FI110194B - Sellulaasin käyttö massan käsittelyyn - Google Patents

Description

x 110194

Sellulaasin käyttö massan käsittelyyn - Använding av cel-lulase för behandling av massa 5 Tämä keksintö koskee sellulaasivalmisteen käyttöä massan käsittelyyn.

Paperinvalmistukseen käytettävän massan valmistuksessa massan suotautumisominaisuudet eivät aina ole riittävän 10 hyviä, jolloin paperilinjan kapasiteetti voi laskea. Mas san suotautumisominaisuudet määritetään usein Schopper-Riegler -testillä (korkea SR-arvo vastaa huonoa suotautu-mista) tai Canadian Standard Freeness -testillä (matala CSF-arvo vastaa huonoa suotautumista). Epätyydyttävää 15 suotautumista voi ilmetä varsinkin valmistettaessa massaa materiaalista, joka jo kerran on läpikäynyt massanvalmistus- ja kuivatusprosessin, kuten esimerkiksi kuivattu ensiömassa, uusiokuitu tai keräyspaperi.

20 Patenteissa EP 262,040 (Cellulose du Pin) ja EP 351,655 (Cultor) kuvataan suotautumiskyvyn paranemista käyttämällä sellulaasia ja hemisellulaasia massan valmistuksessa.

: · Patenteissa JP-A 59-9299 ja JP-A 63-59494 kuvataan sellu- i laasin käyttöä valmistettaessa massaa korkeassa pH-arvos- 25 sa (yli 9) musteen poistumisen parantamiseksi jätepaperi* rista.

Kraft~keitto, massa- ja paperiteollisuudessa laajalti käytetty prosessi, käsittää massan alkalisen sulfaatti-30 keiton, jossa 95% ligniinistä poistuu. Jäljelle jäävä 5% » * ligniiniä antaa massalle tummanruskean värin, jolla on taipumus tummentua UV-valossa tai hapetuksen seurauksena. Jotta saataisiin valkoista massaa korkealuokkaisen pape-rin valmistamiseksi, massan ruskea väri poistetaan moni-35 vaiheisessa valkaisuprosessissa käyttämällä klooria tai . . klooridioksidia.

Valkaisuprosessissa käytetyn kloorin määrän vähentämisek- 2 110194 si on ehdotettu, että massa käsitellään entsymaattisesti ksylanaaseilla (K.E.L. Eriksson, Wood Science and Technology, 24, 1990, sivut 79-101; M.G. Paice et ai., Biotech-nol. and Bioeng., 32, 1988, sivut 235-239; ja J.C. Pom-5 mier et ai., Tappi Journal, 1989, sivut 187-191).

On havaittu, että sellulaasivalmistetta, jossa on runsaasti endoglukanaasi-aktiivisuutta, voidaan menestyksellä käyttää paperimassan käsittelyyn, varsinkin valkaisu-, 10 jauhatus- tai siistausprosessissa tai massan suotautu- misominaisuuksien parantamiseksi.

Tämä keksintö koskee siis runsaasti endoglukanaasia ja vähän tai ei lainkaan sellobiohydrolaasia sisältävän sel-15 lulaasivalmisteen käyttöä paperimassan käsittelyyn.

Tässä yhteydessä termillä "endoglukanaasi" tarkoitetaan sellulaasia, joka hyökkää selluloosakuitujen vähäkitei-siin amorfisiin kohtiin, minkä seurauksena kiteisyyttä ei 20 juuri lainkaan menetetä.

Keksinnön mukaan on havaittu, että kun massaprosessissa : käytetyn sellulaasivalmisteen endoglukanaasipitoisuus on : korkea, massojen selluloosakuidut vahingoittuvat vähemmän • 25 kuin käytettäessä sellulaasivalmistetta, joka sisältää huomattavasti sellobiohydrolaasia. On siis edullista : käyttää sellulaasivalmistetta, joka sisältää vähintään 50%, etenkin vähintään 90% endoglukanaasia (sellulaasi-proteiinin kokonaispainosta laskettuna).

