JP2002537313A - 骨または歯の疾患用の乳タンパク加水分解物 - Google Patents

骨または歯の疾患用の乳タンパク加水分解物

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ソシエテ デ プロデユイ ネツスル ソシエテ アノニム
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Abstract

(57)【要約】 乳タン白加水分解物を含む骨または歯の疾患の予防または治療用組成物、骨または歯の疾患の治療または予防用組成物の製造に乳タン白加水分解物の使用、有効量の乳タン白加水分解物を投与することを含む治療方法。好ましくは態様では乳タン白加水分解物は、骨再吸収または骨損失を抑制し、またはカルシウム吸収、保持または石灰化、またはその組合せを有利にするＣＧＭＰの能力を保有する生物利用形のカゼインの加水分解物、特にカゼイノグリコマクロペプチド（ＣＧＭＰ）、ミメチック体、ホモログまたはその断片である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は骨または歯の疾患の治療予防用組成物の製造に乳タンパク加水分解物
の使用、および有効量の乳タンパク加水分解物を投与することからなる、骨又は
歯の疾患を治療あるいは予防する方法に関する。
【０００２】 本明細書で、「からなる」とは、「特に含む」ことを意味するもので、「のみ
からなる」意味に解するものではない。 「生物的利用性」とは、腸のバリアーを克服し得ることを意味し、かつ血中に
て活性状態で回収しうることを意味する。「骨又は歯の疾患」とは、カルシウム
が関係し、かつカルシウムの吸収、保持、再吸収または石灰化を含む骨組織の健
康に影響する状態を意味する。 ＣＧＭＰはカゼイノ−グリコマクロペプチドの略語として使われ、ＣＧＭＰ−
ＣａおよびＣＧＭＰ−Ｎａはそのカルシウム塩およびナトリウム塩の省略として
使われる。カゼイノ−グリコマクロペプチドの別名はκ−カゼイノグリコ−ペプ
チドである。 「乳タンパク加水分解物」は例えばトリプシン酵素により少なくとも一部加水
分解した後、乳から抽出可能なポリペプチドを意味する。
【０００３】 「ポリペプチド」とは、ペプチド結合または修飾ペプチド結合、即ちペプチド
アイソスタにより結合する２つ以上のアミノ酸からなる任意のペプチド又はタン
パクを意味する。これらは２０個の遺伝子をコードしたアミノ酸以外のアミノ酸
を含むことができる。「ポリペプチド」は天然のプロセス、例えば翻訳後のプロ
セッシング、あるいは当業界で周知の化学的に修正した技術により修飾したアミ
ノ酸配列を含む。このような修飾は基本書に十分かつ一層詳細にならびにボリュ
ームのある研究文献に開示されている。修飾はポリペプチド主鎖、アミノ酸側鎖
およびアミノまたはカルボキシル末端を含むポリペプチドのどこにでも起こりう
る。同じタイプの修飾は一定のペプチドのいくつかの部位で同じあるいは各種程
度で存在しうることは理解されよう。また、あるポリペプチドでは多くのタイプ
の修飾を含み得る。ポリペプチドはユビキチン化の結果分枝鎖することも、ある
いは分枝鎖に関係なく環化することができる。環状、分枝鎖あるいは環状分枝鎖
ポリペプチドは翻訳後自然プロセッシングの結果生じることもあるいは合成法に
よって行うこともできる。修飾にはアセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化
、アミド化、フラビンの共有付着、ヘム部分の共有付着、ヌクレオチドまたはヌ
クレオチド誘導体の共有付着、脂質または脂質誘導体の共有付着、ホスホチジル
イノシトールの共有付着、クロスリンク、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メ
チル化、共有クロスリンクの形成、シスチンの生成、ピログルタメートの生成、
ホルミル化、γ―カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー生成、ヒドロ
キシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク分解処理、ホ
スホリル化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のよ
うなタンパクにアミノ酸をｔ−ＲＮＡ仲介付加、およびユビキチン化（例えば、
ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯ
ＰＥＲＴＩＥＳ、第２版、クレイトン＆フリーマン社、ニューヨーク、１９９３
；ウオールドのPost-translational Protein Modifications：見通しと予想、た
んぱく質の翻訳後の共有修復の第１―１２頁、ジョンソン著、アカデミック出版
、ニューヨーク、１９８３；サイファー等の「たんぱく質修正および非たんぱく
質共因子の分析」、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｍｏｌ．，（１９９０），１８２：６２６
−６４６およびラッタン等の「タンパク合成：翻訳後の修復ならびにエージング
」、Ａｎｎ ＮＹアカデミーサイエンス（１９９２）６６３：４８−６２）があ
る。
【０００４】 本明細書において、「ミメチック体」および「ホモログ」とは、当業界で規定
されるものであり、記述した活性を保持する変異体を意味する。「変異体」とは
、対照のポリペプチドとは異なるポリペプチドを意味するが、本質的性質を保有
するものである。一般に、対照ポリペプチドおよび変異体の配列が前提的に極度
に類似しかつ多くの分野では同じであるように差が限定されている。変異体およ
び対照ポリペプチドは１つ以上の置換、付加、欠失の任意の組合せによりアミノ
酸配列を異にしている。置換または挿入アミノ酸残基は遺伝子コードによりコー
ドされるものであってもなくてもよい。ポリペプチドの変異体は対立遺伝子変異
体のように天然由来のものでよく、あるいは天然由来として知られていない変異
体でもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの非天然由来の変異体は突然
変異誘発技術または直接合成により作ることができる。
