JPH11511335A

JPH11511335A - 液体組成物からのウィルスの吸着方法

Info

Publication number: JPH11511335A
Application number: JP9512972A
Authority: JP
Inventors: クルペイ，ジョン; スミス，アレン，ディー．; アーノルド，エドワード; ドネリー，ロバート
Original assignee: リゴケムインコーポレイテッド
Priority date: 1995-09-22
Filing date: 1996-09-17
Publication date: 1999-10-05
Also published as: US5658779A; EP0857204A1; CA2232622A1; WO1997011160A1; AU7376396A

Abstract

(57)【要約】生存力及び感染力を維持するウィルスの生物学的サンプルからなる溶液からの吸着方法。該方法は、溶液のｐＨをｐＨ６．０〜８．０に調節し；有効量の水に不溶性の架橋ポリカルボン酸ポリマー（ＷＣＰＰ）を該溶液に１００：１〜１：１０，０００の溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−溶液混合物を形成し；ＷＣＰＰ上にウィルスを固定化するのに十分な時間、該ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートして、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成し；および該マトリックスを該溶液から分離することからなる。上記新規な方法は、生存ウィルスおよびウィルスタンパク質や核酸等のウィルス成分を除去、精製、回収および分析するのに適切である。

Description

【発明の詳細な説明】液体組成物からのウィルスの吸着方法発明の分野タンパク質を含む水性培地からの生存力及び感染力を維持するウィルスの吸着方法。発明の背景公知のウィルスやウィルス核酸の精製方法は、重要な欠点や短所を有する。宿主細胞や増殖培地から細菌や哺乳動物ウィルスを純化する公知のプロトコルは、一般的に３つの段階からなる。まず、ウィルスは、宿主細胞から遊離されなければならない。ウィルスを増殖させるのに使用される感染細胞を溶解するウィルスは、いうまでもなく、直接に増殖培地中に放出される。しかしながら、レオウィルス(reovirus)やアデノウィルス(adenovirus)等の、他のエンベロープを有さない(non-enveloped)ウィルスによっては、細胞の膜成分と結合するため、初めにこの材料から抽出しなければならない。細胞成分からエンベロープを有さない(n on-enveloped)ウィルスを抽出する一般的な方法は、シャトキン，エージェー(Sh atkin，A.J.)、プロックナショルアカデサイユーエスエー(Proc．Natl ．Acad．Sci．USA)、５４、１７２１（１９６５年）に記載されたようにフレオン１１３の存在下で細胞懸濁液をホモジネートすることによるものである。有効ではあるが、ウィルスを含むエアロゾルを生じかつ環境中にフレオンを放出するため、この方法を行うにあたっては注意を要する。第二に、ウィルスは、実際に純化する前に濃縮されなければならない。二つの方法がウィルスを濃縮し、部分的に純化するために用いられる。ウィルスを、マーイビーダブリュージェー(Mahy B.W.J.)著、ビロロジー，アプラティカルアプローチ(Virology,a practical approach)、ワシントンディーシー(Washington D.C.)（１９８５年）で論じられるのと同様にして、硫酸アンモニウムまたはポリエチレングリコールを添加することによって沈澱させる。しかしながら、この方法は一般的に組織培養培地中に存在する多くのタンパク質をも一緒に沈澱させるため、ある程度ウィルスサンプルの純度が減少する。または、サンプル中のウィルスを超遠心によりペレット化して、上清の多くの可溶性タンパク質を除去し、さらに少量のバッファーにウィルスを再度溶かすことによって、ウィルスの濃縮を達成してもよい。第三に、濃縮されたウィルスは外因性の材料から純化されなればならない。この純化工程の最終段階は、通常、密度勾配超遠心を用いる分画形態によって行われる。例えば、ピコルナウィルスは、従来、ルーカートアールアール(Ruecker t，R.R.)及びエムパランスク(M.Pallansch)（１９８１年）、メソッズインエンザイモロジー(Methods in Enzumology)、７８、３１５〜３２６に記載される、２種の分染法のうちの一つによって純化されていたが、レオウィルスの純化は、スミスアールイー(Smith,R.E.)ら、ビロロジー(Virology)、３９、７９１（１９６９年）に記載されたように、ショ糖密度勾配による沈降バンディング (sedimentation banding)、および塩化セリウムによる密度平衡バンディング(de nsity equilibrium banding)を伴う。生物学学的液体、生物学学的液体からなる水性懸濁液または水溶液からウィルスを単離する上記公知な方法は、非常に長い時間または遠心のための高価な設備を必要とし；さらに高価な設備および／または有毒な化学物質の使用を必要とする。ウィルス単離技術を改良する一つの方法としては、選択的に固体材料上のウィルスを吸着することがある。理想の吸着剤は、液体懸濁液の外因性材料からある条件下でウィルスを選択的に吸着し、異なる条件下で生存ウィルスを脱離することによって、ウィルス粒子の物理的分離が可能である。種々の合成ポリマー材料がこの取り組みに使われてきた。米国特許第３，２２４，９４１号及び第３，６８４，７７７号の架橋性水溶性ポリマーは、吸水しかつウィルスを吸着または不活化すると報告される。米国特許第４，２７１，０２８号水溶性ポリマー材料は、ｐＨ５〜１０の範囲でウィルスを吸着することが報告される。水不溶性である合成ポリマー材料もまた、ウィルスを吸着する試みに使用された。しかしながら、これらの殆どはｐＨに非感受性であり、そのためｐＨの変化でウィルスの脱離が起こらない。ジョンソン(Johnson)ら、ネーチャー(Nature) 、６６５−６６７（１９６７年）の材料は高希釈水性液体からウィルスを吸着するのに有用であると報告され、また米国特許第４，４２１，６５３号の材料は、ウィルスなどのタンパク質を吸着することが報告された。研究者は、酸性のｐＨでウィルスを吸着し、かつ高いｐＨでウィルスを脱離する合成水不溶性ポリマー材料を使用した。しかしながら、これらの材料は、一般的に、極めて多量の飲用水を処理するために使用される。ウォリス(Wallis)ら、アプライドミクロバイオロジー(Applied Microbiology)、１００７〜１０１４（１９６９年）；ウォリス(Wallis)及びメルニック(Melnick)、７０３〜７０９（１９７１年）；およびウォリス(Wallis)ら、アプライドミクロバイオロジー (Applied Microbiology)、７４０〜７４４（１９７２年）。米国特許第３、３９８、０９２号に開示されたポリマー材料等の、より少ない容積の水性材料からウィルスを除去するために使用される材料は、水中に存在するウィルスを除去するまたは不活性化することが報告される。プロメガコーポレイション(Promega Corporation)（メジソン，ダブリューアイ(Madison，Wi)）製のラムダソルブ（商標）（LambdaSorb^R）は、水性懸濁液からウィルス粒子（特に、バクテリオファージλ粒子）を除去するのに有用であるといわれる別の固体材料である。この材料は、固定化スタフィロコッカスアウレウス(Staphylococcus aureus)細胞及びバクテリオファージλ粒子に対するウサギのポリクロナール抗体との複合体(conjugate)である。この吸着剤を、細菌細胞溶解産物と振盪し、次いで１時間未満の時間、１２，０００×ｇで遠心すると、吸着体及び結合した細菌ウィルスが除去される。この吸着剤の水性懸濁液は、溶解産物に対する吸着剤の容積比が１：１００で用いられる。明らかに、バクテリオファージはラムダソルブ(LambdaSorb)から脱離せず、結合したバクテリオファージ粒子の破壊のみが開示される。水性懸濁液からタンパク質を除去するためのに有用であることが報告される合成ポリマー材料は、クルペイ(Krupey)の米国特許第５，２９４，６８１号、第５，４５３，４９３号および第５，５３４，５９７号に記載されている。これらの材料は、水不溶性ポリカルボン組成物である。これらを約１５分間タンパク質含有懸濁液に添加、混和することにより、ポリマータンパク質マトリックスが形成できる。組成物の置換基によって、懸濁液のｐＨはｐＨ３から７．５である。マトリクスを懸濁液から取り除いた後、結合したタンパク質は、必要であればマトリクスペレット１容積に対して０．５〜２％（ｗ／ｗ）の界面活性剤の存在下で、ｐＨ８．６〜９．５のバッファー溶液中でマトリクスを洗浄することによって放出されることが記載される。ウィルス核酸の精製技術は、通常、先に列挙された公知のウィルス純化段階、さらには界面活性剤またはグアニジンチオシアネート(guanidi ne thiocyanate)等の化合物によるウィルス粒子の破壊、遠心による核酸材料の一部を精製、および電気泳動からなる。公知のウィルス純化方法の欠点、時間がかかりまた高価な設備を使用し、さらに有害な化合物を使用すること、は、ウィルス核酸を精製する方法にもあてはまる。これらの公知の方法を使用した哺乳動物ウィルスから精製された核酸は、細胞外培養液中に放出されたウィルスが宿主細胞やこれらの成分から大きく分離されるため、極めて純粋である。しかしながら、これらの方法を用いて細菌ウィルスから単離された核酸は、それほど純粋でないことが多い。従来精製されたバクテリオファージ核酸の電気泳動ゲルは、純化を示す単一のシャープなバンドが現れず、むしろ、既知のウィルス核酸分子の長さより長い分子を含む、多くの異なる長さの核酸の存在を示す、様々なバンドによる長いスミアが生じる。バクテリオファージλの核酸を単離する一般的な方法は、モレキュラークローニング、アラボラトリーマニュアル(Molecular Cloning, A Laboratory M anual)、第２版、サムブルック(Sambrook)ら、頁２．７３〜２．８１、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス(Cold Spring Harbor Laborato ry Press)（１９８９年）に開示されている。この方法において、遠心分離技術を用いて単離されたバクテリオファージ粒子は、熱にさらされること、界面活性剤（タンパク質変性剤）、ＥＤＴＡなどのキレート剤で破壊される。このような破壊によって放出された核酸は、フェノール／クロロホルム抽出により他のウィルス成分から単離、精製される。この方法ではタンパク質変性剤の存在にもかかわらず、精製されたバクテリオファージ核酸は、通常、ウィルス核酸を多くの小分子に分解する、バクテリオファージエクソヌクレアーゼを低レベル含む。バクテリオファージ核酸の公知の単離技術に関する現在の問題としては、熱や化学変性剤を使用するにもかかわらず、ウィルスのエキソヌクレアーゼ及び核酸結合タンパク質は生理活性を維持し、それぞれ放出される核酸に切断または結合するため核酸の有用性が非常に抑制されることがある。したがって、タンパク質及びウィルス核酸由来の他の外因性のウィルス材料を除去するための抽出段階が、しばしば必要となる。さらに、核酸を固体材料に吸着された細菌ウィルスから単離しようとすると、熱と界面活性剤を使用することにより大量のタンパク質が変性するため、非常に多量のウィルスタンパク質が破壊により固体材料から脱離し、これにより実質的な量のウィルスタンパク質を含む核酸が得られる。前述したラムダソルブ（商標）(LambdaSorb^R)もまた、バクテリオファージから核酸を単離するのに有用であることが報告される。固体に結合したバクテリオファージを破壊するために、ＥＤＴＡ存在下での熱を加える；次に、破壊されたバクテリオファージによって放出された核酸をフェノール／クロロホルム抽出で単離する。