JPS58152476A - 新規微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な微生物に関し、さらに詳しくは。

ストレグ）（セス属に属するカルバペネム系抗生物質生
産菌であって式 ％式％（１） 式中、Ｒ１は水嵩原子、水酸基又は基 −０−８０．Ｈｆ衆わす。

で示される化合書の脱バントテノイル化＃本活性が欠失
し九ｌｌＲ１１黴生物及びこれヤのＬ−ヒスチＶン、Ｌ
−アルイニン又はＬ−アデニン費求性変異菌、ストレグ
トずセス属に属するカルバペネム系抗生物質生産菌であ
って上記式（１）で示される化合物の脱ノ奢ントテノイ
ル化酵素活性及びアセチル化酵素活性を有する微生物の
栄養要求性質ａｍ、韮びに上記２種の変異曹の細胞融合
によって創製される式 式中、　Ｒ１は水素原子、水酸基又は基−０−８ｏ、Ｈ
ｔ人わす、 で示される化合資の生産能を有するｖｒ規倣生物に関す
る。

下記式 で示されるツーオキソ−１−アゾビシクロ〔３゜意、Ｏ
〕ヘグトー８−工ン−８−カルがン酸骨格（カルバペネ
ム骨格）を有する抗生物質（以下この骨格を有する抗生
物質をカルバペネム系抗生物質という）は、一般に高い
抗菌力とβ−ラクタマーヤ阻害活性を有しており、従来
から、ストレグトイ令スｌ！に属する各種の微生物の発
酵培養液から種々のカルバペネム系抗生物質が単離され
ている（Ｎｔば、チェナマイシン（ジャーナル・オン・
アンティビオティクス、３２巻（１１７９年）。

１−１１員）、エビチェナマイシン類（第１丁回インタ
ーサイエンス拳コンファランス・オン・アンティ建クロ
ピアル・エイゼンツ・アンド・ケモテラピー、要旨第８
０および第８１号（１９７７都））、Ｎ−アセチルチェ
ナマイシン（西ドイツ特許１１１１５１８８１号（１９
７７年））、オリパ二ン酸＠（１’ヤーナル・オン・ア
ンティげオンイクス、３２巻（１９７１１年）、２８７
〜３０４画）、ＰＳ−ｓ（ジャーナル・オン・アンティ
ビオティクス、８２巻（１９７９年）、２６２〜２８６
負及びジャーナル・オン・ファーメンティジョン・チク
ノロジ−１５フ巻（１９７９年）２６５〜２７２頁）、
ＰＳ−６（公開特許公報昭５４−６９１！１５号）、Ｐ
ｇ−１（公開特許公翰昭５４−９２９８３号）など〕。

°しかじ、これ迄に提案されているカルバペネム系抗生
物質はカルバペネム骨格の３−位にアばノエチルチオ基
やアセチルアζノエチルチオ基などの短鎖の置換基を有
するものばかりである。

ところが、ごく最近、本発明者らが見い出したストレプ
ト書セス’　ａＰ−ＯＡ−６１２９（ＦＥＲＭＢＰ−ｔ
ｌ）が、これまでに発表されているカル・者ペネム系抗
生物質と３−位の置換基の８ｉ＃４においてタイプの異
なる。すなわち３−位に艮−の・譬ントテノイルアイノ
エチルチオ基を有する前記式（１）で示される抗生物質
０Ａ−６１２９１，Ｂ及びＣを生産することが判明し先
に提案し次（％願昭５ト弓３ｓ８１―号、同！！５−１
４４５０７号及び！１ｌｌ−１７０８６４号出ＭＡ明細
書参照）。

そこで、本発明者らは、３−位にバントテノイル基を含
まない従来のタイプのカル／櫂ペネム系抗生物質生ｔｉ
−と上記の３−位にバントテノイル基を含む抗生物質０
Ａ−６１２ｆｌＪＡ％Ｂ及びＣ生産菌の間の生合成的相
違について鋭意研究を重ねた結果、ストレプトミセス属
に属する従来のタイプのカルバペネム系抗生物質生産−
はカルバペネム糸抗生資質の生合成経路において中間で
３−位に／譬ントテノイル基を含むカルバペネム系化合
物を生成した後これに脱ノ臂ントテノイル化酵素を作用
させてノ臂ントテノイル基を離脱せしめることによ。

Ｄ蝋終のカルバペネム系抗生物質を生産していること（
なお、この脱）々ントテノイル化酵素に関しては特願昭
５　’６−１０”１１６１号出願明細曹徊＠）、そして
逆に、抗生物質０Ａ−６１２９Ａ、Ｂ及びＣ生産菌は脱
・ダントチノイル化酵素活性を奉賀的に欠失していると
いう事実をつきとめ、従来のタイプのカルバペネム系抗
生物質生産菌に変異処理を加えて脱・ダントチノイル化
酵素活性が欠失し次突然変異菌を多数創製し、上記事実
の確認全行なつ念。かかる脱ノクントテノイル化酵素活
性が欠失したカルバペネム系抗生物質生産菌は従来の文
献Ｖこ未載の新規な微生物である。

しかして１本発明によれば、ストレプトミセス属に属す
るカルバペネム系抗生物質生産菌であって、前記式（り
で示される化合物の脱・！ントテノイル化酵素活性が欠
失した新規微生物が提供される。

本発明により提供される新規微生物には、天然界から検
索されたもの及び何らかの変異処理によって既知の微生
物から創製され友ものの両者が包含される。

本発明の新規微生物を天然界から検索により取得する場
合、その検索は次のようにして行なうことができる。

すなわち、天然界からの検索はβ−ラクタム感受性ｌｉ
ｔ？検定菌とするビオアッセイ寒天平板と、これに椙々
のタイプのβ−ラクタマーゼを添加したビオアッセイ寒
天平板とを用いて、土壌分離菌の培養Ｆ液ｔ−憤定し、
前者・υ寒天平板に阻止円を与え、巣に後者のいくつか
の寒天平板における阻止円が前者のそれより小さい培養
Ｆｌ＊ｔ−与える土壌分離面を検索する。次にその土壌
分離菌の培養液中の活性成分を活性炭に吸着させ、その
浴出濃縮液ｔペー／＃−りｐマトダラフイ−１たは薄層
クロマトグラフィーで−一し、β−ラクタム感受性ｍｔ
検定−とするビオオートダラフイーにより抗生物質ＯＡ
−６１２！　９群に属する化合物が慣用されれば、その
菌は本発明の微生物であるということができる。

この検索方法を具体例によりさらに収明すれば次の通り
である。

β−ラクタム感受性菌のビオアッセイ錬大平板として、
後述するコマモナス検定板を用い、これにバチルス・セ
レウス５６９の生産するβ−ラクタマーゼを添加し次コ
マモナスＣＶ検定板と、シトロバクタ−・フロインディ
ーＥ−９の生産するβ−ラクタマーゼ”ｋ＆加したコマ
モナス検定板定板とｖｉ−調製する。一方、土壌分離−
のｆ＠養涙液ｔ８　ｍｓ直径のＡルプディスクにしませ
て、それぞれの検定板に乗せ、３５Ｃで２０時間ｔ＠養
したのち、コマモナス検定板で阻止円を与え、且つコマ
モナス検定板定板またはコマモナス検定板定板での出止
円がコマモナス検定板での阻止円より小さい、層１１Ｆ
液を与え九土壌分離菌を選出する。

次にその土壌分離菌の培養Ｐ液に該Ｖ液の２％＜Ｗ／Ｖ
）量に相当する特製白鷺活性炭（式日薬品工業（株）製
）ｔ−加え、ｌｓ分間攪拌した後、遠心分離により沈殿
を集め、この沈殿を用いた培養Ｐ液と同容量の蒸留水で
洗浄し、再び遠心分離して沈殿を集める。この沈殿に前
記で用いた培養Ｐ液の半容量に相当する量のＳＯ％（Ｖ
／Ｖ　）アセト／水を加え、室温で３０分間攪拌−後、
遠心分離して上ｆＩｌｔ−えた。ｃの上澄液ｔロータリ
ー・エバ４レータ−を用いて３０〜ｓｓＣで濃縮して。

上記で用いたｊｌＩＩＦ液に対して！Ｏ倍の濃縮液をえ
た。この濃縮液を東洋Ｆ紙Ａｇｏ（東洋２紙（株）製）
で８０Ｘア七トニトリル／トリス／ＩＤｒＡ（７４）＝
）リルｌ　！　＠ｄ、ｐＨ’１．ｓｆ）ＶｍＭトリス（
ヒドロキシメチル）アイツメタン−塩鹸緩債液３０−１
νＨ’１．５（０１７１６Ｍエチレンシアずン四酢酸ナ
トリウム塩水溶液１ｍからなる〕溶媒を用い下降法ペー
パークロマトグラフィーを１６時間行った後、コマモナ
ス・テリｒすＢ−９９６ｔ−検定菌としてビオオートグ
ラフィーを付なう、そして、抗生智質０Ａ−６１２９Ａ
、同ＯＡ−ｓｔｇｓＢ又は同０Ａ−６１２９０と同じ移
動距１ｌｌ（Ｒｆ値のところ）に阻止帯を示した土部分
離菌を本発明の目的徽生物の候補として連出する。

このようにして選出された候補側については。

さらにベー／譬−クロマトグラフイーや薄層クロマトグ
ラフィーを行ない、抗生物質（ｊ、４−６１２９Ａ、同
０Ａ−６１２９Ｂ又は同０ｌ−ｓｘ２ｅｃの生産性を確
認する。

これにより、当業者は本発明の目的に適合した微生物を
容易に検索することができる。

上記の如くして検索され次抗生物質０Ａ−６１！９Ａ、
同０Ａ−８１２９Ｂ及び同ＯＡ−８１２９Ｃ生産菌の代
我的なものには、ストレグ）ｆセス属に属する抗生物質
ＯＡ−６１Ｍ９Ａ、同０Ａ−６１！１１Ｂ及び同０Ａ−
ｓｌ＊ｅｃ生産菌が包含され、その好適な一例として昧
、福岡県福岡市の往古神社の近くで採取した土壌から分
離し九放線繭で１本発明者らが０Ａ−８１２９菌株の番
号食付した菌株が挙げられる。

このＯＡ−６１１９９株の菌学的性質は次の通りである
。

１）形態 馴黴鏡下でよく分枝した基中菌糸より、直状〜曲状（Ｓ
ｔｒａｉｇｈｔ　−ｆ１ｍｍ＊ｏ＊ａ　）　ｆ）気菌糸
を伸長し、輪生状はみとめられない、成熟した胞子鎖は
１０個以上の楕円〜円筒形をした胞子から成り。

胞子のうは關められない、胞子の大きさはａ６〜１、６
　Ｘ　＆１〜ａＳＳクロン位で、胞子の表面は平滑であ
る。鞭毛胞子はみとめられない。

２）　各種培地における生育状態 培讐は特記しないかぎり２８°〜３（１’で打った。ま
た色調の記載は主としてエッチ・ディ・トレスナートイ
ー・ジエー・パカス（Ｈ，Ｄ。

Ｔｒａｍ％ａｒａｎｄ　Ｅ、　Ｊ、　Ｂａｏｋｓｓ　）
著、ツヤ−ナル・オツ・アゲライド・ミクロピオロジイ
ー（ＪｏｓｒｎａＬ　　ｅ／　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｅ
ｒｏｂｉｏＬｏｇν）１１巻、４号、（１９６３年）３
３５〜３３８真の方法に従い、〔〕内に示す符号ｒ−Ｃ
ＨＭコード（６ｏｄａ　）　）　Ｕ：ｒンテイナー・コ
ーポレーション・オプ・アメリカのカラー・ハーモニー
・マニュアル（Ｃｏｎｔａｉｎｅｔ　Ｃｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ　ｏｆ　ＡｒｎａｒｉｃａのＣｏ１ｏｒ　Ｈａｒ
ｔｎｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　）　ｆ用イア’ｔ。

（り　　シェークロース・硝酸塩寒天培地：黄灰（Ｊｄ
ｇ）〜明るい灰黄茶Ｃａｒ；ｔａ、ｌの中等度生育上に
、黄灰（！ｄａ）〜灰量ピンク（ｓｄａ）の気菌糸を増
生し、溶解性色素はみとめられない。

（１）　　ダルコース［相］アスノ臂うギン寒天場ｍｔ
　：うす黄Ｃｍｄｋ〕〜明るいオリーブ基（ｌｙｅ）の
良好な生育上に、＠るい灰（ｄ）の気菌糸を着生する。

尚この気菌糸はおくれで灰量♂ンク〔１４ａ〕となる。

＃Ｉ解性色素はみとめられない。

（揚　グリセリン・アスノ々ライン寒天場地（ＩＳＰ培
地−５）： 種子かな黄ピンク〔４１＃〕〜明るい茶〔４（−〕の良
好な生育上に、明るい灰（ｄ）〜明るい屓−茶（１／＃
）の気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめられない。

（尋　スターチ無機塩寒天培地（１＆Ｆ場地−４）：う
す黄（１ｍり〜灰色（！Ｉ／１１の曳好な生育上に明る
い灰（ｊ）の気菌糸を着生する。Ｓ解性色素は生成しな
い。

（２）チーシン晦天壜地ｉＩＭＰ場地−テ）；灰量（３
ｓａ〕〜明るい茶［４４ａ〕の生育上に、明るい灰（ｄ
）〜明るい藁灰（３／＃）の気菌糸を着生する。培地は
極く僅かに茶色ｔ−帯びる。

