JPH11510861A

JPH11510861A - 紙のサイジングのための方法および組成物

Info

Publication number: JPH11510861A
Application number: JP9509067A
Authority: JP
Inventors: ラング，ウィリアム・ケネス; ブラントン，ハーヴェイ・ジョン; クリスプ，マーク・トレイシー; シェアー，ダイアナ・ジェーン; ベイツ，ロバート; スレイター，ジェイムズ・ハワード; ハードマン，デイヴィッド・ジョン
Original assignee: Hercules LLC
Current assignee: Hercules LLC
Priority date: 1995-08-16
Filing date: 1996-08-16
Publication date: 1999-09-21
Also published as: CA2229588A1; AU6824896A; EP0845060A1; EP0845031A1; DE69610841D1; WO1997007203A1; BR9610327A; AU6750296A; GB9516766D0; DE69610841T2; EP0845060B1; CA2229358A1; PT845060E; BR9610219A; CN1199421A; TW353092B; JPH11510701A; CN1199439A; WO1997007282A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、紙のサイジングのための方法および組成物に関する。特に、本発明は、ａ）紙または紙の成分を、紙または紙の成分に結合することができるたんぱく質と接触させること；並びにｂ）紙に結合したたんぱく質を変性または加熱することの工程を含む、紙のサイジング方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】紙のサイジングのための方法および組成物１．技術分野本発明は紙のサイジングのための方法および組成物に関する。特に、本発明は、紙または紙の成分に結合することができるタンパク質の、紙のサイジングへの使用に関する。２．背景製紙についての詳細な記述は数多くあるが、製紙法は慣用的には、（１）パルプとして一般に知られているセルロース繊維の水性懸濁液を形成すること；（２）各種加工剤および紙強化剤、例えば強化および／またはサイズ剤を加えること；（３）繊維をシートにし、そして乾燥して、所望のセルロースウェブを形成すること；並びに（４）ウェブに、サイズ剤の表面塗布等を含めた後処理を施して、得られる紙に様々な所望の特性を付与することの工程を含む。サイズ剤は一般に、サイズ剤で処理した紙、すなわちサイジングされた紙を、他の処理添加剤、印刷インク等を含めた水性液体による浸透または湿潤に対して耐性にする、水溶液、分散液、エマルジョンまたは懸濁液の形のものである。サイズ剤は紙の表面に”表面”サイズ剤として塗布しても、あるいは紙の中に ”内部”サイズ剤として混合してもよい。ロジンに基づくおよびケテンダイマーに基づくサイズ組成物を含めた多くの化学サイズ剤が知られている。しかしながら、サイジング組成物およびサイジング方法の改良は依然として求められている。一般に、紙の主成分はセルロースである。セルロースは木部繊維または一年生作物繊維（例えば、麻、麦ワラ、稲、亜麻、ジュートまたは綿花）の形でもよい。他の紙の成分には、デンプン、ペクチン、グアー、キチン、リグニン、寒天、アルギン酸塩のような天然ポリマーを含めた他のポリマー材料、並びにキシラノース、マンノースおよびアラビノースのようなヘミセルロースを含めた他の多糖類が含まれる。キシラノースは、牧草、穀物、麦ワラ、トウモロコシの皮および木材中に存在するヘミセルロースとしても知られているキシランの主成分である。デンプンは種子、果実、葉、球根等の中に存在する。酵素基質を変性しうる酵素が機能するためには、酵素基質との非共有結合相互作用にかかっている。そのような種類の酵素には、ポリマー分解酵素、例えばプロテイナーゼ、ケラチナーゼ、キチナーゼ、リグニナーゼ、アガラーゼ、アルギナーゼ、キシラナーゼ、マンナーゼ、アミラーゼ、セルラーゼおよびヘミセルラーゼが含まれる。例えば、セルラーゼおよびヘミセルラーゼは糖類または多糖類分子をセルロースおよびヘミセルロースから各々開裂し、アミラーゼはグルコースをデンプンから開裂する。触媒活性に対する必要条件としての、セルロースと、セルラーゼたんぱく質、特にセルロース繊維に結合するもの、との相互作用については、説明かつ論評さｌ．，４４，２１９−２４８，１９９０；セルラーゼおよびキシラナーゼ：ＧｉｌｂｅｒｔおよびＨａｚｅｌｗｏｏｄ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅｒａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１３９，１８７−１９４，１９９３）。このグループの酵素には、機能的に異なるたんぱく質ドメインを含むセルラーゼおよびヘミセルラーゼが含まれる。特に、触媒活性に責任のあるドメインは、セルロース結合ドメインと構造的に異なる。これらのドメインは、そのようなたんぱく質の全てにおいて非常に類似した、進化的に保存された配列である（Ｇｉｌｋｅｓ等，ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ，３０３−３１５，１９９１年６月）。そのようなたんぱく質の結合ドメインは、たんぱく質の加水分解によって活性部位ドメインから分離することができる。単離された結合ドメインは、結合能力を維持することが示されている（ＶａｎＴｉｌｂｅｕｒｇｈ等，ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ，２０４（２），２２３−２２７，１９８６年８月）。セルラーゼのセルロース結合ドメインの使用は、セルロース支持体表面のきめを粗くする手段として提案され、一方、セルラーゼ活性部位ドメインの使用はそのような表面のきめを滑らかにする手段として提案されている（国際公開第ＷＯ９３／０５２２６号）。多くの結合ドメインはまた遺伝学的レベルで特徴づけられ（Ｏｈｍｉｙａ等，ＭｉｃｒｏｂｉａｌＵｔｉｌｉｓａｔｉｏｎｏｆＲｅｎｅｗａｌＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，８，１６２−１８１，１９９３）、そしてサブクローニングして新規な融合たんぱく質を作り出してきた（Ｋｉｌｂｕｒｎ等，国際公開第ＷＯ９０／００６０９号；Ｏｎｇ等，ＥｎｚｙｍｅＭｉｃｒｏｂ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，１３，５９−６５，１９９１年１月；Ｓｈｏｓｅｙｏｖ等，国際公開第ＷＯ９４／２４１５８号）。これらの融合たんぱく質のいくつかは、特殊な用途のアンカーたんぱく質として用いられてきた。