;* ·. 30 ’ Monet endoglukanaasit ovat tunnettuja ja käyttökelpoisia tässä keksinnössä. Mikrobiendoglukanaaseja pidetään ta-, .· loussyistä edullisina. Endoglukanaasin tulee olla aktii- • vinen ja vakaa massaprosessin olosuhteissa, etenkin pH- 35 arvossa. Esimerkkejä sopivista endoglukanaasilähteistä ovat Aspergillus (etenkin A. niger), Trichoderma (etenkin T. viride, T. reesei ja T. koningii), Humicola (etenkin H. insolens, ks. US-patentti 4,435,307), Fusarium, eten- 3 110194 kin Fusarium oxysporum, Myceliophthora, Phanerochaete, Penicillium, Geotricum ja alkalofilinen Bacillus (US-pa-tentti 3,844,890). Sellulaasivalmisteeseen sisältyvä en-doglukanaasi on edullisesti yksikomponenttinen endoglu-5 kanaasi, ja edullisemmin sellainen, joka sisältää sellu loosaa sitovan alueen.

Erityisen edullinen endoglukanaasi käytettäväksi tässä keksinnössä on endoglukanaasi, joka on immunoreaktiivinen 10 vasta-aineen kanssa, joka on kehitetty Humicola inso- lens:ista, DSM 1800, johdettua, erittäin puhdasta 43 kD endoglukanaasia vastaan. Esimeriksi tällainen endoglukanaasi voi sisältää aminohapposekvenssin, joka on esitetty liitteenä olevassa sekvenssiluettelossa ID#1, tai sen 15 homologin, jossa on endoglukanaasi-aktiivisuutta. Tässä yhteydessä termillä "homologinen" tarkoitetaan DNA:n koodaamaa polypeptidiä, joka hybridoi samaan koettimeen kuin DNA, joka koodaa edellä mainittuun endoglukanaasiin samoissa eritellyissä oloissa (kuten esikastelu 5xSSC:ssä 20 ja esihybridointi 1 h 40°C:ssa liuoksessa, joka sisältää 20% formamidia, 5xDenhardtin liuosta, 50 mM natriumfos-faattia, pH 6,8, ja 50 ^g denaturoitua vasikan kateenkor-··' ’ va-DNA:ta, jonka jälkeen hybridointi tehdään samassa li uoksessa, johon on lisätty 100 μΜ ATP:ta, 18 h 40°C:ssa).

:,· 25 Tämän entsyymin eristystä ja käsittelyä on kuvattu tans- kalaisessa patenttihakemuksessa nro 1159/90.

1 * Tätä keksintöä voidaan käyttää kaikenlaisiin massoihin edistämään niiden valkaisua, jauhatusta tai siistausta, ·.·. 30 tai parantamaan niiden suotautumisominaisuuksia. Tämä on erityisen kiinnostavaa etenkin sellaisten massojen kohdalla, joiden SR-arvo on yli 25, ja varsinkin keitettäessä uudelleen jo aiemmin keitettyä ja kuivattua materiaa-lia, kuten kuivattua ensiömassaa, kierrätyskuituja ja 35 keräyspaperia. Muuntyyppiset massat, joita voidaan menes tyksellä käsitellä sellulaasivalmisteella, ovat kraftmas-sa, sulfiittimassa tai termomekaaninen massa ja muut suursaantomassat.

4 110194

Schopper-Riegler luku (SR) määritetään ISO-standardin 5267 (osan 1) mukaan homogeeniselle massalle, jonka sa-keus on 2 g/1. Tunnetun massatilavuuden annetaan suotau-tua metalliseulan läpi suppiloon. Suppilossa on akselin-5 suuntainen reikä ja sivureikä. Sivureiän kautta valuvan suodoksen määrä mitataan Schopper-Riegler yksiköillä merkityllä mittalasilla.