発明の要約本出願人は、クルペイ(Krupey)による米国特許第５，２９４，６８１号、第５，４５３，４９３号および第５，５３４，５９７号（全て参考のために引用される）の架橋水不溶性ポリカルボン酸ポリマーが、生物学的な液体からなる組成物から選択的にウィルス及びウィルス成分を吸着するのに使用し得ることを見出した。これらのポリマー材料は、サンプルから９９％までのウィルスを除去することができる。吸着されたウィルスは、より高いｐＨで脱離されると、生存しておりかつ正常な感染レベルを保持している。このように、ポリマー材料への吸着は、吸着されたウィルスの生存力を減少したりまたは破壊したりしない。本新規な方法と関連する利点は数多くある。公知技術に必須である高価な設備や有毒な化学薬品は本新規な方法では必要がない。タンパク質を含まない溶液からウィルスを吸着できた初期のポリマー材料とは異なり、本発明は、タンパク質を含む液体からウィルスおよびウィルス成分を結合、単離および抽出することができる。この新規な方法使用されるポリマー材料の吸着性はｐＨの機能であるため、ウィルスの簡単な簡便な吸着および脱離が可能である。結合したウィルスの脱離は、生存力及び感染力を損なわない。または、結合したウィルスの核酸（例えば、ＨＩＶの核酸など）が精製および／または複製できるように、結合したウィルスを破壊してもよい。結合したウィルスの破壊は、ウィルス核酸を放出するのみならず、ウィルスタンパク質を一般的に含まずに全非切断核酸を分解が得られる。さらに、この新規な方法は、全ウィルスまたは破壊されたウィルス成分、即ち、ウィルスタンパク質または核酸の吸着及び単離の速度、簡便性および効率を劇的に向上する。この新規な方法は、一連の単純な機械的段階を用いてウィルスを純化するため、自動化が可能である。ａ）溶液のｐＨをｐＨ６．０〜８．０に調節し；ｂ）水に不溶性の架橋ポリカルボン酸ポリマー（ＷＣＰＰ）を溶液に１００：１〜１：１０，０００の溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−溶液混合物を形成し；およびｃ）存在する少なくともあるウィルスをＷＣＰＰ上に固定するのに十分な時間、ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートして、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成し；およびｄ）マトリックスを溶液から分離する；ことからなる、ウィルスを含む生物学的サンプルからなる溶液からのウィルスの吸着方法を提供する。上記ＷＣＰＰは以下からなる群より選ばれるものである：ｉ）Ａ）下記式のアルファ，オメガジアミノヒドロキシアルカンで下記式のポリ（アルキレン無水マレイン酸）ポリマーを架橋し、さらにＢ）未反応の無水物基を加水分解することによって得られ、この際の初めに仕込まれる式（Ｉ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）に対する初めに仕込まれる式（ＩＩ）のジアミノヒドロキシアルカンのモル比が約１：１〜２００：１である、水に不溶性の架橋ポリヒドロキシポリカルボン酸；ｉｉ）式Ｈ₂Ｎ．（ＣＨ）_z．ＮＨ₂のアルファ，オメガジアミノアルカンで式（Ｉ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）ポリマーを架橋することによって得られ、この際の初めに仕込まれる式（Ｉ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）に対する初めに仕込まれるジアミノアルカンのモル比が約１：１〜２００：１である、水に不溶性の架橋ポリカルボン酸；ｉｉｉ）少なくとも２鎖を有し、各鎖は下記式の鎖骨格を有し、各鎖内の少なくとも一のマレオイル部分の一方のカルボニル基は、-ＨＮ.[(Ｈ)_p(ＣＨ)_z.(ＯＨ)_m].ＮＨ-部分 (IV) に共有結合して、少なくとも一の架橋単位の少なくとも２鎖間に存在させ、該架橋単位は以下からなる群より選ばれるものであり：および式（ＩＩＩ）のポリ（アルキレンカルボン酸）鎖の架橋単位の割合が約１：１〜約２００：１である、水に不溶性の架橋ポリヒドロキシポリカルボン酸；およびｉｖ）少なくとも２鎖を有し、各鎖は下記式の鎖骨格を有し、各鎖内の少なくとも一のマレオイル部分の一方のカルボニル基は、式Ｈ₂Ｎ．（ＣＨ）_z．ＮＨ₂のアルファ，オメガジアミノアルカンに共有結合し、この際の初めに仕込まれる式（ＩＩＩ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）に対する初めに仕込まれるジアミノアルカンのモル比が約１：１〜２００：１である、水に不溶性の架橋ポリカルボン酸。上記ＷＣＰＰの基において、Ｒはフェニルであり；ｑは７〜１０，０００の整数であり；ｚは１〜４の整数であり；ｐは０またはｚ−１までの整数であり；ｍは１またはｚまでの整数であり；およびｙはｍまでの整数である。さらに、このような群のＷＣＰＰにおいて、式（Ｉ）のポリマー及び式（ＩＩＩ）の鎖骨格における無水マレイン酸モノマーに対するスチレンモノマーのモル比は１：１である。本明細書に開示されるすべての試薬、高分子、酵素、細菌、ウィルス及び形質転換生物は、市販される、または公知の方法を使用することによって当該分野における通常の知識を有するものによって容易に生産できる。ＷＣＰＰは、好ましくは、上記水に不溶性の架橋ポリカルボン酸ポリマー、即ち、ポリマーｉｉ）またはｉｖ）からなる群より選ばれる。溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合は１：１〜１：１０であってもよい。上記方法において、ＰＨ−感受性ＷＣＰＰは、ｐＨ６．０〜８．０の培地中に存在する際に、ウィルスを吸着することができる。したがって、生物学的サンプルからなる溶液のｐＨは、ＷＣＰＰを上記溶液に添加する前または後に、ｐＨ６．０〜８．０に調節されてもよい。上記方法のウィルスは、細菌、植物及び動物ウィルスからなる群より選ばれる。適当な動物ウィルスとしては、哺乳動物のエンベロープを有する(enveloped) 及びエンベロープを有さない(non-enveloped)ウィルスが挙げられる。本新規な方法における好ましいウィルスは、細菌ウィルス及びエンベロープを有さない(n on-enveloped)哺乳動物のウィルスである。本新規な方法に関して本明細書中で使用される「溶液」ということば（「生物学的サンプルからなる溶液」及び「ＷＣＰＰ−溶液混合物」ということばにおけるなど）は、ＷＣＰＰのウィルス吸着能を干渉しない水及び必要であれば一以上の水混和性溶剤からなる、水溶液、または基本的に水性な溶液(aqueous-based s olution)または懸濁液を意味するものと解する。「溶液」（「１０％ホルムアルデヒド溶液」または「溶出用溶液」など）はそのことばの標準的な化学的な意味を有することは内容から明らかである。「生物学的サンプル」ということばは、「溶液」中に溶解、分散または懸濁できる生体源(biological source)由来の気体、液体または固体材料を意味するものと解する。生物学的サンプルは、好ましくは、加工(processing)せずに「溶液」中に、生体源から直接、仕込まれる。または、生物学的サンプルは、好ましくは、溶液に添加される前に予め加工されてもよい。例えば、血液を遠心して、溶解性や分散性を向上させることにつながる白血球または固体生体材料を除去してもよい。細菌ウィルスが源である適当な生物学的サンプルとしては、以下に、制限されるものではないが、細菌細胞溶解産物または清澄液、および細菌増殖培地の上清が挙げられる。植物ウィルスが源である適当な生物学的サンプルとしては、以下に、制限されるものではないが、基本植物組織、植物細胞溶解産物及び植物細胞培養液の上清が挙げられる。動物ウィルスが源である適当な生物学的サンプルとしては、以下に、制限されるものではないが、呼気；唾液、痰、吐物、リンパ、涙、血液、血清、血漿及び他の血液誘導体、脊髄液、滑液、精液、月経液、尿、組織培養上清、組織培養溶解産物、器官培養上清及び器官培養溶解産物；および組織、皮膚、ケラチン、及び糞由来物質が挙げられる。気体及び固体の生物学的サンプルは、当業者に既知の手段によって「溶液」中に溶解してもあるいは懸濁してもよい。好ましい哺乳動物の生物学的サンプルとしては、血漿、全血及びその画分、及び細胞培養増殖培地上清が挙げられる。本方法は、ＷＣＰＰを溶液に添加する前または後に、サンプル１容積当たり０．０１容積または重量％〜１０容積または重量％までの、０．０５容積または重量％〜１容積または重量％までの及び０．０１容積または重量％〜０．４容積または重量％までの量の界面活性剤を溶液に添加する段階からさらになってもよい。好ましくは、界面活性剤の量は、サンプル１容積当たり０．１〜１．０容積または重量％である。上記した段階によって、生物学的サンプルからなる溶液からウィルスを吸着し；および上記段階によって形成されたＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを溶液から分離して、実質的にウィルスを含まない上清を得る段階からなる生物学的サンプルからなる溶液からのウィルスの除去方法がさらに提供される。上記ウィルスの除去方法において、溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合は１：１〜１：１０であり、かつ生物学的サンプルは血清、血漿、全血及びその画分、ならびに組織培養上清からなる群より選ばれる。得られた実質的にウィルスを含まない上清は、特に、初期溶液または生物学的サンプルが病原性ウィルスを含むことが疑われる血液またはその画分である際に、有用な製品である。このようなウィルスの除去によって、このような血液またはその画分は取り扱ったり捨てたりする保健所の職員(health care wor ker)にとってより安全なものになる。さらに、このようにして病原性ウィルスを除去することによって、ウィルス疾患にかかっている患者に治療を目的とする処置を施すことができる。したがって、例えば、このような患者の血清に上記ウィルス除去方法を施して、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを除去した後、患者の血流に戻してもよい。生物学的サンプルからなる溶液からのウィルスの濃縮方法がさらにまた提供される。上記方法は、上記した生物学的サンプルからなる溶液からのウィルスの吸着方法の段階からなり、さらにｐＨ８．０〜１１．０の溶出バッファー中にＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを再懸濁することによってマトリックスから固定化ウィルスを脱離し；および濃縮形態の溶出バッファーから脱離したウィルスを集める段階からさらになる。溶出バッファーの容積が初期サンプル容積に比べて大きい際には、脱離段階の後に遠心してウィルスペレットを形成してもよい。したがって、ペレットを集めることによって、より少量の、即ち、濃縮形態の、ウィルスが提供される。さらに、ウィルスからのウィルス核酸の単離方法もまた提供される。この方法の段階は上記した方法の段階と似ているが、この方法のウィルスは生物学的サンプルから得る必要がない。この方法は、ウィルス源にかかわらずウィルスの核酸を単離するのに使用される。この方法は、以下の段階からなるものである：ａ）ウィルスを水溶液中に懸濁し；ｂ）この溶液のｐＨを６．０〜８．０に調節し；ｃ）ＷＣＰＰを溶液に１００：１〜１：１０，０００の溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−溶液混合物を形成し；ｄ）存在する少なくともあるウィルスをＷＣＰＰ上に固定するのに十分な時間、ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートして、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成し；ｅ）溶液からマトリックスを分離し；ｆ）分離したマトリックス上に固定化されたウィルスを破壊して、その核酸を放出させ；およびｇ）当業者に既知の手段によって破壊されたウィルスから放出されたウィルス核酸を単離する。