そのようなたんぱく質は、たんぱく質の精製に用いられるセルロース支持体材料への融合たんぱく質の接着によるタンパク質精製を促すものとして用いられてきた（Ｋｉｌｂｕｒｎ等，米国特許第５，１３７，８１９号；Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ等，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，４４，１２９５−１３０５，１９９４）。融合たんぱく質をセルロース支持体上に固定する能力はまた、酵素バイオリアクターのための固定手段として（Ｏｎｇ等，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７，６０４ −６０７，１９８９年６月；Ｌｅ等，ＥｎｚｙｍｅＭｉｃｒｏｂ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，１６，４９６−５００，１９９４年６月）、および化学的”タグ”をセルロース材料へ付着する手段として（国際公開第ＷＯ９３／２１３３１号）提案されている。このたび、紙または紙の成分へ結合することができるたんぱく質を紙のサイジングに用いうることを見いだした。３．発明の概要本発明は、ａ）紙または紙の成分を、紙または紙の成分へ結合することができるたんぱく質と接触させること、並びにｂ）紙に結合したたんぱく質を変性または加熱することの工程を含む、紙のサイジング方法を提供するものである。本発明の別の面は、ａ）紙または紙の成分を、紙または紙の成分へ結合することができるたんぱく質と接触させること、並びにｂ）紙を加熱することを含む紙のサイジング方法を提供するものである。本発明の別の面は、紙または紙の成分へ結合することができるたんぱく質の、紙のサイジングのための使用を提供するものである。本発明はさらに、本発明の方法によってサイジングされた紙を提供する。４．発明の詳細な説明本発明は紙のサイジング方法を提供するものである。ここで、用語”紙”は、植物、鉱物、動物、または合成物質からの繊維を様々な割合で混合していてもよい、並びに金属元素の酸化物、炭酸塩および硫酸塩のような無機物質の微粒子を様々な割合で混合していてもよい、植物から誘導された繊維を含有するセルロースの絡み合った網状構造を含む緊密に結びついたシートまたはウェブの形のどのような物質も意味する。用語”紙”には、紙シートまたはウェブの重量が２００ｇ／ｍ²より重いときの紙を意味する板紙が含まれる。セルロースの植物源には、木材、麦ワラ、バガス、アフリカハネガヤ、竹、カナフ、牧草、ジュート、ラミー、麻、綿花、亜麻が含まれる。粗製植物誘導セルロースを処理してパルプを形成し、この材料から機械的に、化学的にまたはこれらの両方で紙を製造する。セルロース含有パルプは、パルプの製造および精製の方法によって、メカニカル、ケミメカニカルおよびケミサーモメカニカル、セミケミカル、ハイイールドケミカル、フルケミカルとして説明しうる(”ＰｕｌｐａｎｄＰａｐｅｒ，ＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ”、第３版、第１巻、ｐ．１６４、１６５、ＪａｍｅｓＰ．Ｃａｓｓａｙ、ＩＳＢＮ０−４７１−０３１７５−５（ｖ．１）編集を参照）。紙はまた、たんぱく質のような他の天然ポリマー、例えばケラチン、デンプン（陰イオン、陽イオンまたは両性デンプンを含む）、ペクチン、グアー、キチン、リグニン、寒天、アルギン酸塩、並びにキシラノース、マンノースおよびアラビノースのようなヘミセルロースを含めた他の多糖類を含んでいてもよい。本発明の方法は、紙または紙の成分を、紙または紙の成分へ結合することができるたんぱく質と接触させ、その後、たんぱく質を変性または加熱することを含む。本発明で用いられるたんぱく質は、紙または紙の成分へ結合することができるどのようなたんぱく質よりなっていてもよい。たんぱく質は例えば、セルロース、または紙の成分として存在する他のポリマー物質に結合することができるたんぱく質よりなる。好ましくは、たんぱく質は、セルロース、または紙の成分として存在する他のポリマー物質に特異的に結合することができる。さらに好ましくは、たんぱく質は、１×１０^-3Ｍ未満の（Ｋｄ）の解離定数で結合することができる。ここで、用語”たんぱく質”には、ペプチド、オリゴペプチドおよびポリペプチド、並びにたんぱく質残基、たんぱく質含有成分、アミノ酸の鎖、およびペプチド結合を含む分子が含まれる。状況から必要な場合（例えば、たんぱく質を別の分子に結合するとき）、たんぱく質はたんぱく質残基を意味する。たんぱく質は天然のたんぱく質、あるいはそのフラグメント、あるいは化学変性もしくは合成によってまたはたんぱく質の遺伝学的に変性された遺伝子コード化の発現によって得られる変性たんぱく質からなっていてもよい。ここで、用語”変性たんぱく質”には、紙またはその成分に結合することができるたんぱく質の化学類似体が含まれる。好ましくは、たんぱく質は、紙または紙の成分に結合することができる天然酵素またはそのフラグメントからなる。紙または紙の成分に結合することができるたんぱく質の例はよく知られており、セルラーゼおよびヘミセルラーゼ、マンナーゼ、キシラナーゼ、キチナーゼ、リグニナーゼ、アガラーゼ、アルギナーゼおよびアミラーゼよりなる群から選択される酵素がある。たんぱく質は、例えば、デンプンが紙の成分または紙パルプとして存在するとき、デンプン（例えば、陰イオン、陽イオンまたは両性デンプン）に結合することができるアミラーゼまたはそのフラグメントよりなっていてもよい。アミラーゼの例は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅからのようなα−アミラーゼ（シグマアルドリッチ社からタイプＸ−Ａ粗製剤として入手しうる）、およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒからのようなアミログルコシダーゼ（シグマアルドリッチ社から入手しうる）である。好ましくは、たんぱく質はセルロースに結合することができるたんぱく質よりなる。さらに好ましくは、たんぱく質はセルラーゼまたはそのフラグメントよりなる。セルラーゼは天然のセルラーゼもしくはそのフラグメント、または天然もしくは合成セルラーゼの化学的変性によって、あるいはセルラーゼの遺伝学的に変性された遺伝子コード化の発現によって得られる変性セルラーゼよりなっていてもよい。セルラーゼは、例えば、変性して活性部位ドメインを除いたりまたは不活性化してもよい。セルロースに結合する各種のセルラーゼが公知である。そのようなセルラーゼの例は、シグマケミカルシグマ−アルドリッチ社、ノボノルディスク社、ＢＤＨ社またはＩＣＮバイオメディカル社から市販製剤として入手しうる細菌生物、例えばＣｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓｆｉｍｉ、および真菌生物、例えばＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ、Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ、ＴｒｉｃｈｏｄｅｒｕｍａｒｅｅｓｅｉおよびＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓである。（ＦｕｓａｒｉｕｍＯｘｙｓｐｏｒｕｍは、例えば、寄託番号ＤＳＭ２６７２で入手しうる）。あるいは、たんぱく質を、例えば、国際公開第ＷＯ９４／２４１５８号に記載のような組み換えＤＮＡ技術によって製造してもよい。セルラーゼは一般に、セルラーゼ結合ドメインおよびセルラーゼ活性に責任のあるドメインを含む。本発明ではセルラーゼを、セルロースに結合することができる全体またはそのフラグメントとして用いうる。セルラーゼ結合ドメインは、パパインのようなプロテアーゼで処理することにより、全体セルラーゼから得られる。セルラーゼはエキソ−セルラーゼまたはエンド−セルラーゼよりなる。エキソ−セルラーゼ（セロビオヒドロラーゼ、ＣＢＨ；エキソグルカナーゼ；１，４−ベータ−Ｄ−グルカンセロビオヒドロラーゼ；ＥＣ３．２．１．９１としても知られている）は、セルロース分子の非還元末端で作用する。エキソ−セルラーゼは末端セロビオース単位（二糖類）または末端グルコース単位（単糖類）を放出しうる。エキソ−セルラーゼの例には、Ｈｕｍｉｃｏｌａｉｓｏｌｅｎｓから得られるセルラーゼがある。エンド−セルラーゼ（ベータ−１，４−エンドグルカナーゼ；エンド−１，４−Ｄ −グルカナーゼ；１，４−ベータ−Ｄ−グルカングルカノヒドロラーゼ；ＥＣ３．２．１．４としても知られている）は内部ベータ−１，４−グリコシド結合を開裂して、グルコース、セロビオースおよび他の可溶性セロ−オリゴ糖の混合物を生じる。エンドセルラーゼの例はＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉから得られるセルラーゼである。たんぱく質はまたセルロソームよりなっていてもよい。セルロソームは、別個の多感応性、多酵素複合体を含むセルラーゼ系よりなる。これらは一般に、多数のエンドグルカナーゼ（エンドセルラーゼ）およびキシラナーゼ、並びに少なくとも１つのベータ−グルカナーゼを含めた、少なくとも１４の異なるポリペプチドを含む。これらはスカフォールディングたんぱく質と会合している。セルロソームは、ＢａｙｅｒＥ．Ａ．，ＭｏｒａｇＥ．，ＬａｍｅｄＲ．（１９９４），”Ｔｈｅｃｅｌｌｕｌｏｓｏｍｅ − ａｔｒｅａｓｕｒｅｔｒｏｖｅｆｏｒｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ”，ＴｒｅｎｄｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１２：３７９−３８６に詳しく記載されている。好ましくは、本発明で用いられるたんぱく質は、Ｈｕｍｉｃｏｌａｉｓｏｌｅｎｓから得られるセルラーゼ（デンマーク、バグスバード（Ｂａｇｓｖａｅｒｄ）のノボノルディスク社からセルザイム（Ｃｅｌｌｕｚｙｍｅ、登録商標）として入手しうる）、またはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉから得られるセルラーゼ（デンマーク、バグスバードのノボノルディスク社からセルクラスト（Ｃｅｌｌｕｃｌａｓｔ、登録商標）として入手しうる）よりなる。さらに好ましくは、たんぱく質はＨｕｍｉｃｏｌａｉｓｏｌｅｎｓから得られるセルラーゼよりなる。たんぱく質は、紙の製造および加工のどのような適当な段階で紙に加えてもよい。これはパルプ段階で加えても、あるいはウエットパルプマトリックス形成中のまたは紙を形成するためのマトリックスのプレスおよびローリング中のどの段階で加えてもよい。従って、本発明は、ａ）紙パルプを製造すること、ｂ）パルプの成分に結合することができるたんぱく質を加えること、ｃ）パルプから紙を形成すること、並びにｄ）紙を加熱することの工程を含む、サイジングされた紙の製造法を提供するものである。あるいは、たんぱく質は、例えば、たんぱく質を含有する浴に紙を浸漬することによって、あるいはスプレー、スプレッド、ハケ塗り、コーティングまたはプリントを行う適当な工程によって、形成された紙製品に加えてもよい。従って、本発明はさらに、ａ）紙に、紙に結合することができるたんぱく質を施すこと、並びにｂ）紙を加熱することの工程を含むサイジングされた紙の製造法を提供するものである。紙の製造で、たんぱく質を加える時点を選ぶことによって、たんぱく質を紙全体に分布させるか、あるいは紙の表面レベルに実質的に限定するかを調整しうる。たんぱく質が紙または紙パルプに結合するのに十分な時間、たんぱく質を紙または紙パルプと共にインキュベートすべきである。一般に、１５分が適当であることが分かっているが、それより短いインキュベート時間が適していることもある。たんぱく質は、望ましいレベルのサイジングを達成するのに適した量で加える。たんぱく質は、紙パルプの乾燥重量の０．０１〜４０％の量で加えうる。好ましくは、たんぱく質は０．１〜２０重量％で、より好ましくは１〜１０重量％の量で加える。たんぱく質を紙に混合した後またはタンパク質を紙の表面に施した後、たんぱく質を変性または加熱することによって紙のサイジングを行う。たんぱく質は、化学タンパク質変性剤を紙に施すことによって変性しうる。化学タンパク質変性剤には、尿素、グアニジン、酸、アルカリ、洗浄剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標））、水溶性有機物質（例えば、脂肪族アルコール）およびカオトロピズムイオン（例えば、Ｉ^-、ＣｌＯ₄ ^-、ＳＣＮ^-、Ｌｉ⁺、Ｍｇ²⁺，Ｃａ²⁺およびＢａ² ⁺ ）が含まれる。サイジングは紙を加熱することによって行うのが好ましい。紙は、好ましくは５０〜２００℃、より好ましくは７０〜１７０℃、さらに好ましくは８０〜１１０℃、さらにまた好ましくは１００〜１１０℃で加熱しうる。一般に、紙は蒸気加熱ロール上で約１０５℃に加熱する。紙に、異なる温度で１回以上の加熱処理を行ってもよい。必要な加熱時間は、紙の加熱温度によって変わり、時間が長いほどより低い温度である必要がある。一般に、紙は１５〜５００秒間、好ましくは２５〜３００秒間加熱しうる。紙を製造後加熱処理して、紙のエージングまたはキュアリングを行ってもよい。本発明を次の実施例を参照して説明する。実施例は説明のためのものであり、本発明の範囲内で詳細な変更を行いうることは明らかである。実験材料および手順以下で断りがなければ、次の材料および手順を実施例で用いて、たんぱく質のバイオサイズ剤としての使用特性を示す。パルプ：無サイズ紙パルプは、１０ｇの無サイズ紙（７０：３０硬木（カバ）：軟木（マツ））を１００ｍｌの蒸留水に加えることによって製造した。５分後、紙を均質パルプにブレンドした。パルプ懸濁液の試料（０．２ｇの乾燥紙に相当する）を万能ビンに重量を計って入れた。インキュベーション：各ビンに、次のインキュベーション緩衝溶液のうちの１つの１０．０ｍｌを加えた：（ａ）トリス−ＨＣｌ、５０ｍＭ、ｐＨ７．５（ｂ）リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）５００ｍＭ、ｐＨ７．５セルラーゼ：インキュベーション懸濁液に、次のセルラーゼから選択したものを加えた：１．Ｈｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓ − デンマーク、バグスバードのノボノルディスク社からセルザイムとして入手しうるＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓから誘導されたセルラーゼ（パルプの乾燥重量に対して８．７％ｗ／ｗのセルロース結合たんぱく質に相当する８７５μｌ）。２．Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ − デンマーク、バグスバードのノボノルディスク社からセルクラストとして入手しうるＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉから誘導されたセルラーゼ（パルプの乾燥重量に対して４．４％ｗ／ｗのセルロース結合たんぱく質に対応する０．２８μmolに相当する７０μｌ）。３．Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ − ＢＤＨＵＫ社から入手しうるＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅから誘導されたセルラーゼ。セルラーゼの不在下での対照実験も行った。インキュベーション：混合物は、穏やかに撹拌しながら、室温で１５分間インキュベートした。試験シートの製造：紙試験シートを製造するために、体積を蒸留水で１００ｍｌに増加し、次の方法で操作する実験室用設計製紙装置を使用して紙シート（６ｃｍ²）を製造した：紙パルプの懸濁液（０．２％ｗｖ^-1）を、細かいナイロンフィルターメッシュを有するプラスチックフィルターホルダーに注ぎ入れた。数秒間真空にすることによって、パルプはメッシュによって支持された紙シートになった。フィルターメッシュを装置から取り出し、紙シートを第２のナイロンメッシュの間に挟み、吸い取り紙の間で吸い取った。紙シートを注意深く製紙メッシュから取り出し、ロールにかけて平らにし、そして乾燥した。試験シートの乾燥／加熱：紙シートは次の方法のうちの１つで乾燥した：（ａ）空気乾燥；（ｂ）ドラム乾燥 − 接触時間４０〜２５０秒で、８０〜１０８℃の一定温度にて一般に操作する。（ｃ）ホットプレートプレス − 一般に、接触時間３０秒で、最高表面温度１６０℃となる。平なアルミニウムプレートを用いて、紙試験シート（吸い取り紙の間に挟んだ）をホットプレートに向かってプレスした。試験手順：乾燥シートを、次の試験の１つ以上により、サイジングついて評価した：（ａ）インク落下試験（ＩＤＴ） − パーカースーパークイックインク（パーマネントブルーブラック）の１５μｌの滴を、紙の試験片上に落とし、完全に吸収されるのにかかった時間を測定し、記録した。結果は秒または０〜＋＋＋＋の実験目盛りで記録した：０は、完全吸収にかかった時間が１００秒未満であることを意味する。＋は、完全吸収にかかった時間が１００〜５００秒であることを意味する。＋＋は、完全吸収にかかった時間が５００〜１０００秒であることを意味する。＋＋＋は、完全吸収にかかった時間が１０００〜２０００秒であることを意味する。＋＋＋＋は、完全吸収にかかった時間が２０００秒を越えることを意味する。（ｂ）ハーキュリーズサイズ試験（ＨＳＴ） − 米国、ＧＡ３０３４８、アトランタ、私書箱１０５１１３、テクノロジーパークアトランタ、ＴＡＰＰＩ、ＩＳＢＮ０−８９８５２−２００−５（ｖｏｌ１および２）、（１９８７）出版の”Ｔａｐｐｉ試験法”で定められている。ＨＳＴは、耐インク性Ｔ５３０ｐｍ−８３による、紙のサイジング試験として定められている。データは秒で記録し；値が高いほど、そのサイズ剤はすぐれている。好ましくは２０秒を越える、より好ましくは１２０秒を越える、さらに好ましくは２００秒を越えるＨＳＴ値が得られる。（ｃ）コブ（Ｃｏｂｂ）サイズ試験 − Ｔ４４１ｏｍ−８４により”Ｔａｐｐｉ試験法”（上記と同じ）で定められている。データはｇ／ｍ²で記録する。”十分に飽和”とは、紙がサイジングを全く示さなかったことを意味する。コブ値が低いほど、そのサイズ剤はすぐれている。好ましくは３０ｇ／ｍ²未満、より好ましくは２１ｇ／ｍ²未満のコブ値が得られる。実施例１Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉセルラーゼ製剤（セルクラスト、デンマーク、バグスバードのノバノルディスク社）によって得られるサイジングにおける温度の効果を調べた。これらの試験では、ドラム乾燥機を、可変温度ホットプレートと共に用いた。ドラム乾燥機は接触時間２５０秒で一定温度８０℃を提供し、ホットプレートは接触時間３０秒で最高表面温度１６０℃を提供した。平らなアルミニウムプレートを用いて、紙シート（吸い取り紙に挟んだ）をホットプレートに向かってプレスした。Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉセルラーゼ製剤（７０μｌセルクラスト、セルロース繊維の乾燥重量に基づいて４．４％ｗｗ^-1セルロース結合たんぱく質に相当する）を用い、混合物を、穏やかに撹拌しながら、１５分間、室温でインキュベートした。セルラーゼを用いない対照実験も行った。紙試験シートは上記のように製造した。試験シートをまず吸い取り紙の間でプレスし、そして次の３つの方法のうちの１つで乾燥した。（ａ）空気乾燥；（ｂ）ドラム乾燥機：８０℃／２５０秒；または（ｃ）ホットプレートプレス：１６０℃／３０秒、その後、ドラム乾燥機８０℃／２５０秒。次に、乾燥シートをインク落下試験（ＩＤＴ）によってサイジングについて評価した。次のサイジング結果が、異なる乾燥法の下で製造した試験紙から得られた。 − ＝試験せず緩衝塩がセルロースと相互作用してサイジングに影響を及ぼす可能性を除外すると、酵素を用いずに紙を製造したときのサイジングは観察されなかった。サイジングはトリス−Ｔ．ｒｅｅｓｅｉセルラーゼ（セルクラスト）インキュベーションで観察され、そして紙を初めにより高い温度で乾燥し、その後、より低い温度でドラム乾燥したとき、より大きなサイジング度が観察された。セルラーゼ／ＰＢＳ紙もより高い温度でサイジングがなされたが、サイジングの程度は、トリス −ＨＣｌの存在下で得られたものより低かった。実施例２Ｈｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓセルラーゼ製剤（セルザイム、デンマーク、バグスバードのノバノルディスク社）を用いて行ったサイジングのレベルへにおけるインキュベーション時間の効果を調べた。トリス−ＨＣｌ（５０ｍＭ、ｐＨ７．５、１０ｍｌ）を、蒸留水中の０．２ｇパルプへ加え、Ｈｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓセルラーゼ製剤（８７５μ ｌ）を加え、混合物を１５分間または９０分間、室温でインキュベートした。インキュベートの終わりで、パルプ試料を渦巻き状に混合し、１００ｍｌに希釈した。試験紙は標準法で製造し、ドラム乾燥機へ１００℃／２５０秒で１回通過させることによって乾燥した。