Riippuen esimerkiksi kierrätysveden käytöstä prosessi voi 10 olla hapan (esim. pH 4-7), jolloin on edullista käyttää

Aspergillus, Phanerochaete, Penicillium, Geotricum tai Trichoderma -endoglukanaasia. Tai prosessin pH voi olla lähellä neutraalia (esim. pH 6,5-9), jolloin on edullista käyttää Humicola, Fusarium tai Myceliophthora -endoglu-15 kanaasia, tai emäksinen (ph >9), jolloin Bacillus-endo- glukanaasia pidetään edullisena.

Sopiva sellulaasiannos vastaa yleensä pH 6:n sellu-laasiaktiivisuutta 100 - 10 000 EGU (seuraavan määrityk-20 sen mukaisesti) per kg kuivaa massaa. Jos massaprosessi on emäksinen (pH yli 7), sellulaasiannoksen tulee vastata , . pH 9:n sellulaasiaktiivisuutta 100 - 10 000 CEVU (seuraa- • van määrityksen mukaisesti) per kg kuivaa massaa.

i t ' 25 Sellulaasiaktiivisuuden määritys (EGU); Substraattiliuos ' sisältää 34,0 g/1 CMC:tä (Hercules 7 LFD) 0,1 M fosfaat- : tipuskurissa, pH 6,0. Analysoitava entsyyminäyte liuote- ; taan samaan puskuriin. 10 ml substraattiliuosta ja 0,5 ml entsyymiliuosta sekoitetaan keskenään ja siirretään vä-30 rähtelyviskosimetriin (esim. MIVI 3000, jota toimittaa

Sofraser, Ranska), jonka lämpötila on säädetty 40°C:seen. Yksi endoglukanaasiyksikkö (EGU) vastaa sitä entsyymimää-rää, joka näissä olosuhteissa laskee viskositeettiarvon puoleen entisestä.

Sellulaasiaktiivisuuden määritys (CEVU1: Substraattiliuos sisältää 33,3 g/1 CMC:tä (Hercules 7 LFD) Tris-puskuris-sa, pH 9,0. Analysoitava entsyyminäyte liuotetaan samaan ,/..: 35 110194 5 puskuriin. 10 ml substraattiliuosta ja 0,5 ml entsyymili-uosta sekoitetaan keskenään ja siirretään viskosimetriin (Haake VT 181, NV-anturi, 181 rpm), jonka lämpötila on säädetty 40°C:seen. Yksi sellulaasiviskositeettiyksikkö 5 (CEVU) vastaa sitä entsyymimäärää, joka näissä olosuh teissa laskee viskositeettiarvon puoleen entisestä.

Kun sellulaasivalmistetta käytetään tämän keksinnön mukaisesti valmistettaessa massaa keräyspaperista, siistaus 10 voidaan aikaansaada toteuttamalla keitto korkeassa pH:ssa (yli 9) siistauskemikaalien läsnäollessa (kuten natrium-hydroksidi, natriumsilikaatti, vetyperoksidi ja pinta-aktiivinen aine), jonka jälkeen muste erotetaan (esim. flotaatiolla ja/tai huuhtelemalla). Keksinnön tämä suori-15 tusmuoto on erityisen edullinen, koska sellulaasi/endo- glukanaasi parantaa myös siistausta, kuten myös suotautu-mista. Siistauksessa käytetyssä korkeassa pH:ssa on edullista käyttää Humicola- tai emäksistä Bacillus-endoglu-kanaasia.

20

Massan keitto kestää yleensä 5-30 minuuttia ja keittoa voi seurata maserointi (ts. inkubointi sekoituksella tai : ilman) entsyymitoiminnan jatkamiseksi. Lämpötila on koko käsittelyn aikana yleensä 15-80°C, tyypillisesti 30-50°C.