この方法の一実施態様によると、ウィルスは生物学的サンプルからなる溶液中に存在するウィルスであり、さらに得られたウィルス核酸は実質的に宿主細胞核酸を含まない。この方法で単離された核酸は、２本鎖または１本鎖のデオキシリボ核酸またはリボ核酸であってもよい。この方法は、ウィルス核酸を単離する速度、簡易性および効率、さらにはそれらから得られる純度および収量を劇的に向上する。この新規な方法は、非生物学的なものを起源とする固相を利用して細菌ウィルスを結合させるものであるが、サンプルの操作や取り扱いを単純化し、そのため公知の方法に比べて低コストである。この方法は、広範に使用されるポリエチレングリコール／フェノール−クロロフォルム法のような公知の方法よりも、より少ない量の宿主ＤＮＡ及びＲＮＡでより高い核酸の収率が得られる。核酸の放出のためにウィルスの精製や破壊に使用される有毒な溶媒は、この新規な方法では使用されない。ウィルスを吸着する方法に関していえば、ウィルス核酸を単離する本方法は、一連の簡単な機械的な段階を採用しているため、自動化が可能である。前記のように、これらの方法におけるウィルスは、細菌ウィルス、好ましくはバクテリオファージλ、Ｔ２、Ｔ４、Ｔ７、Ｐ１またはＭ１３であってもよい。ウィルスが細菌ウィルスの場合には、生物学的サンプルからなる溶液からの細菌ウィルスの吸着方法が提供される。上記方法は、次の段階からなる：ａ）細菌ウィルスを有することが知られる細菌の培養物を培養し；ｂ）この培養物の細菌を溶菌して、清澄液を形成し；ｃ）清澄液のｐＨをｐＨ６．０〜８．０に調節し；ｄ）有効量のＷＣＰＰを清澄液に１００：１〜１：１０，０００の清澄液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成し；およびｅ）ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを溶液から分離する。細菌を溶菌する段階は公知の手段（細菌細胞を超音波処理または破壊を化学的に誘導するなど）によって積極的に誘導してよく；またはウィルスの溶菌成長サイクル終了させてもよいと解される。さらに、ウィルスが細菌ウィルスの場合には、ウィルス核酸がいかなる細菌宿主細胞の核酸に対しても実質的に純粋なように、生物学的サンプルからなる溶液中に存在する細菌ウィルスから核酸を単離する方法が提供される。この方法は、上記生物学的サンプルからなる溶液から細菌ウィルスを吸着し；固定化細菌ウィルスを破壊し；および破壊された細菌ウィルスから放出された核酸を単離する段階からなる。破壊は、当業者に既知の手段、例えば、分離したＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスをキレート剤溶液、好ましくは１ｍＭ〜１００ｍＭＥＤＴＡで洗浄することによって行うことが好ましい。分離されたＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスの洗浄は２５〜８０℃で行うことが好ましい。核酸は、当業者に既知の手段で単離されることが好ましい。これらの方法におけるウィルスが哺乳動物ウィルスである場合には、アデノウィルス；ＨＩＶ−１；レオウィルス；ライノウィルス；およびそれらの遺伝操作による変異体からなる群より選ばれるものが好ましい。好ましくは、これらの方法におけるウィルスは、アデノウィルス；ＨＩＶ−１；レオウィルス；ライノウィルス及びそれらの遺伝操作による変異体からなる群より選ばれる哺乳動物のウィルスである。ウィルスが哺乳動物ウィルスの場合には、生物学的サンプルからなる溶液から哺乳動物ウィルスを吸着する方法が提供される。通常、ライノウィルスと関連する酸感受性にかかわらず、これらのウィルスは、新規な本方法のポリマーに吸着し、その後、脱着する際に、通常のレベルの感染力を保持することが見出される。この方法において、生物学的サンプルは哺乳動物の体液、および細胞培養液の上清からなる群より選ばれる。ＷＣＰＰと接触させる前に、サンプルは前処理してｐＨ６．０〜８．０に調節される。必要により、界面活性剤を加えてもよい。この方法における溶液に対するＷＣＰＰの容積比は、１：１〜１：１０が好ましい。より具体的には、生物学的サンプルは、血液、血清、血液誘導体、精液、尿、月経液、脊髄液、滑液、組織培養上清、組織培養溶解産物、器官培養上清及び器官培養溶解産物からなる群より選ばれる。好ましい生物学的サンプルとしては、血漿、全血及びその画分、及び細胞培養増殖培地上清が挙げられる。さらに、哺乳動物ウィルスはアデノウィルス、ＨＩＶ−１、レオウィルス、ライノウィルスおよびそれらの遺伝操作による変異体からなる群より選ばれる、生物学的サンプルからなる溶液からの哺乳動物ウィルスの濃縮方法が提供される。この方法は、上記の方法に従って、６．０〜８．０のｐＨの溶液から哺乳動物ウィルスを吸着し；この溶液からＷＣＰＰ−ウィルス複合体を分離し；およびポリマーを８．０〜１１．０のｐＨを有するバッファー溶液で洗浄することによって、マトリックスから固定化ウィルスを脱離する段階からなる。オリジナルな生物学的サンプル（細胞培養上清、血液またはその画分など）が病原性ウィルスを含む場合には、この方法の上清生成物はその取り扱い及び廃棄が安全となる。さらに、単離される核酸が実質的に哺乳動物宿主細胞核酸に対して純粋であるように、哺乳動物ウィルスの核酸を単離する方法が提供される。この方法には、上記した方法に従って生物学的サンプルからなる溶液から哺乳動物ウィルスを吸着し；生物学的サンプルからなる溶液からウィルスが固定化されたＷＣＰＰを分離し；ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックス上に固定化されたウィルスを破壊し；さらに当業者に既知の手段によって破壊されたウィルスから放出されたウィルス核酸を単離する段階からなる。この方法において、細菌ウィルスの核酸に関しては、破壊する段階は、化学変性剤（界面活性剤、カオトロピニズム塩およびタンパク質分解酵素）；ＥＤＴＡなどのキレート剤；または熱などの物理的条件などの、公知の技術によって行われることが好ましい。また、本発明は、ＷＣＰＰおよび製薬上許容される賦形剤からなる組成物を提供するものである。これらの組成物は、周囲領域からウィルスを吸着、分離するために局所的に適用される。したがって、本組成物は、以下に制限されないが、皮膚クレンザー、防腐配合物および避妊ゲルなどの、薬剤、治療または予防製品においてウィルス抑制効果(virustatic effect)を目的として使用される。また、上記した生物学的サンプルからなる溶液からウィルスを吸着じ；固定化ウィルスを破壊し；ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートして破壊されたウィルスタンパク質を再吸収させて、ＷＣＰＰ−タンパク質マトリックスを形成し；およびこのＷＣＰＰ−タンパク質マトリックスを溶液から除去する段階からなる、生物学的サンプルからなる溶液からウィルスタンパク質を精製する方法が提供される。さらに、この方法の変形、すなわち、溶液から除去されたＷＣＰＰ−タンパク質マトリックスをｐＨ８．０〜１１．０のアルカリバッファー中に再縣濁し；さらにマトリックスから放出されたウィルスタンパク質をバッファーに集める段階からさらになる、実質的にウィルス核酸を含まないウィルスタンパク質を単離する方法もまた提供される。このようなｐＨで、上記ウィルスタンパク質は脱離し、これにより実質的に核酸を含まないウィルスタンパク質を集めることができる。図面の説明図１は、ＤＮＡを電気泳動させたアガロースゲルの３レーンの写真である。既知の分子量を有する標準的な化合物を、レーン「Ｍ」に電気泳動した。ＰＥＧ／フェノール−クロロフォルム抽出によって単離されたバクテリオファージλのＤＮＡはレーン１に電気泳動された。新規な本方法を用いて単離されたバクテリオファージλのＤＮＡはレーン２に電気泳動された。図２は、新規な本方法に従って精製されたＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩ（レーン１）またはＳａｌＩ（レーン２）のいずれかで消化した別のアガロースゲルの写真である。既知の分子量を有する標準的な化合物を、レーン「Ｍ」に電気泳動した。実施熊様の詳細な説明定義本明細書中に用いられる略語は次のように定義される：ＥＤＴＡエチレンジアミン四酢酸ＦＢＳウシ胎児血清ＨＥＰＥＳＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２− エタンスルホン酸ＨＲＶヒトライノウイルスＭＥＳ２−[Ｎ−モルホリノ]エタンスルホン酸ｐｆｕプラク形成単位ＳＭバッファー５０％ｍＭトリス（Ｔｒｉｓ）、ｐＨ８．０、１０ｍＭＭｇＳＯ₄、０．１％ゼラチンＴＣＩＤ５０５０％の組織培養物を感染させるために必要な組織培養物感染投与量（またはウィルス希釈液）水不溶性ポリカルボン酸ポリマー式（Ｉ）の括弧内に示される原子の記号は、ポリマーの繰り返し単位を表し、ｑは、ジアミノヒドロキシアルカンでポリマーを架橋する前の、ポリマーの上記単位の数を示す。ｑで表される単位は、７〜１０、０００の範囲で変化する。Ｒがフェニルであり、ｑが７〜約２５０である上記ポリマーは、サイエンテフィックポリマープロダクツインコーポレイテッド(Scientific Polymer Pr oducts，Inc.)、オンタリオ、ニューヨーク、米国(0ntario，New York，U.S.A.) より、スチレン−無水マレイン酸共重合体の名称で入手できる。また、ｑが７から１０であるポリマーもまた、サイエンテフィックポリマープロダクツインコーポレイテッド(Scientific Polymer Products，Inc.)およびアトケムインコーポレイテッド(Atochem Inc.)、グレートバレイパークウェイ、マルバーン、ピーエー、米国(Great Valley Parkway，Malvern，PA，U.S.A.)から入手できる。式（ＩＩ）において、ｚは１〜４の整数であり、ｐは０またはｚ−１までの整数であり、ｍは１またはｚまでの整数である。式（ＩＩ）の各（ＣＨ）基は、１個の水酸基が結合する、または水酸基を持たないかのいずれかであると解される。全架橋部分は、少なくとも一の水酸基を有し、架橋鎖において１個の（ＣＨ）基当たり１個までの水酸基、すなわち２個のアミド基間にｚ個までの水酸基を有してもよい。式（ＩＩ）のアルファ，オメガジアミノヒドロキシアルカン等のアルファ，オメガジアミノヒドロキシアルカンは、例えば、１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン（アルドリッヒケミカルシーオー(Aldrich Chemical Co.)、ミルウォーキー、ダブリューアイ(Milwaukee,Wl)）など、市販している。水不溶性架橋ポリヒドロキシポリカルボン酸中に残っている無水物基は加水分解される。ＷＣＰＰにおける初めに仕込まれるポリ（アルキレン無水マレイン酸）に対する初めに仕込まれるジアミノヒドロキシアルカンの割合は、１に対して約１〜約２００（モル／モル）である。ＷＣＰＰｉ）は、式（Ｉ）のポリマーを式（ＩＩ）のアルファ，オメガジアミノヒドロキシアルカンで架橋し、さらに未反応無水物基を加水分解することによって作製される。式（Ｉ）の一容のポリ（アルキレン無水マレイン酸）を反応容器に加える。式（ＩＩ）のアルファ，オメガジアミノヒドロキシアルカンもまたこの反応容器に加える。初めに仕込まれるポリ（アルキレン無水マレイン酸）に対する初めに仕込まれるジアミノヒドロキシアルカンの割合は、１に対して約１〜約２００（モル／モル）である。架橋したポリヒドロキシポリカルボン酸組成物は、式（Ｉ）のポリマーを式（ＩＩ）のアルファ，オメガジアミノヒドロキシアルカンで架橋し、未反応無水物基を酸により加水分解して式（Ｖ）と（ＶＩ）の化合物の混合物を得ることによって作製される。このポリマレイン酸エステル（ＶＩ）は、室温で数時間、好ましくは少なくとも一晩、強塩基、好ましくは希釈アルカリ水溶液を用いて穏和に処理することによって、加水分解して親のポリオール（Ｖ）に容易に戻すことが可能である。混合物をアルカリ加水分解すると、実質的に純粋な式（Ｖ）の化合物が得られる。これは、具体的には、式（Ｉ）のポリマーをアルファ，オメガジアミノヒドロキシアルカンと、水中またはアセトンのような有機溶媒中で、１〜５時間混合し、次にこの反応混合物を、０〜２４時間、室温で放置することによって実施される。