異なる方法によって得られるサイジング度を、ＩＤＴ法を用いて評価した。インキュベーション時間を１５分から９０分へ増加しても、サイジングレベルの有意な増加にはならなかった。実施例３試験紙において得られるサイジングとＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉまたはＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓセルラーゼ製剤の添加量との間の定量的関係を確定するために、さらに１組の実験を行った。標準化された製紙条件を次のように用いた：蒸留水中のパルプの試料（０．２ｇの乾燥紙に等しい）に、１０．０ｍｌの緩衝液を加えた（５０ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．５）。様々な量のセルラーゼ（ＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉまたはＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓ；表３）を加え、混合物を渦巻き状に混合した。パルプを、室温で１５分間、穏やかに振盪しながらインキュベートし、その後、混合物を蒸留水で１５０ｍｌに希釈し、試験紙シートを製造した。各試験シートをメッシュから取り出し、手動ローラーを用いて、乾燥３ＭＭ吸い取り紙の折り畳んだシートの間でプレスした。シート（まだ吸い取り紙の中に包まれている）を、接触時間２５０秒で１００〜１０４℃のドラム乾燥機に１回通した。結果は表３に示す。＊当量添加レベルを表す。結果から、両セルラーゼはサイジングを行うが、Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓセルラーゼ製剤は使用条件下でＴ．ｒｅｅｓｅｉセルラーゼよりも大きなレベルのサイジングを行うことが分かる。実施例４Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉセルラーゼ製剤（セルクラスト、デンマーク、バグスバードのノバノルディスク社）またはＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓセルラーゼ製剤（セルザイム、デンマーク、バグスバードのノバノルディスク社）のいずれかで得られたサイジングレベルにおける緩衝液の省略および高温（１６０℃）乾燥の効果を調べた。表４に記載の様々な条件を用いて、紙シートを上記のように製造した。サイジングは標準ＩＤＴ法によって翌日測定した。結果から、セルクラストはより高い乾燥温度（１６０℃）でセルザイムよりも有利であり、良好なサイジングを行う。実施例５ハーキュリーズサイジング試験（ＨＳＴ）を用いて、トリスの添加の有無での、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉセルラーゼ（セルクラスト、デンマーク、バグスバードのノバノルディスク社）またはＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓセルラーゼ（セルザイム、デンマーク、バグスバードのノバノルディスク社）のいずれかによって得られるサイジング度を測定した。シートを製造するために、２％（ｗｖ^-1）パルプ製紙原料を５％（ｗｗ^-1）セルラーゼたんぱく質（繊維の乾燥重量に基づく）と共に、５分間、２５℃でインキュベートし、その後、紙シートを形成した。シートを１０５℃のドラム乾燥機で４０、８０、１６０または２４０秒間乾燥し、次の製造後加熱処理のうちの１つを行った：２４時間、自然エージング（Ｎ／Ａ）；１０分間８０℃および１０分間１０５℃。結果から、ＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓおよびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉセルラーゼは、１０５℃でドラム乾燥した後、ＨＳＴによって測定すると、中程度のサイジングをもたらすことが分かる。実施例６Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ（ＢＨＤ社）のセルラーゼ製剤をバイオサイズ剤として試験した。試料をパルプ製紙原料のアリコート（１５ｍｌ蒸留水中の０．２ｇ乾燥重量繊維）に加えた。セルラーゼ添加レベルは、当量セルロース結合たんぱく質濃度（繊維重量に基づいて８．７ｗｗ^-1に相当する）を加えて、Ｈｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓセルラーゼ（セルザイム、デンマーク、バグスバードのノバノルディスク社）と直接比較できるように調整した。パルプおよびセルラーゼ試料を室温で１５分間インキュベートし、その後、手漉きシートを製造した。シートは１０５℃のドラム乾燥機へ１回通すことによって乾燥し、一晩、室温に放置し、その後、ＩＤＴを用いてサイジング試験を行った。結果は表６に示す。結果は、当量たんぱく質濃度を用い、Ｈｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓセルラーゼと比較すると、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅのセルラーゼが中程度のサイジング効果をもたらすことを示している。実施例７サイズ剤としてのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍセルロソームを試験するために、Ｃｌ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ（ＮＣＩＭＢ１０６８２）を、セルロース源（パルプ＠１％ｗｖ^-1）を用いて、１０００ｍｌの基礎培地（（ｇｌ−１）イースト抽出物，１０；ＫＨ₂ＰＯ₄，１．５；Ｋ₂ＨＰＯ₄・３Ｈ₂Ｏ，２．９；（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄，１．３；およびＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ，（１．０％ｗｖ^-1）１．０ｍｌ^-1）を含む成長培地中の１．０％（ｗｖ^-1）パルプ上で成長させ、そして加圧滅菌した。２５ｍｌの塩溶液（ＭｇＣｌ₂２％ｗｖ^-1 ；ＣａＣｌ₂０．２％ｗｖ^-1、加圧滅菌）。１５ｍｌのシステイン溶液（５０ｇｌ^-1、フィルター滅菌）。成長培地（ジュランビン中の１リッター）を５分間窒素でパージし、６０℃に加熱し、その後、インキュベートした。次に、培養物を２４０時間インキュベートした。培養物を採取し、細胞およびパルプ破片を遠心分離によって培養液から分離した。ナトリウムアジド（０．０２％（ｗｖ^-1））を培養液およびパルプ破片の両方に加えて、微生物がさらに成長するのを妨げた。Ｃｌ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ培養物を用いて紙を製造することにより、培養液をサイズ剤として試験した。