; 25 Sellulaasin vaikutusaika on yhteensä (ts. keitto + mase rointi, mikäli käytetään) yleensä 30-180 minuuttia.

t Tämän keksinnön mukaan valmistettua massaa voidaan käyttää tavanomaiseen paperinvalmistukseen.

·.·,, 30 t » ·_ Keksintöä kuvataan tarkemmin seuraavassa esimerkissä, jonka tarkoitus ei ole millään muodoin rajata keksinnön ·. ,* laajuutta.

»

> I

35 6 110194

Esimerkki 43 kD Humicola-endoglukanaasin käyttö paperimassan käsittelyyn 5 43 kD endoglukanaasia, jonka elkuperä on Humicola inso- lens, DSM 1800, käytettiin monentyyppisten paperimassojen käsittelyyn tarkoituksena tutkia entsyymin vaikutusta massan suotautumiseen.

10 Koeolosuhteet olivat seuraavat:

Massat 1. Keräyspaperiseos, joka sisälsi 33% sanomalehtiä, 33% aikakauslehtiä ja 33% tietokonepaperia. Siistauskemikaa- 15 leiliä ja ilman (WPC ja WP).

2. Kierrätettyjä pahvipakkauksia (RCC).

3. Valkaistu kraftmassa, valmistettu männystä (BK).

4. Valkaisematon termomekaaninen massa, valmistettu kuusesta (TMP).

20

Entsvmaattinen käsittely 43 kD endoglukanaasi -valmiste laimennettiin väkevyyteen 7 CEVU/ml ja lisättiin kuhunkin yllä mainittuun massaan (50 g DS, sakeus 3%). Entsyymiannos oli 2400 CEVU/kg kui-: 25 vaa massaa. Entsymaattinen käsittely toteutettiin pH:ssa j 7,5 ja 40°C:en lämpötilassa hellävaroen sekoittaen 60 . minuutin ajan. 30 minuutin kuluttua otettiin näyte reak- tion etenemisen määrittämiseksi. 60 minuutin kuluttua .Γ! massa laimennettiin 0,5%:n sakeuteen kylmällä vedellä 30 (+4°C), jotta reaktio lakkaisi.

t I · Märkien massojen suotautuminen määritettiin yllä kuvatul-la tavalla antamalla kullekin oma Schopper-Riegler (SR) -'·.'·· luku. Suotatumisaika tyhjiössä (DT) määritettiin myös.

Tulokset on esitetty seuraavissa taulukoissa.

, 35 7 110194

Keräyspaperi + kemikaaleja _Vertailu_Entsyymi_ SR (3%) 61 55

Suotautumisaika (s) 5 150 g/m2 18,2 17

Massa g/m2 65,6 66,4

Tilavuus cm3/g 1,65 1,66

Katkeamispituus, m 3650 3970

Puhkaisuindeksi 2,19 2,47 10

Keräyspaperi _Vertailu_Entsyymi 15 SR (3%) 59 51

Suotautumisaika (s) 150 g/m2 18,2 12,7

Massa g/m2 68,0 67,9

Tilavuus cm3/g 1,68 1,64 20 Katkeamispituus, m 3810 3970

Puhkaisuindeksi 2,25 2,33 : 25 Kierrätettyjä pahvipakkauksia j _Vertailu_Entsyymi_ . SR (3%) 45 33

Suotautumisaika (s) 150 g/m2 6,8 5,3 30 Massa g/m2 70,2 67,3 ·’ ’ Tilavuus cm3/g 1,91 1,99

Katkeamispituus, m 3640 3530

Puhkaisuindeksi 2,25 2,22 8 110194

Kraft _Vertailu_Entsyymi SR (3%) 42 31

Suotautumisaika (s) 5 150 g/m2 10,7 6

Massa g/m2 67,5 69,1

Tilavuus cm3/g 1,44 1,42

Katkeamispituus, m 7010 7190

Puhkaisuindeksi 5,14 4,96 10

TMP

_Vertailu_Entsyymi 15 SR (3%) 68 60

Suotautumisaika (s) 150 g/m2 13,8 11,3

Massa g/m2 68,7 70,2

Tilavuus cm3/g 2,13 2,04 20 Katkeamispituus, m 3630 3620

Puhkaisuindeksi 1,95 1,91

Vertailukokeet. Samat olosuhteet kuin entsyymikäsittelys-: 25 sä, mutta entsyymiä ei lisätty.