【０００５】 当業界で公知の「ホモロジ」は２つ以上のポリペプチド配列間の関係であり、
配列を比較して測定される。当業界で、「アイデンティティ」とはポリペプチド
またはポリヌクレオチド配列間の配列関係の程度を意味し、ケースバイケースに
より、このような配列の部分が等しい量により測定する。「アイデンティティ」
または「ホモロジ」は公知方法により容易に計算でき、以下の文献に記載のもの
を含むが、これに限定されるものではない。例えば、「Computational Molecula
r Biology」、レスク著、オックスフォード大学、ニューヨーク、１９８８、「B
iocomputing: Informatics and Genome Projects」、スミス著、アカデミック出
版、ニューヨーク、１９９３、「Computer Analysis of Sequence Data」、パー
ト１、グリフィン共著、フマナ出版、ニュージャージ、１９９４、「Sequence A
nalysis in Molecular Biology」、ハインジュ著、アカデミック出版、１９８７
、「Sequence Analysis Primer」、グリスコフとデブロー共著、ストックトン出
版、ニューヨーク、１９９１、および「SIAM J. Applied Math．」、ガリロ・リ
ップマン共著、４８：１０７３，１９８８。アイデンティティを測定する好まし
い方法は試験配列間に最大の差を得るように工夫されるものである。アイデンテ
ィティまたはホモロジの程度を測定する方法は公に入手可能なコンピュータ−プ
ログラムにて暗号化する。２つの配列間のアイデンティティとホモロジを測定す
る望ましいコンピュータープログラム方法にはＧＣＧプログラム・パッケージ（
デブロー等の「Nucleic Acids Research, 12(1): 387,1984」、BLASTP, BLASTN
およびFASTA（アチュル等の「J. Molec. Biol.」215:404-410、1990）があるが、
これに限定されない。ＢＬＡＳＴ ＸプログラムはＮＣＢＩその他のソース（Ｂ
ＬＡＳＴマニュアル、アルチュル等、ＮＣＢＩ ＮＬＭベセダＭＤ ２０８９４
、アルチュル等、J. Mol. Biol., 215: 404-410, 1990）から公に入手できる。
周知のスミス・ウォーターマンアルゴリズムはアイデンティティを測定するため
にも使用できる。
【０００６】 ポリペプチド配列の比較のための望ましいパラメーターにはつぎのものがある
。すなわち、 アルゴリズム：ニーデルマン等、J． Mol. Biol., 48: 443-453,1970、 比較マトリックス：ヘンチコフ＆ヘンチコフのBLOSSUM62、Proc. Natl. Acad. S
ci. USA, 89:10915-10919, 1992、Gap penalty: 12: Gap Length Penalty: 4。
【０００７】 これらのパラメーターをもつ有用なプログラムはジェネチックス・コンピュー
ター・グループから「ｇａｐ」プログラムとして公的に入手可能である。上記パ
ラメーターはペプチドの比較では欠陥パラメーターである（エンドギャップのペ
ナルティを伴わない）。
【０００８】 ＢＬＡＳＴ（ベーシックなローカル・アラインメント・サーチ・ツール〔アル
チュルのJ. Mol. Evol., 36: 290-300, 1,993、アルチュル等のJ. Mol. Biol.,2
15: 403-10、1990〕を意味する）は配列の類似性を測定するためのヌクレオチド
とアミノ酸配列双方のアラインメントを生ずる。このアラインメントの部分的性
質のために、ＢＬＡＳＴは正確な調和を測定する場合あるいはホモログを同定す
るのに特に有用である。スミス等の（Protein Engineering, 5: 35-51, 1992）
に記載のその他のアルゴリズムは、第一シーケンスパターンと第二構造ギャップ
ペナルティを扱う場合に使用できる。
【０００９】 ＢＬＡＳＴアプローチ（Proc. Natl. Acad. Sci., 90: 5873-7, 1,993）は、
見出される任意の調和の統計的有意性を評価するため、およびユーザーの有意選
択閾値を満足するこれらの調和のみを報告するために、照会シーケンスとデータ
ベースシーケンス間の調和をサーチするものである。本願では、閾値は少なくと
も４０％のアイデンティティあるいはホモロジに設置される。
【００１０】 ＣＧＭＰは乳タンパク加水分解物である。これはシアル酸処理マクロペプチド
であり、かつ約４０％のκ−カゼイン画分を占める。ＣＧＭＰはいくつかの方法
で生成し得、例えば、胃プロテアーゼ（キモシンおよび（または）ペプシン）の
作用による最初の加水分解物である場合、κ−カゼインの腸消化を含む。ＣＧＭ
Ｐはまた凝乳の第一相におけるキモシンの作用により遊離しかつホエイ画分（ス
イートホエイ）に移行し、一方κ−カゼインのＮ−末端部はカゼイン画分ととも
に共沈殿する。ついでＣＧＭＰはスイートホエイから工業的に分離しそしてナト
リウム−ＣＧＭＰ（ＮａＣＧＭＰ）の形で溶出することができる。カルシウム−
ＣＧＭＰ（ＣａＣＧＭＰ）はさらなる工程によりＮａＣＧＭＰから生成する。
【００１１】 ＣＧＭＰは各種表面、例えば、ポリスチレン（ジェイ・アール・ニーサー等、
Infection and Immunity, 56 12, 3201-3208, 1988）および唾液−被覆ヒドロキ
シアパタイト（ジェイ・アール・ニーサー等、Oral Microbiol. Immunol., 9, 1
93-201, 1994）に付着し得ることが知られており、その結果、ペリクル−被覆歯
への菌の付着を防止する。虫歯を誘引する虫歯発生菌の付着を阻止することによ
り虫歯から防止することができる。ビー・チャバンス等（Biochemie, 80, 155-1
65, 1998）は、食後に、ＣＧＭＰを含むα−、β−またはκ−カゼイン由来の多
くのペプチドが胃および血液中に８時間まで検出することができることを示した
が、これはＣＧＭＰが腸バリアーを克服しうることを示す。
【００１２】 現在まで、吸収されたペプチドに寄与した主な生物学的作用は血小板の凝集あ
るいは血液の凝固の減少である。この作用のメカニズムはフィブリノーゲンとＣ
ＧＭＰのＮ−末端ウンデカペプチド（残基１０６−１１６）との間に存在する構