無サイズ紙パルプ（１０％（ｗｖ^-1）；２．１６ｇ）を５つの２５０ｍｌフラスコへ重量を計って入れた。次に、Ｃｌ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ培養液（２００；１００；５０；２５；および０ｍｌ）を各フラスコへ加え、体積を蒸留水で２００ｍｌに調整した。混合物を室温で１５分間撹拌し、標準製紙法を用いて各フラスコの内容物から紙シートを製造した。紙はドラム乾燥機を使用して８０℃で２５０秒間乾燥した。サイジングは標準ＩＤＴ法を用いて翌日測定した。Ｃｌ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ培養液の代わりにＣｌ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ非接種成長培地を無サイズ紙パルプに加えて、対照紙シートも製造し、上記のように測定した。ペレット化パルプ破片および細胞を用いるサイジングについての試験も行った。パルプ破片および細胞（２．１６ｇ；％パルプは未知）を２つの２５０ｍｌフラスコへ重量を計って入れた。一方のフラスコには、２００ｍｌのＣｌ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ成長培地を加えて、パルプ破片を再懸濁させ、他方のフラスコには、２００ｍｌの蒸留水を加えた。両方のフラスコを室温で１５分間撹拌し、標準製紙法を用いて、両フラスコ内容物から紙シートを製造した。紙はドラム乾燥機を使用して９０℃で２５０秒間乾燥した。サイジングはＩＤＴ法を用いて翌日測定した。Ｃｌ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ培養液は紙をサイジングしなかった。これは培養液のセルロソームのレベルが非常に低いためと考えられる。パルプ破片から製造された紙シートはサイジングを示し（表４）、蒸留水を用いたときは、Ｃｌ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ成長培地に比べて、サイジング度に有意な低下が見られた。これは蒸留水の使用により、成長培地の使用に比べて、蒸留水の塩／イオン濃度が低下し、パルプ表面からセルロソームが逃げて、サイジング度を低下させたためと考えられる。結果は、Ｃｌ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍセルロソーム製剤の存在が紙シートにサイジングをもたらすことを裏付けている。＊二重試験実施例８さらに一連の実験を行って、紙のサイジングにおけるセルラーゼの効果を測定した。実験において、次の材料および一般的な手順を用いた：セルラーゼ水性Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉセルラーゼ製剤を用いた（フランス、ナンテーレセデックス９２０１７のノボノルディスクバイオインダストーリ社の”セルクラスト１．５Ｌ”）。さらに、英国、ドーセット、ポールのシグマアルドリッチ社から黄褐色粉末として入手しうるＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍから誘導したセルラーゼを用いた。製紙原料の製造断りがなければ、使用構成はＥＣＦ漂白硬木（ＨＷ）および軟木（ＳＷ）パルプのブレンド（ＨＷ／ＳＷの比率は７０：３０）であった。製紙原料は１／３ＰＢＳを用いて製造し、充填剤は加えなかった。手順は次の通りであった：２８０ｇの漂白硬木パルプおよび１２０ｇの漂白軟木パルプを、１８リッターの１／３ＰＢＳへ加えた。激しく撹拌することによって、繊維を分散させた。次に、この製紙原料をホランダーに移し、叩解度値が２５ｏＳＲとなるまで叩解した（所要時間は通常３０〜３５分）。必要ならば、製紙原料をさらに１／３ＰＢＳで２％の最終稠度に調整した。添加剤の添加／インキュベーションセルラーゼ溶液を粘稠な（稠度２％）製紙原料に加えた。２リッターの粘稠な製紙原料（４０ｇの繊維を含有する）を金属ジャグに入れ、そして製紙原料の動きをゆったりさせるため、できるだけ遅い速度で撹拌した。インキュベーションの段階で酵素の変性が生じるかもしれないので、激しい撹拌は避けるべきである。製紙原料は周囲温度（２０〜２５℃）である。インキュベーション時間は１５分であった。このインキュベーション時間の間に、製紙原料の動きはより軽く／より速くなった。これがはっきりしたら、撹拌機速度をできるだけ遅くする。１５分のインキュベーションの後、粘稠な製紙原料を比例配分装置に加えた。比例配分装置比例配分装置内の粘稠な製紙原料を、ＤＥＭＩ水のみを用いて、０．２５％の稠度に希釈した。比例配分装置における通常の撹拌速度を用いて製紙原料を混合した。手漉きシートの形成白水ボックスを、手漉きシート形成するためにＤＥＭＩ水で満たした。型装置内の適所の手漉きシート形成用長網を用いて、比例配分装置からの製紙原料１リッターを、白水ボックスからの水と共に、デックル（Ｄｅｃｋｌｅ）ボックスに加えた。デックルボックスの内容物を孔あき撹拌機で撹拌した（５回上下に動かした）。５回目の撹拌の後、撹拌機を水面で静止させて、デックルボックス内の水の動きをなくすようにした。次に、水を白水ボックスへポンプで戻し、初期の湿ったマットを形成した。どのくらいの勢いで撹拌を行ったかにより、デックルボックス内に発泡がいくらか生じる。この泡は初期の湿ったマットを形成した後にも残り、かなり多いことがある。水を除いた後、数秒間、空気がマットを通して吸引されるようにポンプを動かし続けると、この泡のいくらかをなくすことができる。手漉きシートのプレスおよび乾燥湿ったマットおよび手漉きシート長網を型からプレスへ移した。プレスされたシートの水分含有率は７０％にすべきである。次に、プレスされたシートを電気加熱ドラム乾燥機上で乾燥した。乾燥機の表面温度は１０５℃であり、乾燥機の速度は、プレスされたシートが熱面と３５秒間接触するような速度であった。シートの最終水分含有率は４〜７％（一般には５％）にすべきである。プレス後のシートの水分含有率が７０％未満であると、上記の条件ではシートはドラム乾燥機の表面に粘着してしまう。これは不均一なプレス圧力がシートの幅にかかるために生じるのかもしれない。これを避けるようにすべきである。ドラム乾燥機の表面温度が１０５℃未満、７０℃以上であるとき、手漉きシートの最終水分含有率を５％にするためには、より長い接触時間が必要である。ドラム乾燥機の表面温度が７０℃より低いならば、接触時間をさらに延長するか、あるいは湿ったマットの初期加圧を増してより多くの水を除去するか、あるいはこれらの両方を行う必要がある。プレスされたシートの水分含有率を６０％未満に下げることは可能である。試験紙の状態調節および試験は、米国、ＧＡ３０３４８、アトランタ、私書箱１０５１１３、テクノロジーパークアトランタ、ＴＡＰＰＩ、ＩＳＢＮ０−８９８５２−２００−５（ｖｏｌ１および２）出版の”ＴａｐｐｉＴｅｓｔＭｅｔｈｏｄｓ”，ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＰａｒｋＡｔｌａｎｔａ，ＰＯＢｏｘ１０５１１３，ＡｔｌａｎｔａＧＡ３０３４８，ＵＳＡ，ＩＳＢＮ０−８９８５２−２００−５（ｖｏｌ１ａｎｄ２）に記載の手順に従って行う。