JP5588097B2 - 核酸単離のための方法 - Google Patents
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Description
ウィルスRNAおよびウィルスDNAの抽出(マグアトラクト(MagAttract)ウィルス・ミニM48キット(キアゲン、ヒルデン、ドイツ)で実施)
さらなる実験では、「外装化HIV」(タンパク質外殻に詰め込まれた合成RNA)と同様にHCV(単一鎖のRNAウィルス)およびHBV(2本鎖のDNAウィルス)を有する陰性ヒト血漿は、上記の例で記載された方法論にしたがって処理された。
Claims (21)
- 下記の工程a)からc)を含む核酸の単離および/または精製のための方法:
a)生体試料を溶解し、核酸を放出させる工程、
b)1から5の炭素原子を有し、かつ分岐状または線状であるアルカノール、並びにカオトロピック化合物の存在下で、1以上のシリコン−酸素化合物を基礎とするマトリックス上に、上記放出された核酸を固定化する工程、但し、当該核酸の固定化は46℃から75℃の温度範囲で実施される、
c)知られる方式で、上記固定化された核酸を分離する工程。 - 工程b)における固定化が46℃〜70℃の範囲にある温度で実施される、請求項1に記載の方法。
- 工程b)における固定化が50℃〜65℃の範囲にある温度で実施される、請求項1又は2に記載の方法。
- 工程b)における固定化が56℃の温度で実施される、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 上記シリコン−酸素化合物がシリカである、請求項1から4のいずれか1項に記載の方法。
- 上記マトリックスがシリカ表面を有する磁性粒子である、請求項1から5のいずれか1項に記載の方法。
- 上記カオトロピック化合物がカオトロピック・ナトリウムまたはグアニジニウム塩である、請求項1から6のいずれか1項に記載の方法。
- カオトロピック・ナトリウムまたはグアニジニウム塩がヨウ化ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、グアニジニウム・チオシアン酸塩、グアニジニウム・イソチオシアン酸塩もしくはグアニジニウム塩酸塩であるか、またはこれら塩類の2以上の混合物である、請求項7に記載の方法。
- 上記アルカノールが1〜5の炭素原子を有するアルコールである、請求項1から8のいずれか1項に記載の方法。
- 上記アルコールが、メタノール、エタノール、イソプロパノール、分岐状もしくは線状のブタノールもしくはペンタノール、またはこれらアルコールの混合物である、請求項11に記載の方法。
- 上記アルカノールは、1〜100%(容積/容積)の濃度の水溶液の形態で存在する、請求項1から10のいずれ1項に記載の方法。
- 1から5の炭素原子を有し、かつ分岐状もしくは線状であるアルカノール、並びにカオトロピック化合物の存在下で、1以上のシリコン−酸素化合物を基礎とするマトリックス上に核酸を固定化する工程であって、当該核酸の固定化は46℃から75℃の温度範囲で実施される上記工程を含む、核酸の固定化のための方法。
- 上記マトリックスはシリカ表面を有する、請求項12に記載の方法。
- 上記核酸の固定化は、46℃〜70℃の範囲にある温度で、かつ上記アルカノールの水溶液の存在下で実施される、請求項12または13に記載の方法。
- 上記核酸の固定化は、50℃〜65℃の範囲における温度で、かつメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールおよび/または分岐状もしくは線状ブタノールもしくはペンタノールの存在下で、またはこれらアルコールの水溶液もしくはそれらの混合物の存在下で実施される、請求項12から14のいずれか1項に記載の方法。
- 上記核酸の固定化は、56℃の温度で、かつ1〜100%(容積/容積)の範囲の濃度のメタノール、エタノール、プロパノールおよび/またはイソプロパノールの水溶液の存在下で実施される、請求項12から15のいずれか1項に記載の方法。
- 上記カオトロピック化合物がカオトロピック・ナトリウムまたはグアニジニウム塩である、請求項12から16のいずれか1項に記載の方法。
- カオトロピック・ナトリウムまたはグアニジニウム塩は、ヨウ化ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、グアニジニウム・チオシアン酸塩、グアニジニウム・イソチオシアン酸塩もしくはグアニジニウム塩酸塩、またはこれら塩類の2以上の混合物である、請求項17に記載の方法。
- 上記核酸の固定化は50℃〜65℃の範囲の温度で実施される、請求項12から18のいずれか1項に記載の方法。
- 上記核酸の固定化が56℃の温度で実施される、請求項12から19のいずれか1項に記載の方法。
- 上記マトリックスがシリカ表面を有する磁性粒子である、請求項12から20のいずれか1項に記載の方法。
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