（６）栄養寒天培地： うす黄Ｃｍｄｂ”Ｊｔたは明るい黄（！／＆）〜明るい
オリーブ基〔＊ｇａ〕の良好な生育上に。

明るい灰赤茶（８／＃）の気菌糸を着生する。溶解性色
素はみとめられない。

（））イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ＩｓＰ培
地−黛）： 穏ヤか表置ぜンク（４ｇｍ）〜明るい茶〔４シー〕の良
好な生育上に％灰量ピンク（ｓｄｇ）或いは十−おくれ
て明るい灰（ｄ）Ｃ）気菌糸を着生する。１１！解性色
素はみとめられない。

（８）オートミール寒天培地＜ｚｓｐｑ地−３）；灰量
（Ｓａｇ）〜明るいオレンジ黄〔Ｓａａ”Ｊ、或いは明
るい訳黄茶（Ｓｒｓ）の良好な生育上に。

明るい藁灰（８／＃）〜明るい灰赤茶（１／＃）の気−
系を着生し、曹集落の周辺の場地扛僅かに褐色を呈す。

（＠　リンｆ鹸石Ｘ＊天培地： 暗色〜黄灰（ＩＩ　ｄ　ｇ　］０中等縦の生育上に、明
る％Ａ灰〔ｄ〕〜明るい灰赤茶（１／ｓ）Ｄ気菌糸を着
生し、＊解性色素はみとめられない、生育曹集落の周辺
にカルシウム塩の溶解帯が見られる。

−ダルコース・ペプトン・ｒツチンｊｌｌ地（１・Ｃ培
養） うす黄（ｓｄｋ’３〜茶色の嵐好な生育上に白色［４］
〜灰黄ｔｙり（Ｉｓｉ）の気菌糸を着生する。鴫−長期
（約３遍間以上）にわたると褐色の溶解性色素を生成し
良。

３）　生塩的性質 （１）　　生育１１度範囲 イーストエキス・麦茅工中ス嘩大場地１ｌｓＰ培地−ｓ
）を用いて１＠”、！０”、！５°、３０”、８４＠％
　３７°、４０”、４Ｂ＠、Ｓ。

Ｃの咎温度で実験の結果、３７ででは殆んど発育出来な
い。４０Ｃ以上では全く発育しない、その他の各温度で
は生育がみとめられた。最適生育温度範囲はｇｏ−ｓｏ
Ｃと思われる。

（２）ｒラチンの液化：液化する。

（３）スターチの加水分解二分解する。

（４）　　脱脂牛乳の＃固、ペグトン化：凝固はしない
が、ぺ／トン化する。

（５）　　メラニン様色票の生成： ペプトン・イースト・鉄寒天培地（ＩＳＰ＠地−６）及
びトリｌトン・イーストエキス・プロス培地（ＩＳＦ場
地−１１）ではメラニン様色素の生成は随められなかつ
良、チ關シン寒天培地で極〈僅かに茶色１ｋｊＩＮする
も、メラエンの生成は痕跡ａｔ度である。

４）　各種炭素ＩＩＯ同化性（ｆリドハム・がトｖｆ’
１ｇ天培地使用） （１）　　Ｌ−アラビノース　　　　　＋偉）　Ｄ−キ
シロース　　　　　　＋ （３）Ｄ−グルコース　　　　　　＋ ＋４　　Ｄ−フラクトース　　　　　＋向　シェークロ
ース　　　　　　疑わしい（６）イノシトール　　　　
　　　− （））　Ｌ−ラムノース　　　　　　＋（８）　　ラフ
ィノース　　　　　　　−ｔｆ１４Ｄ−マンニット　　
　　　　＋十唸同化する。　　−は同化しない。

以上の１学的性質よりＯＡ−＠１！＠菌株はＳｔｒａｐ
ｔａｍｌｌａｍａ　ｇ　ｙＣ属する菌株であって、気菌
糸の形状は竜タシｗ　ｙｐＦ　（Ｓａａｇｈ鴨１ｂｅｔ
４ｆｌａ−ｍ４．に４１ｅｍ　）と考えられ、胞子赤面
平滑であった。

気菌糸の色調は大多数の培地、ｊＩＩちオートオール寒
天、グリセリン・ア／普うギン寒天、スターチ・無機塩
寒天等の培地では明るい灰色（ｄ）で、灰色系（Ｇｒａ
ｙ　ａｏｒｔｍｓ　）の鉋株である。しかしシュークロ
ーズ・硝酸塩寒天、イーストエキス・麦芽エキス寒天、
及びグルコース・アスＡラギン寒天層地では培養時期に
依っては灰量ピンク［５ｄＯ］の赤色系（Ｒｅｄ　５ｅ
ｒｉｅｓ　）を呈する事がある。

また、基中繭糸の色は培養初期はいづれの培地でもうす
黄〜灰量で、培養を続けると黄茶〜灰★茶戚いは茶色の
色′Ｉ４を示す様になる。メラニン色素はペグトン・イ
ーストエキス・鉄寒天咽地中及びトリプトン・イースト
エキス・！ロス中にみとめられず、またその他の水醪性
色素も多くの培地で生成しなかった。しかしプロジン寒
天培地、グルコース・ぺｌトン・ｒラチン層地及びオー
［−フル寒天培地中に僅かに茶色の色Ｘをみとめ友。

本発明者等は本ｌ１ｌＩをストレプトばセス・ａｐ。

ＯＡ−６１Ｍ　９　（Ｓｔｒ＃ｐｔｏｍ１１ａｇａ　ａ
ｐ、　０Ａ−６１１１１）として、工業技術院微生物工
業技術研究所に特許手続上の微生物の沓託に関するブタ
ペ、スト条約による国際寄託として微工研条寄第１１号
（ＦＥＢ、Ｍ　ＢＰ−１１）として寄託している。

壜た、本発明の新Ｍ、＠生物はまた。ストレグトイセス
属に属する既知のカルバペネム系抗生物質生腫劇に聖典
処理を加えることによって創製することも可能である。

この創製に使用しうるカルバペネム系抗生物質生＊ＶＳ
は、ストレグトイセス楕に属する弐式中、Ｒ３は水素原
子又はアセチル基を衆わし。

Ｒ１は１ｍ１ｉｒｉの意味を有する、 で示されるカルバペネム系抗生物質を主生座物又は副生
産物として生産する能力？有する任慧の一生物であるこ
とができ、具体的には次のものを例示することができる
：ストレグトイセス・フル〆ピリデスＡ９３３（ＦＥＲ
Ｍ　　Ｂｐ−１ｏ）、ストレグトイセス・カトレヤ（Ｎ
ＲＲＬ８０５７またはＦＥＲＭ　　Ｐ−３３０９５）、
ストレプトずセス・フルービリデス（，４７’ＣＧ１５
８６３看しくに２１９５４）、ストレプトずセス・アラ
ブグリゼウス（ＮＲＲＬ　８１３９若しくは８１４０）
、ストレグトイセス・オリ／？セウス（ＡＴＣＣ２１３
７９、〜２１３８２．３１１２ｇ若しくは３１３６り、
ストレグトｉセスーｒダネンシス（ＡＴＣＣ４８８０）
、　ストレプトイセスｅ−フル？７ｆｔｋス（ＡＴＣＣ
１１００ｉ１　）、　ストレｆトずセス・フラゲビレン
ス（ＡＴ・ＣＣ３３２０）、ストレグトイセス・フラア
プス（ＡＴＣＣ３３６９）。

ストレゾトンセスやシオヤエンシス（ＡＴＣＣ１８１８
１）、ストレグトイセス・サブスピーシーズΦオーラテ
イリス（Ａｒｃ＜；ａｔｍＢ）又はストレグトイセスａ
ｔ、ＳＦ−１０５０（ＦＥＲＭＰ−４３！ｉｌ）など。

これらの微生−はそれ自体公知の変異処理に付すことに
より脱ノ譬ントテノイル化酵素活性が欠失した突然変異
面に変えることができる。

すなわち、上記の如きカルツクベネム系抗生物質生ｉｉ
ｍを紫外線課射、放射線照射、化学変異誘起剤処理等の
通常の変異誘導方法によって処理することにより、脱・
譬ントテノイル酵素活性が欠失した一株を取得すること
ができる。ここでは、ストレグトイセス・フルがビリデ
ィス１９３ａ（ＦＥＲＭ　　ＨＰ−１・）を−用いてＮ
−メチル−Ｎ’−二トローＮ−ニトロングアニＶン（、
ｙ　Ｔ　Ｇ　）処理によって変異を行つ喪場合について
以下さらに詳細に説明するが、他の菌についても同様に
して変異処理を行なうことができる。

（１１変異処理 イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ＩＳＰ培地−２
）上で２８Ｃ１２週間培養したストレグトイセス・フル
ｌビリディスＡ９３３の斜面堵誉１本の表面からかきと
った胞子全ゾオクチルスルホサクシネー）０．００４％
を含むｐ　Ｈａ　ｓのα１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１
０−に懸濁し、ぼりポアフィルター（孔極ｌＯミクロン
、ＬＣＷＰ）テＦｉＭＬ、ｐ液ニＮＴ　Ｇ　ｆ＠終譲ｇ
＋ｏｏμｖ／ｄになるように添加し２８Ｃで１．５時間
保つ。このとき９０％の殺胞子効果があった。ＮＴＧ処
理胞子液′ｔ−λ５ｏｏｘｐで２０分間遠心分岨し、胞
子をα８５％生理木、塩水に懸濁し、適当に希釈して、
そ、♀胞子＠濁希釈液をＩＳＰ層地−２上ｅこ頭布し、
２８Ｃで７日間培養を行いコロニーｔＶ成させた。

（２）変異暉株の臀離法 上記の如＜ｚｓｐ＠地−２上に形成したコロニーを拾い
、ＩＳＰ培地−２斜面培地上に移し２８Ｃで意週間培養
を行った。これらの各菌株の斜面培地から１白金耳ｔｌ
−８Ｅ−４種母培地〔牛肉エキスα３％、　／ｆクトト
リグト２０，５％、グルコース０．１％、可溶性でんぷ
ん２４％、酵母子キス０．５％、炭酸カルシウムα４東
大豆粉（味のＩＡ（株）製ｊ−）特等）α５％、ｐｆｆ
７．ｏ）ｓ−を含む試験管培地へ接種し、意８Ｃで２日
間振とう培養し良、つぎにこの培養液α％ｄｌ−Ｇ、Ｍ
、培地（大豆粉４Ｉ１１％、グリセリンＩｏ％、Ｋ、Ｈ
Ｐ　Ｏ，α２％、ＭＩＳＯ，−マＨ，０（１１％、Ｃａ
Ｃ０，０，８％、ビタ＜　ンＢｌｔｓ　ｒ／ＭＪ、　ｐ
Ｈｒ、ｏ　）　ｓ　ｏ−５含む２５Ｇ−三角フラスコに
接種し、雪８Ｃでロータリーシェーカー上４日間培養し
た。この培養液を用いて前記に示し次検索方法により脱
／々／トチノイル化ｗ素欠失菌株ストレグトイセス・フ
ルｌビリディスＮ１５０１株を見出した。これにより、
当業者は本発明の目的に適合した微生物を式（厘）で示
されるカル・ぐペネム系抗生物の生産能を有する菌から
それ自体公知の変異処理により容易に検索することがで
きる。

上記の如くして検索された微生物の一例であるストレプ
トミセス・フル？ビリディスＮ１５０１株の菌学的性質
は次の通りである。

ｌ）形態 顕微鏡下でよく分枝し九基中鉋糸より％直状〜曲状（Ｓ
ｔｒａｉｇｈｔ　−ｆｌａｚｕｏｕｓ　）の気菌糸を伸
長し１輪生板はみとめられない。成熟した胞子−は１０
〜５０個の楕円〜円筒形をした胞子から成り、胞子のう
け認められない。胞子の大きさは（０，８〜ｉ、ｏ）ｘ
（ｔｏ〜２．０）イクロン位で、胞ｆのｓｕｉは平滑で
ある。鞭毛胞子はみとめられない。

雪）　各稽培地における生育状態 培養は特記しないかぎり８ｓ０〜ｓＯＣで行つ九、ｔｉ
色調の記載は主としてエッチ・ディ・トレスナートイー
・ゾエー・／童カス（ＨｏＤ。

Ｔｒａｍｗａｙ　ａｎｄ　Ｅ、　Ｊ、　Ｂａｇｋｓｂａ
　）著、Ｎヤ−ｆｋ・オツ・アｌツイｒ−建りロ♂オ０
シイ−（／＊ｓｒｓｇＪ　ｅ／　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉ
ａｒｏｂｉｏｌａｇｙ　）　１１巻、４号、（１１１＠
１年）ｓａトｌａｓ頁の方法に健い、〔〕内に示す符号
〔ＣＨＭコード（ｍａｄｅ　）　］　Ｆｉコンテイナー
・コーーレーシ曹ン・オツ拳アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアｐｈ　（Ｃｅ協ｇ＠４饅ａｒ　Ｃａｒｐ
ｏｒａｔ４ｏ悌　ｏｆ　ｋｎａｒｉａａｔＤ　Ｃｏ１ｏ
ｒ　Ｈｍｒｓａｓｙ　Ｍｕｓｓｅｌ　）を用いた。

（１）　　シエータ關−ス・硝酸塩寒天培地：黄灰（ｌ
ｄ＊）〜灰色［１／＃）の中等度生育上に、　＠ｂＶ％
茶Ｗｌｃ　８１ｍ　）〜藁灰（１１＆）の気菌糸を着生
し、溶解性色素はみとめられない。

