SU1643610A1 - Штамм стрептомицета SтRертомYсеS снRомоFUSсUS - продуцент биотинсв зывающего белка - Google Patents
Штамм стрептомицета SтRертомYсеS снRомоFUSсUS - продуцент биотинсв зывающего белка Download PDFInfo
- Publication number
- SU1643610A1 SU1643610A1 SU884601599A SU4601599A SU1643610A1 SU 1643610 A1 SU1643610 A1 SU 1643610A1 SU 884601599 A SU884601599 A SU 884601599A SU 4601599 A SU4601599 A SU 4601599A SU 1643610 A1 SU1643610 A1 SU 1643610A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- biotin
- protein
- producing
- buffer
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
1
(2) 4601599/13
(22) 04.11.88
(46) 23.04.91. Бюл. № 15
(71)Всесоюзный научно-исследова- тельский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинско- го назначени и Институт цитологии АН СССР
(72)А.П.Кашкин, О.В.Аак, Н.А.Корчагина, Ю.Е.Конев, К.И.Галактионов, В.Г.Демин и Ю.А.Лазебник
(53)612.017.1-064(088.8)
(56)Archives of Biochemistry and Biophysics, 1964, v. 106, p. 1-5.
(54)ШТАММ СТРЕПТОМИЦЕТА STREPTOMYCES ,CHROMOFUSCUS - ПРОДУЦЕНТ БИОТИНСВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА
(57)Изобретение относитс к биотехнологии и может быть использовано при проведении иммуноферментного
и иммунофлуоресцентного анализа в иммунологии, медицине и биологии. Целью изобретени вл етс повышение продуктивности штамма. Штамм Strep- tomyces chromofuscus выделен из почв Ленинградской области в ходе скрининга микробных продуцентов биотинсв - зывающих белков. Штамм синтезирует биотинсв зывающий белок, концентраци которого в культуральной жидкости составл ет 6 мг/л, не токсичен, не патогенен, гидролизует молоко, разжижает желатину, на клетчатке не растет, на среде Придхэма-Готглиба растет в присутствии арабинозы, Ксилозы , глюкозы, рамнозы, фруктозы, маннита, т-инозита. Не растет на среде с сахарозой и рафинозой. Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером ВКПМ Ас 1268Д.
Изобретение относитс к биотехнологии и может быть использовано при проведении иммуноферментного и имму- нофлуоресцентного анализа в иммунолог гии, медицине и клеточной биологии.
Целью изобретени вл етс повышение продуктивности штамма.
Штамм Streptomyces chromofuscus Т-200 выделен из почв Ленинградской области- в ходе скрининга микробных . продуцентов биотинсв зывающих белков. Штамм хранитс во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером ВКПМ Ас 1268Д.
/ Штамм характеризуетс следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки . Спороносцы спиральные, расположены моноподиально и в виде кистей. Споры овальные с гладкой оболочкой.
Агар Чапека с крахмалом.Воздушный мицелий серый, по кра м колоний бе- лый. Субстратный мицелий светло-серый . Растворимых пигментов нет.
Глицерин-аспарагиновый агар. Воздушный мицелий светло-серый, беловатый . Субстратный мицелий буроватый. Растворимых пигментов нет.
to И
рэ
Ь
Крахм,inьно-аммиачный агар Воз- душный мицелий сероватый. Субстрат ный мицелий желтовато-серый Растворимых пигментов нет.
Органическа среда 2. Воздушный мицелий белый. Субстратный мицелий буроватый. Растворимый бурый пиг- мент образует слабо.
Физиологе-биохимические признаки. Меланоидные пигменты образует слабо. Молоко пептонизирует, желатину раз- жижает. На клетчатке не растет. На среде Придхэма-Готтлиба растет в присутствии арабинозы, глюкозы, кси- лозы, рамнозы, фруктозы, маннита, инозита. Не растет на среде с сахарозой , рафинозой
Штамм не относитс к микроорга- низмам, обладающим патогенным деист вием.