ＨＳＴ（ハーキュリーズサイジング試験）は、耐インク性Ｔ５３０ｐｍ−８３によって、紙のサイジング試験として定められており；コブ（Ｃｏｂｂ）試験はＴ４４１ｏｍ−８４によって定められている。セルラーゼ濃度、エージング時間および温度を各々変えた一連の実験を行った。結果は次の表に示す： ”自然エージング”とは、Ｔ４０２ｏｍ−８３に規定されているように２３ ℃±１℃、相対湿度５０．０±２％で、規定時間貯蔵することを意味し； ”オーブンキュアリング”とは、８０℃で３０分間処理することを意味する。セルラーゼを用いて製造しそして標準条件下で乾燥した手漉きシートのサイジング性能 ”Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍで製造した手漉きシートのＨＳＴ（秒）” "Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉで製造した手漉きシートのＨＳＴ(秒)" "Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉで製造した手漉きシートのコブ（ｇ）" 実施例９上記実施例８に記載の手順の下で行ったさらに一連の実験で、添加たんぱく質［セルクラスト（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ、ノボノルディスク社）およびセルザイム（Ｈｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓ、ノボノルディスク社）］が紙に保持されている程度を調べた。別の実験で、セルクラストおよびセルザイムを上記製造の紙パルプおよび試験シートに加えた（２４時間自然エージング）。紙に保持されたたんぱく質の量（紙ウェブを形成したとき、パルプ上澄みに残るものとは異なる）は、両たんぱく質の窒素含有率が１６％ｗ／ｗであるとして、紙の窒素含有率に基づいて推定した。窒素含有率はアンテック（Ａｎｔｅｃ）ミクロ熱分解によって測定した。結果は次の表に示す：結果から、セルクラストの１／４のセルザイムの添加レベルで、同様なたんぱく質保持レベルが得られた。同様なたんぱく質保持レベルで、両セルラーゼは同様なサイジング効果をもたらした。実施例１０次の実施例では、デンプンに対する結合アミラーゼ酵素について説明する。ＨＰＬＣを用いて２つのアミラーゼ酵素の特徴を示す：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅからのα−アミラーゼ（タイプＸ−Ａ粗製剤）およびＡ．ｎｉｇｅｒからのアミログルコシダーゼ（英国、ドーセット、ポールのシグマアルドリッチ社から入手しうる）。各製剤の主な触媒ピークをデンプングルコース放出分析を用いて測定した。各たんぱく質の結合効率を各種デンプンに対して測定し、ＢＳＡ対照を評価に含めた。 α−アミラーゼの３２ｍｇｍｌ^-1（乾燥重量）溶液を０．１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）中で製造した。この１００μｌを、１ｍｌ分^-1で０．１Ｍリン酸塩緩衝液を流すＢｉｏ−ＳｉｌＳＥＣゲル透過カラムを使用するＨＰＬＣに入れた。フラクション（１ｍｌ）を集め、標準マイクロタイター分析（グルコースのための）を用いてデンプン懸濁液から放出された還元糖類についての試験を行った。次の定性分析を用いて、試験試料中のグルコースおよびセロビオースを検出した。分析はマイクロタイター皿中で室温にて行った。試薬成分：フェノール試薬１０μｌ（０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）中の０．１２８Ｍフェノール）アミノピリン試薬１０μｌ（０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）中の１９．７ｍＭ４−アミノフェナゾン）０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）中のペルオキシダーゼ１０μｌ（８００Ｅｕ／ｍｌとする）０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）中のグルコースオキシダーゼ１０μ ｌ（２５０Ｅｕ／ｍｌとする）０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）６０μｌこれらの試薬成分を混合し、マイクロタイター皿の穴に加えた。試験試料１００μｌ、次いで過剰の基質（デンプン）を加えた。赤色の出現がアミラーゼの存在を示した。同じ方法をやはり用いて、アミログルコシダーゼについてのＨＰＬＣ特性を得た。アミログルコシダーゼは、クマシーブルー法によって測定すると、約２６２ｍｇｍｌ^-1のたんぱく質を含有する液体製剤であった。０．１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）中の０．００７希釈物１００μｌを、ＨＰＬＣに入れ、２３０ｎｍ０．１ＡＵＳで調べた。１ｍｌのフラクションを集め、上記のデンプン懸濁液から放出される還元糖について試験した。 α−アミラーゼおよびアミログルコシダーゼが懸濁液中の通常のデンプンに結合する能力を調べた。デンプン（０．２ｇ；Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）を９ｍｌの０．１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）に加え、そして１ｍｌのα−アミラーゼ溶液（クマシーブルー分析により９．５ｍｇｍｌ^-1）を加えた。これを振盪機で２０分間インキュベートした。試料を１３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１００μｌの試料をＨＰＬＣカラムに入れた。２０分で結合したα−アミラーゼのピークの特性を、Ｙ＝０試料と比較した。このデータから、酵素の結合率（％）を計算した。アミログルコシダーゼの結合も陽イオンデンプンに対して試験した。ＢＳＡも対照として同様に用いた。使用ＢＳＡの最終濃度は０．１ＭＰＢＳ中で０．２％（ｗｖ^-1）であった。結合実験結果は次表に示す。デンプンの結合特性結果は、α−アミラーゼおよびアミログルコシダーゼはいずれも、デンプンおよび陽イオンデンプンの両者に特異的に結合することを示している。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１０月２２日【補正内容】請求の範囲１．ａ）紙または紙の成分を、紙または紙の成分に特異的に結合することができるたんぱく質と接触させること；並びにｂ）紙に結合したたんぱく質を変性することの工程を含む、紙のサイジング方法。２．たんぱく質が加熱によって変性される、請求項１に記載の方法。３．紙が７０〜１７０℃に加熱される、請求項２に記載の方法。４．