（２）　　ダルコース争アスノ々ラギン寒天培地：明る
い黄（ＩＭ／ト４／ｉ）の良好な生育上にｌるい藁灰（
１／＃）〜暗い灰〔３１ム〕の気菌糸を着生し、溶解性
色素はみとめられない。

（３）　　ダリーｋｌン・アスΔラギン寒天培地（ＩＳ
Ｐ培地−襲）： 灰量（ｓａｇ）、一部明るい藁灰（：３／１３の良好な
生育上に、明るい灰（ｄ）〜明るい灰赤茶（Ｓ／＃）の
気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめられ彦い。

（４）スターチ無機塩寒天培地（ＩＳＰ培地−４）：う
す黄（１４４）〜うす黄緑［２４残ｄａ”Ｊの良好な生
育上に暗い灰〔３イλ〕の気−糸を着生する。溶解性色
素は生成しない。

（５）チ胃シン庫天培地（ｚｓｊ＠地−７）：明るい黄
〔ｌ／４３．後に明るいオリーブ基（１ｇｇ）０良好Ｘ
＆生育上に％明るい灰（ｄ）だが中辛縁がかつえ気菌糸
を着生する。培地は極〈僅かに茶色を帯びる。

（２）栄養寒天培地： 明るい藁灰（１／＃）の中等度生育上に、明るい灰（４
１０気曹糸を着生する。＃Ｉ解色素はみとめられない。

（η　イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（Ｉｓ？培
地−３）： 白〔−〕の良好な生育上に、明るい藁灰（３１／−〕〜
茶灰藁灰（＆）の気菌糸を着生する。Ｓ解性色素はみと
められない。

（２）オート建−ル嘩天墳地（１８Ｆ培地−３）二暗い
ｊｉＦ［［Ａ］の良好な生育上に、明るい藁灰（１７＃
）〜暗い灰（ｓ（Ａ）の気菌糸を着生する。溶解性色素
は認められない。

（・）　リン：／ｓ石Ｆ７Ｒｇｓ天啼地：明るいオリー
ブ基〔２ｔＩ−〕の中中度の生育上に、明るい灰茶（１
／＃）の気菌糸を着生し、＃１解性色素はみとめられな
い。

鱒　へデトンーイーストエキス・鉄寒天培地（ＩＭＰ培
地−６）： うす黄（１ｄ４〕０良好な生育上にあわい白〔替〕〜明
るい灰〔ｄ〕の気菌糸を着生する。

３）　生理的性質 （１）生育温度範囲 イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ｒｓｐ１＠地−
１）ｔ−用いて１０”、！Ｏ’、！５°。

３０＠、１４°、３７°、４０”、４５°％　５０Ｃの
各温度で実験の結果、３１？Ｃでは殆んど発育出来ない
。４０Ｃ以上では全く発育しない、その他の各温度では
生育がみとめられた。破過生育温度範囲は！Ｏ〜３・Ｃ
と思われる。

（２）ｒラチンの液化：液化する。

（３）　　スターチの加水分解二分解する。

（４）　　脱脂牛乳の凝固、ベグトン化二凝固ヰしない
が、ペプトン化する。

（ｆｉ）　　′ｆＩ４＊塩Ｏ１１元：１元する＊（６）
　　メラニン様色素の生成： ペグトン・イースト・鉄痺天培地（ＩＳＦ培地−６）及
びチロシン庫大培地ではメラニン様色素の生ＩＩＩｔは
認められなかった。トリｌトン・イーストエキス・プロ
ス培地（ＩＳＦ培地−１１）で極〈僅かに茶色Ｏ色ＩＩ
Ａ倉生産した。

４）　各種炭素源の同化性（グリトノ・ム・がトリツ寒
天培地用） く凰）　Ｌ−アラＶノース　　　　　＋（２）Ｄ−キシ
ロース　　　　　＋ （３）Ｄ−ダルコース　　　　　　＋ （褐　Ｄ−フラクトース　　　　＋ （５）　　シュークロース　　　　　士（６）　　イノ
シトール　　　　　　±（７）　Ｌ−ラムノース　　　
　　＋ （８）　　ラフィノース　　　　　　−（９）Ｄ−マン
ニトール　　　　＋ ＋は同化する。　　−Ｆｉ同化しない。

上記の菌学的性質をもつストレプトミセス・フルがビリ
ディス＃１５０１はその親菌株である４９３３株と生産
する抗生物質は異にするが、その菌学的性質は則してあ
った。

該菌株は、通商産業省工業技術院倣生物工業技術研究所
に微工研条寄第１０３号（ＦＥＲＭＢＰ−１０Ｊｌ　）
として国際畜託されている。

以上に述べた脱ノ々ントテノイル化酵素活性が欠失した
新規微生物はさらに変異処理１＆ニア１ｉｌえることに
よｆ）Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−アルギニン又ＦｉＬ−アデ
ニン要求性吟の栄＊＊求性突然変異凶にｋえることがで
きる。かかる栄養費求性突然変異−の創製扛それ自体公
知の変異処理および手段並びに培地遺択法を用いること
により行なうことができるが、ストレグト電セスーフル
がビリディスＮ１！！０１ｔ−代嵌ガとして栄養要求性
変異菌株の創製法をさらに具体的に説明すれば次のとお
ｐでふる。

すなわち、ストレグト建セス・フルービリディスＮ１５
０１株を紫外Ｉｍ＠射、放射線照射、化学変異銹起剤処
理等の通常の変異鋳導方法によって処理し、微生物遺伝
学実験で通常に用いられるレプリカ法によって栄養その
他微量ｌｌ！素要求変異株を選択取得する。

次に、このλトレ！ト建セス・フルがビリデイスＮ１！
！０１株を用いて紫外線処理によってＬ−ヒスチジン要
求株を鱒導した岡を示す。

イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ＩＳＰ層地培地
）上で２８Ｃ，！週間培養したストレプトず竜スａフル
ーＣリゾイスＮ１！１０１株の斜ｌ培養１本の表面から
かき堆った胞子をαＯＯＳ％Ｖオクチルスルホサクシネ
ート含有生理食塩水１０−に懸濁しシャーレに移す、こ
のシャーレをゆるやかに振とうしつつ表面より３０傷の
距隙において紫外線滅菌ランプ（１（１’）ｆ：用いて
７０秒間照射し友、このと＠９Ｌ９％の殺胞子作用があ
った。照射の終った胞子懸濁液を適宜希釈してｒｓｐｑ
地−２に塗布し４日間培養した。１枚のシャーレ上ｓｏ
ｏ乃至１０Ｇコロニー生じたシャーレｆニーｖスターグ
レートとしレグリカ法で最少培地（Ｌ−アス／臂うギン
α０５％、Ｋ、ＨＰＯ，α０５％、　Ｍｇ５Ｏ６・ＹＨ
，Ｏａ　Ｏ１％、ｆ　ｊｌｌｚ　：２−スｌ、　９％＜
　別ｍ菌＞、ディフコ・リトアが−１，５％、および微
量金属要素溶液〔蒸舗水１４につきＺ＊Ｃｌ。

４０ｑ、Ｆｏｃｉｍ−＠Ｈ，Ｏ！　ＯＯｓｙ、Ｃ５ｔＣ
１゜１０呻１Ｍ％Ｃ１，・４Ｈ，□ｔｏ■、Ｎα、八偽
弓ｏＨ，０１６ダ、（Ｎべ）、Ｎｏ、、・４Ｍ、０１０
ダを溶かした−の）′ｋｌｊにつ＠２ＩＩｊ加える。ｐ
ｇｒ、ｏ〕と完全培地（ＩＳＰ培地−２）にレプリカし
７日間培養して完全培地のみで生育するコロニーを選択
し。

ＩｇｌＰ＠地−意の斜面培地上に拾った。これらの栄１
１１要求株についてホリデイの方法（Ｎ＠ｔ％ｒ−ム４
５４０，９１１８７（１９５ｇ））によって要求物質を
決定したところＬ−ヒスチジン要求株としてストレグト
イセス−フルがビリディスＮ１５０！−雇２４が得られ
た。この菌株は親薗株と同様に脱Δントテノイル酵素欠
失株であり、　１（１）で示される抗生物質Ｏｔ４−ｓ
ｔｇｓ群の生産能を有してお９．栄養要求性は異にする
が、その菌学的性質は観劇株であるストレグトイセス・
フルがビリディスＮ１５０１と同一であった。

上記の如く′創製されたストレグトイセス・フルービリ
ディスＮ１５Ｇ’ｌ−ムｇ４は１通商産業省工業技術院
微生物工業技術研究所に倣工研条修第１０５号（ＦＥＲ
Ｍ　　Ｂｐ−１ｏｓ）とり、テ国際寄託されている。

さらに１本発明によれば、ストレグトイセス属に属する
カルバペネム系抗生物質生産劇であって、前記式０）で
示される抗生物質０Ａ−６１２９１１！−の脱・臂ント
テノイル化酵素活性及びアセチル化酵素活性を有する微
生物のＬ−アルギニン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−システ
ィン、Ｌ−アデニン又はピタインＢ＊’ｉｉ！求性変１
４菌が提供される。

かかる栄養要求性変異菌の創製に使用しり６親画株は、
ストレゾ）ｆセス属にＭ−ｊる式式中、Ｒ１は前記の意
味を有する、 で示される化合物を主生産物又は副生産物として生産す
る能力を有する任意の微生物であることができ、その具
体列としては次のもの全例示することができる：ストレ
グトイセス・フルがビリデス１９３Ｂ（ＦＥＲＮ　　ｈ
ｐ−１ｏ）、ストレグトｉ＊スーカトｖヤ（ＮＲＲＬ８
０ｓ　７　ｏｒ　ＦＥＲＮＦ−３８０＠！ｉ）、ストレ
グトイセス・フルービリｒス（ＡＴＣＣ１ｒｓ８６Ｂ若
しくはｉ！　１９５４）、ストレグト建セスーフラＩグ
リゼウス（ＮＲＲＬｇｉｍｌ若しくは８１４０）、ｘト
レグトｉセス自オリバセウス（ＡＴＣＣ２１Ｂ’１９、
〜２１３＠！、３１１１８着しく＃ｉ、３．１３６５）
、ストレグトｉ−＋ｘスーｒメネｙシス（ＡＴＣＣ４＠
８Ｑ）、ストレグトイセス・アルｒンテオルス（ＡＴＣ
Ｃ１１００嘗）、ストレグトイセス・フラがビレンス（
ＡＴＣＣ４８ＱＯ）、ストレフト２セスーフラアツス（
Ａ７’ＣＣ３３１１）、ストレプトずセス・シオヤエン
シス（ＡＴＣＣ４＠８Ｑ）、ストレグトイセス・サブス
ピーシーズ・オーラテイリス（Ａｒｃｃ’ｇｉａｓｓ）
、又はストレグトイセスｍｐ、　ＳＦ−２０８０（ＦＥ
ＢＮ　　Ｐ−４３５８）など。

これらの微生物を栄養要求性変異菌に変える方法はそれ
自体公知のものであり、ここではストレグトイセス・フ
ルがビリディスＡ９３３を代六例としてそのＬ−アルギ
ニン要求性菌株に変員する方法についてさらに詳しく説
明するが、その他の菌株についても同様に処理すること
により各栄養性変異菌に賛えることができる。すなわち
、ストレフ’）ζセス・フルがビリディスＡ　９３３　
（ＦＥＲＭＢＰ−ｌｏ　）株ｔ−紫外線照射、放射線照
射、化学変異誘起剤処理等の通常の変異誘尋方法によっ
て処理し微生物遺伝学実験で通常に用いられるレプリカ
法によって栄養その他微量要素費求ｌｔ異株を選択取得
する０次にストレグＩＩセス・フルがビリディスＡ＠８
１（ＦＥＲＮ　　ＢＰ−ｔｏ）株を用いて以下に述べる
如きＮＴＧ処理によってＬ−アルギニン要求性菌株を誘
導する。

イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ｒｓｐ培地−意
）上で雪８ｒ、！週関ｔ＠養したストレグトイセス争フ
ル？ビリディスＡ＊Ｂ’ａ（ＦＥＲＮｎｐ−１ｏ　）株
の斜面培養１本の表面からかきとった胞子をαｏｏｓＸ
ジオクチルスルホサクシネートヲ含むｐ　Ｈａ　ｓのａ
ｌＡｆリン酸ナトジナトリウム緩衝液１０濁し、ｆリポ
アフィルター（孔径１０　ｉ　ｌ　ｏ　ｙ、　ＬＣＷＰ
　）　テ濾過り、ＰＷｉニＮＴＧを最終濃度４００μｆ
／ＩＩｊになるように添加し。

！８ＣでＬ１時間保った。このとき９０％の殺胞子効果
があった。ＮＴＧ処理胞子液ｔ＆５００ｚｇで意Ｏ分関
連心分離し、沈でんした胞子ｔα８５％生理食塩水に懸
濁し適宜希釈して、ＩＳＰ培地−３上に塗布し２８Ｃで
４日間培養を行いコロニーｔ−形成させた。１枚のシャ
ーレ上１００乃主２００コロニー生シたシャーレをマス
タープレートとし最少培地（前述と同じ）と完全培地（
ＩＳＰ培地−２）にレグリカし７日間培養して完全＠地
のみで生育するコロニーを選択しｒｓｐ＠地−２の斜面
培地上に拾った。これらの栄＃蒙求性株についてホリデ
イの方法によって要求資質を決矩し。