反応は、室温若しくは昇温して大気圧下で行うことができる。ジアミノヒドロキシアルカンは、架橋反応によって、式（Ｉ）のポリマーの無水物基をカルボキシルおよびアミド基に転化する。同時に、利用した反応条件による量で、連結するヒドロキシジアミド鎖中の水酸基によっては、無水物とさらに反応することによりエステル化され、相当する「ポリマレイン酸エステル（ＶＩ）」を形成する。この反応中あるいは反応後の時間において、未反応無水物基は水性媒体における加水分解によって（酸溶液を添加してｐＨを下げることによってなど）カルボキシル基に転化する。エステル化部分（ＶＩ）を含む混合物はタンパク質の除去に作用するが、これらのエステル部分を、アルカリ水溶液中、好ましくは希釈アルカリ、例えば０．０５〜０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液中で、好ましくは室温で約１２時間から約３６時間消化することによって加水分解し、純粋なポリヒドロキシ化合物（Ｖ）を得ることが好ましい。反応が完了した後、水相を混合物に加え、有機相を公知の方法により、好ましくは真空下における蒸発または水相を繰り返し洗浄する遠心によって除去し、さらに残留物を室温で乾燥することによって、ＷＣＰＰを得る。最後に、ペレットまたは固相を水または所定のバッファーに分散させる。生物学的な液体及び吸着するウィルス水性媒体は、除去されるウィルスを含む希釈若しくは非希釈の形態の生物学的な液体からなる。その液体は、細菌細胞溶菌産物、植物抽出物及びヒトの全血などの、広範な材料から選択される。単離されるウィルスが細菌ウィルスの場合には、本発明の方法に従って処理されるべき生物学的な液体は、細菌ウィルス宿主のサンプル由来である。液体は、宿主細菌の液体培養液、またはその上清；固相中で成長した細菌の縣濁液；宿主細菌の細胞溶菌産物；または大部分の細菌が細菌ウィルスによって溶菌される（清澄液）宿主細菌の液体縣濁液であってもよい。ＷＣＰＰを用いたウィルスの吸着および脱離ＷＣＰＰは、生物学的サンプルからなる水溶液からウィルスを吸着する方法で使用される。この方法は、有効量のＷＣＰＰを加えてＷＣＰＰ−ウィルスマトリクスを形成することからなる。ＷＣＰＰ−溶液混合物中のｐＨを約６．０〜約８．０とするＷＣＰＰ含有培養液のｐＨは約６．０から約８．０を超えないｐＨであることが望ましい。一点のｐＨが全てのウィルスを吸着させるために最良でないことに注意すべきである。これは、タンパク質及び他の材料から構成される表面を有する、ウィルスの構造に関する現在の知見に基づくものである。したがって、特定のウィルスを吸着するための最適なｐＨは、例えば、種々のｐＨ値で吸着したウィルスの割合（％）を評価することによって、過度の実験をすることなく当業者に既知の方法によって、決定される。（同様にして、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスから結合ウィルスを脱離するのに最良であるｐＨは一つではないのである。あるウィルスを脱離するのに最良であるｐＨは、第２の、特にウィルス構造の異なるウィルスでは最良でないことが多い。したがって、繰り返すが、特定のウィルスを脱離する最適のｐＨは、例えば、種々のｐＨ値で脱離したウィルスの割合（％）を評価することによって、過度の実験をすることなく当業者に既知の方法によって、決定される。）ＷＣＰＰは、水性縣濁液または乾燥粉末の形態でウィルスを含有する水溶液に加えてもよい。ＷＣＰＰを、ウィルス含有水性媒体に加えられる前に、水性媒体中で縣濁する場合に、ＷＣＰＰ含有媒体のｐＨは、ｐＨが約７．５を超えない成分の混合後の媒体を得るために、約５．５〜約７．５である。または、必要であれば、本明細書に記載される方法は、生物学的サンプルからなる溶液をＷＣＰＰ粒子のベッドまたはそのフィルターを通すことによって行ってもよい。サンプルに対するＷＣＰＰの重量比は、ウィルスの目的とする除去度合いによって変化する。しかしながら、最適な比率は、ウィルスの濃度、処理される溶液中の生物学的サンプルの性質や濃度、ｐＨ値及びイオン濃を考慮して、それぞれの場合において決定することが好ましい。代表的には、ＷＣＰＰは、生物学的サンプルからなる溶液と、一定時間、好ましくは１〜６０分間、例えば、撹拌または反転後放置によって、よく接触させて、インキュベートする。ＷＣＰＰにウィルスを吸着させた結果、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスが形成される。マトリックスは、相分離に一般的な公知の方法（例えば、遠心、濾過または沈降）によって溶液から除去される。したがって、水不溶性相を除去することにより、ウィルス粒子が除去された上清が得られる。ウィルスのポリマーへの吸着が生じて、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスが形成された後、反応混合物を遠心して、ペレットとしてマトックスを回収することが望ましい。水不溶性相の除去を遠心によって行う場合には、遠心は約５〜１００，０００×ｇ、好ましくは５，０００〜２０，０００×ｇで０．２〜１０時間、または単位重力下で沈降させることによって実施されるべきである。１，３−ジアミノヒドロキシプロパンでスチレン無水マレイン酸（分子量５０，０００）を架橋することによって調製されたＷＣＰＰは、エンベロープを有さない(non-enveloped)ウィルスの結合に極めて効果的である。ライノウィルスの遺伝操作による変異体（例えば、下記実施例４におけるＨＲＶ１４：ＨＩＶＡ：２−１およびＨＲＶ１４：ＨＩＶＢ：１７−１、双方とも表面にＨＩＶ− １のＶ３ループ部分をディスプレイする(display)）、レオウィルス及びアデノウィルスに対する結合効率は、細胞培養物、上清および溶菌産物の９９％までであり、脱離後は感染粒子の約８０％までが回収される。ウィルスは、特殊なバッファー溶液または界面活性剤などのその他の抽出剤を用いて、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスから脱離される。ウィルスの除去は、調製または分析の目的であってもよい。バッファー溶液は、ｐＨ約８．０〜約１１．０のバッファーと共に、好ましくは１〜６０分間、マトリックスを撹拌(sti rring)、粉砕およびかきまぜること(agitate)によって、マトリックスからウィルスを分離するために使用される。マトリックスのペレットの１容当たり、ｐＨ約８．０〜約１１．０のバッファーが、約０．１〜約１０容使用される。バッファーは、０．０１％〜１０容積／容積％または重量／容積％の範囲の濃度の界面活性剤を含んでもよいトリスバッファーが好ましい。マトリックスを、ウィルスによって、ｐＨ約８．０〜ｐＨ約１１．０のバッファーで処理することによって、ウィルスを変性することなくマトリックスからウィルスを脱着する。好ましくは、マトリックスのペレットの１容当たり、ｐＨ約８．０〜約１１．０のバッファーが、約０．１〜約１０容使用される。本発明はこれに限定されるものでないが、バッファーがトリスバッファーの場合に優れた結果が得られた。レオウィルスおよびＨＲＶ１４：ＨＩＶＡ：２−１およびＨＲＶ１４：ＨＩＶＢ：１７−１などのライノウィルスの遺伝操作による変異体は、特にＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスから回収可能であることに注目すべきである。ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスからウィルスを脱離させる（およびウィルスを吸着させる）段階は、界面活性剤の存在下で行われてもよい。好適な界面活性剤としては、以下に限定されるものではないが、ツィーン−２０(Tween-20)、トリトンＸ−１００(Triton X-100)、β−オクチルグルコシド、エンピゲンビービー(Empigen BB)およびシーエッチエーピーエス(CHAPS)、ラウリル硫酸ナトリウムまたはＮ−ラウロイルサルコシン(N-lauroyl sarcosine)が挙げられる。溶液中の界面活性剤の好適な濃度は、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックス１容に対して約０．０１容積または重量％〜約１０容積または重量％、または０．０５〜１容積または重量％、または０．１〜０．４容積または重量％である。ウィルスをＷＣＰＰから脱離するまたはＷＣＰＰ上で破壊した後、次に使いやすいように、回収したＷＣＰＰを適当なバッファー中で洗浄することがさらに望ましい。タンパク質分解酵素、界面活性剤及び熱は結合するウィルス粒子を破壊することができるが、これらはまたタンパク質を変性する。したがって、ウィルスを破壊するのに上記を使用すると、ウィルス外被タンパクが変性し、これにより容易にＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスからウィルスが脱離しまたはウィルス粒子を破壊する。これにより、核酸の収率が低下し、高レベルのウィルスタンパク質がウィルス核酸中に放出する。タンパク質分解酵素、界面活性剤または熱をほとんどのタンパク質を変性させるレベルで使用しても、タンパク質の中には、強い結合により、ウィルス核酸に強く結合したままのものがある。これらの核酸分子は、結合タンパク質が核酸と酵素との相互作用を遮断できるため、利用可能性を限定した。したがって、新規な本方法では、結合したウィルスを破壊する化学変性剤を実質的に含まないキレート剤が好ましく使用される；得られる核酸は、ウィルスタンパク質性材料を実質的に含まない。キレート剤を単独で用いると、ＷＣＰＰのこの破壊により放出されたウィルスタンパク質の吸着能力を干渉せずに、ウィルス粒子を破壊できる。その上、ＤＮＡと結合するタンパク質は、そのようにするためにはＭｇ²⁺を必要とする。キレート剤は、ウィルスを分裂するばかりではなく、マグネシウムイオンをタンパク質から奪うことによって、それらを放出し、再結合を防止する。このように、キレート剤を新規な本方法で使用することによって、実質的にウィルスのタンパク質性物質を含まない核酸を得ることができる。ウィルス核酸の単離は、バクテリアファージλを用いて実施すると、特に好ましい。界面活性剤または熱でファージを破壊すると、バクテリオファージに含まれるエキソヌクレアーゼが放出する。たとえ、熱、タンパク質分解酵素または界面活性剤が存在していても、十分なレベルのバクテリオファージエキソヌクレアーゼの活性が一般的に残っており、ファージ核酸を有用性が抑えられた小片に切断される。これに対して、ＥＤＴＡなどのキレート剤を新規な本方法で使用して結合バクテリオファージを破壊する場合には、得られる核酸は、エキソヌクレアーゼによって分裂されず、結合タンパク質を持たない。したがって、細菌ウィルスの核酸を単離する際には、実質的に化学変質剤または変性条件を含まないキレート剤を用いて破壊段階を行うことが好ましい。本発明の概念を何等制限するものではないが、本出願人はＷＣＰＰが水性媒体からウィルスを吸着する機構を理解するために説明したい。沈殿能力は、水性媒体における溶解性の機能である。溶解性は、ウィルス粒子の疎水性の程度の少なくとも部分的な機能である。全てのウィルス粒子は、水性媒体と接触する表面に少なくとも疎水性部分を有する。本出願人は、ＷＣＰＰがウィルス表面上の種々の分子の疎水性部分を相互に近づかせ、水性媒体が６．０〜８．０のｐＨを有しつつウィルスが最後に沈降する程度にまで凝集すると考える。このことが起こる前に、ＷＣＰＰは、電荷吸引などの非共有相互作用によって一以上のウィルスと結合する。（ＷＣＰＰは、全てのタンパク質分子の様々な点、例えばアルギニン残基で、存在する部分的に陽性の電荷と相互作用できる多くの陰電荷を有する。）表面疎水性基によって課せられる水の局所的配列は熱力学的に好ましくない。結合水は、これらの無極性である疎水性基がお互いに相互作用し、凝集するときに、放出される。したがって、二以上のウィルスが、糸上のビーズのように、柔軟なＷＣＰＰと相互作用をするので、ＷＣＰＰ糸は、ウィルスが凝集するように種々のウィルス「ビーズ」の無極性部分を包むことができる。