造的ホモロジーに由来することがわかった。このウンデカペプチドが活性血小板
のインテグリン・リセプターに結合し得、それに対しフィブリノーゲンのγ−鎖
が通常結合しその結果凝固を減少させることが一連の試験管内および生体内実験
において証明された。
【００１３】 主な公的の健康問題として認識される骨疾患の例は骨粗しょう症である。実際
、更年期後の骨粗しょう症的骨折は約１５０万人／年である。約３００，０００
の骨粗しょう症的股関節の新規患者、６５０，０００の脊椎および２００，００
０の前腕端部の骨折が米国で毎年報告されている。股関節骨折後の最初の年の致
死率は２０％に達しており（Ameri. J. Epidem., 1001-1005, １993）、これら
の患者の治療費の概算は年間６０億〜１００億ドルの範囲である。
【００１４】 骨の損失を減じるためにいくつかの有効薬剤が入手できるが、薬と併用するか
または別個に使う栄養的手段の機会がある。今日まで骨損失の栄養的防止に関す
る研究は主として古典的な栄養素、カルシウムやビタミンＤに集中している。し
かし、骨の損失を減じるのに古典的栄養素の能力には限界がある。
【００１５】 ＣＧＭＰを含む組成物は骨や歯の健康維持、あるいは骨や歯の疾患の治療に正
の作用を有することがわかった。試験管内の試験では、ＣＧＭＰは骨分解細胞（
破骨細胞）の活性を減じ、かつ骨の健康に対しＣＧＭＰの潜在的効果を示す骨生
成細胞（骨芽細胞）の活性を増大することが分かった。骨損失について成長中の
動物のモデルにおいて、ＣａＣＧＭＰは骨損失を有意に減じることが分かり、骨
芽細胞や破骨細胞について試験管内の試験ではＣａＣＧＭＰかＮａＣＧＭＰを消
費する動物のカルシウムの保持は増大した。さらに、ＣａＣＧＭＰとＮａＣＧＭ
Ｐは更年期の骨損失の動物のモデル（卵巣切除ラット）にて骨の損失を減じ得る
ことがわかった。さらに、異なる形のＣＧＭＰおよびそのペプチドは各種ステー
ジのライフサイクルで骨の健康に利点を有することが分かった。ＣＧＭＰの効果
は予期せざるものである。というのは、飲料乳の効果は十分に確立されているが
、乳タンパク加水分解物は骨や歯の疾患の予防治療に効果を有することがわかっ
たからである。
【００１６】 それにもかかわらず、骨疾患の予防治療、例えば、骨吸収あるいは骨損失を阻
害する、あるいは哺乳動物におけるカルシウムの吸収、保持または石灰化に寄与
する、あるいはそれらの組合せについて、乳タンパク加水分解物、特にＣＧＭＰ
の利用について先行技術には何らの指摘はない。
【００１７】 本発明は上記の問題に対応するものである。 したがって、第１の特徴としては、本発明は乳タンパク加水分解物を含む、骨
あるいは歯の疾患の予防治療用の組成物を供する。 第２の特徴として、本発明は骨や歯の疾患の予防治療用の組成物の製造に乳タ
ンパク加水分解物を使用するものである。
【００１８】 第３の特徴として、本発明は有効量の乳タンパク加水分解物を投与することか
らなる、骨あるいは歯の疾患を治療する方法を供する。
【００１９】 本発明の利点は、経口投与し得る組成物を供することである。このことは、注
射により投与する通常の処理に比べ患者にとりはるかに安全でかつ便利なもので
ある。 望ましくは、乳タンパク加水分解物は骨再吸収即ち骨損失を阻害し、あるいは
カルシウムの吸収、保持または石灰化にあるいはその組合せに寄与し得るもので
ある。
【００２０】 望ましくは、乳タンパク加水分解物はカゼインの加水分解物、さらに望ましく
はカゼイノグリコマクロペプチド（ＣＧＭＰ）、骨再吸収即ち骨損失を阻害し、
またはカルシウムの吸収、保持または石灰化又はその組合せに寄与するＣＧＭＰ
の能力を維持する生物的に利用可能な形のミメチック体、ホモログまたは断片を
含む。ＣＧＭＰのナトリウムまたはカルシウム塩あるいはその混合物がよい。最
も望ましいのは、ＣＧＭＰのナトリウム塩である。
【００２１】 組成物の態様においてＣＧＭＰの量は乾物重量で約０．０１％から約１０％が
望ましく、約０．５％から約５％がさらに望ましい。
【００２２】 組成物の態様はカルシウムを含むのが良い。本発明の態様にかかる組成物は２
５０ｇあたりカルシウムＲＤＡ約１５％から約６４％（ＲＤＡカルシウムは１０
００ｍｇである）を含むのがよく、即ち、組成物１２５ｇあたり約７５ｍｇから
約３２０ｍｇである。さらに望ましくは、２５０ｇあたりＲＤＡカルシウム約５
０％、即ち、組成物１２５ｇあたり２５０ｍｇ含む。
【００２３】 組成物の態様はタンパク源および生物利用性の形のＣＧＭＰの乾燥物量で少な
くとも０．０１重量％含むのがよい。タンパク源として、食物タンパクを適当な
形で使用するのがよい。乳タンパク、ホエイタンパク、大豆タンパクまたはそれ
らの２種以上の混合物が特に望ましい。組成物はまた炭水化物源および（または
）脂肪源を含むことができる。
【００２４】 本発明は、哺乳動物における骨再吸収即ち骨損失を阻害し、あるいはカルシウ
ムの吸収、保持または石灰化あるいはその組合せに寄与するために、生物的利用
可能性の形で乾燥物重量でＣＧＭＰを少なくとも０．０１％を含む食用サプリメ
ントおよび（または）食品を供するのが望ましい。
【００２５】 組成物は炭水化物源、脂肪源またはタンパク源あるいは少なくともその２つの
組合せからなることが望ましい。さらに望ましくは、全カロリーの約１５から約
２５％のタンパク、全カロリーの約１０から約３０％の脂肪、および全カロリー
の約４０から約６０％の炭水化物を含む。少なくとも一部のタンパクはカゼイノ
グリコマクロペプチド（ＣＧＭＰ）として供するのが望ましい。
【００２６】 組成物は十分なミネラルとビタミンを含み、一日の要求量を満たすのが望まし
い。 栄養組成物を育児食のような食品に加えるのが望ましい。 組成物は食品１００ｇあたりＣＧＭＰを１から約５０ｇ含むのが良く、５から
約２５ｇが望ましく、さらには５から約１０ｇ含むのが望ましい。
【００２７】 ヒトあるいはコンパニオンアニマルに骨再吸収即ち骨損失、あるいはカルシウ
ムの吸収、保持または石灰化、あるいはその組合せに寄与するのに十分なＣＧＭ
Ｐを供するように投与するのが望ましい。正確な量は、正しい効果が見られるま
で、ＣＧＭＰを投与することにより、難なく決定することができる。ＣＧＭＰの
投与量は一日に２〜３度で消費され、約１から約５０ｇ／日が望ましく、さらに
は９から約１８ｇ／日が望ましく、最も望ましいのは３から約６ｇ／日である。