Ｌ−アルギニン要求性株としてストレプトミセス・フル
ービリディス−１９３３−Ａｚ−１４ｔｍた。この菌株
は脱バントテノイル酵素活性及びアセチル化酵素活性を
保有し１式（、ｉ　−ｂ　）で示されるカルバペネム系
抗生物質の生産能を有するが。

栄養要求性會異ぺする点で親−株と走通を示す。

しかし、その他の菌学的性質は親−株と同一性を有する
ので前述のストレプトミセス・フルｌビリデイスＮ１Ｂ
０１株のそれを参照されたい。これにより、歯業考は上
記の栄養要求性をもつ微生物を１式（ｉ−ｉ）で示され
るカルバペネム系抗生物質物の生産Ｗｔ有する菌からそ
れ自体公知の変異手段により容易に創製することができ
る。

上記のＬ−アルギニン要求性のストレグ）ｆセス・フル
がビリディスＡ１１３−．４ｇ−１４は、通−産業省工
業技術院徽生物工業技術研究所に微工研県富＠１６２号
（ＦＥＲＮ　　１３ｐ−１ａ２）として国際畜託されて
いる。

本発明のさらに別の態様によれば、前述した（α）スト
レグ）ｆセス槁に・属するカルバペネム系抗生物質生７
１ｉ１１であって且つ前記式（りで示される化合物の脱
）母／トチノイル化酵素活性が欠失したＬ−ヒスチジ／
、Ｌ−アルギニ／又はＬ−アデニン要求性微生物と、（
ｈ）ストレグ［セス楓に属するカルバペネム系抗生物質
生重曹であって、前記式０）で示される化合物の脱／譬
ントテノイル化酵素活性及びアセチル化酵素活性を有し
且つＬ−アルギニン、ＩＬ−ダルタずン酸、Ｌ−システ
ィン、Ｌ−アデニン又はビタミンＢ、要求性の微生物と
の細ｈ８１融合によって創製される式 式中、Ｒ１は前記の意味を有する。

で示される化合物の生産能を有する新規微生物が提供さ
れる。

上記（ロ））の微生物と（６）の微生物とのａ胞融合は
それ自体公知の方法によって行なうことができ、内えば
、岡西らの方法［Ｊ、　Ｇａｓ、　Ｍｉｃｒｏｈｉｏｌ
　、　。

ｇｏ、５ｓｓ−４ｏｏ（ｔｏ７４）］によってそれぞれ
の微生物をグロトプラストとし１次いでポリエチレング
ライコール存在下にＲ，Ｈ，Ｈａｌｔｓの方法［／、　
Ｇａｓ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　１０７　、９３−１
０１１９γ虐）〕によって両微生物の融合を行い内生培
地上で生育させた後１組換え体としての非費求性繭株を
選択することにより行なうことができる。

以下に前述した如くして創製されたストレプトｉ’ｋ）
１．−フルｄｄすｆ（、Ｃ４１１ｍ−４ｇ−１４株〔（
＆）の微生物のＩＩＩ）とストレプトｉセス・フルがＶ
リゾイスＮｔｓｏｔ−雇ｍ４株〔（ａ）の微生物の１種
〕ｔ−例にとって細胞融合による新規微生物の調製法を
さらに詳しく説明する。

（１）　　微生−の培養 ストレグ）ｆセス・フルがビリディスス９３３−Ａｓ−
１４株のＩＳＰ層地培地斜ｔｈｌ＠地培養より一白金耳
の胞子ｔとｆ）Ｎ、Ｚ培地（グリセリン意％、Ｎ、Ｚ−
アイン・タイ７”ＡＬＯ％、酵母エキｘａｔ％、　Ｍｇ
５Ｏ，−’ＩＨ，ＯＡ　１１　！Ｉ％、に、ＨＰＯ。

ａｏｇ％、ｊｌＨ７，＠）１ｉｄｌ含むＩＩ（）ｉｄ三
角フラスコに接種する。これを！８Ｃ１４０時ｌ司培養
しｔ＠養液１ＩＩｊをＳ培地〔グルコース１．〇九（別
殺菌）、ペグトンα４％、酵母エキス０．４Ｘ。

Ｍｇ５Ｏ，−’ＩＨ，Ｏａ　Ｏ５％、　ＫＨ，ＰＯ，０
，２％。

Ｋ、ＨＰＯ，１４％、ダリシンα５％、ｐｌｉ７．ｏ”
Ｊ２５１Ｉｊを含む２ＳＯｄ三角フラスコに接釉し２０
時間振とり培養する。この菌体を遠心分離で果め次項で
示すグロトグラスト調製に供す。

もう一方の菌株としてストレグトｆセス・フルがビリデ
ィスＮ１５０１−ム２４を上記と同じ方法で培養し菌体
を集め次項で示すグロトグラスト調製に供する。

（２）グロトプラストの調製 上記の如く得られた菌体ケα３Ｍのシュークロース溶液
で１回洗浄し遠心分離により菌体を峯占）る。この菌体
を細胞壁溶解酵素〔リゾチーム（ノグマ社製）　Ｉ　Ｑ
／　ｄ、　Ｌｙｔｉａ−％ｇｙｍａ　Ａ２　（ｆＱｖＬ
１発＃（株）製）（Ｌｌダ／−〕を含むＰ培地〔シュー
タｏ−ｘｌａ１％、Ｋ、８０４Ｑ、　０２５％、　Ｍ（
ＩＣＥ。

６Ｈ，Ｏ（Ｌ３％、ＣａＣ１，−ｇ　Ｈ，Ｏａ　３７％
（別殺繭）、　ＫＨ，ＰＯ，ａｏ　０８％（別殺菌）。

αｏ！ｓＭ　ＴＥＳ緩衝液、微量金属要素溶液（培地１
１につ１！！−の割合）、ｊ＃７１）に懸濁し３！Ｕ、
１時間反応させる。これを綿をつめたフィルターを通し
、Ｆ液を遠心分離（１５００×ｇ、ｌＯ分間）しグロト
プラストを沈でん区分に集める。沈でん＊１氷冷しｆｃ
Ｐｔ＠地に懸濁し遠心分離する。この洗浄操作をさらに
１回行つ７’Ｃ後、ｌＯ！クロンイリ４アフィルターで
ｐ遇し、Ｆ液を遠心分離しグロトグラストを集める。

（３）融合および再生の方法 上記＋２４で得られた２薗株のグロトプラスｌ濁液！Ｗ
Ｊ′に混合し、杏び遠心分離し、上澄液を捨て。

Ｐ＠地ｉ（Ｌｇｄ添加する。つづいて４０％ポリエチレ
ンダライコール６０００の溶液ｔ（２ａｔ加え２５Ｃに
３分間保った後、Ｐ培地で適宜布釈し。

再生培地であるＡ培地（シュークロース１Ｏ４３％、グ
ルコースα５％、マルトエキストラクト０，８％、酵母
エキスα３％、ＭＱＣｊ、・６Ｍ、０　　α４９６、Ｃ
ａＣｌｔ−２Ｈ，Ｏα７％、トリスヒドロキシアミンメ
タンα３％、寒天１．５％、ｐＨ７，０）上に塗布し２
６Ｃ，７日間＠養する。

かくして得られ次Ａ培地上の胞子をかきとり、常法によ
り懸濁液とし、適宜希釈して最少培地ｙｃ塗布し７日間
培養した。生じ次コロニーはＬ−アルギニン及びＬ−ヒ
スチジン非要求性組換え体となっており、自然突然変異
による傷帰変異株でないことは、同時に行った元株単独
の内生１株中Ｖごは非要求性株は検出されない（１０１
以トの出現率）のに対し融合株ではＰ＋生株中１７９０
が斗着求次となったことから明らかである。

（４）融合株の生産物 かくの如く得られ次融合株をＢＥ−４＠地に接種し２８
Ｃ，２日間娠とう培養し、得られた培養液０．２ｗ１ｔ
−Ｇ、Ｍ、ｔ＠地１（１＋７；ｉ含む２５０−三角フラ
スコに接種し、２８Ｃ，４日間培養する。

このｊ＠養液の遠心分離上泄液５μｌをワットマンＦ紙
ムｌにスポットし、ペロナール緩術液（ｐＨ＆５．イオ
ン強度０．０１７　）中で４ｇＶ／儂にて３０分１１５
泳動を行い、Ｆ紙を検定菌としてスタフィロコッカス・
アウレウスＦＤ１２０９Ｐ’を含む寒天培地上に１５分
間貼りつけｉｖｋ、　ｓ　ｏｒ、−夜鳴養する。その結
果、＠極側へ少くともα５鱈通常３〜３０関の範囲で移
動する抗菌活性物質を生産する融合株をストレプトミセ
ス・フルがビリディス７１２６株として選択する。この
融合株が如伺なる抗菌活性物質を生産するかを確認する
ため、３０１シャーファーメンタ−に１５１のＧ。

Ｍ、＠地を入れ、これに別のツヤ−ファーメンタ−でＳ
Ｅ−４ｔ＠地にて４０時間通気攪拌Ｔ＋４１豊した上記
選択した融合株の種母培養液を３００４ＨＳ７ＪＯし、
７２時間通気攪拌培養を行った。培養液ｒフィルタープ
レスによって濾過しｐ液１４１ｆイオン交換樹脂ダイヤ
イオンＰＡ３Ｑｆ１つめたカラム（径１０ｍＸ高６０１
）に通し、通過液ｒ同じ大きさのカラムにつめたダイヤ
イオンＨＰ２ｏのカラムに吸着させる。このカラムに２
０％アセトンを流し、２００ｉＩｊづつのフラクション
を集めスタフィロコッカス・アウレウス２０９Ｐに活性
のある区分を集める。集めた活性画分をロータＩＪ−エ
バポレーターにより真空濃縮し２了セトンを盲人する。

得られた濃縮竺３００ＭＪをｐ　Ｈ７，２とし。

ＱＡＥ−セファデックスＡ−２５（ファルマシアＩ！り
φ１．５ｃｍＸ４０ｃｍのカラムに通じ、さらｆｃｚ％
５０１４で水洗した。通過液及び水洗液を台（５，ぞ−
の水溶液に食塩ＩＬｉｆを加え、ダイヤイオンＨＰ２０
１Ｇ（三菱化成製）−１，５ｃｓＸ４０ｍのカラムに吸
着させ、０％から１０％まで連続的にアセトン＃度が濃
くなる水溶液ｇｏｏ−にて鋳出し。

１フラクシＷ／・−ずつ分画した。そのフラクションＡ
１５から雇怠黛までを合し凍結乾燥して白色粉末１丁ダ
を得た。

かくして得られた物質について、特開昭５４−７３丁８
８号公報に記載の方法によって溶解性、ペー／４−クロ
マトグラフィー、？ｊ６圧Ｐ紙電気泳動。

紫外線吸収ス（クトル呈色反応、赤外線吸収スペクトル
、抗菌スペクトルをしらぺたところ、下記式 で示される抗生物質Ｎ５−ｓ（特開昭５５−４２５３６
号公報参照）であることが判明（７た。

この抗生物質Ｎ５−ｓは細胞融合に供し次ストレグトず
セス・フルがビリディス１９３Ｂ−ＡＸ−１４株及びス
トレグトイセス・フルボビリディス７１／１５０１−４
１！４株によっては生産されない抗生物質であり、前記
（４）で選択された融合株ｒよ上記２つの元の菌株の遺
伝形質を受継いだ新規な轍生物と認められる。

この融合株、すなわちストレグトイセス・フルがビリデ
ィス７１２６は通曲腫業省工業技術院似生物工業技術研
究所に微工研粂寄第１０４号（ＦＥＲＮ　　ＢＰ　　ｔ
０４）とり、てＷ際冨肚されている。

次に、本発明により提供されるｉｉ′ｒ規鍼生物でおる
ストレグトイセス・ａｐ、　ＯＡ−６−１２９及びスト
レグトイセス・フルボビリディスＮｌｓ　ｏ　ｓの有用
性を示すため、以下に実ｒＭ例を局ける。

〔実　施　ガ〕

（Ａ）　　５・〇−容エルレ／マイヤーフラスコに１０
０ａＩの下記組成の種母培地（５’−１）ｔ−入れ、常
法により、１！ＯＣで１５分間殺菌した。

一方、ストレグトイセス・ａｐ、□Ａ−６１１９（Ｓｔ
ｒａｐｇｏｔｎｙｅａａ　ａｐ、　ＯＡ　−ＩＩ　１２
１　）及び。

ストレグトイセス・フルがビリディス＃１５０１（Ｓｔ
ｒａｐｔｏｍｙａａａ　ｆｓｌｖｏｖｉｒｉｄｉａ　Ｎ
　Ｉ　Ｉ＄　０１　）菌株の胞子を個々に充分着生させ
、これらの−白金耳會各々上記槓母培地に接極し、２８
Ｃで４８時間ロータリーシェーカー（２００デｐｍ＋ｍ
輪７億）で振とう培養した。この種母＠養液の各！０Ｏ
１ｊｉ、それぞれ、下記組成の種母培地（ＳＥ−４）１
５１ｔ−入れた３０ｊ容ジヤー・ファーメンタ−にＩＩ
糧し、２８Ｃ，４００ｒ３＋ｓで攪拌及び？、　！ｉ　
ｊ　／ｌｐ＋４偽通気の条件下に９０時間通気攪拌＠Ｉ
ｆ！を行った。培養中、各ジャー・ファーメンタ−に消
泡剤としてシリコンＫＭ−’Ｉｓ〔信越化学（株）製〕
をそれぞれα０７％使川した用 （Ｂ）以下の具体的な方法については、ストレグ）　ｉ
セスミル、　　ＯＡ−６１ｆｔ　９　（以下ｒＯＡ−６
１２９菌株」というについて記載するが、ストレグトイ
セス・フルゲピリデイス＃１５０１（以下「Ｎｌ　５０
　ｔｍ株」という）については、同様に実施した結果の
み金示す。