凝集したウィルスの数または大きさが十分に大きいときには、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスは単位重力下で沈降するであろう。さらに、本出願人は、ｐＨが８〜１１に変化すると、これらの相互作用が逆転し、それに付随してウィルスを放出すると理解する。ｐＨが６．０〜８．０でＷＣＰＰに吸着するウィルスは、ｐＨ８．０〜１１．０で脱離する。さらに、新規な本方法においてＷＣＰＰに結合したウィルスを破壊すると、従来のポリマー材料に結合した破壊ウィルスに比べてかなり少ないタンパク質が放出されると考える。ＷＣＰＰは、６．０〜８．０の周囲ｐＨでは遊離タンパク質性材料も吸着する傾向があるため、このように考えられる。したがって、ウィルスの破壊後に水性媒体中にＷＣＰＰが存在すると、ほとんどの放出されたウィルスタンパク質が再吸着されやすい。ＷＣＰＰに対して、ラムダソルブ(LambdaSorb)の各抗体は、個々のウィルス抗原に対して高い特異性を有する。ポリクローナル抗体は多くの異なる抗体を含んでいる。したがって、各ウィルスは、ＷＣＰＰとよりも極めて少ない結合によって固形材料と結合してると考えられる。その結果、結合ウィルスがラムダソルブ (LambdaSorb)プロトコル中で破壊されると、かなりより高レベルの破壊された遊離ウィルスタンパク質が媒体中に放出される。媒体中にラムダソルブ(LambdaSor b)が存在し続けることにより、ウィルスタンパク質の再吸収が制限される；しかしながら、各ほとんどの破壊されたウィルスタンパク質は、各タンパク質がそれに特異的な抗体に出会う可能性が低いとすると、遊離し続けると考えられる。したがって、ラムダソルブ(LambdaSorb)に結合したバクテリオファージの破壊により、新規な本方法に比べてかなりより多くのウィルスタンパク質を含む核酸が得られると考えられる。下記実施例は、本発明を詳細に説明するものであり、本発明を何等制限するものではない。実施例１サイエンティフィックポリマープロダクツインコーポレイテッド(Scienti fic Polymer Products，Inc.)、オンタリオ(Ontario)、ニューヨークから得られた、分子量５０，０００、酸価４０５の、スチレン／無水マレイン酸共重合体３０ｇ（０．０００６モル）を６００ｍｌのアセトン中に溶解する。この溶液に、２４時間、定常的に撹拌しながら、５．０ｍｌ／分の速度で、１．８リットルのアセトン中に６．６ｇ（０．０７３モル）の１，３−ダイク｝イノ−２ヒドロキシプロパン(1,3-dyq}ino-2 h ydroxy propane)（アルドリッヒケミカルカンパニー(Aldrich Chemical Com pany)、ミルウォーキー、ウィスコンシン(Milwaukee，Wisconsin)）を含む第二溶液を添加する。反応終了後、３リットルの水を撹拌しながら加えて、さらにポリマーを単位重力下で沈降させる。水性の有機相をデカンテーションによって除去する。架橋ポリマーを１リットルの水に懸濁して、ギフォードウッドホモゲナイザー(Gifford Wood homogenizer)（中間のセッティング）を用いて３０秒間、粉砕する。懸濁液のｐＨを塩酸を添加することにより１．５に調節する。１時間後、懸濁液を遠心し、水相を捨てる。次に、ペレットを１リットルの水に分散させ、懸濁液のｐＨを水酸化ナトリウムを添加することにより１０に調節し、混合液を２４時間撹拌する。さらに、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を最終濃度が１．０％（ｗ／ｖ）になるように添加する。続いて、この懸濁液を２時間撹拌し、遠心し、水相を捨てる。さらに、ペレットを１リットルの水に再懸濁し、遠心し、水相を捨てる。この再懸濁及び遠心のプロセスを、残存するＳＤＳを除去するために、少なくとも２回繰り返す。さらに、ポリマーを含むペレットを蒸留水に分散させ、約１．５のｐＨまで塩酸を加えることによって酸（Ｈ⁺）形態に変換する。次に、懸濁液を遠心し、上清を捨てる。続いて、ペレットを、洗浄上清のｐＨが５に達するまで、繰り返し蒸留水で洗浄、遠心する。さらに、ポリマーを０．０１Ｍピペラジン−Ｎ，Ｎ ’−ビス−２−エタンスルホン酸(piperazine-N,N'-bis-2-ethane sulphonic ac id)（ＰＩＰＥＳ）バッファー、ｐＨ６．２、で洗浄し、最後に、上記緩衝液中に懸濁して、３．０％（ｗ／ｖ）の懸濁液を得る。実施例２バクテリオファージλは、ｃＤＮＡクローニング、ゲノムＤＮＡクローニング及び配列決定用のＤＮＡの単離さらにはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に有用な可変性のクローニングビヒクルである。新規な本方法によって単離されるバクテリオファージλ ＤＮＡの純度を、公知のＰＥＧ／フェノール−クロロホルム抽出によって得られる純度と比較する。大腸菌(Escherichia coli)Ｋ１２の２枚のプレート（１５０ｍｍ）に、ファージのコンフルエントなプレートを作製する密度の組換バクテリオファージλ ｇｔ１１（ストラタジーンクローニングシステムズ(Stratagene Cloning Syst ems)、ラジョラ、シーエー(La Jolla，CA)により市販）を播種し、３７℃で６時間、インキュベートする。プレート表面を５０ｍｌの遠心管中の１０ｍｌのＳＭ（ｐＨを６．９に調節）中に削り落とす。このプレート洗浄液を、４５００ｒｐｍ（１０００×ｇ）で１０分間、５０ｍｌのコニカルチューブ中で回転させる。上清を新たな５０ｍｌの遠心管に除去する（約１０ｍｌ）。１容（上清の容積の半分）の実施例１のＷＣＰＰを遠心管に添加し、室温で５分間インキュベートして、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成した後、２５００ｒｐｍ（５００×ｇ）で５分間回転させる。ペレットを、５０ｍｌのＳＭ（ｐＨ６．９）で２回洗浄する。ペレットを５．０ｍｌの１０ｍＭトリス、１ｍＭＥＤＴＡ（ＴＥ、ｐＨを６．９に調節）に再懸濁し、６５℃で１０分間インキュベートして、バクテリオファージ粒子を破壊し、核酸を放出させる。核酸をエタノール沈殿させ、５０μ ｌのＴＥに再懸濁する。このトリスバッファーについて、１０μｌのバッファーを１％アガロースゲル上で泳動することによって、ＤＮＡの存在を調べる。１μｇの再懸濁された核酸を制限酵素ＥｃｏＲＩ及びＳａｌＩで処理する。次に、酵素処理されたバクテリオファージλ ＤＮＡを１％アガロースゲル上で泳動して、写真に撮った。ＰＥＧ／フェノール法を用いてＤＮＡを抽出するプロトコルは、プロメガインコーポレイテッド(Promega，Inc.)（１９９４年）によって公表された、プロメガ(Promega)「プロトコルズアンドアプリケーションズガイド(Protocol s and Applications Guide)」から採用し、参考のために引用する。バクテリオファージλを含む上清を上述のとおり得る。等容のバクテリオファージの上清及び沈殿バッファー（２０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ８０００、２ＭＮａＣｌ）を混合し、６０分間氷上でインキュベートする。この混合物を４℃で４５００ｒｐｍ（１０００×ｇ）で２０分間回転させた後、１．０ｍｌのファージバッファー（２０ｍＭトリス（ｐＨ７．４）、１００ｍＭＮａＣｌ１０ｍＭＭｇＳＯ₄ ）中に懸濁する。再懸濁されたペレットを１容のＴＥ−飽和フェノール／クロロホルムで２回抽出して、さらに１容のＣＨＣｌ₃：イソアミルアルコール（２４：１）で１回抽出する。抽出物を−７０℃で２０分間、等容のイソプロパノールで沈殿させる。抽出物を１０分間ミクロフュージ(microfuge)（１４，０００×ｇ）で最大速度で回転させて、ＴＥ中に再懸濁する。公知の及び新規な方法によって精製されたバクテリオファージλ ＤＮＡのバンドを、それぞれ、図１のレーン１及び２に示す。レーンＭは異なる既知の分子量を有する化合物のバンドを示す。レーン１の長いしまは、多くの異なる長さの核酸分子が存在することを示す。広い明るいバンドの上にあるものはバクテリオファージλのものより大きなポリヌクレオチドである；すなわち、長いしまは宿主細胞細菌ＤＮＡの混入物であることが示される。これに対して、レーン２から、新規な本方法を用いて単離されたＤＮＡはアガロースゲルで単一のシャープなバンドを形成することが示される。単一のバンドの存在は、公知の方法でバクテリオファージから抽出されるＤＮＡ中にしばしば存在しかつこのＤＮＡに非常に有害である、バクテリオファージλのエキソヌクレアーゼのエキソヌクレアーゼ活性が新規な本方法を用いて得られたＤＮＡでは存在しないので、非常に意義がある。さらに、新規な本方法では、公知の方法を行うのに必要な時間のおおよそ半分の時間で上記ＤＮＡが得られる。したがって、新規な本方法は、バクテリオファージλ ＤＮＡをより迅速に生産し、公知の方法による宿主細菌の核酸不純物を実質的に含まない。実施例３精製バクテリオファージλ ＤＮＡは、バクテリオファージタンパク質がＤＮＡと接触し続ける際には使用が制限される。既知の方法では、タンパク質が抽出中を通してファージＤＮＡに結合し続ける。これらのタンパク質は、ＤＮＡに結合すると、他の酵素がファージＤＮＡを切断するまたは複製するのを遮断するため、ファージＤＮＡの利用可能性を極端に抑制する。したがって、実施例２において新規な本方法を用いて単離されたバクテリオファージλ ＤＮＡを試験し、タンパク質が結合し続けるかどうかを決定した。上記測定は、ＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩ及びＳａｌＩで切断することによりなされる。バクテリオファージλ ＤＮＡの中心付近には、一対のＥｃｏＲＩ切断部位およびこのＥｃｏＲＩ部位と隣接する一対のＳａｌＩ切断部位がある。バクテリオファージＤＮＡがタンパク質に結合するか否かを決定するために、精製バクテリオファージλ ＤＮＡの第一サンプルをＥｃｏＲＩで処理し、第二サンプルをＳａｌＩで処理する。タンパク質がＤＮＡに結合していると、サンプルの一方または双方は、未切断の全バクテリオファージＤＮＡに相当するアガロース電気泳動ゲル上に１本の明るいバンドが形成する。しかしながら、タンパク質がＤＮＡに結合し続けない際には、双方の切断部位は利用でき、ＥｃｏＲＩまたはＳａｌＩのいずれかで処理すると、特徴のある切断産物群が得られる：λ ｇｔ１１の場合では、２つのＥｃｏＲＩ及びＳａｌＩ部位は相互に接近している；したがって、いずれかの制限酵素で切断すると、それぞれ、約２０ｋｂ長の、２種のポリヌクレオチドが得られる。実施例２においてバクテリオファージλ ｇｔ１１から新規な本方法によって単離された核酸サンプルを、制限酵素ＥｃｏＲＩまたはＳａｌＩで６０分間、処理する。次に、上記酵素処理されたＤＮＡ分子を、それぞれ、１％アガロースゲル上で電気泳動して、写真に撮った。図２に示されるように、新規な本方法で精製され、ＥｃｏＲＩまたはＳａｌＩのいずれかで処理されたバクテリオファージλ ＤＮＡサンプルは、単一の強い明るいバンドを生じる。この明るいバンドは、約２０ｋｂ長の２種のポリヌクレオチドに相当する。したがって、図２から、実施例２において新規な本方法によって精製されたバクテリオファージλ ＤＮＡはバクテリオファージタンパク質が結合しておらず、即ち、バクテリオファージタンパク質を実質的に含まないことが示される。実施例４下記試験は、４種の哺乳動物ウィルスの実施例１のＷＣＰＰへの結合能及び上記ＷＣＰＰからの抽出能を示すものである。４種のウィルスは、１）表面にＨＩＶ−１のＶ３ループの一部をディスプレイする(display)ヒトのライノウィルスの第一の遺伝子操作による変異体（ＨＲＶ１４：ＨＩＶＡ：２−１）；２）表面にＨＩＶ−１のＶ３ループの一部をディスプレイする(display)ヒトのライノウィルスの第二の遺伝子操作による変異体（ＨＲＶ１４：ＨＩＶＢ：１７−１）；３）レオウィルスタイプ３；および４）アデノウィルス（株Ａｄ５ｄ１３０９）。レオウィルスタイプ３は一般的に使用される株である。アデノウィルス株Ａｄ５ｄ１３０９を得る方法は、ジョーンズエヌ(Jones，N.)及びティーシェンク(T．S henk)、プロックナショルアカデサイユーエスエー(Proc.Natl.Acad．