【００２８】 ＣＧＭＰはＣＧＭＰを含む液体乳原料をイオン交換処理して得るのが望ましい
。乳起源の適当な原料は例えば次のようなものがある。 ・脱脂乳を無機酸または酸性酵素で、任意にはカルシウムイオンを添加して、酸
沈殿させて得た生のカゼインをレンネットで加水分解した生成物、 ・レンネットによるカゼイネートの加水分解産物、 ・レンネットで凝集させたカゼインを分離した後に得られるスイートホエイ、 ・スイートホエイまたは例えば、電気透析および（または）イオン交換および（
または）逆浸透法により脱ミネラル化したそのようなホエイ、 ・濃縮スイートホエイ、 ・スイートホエイを限外濾過や透析濾過により得た濃縮ホエイタンパク、 ・スイートホエイからラクトースを結晶化した母液、 ・スイートホエイの限外濾過の透過水。
【００２９】 ＣＧＭＰの望ましい製造方法は例えば、ＷＯ９８／５３７０２号に記載され、
ｐＨが１から４．５の液体原料を脱カチオン化し、この液体を主として安定化ｐ
Ｈまでアルカリ性にて、疎水性マトリックスの弱アニオン樹脂と接触させ、つい
で樹脂を分離し、液体生成物を回収し、そして樹脂からＣＧＭＰを脱着させるも
のである。
【００３０】 本発明の態様による組成物はプロビオチック菌を含むのが望ましい。それは乳
酸菌が望ましい。さらに望ましくは、Lactobacillus acidophilus, Lactobacill
us crispatus, Lactobacillus amylovorous, Lactobacillus gallinarum, Lacto
bacillus gasseri およびLactobacillus johnsonni, Lactobacillus paracasei,
Lactobacillus reuteri, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus brevis,
Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei 特
にL.casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacill
us delbrueckii特にL. delbrueckii subsp lactis, L. delbrueckii subsp. del
brueckii および delbrueckii subsp. bulgaricus, およびビフィドバクテリア
特にBifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium ado
lescentis, Bifidobacterium lactis , Bifidobacterium longum、およびLeucon
ostoc mesenteroides特にL. mesenteroides subsp cremorisからなる群から選択
される。最も望ましいバクテリアはLactobacillus acidophilus La10(ATCC 1197
5)である。これらのバクテリアにより得られる利点は、これらの菌がカルシウム
吸収の促進に対し正の作用をもつことである。骨形成や再吸収に及ぼす効果は特
に目覚しく、その場合組成物はLactobacillus acidophilus La10(La10)を含む。
本発明の態様にかかる組成物は約１０7〜約１０9ｃｆｕ／ｍｌまたは／ｇプロビ
オチック菌を含むのが望ましい。さらには約１０8ｃｆｕ／ｍｌプロビオチック
菌を含むのが望ましい。
【００３１】 本発明の組成物の約２５０から約３００ｇの投与量は１日に２回に分けて供す
る。１日あたり約２５０ｇ、即ち１日あたり約１２５ｇを２回投与するのがさら
に望ましい。
【００３２】 本発明組成物の態様は、マグネシウム、クエン酸リンゴ酸カルシウム、または
クエン酸乳酸カルシウムまたは乳カルシウム、リン、鉄、沃素、亜鉛、銅、セレ
ンの組成物２５０ｇあたりＲＤＡ約１５から約５０％、ビタミンＤ、Ｄ３、Ａ、
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、Ｃ、Ｅ、Ｋ、ナイアシン、葉酸、パントテン酸の組
成物１２５ｇあたり約７．５から約２５％のＲＤＡ、ビオチンの組成物１２５ｇ
あたり約１５から約３３％のＲＤＡ、プレビオティックス（例えば、繊維、セル
ロース）２５０ｇあたり約６から約４０ｇ、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）
の組成物２５０ｇあたり約５０ｍｇから約２ｇ、イソフラボンの組成物２５０ｇ
あたり約２５から約５０ｍｇ、乳由来の生物活性ペプチドのタンパク、例えば、
ＴＧＦ−，ＰＴＨｒｐ、ｍｇあたり約１．５から約２．５ｎｇからなる群から選
ばれた栄養素／非栄養素を含むのがよい。
【００３３】 本発明の付加的な特徴および利点は図面に記載される望ましい態様に記述され
、かつその記載から明白であろう。各種形のＣＧＭＰ（ＮａＣＧＭＰとＣａＣＧ
ＭＰ）はカルシウム吸収および骨代謝に対して生物学的効果を有することが見出
された。理論にとらわれるものではないが、ＣａＣＧＭＰ（２．３％のカルシウ
ム含有）はカゼインホスホペプチドと同じように胃において可溶性のＣａを維持
するから、Ｃａの生物利用性を増大すると考えられる。第二に、その抗付着性と
ヒドロキシアパタイトの親和性から見て、ＣＧＭＰペプチドは多分骨面に破骨細
胞の付着の減少により、骨に直接生物的作用を有し、それにより骨損失を減じる
ものと考えられる。この仮説を支持するものとして、ＣＧＭＰのＮａ形が象牙質
の切片上の単離破骨細胞の骨再吸収活性を減じる研究がある。
【００３４】 この仮説を試験するために、２つのタイプのＣＧＭＰ（ＮａＣＧＭＰとＣａＣ
ＧＭＰ）からなる組成物の効果を研究し、骨損失の有効な動物モデルであるテト
ラサイクリンラベルのラットの骨損失に関するもので、約４．５％の総飼料で行
った（Am. J. Physiol., 259: R679-R689）。「誘導された」骨損失の状況下で
、このモデルは短期日内（＜１４ｄ）で骨損失の薬理学的および非薬理学的イン
ヒビター（例えば、ビスホスホネート、野菜由来の成分）に対し非常に感受性の
あることが分かった。さらに、実験期間中毎日の糞尿集取の実行可能性の点で、