上記（Ａ）で得られ７’ｃ２４時間培誉恢の極間用養液
２Ｊｔ−下記組成の生産培地（ＧＭ−１）１００Ｉｔ−
入れた２００ノ容醗酵タンクに接種し、２８Ｃ，２ＱＯ
ｒｐｍで攪拌及び５０１　／ｍｉｘ　４気の条件下に９
０時間通気攪拌＠寮を行つ次。＋Ｍｔ剤としてシリコン
ＫＭ−’ＩＳＣ前出〕ｔα０７九便用した゛。

経時的に＠養液ｒサンプリングし、逮七、号鹸ｌ几上澄
液についての抗菌力の測定を行った。

各時間における測定結果は、下衣に示す通りであった。

酵母エキストラクト　　　　　α５　　　〃ポテトスタ
ーチ　　　　　　　２０　　　〃Ｃａ　ＣＯ，α２　　
　＃ ｐＨ＜ｌｉｍ繭）７．０ 種母培地（ＢＥ−４）の組成： 牛肉エキストラクト　　　　（１３％＜Ｗ／Ｖ＞トリプ
トン（ディフコ　　　α５　　　〃社１１ｉ１） ダルコース　　　　　　　　　α１　　　＃解性でんぷ
ん　　　　　　　Ｌ４　　　＃酵母エキストラクト　　
　　α５　　　＃Ｃａ　ＣＯ，α４　　　＃ ず一ト　　　　　　　　　　　　α５　　　　＃ｐＨ（
殺−前）　　　　　　　７．５　　　　＃グリセリン　
　　　　　　＆０％＜Ｗ／Ｖ）魚粉　　　　　１０　　
＃ ｉ　−）　　　　　　　　　　　　　λＯ＃ＣａＣ０，
α３　＃ に、ＨＰＯ，α２１ Ｍｇ５Ｏ，−Ｙｌｉ、０　　　　（Ｌ　！　　ｈｐＮａ
ＯＨでｐＨｔ−７１！にｌｌ１ｍ 別ｔＫ、１ｊＨ翫２のαＯＩＭＩＪン酸緩衝液中に溶解
し、且つオートクレーブで１ｋｇ／ａｉ、！Ｓ分間殺菌
したビタｉンＢ１ｍをαｏｏｏｓ％（Ｗ／Ｖ）添加。

＜Ｃ＞　　上記（Ｂ）で得られた９０時間培養後の醗＃
液１００ｊＫｉ％（Ｗ／Ｖ）ｔｏ）ｆコ、＋−ライト雇
３４〔東興／ダーライト（株）製〕１に添加し、・母ス
ケット型遠心分雌機で菌体を分離し。

１６１の培養Ｖ液を得危。

これをダイヤイオンＨＰ２ｏ［三菱化成（株）製］充填
カラム（１０ＸｌＧ０２）に吸着させ。

蒸留水ｓｉで洗浄ｖｋ、３１％（Ｖ／Ｖ）７セト７水で
溶出した。

１区分を１４とし、その溶出液を分画した。・奇イオア
ツセイ活性画分８から一分１５まで合１ｔｔ８ｊの溶出
ａｔ集め、これをダイヤイオンＦＡ３０６Ｓ〔三菱化成
（株）製〕充填カラム（８Ｘ６０ＣＩＬ）に吸着させ、
蒸留水１ノで洗浄後、１〇九食−水で溶出し九、５ｏｏ
−ずつ溶出液を分画し、・９イオアツセイ活性画分７か
ら画分１６１での合１５ノの爵出液ｆ：集めた。この溶
出液には、抗生物質ＯＡ　−６１２９Ａ、　Ｂ＋及びＢ
、が含まれていた。

続いて、上記のＦＡ３０６８光積カラム（（３０％食塩
水で溶出し、５００−ずつ浴出液ｒ分幽しバイオアッセ
イ活性画分３から１６までの甘ｍｔ７、　ＯＩＯ抗生吻
實０Ａ−６１２９Ｃが百まれた溶出液を集めた。

抗生物質ＯＡ　−、６１２９Ａ−ＢＨｓ　Ｂｔ　ｋ’Ｅ
５゛む浴出液５．０１に３００２の食塩ｉ　７Ｊｔｌえ
、ダイヤイオンＨＰ２０充填カラム（６Ｘ１５０ｍ）Ｉ
Ｉこ吸省させ、蒸留水５００−で洗＃恢、＃１叢が０％
から４０％まで直線的に増加するアセトン水台Ｍｌ’　
４．０１で溶出した。

１区分を１７１１ｊとして、その溶出液を分画した。

バイオアッセイ活性画分２０から画分１３０までの約Ｌ
８ｊの溶出液には主に抗生物質ＯＡ−６ＩＱ９Ｂ、、Ｂ
、と、若干の抗生物質ＯＡ−６１２９Ａが含まれた。バ
イオアッセイ活性画分１３１から画分１７０１での約Ｔ
ＯＯ−の溶出液には抗生物質０Ａ−６１２９Ａが含まれ
た。

上記の２区分をそれぞれ凍結乾燥し、茶褐色の粉末を得
た。

〔抗生物質０Ａ−６１２９Ａの精製〕 抗生物質ＯＡ−６１１９Ａｋ王に含む浴出液を凍結乾燥
することによって得られた茶褐色粉末を少量の蒸留水に
溶解し、バイオグルＰ−２（バイオランド社製）充填カ
ラム（８Ｘ１ＧＧ儂）に導き、ｉＮＮ氷水展開し、バイ
オアッセイにより活性−分ＬＯｊｉ集めた。この活性画
分を予め、α０１＆　ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ＆４）で平
衡化したＱＡＥ−セファデックスＡ−２５（ファルマシ
ア社製）充填カラム（４Ｘ４０（！ＩＬ）に吸着させ、
上記嫉賞液２００ＭＩで洗浄後、濃度が０％から４Ｘま
で面線的に増加する食塩水（合計＆ＯＩ）で鹸出を何っ
た。溶出液ｋ　１　Ｓ　ｌＩｌずつ分画し、バイオアッ
セイを行い１画分５１から画分７０まで、打針３００ｗ
ｒｌの活性画分を得た。

この画分を凍結乾燥し、黄褐色の粉末を得た。

この粉末を東門の蒸留水に溶解し、５Ｆの食１４を加え
、ダイヤイオンＨＰ２０ＡＧ〔三菱化成（株）製〕充填
カラム（２ｘｓｏ儂）に吸着させ、５％食塩水５０ｍ／
で洗浄後、蒸留水１００ｍ／で仇浄し次。濃度が０％か
ら３０％までｌＡ′−的に増υ１するアセトン水（合計
１．　ＯＡ　）で酊出し、ｌｌ＃１カ１１Ｑｄとし、そ
の溶出液全停画し友。バイオアッセイにより、活性画分
３５からＮ分４５までの合計１１１１４を集め、これを
凍結乾燥すると負−色の粉末Ｓ３ダが潜られた。

抗生物質ＱＡｉｔ２ｓＡの粗粉末５！Ｉ１９’ｉ。

少量の蒸留水に溶解し、セファデックスＧ−ｔ。

（ファルマシア社製）充填カラム（ｉｌＸ８０ｃｍ）に
導き、蒸留水で展開し、バイオアッセイにより活性画分
３０ｄｉ集めた。この活性画分を予め、ａｏ　１Ｍ９ン
酸緩衝液（ｐＨｓ、４）で平衡化したＱＡＥ−セファデ
ックスＡ−２５（ファルマシア社製）充填カラム（２Ｘ
３００ＩＩ）に吸着させ、上記緩術液１５０１１ｊで洗
浄後、濃度が０％から５％まで直線的に増加する食塩水
（合計１１００ｄ）で溶出を行い、Ｗ！出液を５ｄずつ
分画した。バイオアッセイにより、活性画分３６から１
１分４０までの合計！５１１Ｉ／ｌ−集めた。

この画分に４ｔの食塩を加え、ダイヤイオンＨＰｚｏＡ
ＧＣ三菱化成（株）製〕光塙カラム（ｆｉＸ４０ｃｍ）
に吸着させ、蒸留水５０−で洗浄後、濃度Ｏ％から３０
％まで直線的に増加するアセトン水（合計８００ｍ）で
溶出し、ｌｌ［！ｌ１分を５−とし、その溶出液を分画
した。

）臂イオアツセイにより活性画分１０５から画分１１７
の合計６５−を集めた。

これを凍結乾燥することにより淡黄色粉末２１即金得た
。

得られた凍結乾燥標品は次の特性を１した。

＋１１　　形　状：淡黄色粉末 （２）比旋光疲：〔α〕θ：　１１．６＠（（ｊ＝１．
Ｑ、ｏ、　ｏ　１Ｍリン峡緩衝液、ｐＨ８，，４）但し
、紫外部吸収においてλｍａｚ３００ｎｔｎのｇｒｓｓ
ｏｏとした時の値である。

（３）分子式 理論分子式　ＣＩ。Ｈ，。Ｎ、　０．ＳＮａ　（Ａ／　
、ｋｌ　、＝　４７９　）（４）紫外部吸収スペクトラ
ム （５）　　赤外部吸収スペクトラム（ＫＢｒ）の生簀ビ
ーク １７ＩＯ（β−ラクタム） １＠＠Ｇ（アオド） ｔｇｏｏ（カルブキシレート） （６）核磁気共鳴スペクトラム（浴＠：：Ｄ、０）（内
部基準ｇＤｊｆｌＳ） ＬＯＧ　（３Ｈ，ｔ　、　Ｊ−７，５＃ｇ　、　ＣＭ、
　−ＣＨ，）Ｌ＠Ｏ〜１００　（ＩＨｅ−９”−ＣＭ、
）１４８　（＊Ｈ、ｔ　、　Ｊ＝６．６Ｈｇ　。

Ｎ　−ＣＭ、　−ＣＨ，−ＣＱ　） ２ｈ８０−＆６１Ｓ（１１Ｈ，犠、Ｃ−４＃、。

Ｃ−＊Ｈ，Ｓ−Ｃ，Ｈ，−Ｃ巧−Ｎ。

（７）　　ペー／＃−クロマトダラフイー東洋Ｆ紙　　
４５０ 展開溶媒　　アセトニトリル：水（８：２）検出方法　
　Ｃｏｍａｍｏｎａａ　ｔａｒｒｉｇａｎａ　Ｂ　９９
６によるバイオオートグラフィー Ｒｆ値　　　α５３ （８）　　呈色反応 ニンヒドリンに対する反応：　陰性 エールリッヒ試桑に対する反応：　陽性（９）　　元素
分析、融点 吸湿性のため測定不能 以上の種化学的性質から抗生ｑｆＪ誓ＯＡ　−６１２９
Ａの平向構造式は １ ｃｉｉ。

であると考えられる。

〔抗生物質０Ａ−ｆｉｌ！９Ｂｍ及びＢ、精製〕抗生物
質０Ａ−８１！９Ｂ、及びＢａｔ−主に含む溶出液を、
凍結乾燥することによって得られた茶褐色の粉末を、前
述の抗生物質０Ａ−６１２９１１に主に含む区分と同様
に、順次、・童イオｒルＰ−冨カラム処理、ＱＡＥ−セ
ファデックスス−意ｉカラム処理、ダイヤイオンＨＰ２
０ＡＧカラムれ理により溶出される第１の活性画分から
抗生物質ＯＡ−１１１１・Ｂ、の黄褐色粗粉末が８４０
ダ、遅れて溶出”される第２の活性画分には抗生物質０
Ａ−６１２９Ｂ、の黄褐色粗粉末が４７０〜得られた。

これらの粗粉末をそれぞれ、抗生＠賀ＯＡ−＠Ｌ２９Ａ
粗粉末と同様に処境して、凍結乾燥品として該０Ａ−６
１２９Ｂ、の淡黄色粉末２１ダを得た０本粉末はさらに
活性炭充填カラムに吸着させた後、濃度が０％から５０
Ｘまで直−的に増加するイングロビルアルコール水で溶
出を行い、３００９％倶に紫外部極大吸収を有する画分
を集め、これを凍結乾燥して、淡黄色粉末８〜を得た。

また、７Ｖ１！ｉ０１菌株の＠賽銭からは、はぼ同一の
性状の該粉末魚５■が得られた。

得られ九凍結乾燥粉末は１次の特性を示した。

（１１形　状：淡黄色粉末 （２）比旋光度：〔αＩＢ　２４．２°　（６＝０．５
゜Ｈ２Ｏ中） （３）分子式　　Ｃ，。Ｈ，。Ｎ、Ｏ＠ＳＮａ　（Ｍ、
　Ｗ、　４９５　）（４）紫外部吸収スペクトル （５）赤外部吸収スペクトル １６５０（アイド） １！ｔｉｌｅ（カルがキシレー ト） （６）核磁気共鳴スペクトラム（溶媒＝Ｄρ、内部Ｌｌ
ｌ　（ＲＨ，ｄ、Ｊ＝６．６Ｍ、。