. .·. Taulukosta näkyy, että 43 kD endoglukanaasi -käsittely aikaansaa huomattavaa SR-lukujen laskua ja parantaa mer-j.”.’ kittävästi paperinvalmistukseen käytettävien massojen 30 suotautumista.

I I I

Eri massoista valmistettiin paperiarkkeja Rapid Köthen : laitteella ja näiden arkkien lujuutta mitattiin eri teki- V : joiden suhteen (katkeamispituus mukaan lukien). Entsyymi- ,···. 35 toiminnan aiheuttamaa lujuusominaisuuksien heikkenemistä ei havaittu, kuten taulukoista ilmenee.

9 110194 SEKVENSSILUETTELO (1) YLEISTÄ (i) HAKIJA: NOVO NORDISK A/Sf 5 (ii) KEKSINNÖN NIMIKE: (iii) SEKVENSSIEN MÄÄRÄ: 1 (iv) POSTIOSOITE: (A) : OSOITE: NOVO NORDISK A/S, Patent-tiosasto 10 (B) KATU: Novo Alle (C) KAUPUNKI: Bagsvaerd (E) MAA: Tanska (F) POSTINUMERO: DK-2880 (v) TIETOKONELLA LUETTAVA MUOTO: 15 (A) LEVYTYYPPI: Levyke (B) TIETOKONE: IBM PC yhteensopiva

(C) KÄYTTÖJÄRJESTELMÄ: PC-DOS/MS-DOS

(D) OHJELMISTO: Patentin Release #1.0, versio #1.25 20 (vi) NYKYISEN HAKEMUKSEN TIEDOT: (A) HAKEMUS NUMERO: (B) JÄTTÖPÄIVÄ: (C) LUOKITUS: 25 (viii) ASIAMIES/AGENTTITIEDOT: : : : (A) NIMI: Thalsoe-Madsen, Birgit (ix) TELEYHTEYSTIEDOT: ;V. (A) PUHELIN: +45 4444 8888 * · 30 (B) TELEFAX: +45 4449 3256 (C) TELEX: 37304 ίο 110104 (2) SEKVENSSIN NRO 1 TIEDOTi (i) SEKVENSSIN OMINAISUUDET: (A) PITUUS: 1060 perusparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo 5 (C) SÄIKEISYYS: yksinkertainen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen

(ii) MOLEKYYLITYYPPI: cDNA

(iii) HYPOTEETTINEN: EI

(vi) ALKUPERÄ: 10 (A) ORGANISMI: Humicola insolens (b) KANTA: DSM 1800 (ix) OMINAISUUS: (A) NIMI/TUNNUS: matjpeptide (B) SIJAINTI: 73...927