Ｃａの吸収、保持および排泄量（即ち、Ｃａバランス）を測定するためにこのモ
デルを使用することが可能であった。要するに、骨損失に対するこの動物モデル
は、骨損失やＣａ吸収に及ぼす食事由来のＣＧＭＰの短期間の効果を試験するの
に十分汎用で感受性であると考えられた。
【００３５】 組成物の態様は少なくともタンパク源とＣＧＭＰを含むことが望ましい。食物
タンパクはタンパク源として使用するのがよい。食物タンパクは任意の食物タン
パクでよく、例えば、動物タンパク（乳タンパク、肉タンパクまたは卵タンパク
など）、植物タンパク（大豆タンパク、小麦タンパク、米タンパクまたは豆タン
パクなど）、混合遊離アミノ酸、あるいはそれらの組合せである。カゼイン、ホ
エイタンパクなどの乳タンパクまたは大豆タンパクが特に望ましい。 本組成物はまた炭水化物源および（または）脂肪源を含んでもよい。
【００３６】 本組成物の望ましい態様は脂肪源を含み、この脂肪源は約５％から約５５％の
栄養処方のエネルギー、例えば、約２０％から約５０％のエネルギーを供するの
が望ましい。脂肪源を構成する脂質は適当な脂肪または脂肪混合物でよい。植物
脂肪は特に望ましく、例えば、大豆油、パーム油、ココナツ油、サフラワー油、
ヒマワリ油、コーン油、カノラ油、レシチン等あるいはこれらの２種以上の混合
油である。乳脂肪のような動物脂肪も必要に応じて添加してもよい。
【００３７】 組成物の望ましい態様は炭水化物源を含む。栄養組成物のエネルギーの約４０
％から約８０％を供するのが望ましい。任意の適当な炭水化物を使用することが
でき、例えば、シュクロース、ラクトース、グルコース、フラクトース、粉飴、
マルトデキストリンあるいはそれらの２種以上の混合物である。
【００３８】 組成物の望ましい態様は食物繊維を含む。使用する場合、栄養処方のエネルギ
ーの約５％までを含むのがよい。食物繊維は任意の適当な起源のもので良く、例
えば、大豆、豆、オート、ペクチン、グアールガム、アラビアガム、フラクトオ
リゴ糖またはそれらの２種以上の混合物である。
【００３９】 組成物の望ましい態様は、適当なガイドラインを満たす量で、組成物の態様に
含まれ得る１種以上のビタミンおよび（または）ミネラルを含む。
【００４０】 組成物の望ましい態様は、必要なら栄養処方に加え得る１種以上の食品級乳化
剤、例えば、モノ−およびジ−グリセリドのジアセチル酒石酸エステル、レシチ
ンおよびモノ−およびジ−グリセリドあるいはそれらの２種以上の混合物を含む
。同様に、適当な塩や安定剤を添加することができる。
【００４１】 望ましい態様の組成物は経腸的に、例えば粉末状で、濃縮液で、あるいは即席
飲料の形で投与することができる。粉末状の栄養組成物を作りたい場合には、均
質混合物を噴霧乾燥機あるいは凍結乾燥機のような適当な乾燥装置に入れて、粉
末化する。
【００４２】 さらなる態様において、一般的な食品にはＣＧＭＰで強化してもよい。例えば
、発酵乳、ヨーグルト、フレッシュチーズ、レンネット処理乳、糖菓バー、朝食
用シリアルフレークまたはバー、ドリンク、粉乳、大豆ベースの製品、非乳発酵
製品あるいは臨床用の栄養サプリメントである。ＣＧＭＰの添加量は少なくとも
約０．０１重量％が望ましい。 別の態様では、スイートや甘味飲料などの糖菓子に組成物を添加することもで
きる。
【００４３】 つぎの例は例示だけのものであり、本願の主題を限定するものではない。％や
部は特に断らない限り、重量に基づく。
【００４４】 例１ ＣＧＭＰの調製 ウシのスイートホエイを１７％乾燥物まで濃縮し、電気透析で脱ミネラル化し
、強力カチオン樹脂カラムでカチオンを除き、弱アニオン樹脂カラムでアニオン
を除き、そして乾燥塔で噴霧乾燥した。その組成は以下に示す。 脱ミネラル化粉末ホエイを脱イオン水に溶解した。カチオンを除去した後、溶
液の初期ｐＨは３．８である。前のプラントで、この溶液３９２ｋｇを８℃の温
度で、ポリスチレンをベースとする疎水性マトリックスの弱アニオン樹脂（ＩＭ
ＡＣ ＨＰ ６６１登録商標、ローム＆ハース、ＯＨ−型に再生）２３ｋｇの存
在下反応器にて４時間攪拌しながら行う。ｐＨが４．８９に安定化すると反応は
終了する。液体を取出し、樹脂を上記のように回収した。 液体を４５％乾燥物まで蒸発濃縮した後、その濃縮物を乾燥塔で噴霧乾燥した
。 ＨＰＬＣによるその濃縮物の分析値では、反応により当初のＣＧＭＰの８９％
が除かれたことが分かった。さらに、粉末は９．１％のホエイタンパクを含み、
これはホエイタンパクの９０％の収量に該当した。 ＣＧＭＰを回収するために、樹脂を脱イオン水、０．５％塩酸の水溶液３０ｌ
ついで脱イオン水３０ｌで順次洗った。ＣＧＭＰは２％のＣａ（ＯＨ）2水溶液
４０ｌで２度溶出した。３０ｌの脱イオン水でリンスを行った。溶離液とリンス
ボリュームを一緒にし、その混合物を、３０００ダルトンの名目上の分画分子量
を有する膜で限外濾過して２５ｌ容量まで濃縮した。保留液を凍結乾燥し、９０
０ｇのＣＧＭＰを得た。これは出発のＣＧＭＰに対して８０％の収量に相当する
。
【００４５】 例２ ラットの骨から単離した分解した破骨細胞による象牙質の再吸収 材料と方法 １―２日令のラットから解剖により取り出した大腿骨と脛骨から破骨細胞を単
離した。この骨を、１５ｍＭ ＮａＨＣＯ3を有するアール塩と１０％のウシ胎
児血清（ＦＢＳ）を含むＭＥＭ中で外科用メスで取り出した。細胞懸濁液を複数
の象牙質切片に加え、細胞を４０分のインキュベーション時間付着させた。非付
着細胞を洗い流した後、各切片を４８個の孔のある組織培養皿に入れ、そして１
０％ＦＢＳと例１で調製したＣＧＭＰの各種濃度を含む培地で２４時間培養した
。細胞を固定し、破骨細胞用の特定のマーカー、酒石酸塩耐性酸ホスファターゼ
（ＴＲＡＰ）で染色し、ついでカウントした。ついで細胞を超音波で除いた。洗
浄・乾燥後、切片を金スパッタリングしそして接線の光源を使ってピットをスコ
アした。１つの実験では、象牙質の切片をＣＧＭＰで１時間予備処理した。その
後、ＣＧＭＰ含有培地を除き、破骨細胞を象牙質の無機表面に付着させた。 １０ｍｇ／ｍｌの濃度でα−ＭＥＭに溶解したＣＧＭＰとウシ血清アルブミン
はカルシウム電極で測定して、それぞれ約０．３〜０．４ｍＭおよび約０．２ｍ
Ｍ Ｃａを結合した。 結果 結果は表１に示す。先ず、破骨細胞の形成に及ぼすＣＧＭＰの影響は「破骨細
胞再吸収試験」により評価した。試験材料を加える前に、象牙質切片（４．０×