Ｌ４’ｒ　（ＩＨ，ｔ　、Ｊ＝ｅ、ｒｓＨＬ。

ＮＨ−ＣＭ、−ＣＭ、−Ｃｏ　　） ２丁８〜＆７０　（１１Ｈ，ｓ、Ｃ−４Ｍ、。

１９Ｎ（ｌＨ，ａ、ＭＯ−６−ｃｏ） ８１　Ｓ　〜４４０　　（２Ｅ　、ｍ　、Ｃ−５＃　。

（７）　　ペーノ櫂−クロ！トダラフイー東洋ＰＩ１１
　　Ａｓ。

展開＃謀　　アセトニトリル／α１Ｍトリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタ ンー塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）／ α１Ｍ１ＭエチレンシアミンＨ ７、＋ｓ）＝ｔｇＯ：３０：１ 検出方法　　Ｃｏｍ惰ｏ＊ａａ　ｔａｒｒｉｇａｓａ　
Ｂ−９９６によるノダイオオートダラフイ− Ｒ／値　　　α１丁 （８）高圧２紙電気泳動 ｐ　ＨＩＬ　ｆＪのペロナール緩衝液、東洋Ｆ樵、ム５
１を用いｔｓｏｏｙ、８００８動じた。

Ｒｍ値αｇ？（Ｒｓ値はＰｇ−ｓナトリウム塩の移動度
ｉＬｏとしたものである） （９）　　高速液体クロマトダラフイー充てん却Ｉ＄マ
イクローンメ／臂ツクＣ１８カラ五；７．ｌ１ｍ（内径
）ＸＩＯｍ （日本ウォーターズリイテッド） 移動相１．１１％アセトニトリルを含むａ０１モルリン
酸ニアンモニウム緩衝液（ｐＨ７，！ｉ）流量喜Ｌ　Ｓ
　ｄ　／　ｓイ協 検出力＠嘗紫外部１６１ｓ溝 上記の条件下で保持時間ＩＬＩ分である。

〔抗生物質０Ａ−６１重９Ｂ、の精製〕抗生物質ＯＡ−
ｅ１ｍｍＢ、（Ｄ粗粉末４７０１１９ｔ、前記ＯＡ−８
１ｍｆｌｊＢ１と同様に、セファデックスＧ−１０充填
カラム処城、ＱＡＥ−セファデックスＡ−ｍｓ充填カラ
ム処理、さらにダイヤイオンＨＰｚｏＡＧ充填カラム処
珈し、抗生物質０Ａ−６１２９Ｂ、Ｉ：）淡黄色粉末２
ＢＩｖｋ得た。

ｔた、Ｎ１５０１菌株の培養液からは、同様な粉末ｇｔ
ｓダが得られた。

得られ次凍結乾燥標品は次の特性を示した。

（１）　　形　　状：淡黄色粉末 （２）比旋光度：〔α］ｐ１４．７°　（ｃ＝１．ｏ。

α０ＩＡｆリン酸緩衝液、ｐＨ＆４） （３）分子式　　Ｃ１゜Ｈ，。Ｎ、Ｏ，ＳＮα（Ａ／、
Ｗ、　４９５　）（４）紫外部吸収スペクトラム （５）赤外部吸収ス（クトラム（ＫＢｒ　）の王賛ピー
ク １６６Ｇ（アミド） １６００（カルｌキシレート） （６）核磁気共鳴スペクトラム（沼ｗｉ、：Ｄ、Ｏ１内
部Ｌｍ　ｌ　（３Ｈ、ｄ　、Ｊ＝’１．ＯＨｍ　。

１４５　（２Ｈ，ｔ　　、Ｊ＝６．６Ｈｇ　。

ＮＨ−ＣＨ，−ＣＨ，−Ｃｏ　　） ２７５〜３．６０　（１１Ｈ，ｆｌＬ、Ｃ４ｆｆｔ　　
Ｉ（７）　　ペーノ譬−クロマトダラフ（−東洋Ｆ紙　
　ムｓ。

展開！媒　　アセトニトリル／αＩＭ）リス（ヒドロキ
シメチル）アばツメタ ンー塩酸緩衝液（ｐ＃７．ｓ）／α１ Ｍエチレンソアミン水溶液（ｐＨ ７，５）＝１２０／３０／１ 検出方法　　Ｃｏｍｔｚｍｏ％ａａ　ｔａｒｒｉｇｅ算
ａ　Ｂ−９９６によるバイオオートグラフィー Ｒｆ値　　　α１７ （８）高圧Ｐ紙電気泳動 ｐＨ＆６のベロナール緩衝液、東洋−紙裏５１を用い１
５００Ｖ、３０分ｍａ　しｉ＊Ａ’ｍ（ｉｉａ６７　ｉ
Ｒｍ値ｕＰＳ−５ｔト’Ｊ’）ムＩＡの移動度１に１．
０としたものである。

（９）高速液体クロマトグラフィー 充てん剤；マイクロがンメノセックｃ１８カラム、７８
ｍ５＋（内径）Ｘ３０ｃＲ（日本ウォーターズリミテッ
ド） 移動相；３％アセトニトリル金含むα０１七ルリｙ＠ニ
アンモニウム緩ｌｉ液（ｐｆｆ７．５） 流量ＩＬ！１ｍ／惧イ篇 検出方法！紫外部１０１％情 上記の条件下で、保持時間２２５分である。

以上の理化学的性質から抗生物質ＯＡ−６１２９Ｂ、及
びＢ、の平面構造は。

Ｃ鵡 であり、Ｂ、、Ｂ、の相違は５．６−位の立体配置がト
ランス又はシスで示される異性体と考えられる。

ＣＣ）　　抗生＊實０Ａ−６１２９Ｃの精製ｈｎ記（７
）抗生物１ｇ０Ａ　−６１２９Ｃｋ自ム＃ｉａｊＭ７、
ＯｊをＨＰ２０ダイヤイオン（前出）充填カラム（５Ｘ
８０ｃｉｉ）に吸着させ、０．０１Ａｆリン＃緩衝液（
ｐＨ＆４）１．５７で洗浄後、濃度がＯＸがら２０％ま
で直線的に増加するアセトン水（合＝ｒａＯＩ）で溶出
した。溶出液を２５０ｍ／ずつ分Ｈし、画分９から画分
】３までの合ｉｉ１．２５７の溶出液を得た。

この溶出液を、３％のアルキルツメチルペンノルアンモ
ニウムクロライド〔東京化成（株）製〕を含むメチレン
クロライド１．０１で抽出を行い、続いて、抽出後のメ
チレンクロライド）ｍｋ８％ヨウ化ナトジナトリウム水
浴液３００内袖用を行った。

得られた抽出液３００ｕ”２予めα０１　Ａｆ　リン融
緩衝液（ｐ＃＆４）で平衡化したバイオダルＰ−２（前
出）充填カラム（８Ｘ１００（３１）に寺さ。

上記緩衝液で展開し、バイオアッセイｒｆｉい、１５性
画分１．２！を集めた。

この溶出液をダイヤイオンＨＰ２０充填カラム（４Ｘ６
０体）に吸着させ、蒸留水６００ａｊで洗浄恢、濃度が
０％から１０％まで直線的に変化するアセトン水（合計
λｏＢで溶出した。溶出液１ｋ１５ｍ−７”つ分画し、
バイオアッセイを行い１画分４１がら画分１ｊ５までの
合計Ｌｌｊの活性画分を得た。この溶出液を予め０．０
１　Ｍ　リン酸−伽液（ｐＨ８，４）で平衡化しｆｃＱ
ＡＥ−セフ”’ｆｆ”；）クスＡ−２５（前出）充填カ
ラム（４Ｘ４０２）に吸着させ、上記緩衛液５００ｄで
洗浄扱、濃度が０％から５％まで直線的に増加する食塩
水（合計１０））で溶出を行った。溶出液を１５−ずつ
分画し、バイオアッセイを行い、両分１１２から一分１
３９までの合計４２０−の活性画分を得た。

次に、この活性画分に最終濃度が５％になるように食塩
を加え、ダイヤイオンＭＰ２０１Ｇ（前出）充填カラム
（３Ｘ６Ｇｍ）に吸着させ、脱イオン水で溶出を行った
。溶出液を１５１１ｊずつ分画し、バイオアッセイを行
い画分３１から自分−４８まで。

合計２７Ｏｄの活性画分を得次。この活性画分を凍結乾
燥し、１３５■の黄褐色の粉末を得た。

この粉末１３５ダを少量の蒸留水に溶解（７，セファデ
ックスＧ−１０（前出）充填カラム（２×７００ＩＩ）
に導き、蒸留水で展開し、バイオアッセイを行い、活性
画分合計６８１１４を得た。

これを予めαｏ１ＭリンｒＲ緩衝液（ｐ＃＆４）で平衡
化したＱＡＥ−セファデックズス−２５光填カラム（４
Ｘ　３０　ｅｘ　）に吸着させ、上記緩衝液８００１Ｉ
Ｊで洗浄＠、濃度がＯから５％まで直線的に増加する食
塩水（合計２４ｊ）で溶出した。彪出液ｔ−１３ＩＩｊ
ずつ分画し、バイオアッセイを何い、画分１１８から画
分１３９まで合計２８６厘！に侍た。

これに、最終濃度が５％になるように食塩を加Ｊ、　１
４−Ｙ４　オｙＨＰ　！　ｏ　ＡＧｙｔ、ｑｇカラＡ（
３Ｘ６０傷）に吸着させ脱イオン水で溶出を行った。

溶出銭金１０ｄずつ分画し、３００ｓｍｌＣ，紫外線極
大吸収を有する自分を合１９０ｄ集めた。

これを、凍結乾燥し、１８〜の淡黄色の抗生物質ＯＡ−
ａ１ｍ＊ｃ粉末を得た。また、７Ｖ１５０１菌株の培養
液からは同様に２αＯダの淡黄色粉末を得た。

得られた抗生＠質０Ａ−８１２９Ｃの凍結乾燥標品は次
の特性を示した。

（１）形状：淡黄色粉末 （２）比旋光度：〔α〕９１７．４゜ （ａ＝ａ！！！ｉ、ａｏｔＡｒリン酸緩衝液、ｐＨ＆２
） （３）元素分析値（Ｃ，。Ｈ，、Ｎ、　Ｏ□Ｓ、　Ｎａ
１−　ｇ　Ｈ，０として） 計算値　Ｃ３７，９１％、Ｎ５．２Ｓ先、＃ａ６３％、
ＳｌＯ，１２Ｍ 分析値　Ｃ３７，６１％％Ｎ５．ｏｏ％、Ｎａ５ｇ％、
Ｓ　９．　ｓ　２．９に （４）分子ｔ５９７．５７３１　（分子式ＣｚｏＨ１，
ＮｓＯ，，Ｓ、Ｎα８） ｆ５１　　Ｍ外部吸収スペクトラム（αＯＩＭリンｄ４
衝液中、１）Ｈ＆２） λ、ｍａ、ｎｍ（６）”、３００．５　（７６００）（
６）光外部吸収スペクトラム（ＫＢｒ）の主安ピーク シｍａｚ−−”　：　　１７５０　（β−ラクタム）１
６６０〜１５９５（アミド、カル〆キシレート） １２５０−１２２．０　（億ｄｉｌ−１−ステル）（７
）核磁気共鳴スペクトラム（１水中）（内１ル羞準：Ｄ
ＳＳ） ＣＨ。

１１　ａｌｌ　８　（８Ｈ、ａ　、　ＣＭ、・−Ｃ−）
１゜４９（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．５＆ｇ、Ｃ＃、−Ｃ１ｉ
−） １４丁（２Ｈ、ｔ　、　Ｊ＝　／、’Ｏ／／ｇ　。

ＮＨ−ＣＨ，−ＣＨ，−ＣＯ） １７０−１１０（１０＃、ｍ、Ｃ−４１１，。

−Ｇ凸−ＯＨ，Ｎ１１−Ｃち−ＣＭ、−Ｃｏ。

５−ＣＢ、−ＣＭ、−ＮＨ） １８１　（ＩＨ，ｄｄ　、Ｊ＝ａ５Ｈｇ　、Ｊ＝表１０
−表４３（ｌＨ，惟、Ｃ−５Ｈ）４７８　（１／ｆ、ｄ
ｄ　、Ｊ＝６．６Ｈｚ　、Ｊ＝、　、　　ｔ　！Ｉ　Ｈ
ｇ　、　ＣＭ、−枕−０８ｏ、Ｈａ　）（８）　　ペー
ノ譬−クロマトダラフイー東洋Ｆ紙　　Ｉ＆５０ 展開溶媒　　アセトニトリル７１１Ｍトリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタ ンー塩酸緩衛液（ｐＨ７，５）／ α１Ｍエチレンシアオン四酢酸ナ トリウム水溶液（ｐ＃７．５） （１２０／３０／１　） 検出方法　　Ｃｏｎｕｍｏｎａａ　ｔａｒｒｉｇａｎａ
　Ｂ　９９６によるノ譬イオオートグラフイ− Ｒｆ値　　　α０９ （ｐｓ−ｂのＲｆイＩ１１は０８３１冨示した） （９）高圧ｐ紙電気泳動 ｐＨ＆６のＶｅｒｏｎａｌ　ａ衝液、東洋ｐ紙４５１を
用い１ｓｏｏＦ、ａｏ分詠励した。