15 (ix) OMINAISUUS

(A) NIMI/TUNNUS: sig_peptide

(B) SIJAINTI: 10...72 (ix) OMINAISUUS

(A) NIMI/TUNNUS: CDS

20 (B) SIJAINTI: 10...927 (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI NRO 1 GGATCCAAG ATG CGT TCC TCC CCC CTC CTC CCG TCC GCC GTT GTG GCC 48 • · Het Arg Ser Ser Pro Leo Leu Pro Ser Ala Vai Vai Ala i -21 -20 -15 -10 :'V GCC CTG CCG GTG TTG GCC CTT GCC GCT GAT GGC AGG TCC ACC CGC TAC 96 : Ala Leu Pro Vai Leu Ala Leu Ala Ala Asp Gly Arg Ser Thr Arg Tyr -5 1 5 jv. TGG GAC TGC TGC AAG CCT TCG TGC GGC TGG GCC AAG AAG GCT CCC GTG 144 • ·' Trp Asp Cys Cys Lys Pro Ser Cys Gly Trp Ala Lys Lys Ala Pro Vai Y: 10 15 20 AAC CAG CCT GTC TTT TCC TGC AAC GCC AAC TTC CAG CGT ATC ACG GAC 192 '·'· Asn Gin Pro Vai Phe Ser Cys Asn Ala Asn Phe Gin Arg Ile Thr Asp ..f 25 30 35 40 TTC GAC· GCC AAG TCC GGC TGC GAG CCG GGC GGT GTC GCC TAC TCG TGC 240 : .. Phe Asp Ala Lys Ser Gly Cys Glu Pro Gly Gly Vai Ala Tyr Ser Cys 45 50 55 GCC GAC CAG ACC CCA TGG GCT GTG AAC GAC GAC TTC GCG CTC GGT TTT 288 ' 1 Ala Asp Gin Thr Pro Trp Ala Vai Asn Asp Asp Phe Ala Leu Gly Phe 60 65 70 110194 11 GCT GCC ACC TCT ATT GCC GGC AGC AAT GAG GCG GGC TGG TGC TGC GCC 336

Ala Ala Thr Ser lie Ala Gly Ser Asn Glu Ala Gly Trp Cys Cys Ala 75 80 85 TGC TAC GAG CTC ACC TTC ACA TCC GGT CCT GTT GCT GGC AAG AAG ATG 384

Cys Tyr Glu Leu Thr Phe Thr Ser Gly Pro Val Ala Gly Lys Lys Met 90 95 100 GTC GTC .CAG TCC ACC AGC ACT GGC GGT GAT CTT GGC AGC AAC CAC TTC 432

Val Val Gin Ser Thr Ser Thr Gly Gly Asp Leu Gly Ser Asn His Phe 105 110 115 120 GAT CTC AAC ATC CCC GGC GGC GGC GTC GGC ATC TTC GAC GGA TGC ACT 480

Asp Leu Asn lie Pro Gly Gly Gly Vai Gly He Phe Asp Gly Cys Thr 125 130 135 CCC CAG TTC GGC GGT CTG CCC GGC CAG CGC TAC GGC GGC ATC TCG TCC 528

Pro Gin Phe Gly Gly Leu Pro Gly Gin Arg Tyr Gly Gly lie Ser Ser 140 145 150 CGC AAC GAG TGC GAT CGG TTC CCC GAC GCC CTC AAG CCC GGC TGC TAC 576

Arg Asn Glu Cys Asp Arg Phe Pro Asp Ala Leu Lys Pro Gly Cys Tyr 155 160 165 TGG CGC TTC GAC TGG TTC AAG AAC GCC GAC AAT CCG AGC TTC AGC TTC 624

Trp Arg Phe Asp Trp Phe Lys Asn Ala Asp Asn Pro Ser Phe Ser Phe 170 175 180 CGT CAG GTC CAG TGC CCA GCC GAG CTC GTC GCT CGC ACC GGA TGC CGC 672

Arg Gin Val Gin Cys Pro Ala Glu Leu Val Ala Arg Thr Gly Cys Arg 1S5 190 195 200 CGC AAC GAC GAC GGC AAC TTC CCT GCC GTC CAG ATC CCC TCC AGC AGC 720

Arg Asn Asp Asp Gly Asn Phe Pro Ala Val Gin lie Pro Ser Ser Ser 205 210 215 : ;·. ACC AGC TCT CCG GTC AAC CAG CCT ACC AGC ACC AGC ACC ACG TCC ACC 768 ’·' · Thr Ser Ser Pro Val Asn Gin Pro Thr Ser Thr Ser Thr Thr Ser Thr : 220 225 230 TCC ACC ACC TCG AGC CCG CCA GTC CAG CCT ACG ACT CCC AGC GGC TGC 816 ,:. Ser Thr Thr Ser Ser Pro Pro Val Gin Pro Thr Thr Pro Ser Gly Cys 235 240 245 Γ·’: ..:, ACT GCT GAG AGG TGG GCT CAG TGC GGC GGC AAT GGC TGG AGC GGC TGC 864