４．０×０．１ｍｍ）の表面に付着させた予備成熟および成熟ラット破骨細胞の
混合物からなる細胞に各種濃度のＣＧＭＰを加えた。マークした場合を除いて、
すべてのカルチャーは１０％の胎児ウシ血清（ＦＢＳ）の存在下で行った。対照
タンパクとして、ウシ血清アルブミンを使った。細胞は２４時間培養した。その
後、酒石酸塩耐性酸ホスファターゼ−陽性多核細胞（ＴＲＡＰ＋ＭＮＣ）の数は
、２つの異なる破骨細胞のプール（列１）を使って１６個の別々に培養した象牙
質切片に見出した。破骨細胞をスコアした後、超音波で除いた。その後、切片を
洗い、風乾しそしてメタルディスクに装着し、そこで切片を金でスパッタリング
被覆した。接線光源を装着した光学顕微鏡を使って、２人で溝を数え上げた。ピ
ットの率を示したデータは、２つの異なる破骨細胞プール（列２）を使って１６
個のそれぞれ培養した象牙質切片についてスコアした。列３は列１と２に示した
ピットとＴＲＡＰ＋ＭＮＣの比を示す。 ついで、破骨細胞が無機表面に付着した後、タンパクを培地に添加した場合の
ＣＧＭＰの効果を研究した。表１．列１に示すように、ＣＧＭＰは破骨細胞数に
弱い効果があった。１０ｍｇ／ｍｌでの有意な減少は特異的であるとは思えない
。アルブミンは類似の効果を有するからである。反対に、象牙質あたりピットの
数は、１０ｍｇ／ｍｌの濃度でＣＧＭＰで減少し（表１、列２参照）かつアルブ
ミンにより増大した。列１と２から計算して、破骨細胞あたりピットの数は、１
と１０ｍｇ／ｍｌの濃度でＣＧＭＰが（表１、列３）分解した破骨細胞の骨再吸
収活性を有意に高く阻害するが、アルブミンはこの活性を刺激することを実証し
ている。
【００４６】 例３ 骨肉腫細胞生育活性／増殖に及ぼすＣＧＭＰの影響 骨肉腫細胞（骨芽細胞様細胞）の生育活性と増殖に及ぼすＣＧＭＰの影響を測
定した。 材料と方法 １．細胞 ＨＯＳ５８ヒト骨肉腫細胞 この細胞系は高度に分化した骨芽細胞様骨肉腫細胞系（ケルン等、Calcif. Ti
ss. Int., 46, Suppl.2, A54, 1990）として特徴づけられ、適当な条件下で、ビ
タミンＤリセプター発現と無機質化により指摘されるように、高度に分化した表
現型に刺激を与えうる。 ＴＥ８５ヒト骨肉腫細胞 この細胞系はＡＴＣＣ（ＣＲＬ１５４３）、ヒト１３ｙ雌から誘導した骨形成
骨肉腫細胞系から入手した。これは培地組成により、高密度または低密度で生育
し得る。これらの細胞は余り分化していない早期骨芽細胞の特徴をもつ急速に発
育する骨芽細胞様細胞である。 ２．ＭＴＴ−テトラゾリウムによる細胞増殖と生育活性の定量比色試験 ティー・モスマンの試験システムの改良方法（J. Immunol. Methods, 65, 55-
63, 1983）は生育細胞の細胞増殖および生育−停止培養体の休止細胞の生育活性
を測定するために使用した。処理期間、４８時間か７２時間の最後に、細胞を３
７℃のＣＯ2恒温器にて細胞培地１００ｌあたり１０ｌのＭＴＴ−テトラゾリウ
ムストック溶液（シグマ、５ｍｇ／ｍｌ ＰＢＳ）で４時間培養した。反応後、
培地−基質混合物を注意深く吸引除去し、暗青色のフォルマザン結晶を２０％の
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）１００ｌに３７℃一晩溶解した。着色溶液の
光学密度は５５０ｎｍで測定した。 結果 細胞の生育活性／増殖に及ぼすＣＧＭＰの影響は、先ず１０％ＦＣＳで１日間
、ついで１％ＦＣＳで２日間、最後に血清を含まない、両剤のＢＳＡ−補充培地
で３日間生育させた細胞密度培養から、あるいは１０％ＦＣＳで１日間、つづい
て直ぐに血清を含まない、ＢＳＡ−補充培地（表２）にてＣＧＭＰで処理した初
期低細胞密度で出発して行った。 両実験の結果から、全体の効果は双方の培養条件で類似していたことを示した
。ＣＧＭＰはＭＴＴ反応で用量−依存性増大を誘起し、ＴＥ８５細胞は両剤に対
し最も感応的細胞型である。表２に示すように、ＣＧＭＰの１０ｍｇ／ｍｌの投
与量は３倍以上までＴＥ８５の代謝活性を最大に刺激した。同じパターンはＨＯ
Ｓ５８細胞にも観察された（表２）。
【００４７】 例４ ＣＧＭＰ含有発酵乳 １−４％の脂肪を有する伝統的発酵乳はつぎのように調製した。 全乳を標準化した後、低脂肪乳またはその混合物、例１のように調製したＣＧ
ＭＰ０．０５重量％を加えた。全体をプレート熱交換機で殺菌し、液体を発酵温
度に冷却し、好熱性または中温性乳酸菌を加えそしてｐＨ＜５になるまで培養を
行った。 続いてポットの充填とシールを常法により行った。 ０．１％，０．２５％および０．５重量％のＣＧＭＰを添加した別の態様を行
った。
【００４８】 例５ ＣＧＭＰを含有するプロビオチック菌を豊富化させたゲル化発酵乳 ゲル化発酵乳はプロビオチック菌を豊富に加えて調製した。脂肪含有の乳８９
．３部を３．７部の粉末脱脂乳および例１で調製した約０．０５重量部のＣＧＭ
Ｐと混合し、ついで混合物を７０℃に予備加熱し、９２℃で６分間殺菌し、その
後４３℃に冷却し、混合物にストレプトコッカス・サーモフィラスとＬ．ブルガ
リカスからなる通常のヨーグルトスターター２％で、およびＬ．ジョンソニ（Ｌ
ａ−１，ＣＮＣＭ Ｉ−１２２５）５％を接種した。ポットで標準化した後、ｐ
Ｈ４．６まで３８℃で発酵を行い、ついでポットを６℃に冷却した。 下記の量のＣＧＭＰを加えた。０．１％，０．２５％および０．５重量％。得
られた生成物は骨形成細胞の代謝活性に対し刺激効果の増大および骨再吸収に対
して阻害効果を有することがわかった。
【００４９】 例６ ＣＧＭＰを含有するプロビオチック菌に富むゲル化発酵乳 ゲル化発酵乳を前記の例に記載のように調製した。ただし、Ｌ．ジョンソニ菌
株をＬ．アシドフィラスＬａ−１０（ネスレ・カルチャーコレクション）（ＡＴ
ＣＣ１１９７５）と取り替えた。
【００５０】 例７ ＣＧＭＰ含有の経腸組成物 エネルギー密度６．３ｋＪ／ｍｌと８％（ｐ／ｖ）のタンパクを有する組成物
を「低温」粉末脱脂乳、即ち、調整熱条件下で乾燥した脱脂乳から調製した。２
０ｋｇの低温粉末脱脂乳を約５０―５５℃の温度で１００ｋｇの脱ミネラル水に
分散させた。この分散液を、６００ｋｇの透過液が排出されるまで脱ミネラル水
を通してミクロ濾過した。ついで保留液をさらに約６０ｋｇまで濃縮し、これは