Пример 1. Штамм Strep chro mofuscus T-200 выращивают в ферментаторе объемом 40 л с барботажем и
посто нным перемешиванием в течение 5 сут при 28+2°С на питательной среде следующего состава, Глюкоза5
(NH4)fcS040,6
MgS040,02
КС10,2
CaCOg0,8
КН2РОФ0,04
Дл приготовлени посевного материала используют кос ки с агаризиро- ванной средой следующего состава, мас.%:
Кукурузный
экстракт0,5
Крахмал не-
растворимьй1,0
(NH4)2S040,3
СаС030,3
Агар2,5
инкубированные в течение 48 ч при
28+2°С.
По окончании ферментации культу- ральную жидкость фильтруют, натив- ный раствор, освобожденный от мицели , концентрируют примерно в 10 раз на ультрафильтрационной установке с использованием мембраны Рипор 4-120 Далее 0,56 л концентрата используют дл выделени биотинсв зывающего белка (БСБ)
На первой стадии провод т высаливание 70%-ным сульфатом аммони , вы- павший осадок отдел ют от надосадоч- ной жидкости центрифугированием
Q
Q
5
0
5
0
5
0
5
15000 g при 4°С и ре суспендируют в 60 мл дистиллированной воды. Полученный раствор диализуют против дистиллированной воды. Диализат центрифугируют при 15000 g 30 мин. Супер- натант используют дп окончательной очистки биотинсв зывающего белка ме- тодом аффинной хроматографии на ими- нобиотинаг ароз е.
Хроматографию провод т следующим образом. Колонку, наполненную 1 мл иминобиотин-агарозы, уравновешивают 10 мл буферного раствора, содержащего 0,05 М NazC03 и 0,5 М NaCl, pH 11,0 (буфер 1). К белковому препарату добавл ют 0,1 об. 10-кратного концентрата буфера 1, после чего 9 мл полученного раствора пропускают через колонку со скоростью 1 мл/мин После нанесени сорбент промывают 20 мл буфера I. Элюцию провод т 4 мл 0,05 М ацетатного буфера, рН ,4,0 (буфер II). По окончании элюции колонку промывают 20 мл буфера II и 20 мл буфера I, после чего цикл хроматографии повтор ют. За 8 циклов выделени получено 34 мг белка. Таким образом содержание БСБ в культу- ральной жидкости составл ет не менее 6 мг/л Гомогенность полученного препарата определ ют методом электрофореза в полиакриламидном геле. Чистота препарата выше 97%,
Белок, продуцируемый штаммом, идентифицирован как стреитавидин на основании следующих данных: белок обладает биотинсв зывающей способностью; белок может быть выделен методом аффинной хроматографии на имино- биотин-сефарозе при режиме, установленном дл авидина и стрептавидина; молекул рна масса белка - 60 КД; субъединичное строение белка с молекул рной массой субъединицы 15 КД; коэффициент экстинкции 1%-ного раствора белка равен 3,2
Пример 2 В лунки планшетов дл иммуноферментного анализа внос т по 100 кг биотинилированных иммуноглобулинов кролика, растворенных в 0,1 М бикарбонате натри . После 2 ч инкубации лунки проминают буфером, содержащим 20 мМ (рН 7,4), О,Г5 М NaCl и 0,05% твин-20 (буфер III) и внос т БСБ в количестве 0,001- 1 мкг на лунку на 100 мкл буфера III. Через 15 мин инкубации лунки промывают буфером III и внос т в них раст51
вор биотинилированной пероксидазы в количестве 0,2 мкг на лунку. Через 15 мин инкубации планшет промывают буфером III и в лунки внос т по 50 мкл раствора о-фенилендиамина с концентрацией 1 мг/мл цитратного буфера, рН 4,5. Буфер содержит 0,012% . Экстинкцию раствора в лунках определ ют на приборе Нуль- тискан. Параллельно все процедуры анализа провод т с использованием вместо БСБ авидин. Сравнительные результаты анализа показывают, что полученный из культуральной жидкости БСБ пригоден дл иммуноферментного анализа, причем рабоча концентраци БСБ в 8 10 раз ниже концентрации авидина.