Sci. USA)、７６、３６６５〜３６６９（１９７９年）に記載される。ＨＲＶ１４：ＨＩＶＡ：２−１及びＨＲＶ１４：ＨＩＶＢ：１７−１を得る方法は、スミス (Smith)ら、ジェービロロジー(J．Virology)、６８、５７５〜５７９（１９９４年）に記載される。上記試験において、下記条件が使用される。キメラヒトライノウィルス、アデノウィルスＡｄ５ｄ１３０９及びレオウィルス３のウィルスストックを、それぞれ、Ｈ１−ＨｅＬａ（アールアールルーカート(R.R．Rueckert)、インスティテュートフォーモレキュラービロロジーアンドユニバシティーオブウィスコンシン(Institute for Molecular Virology and University of Wi sconsin)、およびパーデューユニバシティー(Purdue University)のミカエルジーロスマン(Michael G．Rossmann)から得た）、２９３及びマウスＬ細胞中で増殖させることにより調製する。使用する前に、ウィルス（具体的には、１．０×１０⁶〜５．０×１０⁸ｐｆｕ／ｍｌ）を含む各細胞培養物の上清を、必要であれば、１重量％のＮ−ラウロイルサルコシン(N-lauroyl sarcosine)を含む、５０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ６．５中で作製する。次に、各上清を、室温で１時間、３部の上清に対して１部のＷＣＰＰの重量比で実施例１のＷＣＰＰと共にインキュベートして、ウィルスとＷＣＰＰとのマトリックスを形成する。このマトリックスを、１６，０００×ｇで１分間、遠心することによりペレット化する。上清中に残る感染ウィルスの量を、標準的なプラーク形成検定を用いることによって定量した。プラーク検定は、ウシ胎児血清（５〜１０％）、及び抗生物質を補足した、レスニック(Resnick)ら、ジェービロロジー(J．Virology)、６９、２４０６〜１１（１９９５年）に記載されるのと同様にして調製される、ＭＥＭ培養液を用いて行う。ＨｅＬａ細胞はヒトライノウィルス及びアデノウィルスの定量に使用され、マウスＬ細胞はレオウィルスの定量に使用される。本プラーク検定において、ＨｅＬａまたはマウスＬ細胞の細胞単層に、２〜１０％ＦＢＳを含む培養液によるサンプルの一連の希釈液を接種し、３４．５℃で１時間、インキュベートし；０．５％〜１．０％寒天ノーベル(agar nobel)加培養液を重層し；３４．５℃ で３〜７日間、インキュベートする。次に、細胞単層を１０％ホルムアルデヒド溶液で固定し、クリスタルバイオレットで染色する。さらに、ペレット化マトリックスを、０．１５４ＭＮａＣｌを含むまたは含まない、ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ６．５で洗浄して、遊離ウィルスおよびマトリックスに結合しない他の材料を除去する。続いて、マトリックスを、以下に定義される条件のうちどれを選択するかによって、ＮａＣｌ（０．１５Ｍ〜０．２Ｍ）及び１％Ｎ−ラウロイルサルコシン(N-lauroyl sarcosine)を添加するあるいは添加しない１００〜２００ｍＭトリス、ｐＨ９．０〜９．５中に再懸濁する。上記プロトコルに従って精製される、Ａ：２−１と称されるライノウィルスの遺伝子操作による変異体を超遠心によって濃縮する。次に、濃縮ウィルスのサンプルを変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分析する。結果：４種のエンベロープを有さない(non-enveloped)ウィルスはすべて実施例１のＷＣＰＰに結合する（表１のデータに示されるとおり）。さらに、感染ウィルスがポリマーから溶出される条件を同定する。ヒトライノウィルスキメラＡ：２−１調製物の純度を超遠心による濃縮後に評価したことろ、Ｎ−ラウロイルサルコシンを結合段階に含ませると、ほとんど純粋であると判断される。他の界面活性剤についても、ヒトライノウィルスキメラＡ：２−１調製物の純度に関する効果を調べる（結果は示さず）。ツィーン−２０、トリトンＸ−１００、β−オクチルグルコシド、エンピゲンビービー(Empigen BB)、及びシーエッチエーピーエス(CHAPS)はすべて、Ｎ−ラウロイルサルコシンほど有効ではない。この結果は、上記界面活性剤のいずれかまたはすべてが他のウィルスの精製に有効でないことを意味するものではない。表２及び３における実験１以外は、下記表の各値は少なくとも２試験操作の平均値である；アスタリスク（＊）が記された値は、後に様々な溶出用溶液を受ける様々なグループに分けられる同じ実験操作内で複製されるサンプルの平均値である。下記表のブランク領域は、試験を行わなかったことを示す。条件１から５は表３に従って定義される。％Ｂ：結合率（％）％Ｅ：溶出率（％）（ＷＣＰＰに結合したウィルスの量に対する）条件３について示された結果は、４つの別の実験で得られる。％Ｂ：結合率（％）％Ｅ：溶出率（％）（ＷＣＰＰに結合したウィルスの量に対する）％Ｂ：結合率（％）％Ｅ：溶出率（％）（ＷＣＰＰに結合したウィルスの量に対する）条件１ −界面活性剤不存在下で行われる結合；使用される溶出バッファーは、１５０ｍＭトリス、ｐＨ９．０（ＨＲＶ１４：ＨＩＶＡ：２−１）または２００ｍＭトリス、ｐＨ９．５（Ａｄ５ｄ１３０９及びレオウィルス）である。条件２ −界面活性剤不存在下で行われる結合；使用される溶出バッファーは、１５４ｍＭＮａＣｌを含む２００ｍＭトリス、ｐＨ９．５（Ａｄ５ｄ１３０９）または１５０〜２００ｍＭＮａＣｌを含む２００ｍＭトリス、ｐＨ９．５（レオウィルス）である。条件３ −１％Ｎ−ラウロイルサルコシンの存在下で行われる結合；使用される溶出バッファーは、１５４ｍＭＮａＣｌを含む（レオウィルス、実験３及び４、およびアデノウィルスＡｄ５ｄ１３０９、実験３）または含まない（ＨＲＶ１４：ＨＩＶＡ：２−１、ＨＲＶ１４：ＨＩＶＢ：１７−１；レオウィルス、実験１；アデノウィルスＡｄ５ｄ１３０９、実験１）２００ｍＭトリス、ｐＨ９．５である。条件４ −界面活性剤不存在下で行われる結合；使用される溶出バッファーは、１３９ｍＭＮａＣｌ及び１％Ｎ−ラウロイルサルコシンを含む１８０ｍＭトリス、ｐＨ９．５である。条件５ −１％Ｎ−ラウロイルサルコシンの存在下で行われる結合；使用される溶出バッファーは、１％Ｎ−ラウロイルサルコシンを含む１３５ｍＭトリス、ｐＨ９．０（ＨＲＶ１４：ＨＩＶＡ：２−１）である。（表２及び３におけるいくつかの「０」という試験結果はウィルスが存在しないという実際の測定結果を反映するものであるが、他のデータでは、ウィルスによっては、検定の感受性の限界であるような低いレベルではあるが、存在することを示すと理解すべきである。このような信頼性が低いと思われるデータから存在するウィルスの数を算出するのではなく、上記データは０に等しいと考える。）実施例５ＷＣＰＰのＨＩＶ−１への結合能をまた、ＨＩＶ−１ＩＩＩＢ株（参考のために引用される、ガロ(Gallo)ら、サイエンス(Science)、２２４、５００〜５０３（１９８４年）に記載され、および参考のために引用される、ホワイト−シャーフ(White-Scharf)ら、ビロロジー(Virology)、２１：１９７〜２００（１９９３年）の方法に従ってＨ９細胞中に調製されて、スーザンゾラ−パズナー(Susan Zolla-Pazner)から受け取る）のストックを用いて評価する。ＨＩＶ−１ＩＩＩＢストックを、１０％ＦＢＳ、４ｍＭまでのグルタミン、及び１００単位／ｍｌのペニシリンとストレプトマイシン、またはヒト血清、３５ｍＭＭＥＳ、ｐＨ６．０（未希釈、または２５ｍＭＭＥＳ、ｐＨ６．５、０．１５ＭＮａＣｌで１：２に希釈）が補足される、組織培養液（ＲＰＭＩ１６４０、（ギブコカンパニー(Gibco Company)、グランドアイランド、ニューヨーク(Grand Island，NY)、カタログ番号２１８７０−０７）中に希釈する。次に、希釈ストックを１：１または１：２の重量比でＷＣＰＰと混合する。室温で１時間後、ＷＣＰＰを遠心によってペレット化し、上清に残るウィルスの量を、１）逆転写酵素アッセイ；および２）ＷＣＰＰによる処理後に残る感染ウィルスの量（ＴＣＩＤ５０）の測定によって定量化し、バッファーのみを添加されるコントロールと比較する。ＴＣＩＤ５０値は、参考のために引用される、リード(Reed)及びミュエンチ(Muench)、アメルジェーハイジーン (Amer. J．Hygiene)、２７、４９３〜４９７（１９３８年）の方法を用いて算出する。逆転写酵素活性は、参考のために引用される、ウィリー(Willey)、ジェービロロジー(J．Virology)、６２、１３９〜１４７（１９８８年）の方法を用いて測定し、生成物中に導入される放射性標識の量をモレキュラーダイナミックス(Molecular Dynamics)（サニーベイル、シーエー(Sunnyvale，CA)）製のホスホ−イメージャー(phospho-imager)（４００Ｅモデル）を用いて定量化した。ＷＣＰＰのエンベロープを有する(enveloped)レトロウィルスであるＨＩＶ− １との結合能を調べるために、１容の実施例１のＷＣＰＰを、上記ＲＰＭＩ１６４０細胞培養液またはＨＩＶ−１を含むヒト血清に添加する。存在するＨＩＶ−１のレベルを、以下の２サンプル中に存在する逆転写酵素（ＲＴ）活性の減少を測定することによって測定する；第一はＨＩＶ溶液に対するＷＣＰＰの容積比が１：１であり、第二はこの比が１：２である。また、ＨＩＶ −１レベルを、２個の同様のサンプルにおける感染力価（ＴＣＩＤ５０）の減少を測定することによっても測定する。ａ：ウィルス溶液に対するＷＣＰＰの容積比ｂ：測定せず(Not Determined) 条件１−ＲＰＩＭ１６４０／１０％ＦＢＳ／５０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ６．５からの結合条件２−ヒト血清／３５ｍＭＭＥＳ、ｐＨ６．０からの結合条件３−２５ｍＭＭＥＳ、ｐＨ６．５、０．１５ＭＮａＣｌで１：２に希釈されるヒト血清／３５ｍＭＭＥＳ、ｐＨ６．０からの結合実施例６下記試験を行い、ＷＣＰＰに結合するＨＩＶの核酸が強力なタンパク質変性溶液による処理によって遊離するかどうかを決定する。実施例５のＨＩＶ−１を実施例１のＷＣＰＰに吸着させた後、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを遠心によってペレット化する。次に、上清を捨て、ペレットをＦＢＳを含まないＲＰＭＩ１６４０５００μｌで３回洗浄する。５００μ ｌの４Ｍグアニジンチオシアネート(guanidine thiocyanate)、０．５％Ｎ−ラウロイルサルコシン、２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．０及び１００ｍＭ２−メルカプトエタノール溶液を用いて、洗浄されたＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスペレットを再懸濁する。室温で５分間インキュベートした後、マトリックスを再度遠心によってペレット化する。ＲＮＡを、チョムチンスキー(Chomczynski)及びサッチー(Sacchi)（アンバイオケム(Ann．Biochem.)、１６２：１５６（１９８７年）、参考のために引用される）の方法を用いて上清から抽出する。このようにして遊離したウィルスのＲＮＡを、ｄＮＴＰ（０．１ｍＭ）、ＤＴＴ（１０ｍＭ）、２０μｌの反応液当たり１μｌのインヒビット−エース（５’−３’）（Inhibit-Ace(5'-3'））および（＋）鎖ウィルスＲＮＡと相補性を有する以下の２１塩基のオリゴヌクレオチドプライマーが補足された製造社により供給されるバッファーによるギブコ(G ibco)（カタログ番号２８０２５−Ｄ１３）Ｍ−ＭＬＶ逆転写酵素を用いて、ウィルスのｃＤＮＡに逆転写する：ＨＩＶ−１ゲノムの７３８１番目の塩基から開始する（ＡＴＴＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＡＡＴＴＣＣＣＣ−配列番号１）。（ＨＩＶゲノムについて本明細書で使用される番号付けのスキームは、参考のために引用される、ラトナー(Ratner)ら、ネーチャー(N ature)、３１３、２７７〜２８４（１９８５年）のものである。）