乾燥基準で８２％のタンパク含量を有する２１％の乾燥含量を示す。 経腸組成物を調製するために、２．３ｋｇの保留液を５５℃で６００ｇのマル
トデキストリン、２００ｇのシュクロース、２０．３ｇのクエン酸三カリウムＨ 2 Ｏ、９．２ｇのＭｇＣｌ2６Ｈ2Ｏ、５．８ｇの食塩および例１で調製したＣＧ
ＭＰ約０．５〜１重量％と混合した。成分を保留液に溶解した後、全体の分散液
４．７ｋｇに脱ミネラル水を加えた。ｐＨを６．８に調整した後、３００ｇの脂
肪相を導入し、全体の分散液を５ｋｇとした。 均質化と滅菌の後に、生成物は心地よい甘味を呈した。石灰化に及ぼす刺激効
果および骨吸収に及ぼす阻害的影響を有することが分かった。
【００５１】 例８ ＣＧＭＰを含有するシリアルバー 膨張させた出発物質を調製するために、大麦、小麦、コーンまたはオート粉を
約１２％の水の存在下で約３５０回転のスクリュー速度で約１５秒間二軸エクス
トルーダーで処理した。処理後、膨張した生成物を２〜３ｍｍの長さの粒子の形
でエクストルーダーから出し、１００℃で２０分間乾燥させた。得られた生成物
は多孔性構造を示し、かつ次の組成を示した。 食物繊維 ３１％ タンパク ２１％ 糖質 ３７．５％ 脂質 ６．５％ 灰分 ２．４％ 水 １．６％ この膨張した製品を、糖尿病の治療用に意図したバーに加え、次の組成を示し
た。 膨張製品 ３９．４％ オートフレーク １６．７％ ソルビトール ８．４％ フラクトース ８．５％ リンゴキューブ ６．１％ 米クリスピ ４．１％ ゼラチン ４．０％ 粉末アンズ ２．５％ パーム油 ３．０％ ＣＧＭＰ ２．５％（例１で調製） 水 ４．８％
【００５２】 例９ ＣＧＭＰ含有食用サプリメント ヒト起源のＬ．ジョンソニＬａ−１（ＣＮＣＭ Ｉ−１２２５）の培養物を例
１で調製したＣＧＭＰと混合し、ＥＰ０８１８５２９号に記載の方法により噴霧
乾燥し、約５重量％のＣＧＭＰを含有する食用サプリメントを得た。 得られた粉末は食用サプリメントとして使用することができる。朝食シリアル
、乳製品その他の食品にＣＧＭＰ含有のこの粉末を振り掛けることもできる。
【００５３】 例１０ ＣＧＭＰ含有食用サプリメント 例９に記載のように、食用サプリメントを調製した。しかし、Ｌ．ジョンソニ
をＬ．アシドフィラス、Ｌａ−１０（ネスレ・コレクション）と置き換えるか又
はこれらの混合菌を使用した。
【００５４】 例１１ 骨損失モデル（テトラサイクリン標識ラット）における骨損失とカルシ
ウムバランスに及ぼすＣＧＭＰの影響 骨損失の有効モデル（テトラサイクリン標識の生育ラット）を使用して、飼料
の４．５％ＣａＣＧＭＰとＮａＣＧＭＰが短時間骨損失を低減するかカルシウム
吸収に影響するかどうかを試験した。ＣａＣＧＭＰの消費は対照と比較して、約
２０％まで骨損失を有意に減じた（ｐ＝０．０１）。ＮａＣＧＭＰは対照と比較
して、１０％まで骨損失を減じた（有意でない）。さらに、カルシウムの吸収は
対照群と比較して、ＣａＣＧＭＰまたはＮａＣＧＭＰを消費する動物では高かっ
た。カルシウムの保持率対照と比較して、ＣａＣＧＭＰとＮａＣＧＭＰの双方で
は有意に高かった。 使用したモデルでは、ＣａＣＧＭＰとＮａＣＧＭＰは摂取したカルシウムの吸
収と保持に対し確実に影響を及ぼした。骨損失は対照と比較して、ＣａＣＧＭＰ
により有意に減じた。これはＮａ型よりＣａ型の付加的に有利な特徴を示唆する
ものである。 見かけのカルシウム吸収と保持に及ぼすＮａＣＧＭＰとＣａＣＧＭＰの影響 ＮａＣＧＭＰ、ＣａＣＧＭＰおよび対照群に対する明白なＣａ吸収（％）、Ｃ
ａ保持（ｍｇ／日）およびＣａ保持割合（％）の平均値（カッコに標準偏差あり
）は表３に示し、図１に図示する。明白な異常値は見られない。データの分布は
群間の偏差を測定する古典的ＡＮＯＶＡ方法が適当であることを示す。 カルシウム吸収 ＣａＣＧＭＰおよびＮａＣＧＭＰ群の明白なＣａ吸収は対照群の明白なＣａ吸
収の平均値より平均で５．６％および５．８％（それぞれ）高かった。複数を比
較するためにダネット試験を使用して、３群の統計的比較では少なくとも１群の
平均は有意に異なることが示された。しかし、９５％の信頼レベルを使用すると
２つのＣＧＭＰ群および対照群間のＣａ吸収の差は統計的に有意ではなかった。
ＣａＣＧＭＰおよびＮａＣＧＭＰ群間に差は見出されなかった。カルシウム保持 平均して、対照群は２６．１（２．３）ｍｇＣａ／日を保持し、ＣａＣＧＭＰ
群は３０．４（２．５）ｍｇ／日をおよびＮａＣＧＭＰ群は２８．１（２．０）
ｍｇ／日を保持した。従って対照に比しＣａ保持の評価増加はＣａＣＧＭＰ群で
は平均４．２５ｍｇ／日およびＮａＣＧＭＰ群では１．９８ｍｇ／日であった。
２つのＣＧＭＰ群に対するＣａ保持値は複数比較に対するダネット試験を使用し
て対照群と比較した。この試験によりＣａＣＧＭＰ群は対照と比較して有意に高
い（Ｐ＜０．０５）Ｃａ保持を有することが示された。ＮａＣＧＭＰ群は高いＣ
ａ保持傾向を示したが、統計的に有意ではなかった。２つのＣＧＭＰ群はタキイ
の複数比較試験を使用して比較したが、ＣａＣＧＭＰおよびＮａＣＧＭＰ群間に
有意な差はみられなかった。カルシウム保持割合 Ｃａ保持はＣａ消費量の％としてＣａ保持量を表わすために計算し、群間のＣ
ａ摂取の小差を考慮した。ワンウエイＡＮＯＶＡによるＣａ保持割合の分析は０
．０８８のＰ−値を示し、これは少なくとも１つの平均値が有意に異りうること
を意味する。複数比較のダネット試験および１０％の有意レベルを使用して、Ｃ
ａＣＧＭＰおよびＮａＣＧＭＰは平均して対照より約５．２％（絶対）高いＣａ
保持割合を有することが実証されたが、これらの差は双方とも有意限界にあった
。尿〔Ｈ3〕テトラサイクリン量により定量した骨損失 〔Ｈ3〕テトラサイクリン排泄を１３日間毎日測定し骨損失を定量した。群の
平均は図１に示す。〔Ｈ3〕テトラサイクリン排泄量は試験の初め（第１日）に
は各々同じであるが、３群は１３日までに相互に離れるらしいことが図１に明ら
かに見ることができる。複数試験のダネット試験を使用して３群の統計的比較に
より少なくとも１群の平均は有意に異る（Ｐ＝０．０１）ことが示された。さら
に群はタキーの複数比較試験を使用して比較し、それ場合ＣａＣＧＭＰと対照間
の差は統計的に有意であることが分かった。（Ｐ＜０．０５＞。 顕著なことは、ＣａＣＧＭＰ消費量（約６６０ｍｇ／日）は使用した骨損失の
動物モデルで、対照と比較して尿ラトラサイクリン排泄量、従って骨損失を約２