О&
Таким образом, продуктивность штамма составл ет 6 мг/л при низком уровне пигментообразовани и накоплени в культуральной жидкости балластных белков, что позвол ет упростить процесс выделени конечного про дукта, сократить продолжительность химической очистки и обеспечивает получение высокоочищенного биотин- св зывающего белка в иммунохимичес ком анализе, превосход щем авидин, получаемый из пищевого сырь .
Claims (1)
- Формула изобрет.ениШтамм стрептомицета Streptorayces chromofuscus ВКПМ Ас 1268Д продуцент биотинсв зывающего белка.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884601599A SU1643610A1 (ru) | 1988-11-04 | 1988-11-04 | Штамм стрептомицета SтRертомYсеS снRомоFUSсUS - продуцент биотинсв зывающего белка |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884601599A SU1643610A1 (ru) | 1988-11-04 | 1988-11-04 | Штамм стрептомицета SтRертомYсеS снRомоFUSсUS - продуцент биотинсв зывающего белка |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1643610A1 true SU1643610A1 (ru) | 1991-04-23 |
Family
ID=21407706
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU884601599A SU1643610A1 (ru) | 1988-11-04 | 1988-11-04 | Штамм стрептомицета SтRертомYсеS снRомоFUSсUS - продуцент биотинсв зывающего белка |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1643610A1 (ru) |
-
1988
- 1988-11-04 SU SU884601599A patent/SU1643610A1/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPS63270696A (ja) | 抗真菌性抗生物質 | |
IL24529A (en) | Process for preparing cephalosporin derivatives | |
AU649116B2 (en) | New compounds, named the "Leustroducins", their preparation and their therapeutic uses | |
JPS6348520B2 (ru) | ||
SU1643610A1 (ru) | Штамм стрептомицета SтRертомYсеS снRомоFUSсUS - продуцент биотинсв зывающего белка | |
JPH0689012B2 (ja) | Cl‐1577‐b▲下4▼化合物およびその製法 | |
CA1232852A (en) | Cl-1957b antibiotic compound and its production | |
JP3119680B2 (ja) | 新規抗生物質バルヒマイシン、その製造方法およびそれを含有する抗菌剤 | |
JP3830964B2 (ja) | 海洋放線菌から単離した新規なチオデプシペプチド | |
US4725621A (en) | CL-1957E antibiotic compound and its production | |
US4264734A (en) | Process for producing antibiotic desacetyl 890A10 | |
JP3641013B2 (ja) | 新規な細胞接着阻害剤マクロスフェライドa及びb並びにそれらの製造法 | |
US4696794A (en) | CL-1957D antibiotic compound and its production | |
US4956283A (en) | Process for preparing macrolide antibiotics by culturing streptomyces hirsutus ATCC 53513 | |
RU2032744C1 (ru) | Штамм streptomyces sp. - продуцент рифамиционоксидазы и способ получения рифамициноксидазы | |
JPS6349097A (ja) | イプシロン−ポリ−l−リシンの製造法 | |
RU2143489C1 (ru) | Способ получения лизостафина | |
KR790001610B1 (ko) | 항생물질 mm 13902의 제조방법 | |
SU1724689A1 (ru) | Способ получени эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепл ющей последовательность нуклеотидов 5 @ - TGATCA-3 @ | |
JPS6219599A (ja) | 新規マクロライド系抗生物質m119 | |
JP2000159765A (ja) | 新規抗細菌化合物 | |
JP3641050B2 (ja) | 新規な生理活性物質k93−0711 i−1及びi−2並びにそれらの製造法 | |
JP3327982B2 (ja) | 新規な抗生物質mi481−42f4−a関連物質 | |
JPH09286779A (ja) | 新規化合物レブラスタチン | |
JPH0687866A (ja) | 化合物31668pおよび31668u、それらの製造方法およびそれらの使用 |