Thr Ala Glu Arg Trp Ala Gin Cys Gly Gly Asn Gly Trp Ser Gly Cys 250 255 260 'V ACC ACC TGC GTC GCT GGC AGC ACT TGC ACG AAG ATT AAT GAC TGG TAC 912

Thr Thr Cys Val Ala Gly Ser Thr Cys Thr Lys lie Asn Asp Trp Tyr V · 265 270 275 280 t CAT CAG TGC CTG TAGACGCAGG GCAGCTTGAG GGCCTTACTG GTGGCCGCAA 964 ,,.: His Gin Cys Leu 285 CGAAATGACA CTCCCAATCA CTGTATTAGT TCTTGTACAT AATTTCGTCA TCCCTCCAGG 1024 ‘ GATTGTCACA TAAATGCAAT GAGGAACAAT GAGTAC 1060

Claims (9)

110194

1. Sellulaasivalmisteen käyttö paperimassan käsittelyyn, tunnettu siitä, että valmiste käsittää yksikomponenttisen 5 endoglukanaasin, joka on peräisin Aspergillus-, Phanero- chaete-, Penicillium-, Geotricum-, Trichoderma-, Humico-la-, Fusarium- tai Myceliophthora-kannasta, ja vähän tai ei lainkaan sellobiohydrolaasia, edellyttäen, että käyttö ei ole massan vedenpoisto-ominaisuuksien parantamista kä-10 sittelemällä paperimassaa endokluganaasientsyymillä, jol la on oheisessa sekvenssilistauksessa numerolla 1 esitetty aminohapposekvenssi tai sen homologi, jolla on endo-kluganaasiaktiivisuutta pH:ssa 6,0-10,0 ja joka on immu-noreaktiivinen vasta-aineen kanssa, joka on kehitetty Hu-15 micola insolens kannasta DSM 1800 peräisin olevaa, hyvin puhdasta ~43 kD endoglukanaasia vastaan.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että endoglukanaasissa on selluloosaa sitova alue. 20

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen käyttö, tunnettu , ,·. siitä, että sellulaasivalmiste sisältää vähintään 50 % : (painoprosenttia sellulaasiproteiinin kokonaismäärästä) t · ‘‘V endoglukanaasia. '’25

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen käyttö, tunnettu sii- • ·* tä, että sellulaasivalmiste sisältää vähintään 90 % · (painoprosenttia sellulaasiproteiinin kokonaismäärästä) endoglukanaasia. :’:3;0

5. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-4 mukainen käyt-tö, tunnettu siitä, että endoglukanaasin pH-optimi on pH > » I 4-7, ja se on peräisin Aspergillus-, Phanerochaete-, Pe-’···’ nicillium-, Geotricum- tai Trichoderma-kannasta. :·35 ·:·*: 6. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-4 mukainen käyt tö, tunnettu siitä, että endoglukanaasin pH-optimi on pH 110194 6,5-9, ja se on peräisin Humicola-, Fusarium- tai Myce-liophthora-kannasta.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, tunnettu sii-5 tä, että endoglukanaasi on immunoreaktiivinen vasta-ai neen kanssa, joka on kehitetty Humicola insolens -kannasta DSM 1800 peräisin olevaa, hyvin puhdasta ~43 kD:n en-doglukanaasia vastaan.

8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen käyttö, tunnettu sii tä, että endoglukanaasilla on aminohapposekvenssi, kuten on esitetty oheisessa sekvenssilistauksessa numerolla 1, tai sen homologi, joka omaa endoglukanaasi-aktiivisuutta.

15 Patentkrav