０％だけ有意に低減した。ＮａＣＧＭＰの７２０ｍｇの消費は対照と比較して約
１０％だけテトラサイクリン排泄量を低減したが、有意ではなかった。 乾燥飼料は４．５％のＣａＣＧＭＰおよび４．７％のＮａＣＧＭＰを含有し、
飼料を約４０％の水と混合後、毎日のＣＧＭＰの消費近似値（試験期間の最後の
５日間に消費した飼料量から計算）はＣａＣＧＭＰで６６０ｍｇ、およびＮａＣ
ＧＭＰで７２０ｍｇであった。平均寸法の成人では、これは約１８ｇのＣＧＭＰ
／日に等しい。ＣａＣＧＭＰが閉経期後の女性または老人（そのタン白摂取は適
量より低量でありうる）の骨損失の低減を最終の目標とする場合、ＣＧＭＰの１
８ｇ上限を含有する食事代替型製品はもっとも有望な適用であろう。
【００５５】 例１２ 閉経期骨損失モデルの骨損失およびカルシウムバランスに及ぼすＣＧ
ＭＰの影響（老令卵巣切除ラット） ＣＧＭＰは３ヶ月以上経た卵巣切除ラットのエストロゲン不足により誘発され
た骨損失を低減できるかどうかを測定した。４０匹の老令ラットを４つの群、Ａ
，Ｂ，ＣまたはＤの１つのランダムに分けた。Ａ群はＳＨＡＭ手術し（卵巣結紮
せずに外科手術を行なう）およびＢ，ＣおよびＤ群は卵巣切除した（すなわち、
卵巣の結紮）。ＡおよびＢ群は対照群であり、乳タン白を含まない飼料を消費し
た。Ｃ群の飼料は４．５％のＣａＣＧＭＰを含有し、Ｄ群の飼料は４．５％のＮ
ａＣＧＭＰを含有した。骨密度測定基準線は定量コンピュータ断面撮影法（ｐＱ
ＣＴ）を使用して卵巣切除前関節部から６ｍｍのところを取った。測定は卵巣切
除後５週および再度５週後に反復した。予期されたようにＡ群（ＳＨＡＭ対照）
では骨柱密度（ＴＢＤ）に変化は見られず、Ｂ群（卵巣切除対照）では約１６％
ＴＢＤの損失があり、意外なことにＣ群（ＣａＣＧＭＰ消費）およびＤ群（Ｎａ
ＣＧＭＰ消費）ではそれぞれその初めのＴＢＤの４．６％および６．４％が失わ
れた（図２）。これはＣＧＭＰが骨損失の低減に重要な役割を演ずることを示す
。 ここに記載の好ましい態様に対する各種変更および修正は当業者には明らかで
あろう。このような変更および修正は本発明の精神および範囲から逸脱せずに、
かつその付随利益を減少せずに行なうことができる。従ってこのような変更およ
び修正は特許請求の範囲に包含されるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】 対照、ＮａＣＧＭＰおよびＣａＣＧＭＰに対する〔Ｈ3〕テトラサイクリン平
均排出量および標準誤差バーを示す。各線は１３日にわたる各群に対する〔Ｈ3
〕テトラサイクリン排出（骨再吸収を示す）。
【図２】 卵巣切除ラットの骨柱密度の長期損失に及ぼすＣａＣＧＭＰおよびＮａＣＧＭ
Ｐの効果を示す。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１３年４月１９日（２００１．４．１９）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 1/02 Ａ６１Ｋ 37/16 19/10 37/18 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ツルベルク − ライネルト、ハイディ スイス国 バーゼル、バイムゴールデネン ロエヴェン 13 (72)発明者 ジンティ、フィオナ スイス国 エパランジュ、シュマン デ クロワゼット ６ (72)発明者 バークレイ、デニス スイス国 アルネックス − シュル − オルブ、シュノー (72)発明者 ムールバウアー、ロマン スイス国 ベルン、ムルテンシュトラーセ 35、ディパートメント クリニカル リ サーチ、グループ フォア ボーン バイ オロジイ Ｆターム(参考） 4B018 MD20 MD22 MD71 ME05 ME14 MF01 MF06 MF13 4C084 AA01 AA02 AA17 BA05 BA34 BA43 CA38 CA53 MA01 MA16 MA43 MA52 NA14 ZA672 ZA972 4C087 AA01 AA02 BB39 CA07 CA17 MA17 MA43 MA52 NA14 ZA67 ZA97

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 乳タンパク加水分解物を含む、骨又は歯の疾患の予防あるい
    は治療用組成物。
  2. 【請求項２】 乳タンパク加水分解物は骨再吸収または骨損失を阻害し得、
    あるいはカルシウムの吸収、保持または石灰化、またはその組合せに寄与し得る
    ものである、請求項１記載の組成物。
  3. 【請求項３】 乳タンパク加水分解物はカゼイノグリコマクロペプチド（Ｃ
    ＧＭＰ）、ＣＧＭＰの骨吸収または骨損失の阻害能あるいはカルシウムの吸収、
    保持あるいは石灰化またはその組合せに寄与する能力を保持するミメチック体、
    ホモログあるいはその断片である、請求項１又は２記載の組成物。
  4. 【請求項４】 ＣＧＭＰ、ミメチック体、ホモログまたはその断片はナトリ
    ウムまたはカルシウム塩の形をしている、請求項３記載の組成物。
  5. 【請求項５】 約０．０１％から約１０％乾燥重量のＣＧＭＰを含む、請求
    項３又は４記載の組成物。
  6. 【請求項６】 ヒトあるいはコンパニオンアニマル用の栄養組成物の形状を
    している、請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物。
  7. 【請求項７】 総エネルギーの７から２５％を供するタンパク源、総エネル
    ギーの２８から６６％を供する炭水化物源、総エネルギーの２５から６０％を供
    する脂質源、一日要求量を満たす無機質およびビタミンを含む、請求項１〜６の
    いずれか１項記載の組成物。
  8. 【請求項８】 骨または歯の疾患の治療予防用の組成物を製造するのに、請
    求項１から７のいずれか１項記載の組成物の使用。
  9. 【請求項９】 請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物の有効量を投与す
    ることからなる、骨または歯の疾患の治療又は予防方法。
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