇ、ワ
ニラオイル５ｇ１水２５０ｇを用いてドウを作成し、延
展後これを成形して焙焼しビスケットを製造した。

以上の如くして得られた飲食品は、これを食することに
よって、飲食品に含まれる、Ｃｐｐ中のホスホセリンの
リン酸基、酸性アミノ酸のカルボキシル基によるキレー
ト作用により、カルシウムは可溶化状態に保たれ、小腸
内のカルシウム濃度が高くなることによって、カルシウ
ムの吸収が促進され、成長期にある乳幼児、児童のカル
シウムの吸収の補強、促進また老年期における骨粗し症
等の骨の疾患に対する治療効果、更には健康人において
はカルシウムの代謝への好影響が得られる。

次に本発明に使用するカルシウム吸収促進物質であるｃ
ｐｐの最も有利に製造する方法について説明する。

この方法はカゼインにトリプシン又はトリプシンを含む
酵素剤を作用させ、ｃｐｐを含む分解物溶液を調整し、
これにカルシウムイオンと親水性有機溶媒を添加してｃ
ｐｐを回収する方法である。

本製造に使用する原料であるカゼインは各種酸カゼイン
、カゼインナトリウム、カゼインカルシウム等のカゼイ
ンが最も良いが、牛乳、スキムミルク等の未精製のもの
でも原料として用いることができる０本製法に従えば、
この原料カゼインを水に溶解し、トリプシン又はトリプ
シンを含む酵素剤を加える。本発明に使用するトリプシ
ン又はそれを含む酵素剤としては、市販の膵臓性の酵素
（パンクレアチン）でも十分であるが、収率等の点から
、結晶グレードのものが好ましい。

原料のカゼインに上記酵素を作用させることによって、
両者が反応してｃｐｐを生成する。この際、工業的酵素
反応条件は、反応時のカゼイン濃度は（資）以下、好ま
しくは２〜３０％、反応−は６．０〜９．０、反応温度
は１５〜６０℃、好ましくは加〜関℃が良好にｃｐｐが
生成する。

酵素使用量は対基質カゼイン重量に対し、結晶トリプシ
ンとして０．００１％〜２％相当の量で、処理時間は５
分〜１００時間で十分反応が進行しｃｐｐを生成するこ
とができる。

以上の如くして生成したｃｐｐを回収するには、塩化カ
ルシウム、酢酸カルシウム等のカルシウムの塩類、と親
水性有機溶媒を加えることにより実施される。その場合
の−の影響は−が１０以上になるとｃｐｐからリン酸の
脂層が起るので好ましくない。また、−が５．５以下に
なると沈澱を生ずるのであらかじめそれの除去が必要で
ある。但し、−３以下になるとＣｐｐも共に沈澱するの
で好ましくない。従って−は３〜１０が好ましい。

カルシウムの添加量は対反応液０６０１〜ｌＯ％なら殆
ど差はない。

沈澱に用いる親水性有機溶媒はメタノール、エタノール
、イソプロパツール、ｎ−プロパツール、アセトン等の
通常の親水性有機溶媒が使用され、その添加量は終濃度
Ｉ−（資）％（Ｖ／Ｖ）が好適である。

この回収の際に液温は低く保つ方が収量がやや多いが溶
媒が沸騰しない温度であれば実質上問題はない。

以上の方法により得られたｃｐｐ沈澱の採取は一般に使
用されている方法、例えば、デカンチーシーン、濾過、
遠心分離などにより実施される。

得られたｃｐｐの沈澱を、この回収に用いた溶媒で洗浄
することにより更に純度を向上させることができる。

以上の如くして回収されたｃｐｐ沈澱は、通常実施され
る乾燥方法、例えば熱風乾燥、流動層乾燥、真空乾燥等
の方法で実施し、白〜淡黄色、無臭、殆ど無味の粉末が
得られる。

以上の如（して得られたｃｐｐの純度の分析は含まれる
窒素の含量をケルメール法によって定量し、リンの含量
をアレン（Ａｌｌｅｎ）の湿式灰化法と中村変法により
定量し、両者の原子数比（Ｎ／Ｐ比）を算出することに
よって分析した。

本発明の方法により得られるｃｐｐはＮ／Ｐ比７〜２ｏ
のものであり、カゼイン分解物特有の苦味も実質上殆ど
無視でき、そのまま飲食に用いることができる。また、
ｃｐｐ中には芳香族アミノ酸が含まれていない、従って
、それに起因する紫外部吸収（例えば２８０ｎｍ、２５
４ｎｍ）が殆どなく、ペプチド結合由来の吸収（２０５
〜２２０ｎｍ）Ｌか認められない。

このＣｐｐの別の分析法として高速液体クロラド装置に
よる分析も可能である。例えばＴＳＫ−ＧＥＬ、Ｇ−２
０００ＳＷ　（東洋曹達製）のカラムを用い、ＰＨ６，
５，０，１Ｍリン酸緩衝液（０，１Ｍ塩化ナトリウムを
含む）の溶媒系で行うこともできる。

検出は例えば２１５ｎｍの紫外部吸収で行う。この方法
により分析したところ、本発明により得られたＣｐｐは
α−Ｃｐｐ由来と推定される成分とβ−ｃｐｐ由来と推
定される成分と両方含んでおり、ｃｐｐの含有量は（資
）％以上であった。

製造例１ ニューシーラント度カゼインソーダ２０ｋｇを水に溶解
して２０％溶液とする。（ｐＨ８，０）。この溶液に豚
の結晶トリプシン（ノボ社製）を対基質０．５％添加し
、ｐ）４７．０〜８．５で５０℃、（９）分反応させる
。

その後、直ちに−を４．５に液を調整すると白色の沈澱
が生ずる。この沈澱を遠心分離により除去し、上清部に
塩化カルシウムを対液２．０％、エタノールを終濃度（
資）％（ｖ／ｖ）添加し、攪拌後、−夜室温で放置する
。上澄をデカンテーラ１ンにより除去し、後バスケット
９達心機でｃｐｐ画分を回収した。沈澱を父％エタノー
ル、次いでエタノールで洗浄後、熱風乾燥機で乾燥し、
ｃｐｐｍ分３．４−を得た０本物質の分析値は水分４．
５％、ＮＺＰ比１５．５であり、高速液体クロマトによ
る純度は（資）％であった。

製造例２ 酸カゼイン２％溶液（ｐＨ８，０）にトリプシンを対基
質０．５％添加し、−を７．０〜８．５で（資）℃、（
資）分反応させる。後直ちに−を５に調整し生じた沈澱
を除去した。上清に０．１％酢酸カルシウムと（資）冗
エタノールを加え、ｃｐｐを沈澱させ遠心分離により沈
澱物を回収し、これをエタノールで洗滲しｃｐｐを得た
。このｃｐｐのＮ／Ｐ比は９．０であった。カルシウム
含量は３．５％であり、高速液体クロマトによる純度は
（資）％以上であった。

特許出願人　　明治製菓株式会社 代理人　伊東寸志（ほか２名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　カゼインホスホペプチドを含む健康飲食品。 ２、　カゼインホスホペプチドがカゼインにトリプシン
   を作用させ、これにカルシウムイオンと親水性有機溶媒
   を添加して回収したカゼインホスホペプチドである特許
   請求の範囲第１項記載の健康飲食品。