次に、表面グリコプロテインｇｐ１２０のＶ３ループに相当するウィルスｃＤＮＡの領域を、下記の２プライマーを用いたＰＣＲによって増幅する：６９５７番目の塩基から開始する（＋）鎖の２０塩基のオリゴヌクレオチドプライマー（ＴＡＣＡＡＴＧＴＡＣＡＣＡＴＧＧＡＡＴＴ、配列番号２）および７３３１番目で終わる（−）鎖の１８塩基のオリゴヌクレオチドプライマー（ＣＴＧＧＧＴＣＣＣＣＴＣＣＴＧＡＧＧ、配列番号３）。（配列番号１及び配列番号３は（−）鎖である、即ち、（＋）鎖のウィルスＲＮＡの塩基、故にウィルスＲＮＡまたは後に生じる（＋）ｃＤＮＡ鎖のいずれかに対する塩基対と相補性を有し；配列番号２はＲＮＡ及びＤＮＡプライマー配列番号１から生じる（−）ｃＤＮＡ鎖と相補性を有する（＋）鎖であると解される。）各ＰＣＲ反応物は、０．２ｍＭまでのｄＮＴＰ及び０．５μｇの各プライマーが補足された製造社によって供給される１０×ストックから調製されるバッファーにおける２単位のベントポリメラーゼ(Vent polymerase)（ニューイングランドバイラブス(New England Biolabs)）を含む。反応は、下記のサイクルプログラムを行う前に、９４℃で２分間、インキュベートすることによって加熱により開始される；９４℃で１分間の変性、さらに５５℃で１分間のアニーリング段階、および７２℃で１分間の伸張段階。３５サイクル後、サンプルを７２℃で８分間維持した後、４℃に冷却する。各反応からのサンプルを３７４塩基対の予想されるＰＣＲ産物について２％アガロースゲル上で分析する。１００塩基対のラダー(ladder)を比較のための標準物質として泳動する。ウィルスＲＮＡの逆転写及びＰＣＲから得られる産物の電気泳動分析により、３７４塩基対の予想される分子量のバンドが得られる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１１月１９日【補正内容】請求の範囲１．以下からなる、タンパク質及びウィルスを含む生物学的サンプルからなる溶液からのウィルスの吸着方法：ａ）該溶液のｐＨをｐＨ６．０〜８．０に調節し；ｂ）水に不溶性の架橋ポリカルボン酸ポリマー（ＷＣＰＰ）を該溶液に１００：１〜１：１０，０００の溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−溶液混合物を形成し；ｃ）該ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートし、存在する少なくともあるウィルスをＷＣＰＰ上に固定して、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成する；この際、該ＷＣＰＰは以下からなる群より選ばれるものであり：ｉ）Ａ）下記式のアルファ，オメガジアミノヒドロキシアルカンで下記式のポリ（アルキレン無水マレイン酸）ポリマーを架橋し、さらにＢ）未反応の無水物基を加水分解することによって得られ、この際の初めに仕込まれる式（Ｉ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）に対する初めに仕込まれる式（ＩＩ）のジアミノヒドロキシアルカンのモル比が約１：１〜２００：１である、水に不溶性の架橋ポリヒドロキシポリカルボン酸；ｉｉ）Ａ）式Ｈ₂Ｎ．（ＣＨ₂）_z．ＮＨ₂のアルファ，オメガジアミノアルカンで式（Ｉ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）ポリマーを架橋し、さらにＢ）未反応の無水物基を加水分解することによって得られ、この際の初めに仕込まれる式（Ｉ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）に対する初めに仕込まれるジアミノアルカンのモル比が約１：１〜２００：１である、水に不溶性の架橋ポリカルボン酸；ｉｉｉ）少なくとも２鎖を有し、各鎖は下記式の鎖骨格を有し、各鎖内の少なくとも一のマレオイル部分の一方のカルボニル基は、-ＨＮ.[Ｈ)_p(ＣＨ)_z.(ＯＨ)_m].ＮＨ-部分 (IV) に共有結合して、少なくとも一の架橋単位の少なくとも２鎖間に存在させ、該架橋単位は以下からなる群より選ばれるものであり：および式（ＩＩＩ）のポリ（アルキレンカルボン酸）鎖に対する架橋単位の割合が約１：１〜約２００：１である、水に不溶性の架橋ポリヒドロキシポリカルボン酸；およびｉｖ）少なくとも２鎖を有し、各鎖は下記式の鎖骨格を有し、各鎖内の少なくとも一のマレオイル部分の一方のカルボニル基は、式Ｈ₂Ｎ．（ＣＨ₂）_z．ＮＨ₂のアルファ，オメガジアミノアルカンに共有結合して、下記式：の少なくとも一の架橋単位の少なくとも２鎖間に存在させ、この際の初めに仕込まれる式（ＩＩＩ）のポリ（アルキレンカルボン酸）鎖に対する架橋単位の割合が約１：１〜約２００：１である、水に不溶性の架橋ボリカルボン酸；該ＷＣＰＰの基において、Ｒはフェニルであり；ｑは７〜１０，０００の整数であり；ｚは１〜４の整数であり；ｐは０またはｚ−１までの整数であり；ｍは１またはｚまでの整数であり；ｙはｍまでの整数である。２．該ＷＣＰＰが水に不溶性の架橋ポリカルボン酸ポリマーｉｉ）及びｉｖ）からなる群から選ばれかつ該溶液に対する該ＷＣＰＰの容積：容積の割合が１：１〜１：１０である、請求の範囲第１項に記載の方法。３．該ウィルスが哺乳動物ウィルス及び細菌ウィルスからなる群から選ばれる、請求の範囲第１項に記載の方法。４．該ＷＣＰＰを該溶液に添加する前に、界面活性剤を該溶液に該サンプル１容積当たり０．１〜１．０容積倍または重量倍添加することからさらになる、請求の範囲第３項に記載の方法。５．該溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合が１：１〜１：１０でありかつ該生物学的サンプルが血清、血漿、全血及びその画分からなる群より選ばれ；さらにｄ）該溶液からＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを分離して、実質的にウィルスを含まない上清を得ることからなる、ウィルス及びタンパク質を含む生物学的サンプルの溶液からウィルスを除去する請求の範囲第１項に記載の方法。６．請求の範囲第５項にしたがって製造される上清。７．請求の範囲第１項に記載の方法およびｄ）該溶液からＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを分離し；およびｅ）ｐＨ８．０〜１１．０のアルカリバッファー中に該マトリックスを再懸濁することによってＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスから固定化ウィルスを脱離し；および脱離したウィルスを集める段階からさらになる、ウィルス及びタンパク質を含む生物学的サンプルの溶液からのウィルスの濃縮方法。８．以下からなる、ウィルスからのウィルス核酸の単離方法：ｉ）ウィルスを水溶液中に懸濁し；ｉｉ）該溶液のｐＨを６．０〜８．０に調節し；ｉｉｉ）請求の範囲第１項に記載のＷＣＰＰを該溶液に１００：１〜１：１０，０００の溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−溶液混合物を形成し；ｉｖ）該ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートし、存在する少なくともあるウィルスをＷＣＰＰ上に固定して、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成し；ｖ）該溶液から該マトリックスを分離し；ｖｉ）分離したマトリックス上に固定化されたウィルスを破壊して、その核酸を放出させ；およびｖｉｉ）破壊されたウィルスから放出されたウィルス核酸を単離する。９．溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合が１：１〜１：１０である請求の範囲第１項に記載の方法からなり；かつｄ）該溶液からＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを分離し；ｅ）分離したＷＣＰＰ−ウィルスマトリックス上に固定化されたウィルスを破壊して、その核酸を放出させ；およびｆ）該破壊されたウィルスから放出されたウィルス核酸を単離する段階からさらになる、ウィルス核酸の単離方法：１０．該ウィルスが細菌ウィルスであり、細菌ウィルスを有することが知られる細菌の培養物を培養し、および該培養物の細菌を溶菌して、清澄液を形成する初期段階からなり；さらにａ）該清澄液のｐＨをｐＨ６．０〜８．０に調節し；ｂ）有効量のＷＣＰＰを該清澄液に１００：１〜１：１０，０００の清澄液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成し；およびｃ）該ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを該溶液から分離することからなる、請求の範囲第３項に記載の方法。１１．請求の範囲第１０項に記載の方法からなり、さらにｄ）該ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックス上の固定化細菌ウィルスを破壊し；およびｅ）該破壊された細菌ウィルスから放出された核酸を単離することからなる、細菌ウィルスからの核酸の単離方法。１２．該固定化ウィルスを破壊する段階が分離されたマトリックスを１ｍＭ〜１００ｍＭＥＤＴＡは含むが化学変性剤を実質的に含まないさらなる水溶液中に懸濁することによって行われる、請求の範囲第１１項に記載の方法。１３．該細菌ウィルスがバクテリオファージλである、請求の範囲第１２項に記載の方法。１４．該ウィルスが哺乳動物ウィルスであり、該生物学的サンプルが哺乳動物の体液および哺乳動物細胞培養物からなる群から選ばれる、請求の範囲第３項に記載の方法。１５．該溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合が１：１〜１：１０である、請求の範囲第１４項に記載の方法。１６．該生物学的サンプルが血漿、全血及びその画分、ならびに細胞培養物の上清からなる群より選ばれる、請求の範囲第１４項に記載の方法。１７．該哺乳動物ウィルスがアデノウィルス；ＨＩＶ−１；レオウィルス；及びライノウィルスならびにこれらの遺伝子操作による変異体からなる群より選ばれる、請求の範囲第１４項に記載の方法。１８．該哺乳動物ウィルスがアデノウィルス；ＨＩＶ−１；レオウィルス；及びライノウィルスならびにこれらの遺伝子操作による変異体からなる群より選ばれ、請求の範囲第１４項に記載の方法からなり、およびｄ）該溶液からＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを分離し；およびｅ）濃縮形態のＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスから固定化ウィルスを脱離させる段階からさらになる、タンパク質及び該ウィルスを含む生物学的サンプルの溶液からの哺乳動物ウィルスの濃縮方法。１９．該哺乳動物ウィルスがアデノウィルス；ＨＩＶ−１；レオウィルス；及びライノウィルスならびにこれらの遺伝子操作による変異体からなる群より選ばれ、請求の範囲第１４項に記載の方法からなり、およびｄ）該溶液からＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを分離する段階からさらになる、タンパク質及び該ウィルスを含む生物学的サンプルの溶液からの哺乳動物ウィルスの除去方法。２０．初期の溶液が血液またはその画分である、請求の範囲第１９項に記載の方法を行うことによって製造される上清。２１．請求の範囲第１４項に記載の方法からなり、およびｄ）該溶液からＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを分離し；およびｅ）ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックス上に固定化されたウィルスを破壊し；およびｆ）該破壊されたウィルスから放出されたウィルス核酸を単離する段階からさらになる、哺乳動物ウィルスからの核酸の単離方法。２２．