紙が８０〜１１０℃に加熱される、請求項３に記載の方法。５．たんぱく質が化学変性剤での処理によって変性される、請求項１に記載の方法。６．たんぱく質が多糖類に結合することができる、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。７．たんぱく質がセルロースに結合することができる、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。８．たんぱく質がセルラーゼまたはそのフラグメントである、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。９．たんぱく質が、Ｃｅｌｌｕｍｏｎａｓｆｉｍｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ、Ｆｕｓａｒｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍおよびＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓよりなる群から選択されるセルラーゼである、請求項８に記載の方法。１０．たんぱく質がエキソセルラーゼまたはそのフラグメントである、請求項８に記載の方法。１１．たんぱく質がＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓから誘導されたセルラーゼである、請求項１０に記載の方法。１２．たんぱく質がエンドセルラーゼまたはそのフラグメントである、請求項８に記載の方法。１３．たんぱく質がＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉから誘導されたセルラーゼである、請求項１２に記載の方法。１４．たんぱく質がデンプンに特異的に結合することができる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。１５．たんぱく質がアミラーゼまたはそのフラグメントである、請求項１４に記載の方法。１６．ａ）紙パルプを製造すること、ｂ）パルプの成分に特異的に結合することができるたんぱく質を加えること、ｃ）パルプから紙を形成すること、並びにｄ）紙を加熱してたんぱく質を変性することの工程を含む、サイジングされた紙の製造方法。１７．ａ）紙に、紙に結合することができるたんぱく質を施すこと、並びにｂ）紙を加熱してたんぱく質を変性することの工程を含む、サイジングされた紙の製造方法。１８．請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法によってサイジングされた紙。１９．紙または紙の成分に特異的に結合することができるたんぱく質の、紙のサイジングのための使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ブラントン，ハーヴェイ・ジョンイギリス国ケントティーエヌ13 ３エイイー，セヴンオウクス，ザ・ドライブ 12，フラット２ (72)発明者クリスプ，マーク・トレイシーオランダ王国エヌエル−3816 ハーハーアメルスフォアルト，アリアヴェーク 49 (72)発明者シェアー，ダイアナ・ジェーンイギリス国ケントシーティー２７ユーエイチ，カンタベリー，ビックナー・クロース，アボッツベリー・ハイツ 33 (72)発明者ベイツ，ロバートオランダ王国エヌエル−3817 イェーデーアメルスフォアルト，ステフェンソンストラート 68 (72)発明者スレイター，ジェイムズ・ハワードイギリス国カーディフシーエフ４５エスアール，リズヴェイン，ヘル−ワイ−デライン 38 (72)発明者ハードマン，デイヴィッド・ジョンイギリス国ケントシーティー６７ティーズィー，ハーン・ベイ，ハーン，カーティスウッド・パーク・ロード 50

Claims

【特許請求の範囲】１．ａ）紙または紙の成分を、紙または紙の成分に結合することができるたんぱく質と接触させること；並びにｂ）紙に結合したたんぱく質を変性または加熱することの工程を含む、紙のサイジング方法。２．ａ）紙または紙の成分を、紙または紙の成分に結合することができるたんぱく質と接触させること；並びにｂ）紙を加熱することの工程を含む、紙のサイジング方法。３．紙が７０〜１７０℃に加熱される、請求項２に記載の方法。４．紙が８０〜１１０℃に加熱される、請求項３に記載の方法。５．たんぱく質が多糖類に結合することができる、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。６．たんぱく質がセルロースに結合することができる、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。７．たんぱく質がセルラーゼまたはそのフラグメントである、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。８．たんぱく質が、Ｃｅｌｌｕｍｏｎａｓｆｉｍｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ、Ｆｕｓａｒｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍおよびＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓよりなる群から選択されるセルラーゼである、請求項７に記載の方法。９．たんぱく質がエキソセルラーゼまたはそのフラグメントである、請求項７に記載の方法。１０．たんぱく質がＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓから誘導されたセルラーゼである、請求項９に記載の方法。１１．たんぱく質がエンドセルラーゼまたはそのフラグメントである、請求項７に記載の方法。１２．たんぱく質がＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉから誘導されたセルラーゼである、請求項１１に記載の方法。１３．たんぱく質がデンプンに結合することができる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。１４．たんぱく質がアミラーゼまたはそのフラグメントである、請求項１３に記載の方法。１５．たんぱく質が加熱によって変性される、請求項１に記載の方法。１６．たんぱく質が化学変性剤での処理によって変性される、請求項１に記載の方法。１７．ａ）紙パルプを製造すること、ｂ）パルプの成分に結合することができるたんぱく質を加えること、ｃ）パルプから紙を形成すること、並びにｄ）紙を加熱することの工程を含む、サイジングされた紙の製造方法。１８．ａ）紙に、紙に結合することができるたんぱく質を施すこと、並びにｂ）紙を加熱することの工程を含む、サイジングされた紙の製造方法。１９．請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法によってサイジングされた紙。２０．紙または紙の成分に結合することができるたんぱく質の、紙のサイジングのための使用。