Ｒｍ値１．６９（Ｒｍ値はＰＳ−ｓナトリウム塩の移動
度（−１０とし次ものである）舖　呈色反応 ニンヒドリンに対する反応：＠性 エールリッヒ試薬に対する反応：陽性 Ｑｌ）　　７ＪＯ水分解生成＊　（８Ｎ　ｌｌＣｌ　、
　１１５　Ｃ。

１８時間） ｐＨＬ８？ｉ１衝液によるＦ紙電気泳動（ｓｏｏｏｉ”
１１２Ｃ分）でシステア（ン（Ｒ漢値ｚｇｓ）、β−ア
ラニン（Ｒ淋儀１、５３　）を確μした。（但し、Ｒ常
備はアラニンｉ　１．０としたものである） 以上の理化学的性質から抗生物質ＯＡ−６１２１１Ｃの
平面構造は であり、５．６−シス立体配置を有すると考えられる。

手続補正書（自弁） 昭和５７年　３月３０日 特許片長・ｍｂ・、出　魯　伽　　　殿１、事件の表示 １１１ｊｉｉ＋５　？年符＃：鈑２１４．３４０３５号
２、発明の名称 利籾ω生物 ３補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住　所　東が佃中大区京−−Ｊ°目１５會１号４、代　
理　人〒１０７ 刷部の通り （１′１　　本願特許請求の範囲の全文（明細１Ｆ＠１
負第５行〜第１１負第２行）を別紙のとおシ１Ｊ正する
。

（２１明細書第１１頁末行に「Ｌ−アデニ／」とあるを
１アデニンｊと訂正する。

以上 、（別紙） 〔特許請求の範囲〕 「１．　　ストレプトきセス属に輌するカルバペネム系
抗生物質生産劇であって１式 式中　１１Ｖｉ水ｌＡ扉子、水酸基又は基−０−８ｏ、
Ｈを表わす。

で示される化付物の脱バントテノイル化酵ｌｃ活性が欠
失し九新規像生物。

２　ストレプトミセス１１４に＃ｌｉするカルバペネム
・系抗生物質生産−が、ストレプ）１セス・フルがビリ
ディス（ＳｔｒｇＷｔｏｍｙｃｅａ　ｆ＊１ｖｏｖｉｒ
ｉｄｉｓ）。

ストレプトミセス・カトレヤ（Ｓ　ｔｒａｇｔｏｍｙｅ
ａａＣαｔｔｌａｙα）、ストレプトミセス・フラｌグ
リゼウｘ　（Ｓｔｒｇｐｔｏｔｇｙｃａａ　ｆｌａｖｏ
ｇｒｉａｇｗａ）、ストレプト建セス−オリバセウス（
Ｓ　ｔｒｇｐｔｏｍｙ；ａｍｏｌｉｖａｃａｗａ）、ス
トレプトミセス・グダ不ンシス（Ｓｔｒｍｐｔｏ惧ｙｃ
ａａ　ｇａｄａｔｓａｎａｉａ）、　　ストＬ／プトミ
セ、＊−７ｋｆ７テオルス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃｇａ
αｒｇ−％ｔｇｏｊｕｓ）、ストレプトミセス・フラボ
ビレンス（Ｓｔｒａｐｔｏｔｎｙｃｅｓ　ｆｌａｖｏｖ
ｉｒａｎａ）＋１ストレゾトンセス・フラアプス（Ｓｔ
ｒ峠ｔｏｍｙｃａａｆｌαＶＵａ）、ストレプトミセス
・シオヤエンシス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃａａ　ａｉｏ
ｙａ−％ａｊａ）、ストレプトミセス・クレメウス・サ
ラスピーシーズ・オーラテイリス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙ
ｃｇｓ　ｃｒｇｍｇｕａ　ａ山ｐ。

ａｕｒａｔｉｌｉａ）又はストレプトミーにス−ｓｐ、
　ＳＦ　−２０５０若しくはＳ　Ｐ’　−２１０３（Ｓ
ｔｒａｐｔｏ−ｍｙａａａ　ａｇ、５Ｆ−２０５０ｏｒ
ｓ）’−２１０３）である特許請求の１卵嬉Ｉ項記１の
新規微生物。

ｈ　　ス）し７’）＜セｘ＠ａｙ、Ｑ、Ａ−６１２９（
Ｓｔｒｅｇｔａｍｙｃｇａ　ｓｐ、　ＯＡ　−６１２９
）　ＦＡ’ＲＭＢｐ−１１又はストレプトばセス番フル
がビリディｘＮ　１５０１　　（Ｓｔｒａｇｔｏｍｙｃ
ａａ　ｆｕｌｖｏｖｉｒｉｄｉａ＃１５０１）ＦＡ’Ａ
’Ｍ　Ｂ）’−１０３である特許請求の範囲第２項記載
のｆ＃炊做生９・、。

４、　ストレプトミセス属に属するカルバペネム系抗生
物質生産ｉであって１式 式中、Ｒ１は水嵩原子、水酸基又は基 −ｏ−ｓｏ、ｉｉを表わす。

で示される化合物の脱バントテノイル化酵累活性が欠失
したＬ−ヒスチジン、Ｌ−アルだ二ン又ｒ」アデニン俊
才性を有する新［９生物。

５、　ストレプトミセス属に属するカルバペネム系抗生
物質生産菌が、ストレプトミセス・フルボビリディ、Ｘ
　　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ｆｃｌｖｏｖｉｒｉ
ｄｉａ）。

ストレプトミセス・カトレヤ（Ｓｔｒａｐｔｏｍνｃｍ
ａＣαｔｔｌａｙα）、ストレプトミセス０７うｌグリ
セウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ｆｌａｖｏｇｒｉ
ａｇｗａ）　、　ストレプトミセス・オリバセウス（Ｓ
ｔｒｍｐｔｏｍｙｃｅａｏｌｉｖａｃｅｕｓ）、ストレ
プトミセス−ｒダネンシス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｏｍａ
　ｇｇｄａｎｅｎｓｉｓ）、　　ストレプトミセス・ア
ルｒンテオ／Ｌ、ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃａｓαｒｇ
＃％ｔｇｏｊｗａ）　、ストレプトミセス・フラボビレ
ンス（Ｓｔｒａｐｔｏｔｐ＋ｙｅｅｘ　ｆｌａｖｏｖｉ
ｒｇｎｓ）　、　、Ｘ　）　ｌ／ブトミセス−７ラアプ
ス（ＳｔｒａｐｔｏｍｙｅａｓｆｌαＶＳａ）、ストレ
プトミセス・シオヤエンシス（Ｓｔｒａｇｔａｍｙｃａ
ａ　ａｉｏｙａａｓａｉａ）、　　ストレプト建セスー
クレメウス・サラスピーシーズ會オーラテイリス（Ｓｔ
ｒａｇｔｏｔｎｙｃａａ　　ａｒａｓｎｅｕｓ　ａｓｔ
ｂａｐ。

ａｕｒａｔｉｌｉａ）又ｉｊ　Ｘ　）　ｖブトミーＬｘ
−ｊｐ、５Ｆ−２０！ＯｉしくけＳ　Ｆ　−２１０３（
Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃａａａｐ、５Ｆ−ｆｌＯ５Ｏｏｒ
　ｓＪ’−２１０３）である特許請求の範囲第４項記載
・の新潰黴生物。

区　ストレプトミセス・フルボビリディスＮ１５０１−
４２４　　（Ｓｔｒａｐｔｏｔｎｙｃｍａ　ｆｕｌｖｏ
ｖｉ　−ｒｉｄｉａ　　Ｎ　１５０１−４２４　）　Ｆ
ＥＩｔ：Ｍ　　βＰ−１０５である特許請求の範囲第５
項記載の新却徽生物。

７、　ストレプトミセス属に属するカルバペネム系抗生
物雀生産薗であって１式 ％式％（ 式中、Ｒ１は水素原子、水酸基又は基 −０４０，１１を表わす、 で示される化付物の脱・々ントテノイル化軒素活性及び
アセチル化酵素活性を有し且つＬ−アルギニン、Ｌ−ｆ
ルタ建ン酸、Ｌ−システィン、アデニン又はビタミンＢ
、要求性を廟するｔｎ規倣生物。

８、　ストレプトミセス属に属するカルバペネム系抗生
物質生産菌がストレプトミセス・フルボピリディス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｅａｓ　ｆｓｔｌｖｏｖｉｒｉｄｉｓ
）、ストレプトミセスーカトレヤ　（Ｓｔｒａｐｔｏｍ
ｙｃｅａｃａｔｔｌａｙα）゛、ストレプトミセス・フ
ラｒＩクグリゼウス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃａａ　ｆｌ
ａｖｏｇｒｉｓｍｓｔａ）、ストレゾ）　ｉ−にス−１
リハセウス（ＳｔｒａｇｔｏｍｙｃｇａＯ１ｉνａｃａ
ｕａ）、ストレプト２セス・ｒダネンシス（Ｓｔｒａｐ
ｔｏｍｙｃａａ　ｇａｄａｎａｎａｉａ）、ストレプト
ミセス・了ルｒンテオルス（Ｓｔｒｇｇｔｏｒａｙｅｇ
ａαｒｇｅｎｔａｏ１％虐）、ストレプトミセス・フラ
ボビレンス（Ｓｔｒｇｐｔｏｍｙｃｇａ　ｆｌａｖｏｖ
ｉｒｇｎｓ）、　ストレプトｉ　セス−７ラアプｙ、　
（Ｓｔｒｇｐｔｏｍｙｃｇａ／　ｌ　ａ　轄ａ　）　ｍ
ストレプトミセス・シオヤエンシス（Ｓｔｒｇｐｔｏｒ
ｔａｙｃａａ　ａｉｏｙａｔｔｎａｉｓ）、ｙ、トレデ
トミセス・クレメウス・サブスピーシーＸ・オーラテイ
リｘ　（Ｓｔｒｍｐｔｏｍｙｃ、ｅａ　ｃｒｇｍｔｔｕ
ｓ　ａｗｂｓｐ。

ａｕｒａｔｉｌｉｓ）又はストレプトミセス−ａｐ、５
Ｆ−２０５０若しくはＳＦ　−２１０３にｔｒｅｐｔｏ
−ｍｙｃａｍ　ｓｐ、　５Ｆ−２０５０ｏｒ　　ＳＰ’
−２１０３）である特許請求の範囲第７項記載の新規微
生物。

９、　ストレプトミセス・フルボピリディスＡ９３３−
　Ａｘ　−１４（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｅａａ　ｆｓｌｖ
ｏ−ｖｉｒｉｄｉａ　　Ａ９３３−Ａ　ｚ　−１４）Ｆ
ＥＲＭＢＰ−１０２である特許請求の範囲第８項１針の
新規微生物。

１　Ｇ、　　ストレプトミセス属に属するカルバペネム
系抗生物質生産菌であって且つ式 ％式％（１） 式中、Ｒ１は水素原子、水酸基又Ｖ１基−０−８ｏ、Ｈ
な表わす。

で示される化合物の脱ノセントテノイル化酵素活性カ欠
失したＬ−ヒスチジン、Ｌ−アルギニン又１ユアデニン
費求性を有する微生物と、ストレア２セス属に属するカ
ルバペネム系抗生物質生産菌であって、上記式（１）で
示される化合物の脱パントテノイル化酵素活性及びアセ
チル化酵素活性を有し且つＬ−アルギニン、Ｌ−グルタ
建ン酸、Ｌ−システィン、アデニン又はビタ建ンＢ、蒙
求性を１する書生物との細胞駆付によって創製される弐
式中、　Ｒ１は水＃ＣＣ原子氷水酸基は基−０−８０，
Ｈを表わす。

で示される化付物の生倉能を有する新規微生物。

１１、　　ストレグトンセス城に属するカル・５ペネム
系抗生物質生産−が、ストレプトミセス・フルボビリデ
ィス（Ｓｔｒａｇｔｏｖｍｙａａａハｔｌｖｏｖｉｒｉ
ｄｉｓ）。

ストレプトミセス・フラｌダリゼウス（ＳｔｒａＩｐｔ
ｏ−ｓｙｇｓｓ　ｆｌａ＊ｔｚｇｒｉａａｍｍ）、　ス
トレグトンセス−オリｚ４セウス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙ
ａａａ　ａｊｊｗａ：ａｓｓ）、　ｘトレプ）ミセス−
ｒ〆ネンシス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙａａａｇａｄａ駕−
％５ｉｎ）、　　ストレプトミセス・アルｒンテオｈス
（Ｓｔｒａｇｔｏｍｙｃａｓαｒｇｇ＊ｔａｏｌｕｓ）
、ストレプトミセス・ワラｌビレンス（Ｓｔｒｇｐｔｏ
ｎｃｙｅａａｆｌａｖｅｖｉｒａ駕ａ）、ストレプトミ
セス・フラアプス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙａａａ　ｆｌα
１１）、ストレプトミセス・シオヤエンシス（Ｓｔｒｇ
ｌｔｏｓｙｃｓｓ　５４ｏｙａｓｙｕｓａ）、ストレプ
トミセス・クレメウス・サブスピーシーズ・オーラテイ
リス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃｇａ　ｃｒｇｍｍｓｃａａ
ｕｂａｐ、ａｕｒａｔｉＬｉａ）又はストレプトミセス
−ａｐ。

５Ｆ−２０５０若しくはＳ　Ｆ　−２１０３（Ｓｔｒｇ
ｐｔｏ−ｍｙａａａ　ａｆｆ、ＳＪ’−２０５０ｏｒ　
　８Ｆ−２１０３）である特許請求の範囲第１Ｏ項配嫉
の新却値生智。