該破壊段階が該ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを変性剤を含むバッファー溶液で洗浄することによって行われる、請求の範囲第２１項に記載の方法。２３．請求の範囲第１項に記載の段階、およびｄ）該溶液から該ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを分離し；ｅ）ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックス上に固定化されたウィルスを破壊して、ＷＣＰＰ−溶液混合物を形成し；ｆ）該ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートし、破壊されたウィルスタンパク質を該ＷＣＰＰに再吸収させて、ＷＣＰＰ−タンパク質マトリックスを形成し；およびｇ）該ＷＣＰＰ−タンパク質マトリックスを溶液から除去するさらなる段階を行うことからなる、初めにウィルスを含む生物学的サンプルの溶液からのウィルスタンパク質の精製方法。２４．請求の範囲第２３項に記載の段階を行うことからなり、さらにｈ）ｐＨ８．０〜１１．０のアルカリバッファー中に溶液から除去されたＷＣＰＰ−タンパク質マトリックスを再懸濁し；およびｉ）該バッファー中にマトリックスから放出されたウィルスタンパク質を集める段階からさらになる、ウィルスタンパク質の単離方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 14/14 Ｃ０７Ｋ 14/14 14/155 14/155 Ｃ１２Ｎ 7/02 Ｃ１２Ｎ 7/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者アーノルド，エドワードアメリカ合衆国，ニュージャージー州 08901−1658，ニューブルンスウィック, ボルヒーズロード 16 (72)発明者ドネリー，ロバートアメリカ合衆国，ニュージャージー州 08904，ハイランドパーク，エス．セカンドアベニュー 453エー

Claims

【特許請求の範囲】１．以下からなる、ウィルスを含む生物学的サンプルからなる溶液からのウィルスの吸着方法：ａ）該溶液のｐＨをｐＨ６．０〜８．０に調節し；ｂ）水に不溶性の架橋ポリカルボン酸ポリマー（ＷＣＰＰ）を該溶液に１００：１〜１：１０，０００の溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−溶液混合物を形成し；ｃ）存在する少なくともあるウィルスをＷＣＰＰ上に固定するのに十分な時間、該ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートして、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成し；およびｄ）該マトリックスを該溶液から分離する；この際、該ＷＣＰＰは以下からなる群より選ばれるものであり：ｉ）Ａ）下記式のアルファ，オメガジアミノヒドロキシアルカンで下記式のポリ（アルキレン無水マレイン酸）ポリマーを架橋しＢ）未反応の無水物基を加水分解することによって得られ、この際の初めに仕込まれる式（Ｉ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）に対する初めに仕込まれる式（ＩＩ）のジアミノヒドロキシアルカンのモル比が約１：１〜２００：１である、水に不溶性の架橋ポリヒドロキシポリカルボン酸；ｉｉ）式Ｈ₂Ｎ．（ＣＨ）_z．ＮＨ₂のアルファ，オメガジアミノアルカンで式（Ｉ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）ポリマーを架橋することによって得られ、この際の初めに仕込まれる式（Ｉ）のポリ（アルキレン無水マレイン酸）に対する初めに仕込まれるジアミノアルカンのモル比が約１：１〜２００：１である、水に不溶性の架橋ポリカルボン酸；ｉｉｉ）少なくとも２鎖を有し、各鎖は下記式の鎖骨格を有し、各鎖内の少なくとも一のマレオイル部分の一方のカルボニル基は、-ＨＮ.[(Ｈ)_p(ＣＨ)_z.(ＯＨ)_m].ＮＨ-部分 (IV) に共有結合して、少なくとも一の架橋単位の少なくとも２鎖間に存在させ、該架橋単位は以下からなる群より選ばれるものであり：および式（ＩＩＩ）のポリ（アルキレンカルボン酸）鎖に対する架橋単位の割合が約１：１〜約２００：１である、水に不溶性の架橋ポリヒドロキシポリカルボン酸；およびｉｖ）少なくとも２鎖を有し、各鎖は下記式の鎖骨格を有し、各鎖内の少なくとも一のマレオイル部分の一方のカルボニル基は、式Ｈ₂Ｎ．（ＣＨ）_z．ＮＨ₂のアルファ，オメガジアミノアルカンに共有結合し、この際の初めに仕込まれる式（ＩＩＩ）のポリ（アルキレンカルボン酸）に対する初めに仕込まれるジアミノアルカンのモル比が約１：１〜２００：１である、水に不溶性の架橋ポリカルボン酸；該ＷＣＰＰの基において、Ｒはフェニルであり；ｑは７〜１０，０００の整数であり；ｚは１〜４の整数であり；ｐは０またはｚ−１までの整数であり；ｍは１またはｚまでの整数であり；ｙはｍまでの整数である。２．該ＷＣＰＰが水に不溶性の架橋ポリカルボン酸ポリマーｉｉ）及びｉｖ）からなる群から選ばれかつ該溶液に対する該ＷＣＰＰの容積：容積の割合が１：１〜１：１０である、請求の範囲第１項に記載の方法。３．該ウィルスが哺乳動物ウィルス及び細菌ウィルスからなる群から選ばれる、請求の範囲第１項に記載の方法。４．該ＷＣＰＰを該溶液に添加する前に、界面活性剤を該溶液に該サンプル１容積当たり０．１〜１．０倍容積または重量添加することからさらになる、請求の範囲第３項に記載の方法。５．以下からなる、生物学的サンプルからなる溶液からのウィルスの除去方法：ａ）該溶液に対する該ＷＣＰＰの容積：容積の割合が１：１〜１：１０でありかつ該生物学的サンプルが血清、血漿、全血及びその画分からなる群より選ばれる、請求の範囲第１項に従って生物学的サンプルからなる溶液からウィルスを吸着し；およびｂ）該溶液からＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを分離して、実質的にウィルスを含まない上清を得る。６．請求の範囲第５項による実質的にウィルスを含まない上清。７．請求の範囲第１項に従って生物学的サンプルからなる溶液からウィルスを吸着し；ｐＨ８．０〜１１．０のアルカリバッファー中に該マトリックスを再懸濁することによってマトリックスから固定化ウィルスを脱離し；および脱離したウィルスを集めることからなる、生物学的サンプルからなる溶液からのウィルスの濃縮方法。８．以下からなる、ウィルスからのウィルス核酸の単離方法：ａ）ウィルスを水溶液中に懸濁し；ｂ）該溶液のｐＨを６．０〜８．０に調節し；ｃ）ＷＣＰＰを該溶液に１００：１〜１：１０，０００の溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−溶液混合物を形成し；ｄ）存在する少なくともあるウィルスをＷＣＰＰ上に固定するのに十分な時間、該ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートして、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成し；ｅ）該溶液から該マトリックスを分離し；ｆ）分離したマトリックス上に固定化されたウィルスを破壊して、その核酸を放出させ；およびｇ）破壊されたウィルスから放出されたウィルス核酸を単離する。９．以下からなる、ウィルス核酸が宿主細胞核酸から実質的に純粋であるようなウィルスからのウィルス核酸の単離方法：ａ）請求の範囲第１項に従ってウィルスを含む生物学的サンプルからなる溶液からウィルスを吸着し、この際溶液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合が１：１〜１：１０であり；ｂ）分離したマトリックス上に固定化されたウィルスを破壊して、その核酸を放出させ；およびｃ）該破壊されたウィルスから放出されたウィルス核酸を単離する。１０．以下からなる、請求の範囲第３項に記載の生物学的サンプルからなる溶液からの細菌ウィルスの吸着方法：ａ）細菌ウィルスを有することが知られる細菌の培養物を培養し；ｂ）該培養物の細菌を溶菌して、清澄液を形成し；ｃ）該清澄液のｐＨをｐＨ６．０〜８．０に調節し；ｄ）請求の範囲第１項による有効量のＷＣＰＰを該清澄液に１００：１〜１：１０，０００の清澄液に対するＷＣＰＰの容積：容積の割合で添加して、ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを形成し；およびｅ）該ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを該溶液から分離する。１１．以下からなる、ウィルス核酸が細菌宿主細胞核酸から実質的に純粋であるような生物学的サンプルからなる溶液中に存在する細菌ウィルスからの核酸の単離方法：ａ）請求の範囲第１０項に従って細菌ウィルスを吸着し；ｂ）該固定化細菌ウィルスを破壊し；ｃ）該破壊された細菌ウィルスから放出された核酸を単離する。１２．該固定化ウィルスを破壊する段階が分離されたマトリックスを１ｍＭ〜１００ｍＭＥＤＴＡは含むが化学変性剤を実質的に含まないさらなる水溶液中に懸濁することによって行われる、請求の範囲第１１項に記載の方法。１３．該細菌ウィルスがバクテリオファージλである、請求の範囲第１２項に記載の方法。１４．該生物学的サンプルが哺乳動物の体液からなる群から選ばれる、生物学的サンプルからなる溶液からの哺乳動物ウィルスの、請求の範囲第３項に記載の、吸着方法。１５．該溶液に対する該ＷＣＰＰの容積：容積の割合が１：１〜１：１０である、請求の範囲第１４項に記載の方法。１６．該生物学的サンプルが血漿、全血及びその画分、ならびに細胞培養物の上清からなる群より選ばれる、請求の範囲第１４項に記載の方法。１７．該哺乳動物ウィルスがアデノウィルス；ＨＩＶ−１；レオウィルス；及びライノウィルスならびにこれらの遺伝子操作による変異体からなる群より選ばれる、請求の範囲第１４項に記載の方法。１８．以下からなる、哺乳動物ウィルスがアデノウィルス；ＨＩＶ− １；レオウィルス；及びライノウィルスならびにこれらの遺伝子操作による変異体からなる群より選ばれる、生物学的サンプルからなる溶液からの哺乳動物ウィルスの濃縮方法：ａ）請求の範囲第１４項に従って生物学的サンプルからなる溶液から哺乳動物ウィルスを吸着し；ｂ）該溶液からＷＣＰＰ−ウィルス複合体を分離し；およびｃ）濃縮形態のマトリックスから固定化ウィルスを脱離させる。１９．該溶液に請求の範囲第１８項に記載の段階を行うことからなる、生物学的サンプルからなる溶液からの哺乳動物ウィルスの除去方法。２０．該生物学的サンプルからなる溶液が血液またはその画分である、請求の範囲第１９項に記載の方法から得られる上清。２１．以下からなる、哺乳動物宿主細胞核酸から実質的に純粋である哺乳動物ウィルスの核酸の単離方法：ａ）請求の範囲第１４項に従って生物学的サンプルからなる溶液から哺乳動物ウィルスを吸着し；ｂ）該生物学的サンプルからなる溶液からウィルスが固定化されるＷＣＰＰを分離し；ｃ）該固定化ウィルスを破壊し；およびｄ）破壊されたウィルスから放出されたウィルス核酸を単離する。２２．該破壊段階が該ＷＣＰＰ−ウィルスマトリックスを変性剤を含むバッファー溶液で洗浄することからなる、請求の範囲第２１項に記載の方法。２３．以下からなる、生物学的サンプルからなる溶液からのウィルスタンパク質の精製方法：ａ）請求の範囲第１項に従ってウィルスを含む生物学的サンプルからなる溶液からウィルスを吸着し；ｂ）固定化ウィルスを破壊し；ｃ）該ＷＣＰＰ−溶液混合物をインキュベートし、破壊されたウィルスタンパク質を再吸収させて、ＷＣＰＰ−タンパク質マトリックスを形成し；およびｄ）該ＷＣＰＰ−タンパク質マトリックスを溶液から除去する。２４．以下からなる、ウィルス核酸を実質的に含まないウィルスタンパク質の単離方法：ａ）請求の範囲第２３項に従ってウィルスを含む生物学的サンプルからなる溶液からウィルスを吸着し；ｂ）ｐＨ８．０〜１１．０のアルカリバッファー中に該溶液から除去されたＷＣＰＰ−タンパク質マトリックスを再懸濁し；ｃ）該バッファー中にマトリックスから放出されたウィルスタンパク質を集める。