１２　ストレプトミセス・フルボビリディスｆ−１２６
（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃａａハｔｌｖｏｖｉｒｉｄｉａ
　／　−１２６）１”ＥＲＭ　　ＢＰ−１０４”’Ｃあ
る％ＦＦ１ｉ／＋氷の範囲第１１埴記載の新規微生物。

ｊ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ストレグトイセス輌に属するカルバペネム系抗生物
   質生産−であって１式 ％式％（１） 式中、Ｒ１は水′ｌＡ原子、水酸基又は基−Ｑ−８ｏ、
   Ｈｆ妖わす。 で示される化合資の脱ノＪＩントテノイル化＃素活性が
   欠失した新規黴生吻。 ２　ストレ！）ｆセス属に属するカルバペネム系抗生物
   質生産−が、ストレグ）（セス・フルがビリディス（Ｓ
   ｔｒｅｐｔａｍｙａｅａ　ｆｓｌｖｏｖｉｒｉｄｉａ　
   ）　。 ストレプトずセス・カトレヤ（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃａ
   ａｃａｔｔｌａｙα）、ストレグトンセス・フラ〆グν
   ゼウｘ　（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙａａａ　ｆｌａｗｏｇｒ
   ｉｓａｓａ　）　、　ストレグトイセス・オリバセウス
   （Ｓｔｒａｐｔｏｔｎｙｃａａｏｌｓｗａｃａｕａ　）
   　、ストレプトミセス・ｒダネンシス（Ｓｔｒａｐｔｏ
   ｍｙａａａ　ｇｇｄａｎａｘａｉａ　）　、ストレプト
   ミセス−’７　／ｌ／　ｒンテオルス（Ｓｔｒａｐｔｏ
   ｍｙｃａａ　ａｒｇａｎ−１ｅｏＥｓａ　）　、ストレ
   プトばセス・アラブビレンス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｅａ
   ａ　ｆｌａｖｏｔＡｒａ＊ａ　）　、２≠≠≠≠＆充Ｉ
   ↓ｉ李＆→−４ ストレグ）ｆセス・フラアプス（Ｓｔｒａｐｔｏｍνｃ
   ａｎｆｌａｗ％ａ）、ストレグ１４セス・シオヤエンシ
   ス（Ｓｔｒｇｐｔｏｍｙａｇａ　ａｉｏｙａａｎｓｉｘ
   　）　、ストレグトイセス・クレメウス・サブスピーシ
   ーズ・オーラテイリス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｅａａ　ａ
   ｒａｍａｕｓ　、　５ｕｂａｐ。 ａｕｒａｔｉｌｉａ　）　　又はストレグ）　ｉ　セス
   ・Ｈｐ　、ＳＦ−怠ｏ　ｓ　ｏｔＩＬ、＜は５Ｆ−８１
   ０３（！１ｌｔｒａｐＯ−ｖ＊ｙａａａ　ｍｐ、　８１
   ？−意０１０６ｔ’？Ｊｉ’−１１１（１）である特許
   請求の範囲第１項記載の新規微生物。 ｌ　　ス）Ｌ’、ｉ’）＄４スーｓ３＋、０Ａ−１１１
   ！Ｉ（Ｓｇｒｍｐｔｏｍｙａａａ　ａｙ、　ＯＡ　−６
   １＊　１１　）ＦＥＲＮＢＰ−１１又はストレートζセ
   ス・フルｌビリディスＮ　ｌ　１０　ｌ　（５ｔｒａｐ
   ｔｏｔｈｙｔｔｅｓ　ｆｓ１ｗｏｖｉｒｉｄｉｍ＃１　
   ｓＯ１）ＦＥＲＮ　ＢＰ−１０８であル％許−求の範囲
   第１項記載の新規微生物。 表　ストレプトミセス属に稿するカルバペネム系抗生物
   質生産菌であって１式 （） 式中、Ｒ１は水素原子、水酸基又は基 −Ｏ−Ｓｏ、Ｈを嵌わす。 で示される化合物の脱バントテノイル化酵素活性が欠失
   したＬ−ヒスチジン、Ｌ−アルギニン又はＬ−アデニン
   要求性を有する新規微生物。 ＆　ストレプトミセス属に属するカルバペネム系抗生物
   質生産菌が、ストレグ）＜セス・フルｌビリディス（Ｓ
   ｔｒａｐｔｏｍｙｅａａ　ｆｕｌｖｏｖｉｒｉｄｉａ　
   ）　％ストレグトイセス・カトレヤ（Ｓｔｒａｐｔｏｍ
   ｙａａａｃａｔｔ１ｇｙα）、ストレプトミセス・フラ
   〆グリゼウス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃｇａ　ｆｌａｖｏ
   ｇｒｉａａｕａ　）　、　ストレグトイセス・オリバセ
   ウス（Ｓｔｒａｐｔｏｍνｃａｍｏ１ｉｖａｅａｓｂａ
   　）　、ストレプトミセス・ｒ〆ネンシス（ｆ；ｔｒａ
   ｐｔｏｍｙｃａａ　ｇｅｄａｓａｎａｉａ　）　、スト
   レプトずセス拳アルｒ７ｉオルス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙ
   ｃａａａｒｇｇ＊ｔａａｌｈａ　）　、ストレグトイセ
   ス・フラ〆ビレンス（５ｔｒａｐｔｏｒｎｙａａａ　ｆ
   ｌａｖｏｖｉｒｅ覚ｓ　）　。 ストレプト２セス・フラアプス（Ｓｔデａｐｔｏｍｙｃ
   −虐ｆｌａｖｓｂａ　）　、ストレグトイセス・シオヤ
   エンシス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｅｔａａ　ａｉｅｙａａ
   ｎａ４ｍ　）、ストレグトイセス・クレメウス・ナブス
   ピーシーズ・、ｔ−５テイリス（５ｔｒａｐｔ・ｔｎｙ
   ｅｅａ　ｃｒａｙｕａ　ａｍｋａｐ。 ａｓｒａｔｉｌｉｍ　）又はストレプトＺ　−ｋｘ　−
   ａｐ、　５Ｆ−Ｉ　Ｏ＠　Ｏｉｌ、（はＳ　Ｆ　−２１
   ０３（Ｓｔｒａｐｔｅｒ−ｍｙａｅａ　ａｐ、５Ｆ−２
   ０Ｓ６ａｒＳＦ−２１０３）である特許請求の範囲第４
   項記載の新規微生物。 １　ストレートζセスａフルがビリディスＮ　１　！！
   　０１−Ａ　＊　４　（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｏａａ　ｆ
   ｂｌｖｏｖｉ−ｒｉｄ４ａＮ１５０１−４１１４　）Ｆ
   ＥＲＮ　　ＢＰ−１０１Ｓである特許請求の範囲第５項
   記載の新規微生曽。 ７、ストレグトイセスｌｔ４に属するカルバペネム系抗
   生物質生産１であって１式 （１） 式中、Ｒ＆は水素原子、水酸基又は基 −０−８ｏ、Ｈ′＠：表わす。 で示される化合物の脱バントテノイル化ｗｌ巣活性及び
   アセチル化酵素活性を有し且つＬ−アルギニン、Ｌ−ダ
   ルタイン酸、Ｌ−システィン、Ｌ−ア一二ン又はビタミ
   ンＢ、賛求性を有するｗ′ｒ規淑生吻。 ａ　ストレプトミセス属に楓するカルバペネム系抗生物
   質生産菌がストレグ）（セス・フルｌビリディス（Ｓｔ
   ｒａｐｔｏｍｙｃａａ　ｆｕｌｖｏｖｉｒｉｄｉａ　）
   、ストレグトイセスφカトレヤ（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃ
   ｍａｃａｔｔｌｍｙａ　）、ストレゾトンセス−７う？
   ダリゼクス（Ｓｔｒａｐｇａｔａｙａａａ　ｆｌａｖｏ
   ｇｒ４ａｍｍｍ　）　、　ｘトレプトｆセス−オリバセ
   ウス（Ｓｇｒａｐｔｏｍｙｔｒｅａ・ｌｉｔαＯ−％＃
   ）、ストレグ）（セス・ｒ〆ネンシス（Ｓｇｒａｐｔｅ
   ｍｙｔｔａａ　ｇａｄａ駕ａｖｂａｉａ　）　、　スト
   レゾトンセス・アルｒンテオルス（Ｓｔｒａｐｔｅｍν
   Ｏ−１ａｒｇａｎｔ０−１ａｒ　）　、ストレートミセ
   スーフラがビレンス（Ｓｔｒｇｐｔｏｍｙａｇａ　ｆｌ
   ａｖｏｖｔｒａｎａ　）　、ストレゾトンセス・フラア
   プス（５ｔｒａｐｔｏ倶ｖ６−虐／ｊｇｖｓｓ　）　、
   ストレグトイセスーシオヤエンシス（Ｓｔｒａｐｔｏｍ
   ｙｅａａ　ａｉｏｙａａ＊ａｔｍ　）　、ストレゾトン
   セス・タレメウス・サラスピーシーズ・オーラテイリス
   （Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｏｍａ　ｅｔｒａｔｙｈｅｗａ　
   ａｍｈａｐ。 ａｖｂｒｔｘｔ４１ｉａ　）又はストレグトｉ＊ｘ−ａ
   ｐ、８Ｆ−ｆｉＯＩｏ若しくはＳＦ　−２１０Ｂ　（Ｓ
   ｔｒｅｐｔｏ−ｔｍｙｍａａ　ａｐ、！ＩＦ−＊０６Ｏ
   ｏｒＳＦ−２１０３）である特許請求の範囲第７項記載
   の新規微生物。 飯　ストレートイセス−フルがビリディスス−ａ　ｌ　
   −Ａ　ｓ　−１４（５ｔｒａｐｔｏｔｙ＋ｙｅａａ　　
   ｆｍｌｖｏｗｓｒｉｄｉａＡ＠８Ｂ−Ａｓ−１４）ＦＥ
   ＲＭ　ＢＰ−１０２である特許請求の範囲第８項記載の
   新規微生物。 ｌａ　　ストレートミセス属に楓するカルバペネム系抗
   生物質生産菌であって且つ式 ％式％） 式中、　Ｒ１は水嵩原子、水酸基又は基−０−８ｏ、Ｈ
   を衆わす。 で示される化合物の脱バントテノイル化酵素活性カ欠失
   したＬ−ヒスチジン、Ｌ−アルギニン又はＬ−アデニン
   要求性を有する微生物と、ストレプトミセス属に属する
   カルバペネム糸抗生物質生産繭であって、上記式０）で
   示される化合物の脱バントテノイル化酵素活性及びアセ
   チル化酵素活性を有し且つＬ−アルイニン、Ｌ−ダルタ
   ζン酸、Ｌ−システィン、Ｌ−アデニン又はビタ（ンＢ
   ｏｗｌ求性を有する該生物との細胞融合によって創製さ
   れる式 式中　ｇｔＨ水素原子、水酸基又は基 −０−８ｏ、Ｈ（嵌わす。 て示される化合物の生産能を有する新規微生物。 ｌＬ　ストレノト（セス真に属するカルノ々ペネム系抗
   生物質生慮１が、ストレグ）１セス・フルーＶすｒ４ｘ
   　（Ｓｔｒａｐｇａｔａｙａａａ　ｆｓｌ＊ｏｖｉｒｉ
   ｄｉａ）、ストレプトζセス・フラがダリゼウス（Ｓｔ
   ｒｅｐｔｏ−ｍｙｍａａ　ｆｌａｖｍｇｒ４ａａｓａ　
   ）　、ストレ２）（セス・オリバセウス（Ｓｔｒｇｐｔ
   ｏｍｙａａａ　ｏｌｉｖａｃａｕａ　）、ストレゾトン
   セス・ｒダネンシス（Ｓｔｒｇｐｔｏｍｙｃａａｇａｄ
   ａｎａｎａｉｍ　）　、ストレグ）（セス・アルｒンテ
   オルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃａａ　ａｒｇａ％ｔｅｏ
   １ｗａ　）　、ストレプトミセス・フラービレンス（Ｓ
   ｔｒａｐｔｏｍｙｃａａｆｌａｖｏｖｉｒａｓａ　）　
   、　ストレゾトンセス・フラアプス（５ｔｒａｐｔｏｎ
   ｈｙａａａ　ｆｌａｖｓａ　）　、　ｘ　）　Ｌ／７’
   　）　Ｚセス−シオヤｘンシｘ　（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙ
   ｅａａ　ａｉｏｙａａ算−５ｔａ）、ストレノトずセス
   ークレメウス・サブスピーシーズｅオーラティリス（Ｓ
   ｔｒｅｐｔｏｔｎｙｃａａａｒｅｍｓａ　ａｕｈａｐ、
   　ａｍｒａｔｉｌｔａ　）又ｕ、＜　）　Ｌ／７’トず
   セス−ａｐ、　ＳＦ−２ｏ　ｓ　Ｏ４ｉシ＜Ｉｄ、ＳＦ
   　−１１０３（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃｅａ　ｓｐ、　Ｓ
   Ｆ−２０５０ｏｒｓＦ−２１０３）である特許請求の範
   西第１０項記載の新規微生物。 Ｉｔ　　ストレゾトンセス・フルがビリディスｆ−１１
   ｆ　６　（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃａａ　ｆｕｌｖｏｇｉ
   ｒｉｄｉａ　ｆ　−１２＠）ＦＥＲＭＢＰ−１０４であ
   る特ｔ’Ｆ請求の範囲第１１項記載の新規微生物。